植物离体快繁技术的综述 黄新 （生物科学技术学院2009级生物技术一班） 摘要：植物快繁技术是一种全新的育苗技术，是现代计算机智能控制技术与生物技术有机结合的高新农业技术。运用植物生长模拟计算机为植物创造最为适宜的温、光、气、热、营养、激素环境，使植物的生理潜能得到最大的发挥，植物的生根基因尽快表达，从而实现植物的快速生根。它的推广应用将会带来一次全新的育苗革命。本文简要介绍植物快繁技术程序、相关培养技术以及植物快繁相关问题的讨论。同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。 关键词：植物离体快繁、愈伤组织、不定芽增殖、腋芽增殖、愈伤组织增殖、体细胞胚增殖、玻璃化问题、褐化问题、应用前景 1植物离体快繁概况 1.1研究简史 离体微繁殖技术的应用，首先应归功于Morel，他在1960年首先建立了兰花离体繁殖的方法（原球茎繁殖）。目前已有近400种植物的离体繁殖已获得成功，其中许多具有重要经济价值的花卉(如兰花、菊花、石竹)、果树(草莓、无籽西瓜、葡萄)、经济作物(马铃薯、甘蔗)、林木(桉树、杨树)均已在种苗生产上广泛应用，取得了巨大的经济和社会效益。 我国快速繁殖植物的种类达443种之多荷兰是试管苗的生产王国 1.2植物离体快繁的定义 快速繁殖（rapid clone propagation）：也叫离体繁殖（in vitro
propagation）、微体繁殖（Micropropagation），是指在无菌条件下，将植物体的器官、组织或细胞培养于人工培养基中，并辅以人工控制环境，使其生长出完整植株的繁殖技术。 追究植物组织培养脱毒快繁技术的发展简史，在11世纪就出现的热处理脱毒法，最早解决一些作物的病毒病害问题[1]。本世纪50年代发展的植物组织培养技术为脱毒提供了一条有效途径。现在植物的脱毒技术有多种，其中应用最广泛的有三种：热处理法、茎尖培养脱毒法、抗病毒药剂法，将不同的方法相结合起来应用效果更好。它们的脱毒原理各不相同。 2植物离体快繁的技术程序 无菌材料的建立芽苗的增殖生根及移苗 2.1无菌材料的建立 （1）初代培养：取材消毒接种培养 （2）外植体的选择主要应考虑以下问题： a)繁殖对象的品种典型性。 b)植物在自然条件下的繁殖特点。尽可能取自然繁殖器官的适当 部位作外植体， c)外植体的取材部位和大小、生理状态。 2.2芽苗的增殖 增值方式：不定芽增殖、腋芽增殖、愈伤组织增殖、体细胞胚增殖 2.2.1不定芽增殖 a)不定芽：从现存的芽以外的任何器官、组织上通过器官发生重新形 成的芽称之为不定芽。 b)特点：繁殖系数高、遗传稳定性较好、继代次数有限 c)注意事项：激素浓度不能过高；避免使用2，4-D等活性强的生长素， 以减少变异发生。 2.2.2腋芽增殖 腋芽进行离体培养时可不断生长，逐渐形成芽丛，反复切割和转移可不
椿树阅读附答案 【原文】 椿树 蒋立中 ⑴我的老家坐落在一个小山冲里，三面环山，门前有一口池塘。山上树木苍翠，林间飞鸟和鸣；池塘里碧波荡漾，有莲有鹅有鱼虾，可以听“曲项向天歌”，可以看“鱼戏莲叶间”；池塘边并排种有三棵椿树，枝繁叶茂，粗壮挺拔。这里是个环境清爽宜人的地方。 ⑵这三棵椿树是父亲上世纪七十年代初种的。已经有四十多年了，和我的年龄差不多。父亲喜欢种树，房前屋后都种满了树，有两棵银杏，有五棵桃树，有四棵桂花树，还有一些不知名的树种，池塘四周种有垂柳。老家的土房子就掩映在这些花树之中，四季都有好景致。其中这三棵椿树长得最高大，粗约一米，高约二十米，像三把冲天撑开的大伞。每年立春刚过，那些枝桠上就悄悄地冒出新苗，长出新叶，慢慢地浓荫如盖了。树比人好。树虽然到了秋冬就枝枯叶落，可春夏一到，它又能泛青长芽，返老还童。如今父亲种的树依然活着，可他自己却永远离开了我。 ⑶椿树属落叶乔木。说来奇怪，椿树的树叶能发散不同的气味，有的发散臭味，有的发散香气，所以又分为香椿和臭椿。古代农市上把香椿称为椿，把臭椿称为樗。父亲种的三棵是香椿。春天的时候，只要从它们旁边经过，自然就有一股芳香扑鼻而来了。 ⑷我常想，树木无欲无求，怎么也有香臭之分？只有人才分香臭呢：某某臭名远扬，是个臭男人；某某很吃香，是个香饽饽。鲁迅先生甚至认为，连人的汗都有香臭之别，“弱不禁风的小姐出的是香汗，蠢笨如牛的工人出的是臭汗。” ⑸椿树苗可以做菜。香椿叶厚芽嫩，营养丰富，被誉为“树上蔬菜”。母亲在世时，喜欢炒椿树苗吃。母亲身体不好，不能爬树，摘椿树苗自然是我的乐事。年少的我机灵得很，像个瘦猴子，“嗖嗖嗖”爬到树上，一会儿功夫就摘下一竹篮。母亲站在树下张望，一边夸我，一边叫我小心。 ⑹母亲炒的椿树苗色香味俱全，色是绿色，香是清香，味道好极了。我一餐能吃大半碗。 ⑺记得小时候，只要是我喜欢吃的东西，母亲都会想方设法做给我吃。椿树苗啦、毛香粑啦、山芋粉啦，这些曾经的美味佳肴我吃得不少。 ⑻常常是这样的情景：我在那里狼吞虎咽，母亲在旁边看着我笑。好吃的东西母亲从不先动筷子，至多是等我吃饱了她才尝点剩余的。邻居的孩子也常来摘我家的椿树苗，母亲见了没半点不高兴。现在母亲也走了，我也很少再吃椿树苗了，可每逢春夏回家，我总还是忍不住要做一碗新鲜的椿树苗尝尝，虽然没有母亲烧的好吃，但也是别有一番滋味在心头。 ⑼椿树是很有喻意的，古代以萱代指母亲，以椿代指父亲，所谓“椿萱并茂”意即父母双全。那是人生的大幸事。 ⑽椿树也有许多应用价值：椿树质地坚韧，防虫防腐，是制作家俱的首选材料；椿树通直高挺，美丽壮观，移栽到城市里，是一种很好的观赏树和行道树；据说椿树还有一些药用疗效，药名为樗树子、樗荚、臭椿子、凤眼子。
第二章植物离体繁殖 植物离体繁殖: 利用组织培养技术对外植体进行离体培养，短期内获得遗传性一致的大量再生植株。也叫快繁或微繁。 和传统方法突出特点： 1、繁殖效率高:增值率高，生长速度快，可周年生产，在一个短暂的时间，由单一个体开始，能产生出大量的遗传组成相同的植株。（如苹果矮化砧木茎尖8个月可繁殖6万株，石刁柏一个腋芽一年可繁殖７万株） 2、培养条件可控性强：人为提供培养基及小气候，便于对环境进行控制，省去田间栽培繁杂劳动。 3、便于管理、占地面积小：30m2可存放1万多培养瓶，约10万多苗木。 4、利于种质资源的保存及交换。 快速繁殖的应用 （1）短期内获得大量形状优良、整齐一致的种苗群体。加快引进新种、新育良种的繁殖，促进优良品种推广和应用。（2）大量繁育原来常规方法不能进行无性繁殖、难繁殖和繁殖速度慢的一些植物，尤其对一些珍、稀、濒危的植物的繁殖有更重要的意义。 （3）作为培育新品种的有效手段，繁殖和保存育种材料。如远缘杂种、多倍体、突变体。 （4）通过茎尖培养等技术脱毒，扩增脱毒苗，达到提纯复壮良种的目的。 一、植物快繁的器官形成方式 由于植物种类不同，器官再生及快速繁殖的方式也不同。 1、短枝发生型：外植体为带叶单芽茎段，培养为完整植株。 特点：一次成苗，培养过程简单，容易移栽成活，遗传性状稳定。例如：葡萄、红薯等试管苗繁殖。 2、器官型：外植体带有顶芽或腋芽。培养后形成丛生芽，转入生根培养基，诱导生根成苗，扩大繁殖。 特点：由单芽到丛芽，繁殖速度快，遗传性状稳定，多数花卉、苗木的快繁属于此类。 3、器官发生型：直接由外植体上或从愈伤组织产生不定芽，经过脱分化与再分化成苗。 特点：繁殖速度快，由愈伤组织再生植株，遗传不稳定。烟草、水稻、小麦、番茄等。 4、胚胎发生型：外植体脱分化产生愈伤组织或细胞团，再分化为胚状体产生小植株（球形期、心形期、鱼雷期、子叶期）特点：发生数量大，速度快，结构完整，人工种子繁殖，遗传变异。 5、原球茎发生型：兰科。 茎尖或腋芽外植体通过形成原球茎，而发育为完整植株。 二、植物快繁的程序和关键技术 离体无性繁殖的程序包括：无菌母株的制备，继代芽的增殖，芽苗生根培养，再生植株的锻炼和移栽。 1、无菌母株的制备 初代培养：在无菌条件下，制备无菌繁殖的材料称为无菌母株，或繁殖母株。 选取遗传性状优良、稳定，生长健壮、无病虫害植株上的外植体，经适当有效灭菌处理后，接种在培养基上，诱导其产生芽（腑芽或不定芽）和愈伤组织。 注意:培养基激素配比，取材的年龄、大小和生理状态。 初代培养的启动生长方式:腋芽被刺激后生长;茎段、叶片、其它器官伤口处产生不定芽；外植体切口产生愈伤组织。此阶段一般需要4-6周。 ↗愈伤组织 2、继代芽的增殖 无菌母株再次切割继代培养，芽分化增殖成丛芽，加快繁殖速度。 在快速繁殖过程中，随培养时间和继代次数增加，芽分化和生长速率降低，称为驯化现象，与内源激素和恒定培养条件有关，故可以调节激素配比或变温处理，提高繁殖速度。 3、芽苗生根培养 诱导无根苗生根的方法有两种：试管内生根和试管外生根。 1）试管内生根：将无菌小枝条转入生根培养基中进行培养。 提高生根率的措施： ①降低无机盐和有机物含量（如1/2MS或1/4MS培养基）
目录 摘要 (1) 关键词…………………………………………………………………………………………… 1 Abstract…………………………………………………………………………………………… 1 Keywords (1) 1 污染 (2) 1.1 污染的种类 (2) 1.2 污染的因素 (2) 1.2.1 外植体本身 (2) 1.2.2 外植体灭菌 (2) 1.2.3 接种和培养环境 (3) 2 褐化 (3) 2.1 褐化原因 (3) 2.2 影响褐变的因素 (3) 2.3 防止褐变的方法 (4) 2.3.1 外植体的选择 (4) 2.3.2 适宜的培养基和培养条件 (4) 2.3.3 加入抗氧化剂和吸附剂 (4) 2.3.4 反复转接 (4) 3 玻璃化 (4) 3.1 玻璃化苗的特点与发生原因 (4) 3.1.1 玻璃化苗的特点 (4) 3.1.2 发生原因 (4) 3.2 影响玻璃化苗的因素 (5) 3.2.1 生长调节剂 (5) 3.2.2 温度 (5) 3.2.3 湿度 (5) 3.2.4 消毒方法 (5) 3.2.5 光照时间 (5) 3.2.6 培养基 (5) 3.2.7 继代次数 (5) 4 其他常见问题及其解决措施 (5) 4.1 初始培养阶段 (5) 4.2 继代培养阶段 (6) 致谢 (7) 参考文献 (7)
浅析植物离体快繁过程中常见的问题 摘要 探讨了影响了植物组织培养的主要因素，分析了污染、褐变、玻璃化及其他常见问题，并提出了解决措施。认为：污染主要是由灭菌不彻底和环境不洁造成的，加强外植体和培养基的灭菌，对培养环境及其用具彻底消毒，可大大降低污染率。植物品种、取材部位及环境条件与褐变的发生密切相关，选择适宜的外植体，进行外植体，调价抗氧化剂和吸附剂等可有效控制褐变。培养基的种类、温度、通气状况等会影响玻璃苗的发生，选择适当培养基，降低温度，增强光照，改善通风等可使玻璃化率降低。 关键词 组织培养；污染，褐化，玻璃化 According to the rapid propagation process of in vitro in common problem Abstract Discusses the influence of the main factors of plant tissue culture, this paper analyzes the pollution, Browning, vitrification and other common problems, and proposes the measures. Think: pollution is mainly composed of sterilization is not complete and the environment caused by the unclean, strengthen the explant and culture medium sterilization for training environment and its appliance disinfection, can greatly reduce the rate of pollution. Plant variety, based site and environment and the occurrence of Browning closely related, the choice of appropriate explant, explant, introduce antioxidants and adsorbent, etc can effectively control the Browning. The kinds of culture medium, temperature and ventilation situation will influence the occurrence of glass seedlings, choose proper culture medium, reduce the temperature, and enhance the illumination, improve ventilation can make glass transition rate to decrease. Keywords Tissue culture; Pollution, Browning, vitrificatio
植物组织培养练习题 1.植物组织培养：指要人工控制的条件下，将植物体的任何部分，或器官、或组织、或细胞， 进行离体培养，使之发育形成完整植物体。所谓人工控制的条件，即营养条件和环境条件； 植物体的任何一部分是指根、茎、叶、花、果、实以及它们的组织切片和细胞。 2.愈伤组织培养：将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在，而使其细胞 脱分化形成愈伤组织，然后通过再分化形成再生植株。 3.外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质 体等。 4.脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。 5、接种：把经过表面灭菌后的外植体切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基上的 全部操作过程。 6、褐变：外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类 物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。 二填空 植物组织培养根据培养方式分为固体培养和液体培养。 2、植物组织培养类型分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培养。 3、组织培养的主要应用领域有快速繁殖、脱毒、体细胞无性系变异和新品种培育、单倍体育种、种质保存、遗传转化、次生代谢物的生产等几个方面。 4、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为快速繁殖和脱毒培养两种类型。 5、一般组织培养的几道工序如下：培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种，培养；试管苗的驯化、移栽与初期管理。 6、在进行植物组织培养室设计时，其设计应包括洗涤室、准备室、灭菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室、摄影室等分室，另加驯化室、温室和大棚。 7、培养基的成分主要包括无机营养、氨基酸、有机附加物、维生素、糖、琼脂、激素、活性炭、PH。 8、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 9、细胞全能性是指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 10、玻璃化现象是指试管苗的一种生长失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。
植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用人工培养基，对离体的植物胚胎、器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。又称为植物离体培养 离体生态学：是指研究离体培养环境条件控制的科学，其研究对象是培养基、植物材料和人工环境条件 外植体：用于离体培养的那部分植物器官、组织或细胞 愈伤组织（callus）：是指外植体因受伤或在离体培养时，其细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织 植物组织培养的特点 1.组培技术是无菌操作技术。 2.组培材料处于完全的异养状态。 3.组培材料可以是离体状态的器官、组织、细胞或原生质体。 4.组织培养物可以形成克隆（clone，无性繁殖系），也可以进行茎芽增殖或生根 5.组培容器内的气体和环境气体可通过封口材料进行交换，相对湿度通常是几乎100％，因此，组培苗叶片表面一般都无角质层或蜡质层，且气孔保卫细胞功能缺乏，气孔始终都是张开的。 6.组培的环境温度、光照强度和时间都是人为设定的，其参数可调 植物组织培养的研究类型 组织培养 器官培养 胚胎培养 细胞培养 原生质体培养 植物组织培养的研究任务 研究离体培养条件下，细胞、组织或器官所需营养条件和环境条件，细胞、组织或器官的形态发生和代谢规律，植物脱毒方法和机理，植物特别是一些难繁植物的大量快速繁殖方法，细胞融合方法和机理，再生个体的遗传和变异，种质资源的离体保存机理和方法等 德国植物学家Schleiden和动物学家Schwann于1838-1839年提出的细胞学说 德国植物学家Haberlandt于1902年提出了植物细胞具有全能性 李继侗和沈同1933年成功培养了银杏的胚。 1952年，Morel和Martin提出了植物脱毒（virus free）技术 Guha和Maheshwari等——花药培养 Cocking等-原生质体培养
目录 绪论 (1) 1. 离体快繁过程中的问题、原因及防治措施 (1) 1.1 污染问题 (2) 1.1.1 污染的来源 (2) 2.1.2 污染的防治措施 (2) 1.2 褐变问题 (3) 1.2.1 褐变的原因 (4) 1.2.2 克服外植体褐变的措施 (4) 1.3 玻璃化问题 (4) 1.3.1 玻璃化发生的原因 (4) 1.3.2控制组培苗玻璃化的措施 (5) 1.4 遗传稳定性 (5) 1.4.1 影响遗传稳定性的因素 (6) 1.4.2 提高遗传稳定性，减少变异的措施 (5) 1.5 黄化问题 (5) 1.5.1 黄化原因 (6) 2. 离体快繁的前景与探讨 (6) 2.2适应现状的需求 (6) 2.3存在问题 (6) 参考文献 (6) 致谢 (6)
浅析植物离体快繁中常见的问题 摘要 植物组织培养是20世纪初发展起来的一项新技术，是现代农业生物技术的一个重要组成部分，已经日益广泛地应用于园艺植物的脱毒和快繁等方面。本文针对植物组织培养中常出现的问题进行了分析，探讨了污染、褐变、玻璃化、遗传稳定性、黄化等发生的可能原因，并提出了相应的防治措施。 关键词 离体快繁；污染；褐变；玻璃化；遗传稳定性；黄化 Analysis of the Common Problems in Plant Vitro Propagation Pick to Plant tissue culture is developed in the early 20th century, a new technology of modern agricultural biotechnology, is one of the important constituent, has increasingly widely applied in the enviroment of horticultural plants and rapid propagation, etc. Aiming at the plant tissue culture often appears the question were analyzed, pollution, Browning, vitrification, genetic stability, such as possible reasons Browning, and puts forward the corresponding prevention cuo Key words Propagation in vitro; contamination; browning; vitrification; genetic stability; etiolation
植物快繁技术/植物克隆技术/植物傻瓜克隆技术/植物非试管高效快 繁技术 减小字体增大字体作者：本站来源：本站整理发布时间： 2008-1-1 18:33:32 植物快繁技术简介 所谓植物非试管高效快繁技术也就是植物克隆技术，也有人称之为植物非试管快繁技术、植物快繁技术、植物全光照喷雾育苗技术、全光雾插技术、微材料或微组织扦插育苗技术，喷雾育苗技术、喷雾扦插育苗技术、傻瓜克隆。无论叫做植物快繁还是植物克隆其原理和方法是一样的。 植物克隆技术（植物快繁技术）的关键是喷雾，十几年前就有权威单位推广全光照喷雾育苗技术，实际上也就是后来有人称之为植物非试管高效快繁技术，而现今更多被称为植物克隆、傻瓜克隆等时髦词汇。过去开发的喷雾全套设备是机械式，成本高达数万元，且容易锈蚀和损坏，一段时间后就没人再使用，而自从引进以色列微喷（头）技术后，微喷雾问题顺利以低成本形式解决，于是植物克隆技术（植物快繁技术）得以在全国迅速推广普及。 植物快繁技术（植物克隆技术）的推广的另一障碍就是自动控制仪的问题，进口的温湿控制设备好用但价格高，所谓的农业智能化计算机系统除了价格更高之外还总是不能成熟，使用起来问题百出，经常造成育苗的失败，笔者使用两年后才不得已开发了国产育苗仪，其低廉
的价格和丰富实用的功能很快被全国同行赏识。 植物克隆技术（植物非试管高效快繁技术）现在的投入只需2000余元，大力推广植物克隆技术、植物快繁技术利国利民。 植物非试管高效快繁技术的起源、应用和进展 植物傻瓜克隆技术是20年前从国外引进，又经过我国众多农业专家花费二十余年时间，逐步完善并成熟运用于规模生产一个系统配套，用于多种经济植物大规模无性快繁产业化生产的实用技术，又称非试管快繁技术、喷雾快繁技术等。此技术是一项崭新经济植物苗木快繁技术体系，它将植物组织培养快繁苗从试管培养基中解放到田间大地，是一场无性繁殖快速育苗的革命！是现代农业生物技术研究的一大创举！ 该技术育苗生产成本低，适用于国内外苗木交易市场和经济植物种苗繁殖工程。绿色快繁产业是一个永久性高效益产业，它可以带动制药产业、林纸产业、林草产业、园林绿化等其它产业，进而促进农业产业化、林业产业化、制药产业化和农业现代化的快速发展。还有利于生态城市、园林城市、森林公园、自然保护区的建设、生态环境改善、城市生态系统的改变、无性系造林、天然林保护工程、城市绿化工程以及与人们生活息息相关的如粮食作物、花卉、蔬菜、无公害蔬菜、野生蔬菜、濒危野生植物、果树、山野菜、药用植物、珍稀植物等高效经济植物以及新经济资源的开发利用。 植物快繁技术是古今中外人们十分关注的问题。从传统的扦插繁
0．填空 1.根据培养的材料,植物组织培养分:愈伤组织培养、(器官培养、细胞格养、原生质体培养(悬浮培养 2.植物组织培养的发展分为三个阶段:萌芽阶段、奠基阶段，快速发展和快速发展和应用阶段 3，1902年,Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说,1934年, White出版了《植物组织培养手册》培养等类型从而使植物组织培养为一门新兴学科。 一．填空、 1，组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、调机、_天平、显微镜、_蒸馏水，发生器，酸度计 养基成分主要包括①无机营养成分、②有机营养成分)、_③植物生长调节物质、_④碳水化合物、⑤其它物质 3、培养基最常用的碳源是_蔗糖,使用浓度在1%-5%常用3% 4、糖在植物组织培养中是不可缺少的,它不但作为离体组织棱以生长的碳源而且还能维持培养基渗透压 5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物般用量6-10g/L之间 6.驯化的目的:在于于提高试管苗对外界环境条件的适应性,提高其光合作用的能力,促使试健壮,提高苗的移裁成活 7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向,其比值高:有利于根的形成和愈伤组织的形成:低:有利于芽的形成 8、培养基灭菌一般在108kPa的压力下,锅内温度达_121℃C,维持_20-30min、 9.选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。 10、诱导胚状体比诱导芽的优点:(1)数量多、(2)速度快、_(3)结构完整 11、试管苗的生态环境:高温且恒温、高湿、弱光、无菌 12、培养基中加入活性炭的目的:利用其吸附能力,减少一些有害物质的影响大 13、筛选培养基的方法:单因子试验法、多因子试验法、广谱实验法 14、植物培养技术:灭菌、接种种、培养、驯化四个环节 15、试管苗的驯化注意:基质、温、光、水、肥、气的综合管理 二．填空 1.绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段 2.愈伤伤组织形成大致经历诱导期、分裂期一和分化期三个时期 3、愈用植物生长调节物质时要注意:种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值4.愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式 5.组织培养细胞再分化包括四个水平:细胞水平的再分化、组织水平的再分化、器官水平的再分化(器宣发生)和植株水平的分化 三．填空: 1.植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 2、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。前者主要是对茎尖长度不超过,最小只有几十微米的茎尖进行培养,目的是获得无病毒植株:后者是对几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养,目的是离体快繁 3.不定芽产生的途径一是从外植体上直接产生二是从由外植体诱导产生的愈伤组织上产生 4.离体叶培养是指包括叶原基、叶栖、叶鞘、叶片、子吐等叶组织的无菌培养 5.在离体叶培养中,6-BA和KT利于芽的形成;24D利于愈伤组织的形成 四．填空 1、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养 2、离体胚的培养分为二种类型:。成熟胚培养和_幼胚培养六
植物组织培养：离体条件下利用人工培养条件在无菌情况下培养、生长、发育再生出完整植株的过程。外植体：由活体植物体上提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。植物细胞的全能性：植物细胞具有该植物体全部遗传的可能性，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。脱分化：将来自已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。再分化经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可有转变为各种不同细胞类型的能力。 第二章设备与培养条件 实验室组成：化学实验室、洗涤菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室。1化学实验室：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装等。主要设备：药品柜、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器. 2 洗涤、灭菌室：完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。主要设备：水池、操作台、高压灭菌锅、干燥灭菌器（如烘箱）等。3无菌操作室（接种室）：主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。主要设备：紫外光源、超净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针）等。4培养室：培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。主要设备：培养架（控温控光控湿）、摇床、培养箱、紫外光源等。5细胞学实验室：用于对培养物的观察分析与培养物的计数等。主要设备：双筒实体显微镜、显微镜、倒置显微镜等。6其他小型仪器设备：分注器、血球计数器、移液枪、过滤灭菌器、电炉等加热器具、磁力搅拌器、低速台式离心机等。 第三章培养基及其制备 培养基的成分主要可以分水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。常用的培养基及特点如下：(1)MS培养基特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。(2)B5培养基其主要特点是含有较低的铵，这可能对不少培养物的生长有抑制作用。(3)White培养基其特点是无机机盐数量较低，适于生根培养。（4）N6培养基其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。(5)KM —8P培养基其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。1无机营养--①大量元素，指浓度大于0.5mmol／L的元素等。其作用是：(1)N 是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，是生命不可缺少的物质。(2)P 是磷脂的主要成分。在植物组织培养过程中，向培养基内添加磷，不仅增加养分、提供能量，而且也促进对N的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。(3)K 对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系。K增加时，蛋白质合成增加，维管束、纤维组织发达，对胚的分化有促进作用。但(4)Mg、S和Ca、Mg 是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；S 是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。Ca是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用，铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。同时，它又是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用。也是植物组织培养中不可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。②微量元素，作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢的调节③缺素症④稀土元素，对试管苗的生长分化生根愈伤组织诱导生长体细胞胚的发生以及提高次生代谢物的产量有促进作用2有机营养成分①碳源，对细胞增殖起作用也影响细胞分化②维生素类，对生长分化等有很好促进作用③肌醇，糖类的转化中其重要作用，是细胞壁的构建材料④氨基酸，可直接被细胞吸收⑤天然复合物，对细胞的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显3培养材料的支持物4活性炭吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质，抑制外植体褐变防止玻璃苗的产生促进培养物生长和分化促进生根5抗生素防止外植体内生菌造成的污染6抗氧化物，作用抑制外植体的褐变7硝酸银促进愈伤组织器官发生或体细胞胚胎发生的作用，使原再生困难的物种分化再生植株母液的配置与保存：①大量元素母液，即含N.P.K.Ca.Mg.S等六种盐类的混合溶液，一般配成浓度10倍或20倍母液。②微量元素母液，含有除Fe以外的B.Mn.Cu.Zn,Mo.CL等盐类的混合溶液，因含量低，一般配成100倍或200倍母液。③铁盐母液④有机物母液⑤植物生长调节物质母液1生长素类，作用促进细胞伸长和分裂，促进生根抑制器官脱落，性别控制，延长休眠，顶端优势，单性结实等作用2细胞分裂素类作用，促进细胞分裂和分化，诱导胚状体和不定芽的形成，延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成。3赤霉素作用，加速细胞的伸长生长，促进细胞分裂。脱落酸具有抑制细胞分裂和伸长促进脱落和衰老促进休眠和提高抗逆等能力4多胺作用，调控部分植物外植体不定根不定芽画押体细胞胚发生发育以及延缓原生质体衰老促进原生质体分裂及细胞克隆形成方面具有明显的效果5多效唑作用，控长矮化，促进分枝，分嶪促进生根成花坐果，延缓衰老，提高叶绿素含量，增强植物抗逆性等培养基的配置准备工作1实验用具的准备2试剂药品的准备3 Vo=V1/t 或Vo=(C1*V1)/Co Vo=吸取母液体积（mL）V1=配置培养基体积（mL）Co=母液浓度（mg/L）C1=配置培养基的浓度（mg/L）T=母液扩大倍数①取规定数量的糖源和凝固剂置于烧杯内，加蒸馏水至培养基最终体积的3/4在恒温水浴中加热使之溶解，加热过程应不断搅拌，防治结块。②根据计算所需量一次加入大量元素微量元素铁盐有机物生长调节物质母液及其他特殊附加物，搅拌均匀。③加水定容至规定体积，搅拌均匀。④调整培养基的PH值。⑤分装⑥封口 第四章植物材料 植物材料幼年期特点：植物生长快，呼吸强，核酸代谢和蛋白质合成快。成年期：代谢和生理活动慢，光合速率和呼吸速率下降。外植体的选择：1植物的种质选择2外植体的增值能力3外植体的大小4外植体的年龄和着生部位5取外植体的季节和时间6木本材料的特殊性灭菌的常用化学药品:1乙醇2升汞3次氯酸钠4漂白剂5过氧化氢6其他用于外植体体表灭菌的化学药品①茎尖茎段以及叶片等材料的灭菌流水冲洗，70％乙醇浸泡，冲洗，取0.1％升汞。最后用无菌水洗涤干净，备用。②果实和种子的灭菌冲洗20min 再用70％乙醇灭菌30s，用无菌水洗涤3次，取出果实内种子进行培养。如暴露了，用10％次氯酸钙溶液浸泡30min。
第三章植物离体快速无性繁殖技术和脱毒培养技术 第一节、植物离体快速繁殖技术 一、植物离体快速无性繁殖的概念及其意义 1 概念 离体无性繁殖：指利用组织培养的方法进行植物离体培养，在短时间内获得大量遗传性一致的个体的方法，又称“离体繁殖，快速无性繁殖、微型繁殖”。 试管苗：由离体无性繁殖获得的植株称试管苗。 无性系：指有同一个体通过无性繁殖产生的一个群体，它们的遗传背景基本一致。 2 应用 （1）用来加速难繁殖和繁殖速度慢的植物的繁殖。 （2）无病毒苗木的繁殖。 （3）用于某些杂合园艺植物的繁殖。 （4）用于需要加速繁殖的特殊基因型。 二、植物离体快速无性繁殖的特点 1 优点 （1）首先体现在一个“快”字上。 （2）可人为控制条件，不受大自然的干扰 （3）快速培养脱毒苗。 2局限性 （1）一些植物快速无性繁殖技术的某些环节还没有突破。 （2）要对其成本、技术等进行估算。 （3）随继代次数增多，培养材料的分化能力下降。 三、离体无性繁殖中器官的发生形式 1 不定芽型 ２器官型 ３器官发生型 ４类胚体发生型 ５原球茎型 四、离体无性繁殖的程序 ?无菌母株的制备 ?茎芽的增殖 ?诱导生根 ?炼苗 ?再生植株的鉴定 五、植物组织培养中应注意的问题 １褐变 （１）褐变
褐变：指在组织培养过程中，由培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而死亡的现象。 （２）克服褐变的方法 选择适宜的外植体（幼嫩材料、春季取材） 改善营养条件（连续培养） 在培养基中加入一些附加物 ２污染 （１）特点： 细菌污染的特点 在培养材料附近出现黏液状菌斑，一般接种1-2天一5可发现。特别应注意一种呈乳白色的细菌污染，这种细菌为芽孢杆菌，外被荚膜，耐高温，一般灭菌剂难以杀死，可随培养材料、用具传播，可出现在培养基表面，也可呈滴形云雾状存在于培养基内，发现及时淘汰，并对用过的器具严格高温灭菌。 真菌污染的特点 培养基上长霉，一般接种3-5天就可先，霉的颜色有黑、白、黄等，真菌污染的特点是污染部分有不同颜色的霉菌，接种3天，有时多达10天才能表现。 （２）克服方法： ?外植体灭菌不彻底 ?培养基及各种器具清洁灭菌不彻底 ?人为因素 ?超净工作区被污染 ?环境不清洁 ３玻璃化 （１）玻璃化 玻璃化：是试管苗的一种生理失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的茎、叶往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。 （２）克服方法 ?增加固体琼脂浓度，使细胞吸水受到阻碍。 ?提高培养基中的Ｃ、Ｎ比。 ?控制温度，增加自然光照。 ?附加一些物质 第二节、植物的脱毒技术 一、病毒的特性及其侵染 １病毒的特性 ２植物病毒的侵染途径 ３病毒在植物体内分布不均匀的原因 （１）分生组织中无微管系统，病毒不易移动。 （２）在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性很强，有竞争状态，抑制了病毒的复制。（３）在分生组织中存在高水平的内源激素，可以抑制病毒的增殖。 二、脱毒的方法 １物理方法
植物组织培养的基本步骤 成熟细胞离体——（脱分化）——分生细胞——（分裂）——愈伤组织——（再分化）——形态建成————完整植株。 培养基的主要成分 【水分】 【无机盐】1.大量元素：N，P，K，Ca，Mg，S（由相关的无机盐提供） 2.微量元素：Fe，B，Cu，Mn，Mn，Zn，Co 【有机营养成分】1.糖类 2.维生素 3.氨基酸 4.肌醇 5.天然有机物【植物生长调节剂】1.生长素 2.细胞分裂素 3.其他生长调节剂 【凝固剂】琼脂 【其他物质】1.活性炭 2.抗生素 3.抗氧化物质 4.硝酸银 培养基和组织培养用具的灭菌方式 【培养基，无菌水】高压蒸汽灭菌，0.105MPa灭菌15~30分钟 【移栽基质】曝晒，甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌1~2h 【接种室，缓冲室】紫外线灯照射30min，或气雾消毒剂 【超净工作台】紫外线灯30min，之后打开风机过滤除菌 【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒 【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭，之后用火焰灼烧灭菌 【培养室】3%来苏尔喷雾，或甲醛，气雾消毒熏蒸 【皮肤】先用肥皂洗手，接种前用70%乙醇擦拭 【瓶口，管口】70%乙醇擦拭，用火焰封口
【培养瓶表面】70%乙醇擦拭 【台面，桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒 植物外植体的灭菌方式 【茎尖，茎段，叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒，再用无菌水冲洗1次。 2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡5~10min。 3.若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴吐温。 4.消毒时要不断震荡，使植物材料与消毒剂充分接触。 5.最后用无菌水冲洗3~5次。 【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下，再用无菌水冲。 2.用2%次氯酸钠浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【种子】用10%次氯酸钠浸泡20~30min，或0.1%升汞消毒5~10min，然后再用无菌水冲洗3~5次。 【花蕾】1.用70%乙醇浸泡10~15秒，无菌水冲洗一次。 2.在漂白粉中浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【根及地下部器官】用0.1%升汞浸泡5~10min 或用次氯酸钠浸泡10~15min，再用无菌水冲洗3~5次。 【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】
试卷编号NO: 高等函授教育《植物组织培养》试题 学号: 姓名: 一名词解释:(10*2分=20分) 1、植物细胞组织培养 2、细胞全能性 3、脱分化 4、外植体 5、试管苗驯化 6、间接不定芽发生 7、双极性 8、微体嫁接 9、人工种子 10、体细胞无性系变异 二填空:(30*1分=30分) 1、目前植物组织培养应用最广泛的方面就是 与。 2、由脱分化的细胞再分化出完整植株有两种途径,一种叫做 ,另一种叫做。 3、培养用具的常用灭菌方法有、、 。 4、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定,对其灭菌时不能进行 ,而要进行。 5、一般来说,黑暗条件下有利于的增殖,而往往需要一定的光照。 6、植物离体授粉技术通常包括、、 三个方面。 7、一般液体培养的继代时间较短, 继代一次;而固体培养继代时间可以长些, 继代一次。 8、外植体器官发生的三种途径包括、、。 9、从再生植株倍性来瞧,小孢子培养通常产生植株,胚培养通常产生植株, 通常产生三倍体植株。 10、脱毒苗鉴定与检测的主要方法有、、 、。 11、在生长素中, 对于许多作物花粉的启动、分裂、形成愈伤组织与胚状体起着决定性作用,但就是对却有抑制作用。 12、用平板培养法培养单细胞或原生质体时,常用 来衡量细胞培养效果。 13、用药剂处理就是诱导染色体加倍的传统方法。 三计算题(1*10分=10分) 某培养基的配方就是MS＋BA 2、0mg/L＋NAA 0、5mg/L＋2、5%蔗糖＋0、7％琼脂粉。MS母液的浓度分别就是:大量元素２０倍,微量元素500倍,铁盐100倍,有机物５０倍;BA母液浓度1、0 mg/ml ,NAA母液浓度0、1mg/ml。要配制400ml该培养基,需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？(要求写出计算步骤) 四简答题(5*5分=25分) 1、造成组织培养过程中发生污染的原因有哪些？如何有效控制污染？ 2、简述外植体消毒的一般步骤。 3、胚培养在科学研究及生产实践中有哪些应用？ 4、结合花粉培养,简述瞧护培养法。
多年来，人们总是讴歌松柏，称道杨柳，也有人颂扬木棉……可从来没有人赞美过臭椿树。 松柏常青，不畏严寒，那是傲霜斗雪的勇士，杨柳青绿如烟，袅娜多姿，不时激起人们的诗情画意；木棉那火红的花朵，象征着革命的热情和希望，不愧为南疆的英雄……这些树，受到人们的称颂，原是合乎情理的。 至于臭椿树，它皮粗色黑，谈不上雅观；枝干扭曲，不能作栋梁之材；叶有臭气，不堪入鼻。真可说是外貌丑，材质差，气味恶，有谁去喜欢它呢！ 但是，久而久之，我发现臭椿树自有许多长处。 首先，它成长快，一年小，二年大，三年过后树冠就可以荫庇行人和耕畜。其次，椿树的树叶是椿蚕的饲料。尽管人们厌恶椿叶的臭气，臭椿树还是默默地养育着那些蚕儿。再次，臭椿树对于人几乎一无所求。随便一粒种子，不管风把它刮到什么地方，只要有一点合适的土壤，它都会自己发芽，成长。它从不会让虫蚁蛀蚀，无须人们的特殊关心和照料。长成后，它悄然把自己的子孙交给风儿带往异域他乡，安家落户。 臭椿树就是这样，虽然其貌不扬，其味不香，但是它仍在悄悄地、不声不响地造福于人类。 松柏理应讴歌，杨柳值得称道，木棉应受颂扬……而我内心深处，却总想着要赞美臭椿树，歌颂它那无愧于自己的生命，尽管受到冷遇，却仍然默默地做出贡献的崇高品格。 l．把文章中“赞美”一词的近义词找出来写在下面。 2．给文章分段，并概括段意。 3．给文章拟一个标题，写在文前横线上。 4．用“”画出文章的中心句。 5、填空。 ①人们讴歌松柏是因为；称道杨柳是因为；颂扬木棉是因为。 ②一般人不喜欢臭椿树是因为；而作者喜欢臭椿树是因为。 ③文章采用借物喻____的写作方法，借赞美臭椿树___________________的形象，赞扬那种_________________的人。 答案：2．第一段（第l～3自然段）讲臭椿树不像松柏、杨柳、木棉那样受人赞美的原因。第二段（第4～6自然段）讲臭椿树的许多长处。第三段（末尾段）讲作者赞美臭椿树的原因，同时抒发了对那些不为名，不为利，默默地为社会奉献的人的崇敬感情。 3．我爱臭椿树或我赞美臭椿树。 5、③人；无愧于自己的生命，尽管受到冷遇，却仍然默默地做出贡献；尽管受到冷遇，却不计名利，仍然全心全意为人民服务。
植物组织培养试题 一、名词解释 1、外植体：在植物组织培养过程中，由植物体上切取的根、茎、叶、花、果、种子等器官 以及各种组织、细胞或原生质体等统称为外植体。(重点识记) 2.玻璃化现象: 玻璃化现象指当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈透明水浸状的现象。(重点识记) 3愈伤组织培养:是指将母体植株上的外植体,接种到无菌的培养基上,进行愈伤组织诱导,生长和发育的一门技术. (重点识记) 4 植物细胞全能性：一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在适当的条件下可以通过分裂、分化再生成一个完整的植株。(重点识记) 5愈伤组织：在人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁 细胞。 6胚胎培养——将植物的胚胎和母体分离，培养在已知化学成分的培养基上。 7接种：经过表面消毒的植物材料，按照不同的要求切割或分离出器官、组织、细胞，并将它们转接到无菌的培养基质上的全过程。 8花粉培养：从花药中取出花粉进行无菌培养，以获得单倍性愈伤组织，进而长出单倍体植株的技术。 9体细胞杂交：指将植物不同种、属，甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合，然后进行离体培养，使其再生杂种植株的技术。 10 单倍体育种：利用植物组织培养技术诱导产生单倍体植株，再通过某种手段使染色体组 加倍，从而使植物恢复正常染色体数。 11 超低温冷冻保存：根据生物种子资源，在极低温度下，新陈代谢减缓或降至极低，加入一定的冷冻防护剂，而使之得以长期保存的方法。 12 细胞融合：在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。 13 愈伤组织：在人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。 14热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。 15平板培养法：是把单细胞悬浮液和融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。 16消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。