cDNA第一链合成试剂盒
操作方法
1、逆转录反应
（1）在无菌薄壁管中加入以下成份：
Total RNA 0.5-1.0μg
(dN)
9 or oligo(dT)
18
100pmol
（2）混匀后，70℃变性5min，将薄壁管迅速置于冰上冷却，然后依次加入以下成份：
5×M-MLV Buffer 4μl
dNTPs（10mM each）1μl
RNasin 10U
100mM DTT 2μl
M-MLV Reverse Transcriptase 100U
DEPC-treated water up to 20μl
（3）混匀后短暂离心，使用oligo(dT)
18引物时在42℃，使用随机引物(dN)
9
时在37℃下温育1小时。
（4） 94℃ 5min终止反应后，冰上冷却。
（5）合成的cDNA第一链可直接用于PCR扩增或进行其它下游操作。
2、P CR扩增
（1）在PCR薄壁管中加入以下试剂
Synthesized cDNA 2-5μl
10×PCR Buffer 2μl
Upper primer 10pmol
Lower primer 10pmol
dNTPs（10mM each）0.5μl
Taq DNA Polymerase 1.5U
ddH
2
O up to 20μl
（2）混匀后短暂离心，然后进行PCR扩增。
94℃预变性2.5min。进入下列30~40个循环（此扩增条件仅供参考）：94℃
30s，60℃ 45s，72℃ 1min~3min。最后72℃延伸7min。
注意事项
1、确保RNA完整性及纯度。RNA质量是决定合成cDNA第一链成功的关键因素，
其纯度及完整性可由OD
260/OD
280
比值和进行琼脂糖凝胶电泳检测。较纯的RNA
样品OD
260/OD
280
比值通常为1.8-2.0，若该比值偏低，应进一步纯化。真核生
物RNA样品电泳图谱28s和18s的比值约为2:1，否则，表明有RNA降解。
2、避免RNA酶污染。进行cDNA合成所用的器皿、试剂和溶液必须完全无菌。操
作过程始终戴手套以杜绝各种RNA酶的污染。
3、合成cDNA第一链的引物选择。选择oligo(dT)12-18作为反转录引物，可保证
cDNA具有完整的3’-端，通常可得到接近全长的cDNA第一链；若选择随机
寡核苷酸(dN)
6或(dN)
9
作为引物，引物在整个mRNA的多个位点退火，产生短
的部分长度的cDNA第一链。这种方法经常用于获得5’末端序列及从带有二级结构区域或带有逆转录酶不能复制的终止位点的RNA模板获得cDNA。
常见问题及参考意见
1、cDNA产量很低，为什么？
可能的原因：(1)RNA模板质量低；(2)对mRNA浓度估计过高；(3)反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足；(4)反应体积过大，一般不应超过50μl。
2、合成不了长链的cDNA，为什么？
(1) RNA降解。对使用的器具、试剂用DEPC、干热或湿热灭菌处理，以杜绝RNase 污染。同时，在逆转录反应中加入RNase抑制剂。
(2) 反应条件不合适。通过预实验确定最合适的反应条件，包括酶量、盐浓度、反应温度（37~56℃）、DTT浓度（0.5~10mM）。
(3) RNA结构问题。提高逆转录反应温度，或者使用随机引物。
注：经本公司实验证明某些DEPC处理水可能对Taq DNA聚合酶有抑制作用，因此PCR扩增时建议最好使用超纯水。
有机合成方法大全 ——Jack Cao 2008年于北京
目录 第一章卤化与卤置换反应 1.醇羟基的卤化----------------------------------------------------------1-12 2.苯环及稠环上的卤化-----------------------------------------------12-23 3.杂环的卤化-----------------------------------------------------------23-29 4.芳香环侧链的卤化--------------------------------------------------29-33 5.脂肪烃的卤化--------------------------------------------------------33-42 6.加成卤化--------------------------------------------------------------42-55 7.卤置换反应-----------------------------------------------------------55-67第二章胺化与氨解反应 1.卤代物的胺化----------------------------------------------------------1-19 2.羟基和亚甲基的胺化-----------------------------------------------20-28 3.芳香环的胺化--------------------------------------------------------28-30 4.羧基和羰基的胺化--------------------------------------------------30-38 5.其它的胺化反应-----------------------------------------------------38-42第三章重氮化与重氮盐的反应 1.脂肪胺的重氮化--------------------------------------------------------1-2 2.苯环及稠环上胺基的重氮化---------------------------------------3-12 3.杂环上胺基的重氮化-----------------------------------------------12-20 4.重氮盐的反应--------------------------------------------------------20-34第四章消除反应 1．烃基的消除反应-------------------------------------------------------1-11
人cDNA第一链合成(M-MLV)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围：96T 20pg/ml-480pg/ml 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中cDNA第一链合成(M-MLV)含量。实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人cDNA第一链合成(M-MLV)水平。用纯化的人cDNA第一链合成(M-MLV)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入cDNA第一链合成(M-MLV)，再与HRP标记的cDNA第一链合成(M-MLV)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的cDNA第一链合成(M-MLV)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人cDNA第一链合成(M-MLV)浓度。 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
7.请将以下文件按不同类型分类，每类至少写出两个文件。 丁香花.MP3 https://www.doczj.com/doc/f29411451.html, Index.htm 密码.TXT 成龙.DOC 新课程.PDF Setup.exe 学习的方法与技巧.DOC 童话.RM 春.W A V Marry.wps Cxsj.html 为了谁.MPG Car.midi 中国人.A VI 昆嵛山.JPG PhotoShop.exe 神州六号.BMP 还原精灵.RAR 日出.PSD （1）图形、图像文件：、 （2）声音文件：、 （3）文本文件：、 （4）视频文件：、 （5）网页文件：、 1合成朗读和背景音乐声音文件： ①准备好朗读和背景音乐两个声音文件； ②打开其中一个文件，将（）拖到准备开始混音的位置； ③执行（）菜单项，从出现的文件对话框中选择另一个文件； ④将当前文件以（）为文件名保存。 2.小明同学想将录制的“前奏.W AV”与“主题歌.W A V”两部分音乐合并成一首歌曲“校园主题曲.W A V”，他的操作过程如下，请参照上图帮他完成：（1）用（）程序打开声音文件（），并将（）移动到要插入声音的地方； （2）执行（）菜单顶，选择声音文件（），即可完成两个文件的合并； （3）执行（）菜单项，以（）为名保存合成后的声音。 3.将“校园主题曲.W A V”声音文件中前5秒之前的内容删除，如何操作？ ①用（）程序打开声音文件（）； ②单击（）按钮，播放到（）处，单击（）按钮； ③执行（）菜单项，在出现的对话框中单击（）按钮； ④执行（）菜单项，将编辑好的文件原名保存。 4.小亮同学想制作配乐朗诵文件“荷塘月色.W A V”，他的操作过程如下，请参照下图帮他完成： （1）录制朗诵文件： ①启动（）程序； ②单击（）按钮，然后对着麦克风朗诵，完成后单击（）按钮； ③执行（）菜单项，将录制好的文件保存。
邻苯二甲酰亚胺与氢氧化钾的乙醇溶液作用转变为邻苯二甲酰亚胺盐，此盐和卤代烷反应生成N-烷基邻苯二甲酰亚胺，然后在酸性或碱性条件下水解得到一级胺和邻苯二甲酸，这是制备纯净的一级胺的一种方法。 有些情况下水解很困难，可以用肼解来代替： 反应机理 邻苯二甲酰亚胺盐和卤代烷的反应是亲核取代反应，取代反应产物的水解过程与酰胺的水解相似。 反应实例
参考文献 [1] S. Gabriel, Ber., 1887, 20, 2224. [2] F. Chambret and D. Joly, Bull. Soc. Chim. France, 1947, 1023 [3] E. Sakellarios, Helv. Chim. Acta, 1946, 29, 1675. [4] J. C. Sheehan and VV. A. Bolhofer, J. Amer. Chem. Soc., 1950, 72, 2786. [5] J. H. Billman and R. V. Cash, Proc. Indiana Acad. Sci., 1952, 62, 158. [6] D. J. Cram and G. S. Hammond, Organic Chemistry, p 214 (New York, 1959) [7] L. F. Fieser and M. Fieser, Advanced Organic Chemistry, p 503, 1027 (New York, 1961)
传统Gabriel合成 邻苯二甲酰亚胺的钠盐或钾盐与一级卤代烷发生亲核取代反应（构型翻转），生成烷基邻苯二甲酰亚胺。二级卤代烷无法行此反应。由于邻苯二甲酰亚胺的氮上只有一个氢原子，只能引入一个烷基，故该反应是制取较纯净的一级胺的常用方法。 反应最后用酸处理，使一级胺以成盐的形式纯化。[5]若水解很困难，可以用肼的水溶液或乙醇溶液逆流反应（Ing-Manske法），使取代酞酰亚胺肼解，产生邻苯二甲酰肼沉淀和一级胺。以上的两种处理方法都有不足，水解法产率低且会伴随副产物的生成，而肼解法中分离邻苯二甲酰肼十分麻烦(邻苯二甲酰肼因为水溶性非常好，若产生的胺酯溶性好则非常容易水洗除去，其收率通常可以达到80％以上）。因此还有其他使胺自邻苯二甲酰亚胺解离的方法。[6] 用Gabriel合成制取氨基酸时，如果直接用α-卤代酸，则酰亚胺盐会与羧酸反应，生成相应的羧酸盐。因此可以用α-卤代酯作原料，将羧基保护，等反应后水解时，酯比酰胺更容易水解，羧基也就自然游离出来。 [编辑] 机理
产品信息 Thermo Scientific Maxima第一链cDNA合成试剂盒（适用于RT-qPCR）#K1641，#K1642 https://www.doczj.com/doc/f29411451.html,/onebio
分析证书 经验证，在两步法RT-qPCR中，对于不同起始量（5 ng-0.5 fg）的RNA逆转录产物，使用Thermo Scientific Maxima SYBR Green/ROX qPCR 预混液进行qPCR扩增。其反应效率在90-110％之间，曲线斜率在-3.09和-3.58之间，且相关系数>0.99。 质量授权人：Jurgita Zilinskiene
目录页码 试剂盒组分 (4) 贮存条件 (4) 产品描述 (4) 重要提示 (5) RT-qPCR实验方案 (6) 对照反应 (6) 疑难解答 (7) 参考文献 (8)
试剂盒组分 贮存条件 所有试剂盒成分都应贮存于-20 °C。 产品描述 Thermo Scientific Maxima第一链cDNA合成试剂盒是合成cDNA第一链的方便系统，适用于两步法实时定量RT-PCR（RT-qPCR）中的cDNA合成。试剂盒采用先进的Maxima 反转录酶（RT），该酶源自M-MuL V 逆转录酶的体外进化。这种酶相比M-MuL V逆转录酶热稳定性高，扩增效果强劲且具有更高的cDNA合成效率。Maxima第一链cDNA合成试剂盒能够在较高温度下（55-65℃），在很宽的总RNA量范围内（从1 pg到5 μg）合成cDNA。合成反应能在15-30分钟内完成。 Maxima第一链cDNA合成试剂盒的各组分经预混合，以节约时间和减少移液错误。试剂盒由Maxima Enzyme Mix、5×反应混合液、无核酸酶的水三部分组成。 Maxima Enzyme Mix包含Maxima反转录酶和Thermo Scientific Ribolock RNase抑制剂。重组的Ribolock RNase抑制剂能有效保护RNA模板在高于55℃时不被RNase A、B和C降解。 5×反应混合液包含剩余的反应组分：反应缓冲液、dNTPs、Oligo(dT)18和随机引物。 无核酸酶的水用于反应体系的配制和RNA样本的溶解。已通过相关检验证明其中不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶、核糖核酸酶和磷酸酶。
直接法生产过程 直接法由氨和空气经氧化直接合成浓硝酸，生产的关键是除去反应生成的水.反应经历以下五个步骤： ①制一氧化氮氨和空气通过铂网催化剂，在高温下被氧化成一氧化氮，并急冷至40～50℃，使生成的水蒸气经冷凝而除去. ②制二氧化氮一氧化氮和空气中的氧反应，生成NO2后，残余的未被氧化的NO和浓度大于98%的浓硝酸再反应,被完全氧化成二氧化氮：? ③分出二氧化氮在低温下用浓硝酸（>98%）吸收二氧化氮成为发烟硝酸，不能被吸收的惰性气体（N2等）排出系统另行处理. ④制纯NO2并冷凝聚合为液态四氧化二氮加热发烟硝酸，它热分解放出二氧化氮，然后把这纯的NO2冷凝成为液态四氧化二氮： ⑤高压釜反应制浓硝酸将液态四氧化氮与稀硝酸混合（要求稀硝酸中水分与液态 N2O4成一定比例）送入高压釜，在5.0MPa压力下通入氧气，四氧化二氮与水（来自稀硝酸）和氧反应直接生成98%浓硝酸. 为了加快反应的进行，加入的液态N2O4应比理论量多些，这样制得的是含大量游离二氧化氮（即发烟硝酸）的白色浓硝酸，将它放到漂白塔内，通入空气，把游离的NO2吹出，制到98%成品浓硝酸.二氧化氮经回收冷凝后再送到高压釜使用.如果氨的氧化不用空气，而采用纯氧（需加水蒸气稀释以防爆炸），制得的一氧化氮浓度可高些，这对以后的制酸操作是有利的.但需建造制氧装置和增加动力消耗. 间接法 间接法所用脱水剂有硫酸，硝酸镁，硝酸钙和硝酸锌等.经过多年生产实践的筛选，现在几乎全部采用硝酸镁. 硝酸镁是三斜晶系的无色晶体，变成水溶液后，随浓度的不同，可以形成多种结晶水合物，当硝酸镁溶液浓度为57.8%时，其结晶温度为90℃，此时析出Mg(NO3）2·6H2O 结晶.F点为转熔点，即当硝酸镁溶液浓度为81.1%时，其结晶温度为130.9℃，此时Mg(NO3）2和Mg(NO3）2·2H2O结晶共同析出.因此在选择硝酸镁操作温度时，应该避开这些最高点，以免溶液结晶.当硝酸镁溶液浓度大于67.6%时，其结晶温度随溶液浓度增加而迅速上升，溶液浓度超过81%时，则结晶温度直线上升,在此浓度下操作极易造成管道堵塞.因此，硝酸镁浓度太稀脱水效果固然不好，太高则也难以操作，在实际生产中一般控制在64%～80%之间，即浓硝酸镁浓度不超过80%（一般为72%），加热器出口（即吸水后稀硝酸浓度）不低于64%.硝酸镁法浓缩原理如下：浓度为72%～74%的硝酸镁溶液加入稀硝酸中，便立即吸收稀硝酸中的水分，使硝酸浓度提高到68.4%以上，而硝酸镁由于吸收水分，浓度下降至65%左右，此时在硝酸和硝酸镁混合溶液的气相中HNO3浓度在80%以上，再将后者
cDNA第二链合成试剂盒 产品简介： cDNA第二链合成试剂盒，Second Strand cDNA Synthesis Kit是一种在合成了cDNA第一链的基础上去除RNA-DNA杂合链中的RNA链并合成cDNA第二链，最终形成双链cDNA的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第二链合成所需的各种试剂。 本试剂盒采用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，此时DNA Polymerase I可以通过切口平移(nick translation)反应催化形成cDNA第二链。 使用本试剂盒合成的双链cDNA，可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库的构建等。 本试剂盒用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应的后续反应时，足够进行20个cDNA第二链样品的合成。 保存条件： -20℃保存。 注意事项： 进行第二链合成时，dNTP比较适当的最终浓度约为0.2mM。如果最终浓度过低，在反应体系中需要适当补充dNTP。 如果希望获得平末端的双链cDNA，可以用T4 DNA Polymerase (D7051)或DNA末端平滑试剂盒 (D7012)处理。 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1.用反转录酶，例如BeyoRT TM II M-MLV反转录酶(RNase H-) (D7160/D7161/D7162)或BeyoRT TM II cDNA第一链合成试剂盒 (RNase H-) (D7167/D7168)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。 2. 3.按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 V ortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。 4.15℃孵育2小时。(注意：反应温度不能超过15℃) 5.加入5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。 6.后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯 化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
文件编号：TP-AR-L7039 In Terms Of Organization Management, It Is Necessary To Form A Certain Guiding And Planning Executable Plan, So As To Help Decision-Makers To Carry Out Better Production And Management From Multiple Perspectives. （示范文本） 编订：_______________ 审核：_______________ 单位：_______________ 合成氨装置简介和重点 部位及设备(正式版)
合成氨装置简介和重点部位及设备 (正式版) 使用注意：该安全管理资料可用在组织/机构/单位管理上，形成一定的具有指导性，规划性的可执行计划，从而实现多角度地帮助决策人员进行更好的生产与管理。材料内容可根据实际情况作相应修改，请在使用时认真阅读。 一、装置简介 (一)装置发展及其类型 世界上第一座合成氨生产装置始于1913年。我 国首套合成氨生产装置建于20世纪30年代。到70 年代初，我国运行的合成氨生产装置绝大多数仍为以 煤(焦)为原料，采用固定床制气技术的中、小型装 置。世界上，60年代起，大型合成氨生产装置由于 具有工艺流程短、热利用率高、自动化水平高、单系 列、运行时间长等优点，得到快速发展。我国从 1973年开始，从美国、日本、法国引进了13套日产
合成氨1000t的大型合成氨生产装置。这些装置均采用烃类蒸汽转化制气工艺技术，其中以天然气为原料的有10套(其中两套后来改用轻油)；以轻油为原料的有3套。1978年以后，又引进了以渣油、煤为原料，采用部分氧化制气工艺技术的大型合成氨生产装置。 合成氨装置生产工艺技术因原料制气、气体净化、氨合成工艺不同而有多种工艺技术。原料气化有：煤(焦)固定床气化工艺；煤(焦)气流床气化工艺；渣油、水煤浆部分氧化制气工艺；烃类(轻油、天然气)蒸汽转化制气工艺。气体净化工艺种类繁多。硫化物脱除分为固定床吸附(如氧化锌吸附)和溶液吸收(如：乙醇胺法、甲醇法、NHD法)。一氧化碳变换工艺可分耐硫变换工艺和非耐硫变换工艺。二氧化碳脱除可分为化学吸收法(如：G?V法，苯菲尔法)
1 分析极性单体如MMA负离子聚合的难点，通过增氧的方法可以改善其苛刻的聚合条件。 难点：副反应。分子结构中存在羰基，很容易与引发剂或活性聚合物的链末端侧基第二单元发生“反咬”反应，从而导致反应的终止，单体转化率降低，相对分子质量不能控制和分布变宽；对丙烯酸烷基酯而言由于存在活泼的a氢原子，因此情况更加复杂，即副反应发生的可能性加大。措施：降低活性中心的活性（1）合成立体位阻较大的引发剂（2）在体系中加入不同种类的配位体络合剂（3）降低聚合反应温度。 2 Z-N催化剂、（M）茂金属催化剂、(H)“茂后”催化剂都是配 位聚合的催化剂体系。试从聚合单体、产品结构、引发活性等多个方面进行比较。 聚合单体：M可聚单体比Z-N可聚合单体多，2 Z-N催化剂主要用于乙烯聚合以及丙烯的立构规整聚合，M催化剂催化活性高，多用于乙烯和其他乙烯基单体的共聚反应，共聚能力差，共聚组分分布宽。 产品机构：Z-N可制成LLDPE，它具有LDPE的柔性和HDPE的强度，而且较透明，抗冲击性能，较高的撕裂强度和抗刺穿强度，H可以合成高支化聚乙烯，M和H可以实现烯烃与极性单体的共聚。 引发活性：Z-N多活性中心，MH都是单活性中心，H更活泼。 3 通过负离子聚合方法制备丁苯橡胶时，通常采用非极性溶剂，有时还添加一些极性组分，试分析聚合温度对上述两种体系中聚合物微观结构的影响。（包括聚丁二烯微观结构和序列分布） 先写出两种聚合物的结构式，丁二烯聚合后可以生成1,4；1,2两种结构，非极性溶剂中，两反应的活化能Ea1 反应次数目录号反应次数 04 379 012 001 50次，包括10次对照反应 04 896 866 001 100次 04 897 030 001 200次 试剂盒包装与含量小瓶/瓶盖标签适用于a) 04 379 012 001 b) 04 896 866 001 c) 04 897 030 001 1 红色 Transcriptor Reverse Transcriptase（逆转录酶） a) 1瓶，25 μl (20 U/μl) b) 1瓶，50 μl (20 U/μl) c) 2瓶，各50 μl (20 U/ μl) 储存缓冲液：200 mM 磷酸钾，2 mM 二硫苏糖醇，0.2% Triton X-100(v/v)，50% 甘油(v/v)，pH 约为7.2? 2 无色 Transcriptor RT Reaction Buffer(5×) （逆转录缓冲液） a) 1瓶，1 ml b) 1瓶，1 ml c) 2瓶，各1 ml 5×浓度：250 mM Tris/HCl，150 mM KCl，40 mM MgCl2，pH约为8.5(25°C)? 3 无色 Protector RNase Inhibitor （RNase抑制剂） a) 1瓶，50 μl(40 U/μl) b) 1瓶，100 μl(40 U/μl) c) 2瓶，各100 μl(40 U/μl) 储存缓冲液：20 mM Hepes-KOH，50 mM KCl，8 mM 二硫苏糖醇，50 % 甘油(v/v)，pH 约为7.6 (4°C)? 4 黄色/ 紫色 Deoxynuc-leo-tide Mix （dNTP） a) 1瓶，100 μl(黄色瓶盖) b) 1瓶，200 μl(紫色瓶盖) c) 2瓶，各200 μl(紫色瓶盖) dATP, dCTP, dGTP, dTTP各10 mM?5 蓝色 Anchored-oligo(dT)18 Primer （锚定oligo(dT)18引物） a) 1瓶，100 μl(50 μM) b) 1瓶，200 μl(50 μM) c) 2瓶，各200 μl(50 μM) 6 Random Hexamer a) 1瓶，100 μl(600 μM) 蓝色 Primer（随机引物） b) 1瓶，200 μl(600 μM) c) 2瓶，各200 μl(600 μM) 7 绿色 Control RNA （对照RNA） a) 1瓶，20 μl(50 ng/μl) 包含提取于永生细胞系(K562)的总RNA 片段稳定溶液? 8 绿色 Control Primer Mix PBGD （对照基因引物） a) 1瓶，40 μl 5 μM 人类PBGD特异性正向与反向引物? 9(b和c为瓶7) 无色 Water, PCR-grade a) 1瓶，1 ml b) 2瓶，各1 ml c) 3瓶，各1 ml 注意：货号为04 896 866 001和04 897 RevertAid?第一链cDNA Synthesis试剂盒 #K1621, #K1622 分析证明书 #K1621 Lot 质量控制 采用100 fg对照GAPDH RNA和对照引物进行RT-PCR反应，通过在1%琼脂糖上进行凝胶电泳和溴化乙锭染色显示得到足够量的496 bp的产物 质量认证人：Jurgita Zilinskiene 目录 页码 试剂盒组成 (2) 存储条件 (2) 产品说明 (2) 注意事项 (3) 操作步骤 (6) RT-PCR (6) 合成cDNA用于克隆 (7) 实验对照 (8) 问题分析与解决 (10) 试剂盒成分 RevertAid?第一链cDNA 合成试剂盒 20 次 #K1621 100 次 #K1622 RevertAid? M-MuLV 反转录酶（200 u*/μl ） 25 μl 120 μl RiboLock? RNA 酶抑制剂 (20 u**/μl) 25 μl 120 μl 5×反应缓冲液 （250 mM Tris-HCl (pH 8.3), 250 mM KCl, 20 mM MgCl 2, 50 mM DTT ）150 μl 500 μl 10mM dNTP 混合物 50 μl 250 μl Oligo(dT)18 引物 100 μM, 0.5 μg/μl (15 A 260 u/ml) 25 μl 120 μl 随机六聚体引物 100 μM, 0.2 μg/μl (6 A260 u/ml) 25 μl 120 μl GAPDH 正向引物, 10 μM 5’ – CAAGGTCATCCATGACAACTTTG – 3’ 20 μl 20 μl GAPDH 反向引物, 10 μM 5’ – GTCCACCACCCTGTTGCTGTAG - 3’ 20 μl 20 μl 对照GAPDH RNA 1.3 kb 3’-poly(A) tailed RNA transcript, 0.05 μg/μl 20 μl 20 μl 无核酸酶高纯度水 2x1.25 ml 2x1.25 ml * 一个单位的RevertAid?M-MLV 逆转录酶在37℃10 分钟将1 nmol 的dTMP 转化为多核苷酸组分（吸附在DE81上）。 ** 一个单位的RiboLock?RNase 酶抑制剂抑制5ng RNA 酶A 50%的活性。 存储条件 试剂盒中所有组分应存储在-20°C 。对照用RNA 可存储于-70°C 以便长期使用。 产品说明 RevertAid?第一链cDNA 合成试剂盒以mRNA 或者总RNA 为模板，高效合成第一链cDNA 。本试剂盒使用RevertAid? M-MuLV 反转录酶，它的RNA 酶H 的活性与AMV 反转录酶相比较低。该反转录酶可耐受42-50°C 温度，合成的cDNA 片段长度达13kb 。 试剂盒中含有RiboLock? 重组RNA 酶抑制剂，防止RNA 降解，可耐受55°C 高温。 试剂盒同时含有oligo(dT)18和随机六聚体引物。随机六聚体引物与模板非特异性地结合，以总RNA 中任何RNA 为模板合成cDNA 。oligo(dT)18选择性和RNA 3’poly(A)配对结合，只以有poly(A)尾巴的mRNA 为模板合成cDNA 。使用本试剂盒也可采用序列特异性引物。 合成的第一链cDNA 能直接用作PCR 或荧光定量PCR 的模板，第二链cDNA 的合成或线性RNA 扩增，也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA 的实验，比如将标记好的第一链cDNA 作为杂交实验中的探针或者用于微阵列分析。 MATLAB高级编程与工程应用语音合成综合实验 姓名： 班级： 学号： 日期： 1.2.1 简单的合成音乐 (1) 请根据《东方红》片断的简谱和“十二平均律”计算出该片断中各个乐音的频率，在MATLAB 中生成幅度为1 、抽样频率为8kHz 的正弦信号表示这些乐音。请用sound 函数播放每个乐音，听一听音调是否正确。最后用这一系列乐音信号拼出《东方红》片断，注意控制每个乐音持续的时间要符合节拍，用sound 播放你合成的音乐，听起来感觉如何 由“十二平均律”计算得到各个乐音的频率： “5”——“C”： “6”——“D”： “1”——“F”： “2”——“G”：392Hz “6.”频率是“6”的一半： 代码：（） f=8000; T=1/f; t8=0:T:1*; t4=0:T:2*; t2=0:T:4*; t1=0:T:8*; part1=sin(2*pi**t4); part2=sin(2*pi**t8); part3=sin(2*pi**t8); part4=sin(2*pi**t2); part5=sin(2*pi**t4); part6=sin(2*pi**t8); part7=sin(2*pi**t8); part8=sin(2*pi**t2); total=[part1,part2,part3,part4,part5,part6,part7,part8]; sound(total); 试听发现，合成后的音乐基本保持了《东方红》的音调，但声音比较沉闷，相邻乐音之间有比较明显的“啪”的杂音。 (2) 你一定注意到(1) 的乐曲中相邻乐音之间有“啪”的杂声，这是由于相位不连续产生了高频分量。这种噪声严重影响合成音乐的质量，丧失真实感。为了消除它，我们可以用图所示包络修正每个乐音，以保证在乐音的邻接处信号幅度为零。此外建议用指数衰减的包络来表示。 首先尝试用折线包络，编写函数生成所需折线： function envelope = envelope_line(t) envelope(1:floor(t/8)) = linspace(0,1,floor(t/8)); envelope(floor(t/8)+1:floor(t/4)) = linspace(1,,floor(t/4)-floor(t/8))); envelope(floor(t/4)+1:floor(3*t/4)) = linspace,,floor(t*3/4)-floor(t/4)); envelope(floor(3*t/4)+1:t) = linspace,0,floor(t)-floor(3*t/4)); 对中的部分代码进行修改，调用envelope_line实现折线包络：（） part1=sin(2*pi**t4).*envelope_line(t4); 《高聚物生产技术》——高分子合成部分试题 一、名词解释 1.本体聚合 2.悬浮聚合 3.熔融缩聚 4.乳化剂 5.临界胶束浓度 6.塑料 7.橡胶 8.乳液聚合 9.纤维 10.热塑性塑料 11.热固性塑料 12.溶液聚合 13.界面聚合 二、填空题 1.三大合成材料是指、和。 2.缩聚反应的工业实施方法主要有、、、 和等。 3.连锁聚合反应的四种聚合方法，根据聚合产物在单体（或溶剂）中的溶解情况可以分为聚合和聚合。 4.本体聚合的缺点是难于排除，因此容易产生，致使产品变色，发生气泡甚至。为了克服这一问题，工业生产中一般采用聚合。 5.悬浮聚合的场所是在每个小液滴内，而每个小液滴内只有和，即在每个小液滴内实施。 6.悬浮聚合所用的分散剂主要分为和两大类型。 7.三大合成纤维是指、和。 8.乳液聚合反应可为四个阶段，即、、和。 9.乳液聚合的体系组成为、、和。 10.按照聚乙烯生产压力高低可以分为、和三种方法。 11.合成ABS树脂的方法很多，可以分为和两大类。 12.橡胶物质的典型特性是低，具有性。 13.顺丁橡胶生产中，采用的典型Ni系引发剂中的主引发剂是，助引发剂是，第三组分是。 14.连锁聚合反应的工业实施方法主要有、、和。 三、单项选择题 1.动态界面缩聚是进行搅拌的界面缩聚，所得产物为（）。 a.粒状 b.薄膜状 c.纤维状 2.聚合反应在生产中究竟选择哪一种方法，须由（）来决定。 a.单体的性质 b.聚合产物的用途 c.单体的性质和聚合产物的用途 3.悬浮聚合体系的基本组成为（）。 a.单体和引发剂 b.单体、引发剂、分散剂和水 c.单体、引发剂和分散剂 4.目前生产聚氯乙烯的主要方法是（）。 a.悬浮聚合 b.溶液聚合 c.乳液聚合 5.聚氯乙烯聚合常用的引发剂是（）。 a.有机过氧化物 b.偶氮类引发剂 c.复合型引发剂 6.利用甲基丙烯酸甲酯生产有机玻璃时采用的是（）。 a.悬浮聚合 b.本体聚合 c.溶液聚合 7.ABS树脂是（）三元共聚物。 a.丙烯腈-丁二烯-苯乙烯 b.丙烯腈-异戊二烯-苯乙烯 c.丙烯腈-丁二烯-乙烯 8.目前产量和用量占第一位的通用合成橡胶是（）。 a.顺丁橡胶 b.丁苯橡胶 c.异戊橡胶 9.顺丁橡胶的生产主要采用的是（）。 a.悬浮聚合 b.本体聚合 c.溶液聚合 10.生产丙纶的主要单体是（）。 a.丙烯 b.乙烯 c.丙烯腈 11. 在醋酸乙烯酯乳液聚合反应中，可以选用（）为引发剂。 a.过硫酸铵 b.偶氮二异丁腈 c.过氧化苯甲酰 12.以下聚合物中属于热固性塑料的是（）。 a.聚乙烯 b.聚丙烯 c.酚醛树脂 d.聚氯乙烯 13.天然橡胶的主要成分为（）。 a.聚丁二烯 b.聚苯乙烯 c.聚异戊二烯 d.聚丙烯腈 14.聚对苯二甲酸乙二醇酯的商品名称为（）。 a.涤纶 b.尼龙 c.锦纶 d.腈纶 15.（）溶解性较差，能软化，但难熔融。 a.甲阶树脂 b.乙阶树脂 c.丙阶树脂 16.以下物质中（）为聚甲基丙烯酸甲酯的良溶剂。 a.水 b.丙酮 c.乙醇 d.苯 17.有“合成羊毛”之称的纤维是（）。 音乐合成实验 目录 音乐合成实验 (1) 摘要： (1) 第一部分简单的合成音乐 (2) 1.1合成《东方红》 (2) 1.2 除噪音，加包络 (3) 1.3改变程序，实现1.2中的音乐升高和降低一个八度 (8) 1.4在1.2的音乐中加入谐波 (9) 1.5自选音乐合成——《两只老虎》 (10) 第二部分用傅里叶变换分析音乐 (11) 2.1载入fmt.wav并播放 (11) 2.2载入文件Guitar.mat，处理原始数据realwave (11) 2.3分析wave2proc的基波和谐波 (13) 2.4自动分析fmt.wav的音调和节拍 (16) 第三部分基于傅里叶级数的音乐合成 (19) 3.1 用2.3分析出来的结果重新加谐波 (19) 3.2 通过2.4提取的吉他音调信息弹奏《东方红》 (19) 实验收获 (21) 摘要： 本文共有三大部分：第一部分，简单的音乐合成；第二部分，用傅里叶变换分析音乐；第三部分，基于傅里叶级数的音乐合成。由潜入深，一步一步分析了用MATLAB 进行音乐合成的过程。通过本实验达到了加深对傅里叶级数和傅里叶分析的理解，熟悉对MATLAB 基本使用的目标。 第一部分 简单的合成音乐 1.1 合成《东方红》 根据《东方红》第一小节的简谱和十二平均律计算出该小节每个乐音的频率，在MATLAB 中生成幅度为1，抽样频率为8kHz 的正弦信号表示这些乐音，用sound 播放合成的音乐 由图可知《东方红》的曲调定为F ，即1=F ，对应的频率为349.23Hz ，据此可以计算出其他乐音的频率，例如5对应的频率为 7/125349.232523.25f =?=，一次类推计算出第一小节各乐音对应的频率为： 乐音 5 5 6 2 1 1 6 2 在确定了各乐音的频率之后需要确定每个乐音的持续时间。每小节有两拍， 一拍的时间是0.5s ，因此各乐音的持续时间为： 乐音 5 5 6 2 1 1 6 2 而在MATLAB 中表示乐音所用的抽样频率为fs=8000Hz ，也就是所1s 钟内有8000个点，抽样点数的多少就可表示出每个乐音的持续时间的长短。用一个行向量来存储这段音乐对应的抽样点，在用sound 函数播放即可。 根据以上分析在MATLAB 中编写如下程序： sound_1_1.m miRNA first-strand cDNA synthesis kit 使 用 说 明 书 包 装 量： 产品组成、储存：－20 ℃ 保存。 制品说明：miRNA 第一链合成试剂盒本试剂盒采用在 miRNA 3’末端加多聚A 尾Poly(A)，再使用Anchored oligo(dT)-universal tag 通用逆转录引物进行逆转录反应，最终生成miRNA 对应的cDNA 第一链。miRNA cDNA 第一链合成试剂盒包含miRNA 3’末端Poly(A)修饰过程和逆转录过程的所有试剂，该试剂盒具有高效的Poly(A)修饰和逆转录效率， 可从20pg-2μg 的total RNA 中有效制备miRNA 对应的cDNA 第一链。一次合成的cDNA 可检测多个microRNA ，节约了样品和成本。 注：该试剂盒须与 miRNA 荧光定量检测试剂盒（154901）配套使用。 操作步骤： 一、 m iRNA 3’末端进行加Poly (A)处理 1. 在冰上预冷RNase free 的反应管内加入以下试剂至总体积20μl (最后加入E.coli Poly(A) Polymerase ） *在反应中使用的total RNA 必须含有小分子RNA。 *此过程也可以使用小分子RNA（建议加入量为2μl ~4μl。请根据目的miRNA丰度决定加入量）。 2. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在37℃反应30-60 min。所得的Poly(A)反应液可以立即进行第一链合成，也可以放置-20℃短暂保存。如需长期保存建议存放于-80℃。 二、加Poly (A)修饰后的miRNA 进行逆转录反应（第一链合成） 1. 2. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在42℃反应50min。 3. 70℃加热15 min失活TUREscript Hˉ RTase。合成的cDNA反应液可放置于-20℃保存；也可以直接进行下游PCR或者荧光定量PCR检测。 注：按照上述操作步骤得到的cDNA模板用于下游PCR或者荧光定量PCR检测时，可以根据实际情况选择使用量，如果发现有非特异扩增条带，或者融链曲线显示有非特异扩增，往往提示cDNA模板过量，可以将上述cDNA模板稀释几十到几百倍甚至上千倍再使用。 NOT FOR HUMAN OR DRUG USE罗氏第一链cDNA合成试剂盒Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit 中文说明书
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