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高效液相色谱流动相选择流动相流动相的性质要求：一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
流动相选择1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
这是一个聪明而又省力的办法。
调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
②纯度。
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
③必须与检测器匹配。
使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。
当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
④粘度要低(应<2cp)。
高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。
最好选择沸点在100℃以下的流动相。
⑤对样品的溶解度要适宜。
如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。
⑥样品易于回收。
应选用挥发性溶剂。
流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。
对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在;对弱碱，情况相反。
液相色谱的柱子通常正相柱和反相柱。
正相柱以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS ）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。
另外还有离子交换柱，GPC 柱，聚合物填料柱等。
本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：一、反相色谱柱的选择1．柱子的PH 值使用范围反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。
但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH 范围。
一般的C18柱PH 值范围都在2-8，流动相的PH 值小于2时，会导致键合相的水解；当PH 值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。
一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。
同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。
如果流动相PH 较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH 范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim 柱PH 2-9或Zorbax 的PH 2-11.5的柱子。
2．填料的端基封尾（或称封口）把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。
如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。
3．戴安公司Acclaim 柱子介绍—极性封尾C16固定相柱戴安公司有28种类型的柱子，Acclaim 反相柱填料高纯，金属含量极低，完全封尾。
PH 2-9范围内兼容，低流失，高柱效。
尤其是2003年推出的Acclaim 极性封尾C16柱，是最先商品化的磺酰氨-O 链接键的色谱柱，具极低的硅羟基活性，能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。
对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形，与现有的一流色谱柱相比有好的立体选择性。
（下图是Acclaim 极性封尾C16柱和市售极性封尾一流色谱柱分离酸性化合物谱图的比较）二、液相色谱柱的使用色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
高效液相色谱流动相选择流动相流动相的性质要求：一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
流动相选择1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
这是一个聪明而又省力的办法。
调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
②纯度。
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
③必须与检测器匹配。
使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。
当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
④粘度要低(应<2cp)。
高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。
最好选择沸点在100℃以下的流动相。
⑤对样品的溶解度要适宜。
如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。
⑥样品易于回收。
应选用挥发性溶剂。
流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。
对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k 值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在;对弱碱，情况相反。
HPLC方法开发如何选择流动相的pH 2014-02-16 蒋竞波谱分析
HPLC方法开发如何选择流动相的pH
1) 流动相的pH到底由什么决定？
理论上说流动相的pH决定于化合物的pKa 和pKb,
流动相的pH对于酸性化合物至少要远离其pKa 2个单位，也就是说pH-pKa的绝对值需要大于2，对于碱性化合物流动相的pH应该至少远离其pKb 2个单位，就是说pH-pKb的绝对值大于2，
2）为什么是2呢？
pKa=pH-"lg"([A^(-)])/([HA]) 即
pKa=-log ka=-log 氢例子浓度*酸根浓度/分子态酸的浓度=pH-log酸根浓度/分子态酸的浓度
当pka与pH相差两个单位的时候，酸根离子的浓度就与分子态酸的浓度就会相差一百倍，
即pH在pKa,以下两个单位的时候，这个酸性化合物在这个流动相体系中分子态比例为100/101,离子态的比例为1/101，所以最安全的pH最好是离pKa距离 3个单位，这个时候，化合物只有0.1%左右处于离子态。
3）为什么酸性化合物最好选择pKa一下，而碱性化合物却学则pKb以上呢？
从上面分析可以知道，如果酸性化合物选择pKa以上两个单位，这个化合物主要以酸根的形式存在，而我们常用的HPLC体系是反相体系，出峰会比较早，另外带电荷的离子在柱子上也更加容易与填料作用而产生拖尾和峰型不好的问题
4）常见流动相的pH
蒋竞 12-Feb2014。
hplc的流动相HPLC的流动相HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分析方法，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
在HPLC分析过程中，流动相是至关重要的组成部分，它直接影响着分析结果的准确性和可靠性。
流动相是指在HPLC柱中流动的溶剂或溶液，它能够将样品带入柱中进行分离。
流动相的选择要根据待分析物的性质和目的来确定，常见的流动相包括有机溶剂和水的混合物，以及酸性或碱性缓冲液等。
有机溶剂是HPLC中常用的流动相之一。
有机溶剂具有良好的溶解性和流动性，能够有效地溶解待分析物，并在柱上产生合适的保留时间。
常见的有机溶剂有甲醇、乙醇、乙腈等。
选择有机溶剂时，要考虑其溶解度和挥发性，以及对柱和检测器的影响。
水是另一种常用的流动相。
水是广泛存在于自然界中的溶剂，具有良好的溶解性和流动性。
在HPLC中，水常用作极性物质的流动相，能够有效地分离极性化合物。
此外，水还可以与有机溶剂混合使用，以调节溶剂的极性，实现对不同化合物的分离。
除了有机溶剂和水，酸性或碱性缓冲液也常用作流动相。
酸性或碱性缓冲液可以调节流动相的pH值，对某些具有酸碱性的化合物具有良好的溶解性和分离能力。
常见的缓冲液有磷酸盐缓冲液、醋酸缓冲液等。
选择缓冲液时，要考虑其缓冲能力、稳定性以及对柱和检测器的影响。
在HPLC分析中，流动相的选择要根据待分析物的性质和目的来确定。
一般来说，对于非极性物质，可以选择有机溶剂作为流动相；对于极性物质，可以选择水或酸碱缓冲液作为流动相。
此外，还需要考虑流动相与柱和检测器的相容性，以及流动相的流速和温度等因素。
HPLC的流动相是HPLC分析中不可或缺的组成部分，它直接影响着分析结果的准确性和可靠性。
在选择流动相时，需要根据待分析物的性质和目的来确定，并考虑流动相与柱和检测器的相容性。
合理选择和优化流动相的使用，可以提高HPLC分析的效果，为科学研究和生产实践提供可靠的数据支持。
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种将混合物分离成单一组分的有效工具。
为了实现这种分离，高效液相色谱需要两种相：固定相和流动相。
其中，流动相是高效液相色谱仪中至关重要的组成部分之一，因为它决定着分离效果和分离时间。
因此，选择正确的流动相对于分离的精度和效率来说非常重要。
流动相简介流动相是指在柱床中连续流动的溶液。
在高效液相色谱中，流动相主要由溶剂和缓冲液组成。
溶剂是用于将样品分离的液体，在高效液相色谱仪中通常采用多种溶剂的混合物，称为流动相溶剂或者移动相溶剂。
缓冲液是在溶剂中加入的一种化学物质来调节流动相的pH值，缓冲液的作用是保持样品成分的稳定性和防止封堵柱床。
流动相的选择取决于样品的特性、分离要求和分析环境的条件。
因此，选择合适的流动相是高效液相色谱仪分离分析的关键因素之一。
流动相的分类根据溶剂的极性，流动相可分为两种类型：有机相和水相。
具体分类如下：有机相有机相通常由疏水性的有机溶剂组成，这些有机溶剂的极性比水低。
主要有以下三类：•极性较小的有机溶剂：含有醚、酮或者类似于苯、四氢呋喃等非极性有机溶剂的混合物。
•极性中等的有机溶剂：含有乙腈、甲醇、乙醇等极性有机溶剂的混合物。
•极性较大的有机溶剂：如乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等。
水相水相是由水和缓冲液组成的混合物。
水是极性溶剂，本身具有良好的溶解性和稳定性。
缓冲液是在水中加入的一种化学物质来调节流动相的pH值。
流动相的选择原则在选择流动相时，需要考虑分析的目标和样品的特性。
下面列举几种常见的流动相选择原则：根据分析目标选择流动相首先，需要根据分析目标选择流动相。
如果需要分离极性物质，则应选择相对极性较强的水相，如果需要分离非极性物质，则应选择相对极性较弱的有机相。
如果需要同时分离多种溶质，则可以选择相组合。
根据样品的特性选择流动相如果样品是非极性的，则应选择相对极性较弱的有机相，例如乙酸乙酯-甲醇体系。
