维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）
一、目的要求：
（1）学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型。金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶
液中呈蓝色，在酸性溶液中呈
红色。抗坏血酸具有强还原性，
能使2,6-二氯酚靛酚还原褪
色，其反应如图：
当用2,6-二氯酚靛酚滴定
含有抗坏血酸的酸性溶液时，
滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原
成无色；当溶液中的抗坏血酸
全部被氧化成脱氢抗坏血酸
时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立
即使溶液呈现红色。因此用这
种染料滴定抗坏血酸至溶液呈
淡红色即为滴定终点，根据染
料消耗量即可计算出样品中还
原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：
1．实验材料：多种蔬果（西红柿、尖椒、绿豆芽等）
2．主要仪器：
（1）天平（2）研钵
（3）容量瓶（50mL）
（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）
（6）微量滴定管（3mL）（7）漏斗（8）脱脂纱布（9）滤纸
3．试剂：
（1）2％ HCl
（2）标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）25mg，溶于25ml 4％HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
（3）0.01M 2,6－二氯酚靛酚准确称0.25g氧化型2,6－二氯酚靛酚、0.21g碳酸氢钠溶于250ml热蒸馏水中，稀释至1000ml，充分振摇，装入棕色瓶内，置冰箱内过夜，临用前过滤，用标准Vc标定其浓度。置冰箱内冷藏（4℃）保存不得超过3天（最长约可保存一周）。
四、操作方法：
一、标准液滴定
取5ml标准抗坏血酸，用2,6－二氯酚靛酚溶液滴定，以生成为微红持续15秒不退为终点，另取5 2％HCl 作空白对照，滴定。计算2,6－二氯酚靛酚溶液的浓度，以每ml 2,6－二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的mg数来表示。
二、提取
1．水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。每一样品称取10g或20g，放入研钵中，加入2％HCl一起研磨成匀浆，提取液通过2层纱布过滤到50ml 容量瓶中，然后用2％HCl冲洗研钵及纱布3－4次，最后用2％HCl稀释至刻度线。
2．如果提取液含有色素，则倒入锥形瓶内加入1匙白陶土（高岭土），充分振荡5分钟，滤纸过滤，白陶土吸附生物样品中的色素，有利于终点的观察。
3．取三角锥形瓶两个，各加脱色的提取液5或10ml，用2,6－二氯酚靛酚溶液滴定，直至出现微红色30秒不退色为终点。记录两次滴定的ml 数，取平均值。滴定必须迅速不要超过2分钟，因为在实验条件下，一些非Vc的还原物质其还原作用较迟缓，快速滴定可以避免或减少它们的影响。
4．另取5或10ml 2％HCl 作空白对照，滴定。
5．按下式计算每100g样品中所含的Vc的毫克数。
维生素C含量（mg/100 g样品）＝（V A－V B）×C×T
×100 D×W
式中：V A——滴定样品提取液消耗染料平均值（mL） V B——滴定空白消耗燃料的平均值（ml）
C ——样品提取液定容体积（50mL）
T ——每mL染料所能氧化抗坏血酸的mg数
D ——滴定时吸取样品提取液体积（5或10mL）
W ——被检测样品的重量（5或10g）
【备注】
(1) 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物定容时泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇消泡。
(2) 样品的提取液制备和滴定过程，要避免阳光照射和与铜、铁器具接触，以免抗坏血酸被破坏。
(3) 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。
(4) 本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。2% 盐酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用.
(5) 干扰滴定因素有：
若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色，或加1ml氯仿，到达终点时，氯仿层呈现淡红色。
Fe2＋可还原二氯酚靛酚。对含有大量Fe2＋的样品可用8%乙酸溶液代替草酸溶液提取，此时Fe2＋不会很快与染料起作用。
样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，于15s内不消退为终点。
(6) 提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，留取上清液进行滴定。
（7）市售2,6-二氯酚靛酚质量不一，以标定0.4mg抗坏血酸消耗2mL左右的染料为宜，可根据标定结果调整染料溶液浓度。
五、思考题
1．该法测定抗坏血酸有何不足？
2．用2%盐酸提取样品的目的是什么？
参考答案
1．用本法测定抗坏血酸含量虽简便易行，可以一次测定大量的样品。但有下述缺点：第一，在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在，本法只能测定还原型抗坏血酸，不能测出具有同样生理功能的氧化型抗坏血酸和结合型抗坏血酸。第二，样品中的色素经常干扰对终点的判断，可预先用白陶土脱色，或加入2～3ml二氯乙烷，以二氯乙烷层变红为终点。第三，生物组织提取物和生物体液中常有其他还原性的物质，其中有些也可以在同样条件下使2,6－二氯酚靛酚还原脱色。
2．用2％盐酸制备样品提取液，可有效地抑制抗坏血酸氧化酶，以免抗坏血酸为氧化型而无法滴定。如果样品中有较多亚铁离子（Fe2＋）时，亦会使染料还原而影响测定，这时应改为8％乙酸制备样品提取液。
结果分析：( mg/100g )
西红柿：14.96，15.84，10.12；青椒：50.08，66.88，77.10，75.00；
苹果：0.7－43，大蒜：6.16，8.8，10.12；西瓜肉：8.36；
大葱：12-13；
土豆：2-13；
豆角：18.48；
茄瓤：7.48；
桃：4.84；
豆芽：10；
实验 维生素C 的提取及定量测定（碘量法） 一、实验目的 1.学习滴定分析法的基本原理 2.学习对蔬菜和食品中Vc 含量进行测定的方法 二、原理 “滴定”(titration)是将已知准确浓度的溶液--标准溶液通过滴定管滴加到待测溶液中的过程。待“滴定”进行到化学反应按计量关系完全作用为止，然后根据所用标准溶液的浓度和体积计算出待测物质含量的分析方法称为滴定分析法。 先使用铜盐与过量的KI 进行反应生成CuI2 CuI2 不稳定随即分解为Cu2I2 和游离的碘 生成的碘和维生素C 反应 ,直到溶液里的VC 被碘全部氧 化为止。 剩余的微量碘与淀粉指示剂生成蓝色。 在弱酸性条件下 ,可被碘氧化为脱氢抗坏血酸： 三. 试剂 ⑴ 0.01 mol/L 硫酸铜（CuSO4 5H2O ）:取0.25g 胆矾溶于 水中定容成100ml 溶液。 ⑵ 30% KI 溶液：称量30g 的KI ，然后加入70g 的水，搅拌均匀即可 ⑶ 1%可溶性淀粉指示剂 ⑷ 偏磷酸-醋酸溶液:称取偏磷酸15g ，溶于40mL 冰醋酸和450mL 蒸馏水所配成的混合液中。过滤。贮于冰箱内，此液保存不得超过10天。 四 、实验操作步骤 1. 制样：称取样品20g （分2-3次研磨），加少量石英砂及少量偏磷酸-醋酸匀浆，过滤后，加偏磷酸-醋酸定容到250ml ； 2. 吸取5ml 偏磷酸-醋酸, 加10mL 30%KI 溶液。再加10滴淀粉指示剂溶液。随即用标准硫酸铜溶液(0.01mol/L)进行滴定，边滴定边振摇，直至显示出蓝色（或红棕色），且稳定30s 不退，记录滴定量V0（此为空白对照，注意：会很快变色，要逐滴加入）； 3. 精确吸取5mL 样品溶液于100mL 三角瓶中，加10mL 30%KI 溶液。再加10滴淀粉指示剂。随即用标准硫酸铜溶液进行滴定。边滴定边振摇，直至显示出蓝色（或红棕色），且稳定30s 不退，记录滴定量V1 4 . 计算：Vc 分子量为176 L-抗坏血酸含量(mg/5ml)＝ V ×c V:（V1-V0）标准硫酸铜毫升数 c=0.88, 即1ml 0.01mM/ml 标准硫酸铜溶液相当于1/2x0.01 mmol 42242CuSO +4KI=CuI +2K SO 22222CuI =Cu I + I
实验一维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法 一、测定原理 2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HO —C═C—OH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。 2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此，当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。 还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。 当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。 在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。 反应式如下： 二、实验仪器与试剂 1.仪器 组织捣碎机；水果刀； 托盘天平；精密天平；称量纸；卷纸；台式离心机；电炉；吸耳球；玻璃棒； 蒸馏水，蒸馏水洗瓶；记号笔、标签纸、定性滤纸； 20cm镊子；5ml、10ml移液管、(微量)酸式滴定管、漏斗；漏斗架； 50ml、250ml、 500ml 、1000ml烧杯； 10ml 、500 ml、1000 ml量筒；100ml具塞量筒(或普通量筒)； 100mL、250mL棕色容量瓶；50ml或100ml三角烧瓶。 2.原料及试剂 本实验材料是，用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯度。
(1)2%草酸溶液：草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。 (2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀释至900ml。 (3)抗坏血酸标准溶液： 称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，备用。 (4)0.02% 2,6-二氯酚靛酚溶液： 称取碳酸氢钠52.2mg，溶解在200mL沸水中。再称取2,6-二氯酚靛酚49.2mg，溶于上述碳酸氢钠溶液中。冷后，过滤于250ml棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀备用。 临用前标定： 取2mL浓度为0.2mg/ml的抗坏血酸标准溶液于三角瓶中，加1%草酸5mL，摇匀，用配制的2,6-二氯酚靛酚染料溶液滴定至微红色，15s不褪色即为终点，并计算如下：每1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数=滴定度(T)=C×V1/V2。 式中：C----抗坏血酸的浓度(mg/ml)= 0.2 V1----抗坏血酸的量(ml)=2 V2----消耗染料溶液的量(ml)=31.84 得出T=0.2×2/31.84=1.26×10﹣2 三、实验步骤 1. 取200g新鲜橙子(去皮、去核)，置于1000ml烧杯内，称重。 2.将样品倒入组织捣碎机，加入等量2%草酸（W∶V），加盖旋紧，匀浆5min。 3. 取出匀浆物质。 4.称取30g匀浆物质于50ml小烧杯中编号，记录。 5. 用少量1%草酸将称取的匀浆物质倒入100ml容量瓶中，并用1%草酸反复洗涤烧杯（3次），其洗涤液一并移入，并用1%草酸定容到100ml。 6.加塞后将匀浆物质与1%草酸充分混合，静置10min。 7.取上述溶液过滤或离心。 8. 用移液管吸取10ml滤液置于三角烧瓶内，加入10ml 1%草酸（2个平行样品，编号）；用 移液管吸取10ml蒸馏水，加入10ml 1%草酸（空白对照）。 9. 加1ml氯仿，将2,6二氯酚靛酚染料滴定至终点（淡粉红色，15s不褪色或观察氯仿层 呈现淡红色。），记录染料消耗量。 10. 计算每100g样品中维生素C的含量（ml）及平行样品误差范围，公式如下： 维生素C含量（ml/100g）=[(V1-V2)×T/W]×100 式中：V1----滴定样品时耗去的染料溶液的量(ml) V2----滴定空白时耗去的染料溶液的量(ml) T ---- 1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数 W ----滴定时所取的滤液中，含样品的量(g) 四、实验结果、数据计算与分析 组别耗去的染料溶液的量(ml) 分析数据(ml)
2，6-二氯酚靛酚法测定Vc 的含量 一．实验目的掌握2，6-二氯酚靛酚法测定Vc 的含量 二．实验原理 Vc具有还原性，可以还原2，6-二氯酚靛酚（由玫瑰色至无色），所以可以用2，6-二氯酚靛酚滴定样品溶液中的Vc。 抗坏血酸+2，6-二氯酚靛酚→脱氢抗坏血酸+2，6-二氯酚靛酚 （还原型）（氧化型）玫瑰色（氧化型）（还原型）无色 滴定终点：出现浅玫瑰色时，表明样品液中的维生素c全部被氧化。 计算公式：维生素c毫克数/100g 样品=（Va-Vb）*s/w*100 Va:滴定样品中提取液所用的2，6-二氯酚靛酚的平均毫克数。 Vb:滴定空白对照所用的2，6-二氯酚靛酚的平均毫克数。 S:1ml2，6-二氯酚靛酚溶液相当于维生素c的毫克数。 W：10ml样品提取液中含样品的克数。 三．实验试剂与仪器： 菜花10%盐酸溶液偏磷酸-醋酸溶液2，6-二氯酚靛酚溶液 50ml容量瓶滤纸漏斗滴定管铁架台分析天平研钵 四．实验步骤： 1、30g菜花在研钵中研磨后，用滤纸过滤，滤液置50毫升容量瓶中，用偏磷酸溶液定容，至50毫升，备用。 2、量取10毫升滤液，用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至玫瑰色5s不退色为滴定终点（滴定过程不超过2分钟），记录2，6-二氯酚靛酚溶液用量。 3、空白取偏磷酸溶液10ml，滴定 4、侧S值。取5ml标准抗坏血酸溶液加入5ml偏磷酸-醋酸溶液，然后用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定，以生成微玫瑰红色持续15s不退为终点，计算2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度，以每毫升2，6-二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数（S）来表示。 5、计算结果。 五.数据处理: m=30.07g; V A=2.0mL; V B=0.18mL; w=6.014g; s=0.171mg/ml 维生素C毫克数/100g样品=(2.0-0.18)*0.171*100/6.014=5.17 (mg/100g样品) 六、注意事项 ●提取时，滤液过度浑浊会影响滴定终点的判断，纱布过滤时，要尽可能滤干净抽提 液，以免有残留的Vc 。 ●终点时玫瑰色要持续15s. ●滴定速度要尽可能快一点，以免杂质干扰反应。 碘量法测定维生素C的含量 一、实验目的掌握碘量法测定维生素c的含量的方法。 二、实验原理 2CuSO4+4KI-------2CuI2+2K2SO4 2CuI2 ---------Cu2I2+I2 抗坏血酸(还原型)+I2→2HI+抗坏血酸（氧化型） 终点：声誉的微量碘与淀粉指示剂生成蓝色。 三、仪器与试剂
实验三 维生素C 的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法） 一、原理 维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C ，当样品中的维生素C 被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。 二、 实验仪器 新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗 三、实验试剂 1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为0.1mg/ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。 2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。 3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。 4、0.01% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500 毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。 四、实验步骤 （一）提取 水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。 （二）滴定 1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度： 量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空白对照V 2，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升2，6-二氯酚靛酚所能氧化抗坏血酸的毫克数（K ）。 2、样品的测定： 取50ml 锥形瓶2个，分别加入滤液10ml （V 3），用已标定的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min ，记录两次滴定所得的结果，求平均值V 1。空白滴定方法同前（V 2）， （三）结果计算 根据实验数据计算出每100g 样品的维生素C 含量： 维生素C （mg/100g 样品）=123()V V K V W V -???×100 式中：V 1为滴定样品液所用去染料体积（ml ）; V 2为滴定空白所用去染料体积（ml ）; V 3为样品测定时所用滤液体积（10ml ）; V 为样品提取液的总体积（100ml ）； K 为1毫升染料能氧化抗坏血酸的质量（mg ）; W 为称取样品重量(g )。 五、思考题 1、要测得准确的维生素C 值，实验过程中应注意哪些操作步骤，为什么？ 2、在测定过程中，样品的草酸提取液为什么不能暴露在光下？ 3、试简述维生素C 的生理意义。
食品保鲜技术课程实验报告 专业： 年级： 姓名： 学号： 指导教师： 年月
维生素C含量的测定一、实验目的与原理 维生素C又称抗坏血酸，分子式C 6H 8 O 6 还原型维生素C是新鲜果蔬营养成分 的重要部分。 （一）二氯酚靛酚法：天然的抗坏血酸有还原型和脱氢型两种，还原型抗坏血酸分子结构中有烯醇（COH=COH）存在，故为一种极敏感的还原剂，它可失去 两个氢原子而氧化为脱氢型抗坏血酸。染料2,6—二氯酚靛酚钠（C 12H 6 O 2 NCl 2 Na） 作为氧化剂，可以氧化抗坏血酸而其体身亦被还原成无色的衍生物。2,6—二氯酚靛酚钠盐易溶于水，其碱性或中性水溶液呈蓝色，在酸性溶液中呈桃红色，这个变化用来鉴别滴定的终点。由于抗坏血酸在许多因素影响下都易发生变化，因此，取样品时应尽量减少操作时间，并避免与铜、铁等金属接触以防止氧化。 （二）碘量法：抗坏血酸具有还原性，可被I 2定量氧化，因而可用I 2 标准 溶液直接测定。通过消耗碘溶液的体积及其浓度，计算试样中维生素C的含量。化学反应式如下： KIO 3+5KI+3H 2 SO 4 =3K 2 SO 4 +3I 2 +3H 2 O 二、仪器和用品 1、实验材料 果蔬样品、维生素C标准溶液，1%草酸溶液、2,6-二氯靛酚溶液、10%KI溶液，淀粉液、0.001N标准 3 KIO溶液 2、仪器 滴定管、容量瓶、移液管、烧杯、研钵、漏斗、分析天平容量瓶，滴管 三、实验步骤 1.试剂制备与标定 ①标准抗坏血酸溶液：精确称取抗坏血酸20mg，用1％草酸溶解于100ml容量瓶中，用1%草酸定容。用移液管移取5ml到50ml容量瓶中，并加1％草酸定容。 ②2,6—二氯酚靛酚溶液配制及标定：称取2,6—二氯酚靛酚即2,6—二氯吲哚酚 纳50mg，溶于200ml热水中（热水中溶解52mgNaHCO 3 ），冷却后加水50ml，过滤
实验一维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法) 姓名：杨玉敏学号：130109132 组号：4组 实验日期：2016年/4月/7日实验地点：逸夫楼食品营养实验室7D302 一、测定原理 2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HO—C═C—OH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。 2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此，当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。 还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。 当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。 在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。 反应式如下： 二、实验仪器与试剂 1.仪器 (1)公用仪器 ①组织捣碎机；水果刀；②托盘天平；精密天平；称量纸；卷纸；③1000ml烧
杯；250ml烧杯；500ml、1000ml量筒；④20cm镊子；⑤蒸馏水，蒸馏水洗瓶； ⑥记号笔、标签纸、定性滤纸。 (2)分组及仪器：(12人一组，共4组) 每组仪器包括： ①100ml具塞量筒(或普通量筒)；100mL棕色容量瓶，250mL棕色容量瓶；②10ml 量筒；③5ml、10ml移液管； ④(微量)酸式滴定管；⑤50ml、500ml烧杯；⑥50ml或100ml三角烧瓶；⑦漏斗；漏斗架； ⑧台式离心机；⑨电炉；⑩吸耳球；玻璃棒。 2.原料及试剂 本实验材料是橙子、草酸、抗坏血酸、2,6-二氯酚靛酚、碳酸氢钠，用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯。 原料：橙子。 (1)2%草酸溶液:草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。 (2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀释至900ml。（以上全班统一配制） (3)抗坏血酸标准溶液： 精确称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，最好临用前配制，冰箱中保存。1mL 含0.2mg抗坏血酸。 (4)0.02%2,6-二氯酚靛酚溶液： 称取碳酸氢钠52mg，溶解在200mL沸水中。再称取2,6-二氯酚靛酚50mg，溶于上述碳酸氢钠溶液中。冷后，过滤于250ml棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。于冰箱中保存。。 临用前按下法标定： 取2mL浓度为0.2mg/ml的抗坏血酸标准溶液于三角瓶中，加1%草酸5mL，摇匀，用配制的2,6-二氯酚靛酚染料溶液滴定至微红色，15s不褪色即为终点，并计算如下： 每1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数=滴定度(T)=C×V 1/V 2 。 式中：C----抗坏血酸的浓度(mg/ml)；V 1----抗坏血酸的量(ml)；V 2 ----消 耗染料溶液的量(ml)。 三、实验步骤
水果中维生素C含量的测定 佛山三中高中部陈荣智招树满何衍健 指导老师丘晓琳 0 引言 维生素C的功效早已被人们广泛接受，从营养补充剂、维生素C糖果、到涂在脸上的含有维生素C的保养品，全都标榜着能让你更白皙、更健康。德国营养研究会建议，每人每天应摄取50~100mg的维生素C，才能刚好让血中的维生素C浓度达到饱和，如果摄取超过此范围，身体也无法多吸收，等于浪费。而30mg的维生素C是人体1天摄取维生素C的最少值，如果低于30mg，身体就会缺乏维生素C，使部份机能无法正常运作，长期下来，甚至出现坏血 症。当下，人们讲究“食疗”，倡导“天然”，认为从天然产物摄取维生素C 更安全、更能适应人体的需要。故，我们必须思考“吃什么，怎样吃”的问题。基于这点，本课题对普遍认为含维生素C较多的水果中的维生素C的含量以及对处理过的水果（如加热）中维生素C含量进行了测定，以求得从天然产物中摄取维生素C的较佳方案。 1 维生素C简介 1.1.1维生素C的结构及性质 维生素C （Vitamin C ，Ascorbic Acid，分子式： C6H8O6 ；分子量：176.12u；分子结构如左图）又叫抗坏血 酸，是一种水溶性维生素，水溶液呈酸性，在溶液中会氧化 分解。 1.1.2维生素C主要生理功能 1、促进骨胶原的生物合成。利于组织创伤口的更快愈合； 2、促进氨基酸中酪氨酸和色氨酸的代谢，延长肌体寿命。 3、改善铁、钙和叶酸的利用。 4、改善脂肪和类脂特别是胆固醇的代谢，预防心血管病。 5、促进牙齿和骨骼的生长，防止牙床出血。； 6、增强肌体对外界环境的抗应激能力和免疫力。 1.1.3维生素C的药物作用 近代研究表明VC对人体健康至关重要： 1．坏血病。血管壁的强度和VC有很大关系。微血管是所有血管中最细小的，管壁可能只有一个细胞的厚度，其强度、弹性是由负责连接细胞具有胶泥作用的胶原蛋白所决定。当体内VC不足，微血管容易破裂，血液流到邻近组
维生素C的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法 实验目的 1.学习定量维生素C的原理和方法 2.掌握微量滴定技术 实验原理 维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。它对物质代谢的调节具有重要的作用，近年来发现它还能增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。 维生素C是具有L-系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量都很丰富。 维生素C具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，维生素C易被氧化而破坏。在中性和微酸性环境中，维生素C能将染料2，6—二氯酚靛酚还原成无色的还原型的2，6—二氯酚靛酚，同时将维生素C氧化成脱氢维生素C。氧化型的2，6—二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈兰色。当用2，6—二氯酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶液时，在维生素C尚未全被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即被还原成无色。但当溶液中的维生素C刚好全部被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即时溶液呈红色。所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的维生素C刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时2，6—二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素C的含量。 其化学反应式如下： 仪器、试剂 （一）仪器：研钵、天平、容量瓶（100ml）、量筒、移液管、锥形瓶（50ml）、微量滴定管、漏斗 （二）材料、试剂
1、新鲜蔬菜或新鲜水果 2、1%草酸溶液 1g草酸溶于100ml蒸馏水中 3、2%草酸溶液 2g草酸溶于100ml蒸馏水中 4、标准维生素C溶液 准确称取20mg纯维生素C 粉状结晶于1%草酸溶液中，稀释至100ml，再取其中10ml稀释至100ml，即得0.02mg/ml的维生素C溶液。在使用前临时配制。 5、0.02%2，6—二氯酚靛酚溶液 溶解50mg2，6—二氯酚靛酚于约200ml含有52mg的NaHCO3的热水中，冷后稀释至250ml，过滤，装于棕色瓶中，放入冰箱中保存。使用时用维生素C 标准液标定其浓度。 实验步骤 （一）2，6—二氯酚靛酚溶液的标定： 取5ml维生素C标准液及5ml1%草酸溶液于50ml的锥形瓶中，用配制好的2，6—二氯酚靛酚溶液于微量滴定管中滴定至粉红色出现，并保持15s不褪色，即滴定终点，此时所用染料的体积相当于0.1mg维生素C，由此可求出每ml2，6—二氯酚靛酚溶液相当于维生素C的mg数。 （二）称取新鲜蔬菜或水果（要有大、中、小各部分的代表，洗净，除去不可食部分，切碎，混匀）约10克，于研钵中，加入等体积的2%草酸溶液研磨成浆状，得匀浆液。将匀浆液移入100ml容量瓶中，可用1%草酸溶液帮助转移，加入30%Zn（AC）2和15%K4Fe（CN）6溶液各5ml，脱色，然后用1%的草酸稀释至刻度，充分摇匀，静止几分钟后过滤。（弃去最初流出的几毫升溶液）（三）用移液管吸取滤液5或10ml于50ml的锥形瓶中，立即用标定过的2，6—二氯酚靛酚溶液滴定，直至溶液呈浅粉红色15s不褪色为止。记录所用染料的ml数。为了避免其它物质的干扰，滴定过程不得超过2min。（此步骤平行作2—3次） （一）计算 维生素C含量（mg/100g样品）=（VT/W）×100 式中：V为滴定样品所耗用的染料的平均ml数 T为1ml染料相当于维生素C的mg数 W为滴定时所用样品稀释液中含样品的g数 注意事项 1.整个滴定过程要迅速，防止还原型的维生素C被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应少于1ml或多于4ml，若滴定结果不在此范围，则必须增减样品量或将提取液稀释； 2.本实验必须在酸性条件下进行，在此条件下，干扰物反应进行很慢； 3.提取液中尚含有其它还原性的物质，均可与2，6—二氯酚靛酚反应，但反 应速度均较维生素C慢，因而，滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一滴一滴地加入，并要不断地摇动锥形瓶直至呈粉红色15s不褪色为终点； 4.若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，需脱色，可用白陶土、
姓名：郭沈杰年级专业：2012级生物科学同组者：蔡萍萍 学号：12050011012 实验六维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法） 一、实验目的 掌握2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。 二、实验原理 维生素C又称抗坏血酸（ascorbic acid）。在1928年，从牛的肾上腺皮质中提取出的结晶物质，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。 还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐。本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。 因此可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。若无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量呈正比。 三、实验仪器 1、新鲜水果 2、电子分析天平 3、吸管 4、容量瓶
5、滴定装置 6、锥形瓶 7、研钵 8、漏斗 四、实验试剂 1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水。 2、1%草酸溶液：草酸1g，溶于100ml蒸馏水。 3、标准维生素C液：准确称取10.0mg维生素C，溶于1%草酸溶液，并稀释至100ml， 贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配制。此溶液浓度0.1mg/ml. 4、0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液：称取500mg2，6-二氯靛酚溶于300ml含有104mg 碳酸氢钠的热水中，冷却，加蒸馏水并稀释至500ml，滤去不溶物，贮于棕色瓶中，冷藏。每次临用时，以标准抗坏血酸液标定。 五、实验步骤 （一）样品中抗坏血酸的提取： 1、将水果用水洗干净，用滤纸吸取表面水分。 2、称取5.0g，加2%草酸试剂10ml置研钵中研成浆状。 3、称取浆状物5.0g，倒入50ml容量瓶中，用2%草酸溶液稀释并定容，混匀，静止 10分钟，过滤（最初数毫升滤液弃去），滤液备用。 （二）滴定： 1、标准液的滴定：准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml于100ml锥形瓶中，加9ml1% 草酸溶液，用2，6-二氯靛酚滴定至淡红色。滴定终点要保持15秒钟。用所用2，6-
学院 XXX 专业 XXXX 果蔬中维生素含量的测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）实验设计题目 年级 XXXX 组员 XXXX 一、实验背景及目的: 维生素C 又称为抗坏血酸，常存在于新鲜的蔬菜和某些水果中，尤其是在 橙子、枣、 辣椒、苦瓜中含量丰富。是维持机体正常生理功能的重要维生素 之一。维生素C 抗坏血酸在食品工业中常用做抗氧化剂，维生素 C 可促进胶原 蛋白抗体，具有抗癌的作用；它能参与神经介质、激素的生物合成；能将胆 固醇转化为胆汁酸，使高胆固醇血症患者的胆固醇下降；能将 Fe 抖还原为Fe, 使其易于吸收，有利于血红蛋白的形成；还具有解毒的作用。橙子中防治坏 血病的主要物质为维生素C ,本文以橙子为检测对象，对其营养成分——维生素 C 的含量进行测定，正确了解营养价值。 目前国内测定维生素C 的常见方法有：DPPH 法、碘滴定法、紫外分光光 度计法、高效液相色谱法、苯肼比色法等。这些方法各有特点，但操作过程 复杂，较 慢，仪器昂贵。Vc 易被热、碱、氧和光破坏，根据实验室的条件, 本次实验采用2，6—二氯靛酚滴定法进行实验研究及分析测定。 参考国标法GB6195-1986直接测定橙子中维生素c 的含量，其方法简便、 快速、结果准确。 、实验部分 1、实验原理 染料2 ,6 一二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原 状态， 氧化态为深蓝色，还原态变为无色，二是受其介质的酸度影响，在碱 性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性染料标准溶液， 对含维生素C 的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色，当到达滴 定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中 还原型抗坏血酸的含量。
2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C 含量 一、目的要求 掌握法测定Vc 的方法。 二、实验原理 食品中Vc 包括还原型和氧化型两种类型，当食品放置时间长时或经过烹调处理后，其中有相当一部分维生素C 转化为氧化型，食品中的Vc 氧化酶也可以使还原型Vc 转化为氧化型，氧化型Vc 仍具有部分的活性，新鲜食物中的Vc 主要以还原型的形式存在，测定还原型Vc 可粗略了解食品中Vc 的浓度。 还原型Vc 能使染料2,6-二氯酚靛酚还原，而本身被氧化，在酸性条件下2,6-二氯酚靛酚酸呈红色，因此，当碱性氧化型的蓝色染料2,6-二氯酚靛酚滴定含Vc 的酸性溶液时，刚开始滴下染料立即被样品中的还原型Vc 还原成无色，随着样品溶液中的Vc 被氧化，再滴下的染料就渐渐使溶液变为粉红色，当样品从无色变成微红色且15s 不退色，表明样品中还原型Vc 全部被氧化，即此时已达到滴定终点。反应式见指导书。 三、试剂器材 ① 2% 草酸溶液 ，1% 草酸溶液 ② 0.05mg/ml 标准Vc 溶液 ③ 0.2mg/ml 2,6-二氯酚靛酚溶液（染料） 四、实验步骤 1、维生素C 提取液（1份/班） 称取凉瓜200g ， 切碎，加入2% 草酸200ml ，匀浆机30S （分两次进行， 防止过热） 2、标准Vc 溶液与空白的滴定 微量滴定管中装好0.2mg/ml 2,6-二氯酚靛酚溶液，准确吸取标准Vc 溶液1ml,置于三角瓶中，加入1% 草酸9ml ，滴定至微红色，15S 不退色，由所用染料体积计算1ml 染料相当于多少mg Vc 3、Vc 样品提取液的滴定 准确提取滤液，各取1ml ，加入1% 草酸溶液9ml ，置于三角瓶中滴定。 五、结果处理 100m m g 100/mg c 0 1????-=D C B A V V V V V ）（样品）含量（
实验五食品中维生素C含量测定 维生素C是人类营养中最重要维生素之一，缺少它是会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。今年来，发现它可以预防和治疗感冒，增强机体对肿瘤的抵抗力，并对化学致癌物具有阻断作用。 维生素C是己糖醛酸，属于水溶性维生素。主要分为还原性和脱氢型两种，它广泛分布在植物的组织中，新鲜的水果、蔬菜特别是枣、辣椒、柿子叶、苹果、猕猴桃、芹菜等果蔬中含量较多，果蔬中维生素C含量受果树种类、品种、栽培条件、成熟度和贮藏条件有关。因此，测定维生素C的含量，可以作为果蔬的营养品质和贮藏效果的评价之一。 一、目的要求 1.学习并掌握2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。 2.进一步掌握滴定法的基本操作技术。 3. 了解测定蔬菜和水果中维生素C含量意义。 二、实验原理 维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。 氧化型2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，还原型2,6-二氯酚靛酚无色。当用此染料滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc 未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。
三、操作步骤 1. 样液制备称取苹果和青椒各5g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，漏斗(+脱脂药棉)过滤，滤液转入25ml容量瓶后用2%草酸定容。 2. 标准液滴定准确吸取0.1mg/ml的标准抗坏血酸溶液各1.0ml，分置两个100ml锥形瓶中，加入1%草酸9.0ml，用微量滴定管以0.1%的2,6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s即为终点。由所用染料的体积计算出T值(平均值)，即1ml染料相当于多少mg的Vc。 3. 样液滴定准确吸取已制备的样品滤液各两份，每份10.0ml分别放入两个100ml锥形瓶内，滴定方法同前 计算 m=VT/m0×100 式中m：100g样品中含Vc的质量(mg) V：滴定时所用去染料体积(ml) T：每毫升染料能氧化Vc质量数(mg/ml) m0：10ml样液相当于含样品之质量数(g) 试剂和器材 试剂 1. 2%草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中。 2. 1%草酸溶液：溶1g草酸于100ml蒸馏水中。 3. 标准抗坏血酸溶液(0.1mg/ml)：准确称取50.0mg纯抗坏血酸，溶于1%草 酸溶液，并稀释至500ml。贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配置。 4. 1%HCl溶液。 5. 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液：溶500g 2,6-二氯酚靛酚于300ml含有104mg NaHCO3热水中，冷却后加水稀释至500ml，滤去不溶物，贮棕色瓶内， 冷藏(4℃约可保存一星期)。每次临用时以标准抗坏血酸液标定。 器材 1. 新鲜蔬菜(辣椒、青菜、西红柿等)、新鲜水果(橘子、柑子、橙、苹果等) 2. 吸管1.0ml、10.0ml 3. 容量瓶25ml, 100ml 4. 微量滴定管5ml 5. 天平 6. 研钵 7. 漏斗Φ8cm. 注意事项 1. 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。 2. 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2分钟。因为在本滴定条件下，一些非维生素C的还原性物质也可与2，6-二氯酚靛酚发生反应，影响结
维生素 C 的定 量测定 — 2 , 6- 二氯酚 靛酚滴 定法
维生素 C 的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法实验目的 1.学习定量维生素 C 的原理和方法 2.掌握微量滴定技术 实验原理 维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。它对物质代谢的调节具有重要的作用，近年来发现它还能增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。 维生素 C 是具有L-系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量都很丰富。 维生素 C 具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，维生素 C 易被氧化而破坏。在中性和微酸性环境中，维生素C 能将染料2，6—二氯酚靛酚还原成无色的还原型的2，6—二氯酚靛酚，同时将维生素 C 氧化成脱氢维生素C。氧化型的2，6—二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈兰色。当用2，6—二氯酚靛酚滴定含有维生素 C 的酸性溶液时，在维生素 C 尚未全被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即被还原成无色。但当溶液中的维生素 C 刚好全部被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即时溶液呈红色。所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的
维生素 C 刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时2，6—二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素 C 的含量。 其化学反应式如下：
抗坏血酸 仪器、试剂 （一）仪器：研钵、天平、容量瓶（ 100ml ）、量筒、移液管、锥形瓶 （50ml ）、微量滴定管、漏斗 （二）材料、试剂 1、新鲜蔬菜或新鲜水果 2、1%草酸溶液 1g 草酸溶于 100ml 蒸馏水中 3、2%草酸溶液 2g 草酸溶于 100ml 蒸馏水中 4、标准维生素 C 溶液 准确称取 20mg 纯维生素 C 粉状结晶于 1%草酸溶液中，稀释至 100ml ， 再取其中 10ml 稀释至 100ml ，即得 0.02mg/ml 的维生素 C 溶液。在使用前临时 配制。 5、0.02%2，6—二氯酚靛酚溶液 溶解 50mg2，6—二氯酚靛酚于约 200ml 含有 52mg 的 NaHCO 3的CCC O O H H H 2OH o o 脱氢抗坏血酸
维生素C 的鉴别试验、含量测定 041410122王磊 实验目的： 分析维生素c 性质，并分析其鉴别和含量测定方法。 药物简介： 生素C 即L-抗坏血酸：一般动物都可以利用体内葡萄糖代谢途径来合成维生素C 。但人类、猿猴、天竺鼠及一些鸟类、鱼类无法自行合成维生素C ，需通过食物来供应身体所需。因此，维生素C 是一种必需的营养素。维生素Ｃ极易受到热、光和氧的破坏。 一、维生素C 的性状检测 本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭，味酸；久置色渐变微黄；水溶液显酸性反应。本品在水中易溶，在乙醇中微溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。 熔点：本品的熔点为190~192℃，熔融时同时分解。 比旋度：取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml 中约含0.10g 的溶液，在25℃时，依法测定，比旋度为+20.5°至+21.5°。 二、维生素C 的鉴别试验 （1）方法 取本品0.2g ，加水10ml 溶解后，取溶液5ml ，加硝酸银试液0.5ml ，即生成金属银的黑色沉淀。 （2）方法 取本品0.2g ，加水10ml 溶解后，取溶液5ml ，加二氯靛酚钠试液1～2滴，试液的颜色即消失。 实验原理： 1.与硝酸银反应的原理 维生素C 与硝酸银发生氧化还原反应，产生黑色金属银沉淀。 3 3 2.与2,6-二氯靛酚反应的原理 2,6-二氯靛酚是一种染料，其氧化型在酸性介质中呈玫瑰红色，在碱性介质中显蓝色，与维生素C 反应后生成还原型无色的酚亚胺。反应式如下: 6 5 43 21 O OH HO O C OH H CH 2OH
O H Cl Cl N O O H Cl Cl H OH 三、维生素C 的杂质检查 杂质检查项目包括溶液的澄清度与颜色、炽灼残渣、铁、 铜、重金属、细菌内毒素。 1.溶液的澄清度与颜色 方法：取维生素C 供试品3.0g ，加水15ml ，振摇使溶解，溶液应澄清无色；如显色，将溶液经4号垂熔玻璃漏斗滤过，取滤液，照紫外-可见分光光度法，在420nm 的波长处测定吸光度，不得过0.03。 维生素C 及其制剂在贮存过程中易氧化变色，且颜色随贮存时间的延长而逐渐加深。《中国药典》规定采用测定吸光度的办法控制有色杂质的限量。 2.铁盐、铜盐的检查 方法：（1）铁的检查（原子分光光度法） 供试品溶液的配制：取本品5.0g 两份，分别置25ml 量瓶中，一份中加0.1mol/L 硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(B)； 对照溶液的配制：另一份中加标准铁溶液（精密称取硫酸铁铵863mg ，置1000ml 量瓶中，加1mol/L 硫酸溶液25ml ，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml ，置100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀）1.0ml ，加0.1mol/L 硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(A)。测定方法及判定标准：照原子吸收分光光度法，在248.3nm 的波长处分别测定，应符合规定[若对照溶液(A)和供试品溶液(B)测得吸光度分别为a 和b ，则要求b ﹤（a-b ）]。 （2）铜的检测方法与铁相同。 由于微量的铁盐和铜盐会加速维生素C 的氧化、分解，《中国药典》规定采用原子吸收分光光度法进行铁盐和铜盐的检查。 四、维生素C 的含量测定(碘量法) 1.方法 取本品约0.2g ，精密称定，加新沸过的冷水100ml 与稀醋酸10ml 使溶解，加淀
实验三 维生素C 的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法） 一、原理 维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C ，当样品中的维生素C 被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。 二、 实验仪器 新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗 三、实验试剂 1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。 2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。 3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。 4、% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。 四、实验步骤 （一）提取 水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。 （二）滴定 1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度： 量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空白对照V 2，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升2，6-二氯酚靛酚所能氧化抗坏血酸的毫克数（K ）。 2、样品的测定： 取50ml 锥形瓶2个，分别加入滤液10ml （V 3），用已标定的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min ，记录两次滴定所得的结果，求平均值V 1。空白滴定方法同前（V 2）， （三）结果计算 根据实验数据计算出每100g 样品的维生素C 含量： 维生素C （mg/100g 样品）=123()V V K V W V -???×100 式中：V 1为滴定样品液所用去染料体积（ml ）; V 2为滴定空白所用去染料体积（ml ）; V 3为样品测定时所用滤液体积（10ml ）; V 为样品提取液的总体积（100ml ）； K 为1毫升染料能氧化抗坏血酸的质量（mg ）; W 为称取样品重量(g )。 五、思考题 1、要测得准确的维生素C 值，实验过程中应注意哪些操作步骤，为什么 2、在测定过程中，样品的草酸提取液为什么不能暴露在光下 3、试简述维生素C 的生理意义。
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法) 一、目的要求: (1)学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。 (2)了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。 (3)熟悉微量滴定法的基本操作过程。 二、实验原理: 维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。 维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型。金属铜和酶(抗坏血酸氧化酶)可以催化维生素C氧化为脱氢型。2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)是一种染料，在碱性溶
液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图: 当用2,6-二氯酚靛酚滴定 含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色;当溶液中的抗坏血酸 全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立
即使溶液呈现红色。因此用这 种染料滴定抗坏血酸至溶液呈 淡红色即为滴定终点，根据染 料消耗量即可计算出样品中还 原型抗坏血酸的含量。 三、实验材料、主要仪器和试剂: 1(实验材料:多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等) 2(主要仪器: (1)天平 (2)研钵 1 (3)容量瓶(50mL) (7)漏斗 (4)刻度吸管(5mL，10mL) (8)脱脂纱布 (9)滤纸 (5)锥形瓶(100mL) (6)微量滴定管(3mL) 3(试剂: (1)2, HCl )标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)(2 25mg，溶于25ml 4,HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。 (3)0.01M 2,6,二氯酚靛酚准确称0.25g氧化型2,6,二氯酚靛酚、0.21g碳酸氢钠溶于250ml热蒸馏水中，稀释至1000ml，充分振摇，装入棕色瓶内，置冰箱内过夜，临用前过滤，用标准Vc标定其浓度。置冰箱内冷藏(4?)保存不得超过3天(最长约可保存一周)。 四、操作方法: