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戊二醛固定液(1%,电镜专用)
简介：
固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。戊二醛固定液会引起蛋白质α-螺旋结构变形，不利于过氧化物酶染色。戊二醛固定液固定速度快，渗透力差。
Leagene 戊二醛固定液(1%,电镜专用)由戊二醛、磷酸盐、去离子水等组成，pH7.2～
7.4，该固定液对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好，经常用于电镜标本固定。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 根据实验具体要求操作。
2、 取新鲜标本，立即入戊二醛固定液4℃固定1～4h ，稍大标本应适当延长固定时间。
3、 送检或4℃保存。
注意事项：
1、 Leagene 戊二醛固定液有一定腐蚀性，请在通风较好的环境下小心操作， 避免吸入。
2、 组织取材的厚度不同，固定时间也不同。常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm ，一般不超过6mm 。对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。
3、 固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。
4、 温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但本固定液最好不要提高温度。
5、 取出新鲜组织后，应及时固定。无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。相关： 编号 名称 DF0161 Storage 戊二醛固定液(1%,电镜专用) 100ml RT 避光 使用说明书 1份 编号
名称 DC0032
Masson 三色染色液 NH0043
SSC 缓冲液(20×,pH7.0) NH0053
变性鲑鱼精DNA(10mg/ml) NR0001 DEPC 处理水(0.1%)
https://www.doczj.com/doc/e56006780.html,/ 仅供科研使用版本号：170608 戊二醛固定液(2.5%,电镜专用) 【产品组成】 Component SBJ-0639S SBJ-0639M Store at 戊二醛固定液(2.5%,电镜专用) 100ml 500ml 4℃,避光 【保存条件】 4℃,避光 【产品概述】 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。戊二醛固定液会引起蛋白质α-螺旋结构变形，不利于过氧化物酶染色。戊二醛固定液固定速度快，渗透力差。 戊二醛固定液(2.5%,电镜专用)由戊二醛、磷酸盐、去离子水等组成，pH7.2～7.4，该固定液对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好，经常用于电镜标本的固定。 【使用方法】 1、根据实验具体要求操作。 2、取新鲜标本，立即入戊二醛固定液4℃固定1～4h，稍大标本应适当延长固定时间。 3、送检或4℃保存。 【注意事项】 1、戊二醛固定液有一定腐蚀性，请在通风较好的环境下小心操作，避免吸入。 2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同。常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm，一般不超过6mm。对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。 3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。 4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但本固定液最好不要提高温度。 5、取出新鲜组织后，应及时固定。无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。 6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
7、常用固定剂的种类和配方是什么？ （1）4%多聚甲醛磷酸缓冲液pH7.4（多聚甲醛40g，0.1mol/LPBS液pH7.4500ml，两者混 合加热至60℃，搅拌并滴加1NNaOH至清晰为止，冷却后加PBS液至总量1000ml）。 （2）10%中性缓冲福尔马林液（浓甲甲醛10ml，0.01mol/lpH7.4PBS90ml）。 （3）100%冰丙酮。 （4）戊二醛-甲醛液（戊二醛1ml，浓甲醛10ml，蒸馏水加至100ml）。 （5）甲醛升汞固定液（即B5固定液。浓甲醛10ml，氯化汞6g，醋酸钠1.25g，蒸馏水90 ml）。 （6）醋酸-甲醛液（浓甲醛10ml，冰醋酸3ml，生理盐水加至100ml）。 （7）Bouin’s液。 （8）Zamboni’s液。采用2.5%多聚甲醛和30%饱和苦味酸，更可增加对组织穿透力和固定效果，以保存更多的组织抗原。 （9）PLP液（过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液）。 （10）碳化二亚胺（1-ethyl-3（3-dimethyl-aminopropyl）cardodiimi-HCI）液：2g溶于100 ml0.01mol/L，pH7.4PBS中。此液宜用于标记多肽类激素的组织，对标记IgA、IgG效果不佳。 （11）碳二亚胺-戊二醛液（ECD-G液）。 （12）Zenker’s液（重铬酸钾2.5g，氯化汞5g，硫酸钠1g，蒸馏水100ml，混合溶解后，临用时加水醋酸5ml）。 （13）Clarke氏改良剂（100%酒精95ml，冰醋酸5ml），用于冰冻切片的后固定。 （14）乙醚（或氯仿）与乙醇等量混合液。 （15）AAF液：95%-100%酒精85ml，冰醋酸5ml，浓甲醛10ml。 （16）Carnoy氏液：100%酒精60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml，混合后4℃保存备用。
多聚甲醛-戊二醛固定液说明书 产品编号：SL1580X 保存条件：-20℃保存，一年有效。4℃保存，一个月有效。 产品内容： 产品组成SL177X X%戊二醛固定液10mL/100mL/500mL 说明书1份 产品简介： 1.对于较大的动物要做电镜，灌注固定，选择4%多聚甲醛+（0.5-2%）戊二醛的混合固定液，这两种固定剂优缺点可以互相补充。 2.多聚甲醛与戊二醛相比，其渗透力强、固定迅速、价格低廉，它对细胞基质保存不如戊二醛，但对酶的活性保存好。如果做免疫电镜或者电镜的细胞化学，则戊二醛浓度要低一些为好。 3.而且取材后固定的时间，方法也有讲究。如果是个体较大的动物，也需要在具体试验中做一些处理，比如兔子，就可以只灌注头颈部。小白鼠，数量也不多，做常规透射电镜，也可以用4%戊二醛灌注。 固定液成分选择： 1、多聚甲醛+5%戊二醛：溶解2g多聚甲醛于25ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。冷却后加10ml25%戊二醛，再加15ml0.2PB,调pH备用。此固定液中含多聚甲醛4%，戊二醛5%，属高渗液，但固定效果不错，尤其对细胞内的微管保存较好。 2、2%多聚甲醛+2%戊二醛：溶解1g多聚甲醛于25ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。冷却后加4ml25%戊二醛，再加21ml0.2PB,调pH备用。常规固定选用这种配方。 3、4%多聚甲醛+0.5%戊二醛：溶解2g多聚甲醛于25ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。冷却后加1ml25%戊二醛，再加24ml0.2PB,调pH备用。推荐用作免疫电镜标本固定剂，对于抗原较强的标本，可将浓度降低到2%多聚甲醛+0.25%戊二醛。 第1页共1页
戊二醛固定液(0.25%,电镜专用) 简介： 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。戊二醛固定液会引起蛋白质α-螺旋结构变形，不利于过氧化物酶染色。戊二醛固定液固定速度快，渗透力差。 Leagene 戊二醛固定液(0.25%,电镜专用)由戊二醛、磷酸盐、去离子水等组成，pH7.2～7.4，该固定液对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好，经常用于电镜标本固定。组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、根据实验具体要求操作。 2、取新鲜标本，立即入戊二醛固定液4℃固定1～4h，稍大标本应适当延长固定时间。 3、送检或4℃保存。 注意事项： 1、Leagene 戊二醛固定液有一定腐蚀性，请在通风较好的环境下小心操作，避免吸入。 2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同。常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm，一般不超过6mm。对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。 3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。 4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但本固定液最好不要提高温度。 5、取出新鲜组织后，应及时固定。无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。相关：编号 名称DF0159 Storage 戊二醛固定液(0.25%,电镜专用) 100ml RT 避光使用说明书1份 编号 名称DC0032Masson 三色染色液
Step 1: 0.2M磷酸缓冲液的配制： --------------------- 磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O） 2.6克 磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O) 29克 双蒸馏水加至500毫升 pH调至7.4 Step 2: 戊二醛固定液的配制： --------------------- 25% 戊二醛1ml 双蒸馏水4ml 0.2mol/L磷酸缓冲液5ml 戊二醛最终浓度 2.5% pH值7.3-7.4 戊二醛固定剂的配方： （a）磷酸缓冲液的配方： A液：0.2M磷酸氢二钠贮备液： Na2HPO4·9H2O 17.81 克或：Na2HPO4·7H2O 26.83 克
或：Na2HPO4·7H2O 35.82克 加双蒸水至500毫升 B 液：0.2M磷酸二氢钠贮备液 NaH2PO4·H2O 13.8 克 或：NaH2PO4·2H2O 15.61 克 加双蒸水至600毫升 使用时将A液40.5毫升和B液9.5毫升混合成0.2M磷酸缓冲液。（PH7.4）（b） 2.5﹪戊二醛固定液的配方： 0.2M磷酸缓冲液50毫升 25﹪戊二醛溶液10毫升 加双蒸水至100毫升 具体步骤如下： 离心收集细胞，PBS漂洗两遍，双醛固定（2％多聚甲醛＋2.5％戊二醛。双醛固定对免疫电镜更加适合。）30min，PBS漂洗两遍，1％锇酸固定1h，PBS清洗3遍，用小的样品勺取出一点标本，置包埋板或小的离心管中，然后常规梯度脱水，浸透，包埋。 把细胞离心取沉淀细胞,,然后拿PBS液漂洗两遍后,倒去上清,直接加2.5%戊二醛固定后,送电镜室脱水、包埋、切片后置透射电镜下观察
Bouin固定液 Bouin Fixative Solution 编号名称规格单位 北京华越洋WG07113Bouin固定液250ml，500ml瓶 Bouin固定液说明： Bouin固定液是常用的混合型固定液，其渗透能力强，固定均匀，组织收缩小，不会使组织变硬变脆。适用于绝大部分组织，特别适用于睾丸活检组织的固定。固定时间一般需要12-24小时。 保存条件：4℃避光保存，有效期半年。 一般固定液固定时的注意事项： (1)固定液量：20倍于材料的体积，以免固定液被稀释。 (2)选择合适的固定液：渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中，又不使组织过度收缩或膨胀。 (3)固定的时间要合适： 与材料的大小和温度有关：材料大则时间长，材料小则时间短；温度高则时间短，温度低则时间长。 经固定的材料如不及时使用，可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时，再换入一次70%酒精，在0-4℃冰箱内可保存半年。经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次，效果较好。 一般固定液具有的特点： (1)迅速渗入组织，杀死原生质。在杀死的短时期中，细胞形态不致有所变化。 (2)必须具有渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。 (3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。 (4)使细胞内的成分凝固或沉淀。 (5)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。 (6)增加媒染作用和染色能力。
(7)使组织变硬，具有一定的硬度。 (8)固定以后能起到保存的作用。 (9)在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。 华越洋Bouin固定液其他相关固定液： 通用组织细胞固定液 Champy固定液 Helly固定液 AAF固定液 Bouin固定液 戊二醛固定液 Zetterqvist固定液 B-5固定液 Bouin固定液 Dafano固定液 Gendre固定液 Methacarn固定液 A-F固定液
北京雷根生物技术有限公司 https://www.doczj.com/doc/e56006780.html, 戊二醛固定液(2.5%) 简介： 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。戊二醛固定液会引起蛋白质α-螺旋结构变形，不利于过氧化物酶染色，速速度快，渗透力差。Leagene 戊二醛固定液(2.5%)主要由戊二醛、磷酸盐等组成，pH7.2～7.4，该固定液对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好，是最常用的标准戊二醛固定液，经常用于电镜标本的固定。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 按实验具体要求操作。 2、 取新鲜标本，立即入戊二醛固定液(2.5%)中，固定，稍大标本应适当延长固定时间。 3、 送检或4℃保存。 注意事项： 1、 戊二醛固定液(2.5%)有一定腐蚀性，请在通风较好的环境下小心操作， 避免吸入。 2、 组织取材的厚度不同，固定时间也不同。常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm ，一般不超过6mm 。对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。 3、 固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。 4、 取出新鲜组织后，应及时固定。无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。 有效期： 12个月有效。 编号 名称 DF0151 DF0151 DF0151 Storage 戊二醛固定液(2.5%) 100ml 500ml 5L 4℃ 避光 使用说明书 1份
戊二醛 戊二醛属高效消毒剂。因具有杀菌谱广、杀细菌芽孢效果可靠、杀菌作用受有机物影响较小、对金属腐蚀性小等特点，适用于不耐热的医疗器械和精密仪器的消毒与灭菌，尤其是内窥镜的消毒灭菌。但由于戊二醛对人体具有潜在的毒性、对皮肤黏膜具有刺激性，目前有些人正在积极寻找其替代品用于内窥镜和其他医疗器械的灭菌。 物理化学性质 戊二醛是一种饱和五碳二醛，分子式为C5H8O2,相对分子质量为100.12；纯品为无色或浅黄色油状液体，有微弱的醛气味，沸点187-189℃，易溶于水和醇。戊二醛水溶液呈酸性。 戊二醛在酸性条件下稳定，可长期贮存，商业出售的戊二醛通常是质量分数为2%、25%、50%的酸性溶液。消毒用的戊二醛通常为2%的碱性溶液，酸性溶液在使用之前需活化（碱性化）。碱性条件下戊二醛不稳定，易聚合成多聚体，pH≥8的溶液通常在4周内失去活性，活化的碱性戊二醛使用时间不应超过两周。 对微生物的杀灭作用 戊二醛杀灭微生物的机理还不清楚，可能是自由醛基与细胞表面或内部蛋白质或酶的氨基结合而引起一系列的反应，导致微生物的死亡。戊二醛与蛋白质和酶的反应速率取决于溶液的酸碱度，在pH4～9范围内，随着pH值的增加，反应速率增加。 戊二醛具有良好的杀菌效果，2%碱性戊二醛溶液（pH7.2～8.5）作用5min可杀灭细菌繁殖体，作用10min 可杀灭各类病毒，作用30min可杀灭真菌和结核分支杆菌，杀灭细菌芽孢需要3h。但干燥细菌对化学消毒剂的抗力明显高于悬液中的细菌，戊二醛也不例外。对干燥枯草杆菌芽孢，2%碱性戊二醛在20℃时达到灭菌需要10h。2%强化酸性戊二醛溶液和2%中性戊二醛也都具有可靠的杀芽孢作用。2%戊二醛溶液浸泡口腔镜7min可使其上的HBsAg 破坏，2%中性戊二醛复方消毒剂作用10min 可使HBsAg破坏。 杀菌的影响因素 1)浓度和作用时间的影响随着浓度的增加和作用时间的延长，杀菌作用增强。但质量分数低于2%的戊二醛溶液，无论怎样延长杀菌时间，也不能取得可靠的杀细菌芽孢效果。因此，杀灭细菌芽孢需用质量分数大于2%的戊二醛溶液。 2) 溶液酸碱度的影响酸性戊二醛的杀菌作用明显低于碱性戊二醛，但随温度升高差异逐渐减小。在 pH4.0～ 9.0范围内，随着pH值的增加杀菌作用增强；pH7.5 ～8.5时杀菌作用最强；pH＞9时，戊二醛迅速聚合，杀菌作用迅速丧失。 3) 温度的影响在较低温度下也有杀菌作用。随温度升高，戊二醛杀菌作用增强，在20 ～60℃其温度系数（Q10）为1.5 ～4.0。 4) 有机物的影响有机物使杀菌作用减弱，但有机物对戊二醛杀菌作用的影响比其他消毒剂小，20%小牛血
0.2M磷酸缓冲液一系列PH值的配方： 磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2M） pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.2M NaH2PO4/ml 5.8 8.0 92.0 5.9 10.0 90.0 6.0 12.3 8 7.7 6.1 15.0 85.0 6.2 18.5 81.5 6.3 22.5 7 7.5 6.4 26.5 73.5 6.5 31.5 68.5 6.6 3 7.5 62.5 6.7 43.5 56.5 6.8 49.5 51.0 6.9 55.0 45.0 7.0 61.0 39.0 7.1 67.0 33.0 7.2 72.0 28.0 7.3 77.0 23.0 7.4 81.0 19.0 7.5 84.0 16.0 7.6 87.0 13.0 7 .7 89.5 10.5 7.8 91.5 8.5 7.9 93.0 7.0 8.0 94.7 5.3 Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05 0.2M溶液含35.61g/L Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22 0.2M溶液含71.64g/L NaH2PO4·H2O分子量＝138.01 0.2M溶液含27.6g/L NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03 0.2M溶液含31.21g/L 电镜实验用２．５％戊二醛固定液及其制备方法 申请号/专利号：201010185630 本发明公开了一种电镜实验用２．５％戊二醛固定液及其制备方法，包括以下步骤：１、磷酸盐缓冲液配制：Ａ液：磷酸氢二钠＊１２个结晶水７１．６４克加蒸镏水至１０００ｍｌ；Ｂ液：磷酸二氢钠＊２个结晶水３１．２１克加蒸镏水至１０００ｍｌ；将Ａ液３６ｍｌ＋Ｂ液１４ｍｌ配置成０．２ｍｏｌｐＨ７．２的磷酸盐缓冲液；２、固定剂戊二醛配制：将步骤１配置好的０．２ｍｏｌｐＨ７．２磷酸盐缓冲液５０ｍｌ，加入５０％戊二醛５ｍｌ，然后加蒸镏水至１００ｍｌ，加入活性炭２ｇ
一些固定液及方法介绍 前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3） 试剂：多聚甲醛40g 0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml 配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1N NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。 该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。 2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 试剂：A液：多聚甲醛40g 蒸馏水400ml B液：Na2HPO4?2H2O16.88g 蒸馏水300ml C液：NaOH 3.86g 蒸馏水200m 配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1N NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。 该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 3．Bouin's液及改良Bouin's液 试剂：饱和苦味酸 40%甲醛250ml 冰醋酸50ml 配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），最后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸最好在临用前加入。改良Bouin's液即不加冰醋酸。 该固定液为组织学、病理学常用固定剂这一，对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整。但因偏酸（pH为3～3.5），对抗原有一定损害，且组织收缩较明显，故不适于组织标本的长期保存。此外，操作时，应避免吸入或与皮肤接触。 4．Zamboni's(Stefanini's)液 试剂：多聚甲醛20g 饱和苦味酸150ml Karasson-Schwlt's PB至1000ml 配制方法：称取多聚甲醛20g，加入饱和苦味酸150ml，加热至60℃左右，持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后，加Karasson-Schwlt's PB至1000ml充分混合（Karasson –Schwlt's磷酸缓冲液的配制配制方法见后）。 该固定液适于电镜免疫细胞化学，对超微结构的保存较纯甲醛为优，也适于光镜免疫细胞化学研究，为实验室常用固定剂之一。我们在应用中，常采用2.5%的多聚甲醛和30%的饱和苦味酸，以增加其
Carnoy固定液 Carnoy Fixative Solution 编号名称规格单位 北京华越洋WG04553Carnoy固定液100ml，500ml瓶 Carnoy固定液用途： Carnoy氏液是由乙醇，氯仿和乙酸按6:3:1的比例混合而来的混合型固定液。该液渗透快速，固定只需1-2小时。固定后可以直接用95%乙醇脱水，固定核酸和糖原的效果最好，常用于组织化学。 保存条件：RT，避光保存，有效期一年。 Carnoy固定液固定时的注意事项： (1)固定液量：20倍于材料的体积，以免固定液被稀释。 (2)选择合适的固定液：渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中，又不使组织过度收缩或膨胀。 (3)固定的时间要合适： 与材料的大小和温度有关：材料大则时间长，材料小则时间短；温度高则时间短，温度低则时间长。 经固定的材料如不及时使用，可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时，再换入一次70%酒精，在0-4℃冰箱内可保存半年。经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次，效果较好。 Carnoy固定液固定的条件： (1)迅速渗入组织，杀死原生质。在杀死的短时期中，细胞形态不致有所变化。 (2)必须具有渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。 (3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。 (4)使细胞内的成分凝固或沉淀。 (5)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。 (6)增加媒染作用和染色能力。
(7)使组织变硬，具有一定的硬度。 (8)固定以后能起到保存的作用。 (9)在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。 华越洋Carnoy固定液其他相关固定液： 通用组织细胞固定液 Champy固定液 Helly固定液 AAF固定液 Bouin固定液 戊二醛固定液 Zetterqvist固定液 Carnoy固定液 Brasil固定液 Dafano固定液 Gendre固定液 Methacarn固定液 A-F固定液
Gendre固定液 Gendre Fixative Solution 编号名称规格单位 北京华越洋WG03593Gendre固定液100ml，500ml瓶 Gendre固定液用途： 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。 Gendre固定液(Gendre Fixative Solution)类似于Bouin's固定液，主要由PA、甲醛、乙醇、乙酸混合而成，PA可沉淀蛋白引起组织收缩，但不会使组织硬化，其与甲醛和乙酸混合后，穿透度加快，固定均匀，组织收缩轻微，对细胞的微细结构显示的很清晰，为一种良好的固定液。该固定液主要用于保存糖原，保存的糖原呈粗大颗粒状，小块组织细胞固定数小时至过夜后直接转入95%的乙醇脱水，其缺点是易把糖原推向细胞的一端，造成人为的“极化现象”。 Gendre固定液固定时的注意事项： 1、Gendre Fixative Solution对人体有一定的损害，请在通风好的环境下小心操作，避免吸入。 2、2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同，对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。常规活检组织比较适合的厚度为2~4mm，一般不超过6mm。 3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10：1。如果容积不够大，可以在固定期间更换1~3次固定液。 4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。 5、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。 Gendre固定液固定的条件： 1、一般需固定4h至整夜。如果组织块大，可适当延长固定时间，但不宜超过24h。 2、固定后，组织可稍微流水冲洗或不冲洗直接转入70%的乙醇脱水，经乙醇脱水时可除去大部分PA，组织留有一点黄色，对染色也无影响。 Gendre固定液保存条件：RT,避光。有效期半年。
常用溶液的配制 一、常规溶液 (一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS) 甲液：1/15mol/L Na2HPO4溶液 Na2HPO4 9.465g 蒸馏水加至1000ml 乙液：l/15mol/L KH2PO4溶液 KH2P04 9.07g 蒸馏水加至1000m1 分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表: pH 甲液ml 乙液mI pH 甲液ml 乙液mI 5.29 5.59 5.91 6.24 6.47 6.64 2.5 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 97.5 95.0 90.0 80.0 70.0 60.0 6.81 6.98 7.17 7.38 7.73 8.04 50.0 60.0 70.0 80.0 90.0 95.0 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0 5.0 (二)0.3％台盼兰染液 称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。 (三)0.5％酚红指示剂 酚红 0.5g 0.1N(0.4％)NaOH 15ml 双蒸水 85ml 将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。 (四)5.6％NaHCO3溶液 称NaHCO35.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4℃冰箱保存) (五)10μg／ml秋水仙素 秋水仙素 lOmg 生理盐水 100ml 装入茶色瓶中，为贮备液，4℃冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。 (六)0.4％KCl-0.4％柠檬酸钠低渗液 将0.4％KCl和0.4％柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。 (七)2％柠檬酸钠 称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。 （八）0.2％次甲基兰染液 称次甲基兰(Methylene blue)0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。 (九)0.5％醋酸洋红(Aceio Carmine)染液 洋红 lg
固定液配方 一、戊二醛固定液:市售戊二醛为25%or50%水溶液，一般用磷酸缓冲液或二甲砷酸盐溶液配制成所需浓度的固定液 0.1mol/L 二甲砷酸钠缓冲液A液：二甲砷酸钠?3H2O 4.28g 加双蒸水至100ml B液：HCL(36-38%) 1.66ml 加双蒸水至100ml 按下表比例混合A、B液以配制0.2M二甲砷酸钠母液（在通风橱配制），加1倍双蒸水即得0.1M二甲砷酸钠缓冲液 Na2HPO4?2H2O 35.6g Na2HPO4?4H2O 53.63g Na2HPO4?7H2O 71.64g 100ml B液：NaH2PO4溶液NaH2PO4 24.0g/ NaH2PO4 ?H2O 27.6g/ NaH2PO4 ?2H2O 31.21g 加双蒸水至100ml 二、四氧化饿固定液 1、2%四氧化饿水溶液 将0.5 or 1.0g装四氧化饿安踣瓶充分洗净，放入棕色试剂瓶，在排毒柜5内将安踣瓶敲破，立刻加入双蒸水，配制成2%四氧化饿水溶液，盖上盖子，溶解1d. 2、用0.1M磷酸缓冲液配制成四氧化饿固定液0.1M磷酸缓冲液5ml 2%四氧化饿水溶液5ml 三、karnovsky 2%多聚甲醛-2.5%戊二醛固定液 1、10%多聚甲醛水溶液多聚甲醛2g 双蒸水20ml 2、固定液配制 0.2M磷酸缓冲液50ml 25%戊二醛10ml 双蒸水加至100ml 10%多聚甲醛水溶液20ml 染色液配方 一、超薄切片染色液 1、柠檬酸铅（Re ynolds’）溶液硝酸铅 1.33g 柠檬酸三钠 1.76g 切片染色时间5-10min 双蒸水30ml NOTICE:该溶液易与空气中CO2作用而产生沉淀，故使用与保存时，应尽量减少与空气接触，若稍有白色沉淀即舍弃 2、醋酸双氧铀-50%饱和溶液醋酸双氧铀2g 50%乙醇100ml 切片染色时间15-30min（室温），延迟时间or提高温度可加反差 NOTICE:溶液呈鲜黄色，若变淡则表示失效。 二、负染色液 1、磷钨酸负染色液（PTA）磷钨酸1-2g 双蒸水100ml 2、醋酸双氧铀负染色醋酸双氧铀 双蒸水 3、钼酸铵负染色（AM）钼酸铵2g 双蒸水
电镜用戊二醛固定液（2.5%,电镜专用） 戊二醛固定液（2.5%,电镜专用） 别名：Glutaric dialdehyde solution；Pentane-1,5-dial 分子式：C5H8O2 分子量：100.12 CAS＃：111-30-8 外观：几乎无色液体 特性：类型：Grade II R：22-23-34-42/43 S：23-26-36/37/39-45 戊二醛固定液配制步骤 Step 1: 0.2M磷酸缓冲液的配制： --------------------- 磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O） 2.6克 磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)29克 双蒸馏水加至500毫升 pH调至7.4 Step 2: 戊二醛固定液的配制： --------------------- 25% 戊二醛1ml 双蒸馏水4ml 0.2mol/L磷酸缓冲液5ml 戊二醛最终浓度 2.5% pH值7.3-7.4 戊二醛固定剂的配方： （a）磷酸缓冲液的配方： A液：0.2M磷酸氢二钠贮备液： Na2HPO4·9H2O 17.81 克 或：Na2HPO4·7H2O 26.83 克 或：Na2HPO4·7H2O 35.82克 加双蒸水至500毫升
B 液：0.2M磷酸二氢钠贮备液 NaH2PO4·H2O 13.8 克 或：NaH2PO4·2H2O 15.61 克 加双蒸水至600毫升 使用时将A液40.5毫升和B液9.5毫升混合成0.2M磷酸 缓冲液。（PH7.4） （b） 2.5﹪戊二醛固定液的配方： 0.2M磷酸缓冲液50毫升 25﹪戊二醛溶液10毫升 加双蒸水至100毫升 具体步骤如下： 离心收集细胞，PBS漂洗两遍，双醛固定（2％多聚甲醛＋2.5％戊二醛。双 醛固定对免疫电镜更加适合。）30min，PBS漂洗两遍，1％锇酸固定1h， PBS清洗3遍，用小的样品勺取出一点标本，置包埋板或小的离心管中， 然后常规梯度脱水，浸透，包埋。 把细胞离心取沉淀细胞,,然后拿PBS液漂洗两遍后,倒去上清,直接加2.5%戊 二醛固定后,送电镜室脱水、包埋、切片后置透射电镜下观察 储存条件：室温 产品名称：戊二醛固定液(2.5%) 规格：100ml 分类：固定液储存条件：4℃,避光,6个月用途：对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好，主要用于电镜标本的固定。备注：主要由戊二醛溶液、PBS组成。产品库存：现货戊二醛固定液(2.5%) 说明书请致电销售人员。作为实验用品不能直接用于人体。 戊二醛（25％）水溶液，戊二醛固定液（2.5%,电镜专用）
细胞固定及常用的固定液 ?取材后的组织需立刻投于固定剂中 –固定使组织和细胞的蛋白质凝固，终止内源性或外源性酶反应，防止组织自溶或异溶，以保持原有结构和形态； –对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用，避免抗原失活或弥散。 ?常用固定液：固定剂品种很多，但大多属于醛类和醇类。其固定原理不同，各有优缺点。 –醛类（常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛） –醇类（常用乙醇） –其它（丙酮） (1) 醛类 ?甲醛(福尔马林)应用最广 –原理：形成分子间的交联，影响蛋白构型而使之固定。 –优点：形态结构保存好，且穿透性强，组织收缩少。 –缺点： ?甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色； ?醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍； ?分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。 –注意事项： ? C)，为此组织块不宜过厚。 缩短固定时间，降低固定温度 ?改用中性缓冲福尔马林，以pH值7.2～7.4 0.01mol/L的磷酸盐缓冲液配制成10％甲醛固定液，减少固定液pH的变化。 ?固定后充分水洗以减少分子间交联。 ?切片在作免疫组化染色前，先经预处理使抗原再现(抗原修复)。 ?戊二醛： –穿透性强，微细结构保存好，但对抗原有一定影响，常与其他固定剂联合用作免疫电镜固定液。 ?多聚甲醛(常用4%)： –可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光染色。
?主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等。 (2) 醇类 ?最常用的醇类固定剂是乙醇。 –其固定作用：使细胞内蛋白、糖类发生沉淀。 –优点：穿透性强、抗原性保存好。 –缺点： ?脱水性强，易引起组织收缩、变硬，影响切片质量，因而乙醇固定时间不宜过长(2h内)。 ?乙醇使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度。 (3) 其它固定剂 ?丙酮： –对抗原性的保存好，但脱水性更强，较少用于组织标本，但细胞爬片常用丙酮固定。 抗原修复——原因 ?常规的石蜡切片标本均用甲醛固定，结果使得： –抗原性物质形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇； –蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。 ?要求：在染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。
几种常用的固定剂 固定剂最先应用在光学显微技术中，但光学显微镜中使用的沉淀凝集蛋白性的固定剂对电镜并不特别适用。于是人们引入四氧化锇和中性甲醛进行固定。早期的电镜生物样品化学固定法都采用四氧化锇单一固定，但四氧化锇不能很好地保存糖原和其它碳水化合物，而且四氧化锇在组织中的渗透速度比较慢（约2mm/h）。而早期使用的中性甲醛也令人很不满意，因为早期使用的甲醛很不纯，含有甲酸和甲醇的残留（一般有10-15％），甲醇的存在对样品的保存很不利，于是后来人们改进了甲醛的制备方法，使用多聚甲醛新鲜配制甲醛，提高了它的纯度。1963年Sabatini、Bensch和Barrnett推荐使用醛类（特别是戊二醛）作为初级固定剂。使用戊二醛或戊二醛-多聚甲醛初步固定后再使用四氧化锇后固定的双重化学固定对大多数动物和植物组织都十分有效，因而成为目前大多数实验室常规的固定方法。 电镜中使用的固定剂都有毒性，操作时都要很小心，尽可能在通风橱中完成操作。如果实验室中发生固定剂泄漏，必须立即用大量奶粉覆盖泄漏出来的溶液，待反应充分后收集处理。 四氧化锇（Osmium tetroxide） 四氧化锇是一种很强的氧化剂，呈浅黄色结晶，分子量254，饱和水溶液的浓度为7.24％，它的水溶液为中性，有极大毒性。市售有密封的四氧化锇晶体和四氧化锇水溶液两种。四氧化锇晶体溶于水的速度很慢，必要时可以使用超声波设备来加速溶解。市面上也有已经配制好的2％四氧化锇水溶液出售，使用相当方便。但要特别注意的是无论是四氧化锇晶体还是水溶液都会挥发出四氧化锇气体，因此应将四氧化锇置于密闭容器（玻璃容器）中保存。四氧化锇气体对呼吸系统有刺激，对眼睛有严重的破坏作用，因此在使用时应特别小心，尽可能在通风橱中进行，并且严格控制用量。废弃的四氧化锇溶液应加入酒精水溶液或硫酸亚铁溶液，使四氧化锇转化为黑色沉淀，以降低毒性方便收集处理。 四氧化锇作为固定剂有如下优点： 1,四氧化锇可以与脂类、糖类和蛋白质反应。其对脂类的固定作用可以补充醛类固定剂对脂类固定不足的缺点。其反应方程式如下：
甲醛-生理盐水固定液 Formaldehyde Normal saline Fixative Solution 编号名称规格单位 北京华越洋WG07789甲醛-生理盐水固定液100ml，500ml瓶 甲醛-生理盐水固定液用途： 甲醛-生理盐水固定液pH为7，此液可用于保护脂类和细胞核。 甲醛-生理盐水固定液固定时的注意事项： (1)固定液量：20倍于材料的体积，以免固定液被稀释。 (2)选择合适的固定液：渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中，又不使组织过度收缩或膨胀。 (3)固定的时间要合适： 与材料的大小和温度有关：材料大则时间长，材料小则时间短；温度高则时间短，温度低则时间长。 经固定的材料如不及时使用，可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时，再换入一次70%酒精，在0-4℃冰箱内可保存半年。经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次，效果较好。 甲醛-生理盐水固定液固定的条件： (1)迅速渗入组织，杀死原生质。在杀死的短时期中，细胞形态不致有所变化。 (2)必须具有渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。 (3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。 (4)使细胞内的成分凝固或沉淀。 (5)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。 (6)增加媒染作用和染色能力。 (7)使组织变硬，具有一定的硬度。 (8)固定以后能起到保存的作用。
(9)在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。 华越洋甲醛-生理盐水固定液其他相关固定液： 通用组织细胞固定液 Champy固定液 Helly固定液 AAF固定液 Bouin固定液 戊二醛固定液 Zetterqvist固定液 甲醛-生理盐水固定液 Brasil固定液 Dafano固定液 Gendre固定液 Methacarn固定液 A-F固定液
Step 1: 令狐文艳 0.2M磷酸缓冲液的配制：--------------------- 磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O） 2.6克磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)29克双蒸馏水加至500毫升pH调至7.4 Step 2: 戊二醛固定液的配制： --------------------- 25% 戊二醛1ml 双蒸馏水4ml 0.2mol/L磷酸缓冲液5ml 戊二醛最终浓度 2.5% pH值7.3-7.4 戊二醛固定剂的配方： （a）磷酸缓冲液的配方： A液：0.2M磷酸氢二钠贮备液： Na2HPO4·9H2O 17.81 克 或：Na2HPO4·7H2O 26.83 克
或：Na2HPO4·7H2O 35.82克 加双蒸水至 500毫升 B 液：0.2M磷酸二氢钠贮备液 NaH2PO4·H2O 13.8 克 或：NaH2PO4·2H2O 15.61 克 加双蒸水至 600毫升 使用时将A液40.5毫升和B液9.5毫升混合成0.2M磷酸缓冲液。（PH7.4） （b） 2.5﹪戊二醛固定液的配方： 0.2M磷酸缓冲液50毫升 25﹪戊二醛溶液10毫升 加双蒸水至 100毫升 具体步骤如下：离心收集细胞，PBS漂洗两遍，双醛固定（2％多聚甲醛＋2.5％戊二醛。双醛固定对免疫电镜更加适合。）30min，PBS 漂洗两遍，1％锇酸固定1h，PBS清洗3遍，用小的样品勺取出一点标本，置包埋板或小的离心管中，然后常规梯度脱水，浸透，包埋。
把细胞离心取沉淀细胞,,然后拿PBS液漂洗两遍后,倒去上清,直接加 2.5%戊二醛固定后,送电镜室脱水、包埋、切片后置透射电镜下观察
固定液的选择和配方： 1、缓冲液的配制：在配制固定液之前，应先配制缓冲液。 0.2M磷酸缓冲液的配制： 磷酸二氢钠(NaH2PO4.H2O) 2.6g 磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O) 29g 重蒸馏水加至500ml 调pH至7.4 2 (灌注)固定液的配制 4%多聚甲醛用0.2M磷酸缓冲液配制，重蒸馏水补足容积。 4%多聚甲醛+（0.5-2%）戊二醛，以4%多聚甲醛+1%戊二醛为例，配方如下： 0.2M磷酸缓冲液的配制 100ml 25%戊二醛（电镜专用） 4ml 重蒸馏水加到200ml 多聚甲醛和戊二醛混合固定液： 1.4%多聚甲醛+5%戊二醛：溶解2g多聚甲醛于25 ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化 后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。冷却后加10 ml 25%戊二醛，再加15 ml 0.2 PB,调pH备用。此固定液中含多聚甲醛4%，戊二醛5%，属高渗液，但固定效果不错，尤其对细胞内的微管保存较好。 2.2%多聚甲醛+2%戊二醛：溶解1g多聚甲醛于25 ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化 后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。冷却后加4 ml 25%戊二醛，再加21 ml 0.2 PB,调pH备用。常规固定选用这种配方。 3.4%多聚甲醛+0.5%戊二醛：溶解2g多聚甲醛于25 ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶 化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。冷却后加1 ml 25%戊二醛，再加24 ml 0.2 PB,调pH备用。推荐用作免疫电镜标本固定剂，对于抗原较强的标本，可将浓度降低到2%多聚甲醛+0.25%戊二醛。 注意：多聚甲醛一瓶几十元，电镜专用戊二醛200左右，二者价格差距太大，因此，对于较大的动物要做电镜，灌注固定，则选择4%多聚甲醛+（0.5-2%）戊二醛的混合固定液，这两种固定剂优缺点可以互相补充。多聚甲醛与戊二醛相比，其渗透力强、固定迅速、价格低廉，它对细胞基质保存不如戊二醛，但对酶的活性保存好。如果做免疫电镜或者电镜的细胞化学，则戊二醛浓度要低一些为好。而且取材后固定的时间，方法也有讲究。如果是个体较大的动物，也需要在具体试验中做一些处理，比如兔子，就可以只灌注头颈部。小白鼠，数量也不多，做常规透射电镜，也可以用4%戊二醛灌注。因此，具体情况要具体分析。
创作编号：BG7531400019813488897SX 创作者：别如克* Step 1: 0.2M磷酸缓冲液的配制： --------------------- 磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O） 2.6克 磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)29克 双蒸馏水加至500毫升 pH调至7.4 Step 2: 戊二醛固定液的配制： --------------------- 25% 戊二醛1ml 双蒸馏水4ml 0.2mol/L磷酸缓冲液5ml 戊二醛最终浓度 2.5% pH值7.3-7.4 戊二醛固定剂的配方： （a）磷酸缓冲液的配方： A液：0.2M磷酸氢二钠贮备液： Na2HPO4·9H2O 17.81 克 或：Na2HPO4·7H2O 26.83 克
或：Na2HPO4·7H2O 35.82克 加双蒸水至500毫升 B 液：0.2M磷酸二氢钠贮备液 NaH2PO4·H2O 13.8 克 或：NaH2PO4·2H2O 15.61 克 加双蒸水至600毫升 使用时将A液40.5毫升和B液9.5毫升混合成0.2M磷酸缓冲液。（PH7.4） （b） 2.5﹪戊二醛固定液的配方： 0.2M磷酸缓冲液50毫升 25﹪戊二醛溶液10毫升 加双蒸水至100毫升 具体步骤如下： 离心收集细胞，PBS漂洗两遍，双醛固定（2％多聚甲醛＋2.5％戊二醛。双醛固定对免疫电镜更加适合。）30min，PBS漂洗两遍，1％锇酸固定1h，PBS清洗3遍，用小的样品勺取出一点标本，置包埋板或小的离心管中，然后常规梯度脱水，浸透，包埋。 把细胞离心取沉淀细胞,,然后拿PBS液漂洗两遍后,倒去上清,直接加2.5%戊二醛固定后,送电镜室脱水、包埋、切片后置透射电镜下观察 创作编号：BG7531400019813488897SX 创作者：别如克*