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无菌培养基灵敏度试验验证

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无菌检查用培养基

适用性验证资料

文件编号：YZ-GC -004

文件起草 日期

文件审核 日期

文件批准 日期 常州市南方卫生器材厂有限公司 文件编号YZ-GC-003

第 1 页 共 8 页 1.验证目的：为证明硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适合于细菌，真菌的无菌检查，特制定本验证方案。

2.参照标准：2005版中国药典二部附录XI H无菌检查法。

3.验证项目：

硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基灵敏度检查。

4.验证小组

4.试验材料：

4.1. 被验证培养基：

品名：硫乙醇酸盐流体培养基

规格： 批号： 生产厂家：

品名：营养肉汤培养基

规格：

批号：

生产厂家：

品名：改良马丁培养基

规格： 批号： 生产厂家：

4.2. 仪器设备：

4.2.1. YM50立式压力蒸汽灭菌器

4.2.2. SW-CJ-2F双人净化工作台

4.2.3. JC101型电热鼓风干燥箱

4.2.4.JY-B型生化培养箱 (23～28℃)

4.2.5.PHX-DHS-40x50恒温培养箱(35～37℃)

4.3. 稀释剂：

0.9%无菌氯化钠溶液

4.4. 验证用培养基： 姓名 部门 职 责

质保部 负责对验证进行总结和评价批准方案及报告

质保部 负责制定确认方案及报告的编制

质保部 负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠

质保部 负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠 常州市南方卫生器材厂有限公司 文件编号YZ-GC-003

第 2 页 共 8 页 4.5. 验证用菌株：

5.菌液制备：

5.1.取经培养18~24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。

5.2.取经培养24~48小时的白色念珠菌的改良马丁培养物1ml加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。

6.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）

分别取上述制备的金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml加入培养皿，每种菌液平行做2皿，注入不超过45℃营养琼脂培养基15~20ml，置30～35℃培养箱培养二天，取上项制备的白色念珠菌菌液1ml加入培养皿，平行做2皿，注入不超过45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15~20ml，置23～28℃培养箱培养三天。

7.无菌培养基的无菌性检查

7.1培养基的配制

硫乙醇酸盐流体培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基29.25g，加1L蒸馏水，加热煮沸使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。

营养肉汤培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基18g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。

改良马丁培养基的配制：取改良马丁培养基28.5g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全名称 生产厂家 批号

营养琼脂培养基

玫瑰红钠琼脂培养基

验证菌株 代次 培养基 培养温度 培养时间（小时）

金黄色葡萄球菌

CMCC（B）26 003 30—35℃ 18—24

铜绿假单胞菌

CMCC（B）10 104 30—35℃ 18—24

枯草芽孢杆菌

CMCC（B）63 501 30—35℃ 18—24

白色念珠菌

CMCC（F）98 001 23—28℃ 24—48 常州市南方卫生器材厂有限公司 文件编号YZ-GC-003

第 3 页 共 8 页 溶解，摇匀分装到到试管中，每只试管装量9ml。

7.2培养基的培养

硫乙醇酸盐流体培养基和营养肉汤培养基置于30~35℃的培养箱中培养14天；改良马丁培养基置于23~28℃的培养箱中培养14天℃，每天观察培养基浑浊情况。

表1培养基的无菌性检查表

注：“+”为生长，“-”为不生长

7.培养基灵敏度检查

7.1.硫乙醇酸盐流体培养基等灵敏度检查至少应进行3次独立的平行试验。

7.2培养基的配制

硫乙醇酸盐流体培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基29.25g，加1L蒸馏水，加热煮沸使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。

营养肉汤培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基18g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。 培养基

名称 管数 培养时间（天） 备注

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

硫乙醇酸盐流体

培养基 1

2

3

4

5

营养肉汤培养基 1

2

3

4

5

改良马丁培养基 1

2

3

4

5

结论 常州市南方卫生器材厂有限公司 文件编号YZ-GC-003

第 4 页 共 8 页 改良马丁培养基的配制：取改良马丁培养基28.5g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到到试管中，每只试管装量9ml。

7.3.培养基接种

取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu/ml的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu/ml的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。

7.4.结果判断

空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。

表2培养基灵敏度检查表

菌种类型 培养基装量

（ml） 培养基管数

（支） 硫乙醇酸盐流体培养基（天） 备注

1 2 3

金黄色葡萄球菌 12 1

12 1

枯草芽孢杆菌 12 1

12 1

铜绿假单胞菌 12 1

12 1

空白对照 12 1

菌种类型 培养基装量

（ml） 培养基管数

（支） 营养肉汤培养基（天） 备注

1 2 3

金黄色葡萄球菌 12 1

12 1

枯草芽孢杆菌 12 1

12 1

铜绿假单胞菌 12 1

12 1

空白对照 12 1

菌种类型 培养基装量

（ml） 培养基管数

（支） 改良马丁培养基（天） 备注

1 2 3 4 5

白色念珠菌 9 1

9 1 常州市南方卫生器材厂有限公司 文件编号YZ-GC-003

第 5 页 共 8 页 空白对照 9 1

结论

注：“+”为生长，“-”为不生长

8 验证周期：同种培养基的不同批号，不同生产厂家均应进行适用性验证

9结论：

无菌检查用培养基适用性验证报告书

验证项目 无菌检查用培养基适用性验证

验证目的 无菌检查用培养基适合于细菌，真菌的培养

2009年 月 日至2009年 月 日，验证小组根据批准的编号为“ YZ-GC-004”的“验证方案”对无菌检查用培养基进行无菌检查和灵敏度验证工作，验证方案在实施过程中未做修改；根据《中华人民共和国药典2005年版（二部）》附录无菌检查法培养基的适用性检查，结果_______________。

验证人员会签

部门 职 责 人员会签

质保部 负责对验证进行总结和评价批准方案及报告

质保部 负责制定确认方案及报告的编制

质保部 负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠

质保部 负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠

批 准 人：

批准日期：

常州市南方卫生器材厂有限公司 文件编号YZ-GC-003

第 6 页 共 8 页 无菌培养基的适用性检查记录

培养基：1. 硫乙醇酸盐流体培养基 批号：_______________ 检验日期：

2. 硫乙醇酸盐流体培养基 批号：_______________ 检验日期：

3. 改良马丁培养基 批号：_______________ 检验日期：

一、培养基的无菌性检查

培养温度：硫乙醇酸盐流体培养基 ℃ 改良马丁培养基 ℃

培养基

名称 管数 培养时间（天）

备注 1 2 3

4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

14

硫乙醇酸盐流体

培养基 1

2

3

4

5

营养肉汤培养基 1

2

3

4

5

改良马丁培养基 1

2

3

4

5

结论

注：“+”为生长，“-”为不生长

二、培养基的灵敏度检查

1. 菌液制备：

（1）金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003] 第___代 0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml

（2）枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501] 第 代 0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml

（3）铜绿假单胞菌 [CMCC(B) 10104] 第___代 0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml

（4）白色念珠菌 [CMCC(F)98001] 第 代 0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml

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无菌试验操作检验规程

无菌试验操作检验规程

XXX医药科技有限公司

标题: 无菌试验操作检验规程 文件编号 ABJ/JYGC005

版本号：A 修改状态：0

页 码 共7页 第1页

1 范围

适用于本规程规定的医疗器械的无菌试验方法。

无菌检查法系用于检杳要求无菌的医疗器械、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

本试验系将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染。

2 引用标准

GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法。第2部分:生

物学试验方法。

《中华人民共和国药典（2015年版）》

菌片标准按生物菌片供应商提供的方法进行

3 器材及试剂

3.1器材:

a)试管

b)酒精灯

c)75%乙醇棉

d)灭菌刻度吸管(1mL)

e)灭菌平皿(9cm)

f）勺锥形瓶

g)三角烧瓶

h)灭菌剪刀、镊子

XXX医药科技有限公司

标题: 无菌试验操作检验规程 文件编号 ABJ/JYGC005

版本号：A 修改状态：0

页 码 共7页 第2页

i)恒温培养箱

j)生化培养箱

k)高压蒸汽灭菌器

l)电热千燥箱

3.2培养基及试剂:

a)流体硫乙醇酸盐培养基

b)改良马丁培养基

c)营养琼脂培养基

3.3稀释液、冲洗液及其制备方法:

3.3.1 质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液;

3.3.2 0.1%蛋白胨水溶液:取蛋白胨1.0g，加水1000mL，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1 ± 0.2，分装、灭菌。

3.3.3 pH7.0氯化钠一蛋白陈缓冲液:取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g,氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000mL，微温溶解、滤清、分装、灭菌。

4实验操作:

4.1实验前准备:

无菌培养基灌装试验验证方案及报告

无菌培养基灌装试验验证方案及报告

无菌培养基灌装试验

验证方案

编号：VMP-XZGY-YZFA-001

****药业有限公司

目 录

1 概述 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1

2 验证目的 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1

3 验证范围及要求 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1

4 验证小组成员及职责 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2

4.1 验证小组成员„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2

4.2 相关职责„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2

5 验证前提条件 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2

5.1 厂房和空调系统验证情况检查„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2

5.2 设备和公用系统确认情况检查„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2

5.3人员和物料情况检查„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3

5.4检验仪器确认情况检查„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3

5.5环境监测结果检查„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3

6 验证标准 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3

7 培养基适用性检查 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4

7.1无菌性检查„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4

7.2灵敏度检查„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4

8 验证内容 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4

8.1 取样及检测 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4

8.2 验证程序 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„7

无菌检验方法验证报告参考模板

无菌检验方法验证报告参考模板

无菌检验方法验证报告

1 / 19

编码：

无菌检验方法验证报告

药业有限公司无菌检验方法验证报告

1. 概述：

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。本公司的无菌检查只是针对于灭菌注射用水的无菌检查。

灭菌注射用水灭菌工艺采用121℃30min过度杀菌法，按照2005年版《中国药典》的规定，注射剂的无菌检查应采用薄膜过滤法。制定的《无菌检查法标准操作规程》（SOP4.14.038-B）应经过验证后，才能批准使用。

2. 验证目的：

验证所采用的方法和条件是否适合于供试品的无菌检查。即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不计。

3. 验证范围：

适用于灭菌注射用水无菌检查法的验证。

4. 验证人员及职责

质量部负责该验证方案的起草及组织实施；

验证小组负责验证方案的审批；

质量部参与验证的实施及监督。

5. 文件准备和培训

检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。

6. 验证条件

6.1. 无菌检查室空气净化系统已经过验证并合格，仪器安装完成；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。

6.2. 供试品：3批， 批号：

批号：

批号：

6.3. 培养基及试剂：

6.3.1. 试剂试液：

氯化钠:临用前配成0.9%浓度的溶液 ，配制记录见附件1。 文件名称 文件编号 存放地点

无菌检查法标准操作规程

进出洁净区更衣标准操作规程

灭菌注射用水质量标准

灭菌注射用水检验操作规程 无菌检验方法验证报告

冲洗液：0.1%蛋白胨水溶液，配制记录见附件2。无菌检验方法验证报告

6.3.2. 培养基

硫乙醇酸盐流体培养基 生产厂家： 批号：

改良马丁培养基 生产厂家： 批号：

粉针剂无菌工艺验证——培养基模拟灌装试验

粉针剂无菌工艺验证——培养基模拟灌装试验

粉针剂无菌工艺验证——培养基模拟灌装试验

摘要】目的 为确保粉针无菌分装生产过程对产品不产生污染，保证粉针生产药品质量。方法 先注入液体培养基，再以无菌甘露醇干燥粉为替代物，模拟分装于注射剂瓶，盖胶塞，轧铝盖。分装样品先后在30～35℃与20～25℃下培养7d，并作阴性、阳性对照。结果 无菌灌装环境及操作人员表面微生物检查合格, 阴性、阳性对照成立, 试验样品微生物未检出。结论 无菌粉针灌装过程中，经培训的操作人员在规定的洁净环境中按操作规程操作所生产的产品可以确保无菌。

【关键词】粉针剂 无菌工艺 验证 培养基灌装试验

无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染。生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目标的关键因素。无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法和规程进行。产品的无菌或其它质量特性绝不能依赖于任何形式的最终处理或成品检验。

培养基模拟灌装试验——使用培养基作为药品的替代品（Placebo）进行无菌模拟生产，对无菌工艺进行验证。培养基灌装在某种意义上是一种挑战性试验，因为几乎在所有情况下，微生物在培养基中的繁殖和生长要比在实际产品中更容易。能全面反映整个生产过程采用无菌工艺生产无菌产品的能力。而且也是各国药品法规要求的基本内容。

1 验证准备工作

1.1所有的相关设备及其工艺均应事先通过确认或验证, 如洁净生产区环境须通过静态验证 (空气的悬浮粒子、浮游菌、沉降菌及表面微生物均应符合相应的规定)，操作人员的卫生及其操作行为均须经过严格的培训, 生产主要设备 ( 如分装机等)以及与生产相关的其它辅助工艺 ( 如淋洗、湿热灭菌、干热灭菌去热原、除菌过滤等)，均须通过确认或验证。

1.2甘露醇粉末无菌的处理[1]

事先需要伽马辐照灭菌（钴60，用量约15～25kGy），并进行无菌性、抑菌性和溶解度的测试。在甘露醇粉末的抑菌性试验中，每天观察微生物生长情况，全部样品对照品试管中均有明显的微生物生长，说明甘露醇对枯草杆菌和白色念珠菌均无抑制作用。甘露醇粉末溶解性试验中全部溶解。灌装时，每瓶内的粉末量不宜过多，否则会对培养基溶液的促菌生长造成不良影响，实践证明，每5ml液体培养基内甘露醇含量不宜超过0.3g。通过上述实验证明甘露醇粉末符合无菌模拟灌装验证要求。