小鼠脑组织中单胺类神经递质含量测定方法的建立与比较_张海

高效液相色谱法对大鼠各器官中单胺类神经递质的测定毛有彦;李爱芝【期刊名称】《中国误诊学杂志》【年(卷),期】2007(7)25【摘要】目的:以高效液相色谱法同时测定五种神经递质的含量,为神经递质的检测探索新的实验方法。

方法:色谱柱为C18柱,流动相为甲醇水(体积比为4∶6,其中每升中含EDTA-Na20.028g、SDS0.15g及浓硫酸0.22ml),流速1.0ml/min。

结果:本实验方法对大量样品进行过测定,其中包括正常、肝气郁症、肝气逆症等动物模型测定及用药后动物模型的测定,取得了可靠的结果。

结论:本方法实验成本低、样品处理量大,为稳定性及精密度、准确性都可靠的检测方法。

【总页数】2页(P5983-5984)【关键词】色谱法;高压液相;神经递质/分析;生物源单胺类/分析;动物【作者】毛有彦;李爱芝【作者单位】山东省潍坊市人民医院检验科;山东省潍坊市市立医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R122.11【相关文献】1.库仑阵列电化学高效液相色谱法测定大鼠脑组织中单胺类神经递质及代谢产物[J], 张向晖;刘军;苏林雁2.荧光-反相高效液相色谱法同时测定小鼠脑组织中3种单胺类神经递质 [J], 魏小娟;许建华3.库仑阵列电化学-高效液相色谱法同时检测大鼠不同脑区中的8种单胺类神经递质 [J], 邓少东;卢洪梅;林励;肖凤霞;成晓燕4.高效液相色谱法测定百草枯染毒后小鼠脑组织中8种单胺类神经递质的含量变化[J], 昝富文; 解裴育; 贾昊然; 刘迎; 马莉5.柱前衍生-高效液相色谱法同时测定血清中氨基酸类及单胺类神经递质 [J], 白洁;王妲;刘泽平;张佳琪;刘丽艳;韩艳梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

学报Journal of China Pharmaceutical University2010，41（4）：367－371高效液相色谱-荧光法测定小鼠脑组织中单胺递质及其相关物质张璐璐1，冯芳1，2*，叶小敏1，朱杰1，马冯飞1（中国药科大学1药物分析教研室；2药物质量与安全预警教育部重点实验室，南京210009）摘要建立高效液相色谱-荧光分析方法，研究小鼠脑皮层、海马、纹状体、丘脑等不同部位的单胺类神经递质及其相关物质。

脑组织样本经高氯酸沉淀蛋白后进行色谱分析，采用Lichrospher C18柱（250mmˑ4.6mm，5μm），流动相为pH 3.06缓冲液（含1mmol/L庚烷磺酸钠；30mmol/L磷酸二氢钠-磷酸溶液）-甲醇（85ʒ15）；流速：1.0mL/min；柱温：35ħ。

荧光检测：激发波长为280nm，发射波长为315nm。

采用建立的方法，鉴别出小鼠脑中存在去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）、酪氨酸、色氨酸、3，4-二羟苯乙酸和5-羟吲哚乙酸等物质；对NE、DA和5-HT进行定量研究，确定它们的线性范围分别为2.4 471.0ng/mL（r=0.9996），2.6 519.5ng/mL（r=0.9994），2.4 469.3ng/mL（r= 0.9991），日内、日间RSD均小于9.0%，准确度达到限度要求，提取回收率大于90%。

本法专属性好，准确度高，可以反映不同鼠脑区域单胺类神经递质及相关物质含量上的差异。

关键词高效液相色谱-荧光分析；单胺类神经递质；相关物质；脑组织中图分类号R917文献标识码A文章编号1000－5048（2010）04－0367－05Determination of monoamine neurotransmitters and related substances in mouse brain tissue by HPLC-FLDZHANG Lu-lu1，FENG Fang1，2*，YE Xiao-min1，ZHU Jie1，MA Feng-fei11Department of Pharmaceutical Analysis;2Key Laboratory of Drug Quality Control and Pharmacovigilance(Ministry of Education)，China Pharmaceutical University，Nanjing210009，ChinaAbstract To establish an HPLC-FLD method for the investigation of monoamine neurotransmitters and related substances in mouse frontal cortex，hippocampus，striatum，and hypothalamus.Mouse brain samples were depro-teinized by perchloric acid and analyzed.The separation was carried out on a Lichrospher C18column(250mmˑ4.6mm，5μm).The mobile phase was composed of pH3.06buffer(including1mmol/L heptanesulfonic acidsodium salt，30mmol/L NaH2PO4-H3PO4solution)and methanol in the ratio of85ʒ15;the flow rate was1.0mL/min and the column temperature was35ʎC.Fluorescence detection:the excitation and emission wavelengthswere set atλex =280nm，λem=315nm.Under the optimized conditions，norepinephrine(NE)，dopamine(DA)，5-hydroxytryptamine(5-HT)，3，4-dihydroxy-phenyl acetic acid(DOPAC)，5-hydroxyindoleacetic acid(5-HIAA)，tyrosine(Tyr)，and tryptophan(Trp)in mouse brain were detected.NE，DA，and5-HT were quantified.The line-arity ranges of NE，DA，and5-HT were2.4-471.0ng/mL(r=0.9996)，2.6-519.5ng/mL(r=0.9994)，and 2.4-469.3ng/mL(r=0.9991)，respectively.The intra-and inter-day precision was always lower than9.0%．The accuracy could attain the demands and the absolute recovery values were always higher than90%．The pro-posed method has good specificity and accuracy.It could be used to analyze the content differences of monoamine neurotransmitters and related substances in different mouse brain areas.Key words HPLC-FLD;monoamine neurotransmitter;related substances;brain tissueThis study was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.30973858)763*收稿日期2010-03-12*通讯作者Tel：025－83271301E-mail：fengfang1@基金项目国家自然科学基金资助项目（No.30973858）学报Journal of China Pharmaceutical University第41卷单胺神经递质，如去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）和5-羟色胺（5-HT）是中枢神经系统中非常重要的生物活性物质，它们的前体是酪氨酸（Tyr）和色氨酸（Trp），酸性代谢产物有3，4-二羟苯乙酸（DOPAC）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）等。

库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究【摘要】目的建立库仑阵列电化学高效液相色谱法快速测定大鼠脑组织中的单胺类神经递质的含量。

方法采用库仑阵列电化学检测器检测去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5�掺巧�胺(5��HT)、5�掺沁胚嵋宜�(5��HIAA)，采用Phenomenex C18反相色谱柱(150 mm×4.60 mm，5 μm)，流动相为缓冲液�惨译�(体积比87∶13)，流速为1 mL・min-1，柱温为35 ℃。

结果 4种单胺类神经递质的最低检测限为0.015 15～0.018 15 ng ，回收率为85.3 %～100.5 %。

结论该法具有快速、准确、灵敏、样品制备简便等优点，可用于大鼠脑组织中单胺类神经递质的分离检测。

【关键词】高效液相色谱法;单胺类神经递质;库仑阵列电化学检测器(1.School of TCM，Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou Guangdong 510006，China; 2.Taishan Medical University，Taian，Shandong 271016，China)Abstract:Objective Toestablish a rapid method for determining monoamine neurotransmitters in rats’ brain tissue by HPLC with coularray detector.Methods HPLC was performed on a Phenomenex C18 column(150×4.60 mm，5 micron). The mobile phase，consisted of acetonitrile��water phase(13∶87)，was at aflow��rate of 1 mL・min-1. The column temperature was kept at 35 ℃. The levels of NE，DA，5��HT and 5��HIAA were determined.Results Theminimum measurement limit was 0.015 15-0.018 15 ng. The average recoveries were 85.3 %-100.5%.Conclusion This method is rapid，accurate，highly sensitive and easy to operate. The procedure issuitable for determining the monoamine neurotransmitters in rats’ brain tissue.Key words:HPLC; monoamine neurotransmitters; coularray detector单胺类物质包括去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5�掺巧�胺(5��HT)、五羟吲哚乙酸(5��HIAA)等物质，是哺乳动物和人类中枢神经重要的信息传递物质。

高效液相色谱-荧光法测定小鼠脑组织中的单胺类神经递质金忠秀;许媛媛;李平;储成顶
【期刊名称】《安徽医科大学学报》
【年(卷),期】2009(44)6
【摘要】目的建立同时检测小鼠脑内的去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)3种神经递质的高效液相色谱方法 .方法采用的色谱条件为:C18柱分离,梯度洗脱.结果方法的检测限(以3倍信噪比计算)2.5μg/L以下,回收率均在
87.8%～105.7%之间,样品日内测定峰面积的相对标准偏差在3.4%以下.结论该方法具有检测灵敏度高、样品制备简便等优点,对小鼠脑内的3种单胺类递质的检测具有实用价值.
【总页数】3页(P772-774)
【作者】金忠秀;许媛媛;李平;储成顶
【作者单位】安徽医科大学附属省立医院脑外科,合肥,230001;安徽医科大学公共卫生学院,合肥,230032
【正文语种】中文
【中图分类】R329.54;R971
【相关文献】
1.固相萃取-高效液相色谱-荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质 [J], 高慧;邢燕;汪洋;宋金枝;王旭
2.高效液相色谱-电化学检测法研究大蒜素对百草枯中毒小鼠脑组织中单胺类神经
递质含量的影响 [J], 檀笑昕;张淑娟;刘坤;张铧尹;连靠奇;徐向东;康维钧
3.荧光-反相高效液相色谱法同时测定小鼠脑组织中3种单胺类神经递质 [J], 魏小娟;许建华
4.高效液相色谱法测定百草枯染毒后小鼠脑组织中8种单胺类神经递质的含量变化[J], 昝富文; 解裴育; 贾昊然; 刘迎; 马莉
5.高效液相色谱-荧光法测定小鼠脑组织中单胺递质及其相关物质 [J], 张璐璐;冯芳;叶小敏;朱杰;马冯飞
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010726469.9(22)申请日 2020.07.25(71)申请人 重庆医科大学地址 400016 重庆市渝中区医学院路1号(72)发明人 蒋心惠　李建沙　张静　龚涛　(51)Int.Cl.G01N 1/28(2006.01)G01N 21/31(2006.01)G01N 30/06(2006.01)G01N 30/74(2006.01)(54)发明名称一种C57小鼠脑组织和血浆中18种氨基酸测定的前处理方法(57)摘要本发明公开了一种C57小鼠脑组织和血浆中18种氨基酸测定的前处理方法，属于生物样品内源性物质前处理领域。

该方法使用紫外分光光度计和高效液相色谱仪，对采取液液萃取结合蛋白质沉淀法处理脑组织匀浆和血浆的方法进行考察，主要考察了样品前处理方法对样品中蛋白质去除量、总脂质去除量、18种氨基酸提取量的影响，进一步优化得到一种C57小鼠脑组织和血浆中18种氨基酸测定的最佳前处理方法。

权利要求书1页 说明书4页 附图5页CN 111829851 A 2020.10.27C N 111829851A1.一种C57小鼠脑组织和血浆中18种氨基酸测定的前处理方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步，制备脑组织匀浆与血浆精密称定C57小鼠脑组织，按1：5～1：20(脑组织重量:超纯水＝mg：μL)的比例加入超纯水，以手持匀浆器匀浆30～90s，得到脑组织匀浆，将从眼眶取血得到的样品，离心取上清，得到待处理血浆；第二步，样品处理取100μL～300μL样品，加入100μL～300μL的甲基叔丁基醚，经涡旋震荡、离心、弃上层，以除去样品中的脂质；取100μL～300μL的上述去脂质样品，加入100μL～300μL的蛋白沉淀剂，经涡旋震荡、离心、取上清，以除去样品中的蛋白质；第三步，样品处理后总蛋白质和总脂质含量考察取100μL～300μL经处理后的样品，使用紫外分光光度计在280nm处测定样品的吸光度，考察经处理后的脑组织样品中总蛋白质含量；取100μL～300μL上述经处理后的样品于玻璃试管内，挥干溶剂，加入200μL浓H 2SO 4(96％)，涡旋，90℃水浴加热20min后迅速冷却至室温，再加入200μL 1mg ·mL -1香草醛溶液(17％的磷酸溶液配制)，常温下避光反应后，在500nm～550nm波长下测定吸光度；第四步，HPLC二极管阵列检测器切换荧光检测器考察杂质去除量和氨基酸提取量HPLC的液相条件包括色谱柱、流动相A和流动相B，其中色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相A为甲醇，流动相B为30mmol ·L -1和pH为6.20的乙酸钠缓冲溶液，脑组织和血浆样品中的氨基酸通过邻苯二甲醛衍生后测定，进样量为20μL，流速为0.9mL ·min -1，柱温为30℃，PDA检测器的检测波长选取230nm，荧光检测器的激发波长为340nm，发射波长为450nm；第五步，确定样品前处理条件经第四步的结果选择前处理方法，选择直接采用0.1～0.5mol ·L -1的高氯酸溶液去除样品中的脂质和蛋白质，为进一步优化样品前处理方法，对高氯酸的用量进行优化，按照1：3～1：9(样品：高氯酸溶液＝μL：μL)比例处理样品，按不同比例的0.1～0.5mol ·L -1高氯酸处理后的样品，经总蛋白质和总脂质含量考察，优化得到样品前处理方法；2.本文中所述的样品是C57小鼠脑皮层和血浆，18种氨基酸是：谷胱甘肽(Gsh)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、丝氨酸(Ser)、谷氨酰胺(Gln)、瓜氨酸酸(Cit)、甘氨酸(Gly)、精氨酸(Arg)、牛磺酸(Tau)、酪氨酸(Tyr)、丙氨酸(Ala)、γ-氨基丁酸(GABA)、、色氨酸(Trp)、甲硫氨酸(Met)、缬氨酸(Val)、苯丙氨酸(Phe)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)。

库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究摘要本文研究了一种利用库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学。

该方法基于库仑电位和扫描电位分析，利用三电极系统进行电极化与测量，最终通过计算电流或电压的变化来确定单胺类神经递质的含量。

实验结果表明，该方法简单、迅速、准确，可用于快速测定单胺类神经递质在生物样品中的含量。

研究背景神经递质是神经系统中的重要信号传递分子，对神经系统的正常功能起着关键作用。

单胺类神经递质包括多巴胺、去甲肾上腺素和肾上腺素等，其含量的变化与多种神经系统疾病密切相关，因此测定单胺类神经递质的含量对于神经系统疾病的诊断和治疗具有重要意义。

目前，测定单胺类神经递质主要采用高效液相色谱法、气相色谱法和电化学法等技术，这些方法各有优缺点，如高效液相色谱法虽然灵敏、准确，但需要较长时间进行样品制备、分离和检测；气相色谱法具有分离效果好、检出灵敏度高等优点，但同样需要进行样品制备、分离和净化等操作。

电化学法作为一种快速、准确、易操作的方法，具有测定单胺类神经递质优越性，因此被广泛应用于单胺类神经递质的测定。

实验方法试剂及仪器•制备单胺类神经递质标准品溶液（0.1 mM），使用双氯芬酸溶解。

•物理生化实验仪器，包括双电极、三电极、电位计、波形发生器等。

实验步骤1.标准曲线的建立利用双电极记录单胺类神经递质的循环伏安图，以扫描电位为变量，确定库仑电位。

在电位差为0.1～0.2 V的范围内进行多次循环检测，统计电流或电压的平均值。

2.标本处理将生物样品加入生理盐水中，进行超声处理和离心处理，制备样品，最终得到0.1 mM的样品溶液。

使用实验方法1记录循环伏安图，测量电流或电压的变化。

3.数据分析根据标准曲线和样品电流或电压的变化值，计算样品中单胺类神经递质的含量。

结果与分析本实验使用库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的含量。

通过建立标准曲线和对样品的处理，测量电流或电压的变化，计算出样品中单胺类神经递质的含量。

一、实验背景抑郁症是一种常见的心理健康疾病，其发病机制复杂，涉及神经生物学、遗传学、环境等多方面因素。

近年来，外泌体作为细胞间通讯的重要介质，其功能在精神疾病中的作用逐渐受到关注。

本研究旨在通过构建慢性社交挫败实验应激模型（CSDS）的敏感型青春期小鼠模型，探究脑组织外泌体中miRNA的表达变化，以期为抑郁症的发病机制研究提供新的思路。

二、实验材料与方法1. 实验动物：选取雄性C57BL/6小鼠，体重18-22g，随机分为实验组和对照组。

2. 实验方法：（1）构建CSDS模型：将实验组小鼠置于社交挫败环境中，对照组小鼠置于正常社交环境中，连续7天。

（2）行为学评估：采用糖水偏好和旷场实验评估小鼠抑郁样行为。

（3）脑组织外泌体提取：采用超速离心法提取小鼠脑组织外泌体。

（4）外泌体鉴定：采用透射电子显微镜、纳米流式检测技术以及蛋白质印记对外泌体形态、粒径大小和表面标志蛋白进行鉴定。

（5）高通量测序：采用高通量测序技术评估实验组和对照组小鼠脑组织外泌体miRNAs表达。

（6）生物信息学分析：基于生物信息学进行GO和KEGG通路富集分析。

三、实验结果1. CSDS模型构建成功：通过糖水偏好和旷场实验评估，实验组小鼠表现出明显的抑郁样行为，与对照组相比差异显著。

2. 外泌体鉴定：实验组小鼠脑组织外泌体颗粒大小在50～100 nm之间，呈典型圆盘状的囊泡结构，检测到外泌体阳性蛋白TSG101和Syntenin。

3. miRNA表达变化：CSDS诱导抑郁样行为的青春期小鼠脑组织外泌体中有13个miRNA显著上调，4个miRNA显著下调。

4. 通路富集分析：差异表达的miRNA在PI3K-Akt信号通路、轴突导向以及缺氧反应等显著富集。

四、讨论本研究通过构建CSDS模型，发现青春期小鼠脑组织外泌体中miRNA表达发生显著变化，提示外泌体可能在抑郁症的发生发展中发挥重要作用。

具体表现为：1. CSDS模型成功构建，实验组小鼠表现出明显的抑郁样行为，与已有研究结果一致。