BV2小胶质细胞经典激活及替代激活的诱导及鉴定

BV2小胶质细胞经典激活及替代激活的诱导及鉴定发表时间：2016-06-01T16:50:22.310Z 来源：《河南中医》2015年8月作者：吴非1,2 罗涛2 郭远瑾2 黎红华1 梅元武2[导读] 小胶质细胞是中枢神经系统内重要的固有免疫细胞，也是介导免疫反应的主要效应细胞。

吴非1,2 罗涛2 郭远瑾2 黎红华1 梅元武2（1.广州军区武汉总医院神经内科湖北武汉 430070）（2.华中科技大学协和医院神经内科湖北武汉 430022）【摘要】目的：观察BV2小胶质细胞经典激活及替代激活后代谢分子的变化，判断鉴别M1及M2极化型小胶质细胞的方法。

方法：小胶质细胞以100ng/ml的LPS及20ng/mL的IL-4分别经典激活及替代激活24小时，以ELISA方法检测IL-12、IL-10、TNF-α的分泌量，以实时荧光定量聚合酶链反应检测iNOS、Arg-1、IL-10、IL-12的mRNA表达，以流式细胞术检测细胞膜MMr蛋白表达。

结果：小胶质细胞被LPS 经典激活后呈M1型极化，IL-12、TNF-α分泌量、iNOSmRNA、IL-12mRNA表达量明显升高，与生理对照组比较有统计学差异（p<0.05)。

小胶质细胞被IL-4替代激活后呈M2极化， IL-10分泌量、Arg-1mRNA及IL-10mRNA表达量显著升高，流式细胞术检测MMr蛋白荧光强度较生理对照组显著上升（p<0.05)。

结论：小胶质细胞的能够被LPS经典激活呈M1型极化，IL-4替代激活呈M2型极化，M1/M2极化状态的小胶质细胞能够通过检测炎性相关因子、精氨酸代谢分子及细胞膜特异性蛋白三个方面得到鉴别。

【关键词】小胶质细胞；经典激活；替代激活；M1/M2型极化；脂多糖；白介素-4【中图分类号】R741 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）8-0651-02The Identification of Classical or Alternative Activation on BV2 MicrogliaWu Fei1,2,Luo Tao2,GuoYuan-jing2,Li Hong-Hua1, Mei Yuan-wu2（1 Department of neurology, Wuhan General Hospital of Guangzhou Military 430070）（2.Department of neurology, Wuhan Union Hospital, HuaZhong University of Science and Technology 430022)【Abstract】Objective：To observe the changes in metabolic molecule of BV2 microglia after it is classical or alternative activated, and judge the methods to identify the M1 or M2 -type polarized microglia cells. Methods：BV2 microglia cells were classical activated by LPS in the concentration of 100ng/ml and alternative activated by IL-4 in the concentration of 20ng/mL for 24 hours, then ELISA was used to measure the levels of IL-12, IL-10, TNF-α , and Real-time PCR was used to detect the mRNA expression of iNOS,Arg-1, IL-10 and IL-12. Flow cytometry(FCM) was used to measure the levels of MMr membrane protein . Results：Microglia presented M1-type polarization state after it were classical activated, the secretion of IL-12 and TNF-α, the expression of iNOS mRNA and IL-12mRNA were significantly increased , and the difference were significant compare with that of in normal control group（P<0.05）. Microglia presented M2-type polarization state after it were alternative activated, and the secretion of IL-10, the expression of Arg-1mRNA and IL-10mRNA were significantly increased, and the difference were significant compared with that of in normal control group（P<0.05）. The levels of MMr were also increased significantly measured by Flow cytometry(FCM). Conclusion： BV2 microglia could present M1-type polarization state after it were classical activated, M2-type polarization state after alternative activated. The two type polarization could be identified detected from three aspects including inflammatory factors , arginine metabolic molecular and specific cell membrane proteins. 【Keywords】microglia，classical activation，alternative activation，M1/M2 type polarization， lipopolysaccharide，interleukin-4 小胶质细胞是中枢神经系统内重要的固有免疫细胞，也是介导免疫反应的主要效应细胞[1]。

小胶质细胞生物学特性及对神经元调控作用李杰;周军媚;田绍文【摘要】Microglia are resident immune cells within the brain parenchyma. In physiological conditions,microglia are highly dynamic, expressing multiple immune receptors and neurotransmitter receptors, tightly monitoring the microenvironment of central nervous system (CNS). Recent researches have revealed that these immune cells ac-tively modulate the functions of neurons,which potentially affecting neuronal activity and synaptic pruning,contrib-ute to synaptic plasticity and preventing neurotoxicity. The functional changes of microglia play an important role in the development,maturation and degeneration of the brain.%小胶质细胞是常驻脑实质内免疫细胞,在生理状态下是高度动态的,表达多种免疫受体与神经递质受体,严格监控着中枢神经系统(CNS)微环境.近来大量研究揭示这类免疫细胞具有积极地调控神经元作用,其潜在的影响了神经元发生、突触修剪,调节突触可塑性,阻止神经毒性.小胶质细胞功能性变化对CNS的发育、成熟及退化有重要作用.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2018(038)004【总页数】5页(P563-567)【关键词】小胶质细胞;细胞生物学特性;神经元【作者】李杰;周军媚;田绍文【作者单位】南华大学药学与生命科学学院,湖南衡阳421001;南华大学神经科学研究所,湖南衡阳421001;南华大学药学与生命科学学院,湖南衡阳421001;南华大学神经科学研究所,湖南衡阳421001【正文语种】中文【中图分类】R338小胶质细胞是中枢神经系统(central nervous system, CNS)内数量最多的单核巨噬细胞。

利莫宁在 LPS刺激的 BV2微胶质细胞炎症过程中作用研究摘要：鉴于近些年来神经性退行性疾病的病发率越来越高的现象，医学界对该类疾病的研究也在不断深入。

从医学角度上来看，炎症是一种保护反应，以确保稳态，它针对有毒物质，对抗病原体和防止组织损伤从而有利于组织修复。

相反，不受控制的炎症会导致过度的细胞和组织损伤，通过激活细胞死亡来破坏正常组织。

线粒体过量产生ROS和过度产生细胞因子通常被认为是脑损伤、炎症和退行性疾病的发病机制。

导致对患者正常组织带来负面影响。

从现行研究结果来看，利莫宁以其优异的治疗价值广受人们的关注，其药理价值相对比较复杂，本文研究即针对该药物对患者的作用机理进行深入研究，为神经性退行性疾病的治疗提供参考。

关键词：神经性退行性疾病；细胞脑组织；药理价值；利莫宁引言中枢神经系统(CNS)包括神经元、内皮细胞、星形胶质细胞和胶质细胞。

活化的胶质细胞，即小胶质细胞和星形胶质细胞通过激活炎症途径在神经变性的发病机制中起着至关重要的作用。

胶质瘤是一种以星形细胞增生、细胞体肥大为特征的炎症状态。

当用脂多糖(LPS)等毒素刺激时，胶质细胞产生白介素(IL)1β和肿瘤坏死因子TNF-α，导致炎症发病。

在创伤、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、亨廷顿病(HD)等疾病中，活化的小胶质细胞产生炎症介质，如环加氧酶(COX-2)/前列腺素(PGS)、iNOS/一氧化氮(NO)或细胞因子以及神经毒性物质，介导脑组织损伤。

此外，越来越多的证据还表明，炎症促进不同的脑疾病，显然通过激活胶质细胞和炎症途径杀死神经元。

因此，本研究的重点是旨在激活胶质细胞和相关炎症途径和/或介质的策略或方法，可能有助于临床管理炎症相关神经退行性疾病[1]。

一、研究整体概述柠檬苦素是一种柠檬酸盐(柠檬酸盐D-环内酯和柠檬酸二-δ内酯)，存在于柑橘植物的叶片、果实和根茎中，化学性质为呋喃内酯。

据报道，大约有300个柠檬素类似物已从自然资源中分离出来。

大麻素2型受体拮抗剂对激活态BV2小胶质细胞的免疫调节作用李琳;楼之茵;程洁;赵忠新【摘要】目的观察大麻素2型受体(cannabinoid 2 receptor,CB2R)拮抗剂对BV2小胶质细胞免疫调节功能的影响.方法使用适量浓度的IFN-γ刺激激活BV2小胶质细胞,建立模拟EAE炎性环境的细胞模型,比较静息态BV2细胞组、激活态BV2细胞组和大麻素2型受体拮抗剂SR144528A(SR2)干预组CB2R mRNA和蛋白的表达情况,用ELISA方法检测细胞因子和趋化因子的浓度,MTT法检测细胞增殖率.结果 IFN-γ激活的BV2小胶质细胞CB2RmRNA和蛋白的表达均高于静息组(P ＜0.05);使用SR2干预激活的BV2小胶质细胞,可降低其CB2R mRNA和蛋白的表达(P＜0.05);SR2可显著上调激活态BV2细胞致炎因子IFN-y、IL-17、IL-6和TNF-α的水平,促进BV2小胶质细胞增殖和NO的释放(P＜0.05),同时显著下调IL-4和MCP-1的浓度,对IL-1β、IL-10、CX3CL1无调节作用.结论 CB2R参与了小胶质细胞介导的炎症反应,CB2R在调节Th1/Th17/Th2细胞因子网络平衡中发挥了一定的作用.【期刊名称】《同济大学学报（医学版）》【年(卷),期】2016(037)002【总页数】6页(P14-18,23)【关键词】大麻素2型受体;小胶质细胞;细胞因子;趋化因子【作者】李琳;楼之茵;程洁;赵忠新【作者单位】上海交通大学医学院附属新华医院神经内科,上海200092;上海交通大学医学院附属新华医院神经内科,上海200092;上海交通大学医学院附属新华医院神经内科,上海200092;第二军医大学附属长征医院神经内科,上海200003【正文语种】中文【中图分类】R744.5小胶质细胞是中枢神经系统内最主要的炎症效应细胞，在神经免疫性疾病的发生发展中起重要作用。

山西医科大学学报，202-年-月，第52卷第(期-71-Dectin-1/Syk信号通路介导脂多糖诱导的BV2细胞中的炎症反应程林3,可红"(山东省立第三医院急诊科，济南254000；5山东第一医科大学第三附属医院神经内一科；通讯作者, E-mPR1508430456@)摘要：目的探讨脂多糖(LPS)诱导BV5细胞神经炎症反应中树突状细胞相关C型凝集素-(dendrXW cell-associawd Cdype hctiuO,DectiuO)及其下游脾酪氨酸激酶(sphen tynsiue kinase,Syk)信号通路发挥的作用。

方法采用LPS建立BV5细胞炎症模型。

将BV5细胞分为对照组、LPS3U组、LPS6U组、LPS17U组和LPS24U组，然后用免疫印迹法检测Declu-S,Syk 和P-Syk的表达，随后选出LPS最佳刺激时间。

根据LPS最佳刺激时间，再将BV5细胞分为空白对照组、对照+LAM组、对照+PIC组、LPS组、LPS+LAM组和LPS+PIC组;用免疫印迹法检测DecluF、pPyk、肿瘤坏死因子a(TNFp)和一氧化氮合酶(iNOS)的表达，观察抑制DechuO和Syk对促炎因子表达的影响。

结果与对照组相比丄PS诱导3,6,7,24U组DechuO, Syk和p-Syk蛋白在BV2细胞中的表达均增加，且在24U表达量最高(P<2.05)。

与空白对照组比较，对照+LAM组和对照+PIC组中各蛋白表达无明显差异(P>0.43)；与LPS组相比较丄PS+LAM组DecluF,p-Syk,TNFp和iNOS的蛋白表达明显下调(P<2.05)。

类似的，与LPS组比较,LPS+PIC组TNFp和iNOS的蛋白表达也明显下调(P<2.05)。

结论Dechu--/Syk信号通路可作为治疗神经炎症反应的潜在靶点。

关键词：脂多糖；炎症反应；树突状细胞相关C型凝集素-；脾酪氨酸激酶中图分类号：R363文献标志码：A文章编号：1057-6611(2521)51-0578-53DOI：S7.I3733/j.2x5.757-6611.2521.51.512Dectin-1/Syk sionaling triggert inOammation after libopolyspccharine stimulation in BV2cellsCHENG Liu1,KE Hong5*(Z)up£mdi£qf Emergency,Shandong Provincial Third Hospital,Jinan250000 ,China；2D epartment of Neurology,Third Afinated Hospital of Shandong FirsP Medical University；^CofesponCing authoo,E-mait■5508030056@) Abstraci:Objectiee To iuvestigate the nh of dendriXe cell-associated type C help-(DecUu-S)and its downstream spleen tynsiue kinase(Syk)signal pathway iu u euninUammato j response of BV5cells induced by lipopolysaccharihe(LPS):Methods The inUam-matorj model of BV5cells was induced by LPS.BV5cells were divided into control group,LPS3U group,LPS6U group,LPS7U group and LPS24U groupc The expression of Dechu-S,Syk and p-Syk was UeWcWp by Westers bhtlng,and the best stimulation time of LPS was senened.According to the opimai stimulation time of LPS,BV5cells were divided into blaud control group,blauk control +LAM gnap,blaud control+PIC gnap,LPS group,LPS+LAM group and LPS+PIC gnap.The expression levels of Wmor uecnsis factor-F(TNF-f),nitric oxide syythase(iNOS),Dechu-S and p-Syk were UeWcWp by Western bhtlng.Results Compared with control gnap,the proWix expression of Dechu-S,Syk and p-Syk was iucnased iu BV5cells induced by LPS for3,6,7,24U,and theexpression was the highest at24h(P<4.43).There was uo sipnificaut UNference iu the expression of each proWix between control gnap and control+LAM gnap,control+PIC gnap(P>4.43).Compared with LPS yrosp,the proWix expression of Dechu-S:p-Syk, TNF-f and iNOS was siynificanly dowu-regulawd iu LPS+LAM gnap(P<4.43).SimimSy,compared with LPS gnap,the proWix expression of TNF-f and iNOS was sipnificanly dowu-regulawd iu LPS+PIC gnap(P<4.43).Conclusion Dectix-S/Syk signal pathway cau be used as a poWnlai tarjet for the Weatwent of ueuninUammaW j nsponse.Key words：lipopolysacchariPe；dUammalon；dendriXe cell-associated C-type leclu-S;sphen tyrosiue kinase近年来,神经系统疾病的发生率和死亡率越来越高。

小胶质细胞的研究方法小胶质细胞是一类位于中枢神经系统的非神经元细胞，它们在神经发育、维持神经环境稳定以及参与神经传导等方面发挥着重要的作用。

因此，研究小胶质细胞的方法对于深入了解神经系统的功能和疾病机制具有重要意义。

本文将介绍几种常用的小胶质细胞研究方法。

一、细胞培养小胶质细胞的细胞培养是研究小胶质细胞的基础方法之一。

细胞培养可以提供一个受控的实验环境，使得研究者可以对小胶质细胞进行多种实验操作。

通常，从小鼠或人脑中分离小胶质细胞，然后将其培养在含有合适培养基和生长因子的培养皿中。

通过细胞培养，可以研究小胶质细胞的形态、生理功能以及对外界刺激的响应等方面的特性。

二、免疫组织化学免疫组织化学是一种常用的研究小胶质细胞的方法。

通过标记特定的抗体，可以检测和定位小胶质细胞中的蛋白质或其他分子。

例如，通过使用特异性抗体标记小胶质细胞的特定表面标志物，可以帮助研究者确定细胞的类型和分布情况。

此外，免疫组织化学还可以用于检测小胶质细胞在神经系统中的反应和功能改变。

三、转录组学分析转录组学分析是研究小胶质细胞基因表达的重要方法。

通过RNA 测序技术，可以全面地了解小胶质细胞中基因的表达水平和变化。

这种方法可以帮助研究者发现小胶质细胞在不同发育阶段、疾病状态或受到不同刺激时的基因表达差异，进而揭示小胶质细胞在神经系统功能和疾病中的作用。

四、原位杂交原位杂交是研究小胶质细胞基因表达和分布的重要方法之一。

通过标记适当的探针，可以检测和定位小胶质细胞中具体基因的mRNA。

这种方法可以帮助研究者确定小胶质细胞中不同基因的表达模式和分布情况，进一步了解小胶质细胞的功能和相互作用。

五、功能性研究为了研究小胶质细胞的功能和影响，研究者还可以使用多种功能性实验方法。

例如，通过细胞钙成像技术可以监测小胶质细胞中的钙离子浓度变化，从而研究其对于神经信号传导的调控作用。

此外，还可以利用细胞电生理技术记录小胶质细胞的膜电位变化，以及使用基因敲除或过表达等方法研究小胶质细胞中特定基因的功能。

没食子酸通过NF-κB通路对缺氧诱导的 BV2小胶质细胞损伤的保护作用机制陈洁;陈科;孟宪丽;王小博;陈小睿【期刊名称】《成都中医药大学学报》【年(卷),期】2024(47)2【摘要】目的:建立BV2细胞缺氧损伤模型,研究没食子酸通过NF-κB通路对缺氧诱导的BV2小胶质细胞损伤的保护作用机制。

方法:取BV2小胶质细胞分为空白组、模型组、低剂量、中剂量及高剂量组,通过三气培养箱建立BV2小胶质细胞缺氧损伤模型,低剂量、中剂量及高剂量组分别给予1.7 g/mL、3.4 g/mL、8.5g/mL没食子酸进行干预。

采用CCK-8法检测没食子酸对缺氧的BV2细胞的保护作用,使用试剂盒检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)、细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的含量,ELISA检测上清中炎症因子表达水平(TNF-α、IL-1β、IL-6),Western blot检测BV2细胞内p-IKK/IKK、p-IκB/IκB和pNF-κBp65/NF-κB p65蛋白的表达水平以及NF-κB p65的核位移。

结果:与空白对照组相比,缺氧可造成BV2细胞培养基上清液LDH的活力增加和炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的释放,细胞中SOD活力降低,MDA和ROS的水平升高,NF-κB通路(p-IKK/IKK、p-IκB/IκB和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白的表达水平)的激活以及NF-κB p65的核位移。

没食子酸能通过降低LDH的活力,抑制氧化应激(提高SOD 的活力,下调MDA和ROS水平)、抑制炎症因子的释放、抑制NF-κB通路相关蛋白的激活以及NF-κB p65的核位移改善缺氧引起的BV2细胞损伤。

结论:没食子酸对缺氧诱导的BV2细胞炎症具有保护作用。

【总页数】7页(P11-17)【作者】陈洁;陈科;孟宪丽;王小博;陈小睿【作者单位】成都中医药大学药学院;成都中医药大学创新研究院/交叉学科研究院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.枸杞多糖对LPS诱导BV2小胶质细胞的抗炎活性及NF-κB信号通路的调控作用2.乙酰水杨酸姜黄素酯通过TLR4/NF-κB通路拮抗LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症损伤3.丹酚酸A抑制NF-κB信号通路减轻脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应4.丁酸钠通过TLR4/NF-κB信号通路调控脂多糖诱导的BV2小胶质细胞表型极化5.2-Hydroxycircumdatin C通过抑制TLR4/NF-κB/MAPK和JAK2/STAT3通路对脂多糖诱导BV2小胶质细胞发挥抗炎作用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

原花青素对脂多糖诱导BV2小胶质细胞炎症介质分泌的影响陈金枝;张小强;曲志华;周亚盼;张妍;梁晓瑜【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2016(028)003【摘要】目的:探讨原花青素对脂多糖(LPS)激活小鼠小胶质细胞(BV2)炎症介质分泌的影响.方法:以LPS激活BV2细胞构建神经炎症模型.分别采用0.1、0.5、1.0、5.0 μg/mL原花青素预处理后,1.0μg/mL的LPS刺激BV2细胞24 h.采用MTT法检测细胞存活率;Griess法检测BV2细胞培养液上清中一氧化氮(NO)水平;ELISA 法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的分泌水平.结果:在实验剂量范围内,原花青素及LPS对BV2细胞活性均无显著影响(P＞0.05).但1.0 μg/mL LPS可引起BV2细胞各炎症因子NO、TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显升高(P＜0.05).与LPS组相比,原花青素(0.1、0.5、1.0、5.0 μg/mL)预处理能使激活的BV2细胞培养液上清中NO释放量减少(P＜0.05),TNF-α、IL-1β和IL-6含量降低(P＜0.05),抑制作用呈剂量-效应关系.结论:在体外实验中,原花青素对LPS诱导小胶质细胞所致的炎症反应具有保护作用.【总页数】4页(P214-217)【作者】陈金枝;张小强;曲志华;周亚盼;张妍;梁晓瑜【作者单位】东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京 210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京 210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京 210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京 210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京 210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京 210009【正文语种】中文【中图分类】R994.6【相关文献】1.线纹海马乙醇提取物对脂多糖诱导BV2小胶质细胞炎症反应的作用 [J], 颜玲;杨志友;黄文哲;张永平;杨文聪;刘亚月;张翼;崔玉华;宋采2.氯喹通过抑制NF-κB和MAPK信号通路减轻脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应 [J], 方明楚;林振浪3.黄连解毒汤含药血清通过TLR4/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的BV2小胶质细胞神经炎症反应 [J], 王俊力;杨运;邵卫;罗卫东;张忠文;梅俊华;陈国华4.白藜芦醇通过调节BDNF/Akt/CREB及TREM1/2表达失衡抑制脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应1 [J], 徐静娴;刘森;高欣冉;高叶俊;夏清荣;葛金芳5.TLR4-IN-C34通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3信号通路减轻脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应 [J], 张姗姗;刘漫;刘冬妮;杨滢霖;王月华;杜冠华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

小胶质细胞活化在脊髓损伤中的中医研究进展
钱宏岳;王建伟;俞云飞;王志诚;吴毛
【期刊名称】《中国当代医药》
【年(卷),期】2024(31)10
【摘要】脊髓损伤(SCI)是脊柱骨科常见的严重的中枢神经系统疾患,其发病机制复杂,发病率呈上升趋势,迄今为止,临床上尚未形成具体的诊疗方案。

阴阳失衡是脊髓损伤发生发展的基础。

脊髓损伤发生后,小胶质细胞受到刺激,通过经典激活状态和替代激活状态,极化为M1、M2小胶质细胞,这两种不同的状态在脊髓损伤过程中发挥不同的作用,与中医阴阳学说中的阴阳平衡、相互对立相对应。

研究表明,小胶质细胞不仅在神经元的营养和维护中发挥重要作用,同时在脊髓损伤后的修复和再生中也起着举足轻重的作用。

因此,治疗脊髓损伤应以此为依据,调整脊髓内环境,达到阴阳平衡状态,进而促进脊髓神经修复。

本文从中医阴阳理论出发,探讨小胶质细胞在脊髓损伤后炎症反应中的作用,为临床中医治疗SCI提供理论依据。

【总页数】4页(P181-184)
【作者】钱宏岳;王建伟;俞云飞;王志诚;吴毛
【作者单位】南京中医药大学研究生院;南京中医药大学附属无锡市中医院骨伤科【正文语种】中文
【中图分类】R26
【相关文献】
1.小胶质细胞M1/M2极化状态在脊髓损伤中作用的研究进展
2.小胶质细胞极化在脊髓损伤中的作用与机制研究进展
3.小胶质细胞在脊髓损伤中的作用机制研究进展
4.小胶质细胞在脊髓损伤治疗中的研究进展
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收到常温细胞后如何处理？（细胞培养详细操作步骤请参照《普诺赛细胞培养操作指南》）1. 收到常温细胞后，及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。

2. 用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。

先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。

3. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。

4. 静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。

5. 管内离心，吸去上清，管底沉淀加入80%，可接回原瓶培养，若大于80%6. 培养瓶或用移液器轻轻吹打使其脱落，若通过吹打的方式不易脱落的细胞则需要用胰蛋白酶消化后收集细胞传代。

7. 注意事项有疑问的，可跟我们的技术支持交流。

高糖活化小鼠小胶质细胞BV-2模型的建立景光婵;张孟仁【摘要】目的:观察高糖(Glu)对小鼠神经小胶质细胞BV-2活化的影响.方法:将BV-2细胞分成:正常对照组(25mmol/L Glu),脂多糖组(1 μg/ml LPS),高糖组(75mmol/L Glu),培养24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT检测细胞活力,激光扫描共聚焦显微技术、Western blot法及实时荧光定量PCR技术检测BV-2活化的标志物CD11b的表达.结果:高糖组、LPS组细胞活力与正常对照组相比差异均无统计学意义(P＞0.05);高糖组BV-2 CD11b蛋白含量较正常对照组显著升高(P ＜0.01),与LPS组类似(P＞0.05);高糖组BV-2 CD11b-mRNA值较正常对照组显著升高(P＜0.01),且显著高于LPS组(P＜0.01).结论:75mmol/L高糖培养BV-2 24h,在不影响细胞活力的条件下,可显著上调BV-2活化标志物CD11b蛋白及mRNA表达,作用与LPS相当.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2016(045)007【总页数】4页(P40-43)【关键词】高糖;小胶质细胞;活化;脂多糖【作者】景光婵;张孟仁【作者单位】100730 中国医学科学院北京协和医院中医科;100730 中国医学科学院北京协和医院中医科【正文语种】中文【中图分类】R749.24;R-332国际糖尿病联盟在2011年公布的糖尿病流行病学数据显示[1]，2011年全球糖尿病发生率达8.3%，到2030年，发生率会上升至9.9%，患病总人数将超过5亿。

而在我国，糖尿病发生率高达11. 6%，造成巨大经济损失[2,3]。

糖尿病慢性亚临床炎性反应的研究成为近年的热点，同时对于炎性反应在中枢神经系统疾病中的作用亦日渐得到重视[4,5]。

对1066例2型糖尿病患者进行横断面调查研究显示，血液中白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α显著升高的患者，其认知功能显著下降[6]。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910382527.8(22)申请日 2019.05.09(71)申请人 辽宁大学地址 110000 辽宁省沈阳市沈北新区道义南大街58号(72)发明人 刘学　毕秀丽　刘禹霖　陈扬　(74)专利代理机构 沈阳杰克知识产权代理有限公司 21207代理人 金春华(51)Int.Cl.C09K 11/65(2006.01)C01B 21/082(2006.01)B82Y 30/00(2011.01)B82Y 40/00(2011.01)G01N 21/64(2006.01)(54)发明名称一种纳米荧光探针的制备方法及其在检测BV2细胞活化状态中的应用(57)摘要本发明属于荧光纳米材料技术领域，具体提供了一种纳米荧光探针的制备方法，包括如下步骤：将碳源用水完全溶解，向溶液中加入小分子配体进行掺杂；超声溶解，加热即得目标产物。

所述的碳源为天然氨基酸中的一种或多种。

所述的小分子配体为尿素或氨水。

按摩尔比，碳源：小分子配体＝1:1-5。

本发明所制备的纳米荧光探针，是以碳原子为骨架结构，具有荧光性能的类球形的纳米颗粒。

该纳米荧光探针不仅可以鉴别不同活化状态的BV2细胞，而且还具有生物相容性好、安全无毒、作用效果稳定等特点。

它主要特异性识别BV2细胞膜蛋白及细胞因子；其制备方法工艺简单、易于操作，制备成本低，易于推广。

权利要求书1页 说明书3页 附图2页CN 110079311 A 2019.08.02C N 110079311A权　利　要　求　书1/1页CN 110079311 A1.一种纳米荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将碳源，用水完全溶解，向溶液中加入小分子配体进行掺杂；2)超声溶解，在180-220℃下加热即得目标产物。

2.根据权利要求1所述的一种纳米荧光探针的制备方法，其特征在于，所述的碳源为天然氨基酸中的一种或多种。

小胶质细胞激活的检测方法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述本文旨在介绍小胶质细胞激活的检测方法。

小胶质细胞是中枢神经系统的重要组成部分，其活化状态对于维持神经功能和调控脑内环境至关重要。

因此，准确检测和定量评估小胶质细胞的激活状态对于研究神经科学，了解神经系统疾病的发生机制以及开发相应的治疗策略具有重要的意义。

随着研究的深入，人们意识到小胶质细胞在脑功能中的重要性，并开始关注小胶质细胞与神经元之间的相互作用。

然而，由于小胶质细胞的结构特殊性和其数量的限制，传统的检测方法对于小胶质细胞激活的准确评估存在一定的局限性。

为了解决这一问题，许多科学家和研究者致力于开发新的小胶质细胞激活检测方法。

这些方法基于分子生物学、免疫学、脑成像等技术手段，通过监测特定的标志物或者反应指标来判定小胶质细胞的激活程度。

这些方法的应用范围广泛，既可以在基础研究中用于解剖和理解小胶质细胞的功能，也可以在临床研究中用于神经系统疾病的诊断和治疗。

然而，虽然已经有了一些成功的小胶质细胞激活检测方法，但是目前仍存在一些挑战和难题。

首先，小胶质细胞的结构和功能多样性使得寻找普适有效的激活标志物具有一定难度。

其次，小胶质细胞激活的时间动态性使得实时监测和定量评估成为了一个挑战。

此外，对于小胶质细胞功能的全面评估，还需要将其与神经元的相互作用和环境因素纳入考虑。

因此，本文将综述现有的小胶质细胞激活检测方法，旨在总结其优缺点，探讨其应用前景，并展望未来的研究方向。

通过对这些方法的综合分析，我们可以更好地了解小胶质细胞活化的机制和功能，为进一步研究神经系统疾病的治疗和干预提供理论依据和方法支持。

文章结构部分内容如下:1.2 文章结构本篇文章主要围绕小胶质细胞激活的检测方法展开讨论。

为了更好地理解和探究小胶质细胞激活的机制以及其重要性，文章分为三个主要部分进行探讨。

第二章为正文部分，将详细介绍胶质细胞的激活机制、小胶质细胞的重要性以及现有的小胶质细胞激活检测方法。

· 论著 ·乌帕替尼对氧糖剥夺/复氧后BV2细胞极化的影响宋志兵1,4，张　倩1,4，章越凡2，邱　彦3，李铁军1,4（1. 安徽中医药大学药学院，安徽合肥 230012；2. 海军军医大学药学院药理学教研室，上海 200433；3. 上海市浦东新区人民医院，上海 201200；4. 上海市浦东新区浦南医院药剂科，上海200125）［摘要］　目的　研究乌帕替尼对氧糖剥夺再复氧（OGD/R）后BV2小胶质细胞极化及炎症的影响，并探讨其作用机制。

方法　实验分对照组、OGD组和乌帕替尼组3组。

BV2细胞经OGD/R处理后，噻唑蓝试剂(MTT)检测细胞生存率，划痕实验观察细胞迁移能力，实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)检测BV2细胞M1型极化标志物（CD11b、CD32、iNOS）和M2型极化标志物（Arg-1、IL-10、CD206）的mRNA水平，酶联免疫吸附测定(ELISA)检测培养基中IL-1β、IL-6、TNF-α含量，蛋白质印迹法(Western Blot)检测JAK1/STAT6通路相关蛋白表达水平。

结果　乌帕替尼能增加OGD/R后BV2细胞的生存率（P<0.05），能减少BV2细胞向M1型极化（P<0.05）。

乌帕替尼可明显降低OGD/R诱导的BV2细胞的迁移能力（P<0.05），减少OGD/R诱导BV2细胞分泌的炎症因子：IL-1β、IL-6、TNF-α（P<0.05）。

乌帕替尼提高共培养PC12细胞的生存率（P<0.05）。

乌帕替尼可显著抑制由OGD/R诱导激活BV2细胞p-JAK1和p-STAT6蛋白的表达水平（P<0.05）。

结论　乌帕替尼可减少OGD/R诱导BV2细胞向M1型极化和减少炎症反应，与JAK1/STAT6通路有关。

［关键词］　乌帕替尼；氧剥夺/复氧；极化，炎症，酪氨酸激酶/信号传导及转录激活因子［中图分类号］　R965 ［文献标志码］　A ［文章编号］　1006-0111（2021）02-0112-06［DOI］　10.12206/j.issn.1006-0111.202012006Effects of upadacitinib on BV2 cells after oxygen–glucose deprivation/recovery SONG Zhibing1,4，ZHANG Qian1,4，ZHANG Yuefan2，Qiu Yan3，LI Tiejun1,4（1. School of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230012, China; 2. Department of Pharmacology, School of Pharmacy, Naval Medical University, Shanghai 200433, China; 3. People′s Hospital of Pudong New Area, Shanghai 201200, China; 4. Department of Pharmacy, Punan Hospital of Pudong New Area, Shanghai 200125, China）［Abstract］　Objective　To investigate the effects of upadacitinib on the polarization and inflammation of BV2 microglia after oxygen glucose deprivation/recovery (OGD/R) and to explore its mechanism of action. Methods　The experiment was divided into 3 groups: control group, OGD group and upadacitinib treatment group. After BV2 cells were treated with OGD/R, MTT was used to detect cell survival rate. Wound scratch assay was used to detect the cell migration ability. qPCR was used to detect mRNA levels of M1-type polarization markers (CD11b, CD32, iNOS) and M2-type polarization markers (Arg-1, IL-10, CD206) of BV2 cells. ELISA was used to detect the levels of IL-1β, IL-6, and TNF-α in the culture medium. Western blot was used to detect the expression levels of JAK1/STAT6 pathway-related proteins. Results　Upadacitinib increased the survival of BV2 cells after OGD/R (P<0.05), reduced the polarization of BV2 cells to M1 type (P<0.05). Upadacitinib significantly decreased the migration ability of BV2 cells induced by OGD/R (P<0.05), reduced the inflammatory factors secreted by BV2 cells induced by OGD/R: IL-1β, IL-6, TNF-α (P<0.05). Upadacitinib increased the survival rate of co-cultured PC12 cells (P<0.05). Upadacitinib significantly inhibited the expression levels of p-JAK1 and p-STAT6 proteins in BV2 cells activated by OGD/R induction (P<0.05). Conclusion　Upadacitinib decreases polarization of BV2 induced by OGD/R to M1 type and reduces inflammation, which is related to JAK1/STAT6 pathway.［Key words］　upadacitinib；OGD/R；polarization, inflammation, JAK/STAT［基金项目］ 浦东新区卫生系统学科建设项目（新兴、交叉学科-精准临床药学，PWXx2020-03）；浦东新区卫生和计划生育委员会学科建设项目（重要薄弱学科-临床药学，PWZbr2017-16）；上海市健康医学院协同创新重大专项（SPCI-18-13-001）［作者简介］ 宋志兵，硕士研究生，Email：************************［通信作者］ 李铁军，博士，副教授，研究方向：心脑血管药理学，Email：**************小胶质细胞是参与防御脑缺血再灌注损伤的主要免疫细胞，在中枢神经系统修复和神经发生中发挥重要作用。

成纤维细胞生长因子10抑制脂多糖刺激下BV2细胞的活化潘舒琳;何笑笑;胡莹莹;方明楚;姜槐;肖健;林振浪【摘要】目的:探索成纤维细胞生长因子10(fibroblast growth factor 10,FGF10)对脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)刺激下小胶质细胞BV2活化的影响.方法:小鼠BV2小胶质细胞用细胞培养基DMEM培养,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养,1~2 d换液,4~5 d传代.实验分为对照组、LPS组和FGF10组,FGF10组的BV2细胞预先给予FGF101 mg/L 30 min后,在LPS组和FGF10组中加入500 mg/L的LPS,在不同时点进行检测.用倒置显微镜观察小胶质细胞的形态学改变,RT-qPCR和ELISA分别检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)转录和蛋白表达水平的改变来观测BV2细胞的活化情况.结果:静息状态下BV2细胞形态呈圆形或椭圆形,经过24 h LPS刺激后,BV2细胞形状向多极或纺锤样改变,活化细胞数量比值明显高于对照组;预先给予FGF10能抑制LPS刺激下的BV2细胞向活化形态改变,活化的BV2细胞明显减少.给予LPS刺激6 h后,LPS组TNF-α的mRNA水平相比于对照组显著升高,然而预先给予FGF10会显著抑制TNF-α的转录.LPS作用24 h后,细胞培养上清液内TNF-α的表达水平与对照组相比显著上升,而预先给予FGF10在蛋白水平显著抑制TNF-α的表达.结论:FGF10能够成功抑制LPS刺激下BV2细胞的活化,有望成为治疗经胶质细胞介导的神经系统炎症性疾病的一种有效药物.%AIM: To investigate the effects of fibroblast growth factor 10 ( FGF10 ) on lipopolysaccharide ( LPS)-induced microglialactivation .METHODS:Mouse BV2 microglial cells were maintained in DMEM in a humidified incubator with 95%/5%( V/V) mixture of air and CO 2 at 37℃.The medium was cha nged every 1 or 2 d.The cells were digested and passaged every 4 or 5 d.The BV2 microglial cells were first pretreatedwith FGF 10 (1 mg/L) for 30 min and then stimulated with LPS (500μg/L).The medium and the cells were collected at different time points .The morphologi-cal changes of microglia were visualized under microscope .To evaluate the microglial activation , the transcription and pro-duction of proinflammatory factor tumor necrosis factor-α( TNF-α) were examined by real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), respectively.RESULTS:The morphology of control BV2 microglia showed circular or oval shape .After exposure to LPS for 24 h, the microglia revealed spindle shaped or multipolar morphology , and the percentage of activated cells was significantly increased compared with control group.Pretreatment with FGF10 successfully inhibited the morphological change from normal to activated shape .LPS sti-mulation for 6 h significantly increased the transcription of TNF-α, while FGF10 pretreatment remarkably reversed the effect.In addition, the production of TNF-αincreased in the presence of LPS stimulation for 24 h compared with control group.Pretreatment with FGF10 suppressed LPS-induced TNF-αexpr ession.CONCLUSION: Pretreatment with FGF10 inhibits the morphological change from normal to activated shape , and remarkably suppressed the transcription and produc-tion of TNF-α.FGF10 successfully suppresses LPS-induced BV2 microglial activation , indicating that FGF10 is a therapeu-tic agent for the treatment of glia-mediated neuroinflammatory diseases .【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2017(033)003【总页数】5页(P534-538)【关键词】成纤维细胞生长因子10;BV2细胞;脂多糖;肿瘤坏死因子α【作者】潘舒琳;何笑笑;胡莹莹;方明楚;姜槐;肖健;林振浪【作者单位】温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院新生儿科,浙江温州325027;温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院新生儿科,浙江温州325027;温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院新生儿科,浙江温州325027;温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院新生儿科,浙江温州325027;温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院新生儿科,浙江温州325027;温州医科大学药学院,浙江温州325035;温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院新生儿科,浙江温州325027【正文语种】中文【中图分类】R363.2炎症反应是许多中枢神经系统性疾病中十分重要的病理过程。

MPL体外诱小胶质细胞产生较低的炎症反应。

小胶质细胞是高度动态的细胞，可以进行快速的肌动蛋白细胞骨架的迁移或吞噬异物的重塑。

LPS激活体外培养小胶质细胞表现出深刻的细胞形态的改变，从一个未活化的形状的变化（图2A）为细长和多极化的形态（图2B）。

同时也刺激了细胞骨架重构（图2C），但mpl的程度比LPS较低。

类似的差异（MPL < LPS）是细胞迁移的观察（图2和图S1）。

为了评估这些形态/动力改变是否与先天免疫激活相关，?(什么意思)我们比较用MPL或LPS处理后的小胶质细胞活化的细胞标记物的表达。

相反，LPS，MPL处理并不能诱导的环氧合酶-2（COX-2）表达（图左）或形成亚硝酸盐（图2），LPS诱导的小胶质细胞的激活两个经典的标记。

而MPL没有触发细胞因子诱导型一氧化氮合酶（iNOS）（图2），治疗与MPL或LPS LED在精氨酸1类似的下降（ARG1）蛋白的表达（图2），对巨噬细胞替代激活的敏感指标（17）。

这一发现是出乎意料的，这两种酶一般是负调节（17）。

这反映了不同的MPL TLR4刺激的多方面的影响。

小胶质细胞治疗诱导的TNF-αmRNA MPLα（图2K）和蛋白质（图2）的表达，虽然在较低的水平比较，LPS。

两个MPL和LPS诱导CCL2 mRNA表达水平相似（图2）。

经过2小时的潜伏期MPL和LPS诱导TLR2基因表达水平（图2）相当，但在MPL处理细胞水平较低，在4和24 h（表S2）。

这些结果表明，诱导小胶质细胞MPL低炎症和短暂的先天免疫反应的同时还诱导特性例如迁移和细胞骨架重构。

图2。

MPL诱导小胶质细胞较低的炎症反应。

BV-2小胶质细胞被刺激24小时与1μμg ／ml的LPS或MPL。

肌动蛋白（绿色）染色的鬼笔环肽暴露不同的细胞形态：（一）未激活的变形形状，（b）LPS激活的细长的和多极化的形态，和（C）一个MPL 诱导的中间表型。

（比例尺，100μM.）（D）在至少70个细胞每治疗组总的突出长度的测定。