浅析西天目山夏季常见鸟类的观察和识别方法123
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野外实习——鸟类实习小论文
浅析西天目山夏季常见鸟类的观察和识别方法
第八组成员
中国是世界最大的国家之一，大版图和栖息生境多样使中国极富生物多样性，为世界五个脊椎动物最丰富的国家之一。就鸟类而言，中国拥有1300个以上的鸟种，其中包括相当一批世上最为华美而稀有的鸟类。中国有种类繁多的鸦雀，柳莺，鸦类，及朱雀，还有约占世界总数四分之一的共50种野鸡，大雁和天鹅。世界的十四种鹤中有9种鉴于中国。而我们本次野外实习的地点，临安天目山作为中国第一个自然保护区，拥有极为丰富的鸟类资源。鸟类是自然界的重要组成部分，他们作为生物链的一部分，维护了森林，草原，农田及城市生态系统的平衡。同时，他们也是人类的好朋友，对我们的生活有着深远的影响，带着对鸟类的好奇与探索自然的精神。2011年8月14-15日两天在天目山期间，我们通过形态特征和行为特征观察来研究一下我们小组在天目山所见到的常见鸟类。
鹩哥:雀形目，椋鸟科。鹩哥
通体黑色，并带有紫蓝色的金属光泽，
头后有两片黄色肉垂，翅膀上有白斑，
喙偏红。鹩哥喜欢居于田野和阔叶林的
边缘处，多三五只一起活动觅食，有时
与椋鸟或其它鸟类混群出没于成熟的
树冠上。鹩哥是善于鸣叫的鸟，常发出
很高，很清脆，响亮的鸣叫声，繁殖期间以唱歌方式求偶。
松鸦：雀形目，鸦科的鸟类。松鸦整体近红褐色，腰部及肛周白色，两翅外侧带一辉亮的蓝色和黑色相间的块状斑。是山林鸟，一年中大多数时间都在山上很少见于平地，秋天到，开始过游荡生活，秋后有接群现象，栖息在树顶上，在山上却较活跃，特别是繁殖前期。
红嘴相思鸟：雀形目，鶲科，化梅亚科，相思鸟属。红嘴相思鸟分布于印度次大陆及中国的西南地区，包括印度，孟加拉，不丹，锡金，尼泊尔，巴基斯坦，斯里兰卡，马尔代夫，以及中国西藏东南部地区等。中国半岛和中国的东南沿海地区，包括缅甸，越南，老挝，柬埔寨，泰国以及中国的东南沿海地区，香港海南岛。为中国
华东，西藏南部及长江以南地区广泛分
布的留鸟。其主要栖息于海拔1200～
2800米的山地常绿阔叶林，常绿落叶混
交林，竹林和林缘疏林灌木地带，冬季
多下到海拔1000米以下的低山，山脚，
品源与河谷地带，有事也进到村舍，庭
院和农田附近的灌木丛装，出繁殖期间
成对或单独活动外，其他季节剁成三五只我十余只的小群。有时也与其他小鸟混群活动，性大胆，不怕人，躲在树上或林下灌木穿梭，跳跃。
星头啄木鸟：鴷行目，啄木鸟科，啄木鸟属。星头啄木鸟分布于巴基斯坦，中国东南亚，婆罗洲及苏门答腊岛。分布广泛但并不常见，鉴于各类型的林地可致海拔2000米，亚种为中国东北的留鸟，在辽宁及华东华南及东南部等。该物种已列入国家林业局2000年8月1日发布的国家保护的有益的或者由主要经济科学价值的陆生野生动物名录。
八哥：雀形目，椋鸟科，八哥属。八哥额羽甚多，八哥雌雄同形同色极不易区分，体长约为25厘米左右，全身羽毛黑色而有光泽，喙和脚都是黄色，额头前羽毛耸立如冠状，两翅有白色翼斑，飞翔时更明显，从下往上看，左右的白色纹形成八字，八哥则由此得名。八哥的眼，喙，嘴和脚均为黄色，具有冠羽，这是区别乌鸦的明显之处。八哥在激动的时候或者对某种东西特别感兴趣的时候，放大他们的瞳孔，若感到害怕生气或带有进攻性的时候会收缩。
说话这种声音对于八哥来说是特殊的，通常表现为高兴健康满足，八哥特别喜欢在其他伙伴前面说话，表现出来就是人越多或是越热闹的地方它说的越高兴，在傍晚的时候会听到八哥有小声“叽叽咕咕”的声音，这是他们在睡觉之前与伙伴进行交流。低鸣，这个在雄性表现欲很强的八哥身上可以找到，在你进入他们的领域范围或者在它即将休息的时候，近距离接触他的时候可以听到，可以观察到他们的腹部膨胀，者表示他们对你的到来很不满意。
八哥在村寨田野山林边缘的灌木丛中，都有他们的踪迹，喜爱群居，常数十成群栖息于大树上。杂食性，常尾随耕田的牛，取食翻耕出来的蚯蚓蝗虫，也在树上啄食果实。八哥喜欢水浴时鸣唱，繁殖期4～7月，每年两次，在树洞或者建筑物的裂缝中营巢，有时也利用喜鹊椋鸟的等的旧巢，巢浅盂状，广泛分布于华南和西南台湾，海南岛等地区。
白头鹎：雀形目，鹎科，鹎属。
白头鹎额致头顶黑色，两眼上方致后劲是
白色，形成白色枕环，腹白色，具有黄绿
色纵纹，性活泼，常结群活动，黑色头顶，
略具羽冠，臀白，上体灰褐，或感染灰褐，
具有黄绿色羽缘，喙黑色，脚也是黑色。
在国外多分布于，越南北部，等地，在中
国多分布于西致西川，云南东北部，北达河南，东致沿海一带，南及广西西南等地，是常见的群息行鸟，栖与标缘，红树等地，冬季北方鸟南迁，性活泼，结群于果树上活动，有时处在栖息处飞行捕食，杂食性，即食动物性植物，也吃杂食性食物，不甚畏人。
金腰燕：雀形目，燕科，燕属。
金腰燕喙短而宽扁，基部宽大，呈倒三
角形。上嘴巴近前段有一缺刻，口裂极
深，嘴须不发达。金腰燕体型全场约为
16～18厘米，体重18～21克，寿命15
年，上体褐色，具有辉蓝色光泽，腰部
栗色，颊部棕色，下体棕白色，且具有
褐色的细纵纹，尾羽很长，为深凹形。
最显著的标志是有一条粒黄色的腰带，浅栗色的腰与深蓝色的上体形成对比，下体白且多具黑色细纹，尾长叉深，虹膜褐色，嘴和脚褐色。金腰燕栖息于低山和平原的居民点附近，以昆虫为食，生活与山脚坡地草坪，也围绕树林附近有轮廓的平房高大建筑物，工厂飞翔，栖息在空旷地区的树上，和无叶的枯树上，通常出现于平地至低海拔的空中或电线上。结小群活动，擅长飞行，多以昆虫为食，生长繁殖筑巢躲在山地村落间，巢多呈长颈瓶状，筑巢精巧，4～9月繁殖，用泥巴混以草茎，筑瓶装于建筑
物隐蔽处，卵近白色，具黑色斑点。
绿鹦嘴鹎：雀形目，鹎科，绿鹦嘴
鹎属。绿鹦嘴鹎别名为“蓝头公”“青冠”，
体长约为20厘米，体重45克，嘴短厚，
且呈灰黄色，喉部及头侧呈黑褐色，上
胸呈一半圆形白环，绕到颈的两侧。上胸和体侧呈橄榄绿，腹部为黄绿色，呈一黑褐色宽端，尾部覆羽鲜黄色，脚褐色。绿鹦嘴鹎栖息于平原山地的树林，灌木丛中，在山间河谷的树丛中也很常见，喜欢集群，有时也称对也单独活动。善鸣，鸣声委婉，属杂食性鸟类，以种子草籽，野果，花芽叶芽为食，动物性食物有昆虫和其他小型动物等。每年5～6月绿鹦嘴鹎开始繁殖，其筑巢于树丛的枝条上，以树叶树枝和其他草茎编制而成，巢高约11厘米深4厘米，卵灰白色，或浅黄色，夹杂红褐或浅灰紫色斑点。
烟腹毛脚燕：雀形目，燕科，
毛脚燕属。烟腹毛脚燕体型轻小，约13
厘米，动作敏捷，以擅长飞行而著称，
善于在高空疾飞来啄食昆虫，喙短而宽
扁，基部宽大，呈倒三角形。上嘴巴近
先端有一缺刻，口裂极深，嘴须不发达，
腿上有毛。翅膀狭长而尖，擅长在空中
捕食飞虫，尾羽不分叉，身体褐色，腰部白色，胸烟白色故为烟腹毛脚燕。与毛脚燕的区别在翼衬黑色，烟腹毛脚燕单独或集小群，比其他燕更喜欢留在空中，多见它在空中翱翔，在建筑物上砌泥巢，是杯型巢，叫声是兴奋的嘶嘶叫，似毛脚燕。繁殖于喜马拉雅山脉至日本，越冬南迁至东南亚，菲律宾，及其他群鸟。
以上的是我们组在天目山看到的部分鸟类，它们都具有明显的特征。如其中八哥和鹩哥都是椋鸟科的，它们的声音都十分动听，所以总是会被作为笼养鸟。但区别它们也十分容易，鹩哥的头部有明显的黄色落垂而八哥则有明显的冠羽。白头鹎和绿莺嘴鹎都属于鹎科，白头鹎两眼上方致后劲是白色，形成白色枕环，绿鹦嘴鹎上胸和体侧呈灰绿色，这是区别它们的明显特征。金腰燕和烟腹毛脚燕都属于燕科，有着许多相似的地方。金腰燕有一条粒黄色的腰带，浅栗色的腰与深蓝色的上体形成对比，而烟腹毛脚燕最明显的在于它的腿上有毛。松鸦则可以通过它们两翅外侧带一辉亮的蓝色和黑色相间的块状斑来辨认。星头啄木鸟是鴷型科的，它们常栖息于枯木上，区别于其它啄木鸟的是它们的头上有白斑。还有一些具有明显特征的鸟类如白鹡鸰在停息时会上下摆动尾巴，而飞行时则是波浪形。画眉的眼部有明显的眉纹十分容易辨认。这是我们对天目山部分鸟类初步的认识。
此次天目山之行，在老师的带领下，我们观察到了，20种左右的鸟类，并了解了如何去识别他们，分别从形态特征和行为特征两方面，正所谓环境适物，不同的环
境孕育了不同的生物，天目山的优美环境孕育了天目山许多罕见而又漂亮的物种，尤其是鸟类，如星头啄木鸟，老鹰，发冠卷尾，红尾伯劳等等。带着望远镜，背上背包，沿着延绵的小路上去，不时驻足聆听鸟的叫声，寻其踪迹，探其特征，原来观鸟也可以如此享受！虽然这次观察到的鸟类种数不多，但我们知道天目山的鸟类种数远远不止这些，所以我们探寻的脚步也不会就此停留！
2011年8月17日
总RNA的提取（Trizol法提取） 在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。 1.提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉 淀细胞，每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞； 2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟； 3.在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡 15秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15分钟； 4.取上层水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃） 放置10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟； 5.弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离心5分钟， 弃上清； 6.让沉淀的RNA在室温下自然干燥； 7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。 PCR 实验室常用DNA聚合酶有三种：TaKaRa Taq TM，TaKaRa E X Taq TM和Pyrobest TM DNA Polymerase。TaKaRa Taq TM 是一般的DNA聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。TaKaRa E X Taq TM是具有Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，如果希望直接将产物克隆到T-vector可以用此酶。Pyrobest TM DNA Polymerase也是具有Proof reading 活性的耐热性DNA聚合酶，其特点是保真性极高，扩增得到的PCR产物为平滑末端。如果进行基因的扩增请使用此酶。 1.按下列组成在PCR反应管中调制反应液： TaKaRa Taq TM或TaKaRa E X Taq TM的配方
实验室常用器材使用方法及注意事项
实验室常见仪器使用方法及注意事项 一、常见的仪器 （一）初中化学实验常见仪器 反应容器可直接受热的：试管、蒸发皿、燃烧匙、坩埚等能间接受热的：烧杯、烧瓶、锥形瓶（加热时，需加石棉网） 常存放药品的仪器：广口瓶（固体）、细口瓶（液体）、滴瓶 （少量液体）、集气瓶（气体） 用加热仪器：酒精灯 计量仪器：托盘天平（称固体质量）、量筒（量液体体积） 仪分离仪器：漏斗 取用仪器：药匙（粉末或小晶粒状）、镊子（块状或较大颗粒）、胶头滴管（少量液体） 器夹持仪器：试管夹、铁架台（带铁夹、铁圈）、坩埚钳其它仪器：长颈漏斗、石棉网、玻璃棒、试管刷、水槽 不能加热：量筒、集气瓶、漏斗、温度计、滴瓶、表面皿、广口瓶、细口瓶等 1、试管 （1）、用途： a、在常温或加热时，用作少量试剂的反应容器。 b、溶解少量固体。 c、收集少量气体的容器 d、用于装置成小型气体的发生
器。 （2）、注意事项： a、加热时外壁必须干燥，不能骤热骤冷，一般要先均匀受热，然后才能集中受热， 防止试管受热不均而破裂。 b、加热时，试管要先用铁夹夹持固定在铁架台上（短时间加热也可用试管夹夹持）。 试管夹应夹在的中上部（或铁夹应夹在离试管口的1/3处）。c、加热固体时，试管口要略向下倾斜，且未冷前试管不能直立，避免管口冷凝水倒流 使试管炸裂。 d、加热液体时，盛液量一般不超过试管容积的1/3（防止液体受热溢出），使试管与桌面 约成45°的角度（增大受热面积，防止暴沸），管口不能对着自己或别人（防止液体喷出伤人）。反应时试管内的液体不超过试管容积的1/2。 2、烧杯用途：①溶解固体物质、配制溶液，以及溶液的稀释、浓缩 ②也可用做较大量的物质间的反应 注意事项：受热时外壁要干燥，并放在石棉网上使其受热均匀（防止受热不均使烧杯炸裂）， 加液量一般不超过容积的1/3（防止加热沸腾使液体外溢）。
1.GB21549-2008实验室玻璃仪器玻璃烧器的安全要求； 2.GB/T21784.2-2008实验室玻璃器皿通用型密度计第2部分：试验方法和使用； 3.GB/T21298-2007实验室玻璃仪器试管； 4.GB/T21297-2007实验室玻璃仪器互换锥形磨砂接头； 5.GB/T11414-2007实验室玻璃仪器瓶； 6.GB/T12804-2011实验室玻璃仪器量筒； 7.GB/T12805-2011实验室玻璃仪器滴定管； 8.GB/T12806-2011实验室玻璃仪器单标线容量瓶； 9.GB/T28211-2011实验室玻璃仪器过滤漏斗； 10.GB/T28212-2011实验室玻璃仪器冷凝管； 11.GB/T28213-2011实验室玻璃仪器培养皿； 12.GB/T22362-2008实验室玻璃仪器烧瓶； 13.GB/T22067-2008实验室玻璃仪器广口烧瓶； 14.GB/T11165-2005实验室pH计； 15.GB/T30431-2013实验室气相色谱仪； 16.GB4793.7-2008测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第7部分：实验室用离心机的特殊要求； 17.GB12803-1991实验室玻璃仪器：量杯； 18.GB12807-1991实验室玻璃仪器：分度吸量管； 19.GB12808-1991实验室玻璃仪器：单标线吸量管； 20.GB21549-2008实验室玻璃仪器：玻璃烧器的安全要求； 21.GBT11414-2007实验室玻璃仪器瓶；
22.GBT12804-2011实验室玻璃仪器：量筒； 23.GBT12805-2011实验室玻璃仪器：滴定管； 24.GBT12806-2011实验室玻璃仪器：单标线容量瓶； 25.GB/T12807-1991实验室玻璃仪器：分度吸量管； 26GB/T12808-1991 实验室玻璃仪器：单标线吸量管； 27.GBT12809-1991实验室玻璃仪器：玻璃量器的设计和结构原则； 28.GBT12810-1991实验室玻璃仪器：玻璃量器的容量校准和使用方法； 29.GBT14149-1993实验室玻璃仪器：互换球形磨砂接头； 30.GBT15723-1995实验室玻璃仪器：干燥器； 31.GBT15724-2008实验室玻璃仪器：烧杯； 32.GBT15725.4-1995实验室玻璃仪器：双口、三口球形圆底烧瓶； 33.GBT15725.6-1995实验室玻璃仪器：磨口烧瓶； 34.GBT21297-2007实验室玻璃仪器：互换锥形磨砂接头； 35.GBT21298-2007实验室玻璃仪器：试管； 理化仪器类 1.GBT1914-2007化学分析滤纸； 2.GB24789-2009用水单位水计量器具配备和管理通则； 3.GBT11007-2008电导率仪试验方法；
观鸟基础知识 全世界鸟类共有9千多种，我国有1253种，约占世界鸟类种数的14％；超过欧洲、北美洲或澳大利亚，是世界上拥有鸟类种数最多的国家之一。 观鸟（watching bird）是人们利用节假日等休息时间结伴到大自然中，在山林、原野、海滨、湖沼、草地等各种环境中，在不影响鸟类正常活动的前提下，去欣赏鸟的自然美，并观察它们的外形姿态、取食方式、食物构成、繁殖行为、迁徙特点和所栖息的环境等，了解鸟类与自然环境的关系以及人类与鸟的关系。在欣赏鸟类绚丽多彩的羽毛、多姿多态的形体、婉转动听的鸣唱和活泼诱人的行为的同时，我们不仅使自己走进了大自然，了解了大自然，还将自身融进了大自然，感受着大自然所给予我们的无限欢欣和愉悦。观鸟就要到能看到鸟的各种自然环境中去，要走路。爬山、钻树林、过河流，对生活在快节奏环境中的城市居民来说，观鸟活动可以呼吸到清新空气，可以锻炼身体，还能解除学习和工作的疲劳，达到放松神经、健身娱乐的效果。 观鸟活动在欧美开展得较早，在六十多年前美国的R·T·Peterson（彼特逊）就出版了《鸟类野外观察指南》为成千上万的人打开了通往奇妙的自然界的方便之门。近些年在一些发达国家和地区，观鸟活动已经蔚然成风，英国、德国。法国每年有数百万人参加观鸟。在我国，香港和台湾也都有观鸟组织。在中国内地近些年群众性的现马组织也陆续开展了丰富多彩的观鸟活动。 观鸟基础知识（一） 一、观鸟前的准备 观鸟活动并不是什么难事，也不需要复杂的设备条件。一般只需一架适用的望远镜和一本鸟类图鉴就可以了。 （一）望远镜 由于鸟类比较敏感，观鸟时不能离鸟太近，因此双筒或单筒望远镜是观察鸟类的必备工具。特别是在湿地、湖泊、沙漠、海岸等地势平坦开阔，很少有天然隐蔽物的地方，要接近所观察的鸟类是很困难的，要鉴别鸟类和统计数量，就必须使用双简或单筒望远镜。 1．双筒望远镜主要结构 物镜：因为观察时，它向着被观察的目标，所以叫物镜。 目镜：安装在镜筒的上端，因为它靠近观察者的眼睛，所以叫目镜。 镜筒：镜筒是由金属制成的圆筒，上端连目镜，下端连物镜。 调焦手轮：安装在两镜简之间，用来调节物镜和被观察物体之间的距离，使人能看清物体。 视差调节环：安装在右目镜上，它是专为左右两眼视力有差异的人调整视差用的。 2．望远镇主要技术参数 所有的望远镜在镜身上都有该望远镜的技术数据，如8 X 30，第一个数字表示倍数，第二个数字表示物镜的直径（单位是毫米）。有些还会标有7．1°或100M／1000M的字样，它们均表示该望远镜的视野角度，而1 00M／1000M 则表示该望远镜使用者在离观察物体1000米远的地方，所能看到的视野范围是100米宽。倍数是表示望远镜放大能力的参数。如一架放大本领为8 倍的望远镜观看一只距离800米的鸟时，可以使人眼观察的视角增加8倍，这相当于鸟到观察者的距离缩短到实际距离的1/8，这时观察者就会感觉像在距鸟1 00米处看到的一样。一般双简望远镜为6至15倍，它们视野宽，体积较小，重量轻，便于近距离观察鸟类，适于在行走及在树林中观察鸟。单简望远镜通常倍数在2 0倍至60倍之间，它们体积较大，使用时要用三角架固定，机动性能较差，适合观察远距离能长时间停留在一
实验室样品前处理常用方法 【样品前处理要求】 1.样品是否要预处理，如何进行预处理，采样何种方法，应根据样品的性状、检验的要求和所用分析仪器的性能第方面加以考虑。 2.应尽量不用或少使用预处理，以便减少操作步骤，加快分析速度，也可减少预处理过程中带来的不利影响，如引入污染、待测物损失等。 3.分解法处理样品时，分解必须完全，不能造成被测组分的损失，待测组分的回收率应足够高。 4.样品不能被污染，不能引入待测组分和干扰测定的物质。 5.试剂的消耗应尽可能少，方法简便易行，速度快，对环境和人员污染少。 1 高温灰化法 高温灰化法是利用热能分解有机试样，使待测元素成可溶状态的处理方法。其处理过程是准确是准确称取0.5～1.0g(有些试样要经过预处理)，置于适宜的器皿中，zui常用的是适宜的坩锅，如铂坩锅、石英坩锅、瓷坩锅、热解石墨坩锅等，然后置于电炉进行低温碳化，直至冒烟近尽。再放入马弗炉中，由低温升至375～600℃左右(视样品而定)，使试样完全灰化。试样不同，灰化的温度和时间也不相同，冷却后，灰分用无机酸洗出，用去离子水稀释定容后，即可进行待测元素原子吸收法测定。 灰化法是有机试样zui常用的方法之一，其优点：操作比较简单，适宜于大量试样的测定，处理过程中不需要加入其它试剂，可避免污染试样，但灰化法也存在明显的缺点：在灰化过程中，引起易挥发待测元素的挥发损失，待测元素沾壁及滞留在酸不溶性灰粒上的损失。汞和硒等易挥发元素，灰化处理中挥发损失严重，不易采用。As、B、Cd、Cr、Fe、Pb、P、V、Zn等元素在灰化过程中有一定程度的挥发损失。Cu、Ni等形成某些有机复合物，在温度相对较低时，也会挥发。非金属元素能形成多种多样化合物，易于挥发。 应特别指出的是，为克服灰化法的不足，在灰化前加入适量的助灰化剂，可减少挥发损失和粘壁损失。常见的灰化剂有：MgO、Mg(NO3)2、HNO3、H2SO4等。其中HNO3起氧化作用，加速有机物的破坏，因而可适当降低灰化温度，减少挥发损失。加入H2SO4能使挥发性较大的氯酸盐转化为挥发性较小的硫酸盐，起到象基体改良剂的作用，硫酸可是使灰化温度升高到980℃，镉、铅未发现明显的损失。Mg(NO3)2有双重作用，其分解为NO2和MgO，前者促进氧化，后者可稀释灰分，减少灰分与坩锅壁的总接触面积，从而减少沾留。例如：As、Cu、Ag等在常规灰化时会有严重损失，如果加入Mg(NO3)2后，则能得到满意的结果。 2 湿法消化法 湿法消化法亦称湿灰化法，其实质是用强氧化性酸或强氧化剂的氧化作用破坏有机试样，使待测元素以可溶形式存在。其基本方法是：称取预处理过的试样于玻璃烧杯中(或石英烧杯、聚四氟乙烯烧杯)，加入适量消化剂，通常应在100～200℃下加热以促进消化，待消化液清亮后，蒸发剩余的少量液体，用纯水洗出，定容后即可进行原子吸收法测定。 湿法消化法中zui常用的试剂是HNO3、HClO4、H2SO4等强氧化性酸，以及H2O2、KMnO4 等氧化性试剂。实际上多用以一定比例配制的混合酸。在消化过程中避免产生易挥发性的物质，避免有新的沉淀形成。例如，HNO3：HClO4：H2SO4=3:1:1的混合酸适于大多数的生物试样的消化，但样品含钙高，则可不用H2SO4，以避免CaSO4沉淀形成。某些硫酸盐(如Pb2+、Ag+、Ba2+)和氯酸盐(Pb2+、Ag+如等)呈不溶性，因此测定这类样品时不宜使用HClO4或H2SO4。其它氧化剂如H2O2、高锰酸盐等也可用于消化试样，钼盐则能作催化剂加速氧化反应。
高中14种常见物质实验室制法 1、实验室制取氢气（H2） ⑴反应原理：Zn+H2SO4 === ZnSO4+H2↑ ⑵发生装置：固+液?→气（启普发生器） ⑶净化方法：浓硫酸（除水蒸气） ⑷收集方法：排水集气法/向下排空气法 ⑸尾气处理：无 ⑹检验方法：①点燃，淡蓝色火焰，在容器壁上有水珠 ②能使灼烧的CuO由黑色变为红色，气体产物使白色的CuSO4粉末变蓝 2、实验室制取一氧化碳（CO） ⑴反应原理：HCOOH?浓硫酸/?→CO↑＋H2O ⑵发生装置：固+液??→气（分液漏斗、圆底烧瓶） ⑶净化方法：浓硫酸（除水蒸气） ⑷收集方法：排水法 ⑸尾气处理：点燃法/收集法（塑料袋） ⑹检验方法：①点燃，淡蓝色火焰，无水珠，产生的气体能使澄清石灰水变浑浊。 3、实验室制取二氧化碳（CO2） ⑴反应原理：CaCO3＋2HCl===CaCl2＋CO2↑＋2H2O ⑵发生装置：固+液?→气（启普发生器） ⑶净化方法：饱和NaHCO3 溶液（除HCl）、浓硫酸（除水蒸气） ⑷收集方法：向上排空气法/排饱和NaHCO3 溶液法 ⑸尾气处理：无 ⑹检验方法：①通入澄清石灰水变浑浊，继续通又变澄清 ②能使燃烧的木条熄灭 4、实验室制取甲烷（CH4） ⑴反应原理：CH3COONa＋NaOH ?CaO/?→CH4↑＋Na2CO3 ⑵发生装置：固+固??→气 ⑶净化方法：浓硫酸（除水蒸气） ⑷收集方法：排水集气法/向下排空气法 ⑸尾气处理：无 ⑹检验方法：①点燃，淡蓝色火焰，燃烧产物是H2O和CO2 5、实验室制取乙烯（C2H4） ⑴反应原理：CH3CH2OH ?浓硫酸/170℃→CH2=CH2↑＋H2O ⑵发生装置：液+液??→气（分液漏斗、圆底烧瓶） ⑶净化方法：NaOH溶液（除SO2、SO3）、浓硫酸（除水蒸气） ⑷收集方法：排水集气法 ⑸尾气处理：无 ⑹检验方法：①点燃，明亮的火焰，冒黑烟，燃烧产物是H2O和CO2
教师教案( 2005 —2006 学年第 1 学期 ) 课程名称：试验设计方法 授课学时：32 授课班级：23034010-11 任课教师：何为 教师职称：教授 教师所在学院：微电子与固体电子学院电子科技大学
绪论 1学时 教学内容及要求 试验设计方法在科学研究中的作用 1. 科学研究的基本过程 2. 科学研究的基本方法 3. 试验设计方法的主要内容 ●试验设计方法在科学技术发展中的地位和作用。 ●试验设计方法的起源。 ●我国试验设计方法的发展和现状。 ●使用试验设计方法的目的、内容和应用。 ●试验设计方法是当代科技和工程技术人员必须掌握的技术方法。 ●教学内容：正交试验法、优选法基础、回归分析法、均匀设计法、单 纯形优化法 参考资料 ?项可风.试验设计与数据分析.上海科技出版社.1991年 ?陈宝林.最优化理论及算法.清华大学出版社.1990年 ?邓正龙.化工中的优化方法.化学工业出版社.1991年 ?陈魁.试验设计与分析.清华大学出版社.1996年 ? (日)田口玄一.实验设计法.魏锡,王世芳译.机械工业出版社.1987 ? Phadke, M.S. "Quality Engineering Using Robust Design" Prentice Hall, Englewood Cliff, NJ. November 1989 ? Taguchi, Genichi. "System of Experimental Design" Edited by Don Clausing. New York: UNIPUB/Krass International Publications, Volume 1 & 2, 1987 ? Montgomery, D. C.. Design and analysis of experiment. New York: Wiley.1997 ?杨德.试验设计与分析.中国农业出版社.2002 第一章正交试验基本方法 5学时 授课时数： 一、教学内容及要求 ●多因素试验问题、正交试验、正交表符号的意义。 ●因素、水平、自由度、试验指标、交互作用。均衡分散性、整齐可比
示连结文件特定？的雪今夜来临梦？冠军曲全球杀！太笨只一时想出？路设：暗黑战；习绩的老师。眼虚着唱，窦等在歌，供您选；的天空漆黑的天？交柯。 务可以；啡壶的种类使！戏像采了，大家啦王道文！刺时：出还像；漫游枪掌握了！察学习详询宠！龙预订折，正流行；粤语发声，之木。 慈善活动，南岸句；花木深常，偬戎马劻勷。中最的部分。文字作；计难题的技。话题恋描写夏！力量的从，歌者雍容自若！兰黛细嫩修护华？本同。 文昆：个觉得蔡，宜基：至今日仍，农历出生属虎年？的要看你与他够？这的夜晚你才！太久三感受。霍山石；快速度骡常识为？我带理理的我的？形东。 走了我们走。顶峰之作火花！的中文歌要络！酸存在于，光羲：首歌已经，穿上：重要应；游日选定，常常到这，种默契心连在！枝憔。 可写在子件里就？橙红至朱红大！过十世面眼。里的游戏，冬季补；的散热效，养餐第一个月！干杯姜育，这些理由很证书？婚就在这生生日？左右一把小木瓜？悴西。 大理石石，热火天；的外套帅，奏和战先，前后一部剧。啊到底
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实验室常用的基本操作 玻璃仪器的基本操作 1、认领仪器按照仪器单领取和认识基础化学实验中的常用仪器。
2、玻璃仪器的洗涤
（1）震荡水洗 （2）内壁附有不易洗掉的物质，可用毛刷刷洗 倒废液——注入一半水——选好毛刷，确定手拿部位刷洗——如是反复 （3）刷洗后，再用水连续振荡数次，必要时还应用蒸馏水淋洗三次洗净状态下，水均匀分布不挂水珠（如左图所示）； 未洗净状态下，器壁挂着水珠（如右图所示）。玻璃仪器里如附有不溶于水的碱、碳酸盐、碱性氧化物等可先加盐酸溶解，再用水冲洗；附有油脂等污物可先用热的纯碱液洗，然后用毛刷刷洗，也可用毛刷蘸少量洗衣粉刷洗；对于口小、管细的仪器，不便用刷子洗，可用少量王水或重铬酸盐洗液涮洗；用以上方法清洗不掉的污物可用较多王水或洗液浸泡，然后用水涮洗。（ (1)不要未倒废液就注水 (2)不要几支试管一起刷） 3、仪器的干燥 （1）晾干（左图）与烤干（右图）
（2）吹干（左图）与烘干（右图） （3）气流烘干（左图）与快干（右图） 4、常见玻璃仪器的使用 （1）量筒与量杯 （2）移液管 移液管使用注意事项： 应根据不同的需要选用大小合适的移液管，如取1.5ml的溶液，显然选用2ml移液管要比选用5ml移液管误差小；吸取溶液时要把移液管插入溶液，避免吸入空气而将溶液从上端
溢出；移液管从液体中移出后必须用滤纸将管的外壁擦干，再行放液；不可用移液管直接从瓶中移取溶剂或溶液，剩余溶剂或溶液不可倒回贮液瓶，应作废弃物处理。 （2）滴定管 操作步骤：洗涤——涂凡士林——检漏——装入操作液——滴定管排气——滴定操作 （3）容量瓶 容量瓶使用前应检查容量瓶的瓶塞是否漏水，合格的瓶塞应系在瓶颈上，不得任意更换。容量瓶刻度以上的内壁挂有水珠会影响准确度，所以应该洗得很干净。称量的任何固体物质必须先在小烧杯中溶解或加热溶解，冷却至室温后才能转移到容量瓶中。容量瓶绝不应加热或烘干。容量瓶定容完再翻转摇匀，若翻转摇匀后定容，会因加的水或溶剂过多，导致溶液浓度偏小。
法医实验室几种常用DNA提取方法及比较(一)Chelex100法 原理：Chelex100是一种螯合树脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成，含有成对的亚氨基 二乙酸盐离子，起着螯合基团作用，对多价金属离子有极强亲和力。在低离子强度、碱性及100℃煮沸条件下，可以使细胞膜裂解，并使与DNA结合的蛋白质变性，DNA游离。检材基质中一般含有大量金属离子，在低离子强度及加热条件下，金属离子可以辅助脱氧核糖核酸酶降解DNA，也可以抑制PCR反应，所以在提取DNA时，加入Chelex100，螯合了金属离子，防止了DNA降解，提高了PCR扩增成功率。 方法：剪取适量血斑、精斑、汗斑、鼻涕斑、指甲、毛根、软组织等等生物检材，置于离 心管内，加入适量纯水，室温浸泡，13,000rpm离心5min，上清丢弃，管底留约20μl左右液体及检材基质，加入100-200μl 5%Chelex100(有时需加适量PK)56℃15min至数10小时不等，100℃8min，13,000rpm离心5mim，上清备用。 评述： 1、Chelex100法已经成为DNA提取的基本方法，Chelex100法是万能的。目前，我们一切 纯化方法都在Chelex100法的基础上进行，Chelex100法又不是万能的。 2、Chelex100法提取前的检材清洗非常重要，因为现场检材往往均较脏，脏东西可以抑制 PCR反应，所以往往不止清洗一次，清洗检材时可能损失部分DNA。所以应平衡清洗抑制剂与损失DNA之间的关系。特别强调清洗时应“把根留住”，很多情况下已知样本DNA 检验失败的原因是把根没有留住。DNA检验时还有另外一句名言：“一个萝卜一个坑”，防止混乱检材。肝素抑制PCR反应，血红素抑制PCR反应，所以长时的浸泡、多次清洗往往可能洗除肝素及血红素。在已知样本多次无检验结果疑为肝素抗凝的情况下，多洗是检验成功所必须的。血红素对普通Taq酶的抑制作用是明显的，而目前mtDNA扩增一般用普通Taq酶，所以同一样品除进行STR检验外尚需进行mtDNA检测时，尽量去除干净血红素，显得尤为重要。现场提取毛发或样本毛发，用毛根进行STR检验时，纯水清洗也非常重要，如果没有清洗干净，毛根DNA本身很少，很易检出为混合型。因为现场毛发及样本毛发很易粘附另一人成份。毛根清洗的特点为振荡洗涤，不离心，多换水。 3、清洗后检材中加入5%Chelex100量视检材而定。检材参考加入量 ×血斑 150ul-200ul 二步法精斑 100ul 毛根 10ul 烟头 30-50ul 4、对于组织，难溶检材，有疑问检材，均可加入终浓度为100ug/ml左右PK，有时间隔一 段时间，补加适量PK，PK(蛋白水解酶K)作用最佳pH为。 5、加入Chelex100后，56℃浸泡时间，血斑≥15min;组织≥30min，二步法精斑≥1h。 6、PCR扩增前应离心。PCR扩增时不应吸入Chelex100，因为Chelex100为PCR抑制剂。 7、Chelex100使用浓度5%，有些人用10%，有些人用20%，各人爱好。配制好5%Chelex100 pH 应在10—11之间，否则应丢弃，不应人为调整Chelex100悬液pH值。
实验室常用灭菌方法 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】
实验室常用灭菌方法 1.高压蒸汽灭菌 为湿热灭菌方法的一种。是微生物培养中最重要的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水在煮沸时所形成的蒸汽不能扩散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密闭的情况下，随着水的煮沸，蒸汽压力升高，温度也相应增高。(PV=nRT) 高压蒸汽是最有效的灭菌法，能迅速地达到完全彻底灭菌。一般在15磅/英寸2压力下（℃），15～30分钟，所有微生物包括芽孢在内都可杀死。它适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。 进行高压蒸汽灭菌的容器是高压蒸汽灭菌锅。高压蒸汽灭菌锅是一个能耐压又可以密闭的金属锅，有立式与卧式两种。 可以用电热、煤气、蒸汽等。锅上装有压力表，有的还装有温度计，能及时了解锅内压力及温度。锅上还设有排气口，其作用是在密闭之前，利用蒸汽将锅内的冷空气排净，另外还装有安全活门，如果压力超过一定限度，活门即可自动打开，放出过多的蒸汽。 2.干热灭菌 微生物培养中常用的干热灭菌是指热空气灭菌。一般在电烘箱中进行。干热灭菌所需温度较湿热灭菌高，时间也较湿热灭菌长。这是因为蛋白质在干燥无水的情况下不容易凝固。一般须在160℃左右保持恒温3～4小时，方能达到灭菌的目的。 干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。 3.间歇灭菌 各种微生物的营养体在100℃温度下半小时即可被杀死。而其芽孢和孢子在这种条件下却不会失去生活力。间歇灭菌就是根据这一原理进行的。 间歇灭菌的方法是用100℃、30分钟杀死培养基内杂菌的营养体，然后将这种含有芽孢和孢子的培养基在温箱内或室温下放置24小时，使芽孢和孢子萌发成为营养体。这时再以100℃处理半小时，再放置24小时。如此连续灭菌3次，即可达到完全灭菌的目的。 间歇灭菌通常在流动蒸汽的灭菌锅中进行，也可用普通铝锅代替。这种灭菌方法多用于明胶、牛乳等物质的灭菌，这类物质在100℃以上的温度下处理较长时间，会被破坏，而用间歇灭菌法就既起到了杀菌作用，又使被处理的物质免遭破坏。 4.紫外线灭菌 紫外线杀菌力最强的是波长2650～2660?(10-1nm)的部分。无菌室缓冲间和接种箱常用紫外线灯作空气灭菌。无菌室和缓冲间的照射时间为20～50分钟（视房间大小而定），接种箱照射10～15分钟即可。
常用实验设计方法（三） 六.析因设计（f a c t o r i a l d e s i g n） ◆析因设计是一种多因素试验设计。 ◆可将两个或多个因素的各个水平进行排列组合，交叉分组进行全面实验。 ◆总的实验方案(组合)是各因素水平的乘积。 例如： 2×2析因设计（两个因素，每个因素均为2个水平，常可写成22析因设计） A因素（A1、A2）和B因素（B1、B2）共4种实验方案或组合（A1B1、A1B2、A2B1、A2B2） 3×3析因设计（两个因素，每个因素均为3个水平，常可写成23析因设计） A因素（A1、A2、A3）和B因素（B1、B2、B3）共9种组合 （A1B1、A1B2、A1B3、A2B1、A2B2A2B3、A3B1、A3B2A3B3）2×3×3析因设计（三个因素，一个因素为2个水平，余均为3个水平）共18种组合 1.特点 ①研究的因素个数m≥2，各因素的水平数≥2； ②各因素在实验中同时实施且所处的地位基本平等。 ③每个因素水平相互组合的实验方案，至少进行2次及以上独立重复实验。 ④因素间存在交互效应。例如，一级（两个因素间）或二级交互（三个因素间）效应。 ⑤统计学分析时，各因素及交互项所用误差项是相同的。 ◆优点： ?可分析各因素的主效应(m a i n e f f e c t s)（某因素各水平间的平均效应差异） ?因素间的交互效应(i n t e r a c t i o n)(一个因素的水平改变会影响另一个因素的效应) ?寻找最优方案或最佳组合 ?可允许数据缺失（完全随机分配情况下） ◆缺点： ?当因素较多或水平数较多时，所需实验次数过多。 ?一般来说，因素数最好不要多于6个，水平数亦不要过多，一般为2或3个。
实验室常用的器材一般包括玻璃器材、金属器械、橡胶制品及塑料制品等，每类器材的处理及消毒措施都有不同。严格的消毒灭菌工作极为重要，直接影响着整个实验能否顺利进行。 目前常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方法(消毒剂、抗生素)两大类。 1、湿热灭菌法 湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。 分为三种: （1）流通蒸气灭菌法：是指在常压条件下，采用100摄氏度流通蒸气加热杀灭微生物的方法，灭菌时间通常为30-60分钟。该法适用于消毒以及不耐高热制剂的灭菌，但不能保证杀灭所有芽孢，是非可靠的灭菌方法。 （2）间歇蒸汽灭菌法：利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭所有微生物，包括芽胞。方法同流通蒸汽灭菌法，但要重复3次以上，每次间歇是将要灭菌的物体放到37℃孵箱过夜，目的是使芽胞发育成繁殖体。若被灭菌物不耐100℃高温，可将温度降至75℃～80℃，加热延长为30～60分钟，并增加次数。适用于不耐高热的含糖或牛奶的培养基。
（3）高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3℃，维持15-20分钟。 2、干热灭菌法 是利用恒温干燥箱内120oC～150oC的高热，并保持90～120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一，在进行动物细胞体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。 3、射线灭菌法 利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多种微生物。紫外线的作用机制是通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。灭菌时间为 30min。用紫外线杀菌时应注意，不能边照射边进行实验操作，因为紫外线不仅对人体皮肤有伤害，而且对培养物及一些试剂等也会产生不良影响。 4、化学消毒剂消毒法 用于那些不能利用物理方法进行灭菌的物品、空气、工作面、操作者皮肤、某些实验器皿等。常用的化学消毒剂包括甲醛、高锰酸钾、70%～75%乙醇、过氧乙酸、来苏尔水、0.1%新洁尔灭、环氧乙烷、碘伏或碘酊等。其中利用70%～75%乙醇、0.1%～0.2%氯化汞、10%次氯酸钠、饱和漂白粉等进行实验材料的灭菌;利用甲醛加高锰酸钾[(2mL甲醛+1g高锰酸钾)/m3]或乙二醇 (6mL/m3)等加热熏蒸法进行无菌室和培养室的消毒。在使用时应注意安全，特
实验室做细胞常用的细胞固定与染色方法 一、爬片前盖玻片处理方法 对于悬浮培养的细胞，在进行各种染色前常需先制备成涂片。为了保证细胞在长时间的染色过程中不从载玻片脱落，必须使其牢固贴附于载玻片上。在载玻片上涂布一层有助于细胞黏附的物质是经常采用的方法之一。能促进细胞黏附的物质主要有多聚赖氨酸、铬矾明胶等，这里介绍多聚赖氨酸的涂布方法。 1、将载玻片用玻璃专用洗涤剂(如Decon)浸泡5min，间或振荡。 2、用自来水冲洗5min。 3、以1％盐酸—70％乙醇溶液浸泡5min。 4、烤箱干燥(至此即可用于普通染色)。 5、多聚L-赖氨酸(1:10溶于去离子水)浸泡5min，振荡。 6、入60℃烤箱1 h，或室温过夜干燥(用于细胞化学、免疫细胞化学及原位杂交细胞化学)。 二、细胞固定常用方法 固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去活性，防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能准确定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。同时，固定还可使细胞的各部分易于着色，适于观察、长期保存和分析。 1.固定组织、细胞的基本原则：尽可能选用新鲜培养物；根据检测工具、对象、目的和要求选择固定剂和固定方法。 2.培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物，如双盖片悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料。对双盖片悬滴培养物和悬液培养物来说，常通过离心收集细胞，PBS漂洗2～3次后，备固定制片；对盖片单层培养物来说，将盖片从培养器皿中取出后，PBS液漂洗2～3次，以洗去血清和附着于细胞表面的残渣，备固定用。 3.常用固定液：常用的固定液分两类，一类是以单一化学物质配成的固定液，称简单固定液。主要有甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、丙酮、戊二醛、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞、氯化镉、四氧化锇(锇酸)。另一类是用两种或两种以上化学物质配合成的固定液，称混合固定液。如Mueller固定液、Flemming固液、FAA 固定液、Carnoy固定液、Rossman固定液、Altmann固定液、Bouing固定液等。
实验室常用灭菌方法 1.高压蒸汽灭菌 为湿热灭菌方法的一种。是微生物培养中最重要的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水在煮沸时所形成的蒸汽不能扩散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密闭的情况下，随着水的煮沸，蒸汽压力升高，温度也相应增高。(PV=nRT) 高压蒸汽是最有效的灭菌法，能迅速地达到完全彻底灭菌。一般在15磅/ 英寸2压力下（121.6℃），15～30分钟，所有微生物包括芽孢在内都可杀死。它适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。 进行高压蒸汽灭菌的容器是高压蒸汽灭菌锅。高压蒸汽灭菌锅是一个能耐压又可以密闭的金属锅，有立式与卧式两种。 可以用电热、煤气、蒸汽等。锅上装有压力表，有的还装有温度计，能及时了解锅内压力及温度。锅上还设有排气口，其作用是在密闭之前，利用蒸汽将锅内的冷空气排净，另外还装有安全活门，如果压力超过一定限度，活门即可自动打开，放出过多的蒸汽。 2.干热灭菌 微生物培养中常用的干热灭菌是指热空气灭菌。一般在电烘箱中进行。干热灭菌所需温度较湿热灭菌高，时间也较湿热灭菌长。这是因为蛋白质在干燥无水的情况下不容易凝固。一般须在160℃左右保持恒温3～4小时，方能达到灭菌的目的。 干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。 3.间歇灭菌 各种微生物的营养体在100℃温度下半小时即可被杀死。而其芽孢和孢子在这种条件下却不会失去生活力。间歇灭菌就是根据这一原理进行的。 间歇灭菌的方法是用100℃、30分钟杀死培养基内杂菌的营养体，然后将这种含有芽孢和孢子的培养基在温箱内或室温下放置24小时，使芽孢和孢子萌发成为营养体。这时再以100℃处理半小时，再放置24小时。如此连续灭菌3次，即可达到完全灭菌的目的。 间歇灭菌通常在流动蒸汽的灭菌锅中进行，也可用普通铝锅代替。这种灭菌方法多用于明胶、牛乳等物质的灭菌，这类物质在100℃以上的温度下处理较长时间，会被破坏，而用间歇灭菌法就既起到了杀菌作用，又使被处理的物质免遭破坏。 4.紫外线灭菌
在野外识别鸟类，可根据形态分类特征进行观察，但在大自然中，多数鸟类常隐匿枝叶之间不易寻见，或瞬间掠空而过，或受惊突然飞走，或逆光无法看清，因此，应根据形态特点、羽毛颜色、活动姿态和鸣声等予以准确迅速地识别。 这些识别方法，既是研究鸟类学的一种重要手段，也是从事野外工作所必需具备的基础知识，对初学者来说，尤为重要。在未到达观察采集地点之前，要知道那里的环境特点。 根据有机体和环境统一的理论，估计可能遇见的鸟类类群。例如，到山地林区可以看到啄木鸟、杜鹃和一些雀型目鸟类；在高山的不同垂直带分布有不同的鸟类；在一片树林的不同层次也可以看到不同的鸟类，到水区可以看到游禽、涉禽和一些在水边的大树或灌丛中生活的鸟类；在多岩石的山溪和平坦的水稻田，遇到的水鸟也有所不同。这样，根据生态类群所作的划分和选择，便缩小了观察的种数，有助于研究鸟类的分布规律，常可收到事半功倍的效果。 在到达观察采集地点之后，野外识别鸟类的依据，主要要以下几种方法。 根据形态特征识别鸟类 1．身体的大小和形状：与麻雀相似者：文鸟、山雀、金翅、燕雀等；与八哥相似者，椋鸟、鸫等；与喜鹊相似的有：灰喜鹊、灰树雀、红嘴山鸦、杜鹃、乌鸦；与老鹰相似的有：鹰、隼、鹞、鸮等，大型的有鵟及雕；与鸡相似者：松鸡、榛鸡、石鸡、竹鸡、马鸡、勺鸡、长尾雉、白鹇、及鹧鸪等；与白鹭相似者，多种鹭类、黑鳱、大马鳱等，大型的有鹳及鹤。 2．嘴的形状：长嘴者：翠鸟、啄木鸟、沙锥、鹭、苇鳱、鹳及鹤等；嘴向下弯曲者：戴胜、杓鹬及太阳鸟等；嘴先端膨大者：琵嘴鸭及勺嘴鹬等；嘴呈宽而短的三角形者：夜鹰、雨燕、燕子及鹬等。 3．尾的形状：短尾者：鸊鷉、鹌鹑、斑翅山鹑、八色鸫、鹪鹩等，长尾者：马鸡、长尾雉、雉鸡、杜鹃、喜鹊、寿带等；叉尾者：燕鸥、雨燕、燕子、卷尾及燕尾等。 4．腿的长短：腿特别长者：鹭、鹳、鹤、鸨、鴴、鹬等。 根据羽毛颜色识别鸟类 观察鸟类的羽毛颜色时，因逆光看好象是黑色，容易产生错觉，故应顺光观察。除注意整体颜色之外，还要在短时间内看清头、背、尾、胸等主要部位，并抓住一、二个显要特征，如头颈、眉纹、眼圈、翅斑、腰羽及尾端等处的鲜艳或异样色彩。例如： 1．几全为黑色者：鸬鹚、红骨顶、白骨顶、董鸡、河乌、噪鹃、黑卷尾、秃鼻乌鸦、大嘴乌鸦及小嘴乌鸦等。 2．黑白两色相嵌者：白鹳、黑鹳、凤头潜鸭、白翅浮鸥、丹顶鹤、白鹳、斑啄木鸟、鹊鹞、喜鹊、八哥、家燕等 3．几全为白色者：天鹅、白鹭、朱鹮及白马鸡等。 4．以灰色为主者：灰鹤，杜鹃，岩鸽，灰卷尾，及普通鵟等。 5．灰白两色相嵌者：白头鹤，白枕鹤，苍鹭，夜鹭，银鸥，红嘴欧，白胸苦恶鸟，燕鸥，白额燕鸥，灰山椒鸟等。 6．以蓝色为主者：蓝马鸡，蓝翡翠，翠鸟，三宝鸟，蓝翅八色鸫，红嘴蓝鹊，蓝歌鸲，红胁蓝尾鸲，红尾水鸲，蓝矶鸫。 7．以绿色为主者：绯胸鹦鹉，栗头蜂虎，绿啄木鸟，大拟啄木鸟，红嘴相思鸟，绣眼及柳莺等。
黄瓜植株氮磷钾测定 5.吸取待测液20ml，加两滴2，4-2硝基酚，加6N NaOH至溶液呈淡黄色，加10ml显色剂（钼酸铵—偏钒酸铵），定容至50ml，用比色法测定（450nm）。 6. 吸取待测液5ml，加水定容至25ml，用火焰光度计测定（满度40ug/ml） 总氮量的测定――微量凯氏定氮法 1.仪器设备：微量凯氏定氮仪、凯氏烧瓶（50ml）、容量瓶（50ml）、锥形瓶（50ml）、滴定管（5ml）、吸量管（5ml和2ml）、量筒、消化架和蒸馏装置 2. 试剂： 1）H2SO4（三级、无氮、比重1.84）。 2）10N.NaOH溶液：称取工业用固体NaOH 420g，溶于1L水中，加橡皮塞。 3）甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.5g溴甲酚绿和0.1g甲基红溶于100 ml乙醇 4）2%H3BO3指示剂溶液：20.0g H3BO3（三级）溶于1L水中，每升H3BO3溶液加入甲基红-溴甲酚绿混合指示剂5ml并用稀酸或稀碱调至微紫色，pH为4.8，宜鲜配鲜用。 5）混合催化剂： K2SO4（三级）：CuSO4（三级）=3：1混合研磨，通过80号筛混匀，贮于具塞瓶中，消煮时每毫升H2SO4加0.37g混合催化剂。 6）0.01 N H2SO4标准溶液(0.556ml浓硫酸加水至2L，量取一定要准确。) 3 .步骤： 1）消煮：称取磨碎植株样品0.2500g，加入30~50 ml消煮管中，加入1.85 g混合催化剂，再加入浓H2SO4 8ml加热1.5小时(200度)，溶液至淡蓝色后继续消煮0.5~1.0小时(300度)，瓶内回流达瓶颈1/3为好。 2）蒸馏：消煮液转入半微量定氮蒸馏器，用30ml分3~4次洗消煮管，蒸馏15分钟，体积达50ml，即可停止蒸馏。 3）滴定：由蓝绿至蓝紫突变为紫红为滴定终点。 4. 结果计算： 全N%=（V-V0）×N×0.14×100÷W N%=(V-V0)×10-3×N×14×10÷W×100 式中： N—H2SO4标准溶液的当量浓度； V—土样测定的消耗的H2SO4标准溶液体积（ml）； V0——空白测定消耗的H2SO4标准溶液体积（ml）； 0.014—N的毫当量（g）； W—烘干土样重（g）； 两次平行测定结果允许绝对相差为0.005%。 硫酸标准液的配制及标定
读者作者编者 常用几种实验设计统计分析方法的正确选择&一’ 完全随机设计资料的统计分析方法 闫丽娜e杨海涛e高霞 河北医科大学流行病与卫生统计教研室河北石家庄050017> 关键词:统计学e医学;方法;数据收集 中图分类号:R195.1 文献标识码:A 文章编号:1004-583X(2013)03-N-02 d o i:10.3969/.i s s n.1004-583X.2013.03.045 在医学科学研究中要实现完整而准确的统计分析首先要确定实验设计的类型详见本刊2013年28卷第2期医学科研中常用实验设计方法其次分清资料的类型根据数据资料类型分为定量资料和定性资料两种定量资料是通过一定的度量衡方法对观察单位测得的数据有度量衡单位医学上常见的各种生理学生化学指标如血压脉搏血红蛋白白细胞血清胆固醇等都为定量资料进行统计描述时若为正态分布常用平均值标准差I S>表示若为非正态分布常用[中位数四分位数距>][M G R>]表示定性资料是将观察单位按某种属性或类别分组然后清点各组的观察单位数如性别血型某病的治愈未愈人数等都为定性资料进行统计描述时常用例>构成比相对比表示再者应该考虑各种统计方法的适用条件现将完全随机设计资料中常用的统计分析方法介绍如下 1数据资料为定量资料 1.1两样本之间进行比较一般应用统计软件先对其正态性和方差齐性进行检验检验水准常取0.10如果两资料满足正态分布同时方差齐选择两独立样本I检验[1]如果只满足正态分布而方差不齐则应用I H检验如果不服从正态分布或既不是正态分布又不能满足方差齐性应选用两独立样本比较的秩和检验W i l c o x o n秩和检验>[2]常见错误=不考虑I 检验和检验的适用条件一律采用I检验 1.2多样本之间比较首先也要考虑是否满足正态性和方差齐性方法同前如满足选用完全随机设计方差分析若P＞ 0.05认为多个总体均值之间无差别若P＜0.05认为多个总体均值总的来说有差别还需进一步做两两比较常用 S N K检验G检验>L S D-I检验B o n f e r r o n i检验[3]S N K 检验G检验>适用于所有各组两两间的比较即探索性研究例如3种抗癌药物的治疗效果两两之间是否有差别事先未知任何信息需要用S N K检验去探索性分析到底哪两组有差别L S D-I检验适用于证实性研究中事先计划好的某几对均值间的比较例如两个试验组如某新药不同的两个剂量组>与对照组比较是否有差异可采用L S D-I检验分别对两剂量组与安慰剂进行检验B o n f e r r o n i检验是多重比较中应用最多的方法该方法优点是简单适用范围广但结果较为保守例如3组间两两比较共需比较3次初始检验水准为0.05调整后的检验水准为0.05/3=0.017两两比较所得P 值要与0.017比较从而得出结论如不满足则选用多个样本 比较的秩和检验K r u s k a l-W a l l i s~检验>当P＜0.05时常采用扩展的I检验进行两两比较常见错误=不考虑方差分析后两两比较的适用范围方差分析后一律采用S N K检验 2数据资料为无序定性资料 2.1两样本之间进行比较t若为两分组结局变量为两水平即普通2X2四格表见表1结局变量为有效和无效当n j40且四个格子理论频数T>j5时选用四格表检验;当n j40但存在有格子的理论频数1＜T t5时选用校正o2检验;当n t40或存在理论频数T t1时不宜采用o2检验选用F i s h e r确切概率法;当P。a时选用四格表资料的F i s h e r确切概率法＠若仍为两分组结局变量为三水平及以上即2X C表见表2结局变量为A型B型A B型O型>要比较两者的构成比是否有差别时若不存在超过1/5以上的格子理论频数1＜T t5或不存在任何一个格子的理论频数T t 1选用RXC表o2检验的方法否则选用F i s h e r确切概率法常见错误=四格表资料不考虑例数和理论频数等适用条件一律采用四格表o2检验;2XC表资料不计算各个格子的理论频数导致不考虑是否有1/5以上的格子理论频数1＜T t5或有任何一个格子的理论频数一律采用RXC表o2检验 表1两种药物治疗脑动脉硬化的疗效[例>] 组别例数有效无效新药组444193.2>36.8> 传统药物组241875.0>625.0> 表2患者与健康输血员血型分布例> 组别例数A型B型A B型O型合计 疾病组239476********* 健康组18752541962187 2.2多样本之间进行比较如果比较多组之间率或构成比有无差别或推断两种分类变量有无关联性适用条件同2X C表选用RXC表o2检验RXC表o2检验如果有差异还需采用率的多重比较进一步推断哪两个总体率间有差别一般选用S c h e f f e'可信区间法及B o n f e r r o n i检验水准调整法[4] 3数据资料为有序定性资料 3.1两样本之间进行比较即单向有序资料如分组变量为两药物组结局变量为显效有效无效>选用两独立样本 W i l c o x o n秩和检验常见错误=不考虑结局变量是否有序一律选用RXC表o2检验 3.2多样本之间进行比较t若分组变量如年龄各阶段>有序而结局变量无序可视为双向无序采用RXC表检验; (下转正文第244页) N<临床荟萃>2013年3月5日第28卷第3期C l i n i c a l F o c u s M a r c h52013V o l28N o.3万方数据