Vc含量测定_2,6-二氯靛酚滴定法实验十五抗坏血酸含量测定(2,6-二氯酚靛酚法)
一、目的
学习维生素C的生理功能和性质，掌握用2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
二、原理
维生素 C是一种水溶性维生素，是人类营养中最重要的维生素之一，人体缺乏维生素 C时会出现坏血病，因此它又被称为抗坏血酸。此外维生素 C还具有预防和治疗感冒以及抑制致癌物质产生的作用。
维生素C的分布很广，尤其在水果(如弥猴桃、橘子、柠檬、山植、袖子、草莓等)和蔬菜(觅菜、芹菜、青椒、菠菜、黄瓜、番茄等)中的含量更为丰富。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素 C在金属铜和抗坏血酸氧化酶存在下极易氧化，因此，在用铜制品做食品时，维生素 C易丢失。此外在碱性溶液中，维生素 C也易被破坏，而在酸性溶液中比较稳定。利用它具有的还原性质可测定其含量。还原型抗坏血酸能被染料2，6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型，该染料在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后变为无色。因此用 2，6-二氯酚靛酚滴定含有维生素 C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色，当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2，6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现淡红色。用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、仪器、试剂和材料
1(仪器
(1)天平
(2)组织捣碎机
(3)微量滴定管(5ml)
(4)容量瓶(50ml)
(5)刻度吸管(5ml，10ml)
(6)锥形瓶(100ml)
2(试剂
(1)l,草酸溶液:草酸1g溶于 100ml蒸馏水中
(2)2,草酸溶液:草酸2g溶于100ml蒸馏水中
(3)抗坏血酸标准溶液(0.1 mg,ml):精确称取10mg纯抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)用1,草酸溶液溶解并定容至100ml。此溶液应贮存于棕色瓶中，最好临用前配制。
(4)0(05, 2, 6-二氯酚靛酚溶液:称取 500mg 2, 6-二氯酚靛酚溶于300ml含104mg碳酸氢钠(A.R)的热水中，冷却后用蒸馏水稀释至1000ml，滤去不溶物，贮存于棕色瓶中，4?冷藏可稳定一周，临用前以标准抗坏血酸标定。 3(材料新鲜水果或蔬菜
四、操作步骤
1(提取抗坏血酸
取新鲜水果或蔬菜 50g，加入 50ml 2,草酸溶液，用组织捣碎机打成匀浆。过滤取得滤液，滤饼可用少量2,的草酸洗几次，合并滤液，记录滤液体积。 2(2, 6-二氯酚靛酚溶液的标定
准确吸取4.0 ml抗坏血酸标准液(含0.4g抗坏血酸)于100ml锥形瓶中，加16ml 1,草酸溶液，用2, 6-二氯酚靛酚滴定至淡红色(15秒内不褪色即为终点)。记录所用染料溶液的体积，计算出lml染料溶液所能氧化抗坏血酸的量。 3(样品滴定
准确吸取样品提取液两份，各20ml，分别放入两个100ml锥形瓶中，滴定方法同 2中的操作，另取 20ml 1,草酸作空白对照滴定。
五、结果处理
取两份样品滴定所耗用染料体积的平均值，代入下式计算100g样品中还原型抗坏血酸的含量:
抗坏血酸含量(mg,100g样品),(V,V)?V? M?100/V?W 123式中，V为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数; 1
V为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数; 2
V为样品提取液的总体积;
V为滴定时所取的样品提取液的毫升数; 3
M为lml染料所能氧化抗坏血酸的量(mg)(可由操作2计算得到);
w为待测样品的重量(g)。
六、注意事项
(1)用本法测定抗坏血酸含量虽简便易行，但有下述缺点:第一，本法只能测定还原型抗坏血酸，不能测出具有同样生理功能的氧化型抗坏血酸和结合型抗坏血酸。第二，样品中的色素经常干扰对终点的判断，虽可预先用白陶土脱色，或加入2,3 ml二氯乙烷，以二氯乙烷层变红为终点，但实际上仍难免产生误差。
(2)用2,草酸制备提取液，可有效地抑制抗坏血酸氧化酶，以免抗坏血酸变为氧化型而无法滴定，而1,的草酸无此作用。
2+ (3)如样品中有较多亚铁离子(Fe)时，也可使染料还原而影响测定，这
2+时应改用8,乙酸代替草酸制备样品提取液，此时Fe不会很快与染料起作用。
(4)如样品浆状物泡沫过多，可加几滴辛醇或丁醇消泡。
(5)市售的2, 6-二氯酚靛酚质量不一，以标定0(4mg抗坏血酸消耗2ml左右的染料为宜，可根据标定结果调整染料溶液浓度。
(6)样品提取制备和滴定过程中，要避免阳光照射和与铜、铁器具接触，以免破坏抗坏血酸。
(7)滴定过程宜迅速，一般不超过2min。样品滴定消耗染料1,4ml为宜，如超出此范围，应增加或减少样品提取液的用量。
(8)提取的浆状物如不易过滤，亦可进行离心收集上清液。
七、思考题
1(维生素C具有什么性质和生理功能,
2(为了在实验中得到准确的抗坏血酸含量应注意哪些问题,
参考文献
冯耀主编维生素趣谈。重庆:四川科学技术出版社，1999
李建伍等生物化学实验原理和方法。北京:北京大学出版社，2001
文树基主编基础生物化学实验指导。西安:陕西科学技术出版社，1994
Strong，FM and Koch，GH，Biochemistry，Laboratory Manual，WMC Brown Co Publishers，Iowa，USA，1974
实验一维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法 一、测定原理 2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HO —C═C—OH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。 2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此，当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。 还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。 当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。 在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。 反应式如下： 二、实验仪器与试剂 1.仪器 组织捣碎机；水果刀； 托盘天平；精密天平；称量纸；卷纸；台式离心机；电炉；吸耳球；玻璃棒； 蒸馏水，蒸馏水洗瓶；记号笔、标签纸、定性滤纸； 20cm镊子；5ml、10ml移液管、(微量)酸式滴定管、漏斗；漏斗架； 50ml、250ml、 500ml 、1000ml烧杯； 10ml 、500 ml、1000 ml量筒；100ml具塞量筒(或普通量筒)； 100mL、250mL棕色容量瓶；50ml或100ml三角烧瓶。 2.原料及试剂 本实验材料是，用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯度。
(1)2%草酸溶液：草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。 (2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀释至900ml。 (3)抗坏血酸标准溶液： 称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，备用。 (4)0.02% 2,6-二氯酚靛酚溶液： 称取碳酸氢钠52.2mg，溶解在200mL沸水中。再称取2,6-二氯酚靛酚49.2mg，溶于上述碳酸氢钠溶液中。冷后，过滤于250ml棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀备用。 临用前标定： 取2mL浓度为0.2mg/ml的抗坏血酸标准溶液于三角瓶中，加1%草酸5mL，摇匀，用配制的2,6-二氯酚靛酚染料溶液滴定至微红色，15s不褪色即为终点，并计算如下：每1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数=滴定度(T)=C×V1/V2。 式中：C----抗坏血酸的浓度(mg/ml)= 0.2 V1----抗坏血酸的量(ml)=2 V2----消耗染料溶液的量(ml)=31.84 得出T=0.2×2/31.84=1.26×10﹣2 三、实验步骤 1. 取200g新鲜橙子(去皮、去核)，置于1000ml烧杯内，称重。 2.将样品倒入组织捣碎机，加入等量2%草酸（W∶V），加盖旋紧，匀浆5min。 3. 取出匀浆物质。 4.称取30g匀浆物质于50ml小烧杯中编号，记录。 5. 用少量1%草酸将称取的匀浆物质倒入100ml容量瓶中，并用1%草酸反复洗涤烧杯（3次），其洗涤液一并移入，并用1%草酸定容到100ml。 6.加塞后将匀浆物质与1%草酸充分混合，静置10min。 7.取上述溶液过滤或离心。 8. 用移液管吸取10ml滤液置于三角烧瓶内，加入10ml 1%草酸（2个平行样品，编号）；用 移液管吸取10ml蒸馏水，加入10ml 1%草酸（空白对照）。 9. 加1ml氯仿，将2,6二氯酚靛酚染料滴定至终点（淡粉红色，15s不褪色或观察氯仿层 呈现淡红色。），记录染料消耗量。 10. 计算每100g样品中维生素C的含量（ml）及平行样品误差范围，公式如下： 维生素C含量（ml/100g）=[(V1-V2)×T/W]×100 式中：V1----滴定样品时耗去的染料溶液的量(ml) V2----滴定空白时耗去的染料溶液的量(ml) T ---- 1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数 W ----滴定时所取的滤液中，含样品的量(g) 四、实验结果、数据计算与分析 组别耗去的染料溶液的量(ml) 分析数据(ml)
2，6-二氯酚靛酚法测定Vc 的含量 一．实验目的掌握2，6-二氯酚靛酚法测定Vc 的含量 二．实验原理 Vc具有还原性，可以还原2，6-二氯酚靛酚（由玫瑰色至无色），所以可以用2，6-二氯酚靛酚滴定样品溶液中的Vc。 抗坏血酸+2，6-二氯酚靛酚→脱氢抗坏血酸+2，6-二氯酚靛酚 （还原型）（氧化型）玫瑰色（氧化型）（还原型）无色 滴定终点：出现浅玫瑰色时，表明样品液中的维生素c全部被氧化。 计算公式：维生素c毫克数/100g 样品=（Va-Vb）*s/w*100 Va:滴定样品中提取液所用的2，6-二氯酚靛酚的平均毫克数。 Vb:滴定空白对照所用的2，6-二氯酚靛酚的平均毫克数。 S:1ml2，6-二氯酚靛酚溶液相当于维生素c的毫克数。 W：10ml样品提取液中含样品的克数。 三．实验试剂与仪器： 菜花10%盐酸溶液偏磷酸-醋酸溶液2，6-二氯酚靛酚溶液 50ml容量瓶滤纸漏斗滴定管铁架台分析天平研钵 四．实验步骤： 1、30g菜花在研钵中研磨后，用滤纸过滤，滤液置50毫升容量瓶中，用偏磷酸溶液定容，至50毫升，备用。 2、量取10毫升滤液，用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至玫瑰色5s不退色为滴定终点（滴定过程不超过2分钟），记录2，6-二氯酚靛酚溶液用量。 3、空白取偏磷酸溶液10ml，滴定 4、侧S值。取5ml标准抗坏血酸溶液加入5ml偏磷酸-醋酸溶液，然后用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定，以生成微玫瑰红色持续15s不退为终点，计算2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度，以每毫升2，6-二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数（S）来表示。 5、计算结果。 五.数据处理: m=30.07g; V A=2.0mL; V B=0.18mL; w=6.014g; s=0.171mg/ml 维生素C毫克数/100g样品=(2.0-0.18)*0.171*100/6.014=5.17 (mg/100g样品) 六、注意事项 ●提取时，滤液过度浑浊会影响滴定终点的判断，纱布过滤时，要尽可能滤干净抽提 液，以免有残留的Vc 。 ●终点时玫瑰色要持续15s. ●滴定速度要尽可能快一点，以免杂质干扰反应。 碘量法测定维生素C的含量 一、实验目的掌握碘量法测定维生素c的含量的方法。 二、实验原理 2CuSO4+4KI-------2CuI2+2K2SO4 2CuI2 ---------Cu2I2+I2 抗坏血酸(还原型)+I2→2HI+抗坏血酸（氧化型） 终点：声誉的微量碘与淀粉指示剂生成蓝色。 三、仪器与试剂
实验三 维生素C 的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法） 一、原理 维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C ，当样品中的维生素C 被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。 二、 实验仪器 新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗 三、实验试剂 1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为0.1mg/ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。 2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。 3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。 4、0.01% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500 毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。 四、实验步骤 （一）提取 水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。 （二）滴定 1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度： 量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空白对照V 2，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升2，6-二氯酚靛酚所能氧化抗坏血酸的毫克数（K ）。 2、样品的测定： 取50ml 锥形瓶2个，分别加入滤液10ml （V 3），用已标定的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min ，记录两次滴定所得的结果，求平均值V 1。空白滴定方法同前（V 2）， （三）结果计算 根据实验数据计算出每100g 样品的维生素C 含量： 维生素C （mg/100g 样品）=123()V V K V W V -???×100 式中：V 1为滴定样品液所用去染料体积（ml ）; V 2为滴定空白所用去染料体积（ml ）; V 3为样品测定时所用滤液体积（10ml ）; V 为样品提取液的总体积（100ml ）； K 为1毫升染料能氧化抗坏血酸的质量（mg ）; W 为称取样品重量(g )。 五、思考题 1、要测得准确的维生素C 值，实验过程中应注意哪些操作步骤，为什么？ 2、在测定过程中，样品的草酸提取液为什么不能暴露在光下？ 3、试简述维生素C 的生理意义。
青岛湾环境质量现状与生物生态调查评价方案 一、调查意义 综合运用《环境监测》课程所学知识与方法，对青岛市海湾生态系统进行野外观测，阐明海湾水质状况与生态系统的结构功能并对海湾环境与生态现状做出评价。 二、相关资料搜集 1.地质与生物分布资料 青岛湾栈桥附近属岩石海滩，潮间带各个潮带之间分界明显。高潮带生物以藤壶、滨螺为主，短滨螺个体较小、分布广泛；藤壶为高潮带优势种，密集分布于岩石上部，有的地方覆盖率高达100%。中潮带生物附着于岩石上，以牡蛎（褶牡蛎）、笠贝、贻贝为主，也有少量滨螺分布。牡蛎为中潮带优势种，有的地方覆盖率达100%。笠贝个体较小，附着在岩石上或牡蛎壳上。低潮带生物种类丰富，多种藻类和动物分布在岩石低洼处及水石临界处。鼠尾藻低潮带为优势种，广泛分布。叉枝藻、角叉藻、酸藻等也有分布。动物有朝鲜花冠小月螺、石鳖、贻贝等。 2..历年的水质资料 2007年，全省近岸海域水质以一、二类海水为主。其中一类海水测点占27.0％，二类海水测点占58.0％，三类、四类海水测点分别占10.0％和2.0％，劣四类海水测点占3.0％。全省近岸海域水质功能区达标率为83.7％，海水中主要污染物为无机氮、化学需氧量、石油类和活性磷酸盐。与2006年相比，全省近岸海域水质基本持平。 三、工作思路 污染源调查与评价 (1）采样 a.两个排污口取样，容积法、浮标法测流量。 b.以排污口为放射中心，按扇形布设。 水质站位：与排污口距离由近到远取6组。 沉积物质量站位：从水质站位中选取3组。 海洋生物站位：从沉积物质量站位中选取3组。 c.同时，在附近未受污染海域设2个对照站位。 （2）检测项目 特征污染物； 水质：水温、盐度、pH、SS、DO、COD（碱性高锰酸钾法）、 BOD（碘量瓶法）、氨氮（靛酚蓝分光光度法）、硝酸盐（锌镉还原法）、亚硝酸盐（盐酸萘乙二胺分光光度法）、活性磷酸盐（磷钼蓝法）海洋生物：底栖生物、潮间带生物； 沉积物质量：沉积物类型、石油类（荧光分光光度法）、重金属（原子吸收分光光度法）等。 （3）污染源评价 a.计算各污染物日排放量； b.应用等标污染指数法，确定主要污染物； c.根据相关标准确定水质、沉积物质量、生物体污染物残留量的超标情况及类别；
水杨酸-次氯酸盐分光光度法测定氨氮氨氮的测定方法：通常有纳氏试剂比色法、水杨酸-次氯酸盐，比色法和电极法。氨氮含量较高时，可采用蒸馏-酸滴定法。纳氏试剂比色法具有操作简便、灵敏等特点，但钙、镁、铁等金属离子、硫化物、醛、酮类，以及水中色度和混浊等干扰测定，需要相应的预处理。水杨酸-次氯酸盐法具灵敏、稳定等优点，操作简便、实验室污染少等优点而被广泛应用。 1、测定原理 在碱性介质（pH =11.6）中，亚硝基铁氰化钠[Na 2(Fe(CN) 6 )NO]·2H 2 O存在下， 水中的氨、铵离子与水杨酸盐和次氯酸离子反应生成蓝色化合物，在波长697nm 具最大吸收，用分光光度计测量吸光度。 这类反应称为Berthelot反应。这类反应的机理比较复杂，是个分步进行的反应： (1)第一步是氧与次氯酸盐反应生成氯胺。NH 3+HOCl←→NH 2 Cl+H 2 O (2)第二步氯胺与水杨酸C 6H 4 (OH)COOH反应形成一个中间产物：5氨基水杨酸。 (3)第三步是氨基水杨酸转变为醌亚胺 (4)最后是卤代醌亚胺与水杨酸缩合生成靛酚蓝。 pH对每一步反应几乎都有本质上的影响。最佳的pH值不仅随酚类化合物而不同，而且随催化剂和掩蔽剂的不同而变化。此外，pH还影响着发色速度、显色产物的稳定性以及最大吸收波长的位置。因此控制反应的pH值是重要的。
2、本标准适用于地下水、地表水、生活污水和工业废水中氨氮的测定。 当取样体积为8.0mL，使用10mm比色皿时，检出限为0.01mg/L，测定下限为0.04mg/L，测定上限为1.0mg/L（均以N计）。 3、干扰及消除 氯铵在此条件下均被定量地测定。钙、镁等阳离子的干扰，可加酒石酸钾钠掩蔽。如果水样的颜色过深、含盐量过多，酒石酸钾盐对水样中的金属离子掩蔽能力不够，或水样中存在高浓度的钙、镁和氯化物时，需要预蒸馏。 (一)水样的预处理 1.1 样品采集与保存 水样采集在聚乙烯瓶或玻璃瓶内，要尽快分析。如需保存，应加硫酸使水样酸化至pH<2，2℃～5℃下可保存7天。 1.2 水样的预处理 水样带色或浑浊以及含其他一些干扰物质，影响氨氮的测定。为此，在分析时需作适当的预处理。对较清洁的水，可采用絮凝沉淀法；对污染严重的水或工业废水，则用蒸馏消除干扰。 絮凝沉淀法 加适量的硫酸锌于水样中，并加氢氧化钠使呈碱性，在pH＞10.5时，生成氢氧化锌絮状沉淀，再经过滤除颜色和浑浊等。 1.3. 仪器与试剂： 100 ml具塞量筒或比色管。 (1)10％硫酸锌溶液：称取10g硫酸锌溶于水，稀释至100 ml。 (2)25％氢氧化钠溶液：称取25g氢氧化钠溶于水，稀释至100ml，贮于聚乙烯 瓶中。 (3)硫酸， =1.84。 (4)中速滤纸 (5)漏斗 1.4.絮凝沉淀步骤：
第19卷,第5期光 谱 实 验 室 V o l .19,N o .52002年9月 Ch inese J ou rnal of S p ectroscop y L aboratory Sep te m ber ,2002 靛酚蓝光度法测定海水中的氨型氮 ①联系人,电话:(0633)8786723(宅);E 2m ail :analysis w f @https://www.doczj.com/doc/815144003.html, 作者简介:王锋(1964—),男,山东省日照市人,日照职业技术学院讲师,从事分析化学教学与研究工作。收稿日期:2002202202 王 锋① 李玉环 (日照职业技术学院水产系 山东省日照市新市区烟台路南首 276826) 摘 要 研究了在碱性介质中,以丙酮为催化剂,氨氮与苯酚及次氯酸钠反应生成靛酚蓝的条件,靛酚蓝的最大吸收波长Κm ax =625nm ,Ε=119×104L ?mo l -1?c m -1,氨型氮含量在0—3Λg mL 范围内符合比耳定律,反应体系的灵敏度高,稳定性好,用于海水中痕量氨型氮的测定,结果令人满意。 关键词 靛酚蓝,光度法,海水,氨型氮。 中图分类号:O 657.32 文献标识码:B 文章编号:100428138(2002)0520631203 1 前言 氮的化合物是海洋生物所必须的重要的营养物质[1],其中氨型氮含量的高低,对海洋生物正常的生长、发育、繁殖具有重要意义。对于氨型氮的检测,比较经典的方法是奈氏试剂法[2],但加入奈氏试剂后,硫化物易使水体变浑浊,影响检测的灵敏度。另有离子色谱法[3,4]、毛细管电泳法[5]、离子选择性电极(ISE )[6]、靛酚蓝光度法[7]等。本文对靛酚蓝光度法[8,9]测定海水中的氨型氮进行了研究,并将分析结果应用于实际海水养殖业,收到良好的效果。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 721型分光光度计(上海第三分析仪器厂);754型分光光度计(上海第三分析仪器厂);Z D 22型 自动电位滴定仪(上海分析仪器厂);恒温磁力搅拌器;501超级恒温水浴锅。 5%ED TA 溶液; 酚钠溶液(126g L ):称取3115g 结晶苯酚溶解在5mL 异丙醇和10mL 丙酮中,并用异丙醇稀 释到50mL ,然后移取20mL 苯酚溶液与20mL 27%N a OH 溶液混合,用无氨蒸馏水定容至100mL ,装在有色瓶中于暗处保存; 次氯酸钠(N aC l O )贮备液(1%):量取40mL 无铵去离子水,加入10mL 5%的商品漂白液,用盐酸调pH 值至615—710;硫酸锰溶液(0.45g L ):准确称取50m g M nSO 4?H 2O 于适当蒸馏水中,并定容至100mL ;氨型氮贮备液(1m g mL ):准确称取31819g N H 4C l (预先在100℃下烘干2h )溶于适量无铵去离子水中,移入1000mL 的容量瓶中,并定容至刻度,配成 1m g mL 的氨型氮贮备液;
实验一维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法) 姓名：杨玉敏学号：130109132 组号：4组 实验日期：2016年/4月/7日实验地点：逸夫楼食品营养实验室7D302 一、测定原理 2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HO—C═C—OH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。 2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此，当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。 还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。 当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。 在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。 反应式如下： 二、实验仪器与试剂 1.仪器 (1)公用仪器 ①组织捣碎机；水果刀；②托盘天平；精密天平；称量纸；卷纸；③1000ml烧
杯；250ml烧杯；500ml、1000ml量筒；④20cm镊子；⑤蒸馏水，蒸馏水洗瓶； ⑥记号笔、标签纸、定性滤纸。 (2)分组及仪器：(12人一组，共4组) 每组仪器包括： ①100ml具塞量筒(或普通量筒)；100mL棕色容量瓶，250mL棕色容量瓶；②10ml 量筒；③5ml、10ml移液管； ④(微量)酸式滴定管；⑤50ml、500ml烧杯；⑥50ml或100ml三角烧瓶；⑦漏斗；漏斗架； ⑧台式离心机；⑨电炉；⑩吸耳球；玻璃棒。 2.原料及试剂 本实验材料是橙子、草酸、抗坏血酸、2,6-二氯酚靛酚、碳酸氢钠，用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯。 原料：橙子。 (1)2%草酸溶液:草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。 (2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀释至900ml。（以上全班统一配制） (3)抗坏血酸标准溶液： 精确称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，最好临用前配制，冰箱中保存。1mL 含0.2mg抗坏血酸。 (4)0.02%2,6-二氯酚靛酚溶液： 称取碳酸氢钠52mg，溶解在200mL沸水中。再称取2,6-二氯酚靛酚50mg，溶于上述碳酸氢钠溶液中。冷后，过滤于250ml棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。于冰箱中保存。。 临用前按下法标定： 取2mL浓度为0.2mg/ml的抗坏血酸标准溶液于三角瓶中，加1%草酸5mL，摇匀，用配制的2,6-二氯酚靛酚染料溶液滴定至微红色，15s不褪色即为终点，并计算如下： 每1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数=滴定度(T)=C×V 1/V 2 。 式中：C----抗坏血酸的浓度(mg/ml)；V 1----抗坏血酸的量(ml)；V 2 ----消 耗染料溶液的量(ml)。 三、实验步骤
水中氨氮的测定方法及结果分析研究 【摘要】本文通过对目前一些关于水中氨氮的测定方法进行讨论，并且对其结果进行相应的分析，综合得出水中氨氮的测定方法，给相关的从业人员一些参考。 【关键词】水中氨氮含量；测定方法；结果分析 水中氨氮指的是在水中以铵离子（NH+）或者是游离的氨（NH3）等形式存在的氨。这些水中的离子以化合物的形式存在于水中，其含量可以作为测定相关水体受到有关含氮有机物污染的重要指标。同时，当氨氮的含量比较高的时候，就会使水体中的生物如鱼类中毒。而且，此时对人体也会有或多或少的危害。对于水中氨氮的来源，主要是：（1）水中相关有机物的分解作用；（2）化工厂中的含氮废水排放；（3）农田中含氮化肥的流失。此外，水体之中的下硝酸盐类，在无氧的情况之下，也可以转化成氨氮化合物。水体中氨氮含量对于人类的生存有着非常大的影响。对于水中各种氨氮化合物的含量测定，对于评价水体的受污染程度以及水体的自我净化能力的评定有着非常积极的作用。下面简要地介绍几种测定氨氮的方法，同时对其进行相应的分析，从而得出一些结论。 1.电化学分析法 常用的电化学分析法有：吹脱电导法；氨气敏电极法；离子选择法；以下就这三种方法分别论述。 1.1吹脱电导法 在90摄氏度的温度之下，将水中的铵根离子变成游离的氨分子（即氨气）。在这之后，将水中的氨气使用硫酸吸收。由于洗手液的电导率的变化量和一定浓度范围之中氨氮的吹出量的多少成正比的关系，由于硫酸的吸收作用比较好，因此该方法的准确度以及精确度都比较好，同时其最低检出的浓度为0.1mg/L，因此比较适合对于含氨氮浓度比较低的水体中进行对氨氮浓度的测定。早前，已经有人通过此方法完成了对于氨氮在线自动分析仪的研制，其误差小，准确度高，实现了仪器的自动化检测。 1.2氨气敏电极法 氨气敏电极法的原理就是设置一个“化学电池”，其中一级为氨气敏电极构成的复合电极，以银-氯化银构成的参比电极，以PH玻璃电极作为指示的电极。将复合电极放置到程又0.1mg/L的氯化铵的塑料管之中，同时管的底部有只有按其能够通过的气敏膜。接着改变水中的PH值，使得水中的铵根离子变成氨气，这些氨气进入盛有液体的杆子中，和水发生生成铵根离子和氢氧根的反应。从而使管内液体PH值发生了变化，最后使得PH玻璃电极中的电位发生变化。通过其电位值的变化量可以间接得出水中所含氨氮的含量。对于这种方法，比较适合
维生素C的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法 实验目的 1.学习定量维生素C的原理和方法 2.掌握微量滴定技术 实验原理 维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。它对物质代谢的调节具有重要的作用，近年来发现它还能增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。 维生素C是具有L-系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量都很丰富。 维生素C具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，维生素C易被氧化而破坏。在中性和微酸性环境中，维生素C能将染料2，6—二氯酚靛酚还原成无色的还原型的2，6—二氯酚靛酚，同时将维生素C氧化成脱氢维生素C。氧化型的2，6—二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈兰色。当用2，6—二氯酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶液时，在维生素C尚未全被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即被还原成无色。但当溶液中的维生素C刚好全部被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即时溶液呈红色。所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的维生素C刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时2，6—二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素C的含量。 其化学反应式如下： 仪器、试剂 （一）仪器：研钵、天平、容量瓶（100ml）、量筒、移液管、锥形瓶（50ml）、微量滴定管、漏斗 （二）材料、试剂
1、新鲜蔬菜或新鲜水果 2、1%草酸溶液 1g草酸溶于100ml蒸馏水中 3、2%草酸溶液 2g草酸溶于100ml蒸馏水中 4、标准维生素C溶液 准确称取20mg纯维生素C 粉状结晶于1%草酸溶液中，稀释至100ml，再取其中10ml稀释至100ml，即得0.02mg/ml的维生素C溶液。在使用前临时配制。 5、0.02%2，6—二氯酚靛酚溶液 溶解50mg2，6—二氯酚靛酚于约200ml含有52mg的NaHCO3的热水中，冷后稀释至250ml，过滤，装于棕色瓶中，放入冰箱中保存。使用时用维生素C 标准液标定其浓度。 实验步骤 （一）2，6—二氯酚靛酚溶液的标定： 取5ml维生素C标准液及5ml1%草酸溶液于50ml的锥形瓶中，用配制好的2，6—二氯酚靛酚溶液于微量滴定管中滴定至粉红色出现，并保持15s不褪色，即滴定终点，此时所用染料的体积相当于0.1mg维生素C，由此可求出每ml2，6—二氯酚靛酚溶液相当于维生素C的mg数。 （二）称取新鲜蔬菜或水果（要有大、中、小各部分的代表，洗净，除去不可食部分，切碎，混匀）约10克，于研钵中，加入等体积的2%草酸溶液研磨成浆状，得匀浆液。将匀浆液移入100ml容量瓶中，可用1%草酸溶液帮助转移，加入30%Zn（AC）2和15%K4Fe（CN）6溶液各5ml，脱色，然后用1%的草酸稀释至刻度，充分摇匀，静止几分钟后过滤。（弃去最初流出的几毫升溶液）（三）用移液管吸取滤液5或10ml于50ml的锥形瓶中，立即用标定过的2，6—二氯酚靛酚溶液滴定，直至溶液呈浅粉红色15s不褪色为止。记录所用染料的ml数。为了避免其它物质的干扰，滴定过程不得超过2min。（此步骤平行作2—3次） （一）计算 维生素C含量（mg/100g样品）=（VT/W）×100 式中：V为滴定样品所耗用的染料的平均ml数 T为1ml染料相当于维生素C的mg数 W为滴定时所用样品稀释液中含样品的g数 注意事项 1.整个滴定过程要迅速，防止还原型的维生素C被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应少于1ml或多于4ml，若滴定结果不在此范围，则必须增减样品量或将提取液稀释； 2.本实验必须在酸性条件下进行，在此条件下，干扰物反应进行很慢； 3.提取液中尚含有其它还原性的物质，均可与2，6—二氯酚靛酚反应，但反 应速度均较维生素C慢，因而，滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一滴一滴地加入，并要不断地摇动锥形瓶直至呈粉红色15s不褪色为终点； 4.若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，需脱色，可用白陶土、
X X X J C/Z Y/X Z XXX建设工程质量检测有限公司 作业指导书 XXXJC/ZY/XZ-014 靛酚蓝分光光度法测定空气中氨浓度 作业指导细则 2011-06-15批准2011-07-01实施
XXX建设工程质量检测有限公司作业指导书靛酚蓝分光光度法测定空气中氨浓度 作业指导细则 XXXJC/ZY/XZ-014 编制单位：XXX建设工程质量检测有限公司环境检测室 批准部门：XXX建设工程质量检测有限公司 施行日期：2011年07月01日
关于执行《靛酚蓝分光光度法测定空气中氨浓度细则》的通知 各科室： 根据XXX建设工程质量检测有限公司的要求，由XXX建设工程质量检测有限公司环境检测室修订的《靛酚蓝分光光度法测定空气中氨浓度细则》，经审查，符合XXX建设工程质量检测有限公司《质量体系文件》编制的要求，现予以批准，编号为XXXJC/ZY/XZ-014，自2011年07月01日起施行。 本检验细则由XXX建设工程质量检测有限公司环境检测室负责具体解释。 XXX建设工程质量检测有限公司 2011年07月01日
XXX建设工程质量检测有限公司 靛酚蓝分光光度法测定空气中氨浓度检测作业指导书目录 1.总则 2.检测环境 3.仪器设备与相关物质 4.标准曲线的绘制 5.检测细则 6.722S分光光度仪操作规程 7.QC-2大气采样器操作规程 8.人员与岗位责任制 9.安全规程 10.记录 （1）委托检测联系单 （2）空气采样记录 （3）分光光度法氨检测记录
靛酚蓝分光光度法测定空气中氨浓度作业指导书 1.总则 1.1目的：为规范靛酚蓝分光光度法测定空气中氨浓度方法编制本指导书。 1.2检测依据 （1）《民用建筑工程室内环境污染控制规范》GB50325-2010 （2）《公共场所空气中氨测定方法》GB/T18204.25-2000 1.3适用范围 本指导书适用于靛酚蓝分光光度法测定空气中氨浓度。 2.检测环境样品的检测在室内进行，气温宜室温、湿度气压不限。 3.仪器设备及有关物质 3.1大型气泡吸收管：有10ml刻度线，出气口内径为1mm，与管底距离为3-5mm。 3.2空气采样器：流量范围0-2L/min。流量稳定。 采样前后，用皂膜流量计校准采样系统的流量，误差应不小于±5%。 3.3具塞比色管：10ml。 3.4分光光度计：可测波长为697.5mm，狭缝<20mm，检定后使用每年检定一次。 3.5压力表检定后使用。 3.6本法所用的试剂为分析纯。水为无氨蒸馏水。 3.7吸收液[C（H2SO4）=5mol/L]：量取2.8ml浓硫酸加入水中，并稀释至1L，临时使用时再稀释10倍。
学院 XXX 专业 XXXX 果蔬中维生素含量的测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）实验设计题目 年级 XXXX 组员 XXXX 一、实验背景及目的: 维生素C 又称为抗坏血酸，常存在于新鲜的蔬菜和某些水果中，尤其是在 橙子、枣、 辣椒、苦瓜中含量丰富。是维持机体正常生理功能的重要维生素 之一。维生素C 抗坏血酸在食品工业中常用做抗氧化剂，维生素 C 可促进胶原 蛋白抗体，具有抗癌的作用；它能参与神经介质、激素的生物合成；能将胆 固醇转化为胆汁酸，使高胆固醇血症患者的胆固醇下降；能将 Fe 抖还原为Fe, 使其易于吸收，有利于血红蛋白的形成；还具有解毒的作用。橙子中防治坏 血病的主要物质为维生素C ,本文以橙子为检测对象，对其营养成分——维生素 C 的含量进行测定，正确了解营养价值。 目前国内测定维生素C 的常见方法有：DPPH 法、碘滴定法、紫外分光光 度计法、高效液相色谱法、苯肼比色法等。这些方法各有特点，但操作过程 复杂，较 慢，仪器昂贵。Vc 易被热、碱、氧和光破坏，根据实验室的条件, 本次实验采用2，6—二氯靛酚滴定法进行实验研究及分析测定。 参考国标法GB6195-1986直接测定橙子中维生素c 的含量，其方法简便、 快速、结果准确。 、实验部分 1、实验原理 染料2 ,6 一二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原 状态， 氧化态为深蓝色，还原态变为无色，二是受其介质的酸度影响，在碱 性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性染料标准溶液， 对含维生素C 的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色，当到达滴 定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中 还原型抗坏血酸的含量。
2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C 含量 一、目的要求 掌握法测定Vc 的方法。 二、实验原理 食品中Vc 包括还原型和氧化型两种类型，当食品放置时间长时或经过烹调处理后，其中有相当一部分维生素C 转化为氧化型，食品中的Vc 氧化酶也可以使还原型Vc 转化为氧化型，氧化型Vc 仍具有部分的活性，新鲜食物中的Vc 主要以还原型的形式存在，测定还原型Vc 可粗略了解食品中Vc 的浓度。 还原型Vc 能使染料2,6-二氯酚靛酚还原，而本身被氧化，在酸性条件下2,6-二氯酚靛酚酸呈红色，因此，当碱性氧化型的蓝色染料2,6-二氯酚靛酚滴定含Vc 的酸性溶液时，刚开始滴下染料立即被样品中的还原型Vc 还原成无色，随着样品溶液中的Vc 被氧化，再滴下的染料就渐渐使溶液变为粉红色，当样品从无色变成微红色且15s 不退色，表明样品中还原型Vc 全部被氧化，即此时已达到滴定终点。反应式见指导书。 三、试剂器材 ① 2% 草酸溶液 ，1% 草酸溶液 ② 0.05mg/ml 标准Vc 溶液 ③ 0.2mg/ml 2,6-二氯酚靛酚溶液（染料） 四、实验步骤 1、维生素C 提取液（1份/班） 称取凉瓜200g ， 切碎，加入2% 草酸200ml ，匀浆机30S （分两次进行， 防止过热） 2、标准Vc 溶液与空白的滴定 微量滴定管中装好0.2mg/ml 2,6-二氯酚靛酚溶液，准确吸取标准Vc 溶液1ml,置于三角瓶中，加入1% 草酸9ml ，滴定至微红色，15S 不退色，由所用染料体积计算1ml 染料相当于多少mg Vc 3、Vc 样品提取液的滴定 准确提取滤液，各取1ml ，加入1% 草酸溶液9ml ，置于三角瓶中滴定。 五、结果处理 100m m g 100/mg c 0 1????-=D C B A V V V V V ）（样品）含量（
实验报告 课程名称： 土壤学实验 指导老师： 倪吾钟 成绩：__________________ 实验名称： 植物全氮、全磷、全钾含量的测定 同组学生姓名： 余慧珍 一、实验目的和要求 二、实验内容和原理 三、实验材料与试剂 四、实验器材与仪器 五、操作方法和实验步骤 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析 八、讨论、心得 一、 实验目的和要求 1. 掌握植物样品消煮液制备方法； 2. 掌握植物全氮、磷、钾的测定与结果分析。 二、 实验内容和原理 1. 植物样品消煮——H 2SO 4-H 2O 2消煮法 在浓H 2SO 4溶液中，植物样品经过脱水、碳化、氧化等作用后，易分解的有机物则分解。再加入H 2O 2 ，H 2O 2在热浓H 2SO 4溶液中会分解出新生态氧，具有强烈的氧化 专业： 农资1202 姓名： 平帆 装订
作用，可继续分解没被H 2SO 4 破坏的有机物，使有机态氮全部转化为无机铵盐。同时， 样品中的有机磷也转化为无机磷酸盐，植株中K以离子态存在。故可用同一消煮液分别测定N、P、K。 2.植株全氮的测定——靛酚蓝比色法 经消煮待测液中氮主要以铵态氮存在，被测物浸提剂中的NH4+，在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚反应，生成水溶性染料靛酚蓝，其深浅与溶液中的NH4+－N含量呈正比，线性范围为之间。 3.植株全磷的测定——钒钼黄比色法 经消煮待测液中磷主要以磷酸盐存在，在酸性条件下，正磷酸能与偏钒酸和钼酸发生反应，形成黄色的三元杂多酸—钒钼磷酸[1]。溶液黄色稳定，黄色的深浅与磷的含量成正相关。 4.植株全钾的测定——火焰光度计法 消煮待测液中难容硅酸盐分解，从而使矿物态钾转化为可溶性钾。待测液中钾主要以钾离子形式存在，用酸溶解稀释后即可用火焰光度计测定。 三、实验器材与仪器 样品：三叶草，取于东七教学楼南侧，研磨过18目筛备用； 试剂：浓硫酸、300g/l H 2O 2 、6mol/l NaOH溶液、%二硝基酚指示剂、酚溶液、次氯 酸钠溶液、铵标准溶液（准确称量经105℃干燥2h的氯化铵（NH 4 Cl），用少量水溶
实验五食品中维生素C含量测定 维生素C是人类营养中最重要维生素之一，缺少它是会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。今年来，发现它可以预防和治疗感冒，增强机体对肿瘤的抵抗力，并对化学致癌物具有阻断作用。 维生素C是己糖醛酸，属于水溶性维生素。主要分为还原性和脱氢型两种，它广泛分布在植物的组织中，新鲜的水果、蔬菜特别是枣、辣椒、柿子叶、苹果、猕猴桃、芹菜等果蔬中含量较多，果蔬中维生素C含量受果树种类、品种、栽培条件、成熟度和贮藏条件有关。因此，测定维生素C的含量，可以作为果蔬的营养品质和贮藏效果的评价之一。 一、目的要求 1.学习并掌握2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。 2.进一步掌握滴定法的基本操作技术。 3. 了解测定蔬菜和水果中维生素C含量意义。 二、实验原理 维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。 氧化型2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，还原型2,6-二氯酚靛酚无色。当用此染料滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc 未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。
三、操作步骤 1. 样液制备称取苹果和青椒各5g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，漏斗(+脱脂药棉)过滤，滤液转入25ml容量瓶后用2%草酸定容。 2. 标准液滴定准确吸取0.1mg/ml的标准抗坏血酸溶液各1.0ml，分置两个100ml锥形瓶中，加入1%草酸9.0ml，用微量滴定管以0.1%的2,6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s即为终点。由所用染料的体积计算出T值(平均值)，即1ml染料相当于多少mg的Vc。 3. 样液滴定准确吸取已制备的样品滤液各两份，每份10.0ml分别放入两个100ml锥形瓶内，滴定方法同前 计算 m=VT/m0×100 式中m：100g样品中含Vc的质量(mg) V：滴定时所用去染料体积(ml) T：每毫升染料能氧化Vc质量数(mg/ml) m0：10ml样液相当于含样品之质量数(g) 试剂和器材 试剂 1. 2%草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中。 2. 1%草酸溶液：溶1g草酸于100ml蒸馏水中。 3. 标准抗坏血酸溶液(0.1mg/ml)：准确称取50.0mg纯抗坏血酸，溶于1%草 酸溶液，并稀释至500ml。贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配置。 4. 1%HCl溶液。 5. 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液：溶500g 2,6-二氯酚靛酚于300ml含有104mg NaHCO3热水中，冷却后加水稀释至500ml，滤去不溶物，贮棕色瓶内， 冷藏(4℃约可保存一星期)。每次临用时以标准抗坏血酸液标定。 器材 1. 新鲜蔬菜(辣椒、青菜、西红柿等)、新鲜水果(橘子、柑子、橙、苹果等) 2. 吸管1.0ml、10.0ml 3. 容量瓶25ml, 100ml 4. 微量滴定管5ml 5. 天平 6. 研钵 7. 漏斗Φ8cm. 注意事项 1. 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。 2. 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2分钟。因为在本滴定条件下，一些非维生素C的还原性物质也可与2，6-二氯酚靛酚发生反应，影响结
维生素 C 的定 量测定 — 2 , 6- 二氯酚 靛酚滴 定法
维生素 C 的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法实验目的 1.学习定量维生素 C 的原理和方法 2.掌握微量滴定技术 实验原理 维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。它对物质代谢的调节具有重要的作用，近年来发现它还能增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。 维生素 C 是具有L-系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量都很丰富。 维生素 C 具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，维生素 C 易被氧化而破坏。在中性和微酸性环境中，维生素C 能将染料2，6—二氯酚靛酚还原成无色的还原型的2，6—二氯酚靛酚，同时将维生素 C 氧化成脱氢维生素C。氧化型的2，6—二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈兰色。当用2，6—二氯酚靛酚滴定含有维生素 C 的酸性溶液时，在维生素 C 尚未全被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即被还原成无色。但当溶液中的维生素 C 刚好全部被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即时溶液呈红色。所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的
维生素 C 刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时2，6—二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素 C 的含量。 其化学反应式如下：
抗坏血酸 仪器、试剂 （一）仪器：研钵、天平、容量瓶（ 100ml ）、量筒、移液管、锥形瓶 （50ml ）、微量滴定管、漏斗 （二）材料、试剂 1、新鲜蔬菜或新鲜水果 2、1%草酸溶液 1g 草酸溶于 100ml 蒸馏水中 3、2%草酸溶液 2g 草酸溶于 100ml 蒸馏水中 4、标准维生素 C 溶液 准确称取 20mg 纯维生素 C 粉状结晶于 1%草酸溶液中，稀释至 100ml ， 再取其中 10ml 稀释至 100ml ，即得 0.02mg/ml 的维生素 C 溶液。在使用前临时 配制。 5、0.02%2，6—二氯酚靛酚溶液 溶解 50mg2，6—二氯酚靛酚于约 200ml 含有 52mg 的 NaHCO 3的CCC O O H H H 2OH o o 脱氢抗坏血酸
实验三 维生素C 的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法） 一、原理 维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C ，当样品中的维生素C 被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。 二、 实验仪器 新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗 三、实验试剂 1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。 2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。 3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。 4、% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。 四、实验步骤 （一）提取 水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。 （二）滴定 1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度： 量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空白对照V 2，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升2，6-二氯酚靛酚所能氧化抗坏血酸的毫克数（K ）。 2、样品的测定： 取50ml 锥形瓶2个，分别加入滤液10ml （V 3），用已标定的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min ，记录两次滴定所得的结果，求平均值V 1。空白滴定方法同前（V 2）， （三）结果计算 根据实验数据计算出每100g 样品的维生素C 含量： 维生素C （mg/100g 样品）=123()V V K V W V -???×100 式中：V 1为滴定样品液所用去染料体积（ml ）; V 2为滴定空白所用去染料体积（ml ）; V 3为样品测定时所用滤液体积（10ml ）; V 为样品提取液的总体积（100ml ）； K 为1毫升染料能氧化抗坏血酸的质量（mg ）; W 为称取样品重量(g )。 五、思考题 1、要测得准确的维生素C 值，实验过程中应注意哪些操作步骤，为什么 2、在测定过程中，样品的草酸提取液为什么不能暴露在光下 3、试简述维生素C 的生理意义。