琼脂糖凝胶电泳常见问题解答

琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和检测DNA分子的方法，但有时候会出现电泳条带不清晰的情况。

这种情况可能由以下几个原因引起。

琼脂糖凝胶的制备和使用过程中可能存在问题。

如果琼脂糖凝胶的浓度不够或者制备过程中出现了气泡，就会导致电泳条带不清晰。

此外，如果琼脂糖凝胶的pH值不正确，也会影响电泳结果。

DNA样品的质量可能不够好。

如果DNA样品的浓度过低或者存在杂质，就会导致电泳条带不清晰。

此外，如果DNA样品没有经过充分的纯化和处理，也会影响电泳结果。

第三，电泳条件可能不够合适。

如果电泳时间过短或者电压过高，就会导致电泳条带不清晰。

此外，如果电泳缓冲液的浓度或pH值不正确，也会影响电泳结果。

操作者的技术水平也会影响电泳结果。

如果操作者没有经过充分的培训和实践，就可能出现操作不当的情况，比如样品加载不均匀、电泳仪设置不正确等，都会导致电泳条带不清晰。

为了避免电泳条带不清晰的情况，我们可以采取以下措施。

首先，制备琼脂糖凝胶时要注意浓度、pH值和气泡等问题。

其次，对DNA样品进行充分的纯化和处理，确保样品质量。

第三，调整电泳条件，包括时间、电压和缓冲液浓度和pH值等。

最后，操作者要
经过充分的培训和实践，确保操作技术水平。

电泳条带不清晰可能由多种原因引起，我们需要仔细分析和排除这些原因，才能得到准确的电泳结果。

琼脂糖凝胶电泳常见错误及注意事项琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学实验技术。

在实验过程中，为避免常见错误和提高实验效果，需要注意以下几点：1. 样品制备：在样品制备过程中，需要严格控制样品的来源、处理和质量。

避免污染和杂质的污染，以免影响实验结果。

2. 凝胶制备：在凝胶制备过程中，需要严格按照实验方案的要求制备凝胶。

应避免在制备过程中产生气泡和缺陷，保证凝胶质量的均一性和完整性。

3. 负载样品：样品的负载量也是影响实验结果的一个重要因素。

负载量过多或者过少，都会影响实验结果的准确性。

因此，需要根据实验要求和样品特点调整合适的负载量。

4. 配置电解液：电解液是凝胶电泳实验中的重要组成部分。

配置电解液应按照实验方案的要求进行，不能进行随意变更。

5. 进行电泳实验：在进行电泳实验时需要注意以下几点：（1）电泳时间：电泳时间应根据实验要求和实验人员的经验来调整，以保证样品可以在凝胶中分离出来。

（2）使用电源：电源是电泳实验中的重要设备，需要使用与实验要求相符的电源，避免因电源不适应或使用不当引起实验故障。

（3）电极夹：电极夹应牢固可靠，避免在实验过程中出现松动或断电等情况。

6. 结果解读：琼脂糖凝胶电泳实验结果的解读需要根据实验要求和实验人员的经验进行。

在进行实验结果的解读时需要注意以下几点：（1）确定分离带：分离带越清晰越好，可以通过显微镜来观察分离带是否正常。

（2）确定目标DNA：确定目标DNA时需要考虑实验目的和分离带的特点来确定是否符合要求。

（3）保留样品：需要在实验结果出来后保留样品，以备后续实验需要。

总之，在进行琼脂糖凝胶电泳实验时需要注意以上几点，以达到实验目的并减少实验错误的发生。

琼脂糖凝胶电泳常见问题分析DNA凝胶电泳简介一、实验原理DNA电泳是基因工程中最基本的技术，DNA制备及浓度测定、目的DNA片段的分离，重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成。

根据分离的DNA大小及类型的不同，DNA电泳主要分两类：1、聚丙烯酰胺凝胶电泳适合分离1kb以下的片段，最高分辨率可达1bp，也用于分离寡核苷酸，在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化，也称PAGE纯化。

2、琼脂糖凝胶电泳可分离的DNA片段大小因胶浓度的不同而异，胶浓度为0.5～0.6%的凝胶可以分离的DNA片段范围为20bp～50kb。

电泳结果用溴化乙锭（EB）染色后可直接在紫外下观察，并且可观察的DNA条带浓度为纳克级，而且整个过程一般1小时即可完成。

由于该方法操作的简便和快速，在基因工程中较常用。

二、琼脂糖凝胶琼脂糖是从琼脂中分离得到，由1，3连接的吡喃型b-D-半乳糖和1，4连接的3，6脱水吡喃型阿a-L-半乳糖组成，形成相对分子量为104～105的长链。

琼脂糖加热溶解后分子呈随机线团状分布，当温度降低时链间糖分子上的羟基通过氢键作用相连接，形成孔径结构，而随着琼脂糖浓度不同形成不同大小的孔径。

表1给出了不同浓度凝胶对DNA片段的线性分离范围。

表1不同类型琼脂糖分离DNA片段大小的范围由于琼脂糖凝胶是通过氢键的作用，因此过酸或过碱等破坏氢键形成的方法常用于凝胶的再溶化，象NaClO4能用于凝胶的裂解，一般的凝胶回收试剂盒利用的也是这一原理。

随着实验技术的发展，也针对不同用途开发了各种类型的琼脂糖凝胶：（1）低熔点琼脂糖凝胶，用于DNA片段的回收，且由于该种凝胶中无抑制酶，可在胶中进行酶切、连接等；（2）高熔点凝胶，可分离小于1kb的DNA片段，专用于PCR产物的分析；（3）快速凝胶，电泳速度比普通凝胶中快一倍，可节省实验时间；（4）适用于DNA大片段的分离。

（5）其它类型。

各生产商还开发很多类型的凝胶，可根据实验要求选择不同类型的，选择原则是考虑合适的机械强度和熔点。

琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分析和分离生物大分子的方法。

然而，有时候在进行琼脂糖凝胶电泳实验时，我们可能会遇到条带不清晰的问题，这给结果的解读和分析带来了困扰。

下面我将介绍一些可能导致琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因。

1. DNA样品质量不佳琼脂糖凝胶电泳的前提是获得高质量的DNA样品。

如果DNA样品质量不佳，比如存在脏带、降解或者污染，都会导致条带不清晰。

因此，在进行实验之前，我们需要对DNA样品进行质控，确保其质量符合要求。

2. 样品预处理不当在进行琼脂糖凝胶电泳之前，我们通常需要对DNA样品进行一些预处理，比如酶切、PCR扩增或者纯化等。

如果预处理过程中存在问题，比如酶切反应时间过长、PCR扩增过程中出现非特异性扩增等，都会导致条带不清晰。

3. 聚丙烯酰胺凝胶浓度选择不当琼脂糖凝胶电泳中，聚丙烯酰胺凝胶的浓度是影响条带清晰度的重要因素之一。

一般来说，较低浓度的凝胶适用于较大的DNA片段分离，而较高浓度的凝胶适用于较小的DNA片段分离。

如果选择的凝胶浓度不合适，就会导致条带模糊不清。

4. 电泳条件设置不当电泳条件的设置也是影响琼脂糖凝胶电泳结果的重要因素。

比如，电泳电压、电泳时间和电泳缓冲液的配制等都会影响条带的清晰度。

如果电压过高或者电泳时间过长，都会导致条带模糊不清。

此外，如果电泳缓冲液的配制不正确，比如pH值不稳定或者离子浓度不合适，也会影响条带的清晰度。

5. 负载样品量过多或过少在进行琼脂糖凝胶电泳时，负载样品量的选择也是非常关键的。

如果负载样品量过多，会导致条带扩散，模糊不清；如果负载样品量过少，条带可能会变得非常弱或者根本看不到。

因此，在进行负载样品时，需要根据实验的需要选择适当的样品量。

琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因可能是多方面的，包括DNA样品质量不佳、样品预处理不当、聚丙烯酰胺凝胶浓度选择不当、电泳条件设置不当以及负载样品量过多或过少等。

在进行琼脂糖凝胶电泳实验时，我们需要仔细检查每一个步骤，确保实验条件的准确性和合理性，从而获得清晰可靠的结果。

琼脂糖凝胶电泳实验报告思考题
当涉及琼脂糖凝胶电泳实验时，有许多思考题可以涉及。

以下是一些可能的思考题：
1. 实验目的是什么？为什么要使用琼脂糖凝胶电泳？
2. 实验中使用的琼脂糖凝胶是什么成分？它是如何制备的？
3. 实验中使用的样品是什么？为什么选择这些样品进行电泳分析？
4. 实验中使用的电泳条件是什么？包括电场强度、电泳时间等参数。

5. 在实验中观察到的电泳结果是什么？是否有预期的结果？有无异常结果？
6. 实验中的控制组是什么？它们的作用是什么？
7. 实验中可能存在的误差来源是什么？如何减少这些误差？
8. 实验结果与预期结果是否一致？如果不一致，可能的原因是什么？
9. 实验结果对理论或实际应用有何意义？是否可以推广到其他领域？
10. 未来实验中可以改进的地方是什么？有无可能的进一步研究方向？
以上思考题可以帮助读者更深入地理解琼脂糖凝胶电泳实验，并引发更多的讨论和思考。

琼脂糖凝胶电泳常见问题分析.doc琼脂糖凝胶电泳常见问题分析问题可能原因解决⽅法DNA Marker 降解核酸酶污染每次吸取时更换灭菌枪头，勿将电泳缓冲液带⼊管中；⽤后密闭4°C 保存保存不当4°C 或 -20 °C 保存，避免多次反复冻融；不可加热DNA Marker ⽆法琼脂糖质量差使⽤质量可靠的琼脂糖制胶正确分离电泳缓冲液多次使⽤后失效更换缓冲液条带黯淡核酸浓度过低增加上样量核酸降解使⽤不含核酸酶的试剂和耗材制备样品DNA 条带被⽰踪染料掩盖提⾼上样量；避免使⽤与⽬的⽚段迁移率相同的⽰踪染料条带模糊或弥散电泳缓冲液多次使⽤后失效更换缓冲液核酸部分降解使⽤不含核酸酶的试剂和耗材制备样品核酸样品纯度差，含有DNA 结合蛋酚 /仿抽提或⼄醇沉淀去除蛋⽩、盐份等杂质⽩或⾼浓度的盐份电压过低，电泳时间过长根据凝胶⼤⼩和电泳缓冲液类型，使⽤适当的电压进⾏电泳染⾊时间过长或拍照前放置过久，电泳结束后及时观察、拍照DNA 条带弥散条带缺失DNA 条带分⼦量过⼤使⽤脉冲凝胶电泳分⼦量接近的 DNA 条带没有分开选择适当的凝胶浓度进⾏电泳电泳缓冲液使⽤不当SD 和 TBE 缓冲液适于分析较⼩分⼦量的DNA ⽚段，⼤⽚段分⼦不能完全分离；TAE缓冲液不适于分离很⼩的DNA ⽚段电泳时间过长或电压过⾼，DNA ⾛缩短电泳时间，调整电压出凝胶电极插反， DNA ⾛出凝胶正确连接电极⽅向条带⼤⼩不正确核酸降解或形成聚合物加热处理或重新制备样品λ DNA 酶切 Marker 的 cos 位点复性电泳前65°C加热5分钟，冰上冷却5分钟以上⼀页下⼀页。

要跑琼脂糖凝胶电泳，5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗？能够照相的清楚的条带，至少需要多少量呢？参考见解：5ng 已经可以了，但是或许20ng50ng-200ng效果好，在此范围内呈线性。

把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果吗?用多大浓度的胶和多大的电压呢?参考见解：可以用琼脂糖凝胶电泳分开,电压不变,可用1.5%到2%的胶,20bp得片断不一定能看得到,所以应用未酶切的PCR片断作对照. 琼脂糖浓度（W/V）大小范围（bp）0.6% 1000-230000.8% 800-100001.0% 400-80001.2% 300-70001.5% 200-40002% 100-3000丙烯酰胺凝胶电泳更适合于分离纯化小分子量核酸（5-500bp）并且分辨率高，可以达到1个bp。

所以建议进行丙烯酰胺凝胶电泳试试。

Marker做琼脂糖凝胶电泳，发现Marker在加样孔有一个明显的亮带，什么原因？参考见解：marker有时会出现这样的问题,应该是时间久了。

新买时跑胶在点样孔没有,过一段时间就会在点样孔出现亮点。

也可能是蛋白，有时DNA提的不纯含有蛋白时就会出现上样孔有条带的现象。

琼脂糖凝胶电泳检测DNA时,跑出的带后面出现拖尾现象,什么原因造成的?参考见解：DNA带模糊??：1、DNA降解??避免核酸酶污染。

2、DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。

3、所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。

4、DNA样含盐过高??电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。

5、有蛋白污染??电泳前酚抽提去除蛋白。

6、DNA变性，?电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。

将从组织提取的DNA进琼行脂糖凝胶电泳，用的1.5%的胶加了EB，80V跑1小时，溴酚蓝已经跑到头了，在紫外灯观察什么带也没有，只见孔里面有橘红色的亮光。

琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因介绍琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和鉴定DNA、RNA和蛋白质的技术。

然而，在执行琼脂糖凝胶电泳实验时，有时会发现条带不清晰的情况。

本文将深入探讨琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因，并提出相应的解决方案。

二级标题1：样品质量差在分离和凝胶电泳之前，合理选择、处理和保存样品是确保条带清晰的关键之一。

三级标题1.1：DNA/RNA质量差1.确保使用高质量的DNA/RNA提取试剂盒，遵循厂家提供的操作指南。

2.在提取DNA/RNA的过程中，注意样品的污染问题，如DNA污染、RNA降解等。

3.波长为260 nm和280 nm的比值是衡量DNA/RNA纯度的指标，确保该比值在1.8至2.0之间。

4.使用凝胶电泳仪器前，对DNA/RNA样品进行定量，确保加载足够的样品。

三级标题1.2：蛋白质质量差1.使用高纯度的蛋白质提取试剂盒提取样品。

2.注意蛋白质样品的保存温度和时间，避免蛋白质降解。

3.使用SDS-PAGE等技术进行蛋白质分离，确保负载均衡。

二级标题2：电泳条件不当电泳条件的设置对于琼脂糖凝胶电泳的条带清晰度具有重要影响。

三级标题2.1：电泳缓冲液配制问题1.确保电泳缓冲液的pH值和离子浓度符合实验要求。

2.避免电泳缓冲液的变质和二次污染。

三级标题2.2：凝胶浓度和孔隙度不合适1.根据DNA/RNA或蛋白质的分子大小选择适当的琼脂糖凝胶浓度，以充分分离目标分子。

2.考虑使用不同孔隙度的琼脂糖凝胶，以适应不同大小的DNA/RNA或蛋白质。

三级标题2.3：电泳电压和时间错误1.根据实验要求，设置合适的电泳电压和时间。

2.避免电泳时间过长，以免造成DNA/RNA或蛋白质的扩散和模糊化。

三级标题2.4：电泳缓冲液温度过高1.调整电泳室的冷却系统，控制电泳缓冲液温度在合适的范围内。

2.避免电泳缓冲液温度过高导致琼脂糖溶解和扩散。

二级标题3：样品加载问题样品的加载方式和负载量也会影响琼脂糖凝胶电泳的结果。

琼脂糖凝胶电泳实验注意事项1.实验器材准备：实验室应配备安全柜、工作台、电泳槽、垂直电泳装置、电源、显微镜等必要设备，并定期检查它们的完好性和安全性。

2.琼脂糖制备：琼脂糖用于制备凝胶，应选择高纯度、低融点的琼脂糖，并使用符合实验要求的缓冲液熔化。

在制备凝胶时，应注意搅拌均匀以避免空气泡和固体沉淀。

3. 缓冲液：选择适当的缓冲液对于保持凝胶pH稳定、提供离子传导通道至关重要。

常用的缓冲液有Tris–borate–EDTA (TBE)缓冲液和Tris–acetate–EDTA (TAE)缓冲液，根据实验要求选择合适的缓冲液浓度和pH。

4.样品制备：样品制备是电泳实验的关键步骤之一、需要保证样品质量纯净，避免杂质和蛋白质的污染。

DNA或RNA样品应使用恰当的提取方法进行纯化并根据需求进行适当的稀释。

5.凝胶浇注和固化：凝胶浇注时需要注意平整和均匀的浇注，以避免凝胶表面不平整或出现气泡。

凝胶固化时，应保持恰当的温度和时间，避免过度或不完全固化。

6.样品加载：在加载样品前，需加入适当的负载缓冲液，以改变样品密度和颜色，便于观察结果。

在加载样品时，应避免产生气泡，保证准确性。

7.电泳过程：根据实验要求选择合适的电压、电流、电泳时间和温度。

实验中需要使用直流电源，确保电源接线正确且稳定。

电泳槽中应保持适当的缓冲液深度，以保证样品被完全覆盖，并保持适当的电场强度。

8. 染色和可视化：完成电泳后，可以使用DNA染料如溴化乙锭(Bromophenol Blue)或SYBR Green等染色。

染色时间和染色剂浓度应根据实验需要进行优化，并在充足的光照下进行可视化。

9.结果分析：电泳结果的正确分析非常重要。

可以使用图像分析软件获取数据，应特别注意分析峰的大小、数量和位置，并与标准样品进行比较和解释。

10.安全操作：在进行琼脂糖凝胶电泳实验时，应遵守实验室安全操作规程。

避免接触有害化学品，如乙烯二胺、乙酸乙酯等。

注意灭菌消毒操作，减少污染风险。

凝胶电泳常见问题分析2008-09-15 21:43要跑琼脂糖凝胶电泳， 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗？能够照相的清楚的条带，至少需要多少量呢？参考见解：5ng 已经可以了，但是或许20ng50ng-200ng效果好，在此范围内呈线性。

把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果吗?用多大浓度的胶和多大的电压呢?参考见解：可以用琼脂糖凝胶电泳分开,电压不变,可用1.5%到2%的胶,20bp得片断不一定能看得到,所以应用未酶切的PCR片断作对照.琼脂糖浓度（W/V）大小范围（bp）0.6%1000-230000.8%800-100001.0%400-80001.2%300-70001.5%200-40002%100-3000丙烯酰胺凝胶电泳更适合于分离纯化小分子量核酸（5-500bp）并且分辨率高，可以达到1个bp。

所以建议进行丙烯酰胺凝胶电泳试试。

Marker做琼脂糖凝胶电泳，发现Marker在加样孔有一个明显的亮带，什么原因？参考见解：marker有时会出现这样的问题,应该是时间久了。

新买时跑胶在点样孔没有,过一段时间就会在点样孔出现亮点。

也可能是蛋白，有时DNA提的不纯含有蛋白时就会出现上样孔有条带的现象。

琼脂糖凝胶电泳检测DNA时,跑出的带后面出现拖尾现象,什么原因造成的?参考见解： DNA带模糊??：1、 DNA降解??避免核酸酶污染。

2、 DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。

3、所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA 链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。

4、 DNA样含盐过高??电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。

5、有蛋白污染??电泳前酚抽提去除蛋白。

6、 DNA变性，?电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。

将从组织提取的DNA进琼行脂糖凝胶电泳，用的1.5%的胶加了EB，80V跑1小时，溴酚蓝已经跑到头了，在紫外灯观察什么带也没有，只见孔里面有橘红色的亮光。

琼脂糖凝胶电泳常见问题分析DNA凝胶电泳简介一、实验原理DNA电泳是基因工程中最基本的技术，DNA制备及浓度测定、目的DNA片段的分离，重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成。

根据分离的DNA大小及类型的不同，DNA电泳主要分两类：1、聚丙烯酰胺凝胶电泳适合分离1kb以下的片段，最高分辨率可达1bp，也用于分离寡核苷酸，在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化，也称PAGE纯化。

2、琼脂糖凝胶电泳可分离的DNA片段大小因胶浓度的不同而异，胶浓度为0.5～0.6%的凝胶可以分离的DNA片段范围为20bp～50kb。

电泳结果用溴化乙锭（EB）染色后可直接在紫外下观察，并且可观察的DNA条带浓度为纳克级，而且整个过程一般1小时即可完成。

由于该方法操作的简便和快速，在基因工程中较常用。

二、琼脂糖凝胶琼脂糖是从琼脂中分离得到，由1，3连接的吡喃型b-D-半乳糖和1，4连接的3，6脱水吡喃型阿a-L-半乳糖组成，形成相对分子量为104～105的长链。

琼脂糖加热溶解后分子呈随机线团状分布，当温度降低时链间糖分子上的羟基通过氢键作用相连接，形成孔径结构，而随着琼脂糖浓度不同形成不同大小的孔径。

表1给出了不同浓度凝胶对DNA片段的线性分离范围。

表1不同类型琼脂糖分离DNA片段大小的范围由于琼脂糖凝胶是通过氢键的作用，因此过酸或过碱等破坏氢键形成的方法常用于凝胶的再溶化，象NaClO4能用于凝胶的裂解，一般的凝胶回收试剂盒利用的也是这一原理。

随着实验技术的发展，也针对不同用途开发了各种类型的琼脂糖凝胶：（1）低熔点琼脂糖凝胶，用于DNA片段的回收，且由于该种凝胶中无抑制酶，可在胶中进行酶切、连接等；（2）高熔点凝胶，可分离小于1kb的DNA片段，专用于PCR产物的分析；（3）快速凝胶，电泳速度比普通凝胶中快一倍，可节省实验时间；（4）适用于DNA大片段的分离。

（5）其它类型。

各生产商还开发很多类型的凝胶，可根据实验要求选择不同类型的，选择原则是考虑合适的机械强度和熔点。

琼脂糖凝胶电泳失败的三大原因及解决方法琼脂糖凝胶电泳是常用分离DNA或RNA等生物大分子的方法之一。

但是，在进行琼脂糖凝胶电泳时，经常会出现失败的情况，影响实验
结果。

下面介绍三种常见的琼脂糖凝胶电泳失败原因及解决方法。

一、凝胶制备不当
凝胶制备不当是琼脂糖凝胶电泳失败的常见原因之一。

凝胶的浓
度和 pH 值的不准确，会导致样品在凝胶上的迁移速度不同，分离效
果差。

解决方法：
1、准确称量琼脂糖的用量，按标准比例配制凝胶；
2、保持 pH 值适当，通常为 7.5-8.0；
3、使用新鲜的试剂，防止污染。

二、电泳条件不正确
电泳条件对于琼脂糖凝胶电泳的成功与否有很大的影响，如果电
泳时间不够或者电场强度不够，样品可能没有分离开来。

解决方法：
1、选择正确的电泳缓冲液；
2、根据样品的大小和特性来制定合适的电泳时间和电场强度；
3、定期更换电泳缓冲液，防止污染。

三、样品制备不当
样品制备不良，也是琼脂糖凝胶电泳失败的原因之一。

不同的组织、细胞、DNA或RNA等样品，对样品的制备条件有不同的要求。

解决方法：
1、严格按照标准或常规操作制备样品；
2、根据样品的大小和性质，选择合适的溶解方法；
3、尽可能地去除污染物或者其他干扰物。

综上所述，准备好琼脂糖凝胶，选择合适的电泳条件，以及正确地制备样品，是避免琼脂糖凝胶电泳失败的关键。

琼脂糖凝胶电泳条带弥散的原因
琼脂糖凝胶电泳条带弥散的原因可能有以下几种：
1. 过长的电泳时间：如果电泳时间过长，较长的时间内电泳缓冲液的循环流动会导致凝胶中的DNA分子随机扩散，从而导致条带弥散。

2. 凝胶浓度不合适：凝胶浓度过低会导致凝胶的网络结构较松散，分子在电场力作用下容易扩散；而凝胶浓度过高会导致凝胶的网络结构较紧密，分子很难通过，也会导致条带弥散。

3. DNA分子大小不一致：如果样品中的DNA分子大小变化较大，较大的分子会难以通过凝胶网络，而较小的分子则更容易通过凝胶网络，从而出现条带弥散。

4. 过高的电压：较高的电压会导致凝胶中的DNA分子在很短的时间内移动距离较长，容易引起条带弥散。

5. 电泳缓冲液pH值不合适：如果电泳缓冲液的pH值偏离了合适的范围，电泳缓冲液中的离子浓度会发生变化，从而影响凝胶电泳的分离效果，导致条带弥散。

凝胶电泳常见问题分析2008-09-15 21:43要跑琼脂糖凝胶电泳， 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗？能够照相的清楚的条带，至少需要多少量呢？参考见解：5ng 已经可以了，但是或许20ng50ng-200ng效果好，在此范围内呈线性。

把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果吗?用多大浓度的胶和多大的电压呢?参考见解：可以用琼脂糖凝胶电泳分开,电压不变,可用1.5%到2%的胶,20bp得片断不一定能看得到,所以应用未酶切的PCR片断作对照.琼脂糖浓度（W/V）大小范围（bp）0.6%1000-230000.8%800-100001.0%400-80001.2%300-70001.5%200-40002%100-3000丙烯酰胺凝胶电泳更适合于分离纯化小分子量核酸（5-500bp）并且分辨率高，可以达到1个bp。

所以建议进行丙烯酰胺凝胶电泳试试。

Marker做琼脂糖凝胶电泳，发现Marker在加样孔有一个明显的亮带，什么原因？参考见解：marker有时会出现这样的问题,应该是时间久了。

新买时跑胶在点样孔没有,过一段时间就会在点样孔出现亮点。

也可能是蛋白，有时DNA提的不纯含有蛋白时就会出现上样孔有条带的现象。

琼脂糖凝胶电泳检测DNA时,跑出的带后面出现拖尾现象,什么原因造成的?参考见解： DNA带模糊??：1、 DNA降解??避免核酸酶污染。

2、 DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。

3、所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA 链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。

4、 DNA样含盐过高??电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。

5、有蛋白污染??电泳前酚抽提去除蛋白。

6、 DNA变性，?电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。

将从组织提取的DNA进琼行脂糖凝胶电泳，用的1.5%的胶加了EB，80V跑1小时，溴酚蓝已经跑到头了，在紫外灯观察什么带也没有，只见孔里面有橘红色的亮光。

琼脂糖凝胶电泳常见问题分析DNA凝胶电泳简介一、实验原理DNA电泳是基因工程中最基本的技术，DNA制备及浓度测定、目的DNA片段的分离，重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成。

根据分离的DNA大小及类型的不同，DNA电泳主要分两类：1、聚丙烯酰胺凝胶电泳适合分离1kb以下的片段，最高分辨率可达1bp，也用于分离寡核苷酸，在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化，也称PAGE纯化。

2、琼脂糖凝胶电泳可分离的DNA片段大小因胶浓度的不同而异，胶浓度为0.5～0.6%的凝胶可以分离的DNA片段范围为20bp～50kb。

电泳结果用溴化乙锭（EB）染色后可直接在紫外下观察，并且可观察的DNA条带浓度为纳克级，而且整个过程一般1小时即可完成。

由于该方法操作的简便和快速，在基因工程中较常用。

二、琼脂糖凝胶琼脂糖是从琼脂中分离得到，由1，3连接的吡喃型b-D-半乳糖和1，4连接的3，6脱水吡喃型阿a-L-半乳糖组成，形成相对分子量为104～105的长链。

琼脂糖加热溶解后分子呈随机线团状分布，当温度降低时链间糖分子上的羟基通过氢键作用相连接，形成孔径结构，而随着琼脂糖浓度不同形成不同大小的孔径。

表1给出了不同浓度凝胶对DNA片段的线性分离范围。

表1不同类型琼脂糖分离DNA片段大小的范围胶的再溶化，象NaClO4能用于凝胶的裂解，一般的凝胶回收试剂盒利用的也是这一原理。

随着实验技术的发展，也针对不同用途开发了各种类型的琼脂糖凝胶：（1）低熔点琼脂糖凝胶，用于DNA片段的回收，且由于该种凝胶中无抑制酶，可在胶中进行酶切、连接等；（2）高熔点凝胶，可分离小于1kb的DNA片段，专用于PCR产物的分析；（3）快速凝胶，电泳速度比普通凝胶中快一倍，可节省实验时间；（4）适用于DNA大片段的分离。

（5）其它类型。

各生产商还开发很多类型的凝胶，可根据实验要求选择不同类型的，选择原则是考虑合适的机械强度和熔点。

三、DNA电泳影响因素DNA为碱性物质，在电泳（缓冲液pH=8）时带负电荷，在一定的电场力作用下向正极泳动。

部分：向DNA样本说再见——常见琼脂糖凝胶电泳错误1. 使用水代替凝胶缓冲液或电泳缓冲液琼脂糖凝胶配制和电泳通常使用TAE或TBE缓冲液进行。

如果您使用水进行凝胶配制和跑电泳，您的凝胶将在电泳时很快融化。

TAE、TBE和水都是透明的溶液；因此，在配制时请检查容器的标签。

2. 使用了错误浓度的琼脂糖DNA凝胶电泳所需的标准琼脂糖浓度为1.0%。

浓度越高，小条带的分辨率越高；反之，琼脂糖浓度越低，大分子量条带的分辨率和分离程度越高。

如果使用了错误浓度的琼脂糖凝胶，就很难确定DNA 条带的可靠性。

当使用低百分比浓度琼脂糖凝胶时要小心；它们往往较软，更容易破损。

3. 颠倒了电泳槽与电源连接线的方向这是很容易犯的错误，但是如果你不小心颠倒了电泳槽与电源连接线的方向，结果将会非常令人沮丧。

因为样本会向相反方向移动，而且由于上样孔与凝胶的末端很近，您会丢失所有的样本。

开始您的电泳后确保DNA样本以正确的方向进入凝胶；如果您看到您的条带向错误的方向移动，请颠倒电源线的方向。

II部分：琼脂糖凝胶中实现更高分辨率的5种方法1. 什么是适合于您的琼脂糖凝胶电泳的正确缓冲液？进行DNA琼脂糖凝胶电泳所需的缓冲液类型，主要取决于DNA片段大小和电泳后的应用。

进行琼脂糖凝胶电泳最常见的两种缓冲液是Tris-乙酸EDTA缓冲液（TAE）和Tris-硼酸EDTA缓冲液（TBE）。

因为两种缓冲液的pH值都接近中性，所以缓冲液中的DNA都带净负电荷并向凝胶装置正极(+)方向移动。

对于小片段DNA (<1000 bp)，如果没有计划从凝胶中回收DNA，那么推荐使用1x TBE缓冲液。

TBE 溶液具有高离子强度和缓冲能力。

TAE缓冲液，结合低电场强度（1–2 V/cm），最适于分离大DNA （12–15 kb）。

TAE缓冲液与琼脂糖相互作用，相比较TBE缓冲液中的琼脂糖凝胶，会产生更低的电渗透，更大的表面孔经，和更低的电场强度，可降低大DNA的smear现象。

琼脂糖凝胶电泳没有条带的原因
琼脂糖电泳没有条带的原因
如果琼脂糖能正常凝固，那变质可能性不大。

如果连marker都看不见
1.如果不要求回收而只是看带，TBE可以不用灭菌，但是PH值要调，这影响DNA的迁移率。

很有可能你的marker 都没跑开。

2.可能是荧光染料过期了或者用量不够，可以考虑在合适范围类适当加大用量或者用EB试试，EB毒性大，但是染色能力比低毒染料强。

3.检查marker的保质期，单独跑一次marker，可能这个marker不行了。

4.点样没点好或者制孔没制好，marker孔破洞了。

可以考虑把胶浓度适度配高点，胶稍稍做厚点，孔底和胶底的距离适当拉高点，这样制孔的时候比较难破洞，点样的时候即使新手也难戳穿。

等你marker能跑出带后，确定没问题再跑PCR产物，如果PCR产物在无操作失误的情况下没有带，就是PCR条件和引物设计的问题了。