《丙型肝炎病毒实验室检测技术规范》
中国疾病预防控制中心
二○一○年五月二十日
前言
丙型肝炎已呈全球性流行。据世界卫生组织统计，全球HCV的感染率约为3%，估计约1.7亿人感染HCV，每年新发丙型肝炎病例约3.5万例。我国病毒性肝炎的发病人数一直位于所有传染病的前列，而丙型肝炎报告发病率在病毒性肝炎中也呈现上升趋势。丙型肝炎是一种主要经血液传播的疾病，丙型肝炎病毒慢性感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌，对患者的健康和生命危害极大，已成为严重的社会和公共卫生问题。
丙型肝炎给人类带来了如此巨大的危害，在目前还没有疫苗的情况下，早期发现、早期治疗至关重要。然而，大众对于丙型肝炎认知的欠缺、患者缺乏明显症状、在高危人群中早期发现丙型肝炎患者的机制的缺乏，都使丙型肝炎防治面临巨大的挑战。
目前丙型肝炎病毒检测已经在疾病预防控制机构、医疗机构、采供血机构、出入境检验检疫机构等广泛开展，但是我国在丙型肝炎病毒实验室检测方面尚存在检测策略不明确、检测程序不标准、检测结果解释不规范等问题。临床实验室检测中存在大量的假阳性、假阴性结果。鉴于此，为加强全国丙型肝炎检测工作，提高实验室检测质量，急需制订关于丙型肝炎病毒实验室检测的技术规范。
受卫生部委托，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心于2008年10月25日在北京召开了首次《丙型肝炎病毒实验室检测技术规范》（以下简称《规范》）编写组工作会议。卫生部及中国疾病预防控制中心的有关领导从全国丙型肝炎防控管理角度，为《规范》编写内容提出了几点要求：
1．《规范》内容要考虑为公共卫生服务，要考虑到基层的具体情况。《规范》制订的标准要有实用性及可操作性。
2．《规范》内容要有发展的眼光，要考虑经济发展和技术进步。《规范》内容要有一定的前瞻性，要有较长的使用寿命。
3．《规范》内容要有大局观念，要考虑有利于各系统的发展。《规范》编写要借鉴国外经验、立足国内具体情况。
随后，在卫生部和中国疾病预防控制中心有关领导的支持下，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心组织国内有关专家，历时近两年，经过反复多次修改，制订完成了我国《丙型肝炎病毒实验室检测技术规范》。《规范》共分九章，包括：丙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒抗体检测，丙型肝炎病毒抗原检测，丙型肝炎病毒核酸检测，丙型肝炎病毒检测策略，丙型肝炎病毒细胞培养，实验样品的采集、保存、运输，丙型肝炎病毒检测实验室的室内质量控制及
能力验证和实验室生物安全。
现代医学的发展日新月异，新理论、新观点、新的诊断技术和新的防治策略不断出现，中国疾病预防控制中心将根据最新的临床医学证据适时组织专家组对本《规范》进行修改和更新。
本《规范》主要起草单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心。
本《规范》参加编写单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制中心、北京大学医学部、北京人民医院、上海巴斯德研究所、中国药品生物制品检定所、浙江大学医学院、北京市疾病预防控制中心。
本《规范》编写组织者：蒋岩。
本《规范》编写组人员：庄辉、魏来、鲁凤民、钟劲、祁自柏、陈智、周林福、汪宁、蒋岩、邢文革、邢玉兰、毕胜利。
本《规范》编写联系人：邢文革。
本《规范》适用于全国所有的丙型肝炎病毒检测实验室。
本《规范》解释权属于中国疾病预防控制中心。
本《规范》自发布之日起施行。
《丙型肝炎病毒实验室检测技术规范》编写组
2010年5月20日于北京
目录
第一章丙型肝炎病毒 (1)
1．病毒形态和基因组结构 (1)
2．基因型 (2)
3．复制和细胞嗜性 (2)
4．致病性和免疫性 (3)
第二章丙型肝炎病毒抗体检测 (5)
1．概述 (5)
2．试剂 (5)
3．检测方法及程序 (5)
4．抗体检测注意事项 (10)
5．抗体检测的意义 (11)
6．结果报告和解释 (12)
第三章丙型肝炎病毒抗原检测 (13)
1．概述 (13)
2．试剂 (13)
3．检测方法及程序 (14)
4．抗原检测注意事项 (14)
5．抗原检测的意义 (15)
6．结果报告和解释 (15)
第四章丙型肝炎病毒核酸检测 (16)
1．丙型肝炎RNA定性检测 (16)
2．丙型肝炎病毒RNA定量检测 (17)
3．丙型肝炎病毒基因型检测 (23)
第五章丙型肝炎病毒检测策略 (26)
1．疫情监测相关的检测策略 (26)
2．临床诊断相关的检测策略 (27)
3．血液筛查相关的检测策略 (30)
第六章丙型肝炎病毒细胞培养 (32)
1．丙型肝炎病毒的细胞培养模型 (32)
2．体外细胞培养技术在丙型肝炎病毒检测中应用的展望 (33)
第七章实验样品的采集、保存、运输 (35)
1．样品采集 (35)
2．样品保存与运输 (35)
第八章丙型肝炎病毒检测实验室的室内质量控制及能力验证 (37)
1．室内质量控制 (37)
2．能力验证 (41)
第九章实验室生物安全 (46)
1．丙型肝炎病毒相关检测的生物安全级别 (46)
2．实验室生物安全保障措施 (47)
3．实验室安全操作 (48)
4．职业暴露及其处理 (50)
参考文献 (52)
第４８卷 第５期２０１２年１０月 青岛大学医学院学报 ＡＣＴＡ ＡＣＡＤＥＭＩＡＥ ＭＥＤＩＣＩＮＡＥ ＱＩＮＧＤＡＯ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴＩＳＶｏｌ．４８，Ｎｏ．５Ｏｃｔｏｂｅｒ ２ ０１２［收稿日期］２０１２－０４－１２； ［修订日期］２０１２－０８－０９［基金项目］青岛市卫生科技发展计划资助项目（２０１０ＷＳＺＤ０８）［作者简介］黄艳秋（１９７９－），女，硕士研究生，主治医师。［通讯作者］史昌河（１９６３－） ，男，副主任医师，硕士生导师。丙型病毒性肝炎基因分型及临床意义 黄艳秋，史昌河 （青岛大学医学院传染病学教研室，山东青岛 ２６６０７１ ）［摘要］ 丙型病毒性肝炎病原体为丙型肝炎病毒（ＨＣＶ），以输血为主要传播途径。ＨＣＶ基因组为单股正链ＲＮＡ病毒，有较高的复制率及变异率，在人体内呈准种分布。目前根据Ｓｉｍｍｏｎｄｓ命名系统可将其分为６个基因型。ＨＣＶ基因分型在丙型病毒性肝炎的流行病学研究、病毒载量、病情转归及抗病毒治疗等方面均有重要意义。特别在抗病毒治疗方面，ＨＣＶ基因分型是制定抗病毒治疗方案， 预测抗病毒疗效的重要依据。［关键词］ 肝炎， 丙型；基因分型；综述［中图分类号］ Ｒ５１２．６ ［文献标志码］ Ａ ［文章编号］ １６７２－４４８８（２０１２）０５－０４６８－ ０３ 丙型病毒性肝炎是临床工作中较为常见的一种病毒性肝炎，病原为丙型肝炎病毒（ＨＣＶ），感染后可引起肝脏急、慢性炎症，极少数发展为重症肝炎。输血及血制品曾是丙型病毒性肝炎最重要的传播途径，但近年来，随着筛查方法的改进， 此种传播方式已得到明显控制，目前注射、器官移植、血液透析、性传播及母婴传播亦较常见。人类对ＨＣＶ普遍易感，而且感染后高达８０％的病人转为慢性感染，如果不进行及时和正确的抗病毒治疗，有相当比例的病人会发展为肝硬化、肝癌和肝衰竭，产生严重的临床后果。丙型病毒性肝炎在全球感染率为３％，因此全世界约有１．７亿人曾感染过 ＨＣＶ［１］ ，但各国的感染率不尽相同，我国ＨＣＶ感染率约为 ３．２％，属于高流行区。１ ＨＣＶ基因组的结构和功能１．１ ＨＣＶ基因组的基本结构 ＨＣＶ基因组为单股正链ＲＮＡ，可分为３′非编码区、５′非编码区及编码区（ＯＲＦ）３个区域，ＯＲＦ可编码一个病毒蛋白前体， 在宿主和蛋白酶裂解的共同作用下该蛋白前体可生成至少１０种蛋白。根据所编码蛋白的功能不同，编码区又分为结构基因和非结构基因，其中结构基因编码的４种蛋白包括核心蛋白、包膜蛋白１（Ｅ１）、Ｅ２、Ｐ７，这些蛋白参与病毒的组装，又被称为结构蛋白。非结构基因翻译编码的蛋白有非结构蛋白２（ＮＳ２）、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ、ＮＳ５Ｂ，这些蛋白主要参与病毒复制，故又称非结构蛋白或功能蛋白。ＨＣＶ基因组的变异率高，这一特点使之在人体内呈现准种分布，基因组中Ｅ１和Ｅ２区是变异率最高的区域，而５′及３′非编码区则是最保守的区域。 １．２ ＨＣＶ各区段基因组的结构和功能 ①５′ＵＴＲ：它是ＨＣＶ基因组中最保守的区域。ＨＣＶ ５′ＵＴＲ包括４个保守的结构区域，其中结构域Ⅱ～Ⅳ构成内部核糖体进入位点（ＩＲＥＳ），ＩＲＥＳ能够在不依赖于ＨＣＶ蛋 白作用的前提下启动下游ＨＣＶ编码区基因的翻译，因而抗病毒药物的靶向定位点常为丙型病毒性肝炎病毒的ＩＲＥＳ。②３′ＵＴＲ：３′ＵＴＲ位于ＨＣＶ ３′末端，由２００～２３５个核苷酸组成。其中可变区具有基因型的特异性，在此区域内不同基因型之间存在核苷酸序列的差异。不同的基因型其ＨＣＶ多聚Ｕ区的长度亦不相同。部分研究结果显示，不同的ＨＣＶ型甚至同型不同株型之间３′ＵＴＲ的交换都会导致ＨＣＶ不能复制。因而得出结论，只有当病毒具有完整的３′ＵＴＲ才能发挥其正常的作用。另有研究结果显示，宿主细胞内部所固有的多聚嘧啶束结合蛋白或自身抗原若与ＨＣＶ基因组中的３′ＵＴＲ结构部分（尤其是Ｘ尾）结合，丙型病毒性肝炎病毒核糖核酸的翻译效率和稳定性均可增强。③核心蛋白：丙型病毒性肝炎病毒基因组的３４２～９１４核苷酸位点系核心蛋白基因的位点。编码核心蛋白，核心蛋白的功能之一是与糖蛋白作用组装出完整的ＨＣＶ病毒颗粒。在核心蛋白的氨基端内，高度保守的抗原表位含量非常丰富。核心蛋白在与病毒ＲＮＡ靶向结合的前提下可调节ＨＣＶ基因组的翻译， 并且核心蛋白的基因调节作用与原发性肝癌的发生关系密切，主要因为核心蛋白可抑制Ｐ５３启动因子这一重要肿瘤抑制基因的活性。核心蛋白在人体感染ＨＣＶ后通过对大量基因的调控作用抑制了机体的免疫应答，从而促进了ＨＣＶ对肝细胞及外周血单核细胞等人体细胞的持续感染，此外核心蛋白能加速感染细胞内脂质小体的形成，诱导肝细胞变性。④包膜区：在ＨＣＶ结构中，病毒的外膜常由包膜蛋白构成。第９１５～１４９０ｎｔ位点和１４９１～２７８９位点共同构成了包膜区基因，分别编码Ｅ１和Ｅ２蛋白。其中，Ｅ２氨基端具有高度变异性，ＨＶＲ１和ＨＶＲ２均为Ｅ２氨基端的两个高变区。丙型病毒性肝炎病人的Ｅ２突变增加常由干扰素治疗诱发，ＨＶＲ１序列也会在慢性感染的形成过程中不断改变。Ｅ２结构中还含有若干个中和抗体表位，至少有一个中和抗体表位位于ＨＶＲ１。由此可知，免疫反应常以Ｅ２为主导靶向目标。此外，病毒受体、ＣＤ８１、低密度脂蛋白等物质的受体均可与Ｅ２蛋白发生相互作用，故Ｅ２蛋白具备的另一个重要作用就是介导病毒附着和进入感染细胞内部。因此，在研究和开发ＨＣＶ疫苗这一方向上， 深入地研究膜
4 丙型肝炎病毒抗体（胶体金法）检测作业指导书 1.检测目的 定性检测人全血、血清或血浆样本中的丙型肝炎病毒（HCV ）抗体。 2.测定原理 采用高度特异性的抗体抗原反应原理及胶体金标记免疫层级分析技术，试剂含有预先固定于膜上检测区（T ）的包被用HCV 重组抗原。 3. 标本要求 1. 试剂适用于检测全血、血清或血浆样本，检测时应使用未溶血的样本。 2. 样本应收集于清洁、干燥的容器中，可采用肝素、EDTA 或柠檬酸三钠作为抗凝剂。 3. 样本收集后应尽可能马上使用，不可再室温长时间存放。血清血浆样本可在2-8℃冷藏存放一周，长期保存需冷冻于-20℃。冷藏或冷冻样本应在检测前恢复到室温并充分混均，样本禁止反复冻融。 4.试剂 艾博生物医药（杭州）有限公司 5.操作步骤 5.1 使用前将试剂板和血清／血浆标本恢复至室温。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温)，在1小时内应尽快地使用。 5.2将试剂置于干净平坦的台面上，用25ul 吸管垂直滴加2滴（约50ul ）于加样孔（S ）内，随后加入1滴缓冲液（约30ul ）。 5.3加样后立刻开始计时等待红色条带的出现，在15分钟时读取测试结果。20分钟后读取的结果无效。 6. 结果判定 6.1 阳性（+）：两条紫红色条带出现。一条位于检测区（T ）内，另一条位于质控区（C ）。 6.2 阴性（-）：近质控区（C ）出现一条紫红色条带，在检测区（T ）内务紫红色条带出现。 6.3 无效（×）：质控区（C ）未出现紫红色条带，标本不正确操作过程或试剂已变质损坏。 标题 ：丙型肝炎病毒抗体（胶体金法）检测作业指导书 文件编号：MY2019002 版本号：第一版 页 数：2 编写日期：2018.01.09 编写人： 审核生效日期：2018.01.22 审核人：王立宁
丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（胶体金法） 【检验目的】 定性测定人血清（浆）中的HCV抗体，用于临床术前的初筛查检测。 【实验原理】 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂（胶体金法）采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗人IgG抗体（anti-IgG Ab），在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被丙肝混合抗原（Core、NS3、NS4、NS5）和人IgG抗体。检测阳性样本时，血清样本中HCV-Ab与胶体金标记鼠抗人IgG抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原结合形成“Atenti-IgG Ab-HCV Ab-HCV Ag”夹心物而凝聚显色游离金标鼠抗人IgG 抗体则在对照线处与人IgG抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色，15分钟内观察结果即可。 【样本要求】 1、采集静脉血样本必须在无菌条件下操作，并避免样品溶血。 2、如果血清和血浆样品收集后 7天内检测，样品须放在0-4C保存；大于7天必须-20C—下冷冻保存。 3、常规抗凝剂不影响实验结果。 4、溶血、粘稠及高指标本不适于本试剂。含特殊物质的标本可能会导致检测结果不稳定， 在检测前须清除。 5、在标本中加0.1%NaN3不影响实验结果。 【试验方法】 测试条： 1、将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。 2、将胶体金试纸条从包装盒中取出，打开铝箔包装袋，平置于台面上。 3、用塑料滴管加1滴（10卩）样本血清或血浆，加到试纸条指示箭头下端的加样处。 4、随即滴加2滴样本稀释液（约100^）1。 5、加样后，阳性标本可在1~15分钟内检出，建议15分钟后在最终观察并记录实验结果。 测试卡： 1、将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。 2、将胶体金测试卡从包装盒中取出，打开铝箔包装袋，平置于台面上。 3、用塑料滴管加1滴样本血清或血浆，加到测试卡上的 S孔。 4、随即滴加2滴（约100 ^）1样本稀释液到测试卡上的 D孔。 5、加样后，阳性标本可在1~15分钟内检出，建议15分钟后在最终观察并记录实验结果。 【结果判断】 阳性：试纸条/试卡在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。 阴性：试纸条/试卡只在对照线位置出现一条紫红色条带。 失效：对照区（C）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质 损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试纸条/试卡重新测试。
丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法） 说明书 【产品名称】 通用名称：丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法） 【包装规格】 条型单人份：50人份/盒；板型单人份:40人份/盒。 【预期用途】 本产品用于定性检测人血清.血浆样本中的丙型肝炎病毒（HCV）抗体。 丙型肝炎病毒是一种很小的.具有包膜的单股正链RNA病毒，是主要引起非肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒，据文献报道，90%以上非肠道传播的非甲非乙型肝炎（NANBH）和25%以上急性散发性肝炎均为HCV感染所致，且35-50%的非甲非乙型肝炎发展为慢性肝炎，与肝癌的发生相关。HCV主要传播通过血源传播，此外还可以其他方式如通过母婴垂直传播，家庭日常接触和性传播等。 【检验原理】 本试剂采用高度特异性的抗体抗原反应原理及胶体金标记免疫层析分析技术，试剂含有被预先固定于膜上检测区（T）的包被用HCV重组抗原。 检测时，样本滴入试剂加样处于预包被的胶体金颗粒结合的标记用HCV重组抗原反应。然后，混合物再毛细效应下向上层析。如是阳性，标记用HCV重组抗原金标粒子在层析过程中先于样本中的HCV重组抗体结合，随后结合物会被固定在膜上的包被用HCV重组抗原结合，在检测区内（T）会出现一条紫红色条带。这条带是包被用HCV重组抗原-HCV抗体-标记用HCV重组抗原金标粒子的复合物在膜上结合形成的。如是阴性，则检测区内（T）将没有紫红色条带。无论HCV抗体是否存在于样本血样中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）.质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂内控标准。 【主要组成成分】 丙型肝炎病毒抗体检测试剂：包被用HCV重组抗原，标记用HCV重组抗原。羊抗鼠IgG，硝酸纤维素膜，玻璃纤维； 缓冲液：成份为氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠； 25ul吸管 检测记录表 各组份的包装数量如下： 说明：不同批号试剂中各组份不能够互换使用，以免产生错误结果。
丙型病毒性肝炎诊断标准（WS213-2008） 1范围 本标准规定了丙型病毒性肝炎的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断。 本标准适用于全国各级各类医疗卫生机构及其工作人员对丙型病毒性肝炎的诊断、报告。 2缩略语 HCV:丙型病毒性肝炎病毒 抗-HCV：抗丙型病毒性肝炎病毒抗体 HCV RNA:丙型病毒性肝炎病毒核糖核酸 RT-PCR:逆转录聚合酶链反应 EI.ISA:酶联免疫吸附试验 EIA:酶免疫检测 ALT:丙氨酸氨基转移酶 AST:门冬氨酸氨基转移酶 B超：腹部超声显像 CT:计算机断层扫描 MRI:磁共振成像 3诊断依据 3.1流行病学史
3.1.1曾接受过血液、血液制品或其他人体组织、细胞成分治疗，或器官移植。 3.1.2有血液透析史、不洁注射史，或其他消毒不严格的有创检查、治疗史，有静脉注射毒品史。 3.1.3职业供血者，特别是接受过成分血单采回输者。 3.1.4与HCV感染者有性接触史，或HCV感染者（母亲）所生的婴儿。 3.2临床表现 3.2.1急性丙型病毒性肝炎 3.2.1.1病程在6个月以内，全身乏力、食欲减退、恶心和右季肋部疼痛或不适等。 3.2.1.2可有轻度肝肿大、部分患者可出现脾肿大；少数患者可伴低热或出现黄疽。 3.2.1.3部分患者可有关节疼痛等肝外表现。 3.2.1.4部分患者可无明显症状和体征。 3.2.2慢性丙型病毒性肝炎 3.2.2.1病程超过6个月，全身乏力、食欲减退、恶心和右季肋部疼痛或不适等。 3.2.2.2部分患者可有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣及轻度肝、脾肿大。 3.2.2.3部分患者可无明显症状和体征。
3.2.3丙型病毒性肝炎肝硬化 3.2.3.1可有全身乏力、食欲减退、恶心和右季肋部疼痛或不适等。 3.2.3.2可有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣及腹壁或食管、胃底静脉曲张及脾脏肿大和脾功能亢进。 3.2.3.3失代偿期患者可有腹水、肝性脑病及消化道出血史。 3.3实验室检查 3.3.1急性丙型病毒性肝炎有血清ALT、AST升高，部分病例可有血清胆红素升高。部分慢性丙型病毒性肝炎和丙型病毒性肝炎肝硬化患者亦可有ALT、AST升高。 3.3.2血清抗-HCV阳性。 3.3.3血清HCV RNA阳性。 3.4组织病理学检查 3.4.1急性丙型病毒性肝炎 可有小叶内及汇管区炎症等多种病变，其组织学特征包括：a)单核细胞增多症样病变，即单个核细胞浸润于肝窦中，形成串珠状； b)肝细胞大泡性脂肪变性； c)胆管损伤伴汇管区大量淋巴细胞浸润，甚至有淋巴滤泡形成； d)常见界面性炎症。
62例丙型肝炎病毒基因分型结果分析 发表时间：2017-07-13T15:16:33.613Z 来源：《世界复合医学》2017年第4期作者：张威威[导读] 所以在病毒学研究特别是病毒基因表达谱研究、病毒感染的诊断、病毒流行病学研究等方面有广泛应用前景。 牡丹江市肿瘤医院黑龙江牡丹江 157011 【摘要】目的：对慢性丙型肝炎患者的丙型肝炎病毒（HCV）基因分型情况进行分析，为HCV诊断和治疗地区提供有力的依据。方法：利用门诊及住院患者血清HCV抗体阳性标本，经荧光定量PCR检测HCV RNA阳性的62例标本用基因芯片进行不同基因分型检测。结果：检测HCV感染标本62例，共检出7种基因亚型，分别为1b、6型、2a、1b+ 2a、1b+ 3a、3a和3b，其中1b占72.6%，6型占8.8%，2a 占7.8%，1b+ 2a占5.9%，1b+ 3a占2.9%，3a占1.0%，3b占1.0%。结论：HCV基因型主要为1b与中国南方地区HCV基因型分布比较一致。按照年龄分组20岁以下4例，占6.45%，20～ 30岁12例，占28.6%，30～ 40岁15例，35.7%，40～ 50岁5例，占11.9%，50～ 60岁8例，占19.5%，60岁以上18例，占42.8%。青壮年和有吸毒史、外伤手术史、输注血液制品史的人群阳性率较高。【关键词】丙型肝炎病毒；基因芯片；基因分型【中图分类号】R512.6+3【文献标识码】A【文章编号】1276-7808（2017）04-146-01 Analysis of Hepatitis C Virus Genotyping in 62 Cases Abstract：Objective：To analyze the genotype of hepatitis C virus（HCV）in patients with chronic hepatitis C，and to provide a strong basis for HCV diagnosis and treatment. Methods：62 samples of HCV RNA positive were detected by fluorescence quantitative PCR. The genotypes were detected by cDNA microarray. RESULTS：A total of 62 HBV subtypes were detected，including 1b，6，2a，1b + 2a，1b + 3a，3a and 3b，of which 1b accounted for 72.6%，type 6 accounted for 8.8%，2a 7.8%，1b + 2a 5.9%，1b + 3a 2.9%，3a 1.0%，3b 1.0%. Conclusion：HCV genotype is mainly consistent with the distribution of HCV genotype in southern China. According to the age group under the age of 20 in 4 cases，accounting for 6.45%，20 to 30 years old in 12 cases，accounting for 28.6%，30 to 40 years old in 15 cases，35.7%，40 to 50 years old in 5 cases，11.9% Cases，accounting for 19.5%，over 60 years of age in 18 cases，accounting for 42.8%. Young adults and the history of drug addiction，trauma surgery history，infusion of blood products in the history of the positive rate of high population. Key words：hepatitis C virus；gene chip；genotyping 前言：丙型病毒性肝炎的发病率比较高，非常容易造成慢性病毒性肝炎、肝硬化等疾病，而这些病变的形成与其病原丙型肝炎病毒（HCV）的某些重要生物学特性有关。我国感染丙型肝炎病毒及新发患者数是非常多的，大部分HCV患者会逐步演变为慢性感染，并根据病程轻重发展为肝硬化或肝癌。HCV病毒基因有较强的变异性，变异位点可以发生在基因组的各个区域，根据变异位点的不同将HCV分为不同型别。由于HCV基因型别不仅与疾病严重性存在相关性，而且与抗病毒治疗和肝细胞癌的发生也密切相关。 1.资料与方法1.1一般资料本次研究采用的是我院2015～ 2017年门诊及住院患者血清HCV抗体阳性标本，荧光定量PCR检测HCV RNA阳性的62例标本（其中男31例，女31例，年龄8～81岁）进行基因分型检测。阴性对照为10例健康体检者血清。仪器用的是ABI7300型全自动PCR扩增仪，美国1285REL#6生物安全柜，日本三洋VIP SERIES- 86℃超低温冰箱。试剂用的是丙型肝炎病毒HCV RNA荧光定量检测试剂盒，购于中山大学达安基因股份有限公司，丙型肝炎病毒基因芯片检测技术由中科院上海微系统与信息技术研究所和瑞芯生物科技有限公司提供。 1.2方法 方法用到的是HCV RNA定量检测法，医护人员严格按照丙型肝炎病毒HCV RNA荧光定量检测试剂盒说明书进行操作，先进行RNA提取；逆转录；PCR扩增及荧光检测；然后再对检测结果进行分析，HCV基因分型检测也需要严格按照HCV基因检测芯片说明书进行操作，RNA提取与逆转录；PCR扩增；HCV芯片杂交与显色。 2.结果 62例HCV RNA荧光定量检测阳性结果与HCV基因分型检测结果相符合，10例健康体检者血清检测结果均为阴性，说明基因芯片结果可靠。检测HCV感染标本62例，共检出7种基因亚型，分别为1b、6型、2a、1b+ 2a、1b+ 3a、3a和3b，其中1b占72.5%，6型占8.8%，2a 占7.8%，1b+ 2a占5.9%，1b+ 3a占2.9%，3a占1.0%，3b占1.0%，1b为主要的流行型别，基因型6型已经取代2a成为第二常见亚型，混合基因型感染较多。 3.讨论HCV是一种全球性传染病、给人类健康带来极大威胁的病原体，HCV以血液和性传播为主要传播手段，发病隐匿，症状不典型，加之公众对其认知水平较低，因此病毒的传播不易控制，患者也容易因不能及时诊断而错过治疗的最佳时机。HCV基因型主要为1b与中国南方地区HCV基因型分布比较一致。按照年龄分组20岁以下4例，占6.45%，20～ 30岁12例，占28.6%，30～ 40岁15例，35.7%，40～ 50岁5例，占11.9%，50～ 60岁8例，占19.5%，60岁以上18例，占42.8%。青壮年和有吸毒史、外伤手术史、输注血液制品史的人群阳性率较高。国内外研究表明，HCV不同的基因型对肝脏损伤的程度不同，1b型对肝脏的损伤要比其他型严重得多。HCV对干扰素的应答率也不同，Kandi等，报道HCV 1b型感染多为慢性活动性肝炎，2a型比1b型对干扰素敏感。已证明HCV的基因型能影响抗病毒治疗的效果，感染HCV基因1型或基因4型的患者对使用干扰素和病毒唑的标准治疗反应较差，至少需延长治疗期1年，而且感染基因1型和基因4型的患者比其他基因型者能更快地发展成慢性肝病。HCV是引起人类慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要病原之一。基因分型芯片法，又称基因微矩阵，这种方法是近年来分子生物学及医学诊断技术发展的重要产物，具有非常明显的优点，比如说准确性好，灵敏度高，特异性强，而且简便快速，不需要荧光标记。由于基因芯片可以一次性对大量序列进行检测分析，具有高通量、并行、快速等特点，解决了传统核酸印迹杂交技术操作繁杂、自动化程度低、检测序列少、效率低的缺点，所以在病毒学研究特别是病毒基因表达谱研究、病毒感染的诊断、病毒流行病学研究等方面有广泛应用前景。参考文献：
丙型肝炎病毒基因分型的研究进展 丙型肝炎病毒是输血后感染肝炎常见的一种病毒，目前其分为6型，其亚型已经超过100个，由于其复制依赖的酶缺乏校对功能，所以易发生突变，这也是丙型肝炎病毒基因组分型的基础。其分型的命名因为采取的标准及使用的分析方法不一样也有不同的命名系统。丙型肝炎病毒基因的检测方法很多，但是不简便经济，而且其与丙型肝炎有很大的关系。 标签：丙型肝炎病毒；基因分型；进展研究在如今生活中，除了乙肝是常见肝病外，丙肝患者的比例越来愈高，究其原因主要是人们对于丙肝的感染途径不了解，未对丙肝给予足够的重视。其传播途径主要有：①输血及血制品，尤其是反复输血及使用血制品者，据统计，输血后肝炎70%以上是丙型肝炎。②不正规注射。③伤口未护理。④性接触。⑤母婴传播。在这几种传播途径中，①④⑤最易感染丙肝。在日常生活中，人们需要采取相关防范措施，以免感染丙肝。 1 HCV的结构 HCV的RNA大约有9500－10000bp组成，其5′非编码区有319-341bp，3′非编码区有27- 55bp。在5′非编码区下有一开放阅读框（ORF），其基因排列顺序为5’C-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4-NS5-3，能编码多聚蛋白前体（一长3014个的氨基酸）。经宿主细胞及自身蛋白酶作用可裂解成三种结构蛋白，其分别为核心蛋白、糖蛋白、非结构蛋白三种。HCV基因标记有很多种，如GP72，其基因标记为E2/NS1。其糖蛋白能产生抗HCV的中和作用。还有NS2、NS3、NS4等基因标记。 NS2和NS4的功能可能与细胞膜紧密结合在一起。NS3参与解旋HCV-RNA 分子，具有螺旋酶活性，以辅助RNA复制，NS5参与HCV基因组复制，依赖于RNA的聚合酶活性。 2 HCV的分型及地理差异 目前HCV分型尚无统一的定论，这是因为在研究的过程中采取的技术及研究的位置不一致，因而出现了很多基因分型，这些基因分型没有同一的标准。综合各个国家的研究结果，大致上可分为6型，其亚型很多。而且HCV感染有很大的地域差异。比如欧洲国家主要是HCV-Ⅰ型感染，亚洲国家主要感染Ⅱ型。在我国，很多患者为Ⅱ型感染，其次为Ⅲ型感染，但是有些地区Ⅲ型感染率超过Ⅱ型感染率，从这里来看，丙肝感染并不是一成不变的，还跟地区有很大的关系。 3 HCV基因检测方法 关于HCV的检测方法有很多，主要有分子学方法和血清学方法两种，其中分子学方法占主要方面，其有：①直接测序法；②限制性片段长度多态性分析法； ③特异性探针杂交法；④基因芯片；⑤遗传系统进化树分析方法；⑥型特异性引
丙型肝炎由丙型肝炎病毒（HCV）感染所致，主要由血液/体液传播。据世界卫生组织估计，全球有亿人感染HCV。在我国健康人群抗HCV阳性率为%~%，约3800万人。由于病毒生物学特点和宿主免疫功能等多方面因素，机体免疫往往难以有效清除病毒，致使约 50%~80%HCV感染者发展为慢性肝炎，其中20%~30%将发展成肝硬化。肝硬化患者中每年有1%~4%发展成为肝细胞癌症。 一、基因组特征： 丙型肝炎病毒呈球形颗粒，直径约为50nm，有一脂质包膜。基因组为单链正链RNA，链长月。整个基因组只有一个ORF，编码一条由3010~3033个氨基酸组成的聚蛋白前体，该蛋白前体在病毒蛋白酶和宿主信号肽酶作用下，裂解为病毒的结构蛋白和非结构蛋白。（如图所示） 在HCV基因组中，5’端有一个长度和序列非常稳定的非编码区（UTR），由341个核苷酸组成，形成4个二级结构域，为病毒复制和翻译所必需。此区是整个基因组中最保守的区域，所以常常选择该区域的基因序列作为基因扩增的靶序列，这样可以检测出目前已知的所有HCV基因型。3’端UTR包括3个结构域：靠近5’端为基因型特异的多变区（不同基因型之间的核苷酸序列差异较大；相同基因型之间核苷酸序列比较保守）；居中部分为一个多聚U区域（poly U），含有50~62个核苷酸，对病毒RNA复制至关重要，但不同基因型的HCV的多聚U区域长度不等；3’端尾部为高度保守的发夹样结构，称为X-tail。通过定点突变破坏这一结构会导致RNA病毒复制的显著降低，说明该区域对RNA病毒有效复制同样重要。5’端和3’端UTR之间是一个ORF并且分成9个区域：核心区→E1区→NS1/E2区→NS2区→NS3区→NS4a区→NS4b区→NS5a区→NS5b区。其中NS5b区域在不同型HCV中同源性较低，可作为HCV分型依据。 二、分类 急性丙型肝炎——成人急性丙型肝炎病情相对较轻，多数为急性无黄疸型肝炎，ALT升高为主，少数为急性黄疸型肝炎，黄疸为轻度或中度升高。可出现恶心，食欲下降，全身无力，尿黄眼黄等表现。单纯丙肝病毒感染极少引起肝功能衰竭。在自然状态下，其中仅有15%的患者能够自发清除HCV达到痊愈，在不进行抗病毒治疗干预的情况下，85%的患者则发
丙型肝炎（HC）简介 1974年，人们发现输血后肝炎并非由HAV和HBV感染所致，因此许多学者做了大量的研究，但直到1989年美国Chiron公司Choo等率采用分子生物学技术成功地将HCV cDNA克隆成功，才使HC研究取得突破性进展。HCV是第一个利用分子生物学技术发现的病毒。 一、HCV病毒分子结构 HCV为一单股、正链RNA病毒，其链长度为10000个核苷酸。该链可分为正5`末端、3`末端及位于两个末端之间的病毒编码开读框架（open reading frame, ORF）三部分。 链的5`末端，约有324到241核苷酸组成的区域，有时可形成小的末端发夹样的次级结构，含一个短的直接重复顺序。目前推测其在病毒复制过程中有重要的负调节作用。 3`末端由27－55个核苷酸组成，（不同的分离株，该区的核苷酸长度不一）。 在5`末端与3`末端之间，由9400年核苷酸组成一个大而连续的开读框架。编码3010或3011个氨基酸组成的一个大病毒多肽。从病毒编码框架的上游（5`端）到（3`端），编码不同蛋白质的基因依次为：核衣壳蛋的基因，包膜蛋的基因及非结构蛋的1~5基因。 5`末端里有高度的保守性，其在病毒的复制和保持病毒的性状方面起重要作用。3`末端在病毒的复制过程中可能也起一定的调节作用。单一的ORF称病毒多蛋白前体（Precursor polyprotein）这一大的病毒蛋白前体，但宿主基因和病毒基因编码的蛋白酸的一系列酶切修饰，形成不同大小和功能不一的病毒蛋白。这些病毒蛋白目前主要分两大类：（1）结构蛋白，位于5`末端，包括核心蛋白（C）、包膜蛋白（E1、E2/NS1），是参与组成病毒颗粒的蛋白质；（2）非结构蛋白，又称功能蛋白，包括NS2－NS5，是参与病毒复制和具有其他功能的蛋白质。HCV基因存在显著的变异，这一变异导致HCV不同的分离株间核苷酸序列和氨基酸序列存在不同程度的差别，以此将HCV分为若干个亚型。 应用HCV各型特异性CDNA探针，作印迹杂交分析，发现HCV基因型各地区不同。在美国主要为原型（即PT型Prot-otypt）占70%，而K1与K2型较少（10%），在日本K1型占77.7%，K2a占16.5%、K2b占5%，而PT型则甚少见。我国HCV基因型初步分析结果与日本相似，K1型占40.3%，K2a占20.9%，而K2bH占13.43%，K1型较多见，
丙肝病毒实验室检测进展 四川省双流县第二人民医院检验科杜慧 摘要1989年Choc等应用分子克隆技术获得HCV病毒基因克隆，并命名本病及其病毒为丙型肝炎（Hepatitis C）和丙型肝炎病毒（HCV）。HCV属黄病毒科，为单股正链RNA病毒。其主要通过血源传播，此外还可通过其他方式如母婴垂直传播、家庭日常接触和性传播等。欧美国家多为HCV-Ⅰ型感染，而亚洲国家以Ⅱ型为主，Ⅲ型次之。其传染源主要为急性临床型和无症状的亚临床病人、慢性病人和病毒携带者。人感染HCV后所产生的保护性免疫力很差，会再次感染，部分病人会导致肝硬化及肝细胞癌。故对HCV进行实验室早检测早治疗非常重要。 关键词丙型肝炎病毒实验室检测进展 实验室检测丙肝病毒的方法主要有抗-HCV抗体检测、HCV抗原检测、HCV-RNA 检测。 (一) 抗-HCV抗体检测 1. 酶联免疫吸附实验（ELISA） 检测原理：ELISA检测抗-HCV IgG系利用固定在固相载体（如普通酶标板、聚苯乙烯试管及小球、磁性微粒子等）上的HCV重组表达和/或人工合成多肽抗原，捕捉待测样品中的抗-HCV IgG，然后，通过加入酶（辣根过氧化物酶HRP、碱性磷酸酶ALP等）标记的抗-人IgG检测所捕捉到的特异性抗-HCV IgG。 1989 年美国Ch iron公司首先采用重组HCV C100- 3融合蛋白包被，建立了第一代HCV 抗体检测方法。因其特异性差、灵敏度低很快被第二代抗- HCV 试剂盒替代。第二代抗- HCV 试剂盒于1990年出现，它以HCV 基因组N S3 区的C33C和N S4 区的融合表达抗原(C200)再加上C 区的核心抗原C22- 3作为固相包被进行检测。目前实验室使用的是第三代HCV 试剂盒，在第二代的基础上, 又加入来自N S5 区的重组表达抗原，由于重组了病毒基因组的结构区和非结构区的多个编码抗原,提高了检测的灵敏度和特异性,缩短了检测 的“窗口期”，但是在使用中也要重视以下问题： 1．1样本应避免出现溶血：血红蛋白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性, 会干扰以HRP为标记酶的EL IS A法底物显色反应，引起OD 值的升高，从而可导致接近临界值的标本出现假阳性[1]。 1．2 要注意试剂盒的选取：EL IS A检测抗- HCV存在着明显的缺陷,主要表现为非特异性反应, 产生的假阳性较多。有文献报到对五家国产EIA试剂盒进行评价，其抗干扰能力良莠各半,参差不齐,假阳性率从0.37%～12.68 %不等。产生假阳性的原因有以下方面：1.2.1 高IgG血症：目前国内外的抗-HCV EIA试剂均采用间接酶联免疫检测原理，间接法的一个重要影响因素是血清中所含的高浓度的非特异性IgG对聚苯乙烯有较强的吸附力，非特异性IgG可吸附到固相载体上或包被的抗原上造成假阳性；1.2.2 类风湿因子的干扰：类风湿性关节炎患者血清或血浆中的类风湿因子为巨球蛋白IgM，可非特异性地吸附到固相载体
中国疗养医学2019年第28卷第2期Chin J Convalescent Med ，Feb.2019，Vol.28，No.2 Clinical Practice Guideline [J ].Annals of the American Tho-racic Society ，2017，14(3)：441-443. [11]Maury E ，Guglielminotti J ，Alzieu M ，et al.How to identify patients with no risk for postextubation stridor ?[J ].Journal of Critical Care ，2004，19(1)：23-28. [12]Kriner EJ ，Shafazand S ，Colice GL .The endotracheal tube cuff-leak test as a predictor for postextubation stridor [J ]. Respiratory Care ，2005，50(12)：1632-1638. [13]Jaber S ，Chanques G ，Matecki S ，et al.Post-extubation stridor in intensive care unit patients.Risk factors evaluation and importance of the cuff-leak test [J ].Intensive Care Med ，2003，9(1)：69-74. (收稿日期：2018-08-13) 文章编号：1005-619X (2019)02-0124-03 DOI 编码：10.13517/j .cnki .ccm .2019.02.005作者单位：475000河南省开封市中心医院 应用双抗原夹心法和间接法两种方法检测 丙型肝炎病毒抗体的结果比较 王俊芳 【摘要】目的比较应用双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法和间接ELISA 法两种方法检测丙型肝炎病毒 抗体(抗-HCV)的检查结果， 为临床血液样本抗-HCV 的筛查提供参考依据。方法收集2017年6月至2018年2月某院检测的1300份住院患者传染病丙肝筛查标本作为研究对象， 经荧光定量PCR 血液筛查，其中抗-HCV 阴性标本1221份，抗-HCV 阳性标本79份，所有血液样本均分别采用双抗原夹心ELISA 法和间接ELISA 法进行 检测，记录两种检测方法的结果，并与荧光定量PCR 血液筛查结果进行对照，计算两种检测方法的灵敏度、特异度、符合率等指标。结果双抗原夹心ELISA 法检测出抗-HCV 阳性标本1174份，其中真阳性1173份，假阳性1份。间接ELISA 法检测出抗-HCV 阳性标本1072份，其中真阳性1060份，假阳性12份。双抗原夹心ELISA 法检测抗-HCV 的灵敏度、特异度以及符合率分别为96.07%(1173/1221)、98.73%(78/79)、96.23%(1251/1300)，间接ELISA 法检测抗-HCV 的灵敏度、特异度以及符合率分别为86.81%(1060/1221)、84.81%(67/79)、86.69%(1127/1300)，双抗原夹心ELISA 法检测的灵敏度、特异度以及符合率均明显高于间接ELISA 法，差异均有统计学意义(＜0.05)。结论与间接ELISA 法比较，双抗原夹心ELISA 法检测抗-HCV 的灵敏度和特异性明显提高，能提高临床 检测的准确性，降低假阳性，减少血液的浪费， 可作为临床血液样本抗-HCV 筛查的首选方法。【关键词】丙肝病毒抗体；双抗原夹心法；酶联免疫吸附试验；灵敏度； 特异性丙型肝炎是临床常见的传染性疾病，是由丙 型肝炎病毒(HCV)感染引起的[1]。HCV 的传播途径主要是血液传播，能通过输血和血液制品进行传播，已成为世界性的传染病。数据统计，全球每年HCV 感染导致新发丙型肝炎的人数达到了300万～400万人[2-3]。急性丙型肝炎患者可能会进展成肝纤维化、肝癌，严重威胁人类健康[4]。为了控制HCV 的传播，丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)已成为血液筛查的重要检查项目之一[5]。酶联免疫吸附试验 (ELISA)法是血液抗-HCV 检测的主要方法， 其中又以间接ELISA 法应用最为广泛，但是间接ELISA 法检测由于会受到血清中非特异性IgG 等因素的干 扰，存在一定的假阳性概率， 影响检测准确性[6]。而双抗原夹心ELISA 法同时对包括IgG 、IgM 等在内的总抗体进行了检测，对抗体进行两次特异性反应，从而减少非特异性的IgG 的干扰。近年来双抗 原夹心ELISA 法在抗HBsAg 抗体、梅毒抗体、 抗HIV 等抗体的检测中均取得到了良好的应用效果[7-8]。本次研究收集2017年6月至2018年2月我院检测的 1300份住院患者传染病丙肝筛查标本作为研究 对象，分别采用双抗原夹心ELISA 法和间接ELISA 法进行检测，以比较两种ELISA 法检测抗-HCV 的结果，现将结果报告如下。1材料与方法 1.1样本来源收集2017年6月至2018年2月我院检测的1300份住院患者传染病丙肝筛查标本 作为研究对象，其中男692例，女608例，年龄21～ 65岁，平均年龄(43.5±3.7)岁。所有献血者标本经荧光定量PCR 血液筛查，其中检出抗-HCV 阴性标 本1221份， 抗-HCV 阳性标本79份。1.2设备与试剂采用山东艾德康自动加样系统、美国热电酶标仪。血筛间接ELISA 试剂盒和双抗原夹心ELISA 试剂盒均由北京万泰生物药业股份有限公司提供(批号分别为C20141228、CS20141001)，严格按照试剂盒内说明书操作且均在有效期内使用。 1.3方法先将收集的所有献血者标本进行离心，速度3000r/min ，时间10min ，离心完成后分离血清。然后分别用间接ELISA 法试剂盒和双抗原夹 心ELISA 试剂盒严格按照说明书操作进行检测， 记录两种检测方法的结果。 124··
怀疑自己是不是患上丙型肝炎，仅需要做三项检查（科普支持：湖南肝病医院https://www.doczj.com/doc/ec8930143.html,/） 你是否出现了暴瘦的现象，你是否感到身体不适，你是不是经常感到头痛，头晕眼花和脱水?丙肝主要经血液传播，并且更易慢性化，系丙型肝炎病毒(HCV)感染所引起的疾病，主要经血源性传播，比如输血或血制品、血透析、单采血浆还输血球、肾移植、静脉注射毒品、性传播、母婴传播等传染引起。 一般的丙肝表现比较轻，慢性丙肝可出现不同程度的乏力、头晕、食欲有所减退、厌油、尿黄、肝区不适、睡眠不佳、可有肝大和轻度触痛触痛，可有轻度脾大。部分慢性丙肝病例无明显症状和体征。严重时丙肝症状明显，如乏力、纳差、腹胀、尿黄、便溏等，常伴肝病面容、肝掌、痴、脾大，ALT和/或天门冬氨酸氨酶(AST)反复或持续升高，白蛋白降低或A/G 比值异常、丙种球蛋白明显升高。 丙肝病毒感染与乙肝病毒感染相比，更易慢性化。约40%～50%丙型肝炎病毒感染发展成为慢性肝炎，25%发展成为肝硬化，余为自限性经过。急性丙型肝炎发展成慢性者多为无黄疸型，ALT长期波动不降，血清抗-HCV持续高滴度阳性。因此，临床上应注意观察ALT及抗-HCV的变化。 怀疑自己是不是患上丙型肝炎，仅需要做三项实验室检查 1、血常规 急性肝炎初期白细胞总数正常或略高，一般不超过10×109/L，黄疸期白细胞总数正常或稍低，淋巴细胞相对增多，偶可见异型淋巴细胞。重型肝炎时白细胞可升高，红细胞下降，血红蛋白下降。肝炎、肝硬化伴脾功能亢进，可有血小板、红细胞、白细胞减少的“三少”现象。
2、尿常规 尿胆红素和尿胆原的检测是早期发现肝炎的简易有效方法，同时有助于黄疸的鉴别诊断。肝细胞性黄疸时两者均阳性，溶血性黄疸时以原为主，梗阻性黄疸以尿胆红素为主。深度黄疸或发热患者，尿中除胆红素阳性外，还可出现蛋白质、红、白细胞或管型。 3、肝功能检查 包括血清酶测定、血清蛋白、胆红素、凝血酶原活动度(小于40%是诊断重型肝炎的重要依据)。 如果你最近一段时间里，你感到你浑身没劲、吃饭想吐、腹痛腹胀、皮肤发黄、体重突然减轻等情况，那么就赶紧到医院做一下检查吧，湖南肝病医院根据国家卫生部要求，积极开展肝病普查活动，针对不同类型的肝病病人都能提供设备齐全的肝病检查设备和医疗服务环境，你通过网络咨询或电话咨询，就能立即获得免费检查的名额，这个机会就在眼前，请你把握住吧。【在线值班医生https://www.doczj.com/doc/ec8930143.html,/zixunyuyue/】 为了你的健康，为了家人的幸福，请关注健康，关爱自己！
丙型肝炎检测方法的研究进展 尹秀华 天津市宝坻区中医医院检验科 ３０１８００ 关键词 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）引起的传染病，主要通过血液传播。我国平均感染率为３．２％。北方稍高，约为４．６％，南方为２．６％～２．９％，感染人数估计有３ ７００万。受感染的母亲传播给婴儿的发生率为５％。丙肝是严重威胁人类健康的传染病之一，多数患者可以演变为慢性丙型肝炎，其中２０％左右可发展为肝硬化，肝硬化患者１０年内有大约３０％发展为终末期肝病，并且ＨＣＶ感染与原发肝癌有较密切关系。随着医学检测方法的不断进展，丙肝检测方法也有了很大的进展。本文对丙肝检测方法进行了综述。从胶体金法、ＥＬＩＳＡ法（丙肝抗体检测）、丙肝抗原检测和分子生物学的诊断几个方面进行阐述。目前临床对丙型肝炎的诊断仍是以临床症状结合抗－ＨＣＶ抗体、ＨＣＶ－ＲＮＡ等实验室指标为临床诊断依据。 关键词 ＣＶ 抗－ＨＣＶ 胶体金 ＨＣＶ－ＲＮＡ ＥＬＩＳＡ ＲＴ－ＰＣＲ 中图分类号：Ｒ５１２．６＋３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－７５８５（２０１３）０２－０１７１－０３ 丙型肝炎病毒是单股正链ＲＮＡ病毒，属黄病毒科丙型肝炎属。ＨＣＶ基因组含有一个开放读码框（ＯＲＦ），编码１０余种结构和非结构（ＮＳ）蛋白，膜蛋白分布于病毒表面，ＮＳ３蛋白是一种多功能蛋白，氨基端具有蛋白酶活性，羧基端具有螺旋酶／三磷酸核苷酶活性；ＮＳ５Ｂ蛋白是ＲＮＡ依赖的ＲＮＡ聚合酶，均为ＨＣＶ复制所必需，是抗病毒治疗的重要靶位［１］。丙型肝炎呈世界性分布。丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是丙型肝炎的病原体，其致病机制主要是通过病理性免疫应答导致肝细胞损伤，它还有诱发原发性肝癌的可能［２］。据世界卫生组织统计，全球丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的感染率约为３％，每年新发ＨＣＶ病例约３１５万例［３］，而高度慢性化是该病的最大特征［４］。因此，控制ＨＣＶ感染的形势十分严峻，而早发现、早诊断和早治疗是防控ＨＣＶ传染源、阻断传播途径最为有效的手段。目前临床对丙型肝炎的诊断仍是以临床症状结合抗－ＨＣＶ抗体、ＨＣＶ－ＲＮＡ等实验室指标为临床诊断依据。现将ＨＣＶ感染实验室诊断进展综述如下。 １ ＨＣＶ的胶体金法检测 胶体金法快速检测技术是近年来发展起来的一种新技术。从１９８９年诞生至今，已被广泛应用于免疫检测的各个领域，具有简便、快速、标本用量少、不需仪器设备等优点。它采用特异性抗原抗体反应及免疫层析技术。对于Ｓ／ＣＯ（标本的测定值与临界值之间的比值）值较低的抗ＨＣＶ血清标本特异性低而易造成阴性结果。但是其有效性仍然值得肯定，其特异性、敏感性基本均达到ＥＬＩＳＡ水平，与国内相关报道一致［５］。它在急诊及临床应用中具有较强的优势，已在生物医学领域，尤其是医学检验得到广泛应用，可作为筛查丙型肝炎病毒抗体的重要手段。金标法是一种操作简便、快捷、观察直观、省时的检测抗－ＨＣＶ的方法。虽然临床存在一定的假阴性和假阳性率，可能因环境因素和人为因素以及试 剂自身原因造成，但金标法仍可作为筛查丙型肝炎病毒抗体比较适合的方法推广应用，对于早期发现、预防和控制丙型肝炎，具有重要的临床价值和应用［６］。 ２ ＥＬＩＳＡ法检测丙肝抗体 目前我国最常使用的检测丙肝抗体的方法就是ＥＬＩＳＡ法。它具有简单、快速、方便的特点，但对灰区结果判读的可靠性通常较差。ＥＬＩＳＡ试剂为筛检试剂，存在一定数量的假阴性和假阳性结果，在ＨＣＶ流行率低的人群中，如无偿献血者抗－ＨＣＶＥＬＩＳＡ试剂的假阳性和假阴性问题都一直比较突出［７，８］。ＥＬＩＳＡ在检测过程中影响因素诸多如类风湿因子、高免疫球蛋白血症、标本中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的干扰、用于固相包被的ＨＣＶ基因工程抗原不纯等均可造成假阳性结果［９］。在检测过程中影响因素也很多如加样时间过长、检验速度过快、洗板等均可造成假阳性结果［１０］。目前国产和进口ＨＣＶ抗体检测ＥＬＩＳＡ试剂盒各批次试剂的国家生物制品质量检定结果比较其灵敏度、阴性符合率、阳性符合率结果相似，难分优劣，均达到国家标准。国产试剂实验操作相对简单，物流周期短，有效期长，价格合理，更适合于临床［１１］。丙肝抗体检测特异性和灵敏度高，是目前医院输血前／术前血检中检测丙肝的主要方法，在日常输血前／术前常规检测中，ＥＬＩＳＡ法检测丙肝抗体具有重要的临床价值。近年来酶联免疫反应加速仪的应用将替代常规温育法，酶联免疫反应加速仪具有加速抗原抗体反应的作用，在缩短工作时间的基础上，可以提高ＥＬＩＳＡ检测的灵敏度，有利于临床“灰区”标本结果的正确判读，对临床正确、快速诊断，避免漏诊有很大的积极意义［１２］。 ３ ＨＩＶ核心抗原检测 ＨＣＶ主要的抗原有Ｃ、Ｅ１、Ｅ２、ＮＳ２、ＮＳ３、Ｎｓ４、ＮＳ５等，其中核心抗原（ｃＡｇ）是由ＨＣＶ基因组中保守部位编码而来，该抗原的相关研究是近年 １ ７ １