淋巴细胞刺激指数
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CCK—8法在淋巴细胞增殖检测中最佳实验条件的筛选目的筛选CCK-8法在淋巴细胞增殖检测中的最佳实验条件。
方法采用正交实验设计,对初始细胞浓度、培养时间、LPS浓度、显色时间这4个主要因素各水平对人外周血单个核细胞(PBMC)和小鼠脾细胞增殖的影响进行试验研究,对各实验组合测得的刺激指数进行方差分析。
结果CCK-8检测人PBMC 增殖试验的最佳条件:初始细胞浓度为2.5×106/mL,培养时间为48 h,LPS浓度为1 μg/mL,加入CCK-8后孵育4.5 h;检测小鼠脾细胞增殖试验的最佳条件:初始细胞浓度为5.0×106/mL,培养时间为48 h,LPS浓度为1 μg/mL,加入CCK-8后孵育4.5 h。
结论CCK-8法便捷、灵敏、重复性好,可作为检测淋巴细胞增殖的稳定方法。
本研究建立的CCK-8最佳实验条件可为免疫调节作用的药物体外筛选和免疫药理学作用的研究提供依据。
[Abstract] Objective To optimize the experimental conditions of CCK-8 in lymphocyte proliferation assays. Methods An orthogonal test was designed to investigate the influence of four major factors (cell density,culture period,concentration of LPS and duration of incubation with CCK-8)on cell proliferation of human PBMC and mouse splenocyte. ANOV A was carried out to analyze the stimulation indices of all experimental condition combinations. Results The optimal conditions for CCK-8 was as follows:for PBMC,cell density was 2.5×106/mL,culture period was 48 h,concentration of LPS was 1 μg/mL,and duration of incubation with CCK-8 was 4.5 h;and for splenocyte,cell density was 5.0×106/mL,culture period was 48 h,concentration of LPS was 1 μg/mL,and duration of incubation with CCK-8 was 4.5 h. Conclusion The optimized CCK-8 protocol is a sensitive,convenient and stable quantitative method to evaluate lymphocyte proliferation. This result can provide evidence in screening of immunomodulating drugs and investigation of their immunopharmacology.[Key words] CCK-8;PBMC;Lymphocyte proliferation;Orthogonal test檢测淋巴细胞增殖的方法主要有形态学检查法、放射性核素标记法和四氮唑盐比色法等。
各免疫器官指数的英文表达
各免疫器官的指数通常在医学和生物学领域中使用,以下是一些常见免疫器官的指数及其英文表达:
1.胸腺指数(Thymic Index):表示胸腺大小和发育程度的指标。
2.脾指数(Spleen Index):表示脾脏大小和功能状态的指标。
3.淋巴结指数(Lymph Node Index):表示淋巴结的大小和活跃
程度的指标。
4.骨髓指数(Bone Marrow Index):表示骨髓中免疫细胞的活
跃程度和数量的指标。
5.白细胞计数(White Blood Cell Count):血液中白细胞的数量,
是一个免疫系统健康的常规指标。
6.免疫球蛋白(Immunoglobulin)水平:表示血液中特定免疫
蛋白的浓度,通常分为IgA、IgG、IgM等亚类。
这些指数和参数在医学诊断和研究中用于评估免疫系统的状态和功能。
需要注意的是,具体的免疫指数可能因医学研究领域的不同而有所变化,而且可能还有其他特定的免疫参数和标志物用于更详细的免疫分析。
淋巴细胞计数参考范围1.引言1.1 概述淋巴细胞计数是一种常规的临床检验项目,用于评估人体免疫功能的指标之一。
淋巴细胞是免疫系统中最重要的细胞类型之一,它们在人体的抗感染、抗肿瘤和免疫调节等方面发挥着重要的作用。
淋巴细胞计数的结果可以帮助医生了解患者的免疫状态,以及对某些特定疾病的诊断和治疗提供参考依据。
正常的淋巴细胞计数范围是通过大量的人群研究得出的,它可以作为判断患者免疫功能是否正常的标准。
本文将对淋巴细胞计数的参考范围进行探讨,并分析一些可能影响淋巴细胞计数的因素。
同时,我们还将探讨淋巴细胞计数在临床应用中的前景,以及对某些疾病的诊断和治疗的潜在意义。
通过深入研究淋巴细胞计数的参考范围以及其临床应用前景,我们可以更好地了解免疫系统的重要性,并在临床实践中更好地运用这一指标,为患者的健康提供更加精准的评估和治疗方案。
淋巴细胞计数的研究和应用,无疑是当今医学领域中的一个热门课题,在未来将会有更多令人期待的突破和进展。
1.2文章结构文章结构部分的内容可以根据需要来进行编写,可以包括以下内容:在本文中,我们将按照以下结构来展开讨论淋巴细胞计数的参考范围和其在临床应用中的前景。
首先,我们将在引言部分概述本文的主要内容和目的。
接着,在正文部分的第一部分,我们将详细介绍淋巴细胞计数的意义和作用,探讨其在免疫系统中的关键作用以及与疾病之间的关联。
我们将讨论淋巴细胞计数如何反映机体的免疫功能,并探讨其在临床诊断和治疗中的重要性。
在正文部分的第二部分,我们将探讨淋巴细胞计数的影响因素。
我们将介绍各种可能影响淋巴细胞计数的因素,包括年龄、性别、健康状况等。
我们将详细讨论这些因素如何对淋巴细胞计数产生影响,并分析它们对临床应用的潜在影响。
最后,在结论部分,我们将总结淋巴细胞计数的参考范围,并讨论其在临床应用中的前景。
我们将总结淋巴细胞计数的正常范围,并讨论异常计数可能意味着何种情况。
我们还将探讨淋巴细胞计数作为临床指标的潜在应用,包括其在疾病诊断、治疗监测和预后评估中的可能性。
淋巴细胞免疫12项解析淋巴细胞免疫12项指的是人体免疫系统内特定的12项指标,可以检测气体交换、急性期反应、细胞免疫功能等方面的信息,是评估人体免疫功能状态的重要指标之一。
下面将针对每项指标进行解析。
1. 总淋巴细胞计数:是指人体内所有淋巴细胞的数量,包括T、B、NK细胞等。
通过该项指标的检测可以初步了解人体免疫系统的总体状态。
2. CD3+细胞计数:指的是具有CD3表面标志的T淋巴细胞数量,这类细胞在人体免疫系统中扮演了非常重要的角色。
CD3+细胞计数可以初步了解人体的细胞免疫状态。
3. CD4+/CD8+细胞计数:CD4+和CD8+分别是T细胞亚群的代表性分子,二者的比例可以反映人体免疫系统的平衡状态。
如果CD4+/CD8+的比值增高,则说明免疫力下降。
4. CD19+细胞计数:CD19+细胞是B淋巴细胞数量的代表,它的检测可以反映人体的体液免疫状态。
5. NK细胞计数:NK细胞是一种重要的免疫细胞,是人体体液免疫和细胞免疫中不可缺少的细胞。
NK细胞计数可以反映人体的免疫防御水平。
6. IFN-γ:是一种细胞因子,它参与了人体细胞的抗病毒和抗肿瘤防御。
IFN-γ水平的升高表明细胞免疫功能的增强。
7. IL-2:是一种促进T细胞增殖和增强细胞免疫功能的细胞因子,IL-2水平的升高可以反映出T细胞免疫功能的增强。
9. IL-6:是一个促炎性因子,参与了许多生理过程,如发热、急性期反应等。
IL-6水平的升高可以反映出机体免疫炎症反应的增强。
10. IL-10:是一种抗炎因子,它能够抑制细胞免疫和体液免疫反应,因此IL-10水平的升高表明机体正处于免疫抑制状态。
总的来说,淋巴细胞免疫12项检测可以反映出机体免疫系统的代谢、细胞免疫功能、体液免疫功能、免疫调节等方面的信息,对于了解机体的免疫状态起到了非常重要的作用。
同时,通过对这些指标的监测,还可以帮助医生制定合理的免疫调控方案,从而改善机体的免疫状态,提高身体的抗病能力。
长期递增负荷运动对大鼠脾淋巴细胞增殖活性、凋亡及凋亡相关基因表达的影响王雪芹;郝选明【摘要】目的:观察6周递增负荷运动对大鼠脾脏淋巴细胞增殖能力(SI)、线粒体膜电位(△Ψm)及Bax和Bcl-2 mRNA的影响.方法:将64只8周龄SPF级雄性SD 大鼠随机分为0周组(WK0)、2周组(WK2)、4周组(WK4)和6周组(WK6),进行递增负荷跑台训练6周,分别于第0、2、4、6周周末,利用JC-1染色流式细胞术检测脾脏淋巴细胞形成的单体(J-aggregate)和聚合体(J-monomer)的平均荧光强度(FL2,FL1),并计算线粒体膜电位(FL2/FL1,△Ψm),MTT法检测淋巴细胞刺激指数(SI),FQ-RT-PCR技术测定Bax mRNA和Bcl-2mRNA表达水平.结果:6周递增负荷运动过程中,WK2、WK4、WK6组大鼠的脾系数显著低于WK0;WK4、WK6组大鼠的脾脏淋巴细胞SI显著低于WK0和WK2;WK2、WK4、WK6组大鼠的线粒体膜电位显著低于WK0;WK4、WK6组大鼠的Bax mRNA表达明显增加,WK2、WK4、WK6组大鼠的Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2/Bax比值明显降低.结论:6周递增负荷运动使大鼠脾脏淋巴细胞的增殖活性降低,凋亡增加,其机制可能是6周递增负荷运动改变了调控基因Bax mRNA和Bcl-2 mRNA的表达.【期刊名称】《中国体育科技》【年(卷),期】2013(049)006【总页数】5页(P100-104)【关键词】运动;运动免疫;脾脏;凋亡;刺激指数;膜电位;Bcl-2相关X蛋白;B细胞淋巴瘤基因-2;鼠;动物实验【作者】王雪芹;郝选明【作者单位】临沂大学体育学院,山东临沂276005;华南师范大学体育科学学院,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】G804.5运动免疫学研究业已证实,长期从事长时间大强度运动对免疫机能有非常强烈的负性影响[2],表现为淋巴细胞数量减少,亚群改变;细胞毒性降低,细胞免疫功能受损;主要免疫球蛋白及补体含量降低;中性粒细胞吞噬作用降低;大负荷运动降低巨噬细胞的抗原提呈及MHC的表达等,说明长期大强度运动训练对细胞和体液免疫都有明显的负性作用。
小鼠福利受损模型的建立及营养干预作用的研究杨 斐,胡 樱, 许兰文(复旦大学实验动物科学部,上海200032)[摘要] 目的 探索建立实验小鼠的福利受损模型,并研究营养干预对模型小鼠福利的改善作用。
方法 以反复制动模拟常规实验处置对小鼠的福利损害,测定与福利相关的神经内分泌、免疫、生化、生长指标和饲料效价,评价其在实验中消耗的生物学代价;采用营养咬棒对模型小鼠同步干预,测定相关指标。
结果 制动小鼠体增重和饲料效价(FER)显著降低(P<0.01),血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)、肾上腺素(EPI)、去甲肾上腺素(NE)水平显著升高(P<0.01),血清β-内啡肽(β-EP)、白介素-2(IL-2)水平、脾脏指数、外周血白细胞总数(WBC)、脾脏T 、B淋巴细胞增殖能力(SIT, SIB)显著降低(P <0.05, P <0.01)。
与模型对照组比较,营养咬棒组CORT、ACTH 、EPI 和NE显著降低(P<0.05),脾脏指数、脾脏T 、B 淋巴细胞增殖能力、IL-2 和WBC显著升高(P<0.05,P <0.01)。
结论 制动小鼠再现了福利损害时动物的神经内分泌紊乱、免疫抑制和生长抑制状况,可作为福利受损的动物模型,营养干预有助于改善制动小鼠的神经内分泌紊乱和免疫抑制。
[关键词] 动物福利;模型;生物学代价;营养干预;小鼠[中图分类号] Q95-33 [文献标识码] A [文章编号] 1004-8448(2008)02-0074-06[收稿日期] 2007-07-16[基金项目] 上海市科技发展基金项目 (064909011)[作者简介] 杨 斐(1968-), 男, 副研究员, 硕士生导师, 从事实 验动物学及比较医学的教学、科研和管理工作。
E-mail: yfdwbfd@[通讯作者] 许兰文(1945-), 女, 教授, 硕士研究生导师。
E-mail: LWXU@Shmu.edu.cn在实验动物福利技术研究领域,近年来越来越多的证据表明常规的实验处置手段能够引起动物的应激反应,如不予及时控制和干预,往往导致额外的福利损害[1],不仅降低了实验动物的福利水平,也在一定程度上干扰了科学研究。
药物淋巴细胞刺激试验(3H-TdR掺入法)建立及其在药物性肝病诊断中的应用内科感染病学研究生陈高艳导师陈成伟程明亮教授【摘要】目的:建立药物淋巴细胞刺激试验(drug lymphocyte stimulation test,DLST),作为免疫特异质性药物性肝损伤(Drug-induced liver injury, DILI)的辅助诊断手段,提高DILI的诊断水平。
方法:对29例拟诊为DILI 的患者,通过分离其外周单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell ,PBMC),暴露于可疑药物,用3H-TdR掺入法检测,依据3H-TdR掺入值确定淋巴细胞被药物特异激活而增殖的程度。
实验同时设立药物试验组、阴性和阳性对照组。
预试验包括PHA最适剂量和药物最适浓度等。
试验同时设立25例健康组群,每次暴露于相同药物,同步检测。
结果:DILI组PBMC经敏感药物刺激后的增殖程度与经PHA刺激后增殖程度相当,DILI患者暴露目标药物后阳性者刺激指数(stmulation index,SI)大于1.8,本试验29例拟诊为DILI患者中19例为阳性(65.5%),SI在1.9-9.8之间,均值为4.3,健康组SI≤1.8,可见DILI 组SI显著高于健康组(分别为3.22±2.57/1.18±0.22,P<0.001)。
本试验具有较高的特异性(96%)及灵敏性(65.5%)。
结论:DLST对免疫特异质型DILI 患者的诊断具有较显著意义,反映了这部分患者的PBMC再次暴露于致敏药物后的增殖情况。
关键词:药物性肝病(DILI) 药物淋巴细胞刺激实验(DLST)3H-TdR诊断前言肝脏是药物转化和代谢的主要器官,也是药物损伤的主要靶器官。
药物性肝损(Drug-induced liver injury, DILI)发病率逐年上升,已开始引起人们和临床医师高度的重视[1,2]。
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小鼠淋巴细胞刺激转化指数实验
1.小鼠淋巴细胞悬液的制备
1)小鼠脱臼处死,75%酒精浸泡2-3分钟。
减少污染。
2)将小鼠移入超净台内,仰卧固定在解剖盘,用眼科剪,镊子取出脾脏和胸腺(各1/2),放入装有2mL IMDM培养液的无菌平皿中。
3)将消毒好的纱布,3-4层覆盖到组织上,直头镊子固定,弯头镊子轻压组织,用移液枪反复吹打。
4)将悬液吸出,放入1.5mLEP管中,2000rpm,15-20min,吸取白色淋巴细胞层于无菌离心管中,用PBS缓冲液洗3遍。
2细胞计数
1)取上述制备好的细胞悬液混匀后,取出20mL,加到有980细mL胞计数液的EP管。
2)取20微升到细胞计数板,计数,数出四个大方格的细胞总数Y.则悬液的浓度为Y/4×104×50
3)用含有20%血清的培养液调细胞浓度至1×107/mL。
3.淋巴细胞培养
1)取含20%血清的IMDM 培养液(分别含有0g/mL,5mg/mL,10mg/mLConA)加入无菌96孔细胞培养板,每孔50mL)
2)青链霉素的浓度最终应为100单位/ml。
青霉素是160万单位(0.96g)/瓶,链霉素是100万单位(1g)/瓶,取青霉素0.06g,链霉素0.1g,加10ml灭菌双蒸水,配制成青链霉素1万单位的母液,过滤后分装在小EP管中。
使用时,可取1ml 母液放入100ml的培养液中,使青链霉素的浓度最终为100单位/ml。
3)再加入调好浓度的淋巴细胞悬液,50mL/孔
4)将上述培养板放入含有5%CO2的37℃培养箱中培养48-72h
4、MTT
1)结束培养前2h,在显微镜下观察细胞转化情况。
2)每孔加入MTT 5mg/mL,10mL/孔,将MTT和细胞混匀。
3)在培养箱中继续培养2h
4)取出后离心2000rpm,10min,弃去上清。
5)每孔加入100mL二甲基亚砜,将颗粒溶解,过夜。
6)用酶标仪测定OD值,波长570nm.。