第10卷第1期1997年2月
同 位 素
Jou rnal of Iso topes
V o l.10 N o.1
Feb.1997
111I n-D TPA-octreotide的标记
条件研究及初步动物实验
王 凡 樊红强 肖 伦3 王翌善
金小海 陈大明 白宏升 程 震 杜 进(中国原子能科学研究院同位素研究所,北京102413)
研究了一步法不经纯化111In标记生长激素抑制素(S M S)类似物D T PA2octreo tide的标记条件,其中包括反应时间、D T PA2octreo tide用量、反应体积等。标记率达99%,比活度为277.5PBq mo l,产物的放化纯度>99%。对标记物的稳定性及其在小鼠体内的分布也进行了观察。
关键词 111In2D T PA2octreo tide 标记条件 生物分布
研究证明,源于神经内分泌细胞的肿瘤以及一些其它肿瘤的细胞膜上都有高密度的生长激素抑制素(S M S)受体存在,而且已经证明S M S类似物octreo tide(八肽)与S M S具有相似的生物学性质,可与S M S受体特异结合,这就使肿瘤受体显像成为可能[1]。80年代,瑞士首先合成了123I2T yr32octreo tide用于肿瘤显像,并获得了成功[2]。90年代开始,人们合成出111In2 D T PA2octreo tide[3,4],它克服了123I2T yr32octreo tide的一些不足。目前在一些发达国家,111In2 D T PA2octreo tide已用于临床[5-7]。由于各方面条件的限制,我国在此项研究上刚刚起步。
1 材料与方法
1.1 试剂和仪器
1.1.1 试 剂 D T PA2octreo tide(日本Pep tide研究所);111InC l3(中国原子能科学研究院同位素研究所);生理盐水(石家庄市第四制药厂);冰醋酸、甲醇(A R,北京化工厂);无水醋酸钠(温州市试剂化工厂);111In2D T PA(自制)。
1.1.2 仪 器 RM2905放射性活度计(中国计量科学研究院);FH2408定标器,FT2603井型电离室(北京综合仪器厂);M D11022电子天平(上海天平厂);高压液相色谱仪(W aters公司);高压液相色谱放射性监控仪(EG&G B ertho ld);高压液相色谱柱(Λ2Bondap ak2C18, Υ4.0mm ×300mm,粒度为10Λm,大连化学物理研究所)。
1.2 实验方法
1.2.1 111In2D T PA2octreo tide的标记 取20ΛL D T PA2octreo tide溶液(D T PA2octreo tide溶于
3通讯作者:北京275信箱12分箱,邮编:102413
收稿日期:1996208201 修改稿收到日期:1996208222
0.1m o l L 醋酸溶液中,浓度为0.1m g mL )于特制的尖底玻璃瓶中,加入37M B q 111
InC l 3溶
液(111InC l 3溶于0.04m o l L HC l 中,放射性浓度为1850M B q mL ),室温静止反应10m in ,标记完成,标记后的溶液加2mL 生理盐水稀释,pH =6-7,待用。1.2.2 标记率分析 采用H PL C 分析,分别上样111InC l 3、111In 2D T PA 和反应液。采用线性梯度淋洗,A 液为Υ(甲醇)=40%水溶液与0.05m o l L 醋酸钠(pH 5.5)的混合溶液,B 液为Υ(甲醇)=80%水溶液与0.05m o l L 醋酸钠(pH 5.5)的混合溶液。梯度淋洗时间为20m in ,然后延长淋洗10m in 。流通池体积为150ΛL ,流速为1.0mL m in 。
1.2.3 动物实验 18-20g 雄性昆明小白鼠,每只注射0.185M B q 111In 2D T PA 2octreo tide ,每组3只,分别于注射后不同时间处死,取其重要脏器进行测量。给另3只小白鼠各注射
0.185M B q 111In 2D T PA ,于注射后1h 处死,取其重要脏器进行测量,并与111
In 2D T PA 2octreo tide 的实验结果相对照。
2 结果与讨论
2.1 高压液相色谱分析结果
图1 H PL C 分析结果1——111InC l 3+111In 2D T PA ;2——杂质;
3——111In 2D T PA 2octreo tide 通过H PL C 放射性监测(图1)可以看到,
111InC l 3和111
In 2D T PA 的保留时间为3m in 。
111
In 2D T PA 2octreo tide 的保留时间为18m in 。
2为杂质峰,这与文献[3]一致。由图1可得,
标记物的标记率达99%,放化纯度>99%。2.2 反应时间对标记率的影响
采用1.2.1的标记条件,改变反应时间,测其标记率,结果示于图2。由图2可知,反应10m in 产物的标记率可达99%以上,因此可认为10m in 完成标记反应。
2.3 D TPA -octreotide 用量对标记率的影响
37M B q
111
InC l 3中分别加入0.25、0.5、
1.0、1.5、
2.0Λg D T PA 2octreo tide ,反应10m in ,然后分别测其标记率,结果示于图3。由
图3可知,37M B q 的111InC l 3中加入2Λg 的D T PA 2octreo tide 为比较适宜的反应量比例。为满足实际需要,可在此基础上扩大反应量。2.4 反应体积对标记率的影响
反应前,给每个尖底瓶中分别加入不同量的0.01m o l L 醋酸溶液,调反应体系的体积分别为40、100、200、400、800ΛL ,其它条件同1.2.1,测其标记率,结果示于图4。由图4可知,适当增大反应体积,对标记率无明显影响,但在
实际应用中,要求一定的浓度,因此反应体积不能过大。本实验体积控制在40-100ΛL 。2.5 稳定性实验
将1.2.1标记好的样品放置一定时间后测其放化纯度,结果示于图5、6。由图5和图6
7
1 第1期 王 凡等:111In 2D T PA 2octreo tide 的标记条件研究及初步动物实验
图2 标记率与反应时间的关系可知,随标记物放置时间的延长,其放化纯度有所下降,24h 时放化纯度降低到96%,其杂质含量有所增加,因此,标记好的药物应尽早使用。
2.6 动物实验结果
111
In 2D T PA 2octreo tide 和111
In 2D T PA 在
小鼠体内的分布结果列于表1。由表1可以看
出,111In 2D T PA 在小鼠体内的代谢要比111
In 2D T PA 2octreo tide 快得多。体外实验证实,小鼠的肾上腺有S M S 受体存在。从表1也可看
出,小鼠肾上腺的每克组织摄入量比较高,而且在注射后24
h 其值变化不大,而此时,血液
和其它脏器中的放射性都下降得很明显,因而建议最好在注射后24h 显像
。
图3 标记率与D T PA 2octreo tide
用量的关系
图4
标记率与反应体积的关系
图5
放化纯度随时间的变化
图6 样品放置不同时间的H PL C 谱
1——1h ;2——24h
81同 位 素 第10卷
表1 111I n -D TPA -octreotide 和111I n -D TPA 在正常小鼠体内分布(n =3,x θ±s ) %I D ?g -1(组织)
组织
时间 h
111
In 2D T PA 2octreo tide
0.25
0.51424111
In 2D T PA 1
血5.92±0.074.10±0.103.28±0.051.88±0.060.18±0.020.15±0.01肝2.41±0.122.20±0.091.73±0.061.09±0.010.75±0.010.25±0.04肺1.31±0.031.12±0.041.07±0.050.98±0.050.72±0.030.29±0.00肾16.93±0.5114.82±0.0811.18±0.127.77±0.093.27±0.142.14±0.04脾1.21±0.111.08±0.140.96±0.080.72±0.070.43±0.030.11±0.03心1.07±0.140.95±0.070.89±0.100.75±0.060.27±0.010.07±0.00肌肉0.88±0.130.76±0.090.55±0.110.42±0.030.12±0.040.17±0.01小肠1.11±0.151.07±0.150.84±0.080.63±0.050.21±0.020.09±0.01大肠1.51±0.061.37±0.101.24±0.111.06±0.070.56±0.050.23±0.05肾上腺
2.61±0.08
2.47±0.11
2.38±0.07
2.35±0.06
2.11±0.07
0.54±0.03
3 小 结
用37M B q 的111InC l 3溶液(1850M B q mL 111
InC l 3的HC l 溶液)和20ΛL 的D T PA 2oc 2treo tide 溶液(0.1m g mL D T PA 2octreo tide 的醋酸溶液),反应总体积控制在40-100ΛL ,室温静止反应10m in 即可完成标记反应。产物标记率达99%,比活度为277.5PB q m o l ,放化纯度>99%。标记后的产物应尽早使用,且在注射后24h 显像较为适宜。
参 考 文 献
1 Steven W JL ,K renn ing EP ,R eub i JC .T he Ro le of Som ato statin and Its A nalogs in the D iagno sis and T reat 2m en t of T umo rs
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3 Bakker W H ,A lbert R ,B run s C ,et al .[111In 2D T PA 2D 2Phe 1]2octreo tide ,a Po ten tial R adi opharm aceu tical
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4 BakkerW H ,K renn ing EP ,R eub i JC ,et al .In V ivo A pp licati on of [111In 2D T PA 2D 2Phe 1]2octreo tide fo r D e 2
tecti on of Som ato statin R ecep to r 2po sitive T umo rs in R ats
.L ife Sci ,1991,49:1593-1601.5 K renn ing EP ,Kw ekkeboom DJ ,BakkerW H ,et al .Som ato statin R ecep to r Scin tigraphyW ith [111In 2D T PA 2D 2Phe 1]and [123I 2T yr 3]2octreo tide :the Ro tterdam Experience W ith M o re T han 1000Patien ts .Eu r J N ucl M ed ,1993,20:716-731.
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9
1 第1期 王 凡等:111In 2D T PA 2octreo tide 的标记条件研究及初步动物实验
02同 位 素 第10卷
LABEL ING STUDY ON111I n-OCTREOT I D E
AND PR I M ARY AN I M AL TESTS
W ang Fan Fan Hongqiang X iao L un3 W ang Y ishan
J in X iaohai Chen D am ing B ai Hongsheng Cheng Zhen D u J in
(Ch ina Institu te of A to m ic E nergy,B eij ing102413)
AB STRA CT
O ctreo tide,a som ato statin analogue,is a u sefu l ligand fo r in vitro detecti on of som ato2 statin recep to r.111In2D T PA2octreo tide can be u sed fo r the visualizati on of som ato statin recep2 to r2po sitive tum o rs by gamm a cam era scin tigrap hy.In the p ap er,the labeling conditi on includ2 ing the effects of reacti on ti m e,the D T PA2octreo tide quan tity and the reacti on vo lum e on la2 beling yield are studied.T he labeling yield is analysed by H PL C,and it reaches up to99% w ithou t fu rther p u rificati on.Sp ectific activity of radi o labeled com pound is277.5PB q m o l,the radi ochem ical p u rity is m o re than99%.T he in vitro stab ility of111In2D T PA2octreo tide and the b i odistribu ti on in rats are m easu red.It is show n that the radi ochem ical p u rity decreases w ith stock ti m e and the%I D?g21in adrenals is h igher than o ther o rgan s.111In2D T PA2octreo tide clearance in tissues is slow er than that of111In2D T PA.
Key words 111In2D T PA2octreo tide labeling conditi on b i odistribu ti on
3Co rresponding au tho r:Ch ina In stitu te of A tom ic Energy,Beijing102413