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流动相的离子强度对RP(1).

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反相液相色谱法原理

反相液相色谱法原理

反相液相色谱法原理：
反相色谱法是一种液相色谱技术，其原理是分析物与疏水固定相之间发生非极性、非特异性的相互作用。

在反相色谱系统中，通常使用的固定相是C18、C8苯基等。

流动相则是极性溶剂，例如水，可含缓冲液或用酸或碱调节pH。

这种色谱技术的分离效果受到流动相的极性和组成等因素的影响。

拓展资料
反相色谱法是以表面非极性载体为固定相，以比固定相极性强的溶剂为流动相的一种液相色谱分离模式．反相色谱固定相大多是硅胶表面键合疏水基团，基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离．在生物大分子分离中，多采用离子强度较低的酸性水溶液，添加一定量乙腈、异内醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作流动相．普通的反相色谱固定相和孔径大于300Å的硅胶键合烷基固定相应用较为普遍，聚合物基质的反相色谱固定相也有较多应用。

反相高效液相色谱法（RP-HPLC）使用亲水性的固定相和疏水性的移动相，利用样品分子在移动相和固定相之间的互作用力差异进行分离。

一、基本原理：
1.疏水性固定相：反相色谱柱通常使用疏水性的固定相材料，如疏水链状碳氢化合物改性的硅胶或封闭的C18链，使分析物在移动相中具有亲水性，与固定相表面发生疏水作用。

2.亲水性移动相：移动相一般由水和有机溶剂混合而成，亲水性较强。

通过调节有机溶剂的类型和浓度，可以控制移动相的极性，以实现分离不同特性的分析物。

3.受体相互作用：分析物在移动相中通过水合作用与亲水性的移动相发生相互作用，进而与固定相上的疏水链状结构发生疏水作用，从而实现分离。

简述高效液相色谱法中流动相的要求

简述高效液相色谱法中流动相的要求

简述高效液相色谱法中流动相的要求高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种用于分离和分析化学、生物和制药样品的色谱技术。

在高效液相色谱过程中，流动相的选择和性能对分析的准确性和分离效果有着重要的影响。

下面将详细介绍高效液相色谱法中流动相的要求。

1.基础流动相特性：流动相应具有一定的极性和溶解性能。

常用的流动相包括水和有机溶剂，如甲醇、乙醇和乙腈等。

流动相的选择应考虑到待分离组分的性质和分析目的，要保证样品能够溶解并很好的分离。

常用的流动相配比为水/有机溶剂（如乙腈）的比例，比如常见的70:30、50:50等。

2.pH值调节：根据待分离物和色谱柱的性质，适当调节流动相的pH值可以改变待分离物的电离状态，从而影响它们在色谱柱上的分配行为。

比如，对于具有酸性基团的分析物，可以通过酸或碱的加入来调节流动相的pH值，以影响它们与色谱固定相之间的相互作用。

3.离子强度调节：有些样品中可能存在电解质，其离子强度会对分离产生影响。

在这种情况下，可以通过添加相应的盐来调节流动相的离子强度，以改变分析物与色谱固定相的相互作用。

常用的盐有甲酸铵、硫酸铵、三氟乙酸等。

4.流速控制：流动相的流速也对色谱分离的效果有着重要的影响。

流速过快可能导致分离不充分，流速过慢则会增加分析时间。

流速的选择需根据待分离物的性质、色谱柱的尺寸和色谱仪的性能等因素综合考虑。

5.除气和过滤：流动相中的气泡和杂质会影响液相的流动性和检测信号的稳定性。

因此，在使用前应对流动相进行除气处理，以减小气泡对色谱分离的干扰。

同时，对流动相进行过滤处理，可以去除其中的固体颗粒和微生物等。

通常使用0.45μm的滤膜进行过滤。

6.流动相稳定性：流动相应具有良好的稳定性，以保证分析结果的准确性和重复性。

一般来说，流动相中的溶液成分要充分溶解，不发生相分离和析出现象。

所以，流动相的配制要求严格，要遵循相应的配方和混合方法，并在使用前进行充分的搅拌和均匀。

高效液相色谱法在蛋白质分离检测中的应用_唐玲玲

高效液相色谱法在蛋白质分离检测中的应用_唐玲玲
RP—HPLC 在 HPLC 各种模式中的应用最为 广 泛，但目前比较流行的 C18 色谱柱在蛋白质的检测方 面并不多见。这是因为蛋白质分子的混合物要在 RP—HPLC 中得到分离，必须有极性的差异，且在固 定相和流动相中都有分配，而蛋白质通常都是强极性 的化合物，与 C18 的结合较困难。另外，RP—HPLC 常用的流动相，如甲醇、乙腈等都能使蛋白质变性沉 积而导致色谱柱报废。因此，当 RP—HPLC 用于蛋 白质分析时，一般需要低 pH 值流动相、较高的温度 及使用乙腈或异丙醇作为有机部分，三氟乙酸 （TFA） 作为离子对试剂，是反相色谱中最常用的添 加剂—— —蛋白质的保留性质和选择性与反相色谱键合 固定相的性质有关。随着研究的深入，越来越多的小 分子蛋白质和多肽已经能够使用 RP—HPLC 进行分 离分析[1]。 2.2 高 效 亲 和 色 谱 （high performance affinity chromatography，HPAFC）
1 HP LC 基本原理
HPLC 由液体输送系统、进样系统、色谱柱和检 测系统 4 部分所组成。输液泵将流动相以稳定的流速 （或压力） 输送至分析体系，在进入色谱柱之前通过 进样器将样品导入，流动相将样品带入色谱柱，在色 谱柱中各组分依照分配系数、吸附力大小、带电性 质，乃至分子量大小的差异而被分离，并依次随流动 相流至检测器，将检测到的信号送至数据系统记录、 处理或保存。随着 HPLC 技术的日趋成熟，它已成为 分离和检测蛋白质的重要工具。
Samira Roufik 建立了用 HPSEC 分析多种乳清蛋 白组成的方法，可以作为食品中添加乳清蛋白配方的 依据[12]。由于 HPSEC 相对温和的色谱条件，不会导 致蛋白质和多肽的变性，故常用作一些乳源性生物活 性多肽的制备，如用乳白蛋白和酪蛋白制备血管紧张 素抑制肽[13]，在对 β- 乳球蛋白体外降解的组分进行 分离分析时，采用 HPSEC 能够较好地保持产物多肽 的物理化学性质[14]。 2.5 高效疏水色谱 （high performance hydrophobic iinteraction chromatography，HPHIC）

仪器分析简答题及答案-学哥独创版

仪器分析简答题及答案-学哥独创版

二章1、简述原子发射光谱定性分析的基本原理，光谱定性分析的方法的种类及各自的适用范围答：由于各种元素的原子结构不同，在光源的激发作用下，试样中每种元素都发射自己的特征光谱，其波长是由每种元素的原子性质所决定的。

通过检查谱片上有无特征光谱出现来确定该元素是否存在。

1）铁光谱比较法，可同时进行多种元素的定性分析2）标准试样光谱比较法，适应于只定性分析少数几种指定元素1、解释下列名词1）分析线：进行分析时所使用的谱线2）灵敏线：指元素特征光谱中强度最大的谱线，通常是具有较低激发电位和较大跃迁概率的共振线3）最后线：指样品中被测元素含量或浓度逐渐减少时而最后消失的谱线，往往是灵敏线4）共振线：以基态为跃迁低能级的光谱线5）原子线：原子发射的谱线6）离子线：离子发射的谱线7）自吸：原子在高温时被激发，发射某一波长的谱线，而处于低温状态的同类原子又能吸收这一波长的辐射，这种现象称为自吸现象8）自蚀：当自吸现象非常严重时谱线中心的辐射将完全吸收，这种现象称为自蚀现象2、什么是内标线和分析线对？光谱定量分析为什么用内标法？简述其原理并说明如何选择内标元素和内标线，写出内标法的基本关系式。

答：1）内标线：在基体元素的谱线中选一条谱线作为内标线，在被测元素的谱线中选一条灵敏线作为分析线，这两条线组成分析线对。

2内标法可以提高光谱定量分析的准确度，可以在很大程度上消除光源放电不稳定因素带来的影响，可得到较准确的结果3）原理：测量谱线相对强度进行定量分析4）选择内标线与内标元素时应注意：金属光谱分析中的内标元素一般采用基体元素，矿石光谱分析中，一般不用基体元素作内标而是加入定量的其他元素5）内标元素的基本关系式3、什么是ICP光源的环状结构？简述其优缺点答：电感耦合高频等离子炬具有环状结构。

这种环状结构造成一个电学屏蔽的中心通道，这个通道具有较低的气压，较低的温度，较小的阻力，试样容易进入炬焰，并有利于蒸发，解离、激发电离以及观测。

流动相的离子强度对RP—HPLC中抗生素色谱峰形的影响

流动相的离子强度对RP—HPLC中抗生素色谱峰形的影响

ＡＢＳ ＲＡＣＴ Ｔｈ ｏ ｉ ｓ ｒ ｎ ｔ ｆｍｏ ｉ ｈ ｓ ａ ｉ ｎ ｆ ａ ｔｙ ａ ｆ ｃ ｈ ｅ ｋ ｓ ａ ｅ ｏ ｏ ｏ ｅ ｉ ｃ ｒ — Ｔ ｅ ｉ ｎ ｃ ｔ ｅ ｇ ｈ ｏ ｂ ｌ ｐ ａ ｅ ｃ ｎ ｓｇ ｉ ｃ ｎ ｌ ｆｅ ｔｔ ｅ ｐ ａ ｈ ｐ ｆｉ ｎ ｇ ｎ ｃ ｏ ｅ ｉ ｎ
ｐ ａ ｅ ｏ ｅ ｎ ｒ ａ ｉｇ ｙ ｒｇ ｔａ ｇ ｅ ｒａ ｇ ｅｉ ｈ ｐ ｔ ｎ ｒ ａ ｉｇ ｓ ｍｐ ｅｌａ ｏ ｅ ｈ ｒｗｉ ｎ ｒａ ｉｇ ｅ ｋ ｂ ｃ ｍ ｓ ｉｃ ｅ ｓｎ ｌ ｉｈ — ｎ ｌｄ ｔｉｎ ｌ ｎ ｓ ａ ｅｗｉｈ ｉｃｅ ｓｎ ａ ｌ ｏ ｄ ｔ ｇ ｔ ｅ ｔ ｉｃ ｅ ｓｎ ｈ ｐ ａ ｄ ｈ ａ ｄ ｔ ｉ ｎ ． Ｔｈ ｅ ｅ ｔｏ ｉ ｆｔ ｅ ｈ ｇ —ｏ ｃ ｎ ｒｔ ｎ ｆｏ ｔｄ ｃ ｅ ｓ ｓ ｗｉｈ ｉｃ ｅ ｓｎ ａ ｌ ｅ ｋ ｗｉｔ ｎ ａｌ ｇ ｉ ｅ ｒ ｔ ｎ ｉｎ ｔ ｍｅ ｏ ｈ ｉｈ ｃ ｎ ｅ ｔａ ｉ ｒ ｎ ｅ ｒａ ｅ ｔ ｎ ｒ ａ ｉｇ ｓ ｍｐ ｅ ｏ
ｐ ｕ ｄ ｕ ｈ ａ ｎ ｉｉｔ ｓｉ ｅ ｅ ｓ ｄ ｐ ａ ｅ ｈｇ ｅ ｆ ｒ ｎ ｅ ｌ ｕｄｃ ｒ ｍａ ｏ ｒｐ ｙ （ ｏ ｎ ｓｓ ｃ ｓａ ｔｂｏ ｉ ｎ ｒ ｖ ｒｅ — ｈ ｓ ｉ ｈ ｐ ｒｏ ｍａ ｃ ｉ ｉ ｈ ｏ ｔ ｇ ａ ｈ ｃ ｑ ＲＰ— ＬＣ） Ｔｈ ｎ ｌ— ＨＰ ． ｅｉ ｆ ｕ
ｅ ｃ ｙ ｂ ｔ ｒｂ ｔ ｄ ｔ ｖ ｒｏ ｄ ｎ ｆ ｏ ｏ ｅ ｉ ａ ａ ｙ ｅ ｎ ｌ ｗｅ ｎ ｃ ｓ ｒ ｎ ｔ ｂ ｌ ｈ ｓ ．Ｉ ｕ ｈ ｐ ａ ｅ ｎ ｅ ｍａ ｅａ ｔ ｉ ｕ ｅ ｏ ｏ ｅ ｌ ａ ｉ ｇ ｏ ｎ ｇ ｎ ｃ ｎ ｌ ｔ ｓ ｉ ｉ ｏ ｒｉ ｉ ｔｅ ｇ ｈ ｍｏ ｉ ｐ ａ ｅ ｎ ｓ ｃ ｈ ｓ ， ｏ ｅ

流动相的离子强度对RP(1).

流动相的离子强度对RP(1).

流动相的离子强度对RP(1)在反相高效液相色谱(RPHPLC)过程中，流动相的离子强度可显著影响可解离的化合物如抗生素的色谱峰形，原因在于流动相的离子强度较低时，色谱填料的固定相易于过载，使离子化的化合物的色谱峰形呈典型的过载特征――峰形接近直角三角形。

随着进样量的增加，色谱区带中高浓度的前半部的保留时间减少，但色谱区带均在同一时刻结束，色谱峰的拖尾因子及峰宽均显著增加，同时被测物与有关物质间的分离也随之变差。

选择合适的缓冲盐并适当地增加流动相的离子强度即可显著改善抗生素的色谱峰形，色谱峰的拖尾因子及峰宽均随之降低，同时被测物与有关物质间也更加易于分离。

关键词： RPHPLC；抗生素；色谱峰形；流动相；离子强度Influence of the ionic strength of mobile phase on peak shape of antibiotics in RPHPLCABSTRACT The ionic strength of mobile phase can significantly affect the peak shape of ionogenic compounds such as antibiotics in reversedphase high performance liquid chromatography (RPHPLC). The influence may be attributed to overloading of ionogenic analytes in lower ionic strength mobile phase. In such phase, peak becomes increasingly rightangled triangle in shape with increasing sample load together with increasing peak width and tailing. The retention time of the highconcentration front decreases with increasing sample load, while the end of the peak tail has a constant retention time, equal to the symmetrical analytical peak. Due to considerably worse peak shapes, poorer resolution between the main component and its related substances might be observed. With the optimal buffer and the increase of ionic strength, significant improvement in peak shape of antibiotics could be achieved and consequently a decrease in the tailing factor, an increase in the apparent column efficiency as well as an efficient resolution were obtained.KEY WORDS RPHPLC; Antibiotics; Peak shape; Mobile phase; Ionic strength据统计，约80%的药物含有碱性官能团，故碱性化合物的反相高效液相色谱(RPHPLC)行为在色谱学界始终是一个引人注目的研究课题，而具有不同pKa值的碱性药物的RPHPLC分离在药学界的重性正日益被关注［1］。

层析技术习题

层析技术习题

层析技术习题一、选择题1. ------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 层析图是指 （ C ） A.某组分的流出曲线 B. 某组分的层析峰C.整个层析分离过程所得的各组分流出曲线D.层析分离过程所得的单组分流出体积2.在层析技术中，分配系数是指 ----------------------------------------- （ A ） A.一种化合物在固相与流动相中的分配达到平衡时的浓度比B. 二种化合物在固相与流动相中的分配达到平衡时的浓度比C. 一种化合物在固相与流动相中的分配达到平衡时的质量比D. 二种化合物在固相与流动相中的分配达到平衡时的质量比 3. 下列哪项不是层析技术中的速率理论指出的影响柱效的因素： --------------- （ D ）A. 涡流扩散B.分子扩散C. 传质阻力D. 理论塔板高度4.下列哪项不是吸附层析常用的吸附剂： ----------------------------------- （D ） A. 氧化铝 B. 硅胶 C. 活性炭 D. 琼脂糖 5.凝胶层析分离混合物的基本原理是： ------------------------------------- （B ）A.吸附力差异B.分子筛作用C.离子交换D.配体亲和差异6.关于离子交换层析的描述下列哪一项不正确： ----------------------------- （ B ） A. 离子交换剂通常不溶于水B. 阳离子交换剂常可离解出带正电的基团C. 阴离子交换剂常可离解出带正电的基团D. 阳离子交换剂常可离解出带负电的基团7. 分离鉴定氨基酸的纸层析属于 ------------------------------------------- （ D ）A 、亲和层析B 、吸附层析C 、离子交换层析D 、分配层析填空题根据分离的原理不同分类，层析法主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等o1. 2. 3.4.5.6.是非题（对的打V ,错的打“x” 色谱法就是分离有色物质的方法。

《仪器分析》作业题解答 2..

《仪器分析》作业题解答 2..

第二章气相色谱法1.简要说明气相色谱分析的基本原理借在两相间分配原理而使混合物中各组分分离。

气相色谱就是根据组分与固定相与流动相的亲和力不同而实现分离。

组分在固定相与流动相之间不断进行溶解、挥发（气液色谱），或吸附、解吸过程而相互分离，然后进入检测器进行检测。

2.气相色谱仪的基本设备包括哪几部分?各有什么作用?气路系统．进样系统、分离系统、温控系统以及检测和记录系统．气相色谱仪具有一个让载气连续运行管路密闭的气路系统．进样系统包括进样装置和气化室．其作用是将液体或固体试样，在进入色谱柱前瞬间气化，然后快速定量地转入到色谱柱中．19.有哪些常用的色谱定量方法?试比较它们的优缺点和使用范围?（1）．外标法：外标法是色谱定量分析中较简易的方法．该法是将欲测组份的纯物质配制成不同浓度的标准溶液。

使浓度与待测组份相近。

然后取固定量的上述溶液进行色谱分析．得到标准样品的对应色谱图，以峰高或峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标作峰高或峰面积对浓度的标准曲线．该曲线为一通过原点的直线．分析样品时，在上述完全相同的色谱条件下，取制作标准曲线时同样量的试样分析、测得该试样的响应讯号后．由标谁曲线即可查出其百分含量．此法的优点是操作简单，因而适用于工厂控制分析和自动分析；但结果的准确度取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性．（2）．内标法：当只需测定试样中某几个组份．或试样中所有组份不可能全部出峰时，可采用内标法．具体做法是：准确称取样品，加入一定量某种纯物质作为内标物，然后进行色谱分析．根据被测物和内标物在色谱图上相应的峰面积(或峰高)]和相对校正因子．求出某组分的含量．内标法是通过测量内标物与欲测组份的峰面积的相对值来进行计算的，因而可以在—定程度上消除操作条件等的变化所引起的误差．内标法的要求是：内标物必须是待测试样中不存在的；内标峰应与试样峰分开，并尽量接近欲分析的组份．内标法的缺点是在试样中增加了一个内标物，常常会对分离造成一定的困难。

液相色谱分析方法建立-系列一基本理论及色谱介绍

液相色谱分析方法建立-系列一基本理论及色谱介绍
O pH值小于2时键合相水解 O pH值大于8时硅胶溶解
硅 胶 的 溶 解 曲 线
1 2 3 4 5 6 7 8 9 p H
硅胶表面键合相的水解（PH<2）
O
OH
Si
O
+
O
“Column Bleed”
H3C
C
C
C
C
Si
C
C
C
CH3
Cl
CH3
O
+ H3C
C
C
C
C
Si
C
C
C
CH
O 硅胶表面未被键合的酸性硅羟基将会与被分析物相互作用，特别是在 中性条件下会对强碱性化合物产生严重的峰形拖尾。
O 封尾工艺使得表面残余的硅羟基被进一步的消除，为小分子所取代。 O 封尾工艺能促使色谱柱对极性和碱性化合物的分离具有良好的峰形。
50
色谱柱的pH值
O 填料的pH稳定性 O 硅胶填料 pH：2-8 O 聚合物填料 pH：2-12 O 杂化硅胶填料 pH：2-12
O
Low pH (hydrolysis of ligand)
O Si
O
O
OH
+
H3C
C
C
C
C
Si
C
C
C
CH3
HO
CH3
硅胶的溶解（PH>8）
Nucleophilic attack
• Complete dissolution of Silica
• Catastrophic column failure
蒸发光散射
任何挥发性低于流动相的样 品均能被 检测
可检测所有物质。

生物分离工程选择题

生物分离工程选择题

选择题：1.B可以提高总回收率。

A.增加操作步骤B.减少操作步骤C.缩短操作时间D.降低每一步的收率2．分离纯化早期，由于提取液中成分复杂，目的物浓度稀，因而易采用（ A ）A、分离量大分辨率低的方法B、分离量小分辨率低的方法C、分离量小分辨率高的方法D、各种方法都试验一下，根据试验结果确定选择题：1、适合小量细胞破碎的方法是（）A、高压匀浆法 B.超声破碎法 C.高速珠磨法 D.高压挤压法2、丝状（团状）真菌适合采用（ A ）破碎。

A、珠磨法B、高压匀浆法C、A与B联合D、A与B均不行3、撞击破碎法适用于（C ）的回收。

A、蛋白质B、细胞壁C、细胞器D、核酸4、以下哪项不是在重力场中，颗粒在静止的流体中降落时受到的力（B）A.重力B. 压力C.浮力D. 阻力5、颗粒与流体的密度差越小，颗粒的沉降速度（ A ）A.越小B.越大C.不变D.无法确定6、碟片式离心机中碟形分离板的作用是；（D ）。

A、增大离心力，提高处理能力B、增大流体阻力，提高处理能力C、增大料液量，提高处理能力D、增大沉降面积，提高处理能力7、那种细胞破碎方法适用工业生产（ A ）A. 高压匀浆B超声波破碎 C. 渗透压冲击法 D. 酶解法8、可压缩滤饼的平均比阻与压力之间的关系为：（ C ）。

A、随压力提高而减小B、与压力无关C、随压力提高而增大D、与压力的倒数成正比9、重力沉降过程中，固体颗粒不受 C 的作用。

A.重力B.摩擦力C.静电力D.浮力10.过滤的透过推动力是 D 。

A.渗透压B.电位差C.自由扩散D.压力差11.在错流过滤中，流动的剪切作用可以 B 。

A.减轻浓度极化，增加凝胶层的厚度B.减轻浓度极化，降低凝胶层的厚度C.加重浓度极化，增加凝胶层的厚度D.加重浓度极化，降低凝胶层的厚度12.菌体和动植物细胞的重力沉降操作，采用 D 手段，可以提高沉降速度。

A.调整pHB.加热C.降温D.加盐或絮状剂13.差速区带离心的密度梯度中最大密度 B 待分离的目标产物的密度。

流动相对色谱峰形及保留值的影响

流动相对色谱峰形及保留值的影响
? 中性 茶碱 维生素c 非那西丁 卡马西平 硝苯地平 地西泮 阿昔洛维
? 有的药物在结构上同时含有酸性、碱性基团 , 却表现出不同 色谱行为。如环丙氟呱酸和氨甲苯酸呈碱性 , 丙谷胺为酸性 , 而氟呱酸却类似中性。磺胺类药物多为中性或呈弱碱性。
? 一般来说 , 碱性药物的保留值对 pH值的敏感性差异较大 , 保 留值大的药物对 pH值的敏感性较大 , 碱性药物对 pH值敏感 性在 pH>4 时显著增加 , 如酮康哇和益康哇。所以当分离碱 性或酸性药物采用的流动相 pH值在4左右时 , 要特别给予注 意, 以免影响分离度和峰序的改变 , 如环丙沙星与氟哌啶 , 地 卡因与普罗帕酮等在一之间发生峰序倒置。
所谓的促溶效应(chaotropic effect) ,被测物与盐相互作用, 离子化
的被测物相互间的排斥作用减弱 , 从而显著地影响被测物在固定
相上的吸附行为; 在制备色谱系统中或被测物浓度较高时, 流动相
中
应
含
有
足
量
的
缓
冲盐以改善色谱峰形和分离效果。
? 色谱柱的饱和容量可随缓冲盐的单价阳离子 (如Na + 、 NH4+ 、K+ 、Cs+ ) 直径的增加 而降低, 选用Na+ , 色谱 柱的饱和容量相对较高。
? 解离的化合物在固定相表面的相互排斥作用以及较难渗透 进入疏水性的固定相中也是可能的原因，采用反相高效液 相分离可解离的(尤其是碱性的) 化合物时色谱柱易于过载, 甚至低达 10ng 的碱性化合物也可使常规色谱柱的表观柱 效明显降低; 减少进样量则可改善色谱峰形并使表观柱效 显著增加;过载效应可随着流 动相的离子强度的增加而逐渐减弱。
甲醇∶ NH4H2PO4(0.025M) =55∶45

仪器分析北师大考题

仪器分析北师大考题

选择题：1.下列四种化合物中，在紫外区出现两个吸收带的是A.乙烯B. 1，4-戊二烯C. 1，3-丁二烯D. 丙烯醛D2某化合物λmax（正己烷为溶剂）=329nm，λmax（水为溶剂）=305nm，该吸收跃迁类型为：A. n→σ* B.n→π* C.σ→σ* D. π→π*A3某物质摩尔吸光系数很大，则表明：A该物质对某波长光的吸光能力很强 B 该物质浓度很大C光通过该物质溶液光程长 D 测定该物质精密度高A4.下列数据中哪组涉及的红外光谱区包括乙醛的吸收带A 3000-2700cm1- 2400-2100cm1- 1000-650cm1-B 3300-3010cm1- 1675-1500cm1- 1475-1300cm1-C 3300-3010cm1- 1900-1650cm1- 1000-650cm1-D 3000-2700cm1- 1900-1650cm1- 1475-1300cm1-5.下列化合物中v O C=的大小的顺序为A6原子吸收光谱线的多普勒变宽是由于下述哪些原因产生的（）A原子在激发态所停留的时间 B原子的热运动C外部电场对原子的影响 D原子与其它原子或分子的碰撞B7下列哪种化合物分子离子峰为奇数8下列化合物中哪个容易发生理解最后生成M/Z 91的离子9.影响两组分相对保留值的因素有（）A载气流速 B柱温 C柱长 D固定液性质 E检测器类型10.HPLC与GC比较，可忽略纵向扩散项，主要原因是A柱前压力高 B流速比GC快 C流动相粘度大 D柱温低C11.分光光度计测量有色化合物的浓度相对标准偏差最小时的吸光度为A 0.368B 0.334C 0.433D 0.43412.试指出下列基团中，哪个集团的伸缩振动波数最小A v N C≡B v N C=C v N C-D v H N-A13.在IR光谱中，用KBr作样品池，这是因为A KBr晶体在4000-400cm1-范围内不会散射红外光B KBr晶体在4000-400cm1-范围内有良好的红外吸收特性C KBr晶体在4000-400cm1-范围内无红外吸收D KBr晶体在4000-400cm1-范围内对外无反射14.原子化器的主要作用（）A 将试样中待测元素转化为气态的基态分子B 将试样中待测元素转化为激发态原子C 将试样中待测元素转化为中性分子D 将试样中待测元素转化为离子B15.原子吸收分光光度计中，目前常用的光源是A火焰 B空心阴极灯 C氙灯 D交流电弧A16.下面说法正确的是A质量数最大的峰为分子离子峰 B强度最大的峰位分子离子峰C质量数第二大的峰为分子离子峰 D以上说法均不对B17.产生拖尾峰的原因可能有A进样速度太慢 B进样量过大 C气化温度过低 D柱温太低简答题1.何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何异同之处？在一个分析周期内，按一定程序不断改变流动相的组成或浓度配比，称为梯度洗提．是改进液相色谱分离的重要手段．梯度洗提与气相色谱中的程序升温类似，但是前者连续改变的是流动相的极性、pH或离子强度，而后者改变的温度．程序升温也是改进气相色谱分离的重要手段．2.石墨炉原子化法的工作原理是什么？与火焰原子化法相比较，有什么优缺点？为什么？解:石墨炉原子化器是将一个石墨管固定在两个电极之间而制成的,在惰性气体保护下以大电流通过石墨管,将石墨管加热至高温而使样品原子化.优点：与火焰原子化相比,在石墨炉原子化器中,试样原子化程度高,因而测定灵敏度高. 试样含量很低或试样量很少时非常适用。

色谱选择题

色谱选择题

1、对同一样品，程序升温色谱与恒温色谱比较，正确的说法是（ D ）A、程序升温色谱图中的色谱峰数与恒温色谱图中的色谱峰数相同B、程序升温色谱图中的色谱峰数大于恒温色谱图中的色谱峰数C、改变升温程序，各色谱峰保留时间改变但峰数不变D、程序升温色谱法能缩短分析时间，改变保留时间、峰形，从而改善分离度及提高检测灵敏度，峰数也可能改变，并且使样品中的各组分在适宜的柱温下分离2、在气象色谱中，不影响相对校正因子的因素有（A）A、柱温B、栽气种类C、标准物D、测定器类型3、气相色谱检测器的传感器不包括（B）A、火焰电离FID，B、紫外可见UVC、热导TCD,D、氮磷NPD4、气相色谱中，影响两组分分离度的因素有（ A ）A、柱长、固定液性质B、柱的死体积C、栽气种类D、测定器灵敏度5、在定量工作曲线的线性范围内，进样量越大，不会产生的变化为（ C ）A、峰面积比例增大B、峰高比例增高C、半峰宽比例增大D、半峰宽不变6、在气液色谱中，色谱柱的使用上限温度取决于（ B ）A、样品中沸点最高组分的沸点B、样品中各组分沸点的平均值C、固定液的沸点D、固定液的最高使用温度7、、选择程序升温方法进行分离的样品主要是（ C ）。

A、同分异构体B、同系物C、沸点差异大的混合物D、分子量接近的混合物8、在GC中，与保留值无关的是（ C ）A、分离度B、固定液的相对极性C、塔板高度D、相对质量校正因子、检测器的灵敏度9、在相反色谱法中固定相与流动相极性的关系是（ B ）A、固定相的极性＞流动相的极性B、固定相的极性＜流动相的极性C、固定相的极性＝流动相的极性10、HPLC与GC比较，可忽略纵向扩散项，主要原因是（ C ）A、柱前压力大B、流速比GC的快C、流动相黏度大D、柱温低11、有机弱酸、弱碱与中性化合物的混合物样品，用（ D ）类型的高效液相色谱法分离为好。

A、离子交换色谱法B、吸附色谱法C、正相分配色谱法、一般反相色谱法D、离子抑制色谱法、离子对色谱法12、用ODS柱，分析一有机弱酸混合物样品。

液相色谱流动相说明

液相色谱流动相说明

液相色谱流动相说明什么是液相色谱？液相色谱（Liquid chromatography，LC）是一种分离技术，主要用于生化、制药、环境、食品等各个领域中的物质分离、纯化和分析等工作。

液相色谱分为两种类型：常规液相色谱和高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）。

常规液相色谱分离速度较慢，分离效率较低，而HPLC以其高分离速度和高分离效率迅速地成为了现代液相色谱分离技术的主流。

液相色谱的原理液相色谱的分离原理基于样品组分在流动相和固定相的相互作用上。

样品经过色谱柱时出现组分分离，分离的程度取决于样品组分在固定相和流动相上的亲疏性。

流动相的性质可以通过改变其成分、溶剂极性、离子强度和缓冲能力等来控制。

液相色谱的流动相液相色谱中的流动相通常是液体，而常用的液体流动相包括乙腈、甲醇、水、乙酸等。

流动相的选择要考虑到样品的性质、固定相的性质、分离效率、检测方法等多种因素。

通常情况下，液相色谱使用的流动相是复合流动相（Mobile phases consist of two or more solvents，常称为BOTH-EL），即由两种或多种有机溶剂组成的混合液体。

BOTH-EL有利于提高分离效率，提高检测灵敏度，并保证了流动相的气味、毒性和等级相容性。

液相色谱流动相的性质溶液循环性能在液相色谱中，流动相要在色谱柱中发生循环。

因此，流动相循环性能的好坏对于液相色谱分离效果具有重要影响。

如果流动相流量不稳定或有间歇流动现象，可能影响某些成分的分离峰形，使峰宽加大，峰与峰之间的分辨率下降。

极性和离子强度液相色谱的流动相中，极性和离子强度较低的流动相通常可加速样品在固定相上的迁移，使分定速度提高，但峰形会变得稍宽，可能影响分离效率。

同时，离子强度也会影响某些化合物的分离效果，这是由于流动相离子强度的影响。

等级相容性液相色谱流动相的等级相容性通常指流动相成分中两种或多种有机溶剂的等级。

分离氨基酸的沃特世c18色谱柱

分离氨基酸的沃特世c18色谱柱

分离氨基酸通常使用反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法，而C18色谱柱是其中常用的一种。

沃特世（Waters）是一家生产色谱柱和相关色谱设备的公司，他们生产了许多种不同类型的色谱柱，包括C18反相色谱柱。

C18是指色谱柱的填料是由碳链长度为18的十八烷基基团组成的，这种柱常用于分离非极性或弱极性的化合物，包括氨基酸。

在RP-HPLC中，C18柱可以通过调整溶剂的极性和流动相的离子强度来实现对氨基酸的分离。

操作RP-HPLC分离氨基酸的步骤通常包括以下几个方面：
1. **前处理（Preparation）：** 包括样品的制备，通常涉及氨基酸的衍生化或者其他适当的前处理步骤。

2. **流动相的选择：** 选择合适的流动相，通常是水和有机溶剂的混合物，可以添加适量的缓冲剂来维持溶液的pH值。

3. **梯度程序（Gradient Program）：** 设置梯度程序，即改变流动相组成的比例，以便在不同时间分离不同的氨基酸。

4. **检测器选择：** 选择适当的检测器，如紫外（UV）检测器，以监测氨基酸的吸收峰。

5. **数据分析：** 对色谱图进行分析，确定氨基酸的相对浓度和峰的分离情况。

请注意，具体的操作条件和方法可能因实验目的、仪器型号和样品特性而有所不同。

在进行实验之前，建议参考仪器和色谱柱的使用手册，并根据具体的实验要求进行优化。

仪器分析期末考试复习题 名词解释+简答题

仪器分析期末考试复习题 名词解释+简答题

仪器分析1.生色团：能吸收紫外、可见光的基团或结构系统定义为生色团2.助色团：助色团是指带有非键电子对的基团，如-OH、 -OR、 -NHR、-SH、- Cl、-Br、-I等，它们本身不能吸收大于200nm的光，但是当它们与生色团相连时，会使生色团的吸收峰向长波方向移动，并且增加其吸光度。

3.红移：向长波方向移动4.蓝移：向短波方向移动5.激发电位：原子的外层电子由低能级激发到高能级时所需要的能量称为激发电位.。

6.共振线：由电子激发态与电子基态能级之间的跃迁所产生的谱线7.自吸效应：激发态原子发出的辐射被其基态原子所吸收,从而使谱线强度下降的效应。

8.灵敏度：仪器或分析方法灵敏度是指区别具有微小浓度差异分析物能力的度量,它取决于两个因素:即校准曲线的斜率和仪器设备的重现性或精密度。

9.参比电极：测定过程中其电极电位保持恒定不变。

10.检测极限D：以特定的分析方法，以适当的置信水平被检出的最低浓度或最小量11.分离度R：相邻两组分色谱峰保留值之差与两组分色谱峰峰底宽度总和之比。

1.光谱分析法：1.原子光谱1.原子发射光谱：由三部分构成： AES光源：电弧，火花，ICP 、分光、检测发射光谱定量分析关系式为：I = a c b 或者 log I = b log c + log a为什么选铁谱？（1）谱线多：在210～660nm范围内有数千条谱线；（2）谱线间距离分配均匀：容易对比，适用面广；（3）定位准确：已准确测量了铁谱每一条谱线的波长。

2.原子吸收光谱：标准曲线法和标准加入法（求坐标轴的CX）空心阴极灯用空气-乙炔火焰；原子化器用空气-乙炔火焰2.分子光谱紫外吸收光谱不饱和脂肪族化合物Π-Π *跃迁（不饱和基团）共轭体系愈大，π→π*跃迁产生的吸收带波长愈长。

乙烯的吸收带位于162nm，丁二烯为217nm，1，3，5－己三烯的吸收带红移至258nmn→π*跃迁（含杂原子的不饱和基团）是四种跃迁中所需能量最小的，它所对应的吸收带位于200～400nm 的近紫外区在n→π*跃迁中：溶剂极性增加，吸收带蓝移。

仪器分析朱明华版课后习题答案(详细)第3章

仪器分析朱明华版课后习题答案(详细)第3章
但是如果选用低电导的流动相（如１× 10-４~ 5 ×10-4M的苯
甲酸盐或邻苯二甲酸盐），则由于背景电导较低，不干扰
样品的检测，这时候不必加抑制柱，只使用分析柱，称为 非抑制型离子色谱法．
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８．何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何异同之 处？
解：在一个分析周期内，按一定程序不断改变流动相的组成 或浓度配比，称为梯度洗提．是改进液相色谱分离的重要手 段．
2. 无固定相流失,增加了色谱柱的稳定性及寿命.
3. 可以键合不同的官能团,能灵活地改变选择性,可应用与多 种色谱类型及样品的分析.
4. 有利于梯度洗提,也有利于配用灵敏的检测器和馏分的收集.
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7. 何谓化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱?试述它们的 基本原理. 解:在离子色谱中检测器为电导检测器,以电解质溶液作为流动 相,为了消除强电解质背景对电导检测器的干扰,通常除了分析 柱外,还增加一根抑制柱,这种双柱型离子色谱法称为化学抑制 型离子色谱法.
二者均具分离能力高、灵敏度高、分析速度快，操作方便等优点，但 沸点太高的物质或热稳定性差的物质难以用气相色谱进行分析。而只 要试样能够制成溶液，既可用于HPLC分析，而不受沸点高、热稳定性 差、相对分子量大的限制。
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2.液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比 较, 有哪些主要不同之处?
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毛细管凝胶电泳(CGE) 是毛细管内填充凝胶或其他筛分介质，
如交联或非交联的聚丙烯酰胺。荷质比相等，但分子的大小不
同的分子，在电场力的推动下在凝胶聚合物构成的网状介质中 电泳，其运动受到网状结构的阻碍。大小不同的分子经过网状 结构时受到的阻力不同，大分子受到的阻力大，在毛细管中迁 移的速度慢；小分子受到的阻力小，在毛细管中迁移的速度快，

DNA合成原理及操作

DNA合成原理及操作
4.3 脱盐纯化 如果偶合效率高，合成效果好，粗品本身没有什么短片段，可以直接脱盐。 优点: 省去PAGE电泳的麻烦，样品回收率高。 缺点: 不能有效去短片段，前提一定要合成效果很好才选用此方法。
4.4 HPLC纯化 HPLC吸附基质分反相柱和离子柱: RP(反相柱）是根据疏水性的差别来分离的: 疏水性更强的长片段比短片段在柱内保留的时间更长。 离子柱是根据不同长度的寡核苷酸带有不同的净电荷，通过缓慢增加流动相的离子强度将n-片段先洗脱。 优点: 纯化效果好，纯度可达99%以上，特别是对标记引物，特殊探针特别有用。 缺点: 不能批次生产，比较费时，有时样品接收不好也不能有效分离。
DNA合成作业流程
1. 接收订单安排合成 合成部根据合成实际情况合理安排订单, 依次安排加急-测序-内部-外部, 同一客户尽量同批次安排合成, 部分长链、G含量高、合成量大的引物比较难合成, 时间上可能会有所延缓 2. 上机合成 不同型号的合成仪合成通量和合成时间均不同, 公司预定的仪器批次合成96条引物, 20bp长度合成需要2-3小时。
DNA合成碱基缺失或错误原因分析
一般客户提出异议时，我们首先给客户重新合成，然后再分析原因。 从合成机理上分析就可以很清楚的表明：人为的因素不可能造成碱基缺失或个别的碱基错误。如果说某一个碱基由于种种原因(如瓶中溶液没有了，或管道堵塞)，未加入到正在延伸的Oligo上，那么下一个反应Capping将会把Oligo封死，使整个oligo合成立即中止 。造成的原因可能是： 1、Taq酶的原因。因为在PCR扩增时引物也被扩增,就可能出现错误 ， 2、化学原因 。在合成过程中，如果本公司提供的DNA合成报告单是正确的，表示合成是成功的 。化学合成的DNA片段要比天然的DNA片段有更多的碱基突变概率。但其真正的化学机理还不太清楚，但可以肯定的是要保证100％不发生错误是不可能的。 解决的办法： 1、采用高保真的 Taq酶 2、重新挑克隆 3.重合引物

反相色谱中流动相选择的最新趋势和最佳操作

反相色谱中流动相选择的最新趋势和最佳操作

反相色谱中流动相选择的最新趋势和最佳操作反相液相色谱（RP-HPLC）在用于定量分析的高效液相色谱（HPLC）中占主导地位，它被用于80%的HPLC应用中（1-3）。

RP-HPLC使用一种疏水性固定相和一种极性流动相，分析物主要依靠疏水作用来保留。

由于优秀的精确度和可靠性，带有UV检测器的RP-HPLC被用于绝大多数药物纯度评估、质量控制和稳定性测试当中。

其中在稳定性预测分析（Stability-Indicating Analyses）中使用RP-HPLC的另一个原因是出于物料守恒的考虑。

RP-HPLC中化合物的保留和其log P（即水和正辛醇中的分配系数）高度相关，在这种色谱模式中，分析物与固定相较弱的相互作用力确保分析的样品中的所有杂质在方法梯度结束前都从柱子上洗脱下来，从而计入样品中的所有成分（4）。

关于流动相在调控RP-HPLC中的中性和离子化分析物的保留和选择性的作用已经在教科书中被广泛地讨论，详细信息请参考相关文献资料（1-3）。

分析物在RP-HPLC中的保留能力可以通过线性溶剂强度模型（5）来预测，在这个模型中，分析物保留因子的对数与强溶剂的比例成反比。

然而，由于溶质和周围极性溶剂分子的作用而使得这个模型变得非常复杂，因此Horvath等人提出了“疏溶剂作用模型（Solvophobic Interactions Model）”（6），也指出了吸附在疏水固定相表面的单层强溶剂的作用（1）。

同时也存在二级作用，比如碱性基团与固定相表面存在的硅醇基团的相互作用，这个作用也会导致峰拖尾（7）。

在这篇文章，我们将简单阐述RP-HPLC中流动相涉及的基础理论以及流动相选择的最新趋势，如TABLE I所示。

最明显的趋势集中在三个方面：小分子药及生物药的稳定性预测分析、提高UV和MS检测器灵敏度以及碱性分析物峰形的优化。

流动相选择的基础在这部分中，我们会讲述在RP-HPLC中常见的弱流动相（水相）和强流动相（有机相）以及流动相的添加剂的选择标准。

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流动相的离子强度对RP(1)在反相高效液相色谱(RPHPLC)过程中，流动相的离子强度可显著影响可解离的化合物如抗生素的色谱峰形，原因在于流动相的离子强度较低时，色谱填料的固定相易于过载，使离子化的化合物的色谱峰形呈典型的过载特征――峰形接近直角三角形。

随着进样量的增加，色谱区带中高浓度的前半部的保留时间减少，但色谱区带均在同一时刻结束，色谱峰的拖尾因子及峰宽均显著增加，同时被测物与有关物质间的分离也随之变差。

选择合适的缓冲盐并适当地增加流动相的离子强度即可显著改善抗生素的色谱峰形，色谱峰的拖尾因子及峰宽均随之降低，同时被测物与有关物质间也更加易于分离。

关键词： RPHPLC；抗生素；色谱峰形；流动相；离子强度Influence of the ionic strength of mobile phase on peak shape of antibiotics in RPHPLCABSTRACT The ionic strength of mobile phase can significantly affect the peak shape of ionogenic compounds such as antibiotics in reversedphase high performance liquid chromatography (RPHPLC). The influence may be attributed to overloading of ionogenic analytes in lower ionic strength mobile phase. In such phase, peak becomes increasingly rightangled triangle in shape with increasing sample load together with increasing peak width and tailing. The retention time of the highconcentration front decreases with increasing sample load, while the end of the peak tail has a constant retention time, equal to the symmetrical analytical peak. Due to considerably worse peak shapes, poorer resolution between the main component and its related substances might be observed. With the optimal buffer and the increase of ionic strength, significant improvement in peak shape of antibiotics could be achieved and consequently a decrease in the tailing factor, an increase in the apparent column efficiency as well as an efficient resolution were obtained.KEY WORDS RPHPLC; Antibiotics; Peak shape; Mobile phase; Ionic strength据统计，约80%的药物含有碱性官能团，故碱性化合物的反相高效液相色谱(RPHPLC)行为在色谱学界始终是一个引人注目的研究课题，而具有不同pKa值的碱性药物的RPHPLC分离在药学界的重性正日益被关注［1］。

然而，由于碱性化合物的保留可随着流动相pH值的不同而产生显著的变化，因而它们的RPHPLC分离通常具有一定的难度。

在某些pH范围内，碱性化合物的色谱峰拖尾，表观柱效(理论板数，n)较低，其原因可能包括色谱柱的过载、碱性化合物与填料表面残余硅醇基的相互作用以及较慢的吸附解吸附动力学等。

绝大多数抗生素同时含有碱性和酸性基团，多为亲水性的两性化合物，故其RPHPLC行为远较通常的碱性化合物更为复杂。

我们在应用现行各国药典［2～4］进行抗生素RPHPLC分析时发现，有些抗生素的色谱峰形异常――峰形展宽并接近直角三角形，色谱峰的拖尾因子及峰宽均较大，有时甚至影响到被测物与有关物质间的分离。

囿于目前的填料制造水平，以硅胶为基质的反相键合相填料的表面实际上是不均匀的，固定相中不可避免地含有少量高能量位点(sites)，这些高能量位点易为可解离的(甚至中性的)化合物所过载(overloading)［5，6］。

此外，解离的化合物在固定相表面的相互排斥作用以及较难渗透进入疏水性的固定相中也是可能的原因［7］。

众多实验结果已经证实，在线性色谱(linear chromatography)领域，采用RPHPLC分离可解离的(尤其是碱性的)化合物时色谱柱易于过载，甚至低达10ng(相当于10-6，进样10μl)的碱性化合物也可使常规色谱柱(150mm×46mm)的表观柱效明显降低；减少进样量则可改善色谱峰形并使表观柱效显著增加；过载效应可随着流动相的离子强度(c)的增加而逐渐减弱［8～12］。

本课题选取了几个具有代表性的抗生素品种，初步研究了流动相的离子强度对RPHPLC中抗生素色谱峰形的影响。

1 仪器与试药美国Agilent 1100型HPLC仪。

色谱柱：头孢呋辛为美国DiscoveryC18(250mm×46mm，5μm)，头孢哌酮和青霉素G为英国Hypersil BDSC18(250mm×40mm，5μm)，克林霉素为日本TSK GEL ODS100S(150mm×46mm，5μm)。

头孢呋辛钠、头孢哌酮钠、头孢哌酮S异构体、头孢哌酮降解物B、盐酸克林霉素和青霉素G钾对照品均由中国药品生物制品检定所提供。

乙酸钠、乙酸、氯化钠、氢氧化锂、氢氧化钾、氨水、甲酸钠、甲酸、三乙胺、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、磷酸和高氯酸钠均为分析纯，乙腈和甲醇均为HPLC级，水为蒸馏水。

应用PeakMaster 5.1软件(Charles大学)计算流动相的离子强度。

2 色谱条件和测定方法流动相的组成以及供试品液的浓度见结果与讨论；检测波长：头孢呋辛和头孢哌酮为254nm，克林霉素为214nm，青霉素G为220nm；柱温30℃。

流速：头孢呋辛为15ml/min，头孢哌酮为12ml/min，克林霉素和青霉素G为10ml/min。

进样体积：头孢呋辛为20μl，头孢哌酮、克林霉素和青霉素G为10μl。

以流动相作头孢呋辛钠、头孢哌酮钠和盐酸克林霉素的溶剂，以水作青霉素G钾的溶剂。

3 结果与讨论已知在低pH值的流动相中，以所谓“B型”高纯度硅胶为基质的反相键合相填料的表面几乎不存在离子化的硅醇基，这使得残余硅醇基对被测物的保留和过载行为的影响极小［10，11］，故本课题主采用这类金属残留量极低、酸性硅醇基含量最少的惰性填料――Discovery C18、Hypersil BDS C18和TSK GEL ODS100S。

3.1 头孢呋辛中国药典(ChP)［2a］测定头孢呋辛钠中头孢呋辛含量的RPHPLC系统是参考美国药典(USP)和英国药典(BP)［3a，4a］制订的，主区别在于ChP选用C18柱代替USP规定的己基硅烷键合硅胶(C6)柱，而流动相则均为乙腈∶pH34乙酸盐缓冲液(含5mmol/L乙酸钠和01mol/L乙酸)(1∶10)，头孢呋辛(羧基的pKa值为25［13］)在流动相中大部分呈解离状态并荷负电。

由于ChP规定采用较大的进样量(05mg/ml，约11mmol/L，20μl)，使头孢呋辛峰具有典型的过载特征［5～12，14］――峰形接近直角三角形。

随着进样量的增加，色谱区带中高浓度(C)的前半部的保留时间(tR)相应减少，但色谱区带均在同一时刻结束(Fig.1A，Tab.1)。

这种色谱峰形在色谱学界通常称之为过载拖尾(overload tailing)或非线性拖尾(nonlinear tailing)。

过载使头孢呋辛峰的拖尾因子(T)和峰宽均显著增加，头孢呋辛与有关物质间的分离也相应变差。

另选用其他C18柱(Kromasil C18、Zorbax C18、Inertsil ODS3、Hypersil BDS C18、TSK GEL ODS100S、Shimpack CLCODS和LiChrospher 100 RP18e)、C8柱(Kromasil C8、Inertsil C83、Hypersil BDS C8、Shimpack CLCC8、TSK GEL C8和Discovery C8)和C4柱(SinoChrom C4)实验，结果也如此。

如选用C6柱则可得最为对称的色谱峰形［15］，且头孢呋辛峰无过载特征(Fig.1B)。

国内另有研究表明，头孢呋辛的峰形与填料的品牌也即填料的制造工艺有关，选用某些品牌的填料如Spherisorb C18可得较为对称的峰形［16］，在我们的实验中也得到证实。

由此可见，虽然所用流动相的缓冲容量较低(乙酸的pKa值约为47［17a］)，但头孢呋辛在大多数类型的色谱柱上易于过载并非由于缓冲液过载(buffer overload)所致，而可能源于这类色谱柱对离子化的化合物的饱和容量相对较低。

作者：刘浩王红武丁建英仇仕林【关键词】,,RP摘在反相高效液相色谱(RPHPLC)过程中，流动相的离子强度可本篇论文是由3COME文档频道的网友为您在网络上收集整理饼投稿至本站的，论文版权属原作者，请不用于商业用途或者抄袭，仅供参考学习之用，否者后果自负，如果此文侵犯您的合法权益，请联系我们。

Fig.1 （略）最近的研究结果［7～12，18～27］显示，应用RPHPLC分离可解离的化合物时，流动相中添加缓冲盐并非仅仅用于稳定流动相的pH值，缓冲盐、甚至简单的中性盐的反离子还可与离子化的被测物通过相互间的缔合作用形成疏水性较强的中性离子对复合物；在低离子强度的缓冲液中，吸附在固定相表面的离子化的被测物分子的极性基团相互之间存在静电排斥效应，这使得色谱柱的饱和容量显著降低；随着缓冲液浓度(离子强度)的增加，中性离子对复合物的浓度相应增加，固定相表面离子化的吸附物之间的相互排斥作用随之减弱，导致色谱柱的饱和容量、尤其是填料上的低能量位点(与溶质和键合相的烷基链之间的相互扩散作用有关)的饱和容量以及平衡常数增加；盐一类的流动相添加剂可破坏离子化的被测物在流动相中的溶剂化去溶剂化平衡，产生所谓的促溶效应(chaotropic effect)，被测物与盐相互作用，离子化的被测物相互间的排斥作用减弱，从而显著地影响被测物在固定相上的吸附行为；在制备色谱系统中或被测物浓度较高时，流动相中应含有足量的缓冲盐以改善色谱峰形和分离效果。