武汉地区Ⅰ型鸭疫里氏杆菌的分离鉴定

鸭疫里氏杆菌的分离鉴定和药敏试验作者：刘丽君，万培伟，万根来源：《江西畜牧兽医杂志》 2014年第5期刘丽君1，万培伟2，万根 3，刘昌林4（1.吉安市澄江镇人民政府，江西吉安 343000；2.江西生物科技职业学院；3.江西农业大学；4.南昌市农科院）摘要：对江西丰城地区某规模化养鸭场疑似鸭传染性浆膜炎的病死鸭进行病原菌的分离鉴定、生化试验和药敏试验,初步鉴定为鸭疫里氏杆菌。

药敏实验结果发现分离菌对庆大霉素、链霉素、氯霉素、阿米卡星、环丙沙星、呋喃唑酮高度敏感，对青霉素、红霉素、诺氟沙星、四环素、氨苄西林存在耐药性。

关键词：鸭疫里氏杆菌；生化鉴定；药敏试验鸭疫里氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎[1]，是由鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的以家鸭、家鹅、火鸡等多种禽类多发的一种急性或慢性传染病，主要引起1～8周龄尤其是2～3周龄雏鸭大批发病、死亡、生长发育受阻[2]，其病理变化特点为纤维性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪型输卵管炎和脑膜炎，发病率5%～90%，病死率可高达90%[3]，随着抗药菌广泛、长期大量甚至违规使用，使得鸭疫里氏杆菌耐药现象日益增多，因此用药前最好能做药敏实验，筛选高敏药物，并注意药物的交替使用。

目前鸭传染性浆膜炎已成为危害养鸭业的主要细菌性传染病之一,通过细菌分离、鉴定、生化鉴定、药敏实验，对于鸭疫里氏杆菌的预防和治疗有一定的意义。

本研究从初步鉴定为鸭疫里氏杆菌病的病死鸭心包液、肝脏、和脾脏等病料中分别进行了细菌的分离和鉴定，并进行了药敏试验确定了其敏感药，为鸭传染性浆膜炎的有效防制提供一定的科学依据。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 病料来源。

从江西省丰城地区某规模化养鸭场疑似鸭传染性浆膜炎发病鸭中取鸭的心脏、肝脏与平皿内，4℃保存待检。

1.1.2 主要试剂。

药敏片和生化微量发酵管（购自杭州天和微生物试剂有限公司，4℃冰箱保存）、无菌犊牛血清（购自杭州天杭微生物科技有限公司）。

幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验一、引言鸭疫是一种由鸭疫里默氏杆菌引起的急性传染病，主要发生在水禽中，特别是对于幼鸭来说更为致命。

鸭疫病症主要表现为高热、抑郁、呼吸急促、鸭群死亡率极高，对农业生产造成了严重的危害。

对鸭疫病原菌的分离鉴定及药敏试验成为显得尤为重要。

二、分离鉴定1. 样品采集从患有鸭疫的幼鹅体内取样，如肺、脾、肝等内脏组织进行采集。

将样品放入无菌离心管中，冷链运输至实验室。

2. 细菌分离将取样的组织进行匀浆处理，然后用无菌梳子在无菌平板上均匀涂布。

置于37℃培养箱中培养24-48小时，直至出现细菌克隆。

3. 形态特征观察观察克隆菌落的形态特征，里默氏杆菌在培养基上呈现为小、灰白色，透明且呈环形的菌落，细菌呈杆状。

4. 生理生化特性鉴定将分离的细菌进行革兰氏染色，鉴定其为革兰氏阴性菌；进行氧化酶试验、嗜碱性酸加索试验等生化鉴定来确认细菌的特性。

5. 分子生物学鉴定利用PCR技术进行DNA提取和扩增，选择里默氏杆菌特异的引物进行扩增，最后通过测序鉴定其属于里默氏杆菌。

三、药敏试验1. 抗生素选取常见供试的抗生素包括庆大霉素、环丙沙星、卡那霉素、氨苄青霉素、头孢他啶、磺胺类药物等。

2. 药敏试验操作将分离的里默氏杆菌接种于固体培养基上，然后将不同抗生素的药片均匀涂布在培养基上，培养一段时间后观察对抗生素的敏感性。

3. 敏感性判定观察各药片周围是否有抑菌圈，并计算出抑菌圈直径，根据国家卫生部门颁发的药物抗菌圈直径标准来判断药敏性。

4. 结果判定根据药敏试验的结果，选择对里默氏杆菌具有良好疗效的抗生素进行治疗。

四、结语对幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验是鉴定病原体和确定治疗方案的重要手段。

合理的抗生素治疗可以有效控制鸭疫病的传播，保障畜禽养殖业的顺利进行。

希望通过不懈的努力，能够及时发现并有效治疗鸭疫病，保障水禽养殖业的健康发展。

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定与药敏试验作者：秦绪伟吴昊王蕾刁有祥来源：《畜牧兽医科学》2017年第05期摘要：2017年3月，山东潍坊某养殖场养殖肉鸭15000X，发生急性死亡、神经症状、厌食为主要特征的疾病，经实验室解剖化验、细菌的分离鉴定、分子生物学的鉴定，最终确诊为鸭里默氏杆菌病，经药敏试验，选择敏感性高的药物治疗，最终控制了病情。

关键词：鸭里默氏杆菌病；鉴定；毒力；药敏中图分类号：S858.23 文献标识码：B 文章编号：2096-3637（2017）05-0002-03鸭里氏杆菌病又称为鸭传染性浆膜炎，是由鸭疫里默氏杆菌引起的幼鸭的一种急性传染病，主要侵害1～8周龄的小鸭，是造成幼鸭死亡的主要传染病之一。

鸭疫里默氏杆菌，菌体呈现杆状或者椭圆，菌体大小为0.3～0.5×0.7～6.5um，也有的呈现长丝状，可以达到11～24um。

细菌少数呈现短链排列或者成双排列，多数呈现单个存在，可形成荚膜，无鞭毛，革兰氏染色呈现阴性，瑞氏染色可见细菌呈现两极浓染。

鸭疫里默氏杆菌的生长营养要求比较高，普通的琼脂平板、麦康凯平板、SS琼脂平板不生长，细菌分离时需要在5%二氧化碳环境中分离，37℃培养24h以上。

鸭疫里氏杆菌发病主要是发生在2～3周龄的小鸭，一年四季都有发生，各种应激都会促进疾病的发生，饲养密度大、环境卫生差、饲养管理不善、维生素缺乏等原因都会造成疾病的发生，剖检明显症状以纤维素性心包炎、肝周炎，严重的引起气囊炎以及有的发病鸭可以出现干酪性输卵管炎、关节炎，死亡率高，耐过的鸭生长迟缓、饲料报酬低，该病成为养殖场养鸭业影响比较大疫病。

2017年3月，山东潍坊某肉鸭养殖场，养殖15日龄的肉鸭15000只，开始有少量死亡，每天死亡10只左右，未引起重视，以为环境变化、天气原因引起的发病，发病都为急性死亡，3d后死亡率开始增加，每天死亡50多只、100多只，严重的死亡每天300只，发病表现有的精神萎靡、神经症状、厌食、嗜睡、缩颈，部分发病的鸭子表现眼睛浆液性或者粘液性的分泌物，眼睛周围羽毛脱落，鼻孔有粘液或者浆液性的分泌物，粪便稀薄，两腿伸直或者尾部摇摆，不久后抽搐死亡。

Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报2023,31(3):41-45·研究论文·湖北省鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析朱玲玲1，孙敏华2，胡 怡1，汪 婷1，徐 欢1，汪 威1，殷世彬1，汪招雄1（1.长江大学动物科学学院，荆州434025；2.广东省农业科学院兽医研究所，广州510640）摘 要：鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里默氏杆菌（RA ）感染引起的一种雏鸭高度接触性传染病。

为了解该病在鸭群中的发病情况、细菌耐药性变化，本研究从湖北省不同地区鸭场采集鸭传染性浆膜炎疑似病例肝脏，分离到34株细菌，对分离细菌进行培养、形态观察、生化鉴定、耐药性检测和氟苯尼考耐药基因测定。

药敏试验显示34株分离株对头孢噻肟、大观霉素和阿米卡星敏感性比较高，对新霉素和诺氟沙星耐药性最强。

PCR 扩增RA 氟苯尼考flor 基因，16株分离株可以扩增出该基因，所得序列与Flor 蛋白全基因序列比对，相似性高达100%。

关键词：鸭疫里默氏杆菌；PCR 鉴定；耐药性检测；fl or 基因测定中图分类号：S852.61文献标志码： A文章编号：1674-6422（2023）03-0041-05Isolation, Identifi cation and Drug Resistance of Riemerella anatipestifer in Hubei ProvinceZHU Lingling 1, SUN Minhua 2, HU Yi 1, WANG Ting 1, XU Huan 1, WANG Wei 1,YIN Shibin 1, WANG Zhaoxiong 1(1. College of Animal Science, Yangtze University, Jingzhou 434025, China; 2. Institute of Veterinary Medicine, Guangdong Academy ofAgricultural Sciences, Guangzhou 510640, China)收稿日期：2021-01-03基金项目： 湖北省农业科学学院农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室开放课题资助（KLAEMB-2017-04）作者简介：朱玲玲，女，硕士，主要从事为动物传染病防制和病原感染宿主致病机制研究通信作者：汪招雄，E-mail：****************Abstract: Infectious serositis in duck is a highly contagious infection caused by Riemerella anatipestifer . In order to understand the incidence of this disease in the duck population and the drug resistance, liver samples were collected from ducks suspicious of infectious serositis from different regions of Hubei province and 34 bacterial strains were isolated and identifi ed as R. anatipestifer based on culture, morphology, biochemical reaction. These strains were tested for their drug resistance. These strains were susceptible to cefotaxime,spectinomycin and amikacin and resistant to neomycin and norfl oxacin. In addition, the fl orfenicol fl or gene was amplifi ed in PCR from 16 isolates and compared with the whole flor gene sequence at 100% identity.Key words: Riemerella anatipestifer ; PCR identification; drug resistance test; fl or gene 鸭传染性浆膜炎（infectious serositis of duck）是由鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer , RA）感染鸭引起的一种高度接触性败血性传染病[1-2]。

2024.03 71鸭疫里默氏杆菌病是一种接触性传染病，导致病鸭出现纤维素性的心包炎、肝周炎等，主要感染2～8周龄的鸭，传染性和死亡率较高，严重危害鸭养殖业的发展。

1　流行特点该病的病原菌是鸭疫里默氏杆菌，为革兰氏阴性菌，无芽孢，无鞭毛，有荚膜，有21个的血清型，各血清型间无交叉免疫，我国流行的类型主要是血清1型。

该病一年四季均可发生，传染源为病鸭和带菌鸭，污染饲料、饮水和垫料等，健康鸭主要通过消化道、呼吸道和接触感染。

不同品种、年龄、性别的鸭均可感染，但 2～8周龄的鸭最易发病，1周龄以内和成年鸭几乎不会发病。

2　临床特点该病有1～3天的潜伏期，最急性型病程短，没有明显的临床症状，可在几小时内死亡。

急性型的病程在1～3天，发病初期病鸭精神萎靡，共济失调，嗜睡，喜卧，缩颈或低头啄地，食欲减退甚至废绝，眼鼻分泌物增多，呈黏液性或浆液性，黏连眼睛周围羽毛导致羽毛脱落，并堵塞鼻腔，致使病鸭咳嗽和打喷嚏。

有的病鸭腹泻，稀便由白色变为绿色，有腥臭味；有的病鸭有角弓反张等神经症状，严重者全身抽搐，死亡。

亚急性或慢性型的病程较长，通常在7天左右，病鸭精神萎靡，嗜睡，羽毛杂乱，离群独卧，共济失调，前仰后翻或转圈，有的病鸭头颈歪斜，易受惊吓，鸣叫不停；有的病鸭跗关节肿胀，跛行，最后逐渐衰竭死亡。

3　病理变化剖检病死鸭发现，肺部充血、水肿，有炎症；气囊增厚、浑浊，有纤维素性渗出物附着；心脏边界不清，心外膜表面有纤维素性渗出物，可与心包发生黏连；心包积液，心包膜变厚，心包和肝脏表面有一层易剥离的纤维素膜，呈淡黄色或者灰白色；肝脏质脆、肿大，呈土黄色或棕红色，可有小坏死灶；脾脏肿大，表面呈花斑状；肾脏充血；大部分病鸭有输卵管炎的症状，产蛋率低，有的病鸭有纤维素性脑膜炎、跗关节积液等症状。

4　诊断根据病鸭的发病特点和剖检结果等可做初步诊断，经实验室检查才可确诊。

无菌条件下，取病死鸭的心、肝、脑等组织接种于普通琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基和巧克力琼脂培养基，37℃培养1～2天，只有巧克力琼脂培养基上有表面光滑、湿润的菌落生成。

鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析韩心语,邓建峰,张丽霞,刘倩,王颖,田文霞（山西农业大学动物医学学院，山西太谷030801）摘要:为调查鸭疫里氏杆菌对常用抗菌药物的敏感性，试验从广东和山东地区病鸭体内分离到10株病原菌，通过细菌形态观察、革兰氏染色、瑞氏染色和PCR 对菌株进行种属鉴定，并采用Kirby-Bauer 纸片法测定鸭疫里氏杆菌对15种常见抗菌药物的耐药性。

结果表明，分离到10株菌均为鸭疫里氏杆菌；10株菌均对茁-内酰胺类（阿莫西林、青霉素、氨苄西林）、氨基糖苷类（庆大霉素、链霉素、大观霉素、卡那霉素）和林可霉素类药物（林可霉素）的耐药率在50%以上，对大环内酯类（红霉素）耐药率较低，为10%；但分离菌株都对喹诺酮类（左旋氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星）、四环素类药物（四环素）、氯霉素类（氟苯尼考）和头孢噻呋钠高敏。

通过对鸭疫里氏杆菌的耐药性检测，其结果对当地鸭疫里氏杆菌病的临床用药具有一定的指导意义。

关键词:鸭疫里氏杆菌；分离；鉴定；Kirby-Bauer 纸片法；耐药性检测中图分类号:S858.32文献标识码:A文章编号:1002-2481（2021）05-0675-04Isolation ，Identification and Drug Resistance Analysis of Riemerella anatipestiferHAN Xinyu ，DENG Jianfeng ，ZHANG Lixia ，LIU Qian ，WANG Ying ，TIAN Wenxia（College of Veterinary Medicine ，Shanxi Agricultural University ，Taigu 030801，China ）Abst ract ：To investigate the susceptibility of Riemerella anatipestifer to commonly used antibacterial drugs,10strains of pathogens were isolated from diseased ducks in Guangdong and Shandong,and the strains had been identified by morphological observation,Gram staining,Swiss staining and PCR.The resistance of Riemerella anatipestifer to 15common antibacterial drugs were determined by Kirby-Bauer disc method.The results showed that the 10strains isolated were all Riemerella anatipestifer ,all 10strains were resistant to β-lactams （amoxicillin,penicillin,ampicillin ）,aminoglycosides （gentamicin,streptomycin,spectinomycin,kanamycin ）and lincomycin drugs （lincomycin ）,and the resistance rate was more than 50%,the resistance rate of macrolides （erythromycin ）was low,which was 10%.But the isolated strains were all highly sensitive to quinolone （levofloxacin,ciprofloxacin,enrofloxacin ）,tetracyclines （tetracycline ）,chloramphenicol （florfenicol ）and ceftiofur sodium.The detection results of drugs resistance of Riemerella anatipestifer had a certain guiding significance for clinical medication.Key words ：Riemerella anatipestifer ;isolation;identification;Kirby-Bauer disc method;drug resistance detection收稿日期:2020-12-24作者简介:韩心语（1995-），男，河北石家庄人，在读硕士，研究方向：动物疫病发生与免疫。

一株鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏实验余树培，陈静华，韩昆鹏，吴婷婷，陈丽珠(江苏省盐城市畜牧兽医站，江苏盐城224001)摘要：为了有效防治鸭疫里默氏杆菌病，本研究对送检的疑似病料进行鸭疫里默氏杆菌"liemerella anatidzs，&")PCR检测，将阳性病料进行细菌分离培养，通过革兰染色、生化实验及PCR验证进行鉴定，并对该分离株进行药敏实验%结果显示，脑、脾、肝病料RA阳性，分离株鉴定为命名为YCSY1，该分离株对环丙沙星等7种抗生素表现为耐药，对头抱&咻和多西环素中度敏感，对青霉素、氧氟沙星和氨*西林高度敏感％关键词：鸭疫里默氏杆菌&分离鉴定&药敏实验鸭疫里默氏杆菌病又称鸭浆膜炎、鸭败血病、鸭疫综合症等，是由鸭疫里默氏杆菌(.Rtemerella anatidis，RA)引起的鸭急性或慢性、接触性传染病,病理症状主要表现为纤维性心包炎、肝周炎和气囊炎(1)%RA主要感染1〜8周龄雏鸭，致死率高，病鸭生长发育迟缓，给国内、外养鸭业带来了巨大经济损失閃％RA血清型复杂，已报道的血清型有20余种，并且各血清型之间交叉免疫保护效果差，在使用疫苗的情况下,仍有部分养殖场出现相关病例⑷％因此，对于鸭疫里默氏杆菌病的防治，RA的快速检测和科学用药至关重要％笔者对盐城市射阳县某养殖场送检的1例鸭疫里默氏杆菌病疑似病例进行RA PCR检测，从阳性病料中成功分离出YCSY1菌株，并通过药敏实验筛选敏感药物，为该鸭场鸭疫里默氏杆菌病的防控提供参考％1材料与方法1.1材料1.1.1病料和菌株病料为盐城市射阳县某鸭场的病死鸭，6周龄％解剖可见，心脏、肝脏表面有大量灰白色炎性渗出物，呈现鸭疫里默氏杆菌病典型症状％无菌采集脑及心、肝、脾、肺、肾组织％RA阳性对照菌株YCBH1由江苏省盐城市畜牧兽医站保存％1.1.2主要试剂与仪器胰酪蛋白月东大豆肉汤培养液(Trypticase soy broth,TSB)、胰酪蛋白东大豆琼脂培养基(Tryp-tose soya agar,TSA)均购自上海博微生物科技有限公司，新生小牛血清(Neonatal bovine serum, NBS)购自上海碧云天生物技术有限公司，组织DNA提取试剂盒购自天根生化科技有限公司，革兰染色液、12种药敏试纸、细菌微量生化反应管均购自杭州微生物试剂有限公司，Premix Taq DNA聚合酶、DNA Marker DL2000、DNA Marker DL5000均购自TaKaRa公司％根据参考文献[5],设计RA外膜蛋白A编码序列的特异性弓I物(F：5'-GGAGCCAACTATTT-GAGAC-3'；R：5^GACCTGGAACATTAGGA-CACT-3'),委托上海生工生物工程有限公司合成％Mastercycler nexus PCR仪为德国Eppendorf 公司产品，恒温培养摇床KYC-100C购自上海新苗医疗器械制造有限公司，核酸电泳仪PowerPac Basic、凝集成像仪Gel Doc XR+均为美国Bio-Rad 公司产品％1.2方法1.2.1疑似病例病料的PCR检测分别从采集的脑及心、肝、脾、肺、肾等组织样本中剪取小块，参考组织DNA提取试剂盒说明书，从各组织中提取总DNA作为PCR检测模板；按照Premix Tq DNA聚合酶说明书，进行PCR反应％反应程序: 94°C预变性5min；94]30s,56]30s,72]45s,共30个循环；72C延伸5min；4C保温。

鸭疫里默氏菌的分离和鉴定张　程沭阳县农业农村局，江苏沐阳２２３６００摘　要　为明确规模化鸭场病因，开展了鸭疫里默氏菌的分离和鉴定。

通过采集病料进行实验室诊断，经细菌分离鉴定及ＰＣＲ特异性扩增、产物测序鉴定方法，明确从规模化鸭场分离得到的细菌为鸭疫里默氏菌。

检测结果为鸭场制定科学的预防和治疗方案提供了参考，对及时治疗病鸭、防止疾病传播、减少养鸭场的经济损失具有重要意义。

关键词　鸭疫里默氏菌；分离；鉴定ｄｏｉ：１０．１９５６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８ ０４１４．２０２４．０３．００５０　引言鸭疫里默氏菌（Ｒｉｅｍｅｒｅｌｌａａｎａｔｉｐｅｓｔｉｆｅｒ）属于黄杆菌科、里氏杆菌属，为革兰氏阴性短小杆菌，无芽孢，不能运动，有荚膜，瑞氏染色呈两极浓染［１］。

对培养鸭疫里默氏杆菌的营养条件有较高的要求，在普通培养基和麦康凯培养基上无法生长，在鲜血琼脂平板上不溶血。

该菌不发酵糖类，不产生吲哚和硫化氢，不还原硝酸盐［２］。

鸭疫里默氏菌易引发雏鸭的鸭疫里默氏菌病，又称鸭传染性浆膜炎，呈现急性、慢性或败血症感染［３ ４］。

病鸭临床表现为排出绿色稀粪、眼睛和鼻子分泌物增多［５］，常伴有角弓反张等神经症状。

其大体病理变化主要为气囊浑浊，心包膜出现纤维素性炎症，少数情况会出现输卵管炎并在输卵管内有干酪样沉淀物，该病的病理变化与鸭沙门氏菌和致病性大肠杆菌感染的病理变化相似，故若要确诊须进行鉴别诊断，并进行微生物的分离鉴定［６］。

鸭疫里默氏菌在鸭场中较为常见，广泛存在于土壤、水源、鸭舍等，在鸭子体表、黏膜、鼻咽等部位均有寄生，容易引发动物感染、食品污染导致动物发病、食物中毒等。

该细菌是存在于动物皮肤表面的一种常在菌，通常情况下不侵入机体体内，多见于水平传播，可通过破损的皮肤或黏膜、消化道、呼吸道、汗腺、毛囊等侵入机体，感染途径较多。

同时，该病易受外界应激因素影响，例如恶劣环境、惊吓、外伤感染、昼夜温差等均可成为该病流行暴发的诱因［７］。

幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
默氏杆菌是一种革兰氏阴性杆菌，属于肠道细菌家族。

它是引起鸭疫的病原体之一，
在幼鹅中感染常引起严重症状，因此对于幼鹅感染鸭疫并且怀疑被默氏杆菌感染的情况，
需要进行分离鉴定和药敏试验。

对于感染鸭疫的幼鹅样本，需要应用适当的方法进行细菌的分离。

可以选择样本进行
培养，并将培养基中生长出的菌进行聚准动物类鸭疫菌检查。

分离出的菌落可以进行形态
学和生理生化特性的观察，以了解其基本特征。

在形态学上，默氏杆菌具有呈杆状的形态，通常为直线状或弯曲状。

它是革兰氏阴性，因此可以通过革兰氏染色进行观察。

生理生化特性方面，默氏杆菌是厌氧菌，无需氧气即
可生长，并且在培养基中产生硫化氢。

除了形态学和生理生化特性的观察，还可以采用分子生物学方法对默氏杆菌进行进一
步鉴定。

可以提取细菌的基因组DNA，并进行PCR扩增和测序分析。

通过与数据库中已知
的默氏杆菌的基因序列进行比对，确认所分离的菌株是否为默氏杆菌。

在药敏试验方面，可以利用已知的抗生素药盘进行药敏试验。

将分离出的默氏杆菌进
行培养，并将其均匀涂在含有抗生素的培养基上。

根据菌落的生长情况和抑制圈的直径进
行判断，以确定默氏杆菌对某种特定抗生素的敏感性。

对于幼鹅感染鸭疫并怀疑被默氏杆菌感染的情况，需要进行分离鉴定和药敏试验。

通
过形态学、生理生化特性的观察以及分子生物学方法的应用，可以对所分离的菌株进行鉴
定确认。

而药敏试验可以确定默氏杆菌对不同抗生素的敏感性，为后续药物治疗提供指
导。

鸭疫里氏杆菌的分离及PCR鉴定作者：范荣香来源：《农民致富之友》2019年第30期鸭疫里氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎，是危害养鸭业的主要细菌性传染病。

该病主要侵害1-8周龄健康鸭，尤其引起2-3周龄雏鸭大批发病，病死率可高达80%或以上。

发病鸭以倦怠、缩颈、不食或少食、眼鼻出现大量分泌物、绿色下痢、共济失调和抽搐为主要临床特征。

随着集约化养鸭业的发展，该病的流行日趋严重，而细菌分离鉴定、PCR检测，是实验室最常用的检测方法，灵敏度较高、特异性较强，在微生物检测方面应用十分广泛。

本文根据实验室采集的病料进行细菌分离、形态染色观察、生化鉴定、PCR反应，鉴定该菌株为鸭疫里氏杆菌。

一、材料和方法1、材料（1）病料来源某养殖场饲养的300只肉鸭突然发病，发病日龄为16日龄，临床表现：主要以偏颈、眼鼻有分泌物、绿色下痢、站立不稳、运动失调为基本特征。

并出现死亡，每天死亡10-20只左右，3天死亡57只，死亡率为19%。

发病后用青霉素、土霉素、磺胺二甲嘧啶等抗菌药物治疗均未见效。

（2）病料处理剖检病（死）鸭5只，呈现典型纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎。

无菌操作采病死鸭脑、心血、肝脏做病料触片及细菌分离培养。

（3）药品与试剂革兰氏染色液、PBS、普通培养基、鲜血琼脂平板、巧克力平板、伊红美蓝平板、麦康凯平板、SS培养基、TSA培养基、生化发酵管、PCR反应试剂（rTaq、dNTP、Mgcl2、10×PCRbuffer）和DNAMarker等购自宝生物工程（大连）有限公司。

（4）主要试验仪器恒温箱、冰箱、干燥箱、厌氧培养箱、显微镜、高速离心机、BIORAD凝胶成像系统。

2、方法（1）细菌分离培养无菌操作取病（死）鸭脑、心血、肝脏病料划线接种于普通琼脂平板、鲜血琼脂平板、巧克力琼脂平板各2份，分别放在厌氧和有氧条件下，37℃培养24-48h，观察菌落特征，挑选单个菌落革兰氏染色。

（2）细菌的纯化在巧克力琼脂平板上钩取厌养条件下生长的鸭疫里氏杆菌可疑菌落，分别接种于伊红美蓝平板、麦康凯平板，SS培养基，TSA培养基，置厌氧条件下，38℃培养24-48h，观察细菌的生长情况、菌落特征等。

武汉地区Ⅰ型鸭疫里氏杆菌的分离鉴定摘要从武汉郊区的3个发病鸭场中分离到3株鸭疫里氏杆菌，血清型鉴定均为ⅰ型；药敏试验结果显示分离株均对环丙沙星高敏，对青霉素g、氨苄青霉素、庆大霉素、诺氟沙星、恩诺沙星中敏。

关键词ⅰ型鸭疫里氏杆菌；分离鉴定；药敏；湖北武汉中图分类号 s858.325.1文献标识码a文章编号1007-5739（2008）19-0266-01鸭疫里氏杆菌（riemerella anatipestifer，ra）能导致鸭、火鸡和其他多种禽类发生传染性浆膜炎，以纤维性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪性输卵管炎和脑膜炎为特征的急性败血性或慢性疾病，发病率为5%～90%，死亡率为10%～60%；若治疗不当或延误治疗，死亡率可达90%以上。

ra的血清型比较复杂，目前报道的血清型至少有21个，主要以1、2、6、10型多见，各血清型之间无交叉保护性[1，2]。

自1982年郭玉璞等[3]在我国首次分离鉴定出该菌后，各省市相继有该病的报道[4，5]，影响范围不断扩大，已经成为鸭的主要传染病之一，严重影响养鸭业的发展。

近几年，随着养鸭业的发展，本病的危害也日益严重，不断有鸭场发生类似疾病，造成严重的经济损失。

为了搞好本病的防治工作，本研究对武汉市郊区的3个发病鸭场进行采样检测，现将细菌的分离鉴定和药敏试验结果报告如下。

1材料与方法1.1试验材料1.1.1病料来源。

病鸭为3～5周龄樱桃谷鸭，分别来自武汉市郊区3个肉鸭场，剖检病变为典型的纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎。

1.1.2试验试剂。

胰酶大豆琼脂（tryptic soy agar，tsa），difco 产品；绵羊血、生化鉴定管及药敏片均购自杭州天和试剂有限公司；抗raⅰ、ⅱ型血清，由华中农业大学微生物研究室提供。

1.1.3试验动物。

1日龄健康未免疫雏鸭，购自武汉天绿农业科技有限公司，自养6d后健康者供试验用。

1.2研究方法1.2.1细菌分离及生化鉴定。

无菌采取剖检可疑病鸭的肝脏和脑组织，接种营养琼脂、血液琼脂、巧克力琼脂及tsa（含10％小牛血清）平板，置co2培养箱37℃培养24～48h，观察细菌生长情况和培养特性，挑取单个菌落进行革兰氏染色并进行纯化培养。