植物茉莉酸JA酶联免疫分析ELISA

酶联免疫吸附法（ELISA）检测霉菌毒素霉菌毒素主要是指霉菌在其所污染的食品或是饲料中产生的有毒代谢产物，在饲料的加工、运输和贮存过程中都可能会产生。

据统计，已知的霉菌毒素有300多种，常见的毒素有：黄曲霉毒素，玉米赤霉烯酮/F2毒素，赭曲毒素，T2毒素，烟曲霉毒素，赭曲霉毒素，呕吐毒素，麦角毒素等。

霉菌毒素污染多为复合型，饲料中大多存在3种以上的霉菌毒素污染。

霉菌毒素通过饲料或食品进入人和动物体内，引起人和动物的急性或慢性毒性，损害机体的肝脏、肾脏、神经组织、造血组织及皮肤组织等。

因此，霉菌毒素的检测必须引起重视，防患于未然。

1霉菌毒素检测方法饲料中霉菌毒素检测方法主要有目测法，薄层色谱法（TLC），高效液相色谱法（HPLC），酶联免疫吸附法（ELISA），放射免疫法（KIA）及快速试纸检测法。

其中酶联免疫吸附法（ELISA）此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。

经过三四十年发展，ELISA技术已经作为一个成熟的快速筛选方法，应用于不同的行业，美国USDA，EPA将众多ELISA的方法作为官方快速筛选方法。

2酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附法（ELISA）的基本原理是，在合适的载体上，酶标记抗体或抗原与相应的抗原或抗体结合成酶标记抗体抗原复合物，在酶底物的参与下，复合物上的酶催化底物使其水解成为另一种带色物质，其核心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色深浅来进行分析。

该法优点突出，1）灵敏度高，干扰小：抗体抗原的免疫反应特异性很强，结构类似物、荧光物质、有色物质对检测的干扰很小。

2）操作简便快捷：由于特异性强，简化了样品的预处理和提取纯化过程，同时测定时间短。

3）安全性高，污染少，成本低廉：不需要昂贵的测定仪器，且所用试剂也相对较少，毒素标准品的浓度可以很低，减少了对检测人员和环境的潜在危害和污染。

尤其适用于大批量样品的快速测定。

3试剂盒ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。

elisa的基本原理方法类型及应用酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种免疫学的诊断技术，属于发光免疫分析（ FIA）的一种，它能判断待测物质是否含有某种抗原或抗体。

ELISA 是由分子生物学家Peter Perlman在 1969 年发明的，它是由免疫学家和检验室专业人士经过不断改进和发展形成的一种常见的检测工具。

ELISA 试验有三个主要步骤：配制板（Prepare Plate）、抗体配体结合（Antibody-Antigen Binding）和检测（Dectection）。

首先在特定医学实验室中将待测抗原或抗体与其他分子结合在反应基片或其他特定容器上。

随后，将特异性的抗体结合该特定的抗原或其抗体，以形成特异性的蛋白质复合物；最后，将一种特定的发光抗体，经过特定的化学或物理反应，与试剂相结合，从而检测到这种抗原和其抗体。

ELISA 有两种基本类型：一种是检测抗原的ELISA，也被称为酶免疫吸附法（EIA）；另一种是检测抗体的ELISA，也被称为免疫印迹分析（IIA）。

酶免疫吸附法（EIA）的主要特点是反应的时间比较短，因此可以快速地检测特定抗原。

它的原理是将适当浓度的待测抗原与抗原试剂相结合，然后将相互作用的悬液加到对应的孔板上，再将对应的特异性抗体悬液加到孔板中，当抗体与抗原发生作用时，会形成一个抗体复合物，并产生一个抗原复合物；最后，将作用到抗原复合物上的特异性发光强度肽或其他发光物质，最终显示出抗原浓度水平，以便进行分析。

而免疫印迹法（IIA）的主要特点是可以对相对浓度较低的抗体进行检测，可以精确地评估特定的抗体水平。

原理是将含有特定酶质的试剂加到孔板上，然后将抗原悬液加入酶质中，将含有特定抗体的悬液加入酶质中，当与特定抗原结合时，形成抗体复合物，将特定发光抗体结合到抗原复合物上，从而检测特定抗体水平。

ELISA 应用非常广泛，在生物学、药物学、流行病学等一些领域中都有应用，并且能够检测出抗原和抗体的小量组分，能够准确的检测出抗原和抗体，从而更有效的同时体现出检测的准确性。

植物NADPH酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中植物NADPH含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物NADPH水平。

用纯化的植物NADPH抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物NADPH，再与HRP标记的NADPH抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的植物NADPH呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物NADPH浓度。

标本要求：1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。

（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为120U/L，80U/L ，40U/L，20U/L，10U/L）。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。

ELISA的原理和类型ELISA（酶联免疫吸附测定法）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的基于抗原-抗体反应的实验方法。

它通过测量特定抗原或抗体的含量来检测身体内部特定物质的存在与否。

ELISA的原理基于体外特异性抗原-抗体的相互作用。

直接ELISA是最简单的类型。

首先，在表面上涂覆特定抗原，使其与固相的试剂反应。

然后，加入待测样品，如果样品中存在特定抗体，它们将结合到被固定的特定抗原上。

接下来，加入与特定抗体结合的酶标记抗体。

最后，通过添加底物，观察酶催化的氧化型底物在酶的作用下转换为可检测的产物颜色的变化。

间接ELISA是常见的ELISA类型。

在间接ELISA中，首先在表面上涂覆特定抗原，使其与固相试剂反应。

然后，加入待测样品，如果样品中存在特定抗体，它们将结合到被固定的特定抗原上。

接下来，加入与特定抗体结合的次级抗体，该次级抗体已与酶标记物结合。

最后，通过添加底物，观察酶催化的氧化型底物在酶的作用下转换为可检测的产物颜色的变化。

竞争ELISA（也称为间接竞争ELISA）是一种用于测定种属特异性抗体或多克隆抗体的方法。

在竞争ELISA中，首先在表面上涂覆特定抗原，使其与固相试剂反应。

然后，加入已知浓度的酶标记抗体和待测样品，并使它们在未饱和条件下与被固定的抗原竞争结合。

最后，通过添加底物，观察酶催化的氧化型底物在酶的作用下转换为可检测的产物颜色的变化。

总的来说，ELISA的原理是通过将被测物与特异性抗体结合，并利用酶标记的抗体与结合复合物发生化学反应来检测和定量测量特定物质的存在。

这种高灵敏度和特异性的实验方法在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用。

elisa检测方法的原理（酶联免疫吸附试验）【实验原理】酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）的基本原理是：由于抗原、抗体的反应在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去游离的反应物，从而保证实验结果的特异性与稳定性，且最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。

加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。

由于酶的催化效率很高，从而使该测定方法具有高敏感度。

具体的方法较多，有用于检测抗体的间接法（图8-1）、用于检测抗原的双抗体夹心法（图8-2）以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。

比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。

图8-1 ELISA间接法图8-2 ELISA双抗体夹心法【材料与仪器】1. 包被缓冲液（pH9.6的0.05mol／L碳酸盐缓冲液）、洗涤缓冲液（pH7.4的0.15mol／LPBS）、底物缓冲液（pH5.0柠檬酸－磷酸氢二钠）、终止液2mol／LH2SO4、抗原、抗体及酶标记抗体、正常人血清和阳性对照血清、TMB。

2. 聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔、ELISA检测仪、50μl、100μl微量加样器、塑料滴头、小毛巾、洗涤瓶、小烧杯、玻璃棒、试管、吸管、量筒等。

3.4℃冰箱、37℃孵育箱。

【实验方法】一、ELISA间接法间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为：利用酶标记的抗抗体检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。

1. 包被固相抗原：用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。

次日弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3min，除去未结合的抗原及杂质。

2.加待检标本：加一定稀释度的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被的反应孔中，置37℃孵育1h，用洗涤缓冲液洗3次，每次3min，除去未结合的抗体及杂质。

酶联免疫法（ELISA）测定植物激素含量姓名：李希东专业：植物学学号：200808201 日期：09.5.10 成绩：一、实验目的：掌握间接法测定植物激素的原理和方法；了解逆境对玉米根系ABA和IAA含量的影响。

二、实验原理：酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbert assay，简称ELISA)是在免疫酶技术(immuno enzymite technique)的基础上发展起来免疫测定技术。

其建立在两个重要的生物化学反应基础之上的，即①抗原抗体反应的高度专一性和敏感性；②酶的高效催化特性。

ELISA把这二者有机地结合在一起，即被分析物先与其相应的抗体或抗原反应，然后再检测抗体或抗原上酶标记物的活性，从而达到定性或定量测定的目的。

间接法是将过量的与蛋白质连接的待测植物激素(实验前将该激素与牛血清白蛋白等蛋白质连接成[激素一蛋白质复合物])吸附在固相支持物上，然后加入待测植物激素和相应抗体，使抗体与待测植物激素及激素蛋白质复合物结合，再加入酶标抗体(标记酶与非特异第二抗体的复合物)，就形成〔蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物〕，加入底物后就生成有色产物，测定其吸光率，可计算待测抗原的量。

如果抗体、激素一蛋白质复合物和酶标抗体的量一定，并且[激素·蛋白质复合物]和待测激素的总量超过抗体的量，那么生成的[蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物]的量就受待测激素含量的限制，因此待测抗原的量将与吸光率成反比。

图A表示间接酶联免疫方法的基本原理：A.间接酶联免疫原理示意图示反应板（固相载体）示激素特异抗体（一抗）示激素（抗原）示非特异二抗示蛋白质·激素复合物示标记酶本实验所采取的方法，则是利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体的竞争性结合反应，它的原理可用下式表示:Ab十H十HP=AbH十AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素一蛋白质复合物。

简述elisa的基本原理Elisa（酶联免疫吸附测定法）是一种常用的实验技术，用于检测生物样本中特定分子的存在和浓度。

它的基本原理是利用酶与抗原或抗体结合，然后通过酶的催化作用来检测样本中的目标分子。

Elisa技术在生物医学研究、临床诊断和药物开发中得到了广泛的应用。

Elisa的基本原理可以分为间接法、直接法、竞争法和夹心法四种类型。

其中，间接法和直接法是最常用的两种。

在间接法中，首先将待检测的抗原或抗体样本加入到固相酶标记的抗体或抗原上，形成抗原-抗体-酶复合物。

然后，通过洗涤去除未结合的物质，加入底物和显色剂，测定酶的活性，从而间接检测出待测物质的存在和浓度。

而在直接法中，待检测的抗原或抗体样本直接与固相酶标记的抗体或抗原结合，形成抗原-抗体-酶复合物，然后通过相同的方法进行检测。

竞争法和夹心法则是在间接法和直接法的基础上进行的改进。

竞争法中，待检测的样本中的抗原与固相抗原结合，而夹心法中，待检测的抗原与固相抗体结合。

这些不同的Elisa类型在实际应用中，可以根据具体的实验要求来选择合适的方法。

Elisa技术的优点在于其灵敏度高、特异性好、操作简便、成本低廉等特点。

因此，它被广泛应用于临床诊断、生物医学研究和药物开发等领域。

例如，在临床诊断中，Elisa可以用于检测各种疾病标志物，如肿瘤标志物、传染病病原体等；在生物医学研究中，Elisa可以用于检测细胞因子、激素、抗体等；在药物开发中，Elisa可以用于药物的药代动力学研究、药效学评价等方面。

总之，Elisa作为一种常用的实验技术，其基本原理简单清晰，操作方便，应用范围广泛。

随着生物医学技术的不断发展，Elisa技术也在不断完善和改进，为生物医学研究和临床诊断提供了重要的技术支持。

茉莉酸酶联免疫检测法(ELISA)的建立
辛泽毓;周燮;张能刚
【期刊名称】《南京农业大学学报》
【年(卷),期】1998(21)4
【摘要】以茉莉酸－牛血清白蛋白复合物作为免疫原，获得了兔抗茉莉酸甲酯抗血清，并在此基础上建立了茉莉酸固相抗原型ＥＬＩＳＡ。

此外，利用茉莉酸甲酯和辣根过氧化物酶标记的茉莉酸对鼠抗茉莉酸甲酯单克隆抗体的竞争结合，建立了茉莉酸固相抗体型ＥＬＩＳＡ。

上述两种ＥＬＩＳＡ的检测灵敏度分别为０．４２ｐｍｏｌ和０．２０ｐｍｏｌ，检测范围分别为０．９８～１０００ｐｍｏｌ和０．６３～２０ｐｍｏｌ，批内变异系数分别为３．４４％和１．６２％，批间变异系数分别为２．４７％和２．０６％。

样品的平均回收率分别为７３．３％和７６．９％。

【总页数】5页(P19-23)
【关键词】茉莉酸;茉莉酸甲酯;酶联免疫;吸附测定法;抗体
【作者】辛泽毓;周燮;张能刚
【作者单位】南京农业大学农学系
【正文语种】中文
【中图分类】Q946.819
【相关文献】
1.GA1,3,4,7酶联免疫检测法(ELISA)的建立 [J], 黄少白;周燮
2.莪术醇酶联免疫检测方法(ELISA法)的建立 [J], 黄凤香;王娟;曾建红;侯艳芳;白准;陈旭
3.人血清去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H2亚基(sH2a)酶联免疫检测法的建立及临床应用 [J], 尹栩芳;樊一笋;汪琪;饶品彬;石立立
4.抗去唾液酸糖蛋白受体酶联免疫检测法的建立及临床初评 [J], 刘海英;范列英;沈芳;邓安梅;屠小卿;周晔;陈燕;仲人前
5.GA_(1,3,4,7)酶联免疫检测法(ELISA)的建立 [J], 黄少白;周燮
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实验17 酶联免疫吸附检测法（ELISA）测定植物激素含量一、原理植物激素（planthormone）免疫定量主要有放射免疫分析（RIA）和酶联吸附免疫分析（ELISA），由于前者操作上欠安全等原因，目前常采用后一种类型。

在ELISA中，抗原抗体反应的检测依靠酶标记物来实现，常用的酶有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酯酶。

酶可直接标记激素分子，称为酶标植物激素，也可标记于第二抗体（识别抗激素抗体Fc片段的抗体或金黄色葡萄球菌A蛋白），称为酶标二抗。

这两类标记物分别用于固相抗体型和固相抗原型ELISA。

A.固相抗体型ELISA：将抗激素的单克隆抗体（Mab）与已吸附于固相载体上的兔抗鼠Ig抗体（RAMIG）结合，然后加入激素标准品或待测样品，使其与固相化的Mab结合，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记激素（酶标激素）。

通过测定酶标激素的被结合量，可换算出未知样品中激素的数量。

B.固相抗原型ELISA：将“激素-蛋白”复合物（该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白）包被于固相载体，加入待测激素（样品或标准品）和抗IAA多克隆抗体（Pab）反应，进行竞争反应。

然后让HRP标记羊抗兔Ig抗体（HRP-GARIG）与结合在固相上的Pab反应，通过测定与固相结合的酶量，换算出未知样品中激素的含量。

二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：高等植物、真菌、藻类等组织或器官。

（二）仪器设备：1. 酶联免疫检测仪；2. 高速冷冻离心机；3. 恒温箱；4. 连续进样器；5. 涡旋仪；6. 96孔微孔板；7. 离心管；8. 研钵或匀浆器；9. 试管。

（三）试剂1. 洗涤缓冲液：0.01mol/L pH7.4磷酸缓冲液（PBS），含0.05％Tween-0；2. RAMIG 溶液，或“激素-蛋白”复合物；3. 0.1％封闭蛋白（该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白）；4. 抗激素Mab，或Pab；5. 激素标准品母液，及参比系列溶液（按双倍或四倍系列稀释）；6. HRP标记激素，或HRP-GA RIG；7. 邻苯二胺（OPD）基质液：5mgOPD溶于12.5ml0.01mol/L pH5.0PBS，用前加入30％H2O212.5μl。

(10)申请公布号 CN 102135528 A(43)申请公布日 2011.07.27C N 102135528 A*CN102135528A*(21)申请号 201010101062.3(22)申请日 2010.01.26G01N 30/72(2006.01)(71)申请人湖南农业大学地址410128 湖南省长沙市芙蓉区湖南农业大学(72)发明人肖浪涛 蔺万煌 童建华 黄志刚李合松(54)发明名称一种微量植物鲜样中茉莉酸和茉莉酸甲酯的检测方法(57)摘要本发明涉及一种基于固相萃取和串联质谱的微量植物鲜样中茉莉酸(JA)和茉莉酸甲酯(MeJA)的检测方法，主要包括如下步骤来实现：1)制备JA 和MeJA 的提取纯化的反向碳十八固相萃取小柱；2)采用固相萃取柱法提取和纯化植物鲜样中JA 和MeJA ；3)样品检测：植物样品提取纯化后，LC-MS-MS 检测其JA 和MeJA 含量。

本发明的效果是：反向碳十八固相萃取柱适合JA 和MeJA的分离纯化，可实现二者的同时提取纯化；同时，基于串联质谱的高灵敏性，能在较短时间内对复杂样品中的JA 和MeJA 进行分离检测，并获得比以往检测方法相同或更好的结果，且具有操作简便、结果可靠和样品需求量低等优点，从而实现微量植物鲜样中JA 和MeJA 的高灵敏测定。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页1.一种微量植物新鲜样品中茉莉酸(JA)和茉莉酸甲酯(MeJA)的检测方法，其特征在于包括以下步骤：(1)制备JA和MeJA提取纯化的反向碳十八固相萃取柱；(2)固相萃取柱法分离、纯化植物鲜样中JA和MeJA；(3)LC-MS-MS检测样品中JA和MeJA含量。

2.根据权利要求1所述的JA和MeJA提取纯化反向碳十八固相萃取柱的制备，其特征在于：采用固相萃取柱。

取内径为5.6mm的SPE柱体，放入聚乙烯筛板后，添加反向碳十八填料，平衡柱子后即可。

酶联生物elisa流程酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的检测生物样品中特定抗原或抗体的方法。

ELISA流程主要包括以下步骤：1. 处理样品：首先，将待检测的生物样品（如血清、细胞培养液等）收集并处理，如稀释样品、提取抗原或抗体等。

对于抗原分析，一般需要将样品加入含有特定抗体的孔板中；对于抗体分析，则需要将样品加入含有特定抗原的孔板中。

2. 孔板涂布：将处理后的样品加入到含有固定抗原或抗体的微孔板中。

通常使用多孔聚丙烯或聚苯乙烯的微孔板，可以通过吸液法或喷洒法将样品加入到每个孔中。

孔板涂布后，需要在适当温度下孵育一段时间，使抗原或抗体与孔板表面结合。

3. 洗涤：将涂布后的孔板洗涤，去除没有结合的抗原或抗体以及非特异性结合物质。

洗涤可以使用缓冲液或洗涤缓冲液，一般通过倒置、抽吸或洗涤机进行。

4. 标记抗体：将标记有酶的抗体加入到每个孔中。

标记抗体可以是与酶直接结合的二抗（如HRP-HRP抗体）或与酶间接结合的二抗（如兔抗鼠抗兔抗体）。

标记抗体与待测样品中的抗原或抗体发生特异性结合。

5. 二次孵育：将孔板进行二次孵育，使抗原/抗体-标记抗体复合物形成。

此步骤一般进行在适当的温度和时间下。

6. 洗涤：将二次孵育后的孔板洗涤，去除没有结合的标记抗体。

洗涤方法与步骤3相似。

7. 底物添加：将酶底物（如2,2'-聯氨基甲基丙烷磺酸盐，TMB）加入到每个孔中。

酶底物与孔中的酶发生反应，产生显色或荧光信号。

反应时间一般是几分钟至数小时。

8. 反应终止：通过加入反应终止剂（如硫酸或盖塑等）停止酶底物反应，防止色素过度产生。

9. 测量：使用酶标仪或其他测量设备，测量每个孔中的颜色或荧光强度。

通常，测量波长会根据底物和酶的选择进行调整。

10. 数据分析：根据测得的吸光度或荧光强度，使用标准曲线或计算方法计算待测样品中目标抗原或抗体的浓度。

植物酶联免疫检测技术的发展和应用随着全球人口的不断增长，营养不良、疾病、环境污染等问题也随之加剧，对食品和生物领域的质量安全与环境监测提出了更高的要求。

为了解决这些问题，植物酶联免疫检测技术应运而生。

植物酶联免疫检测技术（Plant Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称PELISA）是指利用酶标记抗体或抗原分子特异性结合的能力，通过测定光学信号来检测分析样品中的特定成分。

与传统的检测方法相比，植物酶联免疫检测技术不仅具有快速、敏感、高通量等优点，而且不需要复杂的前处理步骤，可以直接应用于样品的检测。

PELISA 技术的发展始于 20 世纪 80 年代，其基本原理和酶联免疫检测技术类似，但是在抗体和抗原的选择、检测信号的放大等方面做出了相应的改进。

与其它酶联免疫技术相比，PELISA 有更广泛的应用领域，不仅可以用于植物病害和生长调节剂的检测，还可以用于环境监测、食品安全、医学诊断等多个领域。

在植物领域，PELISA 技术广泛应用于植物病原菌检测、转基因作物鉴定等方面，可以帮助农业科学家更好地控制植物疾病、提高作物产量。

同时，PELISA 技术还可以用于检测植物生长调节剂，如激素和植物抗逆性相关蛋白等，可用于揭示植物的生长和发育机制，为植物育种和改良提供科学依据。

在环境领域，PELISA 技术可以用于监测大气污染物、土壤中的重金属、农药等，与传统的监测方法相比，PELISA 具有更高的灵敏度和选择性。

此外，PELISA 技术还可以用于检测环境中的微生物、食品添加剂、工业废水等。

在食品领域，PELISA 技术可以用于检测食品中的各类有害物质，如致癌物质、致敏物质、抗生素残留等，有助于保障食品质量安全。

PELISA 技术检测速度快，效率高，已经成为目前食品监管机构的重要工具之一，在食品加工企业、餐饮服务等行业得到了广泛应用。

在医学领域，PELISA 技术可以用于检测血液中的抗体、细胞因子、肿瘤标志物等，有助于早期诊断和治疗疾病。

e l i s a酶联免疫吸附实验报告一．实验目的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。

借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。

待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。

二．实验原理用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。

常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。

由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。

辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。

酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。

氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（ＲeinheitZahl）值越大说明酶内所含杂质越少。

高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。

用于ELISA检测的HRP的RZ 值要求在3.0以上。

E L I S A的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。

植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。

由于酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assays, 简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。

目前，几大类植物激素IAA,ABA, GA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。

植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式，一种是在固相载体上包被抗体（直接法），另一种是包被抗原（间接法）。

直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。

间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。

间接法的原理可用下式表示：Ab+H+HP=AbH+AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物。

根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H 量的多少。

材料、试剂及设备1 材料各种新鲜植物材料2 仪器设备研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl,200μl,1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。

3 试剂(1) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4, 2.96g Na2HPO4·12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。

(2) 样品稀释液：500 ml PBS中加0.5 ml Tween-20，0.5g明胶（稍加热溶解）。

酶联免疫吸附测定法elisa酶联免疫吸附测定法（ELISA）的原理酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种广泛用于生物医学研究和诊断的免疫分析技术。

ELISA 的原理基于抗原抗体特异性结合的原理，通过标记酶的抗体来检测目标抗原或抗体。

ELISA 的种类根据检测方法的不同，ELISA 可分为以下几种类型：直接 ELISA：将待测样品直接加入固定在微孔板上的抗原或抗体上，然后用标记酶的抗体检测。

夹心 ELISA：微孔板固定一层捕获抗体，待测样品通过捕获抗体与检测抗体结合，然后用标记酶的抗体检测。

竞争性 ELISA：待测样品与标记抗原竞争结合固定在微孔板上的抗体，标记抗原和待测样品结合量成反比。

ELISA 的步骤ELISA 的主要步骤包括：抗原或抗体固定：将待测抗原或抗体固定在微孔板上。

样品孵育：将待测样品加入微孔板，进行孵育。

洗涤：去除未结合的样品。

添加标记抗体：加入标记酶的抗体，再次孵育。

洗涤：去除未结合的标记抗体。

底物反应：加入底物，酶促反应产生有色产物。

终止反应：加入终止液，停止酶促反应。

测量吸光度：测量有色产物的吸光度，吸光度与样品中抗原或抗体浓度成正比。

应用ELISA 具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点，广泛应用于以下领域：诊断：检测传染性疾病（如艾滋病毒、乙肝）、自身免疫疾病（如类风湿性关节炎）、癌症标志物等。

研究：研究抗原抗体相互作用、免疫应答、药物开发等。

食品安全：检测食品中的残留农药、抗生素等。

环境检测：检测水体或土壤中的污染物。

注意事项进行 ELISA 时需要注意以下事项：抗体的特异性和亲和力：使用的抗体必须具有高特异性和亲和力，以确保准确的检测结果。

样品准备：样品应经过适当的处理，去除干扰物质，以获得准确的结果。

优化条件：ELISA 反应条件（如孵育时间、温度）应经过优化，以获得最佳检测灵敏度和特异性。

背景信号：应使用阴性对照进行检测，以去除背景信号的影响。

质量控制：应使用已知浓度的标准品进行质量控制，以确保检测结果的准确性和可重复性。