猪瘟抗体快速检测试剂盒
——（胶体金法）使用说明书
一、原理：本试纸采用酶联免疫原理和胶体金层析技术制成快速检测猪血清中的猪瘟抗体。将猪瘟抗原包被在硝酸纤维素膜的检测线（T）上，兔抗猪瘟抗体包被在硝酸纤维素膜的质控线（C）上，用胶体金标记的猪瘟抗原干燥后置于玻璃纤维素膜下端。当血清加入加样孔内，由于层析的原理，血清开始沿纸条移动，当遇上干燥的金标抗原，将其溶解，并带着金标抗原继续往上移动，至硝酸纤维素膜的检测线。如果样品中有猪瘟抗体存在时，会与玻璃纤维素上的金标猪瘟抗原和包被在检测线上的猪瘟抗原，在检测上形成一个夹心的免疫复合物，呈一条紫红色线。样品中的抗体越高，色线颜色越深，判定为阳性。如果样品中没有猪瘟抗体，检测线（T）线上没有色带出现，判定为阴性。样品和金标抗原继续往上移至质控线时，此处的兔抗猪瘟抗体将会同金标猪瘟抗原结合，在质控线（C）上形成一条紫红色线，证明本试纸有效。整个试验仅需20分钟。操作简便、快速、准确、灵敏度高，直观、结果容易判定。
二．产品组成：1、检测卡(1个)：由一特制的塑料检测卡将猪瘟抗体检测试纸条夹于卡内，卡面上设有加样孔和观察孔。加样孔作为加入待检血清，观察孔内为试剂检测线（T），试剂质控线（C）。一个检测试剂卡用一个铝箔袋包装，内装干燥剂。2、吸样管1个；3、5份塑料手套；4、使用说明书一份。
三．操作方法：1．用1.5ml样品管，采血0.5~1ml待检测血清自然析出或用离心机离心10分钟左右，使血清析出。2．将检测卡平置于桌面上，用吸样管吸取被检血清，在检测卡的椭圆形加样孔内加入2滴约80~100ul。在室温下反应20分钟判定结果。（检测卡如在4℃保存，必须恢复至室温后方可进行检测）
四．结果判断：1．阳性：在检测线（T）处，质控线（C）处，各出现一条紫红色条带，判定为阳性；检测线（T）处条带色泽的深浅，依检测样品中猪瘟抗体效价的高低而变化，效价越高色带越深，反之越浅。2．阴性：在质控线（C）处，出现一条紫红色条带，检测线（T）处未出现一条紫红色条带，说明检测样品中无猪瘟抗体存在。3．无效：在检测线（T）处，质控线（C）处，都无明显条带出现，判定为试纸条无效。
五．诊断参考：被检样品加样后20分钟可与对照卡的色带滴度进行参考比较。1．当被检样品检测线（T）条带的色泽≥对照卡中1：16效价时，说明检测样品中猪瘟抗体的滴度较高，暂不需要进行猪瘟疫苗的接种免疫。2．当被检样品检测线（T）条带的色泽＜对照卡中1：16效价时，说明检测样品中猪瘟抗体效价不能抵御猪瘟强毒攻击的最低保护滴度，为进行猪瘟疫苗接种时间。3．当被检样品检测线（T）处无明显色带出现，说明被检测样品中没有猪瘟抗体。如果猪群健康，应当及时进行猪瘟疫苗接种。
食品安全快速检测箱 瘦肉精快速检测卡作业指导书 1 目的 本作业指导书规定了瘦肉精快速检测卡的使用操作与维护程序，确保检测结果准确可靠。 2 适用范围 瘦肉精快速检测卡的使用。 3 依据 瘦肉精快速检测卡使用说明书。 4 职责 4.1操作人员按照本规程使用仪器，对仪器进行日常维护，作使用记录。 4.2保管人员负责监督仪器使用是否符合规程，对仪器进行定期维护、保养。 4.3科室负责人监督上述人员履行有关职责。 5 试剂组成 “瘦肉精”快速检测卡；展开液；一次性塑料吸管；一次
性塑料手套；对照液。 6 标本收集 肉及内脏样本（包括精肉、肝脏、肺脏和肾脏）立即检测或收集在塑料袋中送检。若不能及时检测，样本在2-8℃冷藏可保存24小时，-20℃冷冻保存1周，冷冻时忌反复冻融。 7 操作步骤以及结果判读 ⑴测试前将未开封的检测卡恢复至室温。 ⑵将瘦肉或内脏样本剪碎，装入1.5ml离心管中，盖紧管盖。放入沸水浴中加热5分钟以上使有液汁浸出，取出离心管放至室温。 ⑶从铝箔袋中取出检测卡（在一小时内使用）。 ⑷将检测卡平放于台面，用塑料吸管垂直滴加1滴无气泡的样本渗出液(约20-30ul)于加样孔，30秒后再加入展开液2-3滴(约60-80ul)。 ⑸反应10min后，展开区出现紫色条带为阴性结果，无条带者为阳性结果。
注意事项： ⑴检测卡在室温下一次性使用。 ⑵脂肪会导致假阳性结果，取样时请弃去肉眼可见的脂肪部分。 ⑶检测时避免阳光直射。 ⑷出现阳性结果，应用本卡复查并作阳性对照实验。必要时送实验室进一步定量。 ⑸附带的瘦肉精阳性对照液为5ng/ml。 8 仪器维护 8.1 仪器使用人员应做好仪器的日常维护并认真填写使用记录。 8.2 仪器出现故障应联系相关部门，不可擅自拆
盐酸克伦特罗的检测方法 科技信息职教与成教 盐酸克伦特骂硇楦测方法 河南科技大学林业职业学院刘荣森 [摘要]肉食中的盐酸克伦特罗严重危害人体健康.检测盐酸克伦特罗残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法,高效液相色谱 法,酶标记免疫吸附测定法,毛细管电泳'~--(CE)等,本文分析了各方法的优缺点,指出了今后的研究方向. [关键词]盐酸克伦特罗检测方法研究进展 中央电视台2011年3.15晚会上,曝光了一些地方在动物饲养中滥 用"瘦肉精"的问题."瘦肉精"是盐酸克伦特罗的俗称,通用名称: Clenbuterol(CLB),化学名称:d一[(叔丁氨基)甲基卜4一氨基一3,5一二氯 苯甲醇盐酸盐,分子式:C.:H.C12N20?HC1,结构式: ]}H31. l 盐酸克伦特罗是一种B:一受体激动剂,具有蛋白同化作用,可以减 少脂肪的形成,提高瘦肉和脂肪的比率,因而被滥用于饲养业,造成该 药在动物体内蓄积,尤其是肝脏组织中的浓度较高.人类食用含有克伦 特罗残留的肉品后会出现头晕,心悸,手指震颇等中毒症状.滥用瘦肉 精已成为重大的食品安全问题. 中国严禁盐酸克伦特罗等在动物生产中使用.但目前非法使用情 况仍非常严重.近几年来,接连发生数起人食用有CLB残留的肉品中毒 事件.造成CLB屡禁不止的原因一方面是利益驱使;另一方面是现在 检测CLB的方法,手段还不完善,急需建立宰前监测体系和准确,迅速, 方便,精确的检测方法. 检测CLB残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法(GC—MS),高 效液相色谱法(HPLC),酶标记免疫吸附测定法(ELISA),毛细管电泳法
(CE)等. 1.气相色谱一质谱联用法(GC—MS) 气相色谱一质谱联用法是我国CLB测定中的确证性方法 fNY/T468—2001].是最常用的CLB测定方法,能在多种残留物同时存在情况下对某种特定的残留物进行定性,定量分析.具有灵敏度高,假阳 性率低等特点.测定时一般需要柱前衍生,最常用的衍生试剂是双三甲 基硅基三氟乙酰氨(BSTFA).本办法具有前处理过程烦琐,检测时间 长,需贵重仪器等缺点. 吴银良等建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱 克多巴胺残留量的固相萃取一气相色谱一质谱分析方法.样品在碱化 条件下经乙酸乙酯和异丙醇混合溶剂提取,浓缩后用乙酸乙酯溶解,经SCX固相萃取(SPE)柱净化,经氮气吹干后用双三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA)衍生,外标法定量.盐酸克伦特罗的检出限为O.301~g/kg.盐酸 克伦特罗添加浓度在1.O～5.01zg/kg范围内,添加回收率为77.4%～88.3%;相对标准偏差(RSD)为3.1%～5.1%.胡明友等[21建立了克伦特罗的测定方法,用甲醇提取,正己烷脱脂净化,然后旋转蒸发冷冻离心浓 缩后加0.1mmol/L的盐酸溶解,加样到净化柱上,用4%氨化乙酸乙酯 洗脱后氮气吹干,甲苯溶解后加BSTFA衍生,用气相色谱一质谱法进行测定,内标定量.结果表明:添加56~10-9540x10(∞)浓度水平的克伦 特罗,方法回收率在89.3%～107%,相对标准偏差为7.3%～16.5%,线性相关系数r为0.998,克伦特罗的最低检测限为2.0xl0f∞).PeterBa—tioens等[31用气相色谱一质谱联用法测定了牛,羊,猪粪便中的盐酸克伦特罗含量,最低检测限为2n. 2.高效液相色谱法(HPLC) 高效液相色谱法是检测CLB残留常见的分析检测手段之一,适合 大批量样品的快速测定.我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证法.HPLC法中常用的检测器有电化学检测器,紫外检测器;其优点是 检测精确度高,其最低检测限范围为1～15ng/g,而且假阳性率低,与GC—MS法相比样品不必衍生;缺点是检测过程繁琐,检测时间长,需贵
新疆农业大学 专业文献综述 题目: 肉品中盐酸克伦特罗的危害及其免疫检测技术姓名: 郑峰 学院: 食品科学与药学学院 专业: 食品科学 班级: 2013级研究生 学号: 1340020279 成绩： 指导教师: 王子荣职称: 教授 200 年4月24日 新疆农业大学教务处制
肉品中盐酸克伦特罗的危害及其免疫检测技术 郑峰指导老师：王子荣教授 摘要：本文介绍了盐酸克伦特罗的理化特性和生理作用，分析了它在肉制品中残留对人体造成的危害，同时综述了肉品中残留盐酸克伦特罗的胶体金免疫检测技术和酶联免疫检测技术的原理和操作要点，分析了两种免疫检测技术的特点，总结了两种免疫检测技术的技术优势并提出自己的观点。 关键词：盐酸克伦特罗；生理；胶体金检测；酶联免疫 The detection of Clenbuterol hydrochloride residues Absttact:This paper describes the effects in physiology of the clenbuterol hydrochloride remained in meat products,and analyzes the harms which caused by the residues in meat; The artical also summarizes the characteristics of technology principles with gold and enzyme-linked immunoassay to analyze the residues in meat and the operation points in immunoassay technique,contrasting the two immunoassay techniques.Finally the advantages of both immunoassay techniques were summarized and views were put forward on. Key words:Clenbuterol;DIGFA;ELISA 目前食品安全问题已经成为国内最为关注的问题，其关系到每个人的将抗发展。畜产品在人类饮食结构中占有重要的地位，如何确保畜产品的安全是目前急需解决的问题。市面上畜肉产品的安全卫生主要由两方面因素决定，即宰前因素和宰后因素，宰前因素主要是由动物的养殖方式和病害控制对肉品质产生的影响；宰后因素主要表现在宰后检验、运输、加工、包装等方面。随着一系列由饲料问题引起的肉品安全问题的发生（二噁英、疯牛病、苏丹红和瘦肉精），人们渐渐认识到饲料安全在保障畜产品安全中的重要性。饲料安全性关系到畜产品的质量与人类的健康。 盐酸克伦特罗（Clenbuterol Hydrochloride，CL）俗称瘦肉精是国家违禁药物中的一种[1]。盐酸克伦特罗是一种β-肾上腺素受体激动剂，曾作为药物用于治
目前，检测瘦肉精的方法主要有四种，即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC －MS）、毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）。而我国结合自己的实际情况，2001年农业部首先组织制定了饲料中盐酸克伦特罗的测定标淮。该标准选择确定了两种：即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC－MS）。其中将HPLC法作为检测瘦肉精的半确证性方法，其最低检测限为0．05μg/kg，优点是检测精确度高，而且假阳性率低；缺点是检测过程烦琐、检测时间长，需贵重仪器、难于操作、价格昂贵。而GC一MS法优点是能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析。GC－MS 法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低，已将GC－MS法定为检测瘦肉精的确证性方法。GC－MS法的缺点同HPLC相似。 (1)试剂和材料以下所有试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂；水为符合GB／T6682规定的二级水。 ①盐酸克伦特罗对照品：含盐酸克伦特罗不得少于98．5％ ②盐酸 ③无水甲醇 ④氢氧化钠 ⑤磷酸二氢钾 ⑥磷酸 ⑦盐酸溶液取盐酸4．2ml，加水至1000ml，即得。 ⑧o．5mol／L磷酸二氢钾溶液取磷酸二氢钾68g，加水800ml溶解并用磷酸调pH值至3．O，用水稀释至1000ml，即得。 ⑨0．05mol几磷酸二氢钾溶液取磷酸二氢钾6．88，加水800ml溶解并用磷酸调pH 值至3．0，用水稀释至1000mi，即得。 a．氢氧化钠溶液取氢氧化钠48，加水使溶解成100mi，即得。 b．盐酸克伦特罗对照品储备液(1mg／mi) 准确称取28．3mg盐酸克伦特罗对照晶至25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至25ml，一20~C以下保存，有效期1年。 ⑩盐酸克伦特罗对照品工作液(10ttg／mi) 取lmg／mi储备液o．5ml到50mi量瓶中，加水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。 ⑾盐酸克伦特罗对照溶液(100ng／m1) 取1(ug／m1工作液o．5ml到：50mi量瓶中水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。 ⑿盐酸克伦特罗检测试剂盒(2～8~C冰箱中保存) ⒀固相萃取柱C，s：100mglml含碳量≥17％ (2)仪器和设备 ①酶联免疫反应读数仪 ②分析天平精度0．00001g ③天平精度0．01g ④冷冻离心机 ⑤50mi具塞离心管 ⑥匀浆机 ⑦微型振荡器 ⑧回旋振荡器 ⑨微量移液器单道20uL，50ul，100uL；多道50～250uL， ⑩干热浓缩器
瘦肉精快速检测
瘦肉精快速检测 2011年04月20日11:00 阅读次数：13 来源：食品安全快速检测网 [字号：大中小] 瘦肉精是一类药物，而不是一种特定的物质，是指能够促进瘦肉生长的饲料添加剂。任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。 目前，能够实现这种功能的物质是一类叫做β-兴奋剂（β-agonist）的药物，比如在中国造成中毒的克仑特罗（clenbuterol）和美国允许使用的莱克多巴胺/又译雷托巴胺（Ractopamine）。 瘦肉精在上海曾经引发了几百人的中毒事件。而在台湾，由于从美国进口的猪肉里含有瘦肉精，几乎挑起一场政治争端。由于西方国家一般不消费动物内脏（猪肉一般不含瘦肉精，但内脏特别是肝脏则会残留瘦肉精），因而在美国、加拿大、新西兰等国，瘦肉精这类物质的使用是合法的。其它这样类似药物还有沙丁胺醇（Salbutamol）和特布他林（erbutaline)等，同样能起到“瘦肉”作用、却对人体健康危害过大，因而造成安全隐患。它们也因而在全球遭到禁用。 早在2002年，农业部、卫生部、国家食品药品监督管理局就公告，明令禁止在饲料和动物饮用水中添加盐酸克伦特罗和莱克多巴胺等7种瘦肉精。而据有关专业人士透露，各地在进行瘦肉精检测中基本都只检测盐酸克伦特罗，莱克多巴胺只有个别地方有检测。而正因为如此，一些不法养殖户就选择回避盐酸克伦特罗，改用莱克多巴胺等其他品种的瘦肉精。 为了较彻底排查检测“瘦肉精”，最好检测盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三种“瘦肉精”。 排查常用的方法是胶体金快速检测卡法，该方法操作方便、快捷，整个检测过程只需几分钟；检测灵敏度高;结果直观；胶体金本身为红色，不需加入发色剂，对人体无害；标记物稳定，携带、储存方便；成本低，无需仪器设备。非常适合于基层执法部门对“瘦肉精”的快速筛查。 胶体金速测卡原理： 胶体金速测卡的检测原理是竞争性免疫层析。将着色标记物与待测抗原的特异性抗体(Ab1)相偶联,沉积在结合区。而检测区处固相化的是待测抗原或待测抗原的类似物。若样品中含有待测抗原,则样品中的抗原和带有标记物的Ab1形成Ag-Ab1复合物。随后在通过固相化有待测抗原或其类似物的检测区时,由于竞争抑制,不再发生反应,检测线处不显色;样品继续前移, Ag- Ab1 复合物被固相化在质控线处的抗Ab1 抗体(Ab2)所结合,形成Ab1- Ag- Ab2 复合物,使质控线显色。 食品安全快速检测技术研究中心根据此原理成功研发出盐酸克伦特罗速测卡、莱克多巴胺速测卡和沙丁胺醇速测卡，为基层执法部门对“瘦肉精”的快速筛查提供了简便、快捷、经济、适用的快速检测手段。 瘦肉精快速检测法-盐酸克仑特罗快速检测卡 2011年04月11日16:44 阅读次数：6 [字号：大中小] 盐酸克仑特罗（瘦肉精）速测卡使用说明书
ICS 备案号： DB34 动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定 —胶体金免疫层析法 Determination of clenbuterrol residue in animal tissues Colloidal gold immunochromatographic method （征求意见稿） 安徽省市场监督管理局 发布
DB34/T 824—2008 II 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准代替DB/T 824-2008《动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法》，除编辑 性修改外主要技术变化如下： ——修改了范围（见1）； ——修改了规范性引用文件（见2）； ——修改了检测步骤（见5）； ——修改了结果判断（见6）； ——修改了结果确认（见7）。 本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所。 本标准起草人：许世富、。 本标准2008年8月发布，本次为第一次修订。
DB34/T 824—2008 动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法 1 范围 本标准规定了动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留测定的胶体金免疫层析法。 本标准适用于动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留的快速检测。 本标准检测限为3μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 本试验采用胶体金竞争抑制法。将氯金酸用枸橼酸钠还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，将样本滴加在胶体金检测条样品垫一端，使液体慢慢向吸水纸另一端渗移。在样本移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过免疫金的颜色而显示出来。样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上的盐酸克伦特罗人工抗原的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显紫红色，结果为阴性。 4 试剂和材料 4.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的二级水。 注：不同检测卡制造商间的产品组成和操作会有细微的差别，应严格按说明书要求规范操作。 4.2 胶体金免疫层析快速检测卡组成 4.2.1 盐酸克伦特罗抗体单克隆抗体。 4.2.2 胶体金。胶体金溶液采用氯金酸还原法制备，应为带负电的紫红色疏水胶体金溶液，金颗粒大小应在30 nm～60 nm之间。 4.2.3 硝酸纤维素膜。硝酸纤维素膜表面应平整、光滑、白净，没有划痕、凹印、小孔、水迹、橘皮状或其他肉眼能见的瑕疵，无灰尘、油渍或其他杂物。硝酸纤维素膜宽度为（2 5.4±0.5）mm，长度在（100±2）mm，厚度在（185±19）μm，毛细流速度为（180±45）s/40 mm。 4.2.4 聚酯纤维膜。聚酯纤维膜表面形状应为基本均匀的矩形，无明显歪斜现象。色泽好，白色，表面洁净，均匀度好，无破损，无起皱，无污点，无色斑，无霉点，无异味，无杂质及灰尘。聚酯纤维膜重量在（98.3±10.0）g/m2，厚度在（0.42±0.07）mm，长度为（30 5.0±2.5）mm，宽度为（254.0±2.5）mm。 4.2.5 吸水纸。 4.2.6 底板。 4.2.7 塑料盒。 4.2.8 塑料吸管。 4.2.9 提取液。 4.3 电子天平：感量分别为0.01mg和1mg。 1
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/d011962562.html, 猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法 作者：宋瑞张彩云何立宁张蕾 来源：《科技资讯》2011年第15期 摘要:本文介绍了盐酸克伦特罗(瘦肉精)的性质、危害性以及主要的检测方法。 关键词:盐酸克伦特罗残留检测方法 中图分类号:S859.84 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2011)05(c)-0104-01 1 盐酸克伦特罗的性质 盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB)俗称瘦肉精,又名氨哮素、克喘素,化学名为“4-氨基-α-[(叔 丁基氨基)甲基]-3,5-二氯苄醇盐酸盐”,常温下为白色或微黄粉末状固体,熔点为170℃～176℃,极易溶于水、甲醇和乙醇,微溶于氯仿,不溶于苯,是一种β2一肾上腺素能激动剂。20世纪70年代末,美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作。80年代,由于盐酸克伦特罗能促进猪生长,提高瘦肉率,而被作为饲料添加剂广泛应用到猪的生产中。但是近年来,因食用被盐酸克伦特罗污染的猪肉导致中毒事件屡有发生,且后果极其严重,引起了世界各国的高度重视,为了保证猪肉产品质量安全,保护人类健康,许多国家都禁止在食用动物源性的生产中使用盐酸克伦特罗[1]。 2 危害性 2.1 对猪的影响 在饲用初期会在短期内出现血压升高、血管扩张、呼吸加剧、体温上升等症状,并出现采 食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤等症状。后期会使猪体内糖降解作用不足,导致猪肉品质下降,同时容易发生蹄损伤和跛行,大运动量或高温条件会造成死亡。 2.2 对人的影响 人食用含残留盐酸克伦特罗猪肉后对肝、肾等内脏器官会产生毒害作用,出现心悸、头 痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状,特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列 腺肥大等疾病患者危害更大,严重的可导致死亡。
????????????????????????????????????????????????????????????????????????既快速又精确 目前检测瘦肉精的方法有以下几种，胶体金快检卡是最快速简单的一种方法，适用于多种流通领域和各种实验室 ??一."瘦肉精"快速检测新方法初获成功盐酸克伦特罗（俗称瘦肉精），是一种饲料添加剂，能改进脂肪性动物肉和脂肪的比例，加速动物生长，但是它能够长期残留在动物体内，一般的烹饪加热不能将其消除。人们一旦食用了含有瘦肉精残留的动物性食品，便会对人们的健康造成严重危害。目前已有的快速检测方法（试剂条等），均不能定量，而定量的检测手段，大都依赖于酶联免疫（ELLSA）和高效液相色谱（HPLC）等技术，这些方法有些步骤繁琐，非常耗时，有些则需要昂贵的仪器和熟练的操作人员，并且都不能实时地监视动态反应过程等。 研制的HPSPR－6000表面等离子共振生物分析仪用于盐酸克伦特罗快速检测，有效地克服了现有方法的缺点，其优点有：（1）盐酸克伦特罗的最低检出限约为1.0ppb，接近和达到了高效液相色谱和酶联免疫等现行的方法的检出限（0.05～1.0ppb）；（2）
每个样品检测时间为?10min，与目前常规方法最低需要2～3h相比，检测时间缩短10倍以上；（?3）样品前处理简单、免标记；（?4）能够实时监控相互作用分子的结合、解离等动力学信息。 二．快检卡：猪肉方面，目前使用胶体金试纸，只需要取一些猪肉样品，放在离心管中，在水浴中煮10分钟，将煮出的汁液加同样体积的配套缓冲液，混匀，用于检测即可，几个ppb（μg/Kg，ng/g）的瘦肉精就能被测出。北京华安麦科生物技术有限公司自主研发生产的瘦肉精类快检卡可的检出限可达到1ppb，全程只需十几分钟。 ?盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附法，在微孔条上预包被克仑特罗的单抗，克仑特罗的标准品（或样本中的残留物克仑特罗胺药物）与酶标记克仑特罗抗原竞争结合包被的莱克多巴胺抗体，酶标记物放大信号后，加入底物显色，终止液终止反应，酶标仪450nm测定其吸光值。样本的吸光值与其所含残留物克仑特罗药物的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应克仑特罗药物的含量。 ?“瘦肉精” 1ng/ml，检测
┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊装┊┊┊┊┊订┊┊┊┊┊线┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊ 第1章盐酸克伦特罗的理化性质及其主要危害 1.1 盐酸克伦特罗的理化性质 盐酸克伦特罗又称“瘦肉精”，是一种从天然儿茶酚胺衍生合成的化合物，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素分子式为C12 H19 C13 N20，相对分子质量为313．5，熔点为174 ～175.5 ℃，其制剂常用盐酸盐，又称为盐酸双氯醇胺氨双氯醇胺呈白色或类白色的结晶粉末状，熔点161℃，无臭，味苦，化学性质稳定，溶于水、乙醇，微溶于丙酮。不溶于乙醚，加热到172 ℃才能分解，盐酸克伦特罗的化学结构稳定，在体内不会被破坏分解，能耐受100 ℃高温，126 ℃油煎5min才能破坏减半，常规烹调对盐酸克伦特罗残留起不到破坏作用。 1.2盐酸克伦特罗的主要危害 对人的危害：人食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉及其制品后，会发生急性中毒通常表现为肌肉振颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等症状，特别是原有心律失常的病例会引起心室早搏，ST段与T波幅压低，还可引起代谢紊乱，产生酮体，对糖尿病病人可发生酮中毒或酸中毒，对心律失常、高血压、青光眼、糖尿病、甲状腺功能亢进、前列腺肥大等疾病的患者更容易产生急性中毒症状，严重的可导致死亡，因食用猪肉中残留有盐酸克伦特罗的急性中毒病人，临床症状以交感神经系、统兴奋性增高为主要表现，并在患者血尿中检出较高含量的盐酸克伦特罗。人食用残留有盐酸克伦特罗的畜产品后表现为肌肉兴奋性增强，有的人中毒后表现为肌肉震颤，重症者腓肠肌痉挛；同时引起心肌收缩加强，心率加快；对高血压患者危害更大，盐酸克伦特罗分解脂肪成游离脂肪酸进入血液，使血管壁弹性降低，引起血压升高，微循环血管膨胀，压迫刺激周围的神经，引起头痛头晕；引起人内脏横纹肌和平滑肌+兴奋性增强，表现为呕吐和腹泻。盐酸克伦特罗中毒的患者群中，对患心、脑血管疾病、糖尿病、甲状腺机能亢进、青光眼、前列腺肥大者可造成威胁生命的恶果。孕妇中毒又可导致癌变、胎儿致畸的严重危害性。 对动物的危害:虽然盐酸克伦特罗的毒性并不很强，小鼠、豚鼠静脉注射的半数
盐酸克伦特罗快速检测 摘要 本实验采用了百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡对样品进行定性检测。盐酸克伦特罗快速检测卡适用于尿样、瘦肉、肝脏、肺脏、肾脏和饲料等样本中盐酸克伦特罗的测定。检出限为3ng/mL（3ppb）。 关键词盐酸克伦特罗快速检测卡定性检出限 前言 盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB),又名瘦肉精,分子式为C12H18Cl2N2O?HCl,药品名为克喘素、氨哮素等,为白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于丙酮、氯仿,不溶于乙醚和苯,化学性质稳定;它是一种人工合成的B-肾上腺素受体激动剂,具有扩张支气管的作用,常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病(Mersmann,1998)。当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时,又具有能量重分配作用,可使肌肉合成增加,脂肪沉积减少,因此将其俗称为瘦肉精,在养猪业中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到饲料中(Kuip-er,1998),用以改善胴体的品质,但同时也造成了猪肉中盐酸克伦特罗的残留。当人们食用含有盐酸克伦特罗残留的肉品后,常常造成心动过速,低血钾,低磷酸盐血症,肌肉震颤,头晕,口干,失眠甚至于瘫痪等中毒症状,对心脏病患者更有生命危险。国家农业部农牧发[2002]1号文5关于发布食品动物禁用的兽药及其他化合物清单的通知6中,盐酸克伦特罗被列为所有食品动物禁止使用。 1实验步骤 （1）使用前将待测样本溶液恢复至室温 （2）取出检测卡平放，用移液枪吸取待测样品溶液100ul，垂直加于加样孔，开始计时 （3）结果应在3~5min读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。
【结果判断】 2 实验结果 实验结果如下图 1 由图可知，左边表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于 3 ng/mL ，或不含有盐酸克伦特罗；右边样品中盐酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL 。 3结果与讨论 3.1实验原理 若待测样品溶液中不含盐酸克伦特罗,当样品溶液进入测试端,盐酸克伦特罗金标单抗在硝酸纤维素膜上层析泳动,被硝酸纤维素膜上检测印迹处的盐酸克伦特罗-BSA 偶联物拦截形成盐酸克伦特罗-BSA 偶联物)金标盐酸克伦特罗单抗 复合物,并在该印迹处形成红色的条带(检测线); 测试端多余的金标盐酸克伦特阴性（-）：两条紫红色条带出现。表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3 ng/mL ，或不含有。 阳性（+）：检测T 线无显色，则表示样品中盐 酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL 。 无效：未出现质控C 线，表明操作过程不正确 或检测卡已失效。
瘦肉精检测原理及操作步骤37条必备知识 ?瘦肉精检测原理及操作步骤？ 0 个回复 - 71 次查看 一、测定原理 “瘦肉精”克仑特罗竞争酶标免疫检测方法快速测 定的基础是抗原抗体反应。酶联板的微孔包被有针对兔抗克仑特罗特异性抗体的羊抗体（第二抗体）。加入兔抗克仑特罗特异性抗体（第一抗体）与第二抗体 ... 2011-6-3 18:10 - 畜牧联盟010 - 兽药应用 ?广元市加强禽流感、瘦肉精等监测工作 0 个回复 - 75 次查看 全市畜牧系统按照食品质量安全执法年活动要求，在加强日常畜产品质量安全监管的同时，进一步加强了在节假日、庆典活动等重点时段畜产品的质量安全检测工作。近日，我市开展了禽流感、口蹄疫等重大动物疫病、瘦肉精、 ... 2011-6-3 18:03 - 畜牧联盟003 - 兽药应用 ?辽宁猪牛“瘦肉精”抽检全部合格 0 个回复 - 108 次查看 为切实加强元旦、春节期间畜产品质量安全监管，保障广大人民群众消费安全，辽宁省动物卫生监督管理局组织省、市畜产品质量检测机构，于2008年12月19日～29日在全省14个市开展了猪肉、牛肉中“瘦肉精”及其替代 ... 2011-6-3 18:00 - 畜牧联盟004 - 兽药应用 ?瘦肉精超标同批生猪要“连坐” 0 个回复 - 51 次查看 《广州市生猪屠宰检疫和违禁药物检测实施办法》下月20日正式施行本报讯(记者严慧芳)同批检验的生猪，经酶联免疫吸附测定法检测发现有不合格样品的，将判定此检验批的生猪不合格。昨日，记者从广 ...
2011-6-3 17:52 - 畜牧联盟004 - 兽药应用 ?瘦肉精 0 个回复 - 28 次查看 克伦特罗是一种β-兴奋剂，添加于饲料中能提高几种家畜包括猪的瘦肉率。克伦特罗在家畜和人体内吸收好，而且与其它β-兴奋剂相比，它的生物利用度高，以至食用了含有克伦特罗的猪肉出现中毒。zimmer（19 ... 2011-6-3 17:45 - 畜牧联盟006 - 兽药应用 ?山东肉羊在河北被检出瘦肉精 198只羊被封存 0 个回复 - 182 次查看 198只羊被封存两名嫌疑人被控制 4日晚，山东省庆云县召开新闻通报会表示，在输冀肉羊发现“瘦肉精”以后，庆云县迅速侦破案件，将两名违法嫌疑人控制，同时对全县畜产品质量安全进行拉网检查。河北 ... 2011-6-3 12:56 - 畜牧联盟007 - 行业动态 ?瘦肉精使用向牛羊养殖扩散防范形势严峻 0 个回复 - 140 次查看 据中国之声《央广新闻》13时19分报道，元旦和春节将至，肉类食品需求旺盛，违法使用瘦肉精问题又有所抬头。为此，农业部要求以瘦肉精等违禁药物为重点，加大对生猪、肉牛养殖的监管力度，确保畜产品质量安全。据 ... 2011-6-3 12:35 - 畜牧联盟002 - 行业动态 ?山东流入河北省青县的“瘦肉精”肉羊已销毁 0 个回复 - 8 次查看 从河北省畜牧兽医局获悉，由山东流入我省的192只“瘦肉精”肉羊，目前已被全部扑杀并无害化处理。 3月31日晚，从山东省庆云县流入我省青县戴庄子村肉羊192只。根据群众举报，这批羊可能存在问题。4月1日凌 ... 2011-6-3 09:28 - 畜牧联盟004 - 饲养管理
综述盐酸克伦特罗的 药理作用、在机体内的残留性及检测技术 摘要：由瘦肉精引起的中毒事件屡见不鲜，而品种繁多的瘦肉精中盐酸克伦特罗是使用最普遍的一种，本文从盐酸克伦特罗的理化性质、药理作用、残留性、检测方法等方面详细介绍其对人体的危害，为我们更好的认识和抵制瘦肉精提供参考。 关键词：理化性质；药理作用；毒性；残留性；检测方法 瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。当它们以超过治疗剂量5-10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。 1. 盐酸克伦特罗的理化性质及药理作用 1.1 理化性质 中文名：瘦肉精；克伦特罗；学名：盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride)，又称氨哮素、克喘素氨双氯醇胺，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，是一种平喘药。该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。相对分子量：313.7，分子式：C12-H18-Cl12-N2-O·HCl； 图1盐酸克伦特罗结构式 盐酸克伦特罗的外观与性状：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦；熔点：174～175.5°C；溶解性：溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚[1]。 1.2 药理作用 20世纪70年代中后期,克伦特罗作为一种伦特罗1000～3000 μg 具有促进新的、选择性的β肾上腺受体激动剂逐步应用于临床试验,它能够引起交感神经兴奋在治疗剂量下,强而持久地松弛支气管平滑肌,口服治疗剂量仅为30～40 μg/d, 对支气管哮喘和伴随有逆性气道梗塞的慢性支气管炎均有良好的效果,能较长时间地增加肺的最高呼气量(PEFR)，用药剂量仅为舒喘宁片的1%, 副作用和对心血管系统的作用不明显。克伦特罗可作为支气扩张剂治疗慢性梗塞性肺部疾病,用吸入法给药,有效剂量可低至12ug；口服效果是特布他林的170倍，对心率和血压的影响不明显。克伦特罗进入机体后, 与广泛分布于呼吸道效应细胞膜上的β2受体结合,导致受体构型改变,激活腺苷酸环化酶,催化细胞内ATP转化为cAMP,后者激活cAMP依赖性蛋白激酶,促使胞浆中游离钙浓度下降钾通道开放引起平滑肌松弛而缓解喘息等症状除松弛支气管平滑肌外克伦特罗也激活β2肾上腺受体克伦特罗能增加神经生长因子的表达而起到保护神经系统的作用,也能防止大鼠诱导性肝细胞凋亡。此外,克伦特罗可能具有治疗过敏性炎症的作用并可以在抑制失神经肌萎缩的同时不影响或很少影
盐酸克伦特罗（瘦肉精）快速检测卡说明书 【产品名称】 产品名称：盐酸克伦特罗快速检测卡（胶体金法） 英文名称：Clenbuterol Rapid Test Card(Colloidal Gold) 【产品简介】 盐酸克伦特罗（瘦肉精主要成分）是为提高猪肉瘦肉率而使用的兴奋剂药物，在动物可食性组织中蓄积，危害食用者的健康，我国已经禁止用其做动物饲料添加剂。 本产品用于快速检测猪肉和其他肉类肌肉组织中盐酸克伦特罗残留，检测过程只需20分钟，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构快速筛查。 【产品组成】盐酸克伦特罗快速检测卡（5条）；200μL刻度吸管（5支）；提取瓶（内含盐酸克伦特罗提取液0.5mL，5瓶）；小勺（1个）。 【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。 【检测限】本产品检测方法对肌肉组织中盐酸克伦特罗的检出限为5 μg/kg。 【使用方法】 1、取一小块瘦肉，用刀切成碎肉，用小勺将碎肉装入提取液的瓶盖内，高度与瓶盖相平（约 2.0g）。 2、将瓶盖量取的碎肉转移到提取瓶内，盖紧瓶盖后振荡，使碎肉与提取液充分混匀，放入盛有热水(>80℃)的容器中热水浴10分钟后取出，冷却至室温。 3、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用吸管从提取瓶中吸取肉品提取液，垂直滴加2-3滴于加样孔（S孔）中。 4、室温环境计时5分钟，对照结果判断示意图判定检测结果，其他时间判定无效。 【结果判断】 阴性（-）：C线和T线都显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于检出限。 阳性（+）：C线显色，T线不显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度等于或高于检出限。 无效：C线未出现，表明操作过程不正确或检测卡已失效。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡重新测试。 【注意事项】 1、请按照使用方法进行测试，检测卡打开包装后1小时内使用，检测前将检测卡恢复至室温。 2、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面，检测时避免阳光直射。 3、本检测卡为一次性产品，请勿重复使用。 4、提取瓶内液体不可食用，避免儿童接触，检测完后可倒入下水道，瓶体可丢在垃圾桶。 5、本产品检测结果仅供参考，如需确证，请参照国家相关标准方法。 【储存及有效期】 原包装应储存于4～30℃，阴凉避光干燥处，切勿冷冻；有效期12个月。
摘要：瘦肉精是一种引起广泛关注的非法饲料添加剂，人食用瘦肉精超标的肉制品会引起严重的不良反应，本文讲述了瘦肉精危害以及检测方法。 关键词：瘦肉精残留检测方法 Abstract:Clenbuterol Hydrochloride was a illegal feed additive which caused wide attention. It would bring serious harmful reaction if people eated Clenbuterol Hydrochloride. The article discussed toxicology and the way of assay of Clenbuterol Hydrochloride. Key words:Clenbuterol Hydrochloride residue assay 1 盐酸克伦特罗概述 盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride，CLB)，又名瘦肉精，药品名为克喘素、氨哮素等，为白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，易溶于水、甲醇、乙醇，微溶于丙酮、氯仿，不溶于乙醚和苯，化学性质稳定。它是一种B：肾上腺素受体激动剂，最早作为止喘药用于防治哮喘和支气管痉挛。20世纪70年代末，美国等发达国家开始了将CLB用作“营养重分配剂”及“促生长剂”的实用性开发研究，20世纪80年代后期，我国部分大专院校和科研机构也开始向饲料企业和养殖户推广这类物质作为饲料添加剂使用，但很快发现它在畜牧业发展和食品安全方面的副作用，便全面禁止其使用。 2 危害性 2．1 对动物的影响 (1)扩张气管，影响肌肉蛋白质、脂肪代谢及肝脏中的糖代谢，严重影响动物正常的生长发育。(2)糖降解作用不足，导致猪肉品质下降 (3)容易发生蹄损伤和跛行，大运动量会造成死亡，高温条件更容易发生。 2．2 对人的影响 自从上世纪80年代中期，欧美国家发现CLB的毒副作用以来，至今世界范围内已有数以千计甚至万计的人因食用残留有CLB的动物性产品而中毒。CLB残留引起的中毒事件最早发生在西班牙。在我国，最早披露的中毒事件发生在香港。今年三月份，中国最大肉制品加工企业双汇也发生了令人震惊的“瘦肉精事件”，对国家企业消费着造成了巨大的伤害。人中毒后主要表现为：(1)心肌收缩加强，心率加快，产生心悸、心慌；对原有心脑血管疾病、糖尿病、冠心病、甲状腺功能亢进、青光眼、前列腺肥大者可导致心动过速，室性期前收缩，甚至中毒性心肌炎、心肌梗死，心电图可呈S—T段压与T波倒置或低平等现象。(2)面颈、四肢肌肉颤动，有恶心、呕吐、头晕乏力、手抖甚至不能站立等现象。(3)孕妇中毒可导致癌变，胎儿致畸。 3 控制标准 检验CLB对动物和人构成严重危害，世界各国纷纷颁布法规，禁止将其用作生长促进剂。从1986年开始，欧美等发达国家已严禁畜牧生产中应用CLB，我国农业部在1997年3月以[农牧发(1997)3号文]严令禁止B一肾上腺素类激动剂在动物生产中的应用”。美国食品药物管理局(FDA)和世界卫生组织(WHO)建议CLB在动物组织中最高残留限量(MRL)分别为：肉0．2μg／kg，肝0．6μg／kg，肾0．61μg／kg，脂肪0．2μg／kg，奶0．051μg／kg。部分欧盟成员国如英国规定可食性组织中MRL值为0．5μg／kg，荷兰规定牛、马肝脏组织中的MRL值为0．51
瘦肉精快速检测卡操作步骤 一、【检测原理】 本试纸采用竞争抑制免疫层析技术的原理来测定动物尿液、组织和饲料中的盐酸克仑特罗。试剂含有被预先固定于膜上检测带（T ）的盐酸克仑特罗偶联物和被胶体金标记的抗盐酸克仑特罗单克隆抗体。检测时样品和标记抗体竞争结合偶联物。检测限为3ng/ml（3ppb ）。 二、【样品制备】 肉：装入大约4克碎的肉样本（肉泥）于离心管中（酱猪牛肉加2ml 水或PBS ），盖紧管盖，在80℃左右的水浴锅中水浴10 分钟；吸取煮出的溶液到 1.5ml 的离心管中。如有明显黄色浑浊请离心（3000rpm,5min ），取上清检测。如果检测牛肉请吸出肉汤离心(3000rpm,5min，取上清检测。 三、【操作步骤】 1. 在进行测试前先仔细阅读使用说明书，使用前将本品和待检样本溶液恢复至室温。 2. 从原包装中取出试剂，打开后平放在桌面上，请在1小时内尽快使用。 3. 吸取待检样品溶液，缓慢滴加80~100μl(约2~3滴）于加样孔中，加样后开始计时。 4. 在5分钟内读取结果，超过5分钟的结果判读无效。 四、【结果判定】 阳性：位置C 显示出红色条带，位置T 无条带或颜色非常模糊时判为阳性。阴性：位置C 显示出红色条带，位置T 同时出现红色条带时，判为阴性。无效：
位置C 不显示出红色条带，则无论位置T 显示出红色条带与否，该试纸卡均判为无效。 【贮存及有效期】 冷藏，忌冷冻，有效期12个月。 【注意事项】 1. 请按照操作步骤进行测试，操作时请勿触摸试纸显示区。 2. 如购买时发现过期，破损，污染，无效的产品，请到购买处更换。 3. 本品为一次性产品，请勿重复使用。 4. 出现阳性结果，建议用本卡复查一次。 5. 自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。 6. 由于样品（尿和饲料）的差异，有的检测线可能偏淡或偏暗，但只要出现条带，就可判定为阴性结果。 7. 若需直接检测标准品，请用PBS 或阴性样品配制。
2009 年 4 月 Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities Apr. 2009文章编号：1003-9015(2009)02-0355-05 盐酸克伦特罗完全抗原的合成及其偶联工艺的优化 杨香瑜, 黄鹤 (天津大学化工学院生物化工系系统生物工程教育部重点实验室, 天津 300072) 摘要：为获取用于快速免疫分析的免疫抗原和包被抗原，本实验采用重氮化反应制备盐酸克伦特罗(Clenbuterol hydrochloride, CL)完全抗原，在强酸条件下CL先经重氮化，再与鸡卵清白蛋白(OV A)发生共价取代制备了盐酸克伦特 罗包被抗原(OV A-CL)，并以正交实验确定了共价取代反应的关键影响因素，进一步采用单因素实验确定了反应所需的 最佳条件，并通过紫外扫描对制得的包被抗原进行了鉴定。结果表明，投料比例是盐酸克伦特罗完全抗原合成的关键 因素，搅拌转速和反应时间也起着至关重要的作用。而且偶联反应在1 h内基本完成，延长反应时间对提高产物偶联 比影响不大。当投料比例为30:1，pH值约为8，低速搅拌状况下，包被抗原和免疫抗原的偶联比分别高达29:1和48:1，盐酸克伦特罗完全抗原合成条件的优化筛选取得了预期的效果。 关键词：盐酸克伦特罗；重氮化反应；完全抗原；偶联比 中图分类号：O625.14 文献标识码：A Synthesis of Clenbuterol Hydrochloride Complete Antigen and Optimization of its Conjugation Conditions YANG Xiang-yu, HUANG He (Key Laboratory of Systems Bioengineering, Ministry of Education, Department of Biochemical Engineering, School of Chemical Engineering and Technology, Tianjin University, Tianjin 300072, China) Abstract: In order to synthesize the immunogen and coatigen used for the rapid immunoassay, the diazotization was adopted to prepare the Clenbuterol hydrochloride (CL) complete antigen. During which, the CL was firstly activated under strongly acidic conditions, and the activated CL was then conjugated with ovalbumin (OV A) to form coatigen OV A-CL. The important factors affecting the conjugating reaction were determined by orthogonal experiments, and the optimum value of those important factors was confirmed by single factor experiments. The prepared OV A-CL was characterized by UV scan. It was found that the CL/OV A dropping proportion is the key factor for preparing the complete antigen, while the stirring speed and reaction time are important too. The conjugating reaction can be completed within one hour and prolonging the reaction time has little effect on the increase of coupling ratio. When the CL/OV A dropping proportion (molar ratio) is 30:1, the pH value is 8 and at a low stirring dispersion speed (<250 r?min?1), the coupling ratio of coatigen and immunogen can be up to 29:1 and 48:1, respectively. It indicates that the optimization of the conjugation conditions of Clenbuterol hydrochloride complete antigen achieves the expected results. Key words: Clenbuterol hydrochloride; diazotization; complete antigen; coupling ratio 1前言 盐酸克伦特罗是一种β2-肾上腺受体激动剂 [1]。大量用其作为饲料添加剂，可显著提高畜禽生长速率，瘦肉相对增加[2]。但该药易在牲畜体内沉积，人食用含有该药残留的动物产品后可引起食物中毒，严重 收稿日期：2008-01-29；修订日期：2008-06-02。 基金项目：天津市自然科学基金资助项目(06YFJMJC13200)。 作者简介：杨香瑜(1983-)，女，河北省沧州人，天津大学硕士生。通讯联系人：黄鹤，E-mail：huang@https://www.doczj.com/doc/d011962562.html,