实验二牛乳中酪蛋白的制备（等电沉淀法）
171850044
钱诗晨 实验目的
1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法
2.了解从牛乳中制备酪蛋白的原理
3.验证蛋白质的双缩脲反应性质
4.学习和掌握蛋白质双缩脲反应的原理和方法
实验原理
（一）牛乳成分及酪蛋白性质
牛乳中含有碳水化合物、脂类蛋白质、维生素、微量元素和水。
其中蛋白质的种类有酪蛋白和乳清蛋白。乳清蛋白水合能力强，分散性高，在牛乳中呈高分子状态；酪蛋白含量较高，为80%，白色至淡黄色，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。酪蛋白是等电点为PH4.8的两性蛋白质，对酸敏感，PH较低时会沉淀。用途有食品如牛奶、奶粉、奶酪；医药保健如酪蛋白磷酸肽（CPP），其他行业如制备颜料等。
（二）测定方法
测定蛋白质常用的几种方法有：凯氏定氮法（蛋白质测定的国标规定方法）双缩脲法（Biuret法）Folin-酚试剂法（Lowry法）紫外吸收法、考马斯亮蓝法（Bradford法）
本次实验采用了双缩脲法：蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫色配合物，在540nm处有最大吸收。在一定浓度的范围内，蛋白质浓度与双缩脲反应所呈的颜色深浅成正比，可用比色法定量测定。
实验试剂
1.0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液
2.醇醚混合液
3.无水乙醚
4.市售牛奶
5.标准酪蛋白溶液
6.0.9%NaCl
7.双缩脲试剂
8.0.05mol/L NaOH
实验操作
（一）制备酪蛋白
1.称取20mg牛奶样品盛于100ml烧杯中，水浴加热至40℃。在搅拌下慢慢加
入预热至40℃的醋酸钠缓冲液20ml，用冰醋酸调节溶液pH至4.7（用精密pH
试纸3.8-5.4检测）。
2.将上述悬浮液冷却至室温，转移到100ml离心管中，4000r/min离心5min，
弃去上清液，沉淀为酪蛋白粗品。
3.用蒸馏水洗涤沉淀3次（每次20ml），3000r/min离心5min，弃去上清液。
在沉淀中加入20ml95%乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移到布氏漏斗中进行抽滤。用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次，最后用无水乙醚洗涤沉淀2次，抽干。4.将沉淀摊开在培养皿上，风干，得到酪蛋白纯品。准确称重，计算100ml牛乳
中酪蛋白含量。
5.将酪蛋白纯品存放于干净的小烧杯中，贴上标签并上交，其余作为样品进行测定。
（二）未知蛋白质样品的配制（0.5mg/ml）
准确称取25mg自制酪蛋白，用0.05mol/l NaOH溶液充分溶解（不溶可在50℃
水浴加热），用0.05mol/L NaOH溶液定容至50ml，充分摇匀。（如果有浑浊，须过滤取滤液。）
结果处理
1.样品吸光度标准曲线：以吸光度为纵坐标，各标准蛋白质溶液（mg/ml）为横
坐标绘制标准曲线
01234567
2mg/ml酪蛋白液/ml00.30.60.9 1.2 1.5 1.8样品3ml
蒸馏水/ml 3.
2.7 2.4 2.1 1.8 1.5 1.20
双缩脲/ml 2.0
蛋白质浓度/(mg/ml)00.20.40.60.8 1.0 1.2如图
A540nm00.03
60.07
3
0.10
6
0.13
7
0.17
0.20
7
0.053
2.计算酪蛋白纯度
分别以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/ml）或含量（mg）作为横坐标作图得标准曲线，由样品液的吸光度查标准曲线求出含量。
根据图表得，样品蛋白质浓度约为0.28mg/ml
纯度为(0.28*50)/25=56%
注意事项
1.须于显色后30min内比色测定，30min后可能有雾状沉淀产生。各管由显色到比色的时间应尽可能一致
2.若样品中有大量脂类物质存在时，反应混合物会产生浑浊，可用乙醚或石油醚将样品脱脂后再进行测定
思考题
1.本实验成败的关键是什么？
调节PH
2.提取酪蛋白除了本实验所用的方法外，还有没有其它
方法？
有，如盐析或加入有机溶剂
3.测定蛋白质的等电点的方法有哪些？
isoelectric focusing等电聚焦
3.若实验结果超出理论值范围，可能的原因是什么？
配制未知浓度蛋白质溶液时，提纯的蛋白质样品加多了
实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析实验材料：牛奶 小组成员： 实验时间：
一：实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析 二：报告撰写者 三、小组成员 实验仪器 温度计、布氏漏斗（*）、pH试纸（*）、抽滤瓶（*）水浴锅、烧杯、量筒、表面皿（*）、电子天平（*）、2个1000ml的容量瓶（*）、2张醋酸纤维薄膜（2cm×8cm 厚度120nm）成品（*）、培养皿9—10cm（*）、毛细管（*）、尺子、铅笔、单面刀片（*）、镊子、普通滤纸（*）、电泳槽、玻璃板8cm ×12cm（*）、752型分光光度计（*）、细布（*）、、、的移液管、试管、试管架、 四、实验材料 牛奶（蒙牛特仑苏和伊利金典） 五、实验试剂 特仑苏400ml、金典200ml、巴比妥（*）、巴比妥钠（*）、氨基黑10B（*）、50ml甲醇AR（*）、100ml冰醋酸AR（*）、95%的乙醇250ml（*)、95%的乙醚100ml（*）、L的乙酸100ml（*）、L的乙酸钠100ml（*）、25g氢氧化钠固体（*）标准酪蛋白、15mg五水硫酸铜（*）、60mg酒石酸钾钠（*）所需试剂配制方法： 乙醇乙醚混合液的配制： 10ml95%的乙醇 10ml95%的乙醚 乙醇钠缓冲液的配制： 配制乙醇乙醚1:1的混
L 的乙酸51ml L 的乙酸钠49ml 巴比妥钠缓冲液的配制： 巴比妥 巴比妥钠 染色液的配制： 氨基黑10B 50ml 甲醇AR 10ml 冰醋酸AR 漂洗液的配制： 45ml95%乙醇AR 5ml 冰醋酸AR 蒸馏水 透明液的配制： 25ml 的冰醋酸AR 75ml 的无水乙醇AR L 氢氧化钠溶液的配制： 16g 的氢氧化钠固体定容至1000ml 10%氢氧化钠溶液的配制： 5g 的氢氧化钠固体定容至50ml 双缩脲试剂的配制： 15mg 五水硫酸铜 配制巴比妥钠缓冲液（,./L ）, 将上 +40ml 蒸馏水， 混匀既得染 配制的乙酸钠缓冲液（l ） 混匀得染色液 混匀得透明液 溶于5ml 蒸馏水，在搅拌情况下，加入10%氢氧化钠溶液3ml ，用
酪蛋白磷酸肽的药理作用 【摘要】酪蛋白磷酸肽具有促进钙、铁、锌的吸收、利用，增强精卵的结合等作用。近年来对其进行了深入研究发现它在增强机体免疫力，促肿瘤细胞凋亡方面有潜在的药理作用，通过对其作用机制的研究，将为其用于临床提供理论依据。 【Abstract】Casein protein phosphorylation peptide with the promotion of calcium,iron,zinc absorption,utilization and enhance the integration of sperm，In recent years their has conducted in-depth study found that it enhanced immunity,and promote apoptosis of tumor cells have the potential pharmacological effects,through the mechanism of its role will be to provide a theoretical basis for clinical. 【Key words】Casein Phospho peptides; Pharmacological effects 英文：Casein Phospho Peptides(CPP) 别名：酪蛋白磷肽 化学结构：CPP的活性中心是成串的磷酸丝氨酸和谷氨酸族，其基本结构可表示为-serp-serp-serp-glu-glu-，相对分子质量约2000~4000。 性状：乳白色或淡黄色粉末，有轻微的芳香气味。易溶于水，水溶液呈中性，在酸性条件下不易沉淀。有良好的热稳定性。 来源与结构：Nato[1]最早用酪蛋白喂养大鼠,在肠内容物中发现CPP。Nicholas等[ 2-3]用胰酶或胰蛋白酶水解酪蛋白,精制、纯化制备CCP。CPPs有α和β两种构型[4]，其主要功能区是αSI-(59-79)5P和β(1-25)4P，不同条件下制备的CPP 都含有相同的核心构:-Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu-(Ser:丝氨酸,Glu:谷氨酸,P:磷酸基)。此结构中磷酸丝氨酸残基［-Ser(P)-］成簇存在,在肠道pH弱碱性环境下带负电荷,可阻止消化酶的进一步作用,使CPP不会被进一步水解而在肠道中稳定存在。同时,-Ser(P)-对CPP 的功能发挥起重要作用。冯凤琴等[5]研究了CPP的纯度、CPP 中氮与磷摩尔比值(N∶P)与其功能的关系,发现N∶P 越小,CPP的肽链越短,磷酸基密度越大,CPP 纯度越高,促进钙吸收和利用的作用越强。 1 酪蛋白磷酸肽的药理功能 1．1 促进小肠对钙的吸收25-(OH)2VitD3可促进钙吸收,其吸收率取决于小肠内游离的钙离子浓度。人日常膳食中,谷类等植物性食物中含有大量的植酸、肌醇六磷酸等高磷成分,它们在小肠下端pH 7~8 的环境下与钙结合成磷酸钙沉淀,因此影响钙离子的被动吸收。CPP[1] 能抑制磷酸钙沉淀的形成,使游离钙保持较高的浓度,促进钙离子的被动吸收,从另一个途径提高钙离子的吸收率。冯凤琴等[3]用pH-stat法观察实验室制得的CPP抑制磷酸钙沉淀的效果。结果发现0．11~0．12 g/L的CPP使磷酸钙沉淀的形成延缓5~40 min。相同条件下,不加
牛奶中酪蛋白的提取及含量测定 一、实验原理 1、牛乳的主要成分：碳水化合物（5%）、脂类（4%）、蛋白质（3.5%）、维生素、微量元素（Ca、P等矿物质）、水（87%） 牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖，它由D?半乳糖分子和D?葡萄糖分子通过P -1,4-糖昔键连接而成。乳糖溶于水，不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖水溶液中时，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。 牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白和乳清蛋白两种，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。而乳清蛋白水合能力强，分散性强，在牛乳中呈高分子状态。 2、等电点沉淀法： 在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零（即正负电荷相等），此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。酪蛋白的等电点为4.7左右（不同结构的酪蛋白等电点有所不同），本实验中将牛乳的pH调值4.7时，酪蛋白就沉淀出來。 市售牛奶通常会添加耐酸碱稳定剂來增加粘稠度，以致即使pH调至等电点酪蛋白也沉淀的很少，故实验时可将pH稍微调过多一点再调回等电点。同时，市售牛奶由于生产过程通常导致酪蛋白组分发生变化，因而使pl偏离了 4.7,通常偏酸。3、酪蛋白的提纯 根据乳糖、乳清蛋白等和酪蛋白的溶解性质差异，可以用纯水洗涤来除去乳糖、乳清蛋白等溶于水的杂质，再用乙醇除去脂类，然后过渡到用乙瞇洗涤，由于乙瞇很快挥发，最终得到纯粹的酪蛋白结晶。 4、蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝结合法） 考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G520的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm o当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰变为595nm o在一定范围内，考马斯亮蓝G520- 蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以测定蛋白质浓度。 二、实验器材与试剂 1、器材：恒温水浴锅、离心机、抽滤装置、蒸发皿、精密pH试纸、旋涡混合器、紫外分光光度计、试管四、5mL吸管、50mL容量瓶、100mL ft筒、电子分析天平 2、试剂：鲜牛奶、pH4.7醋酸■醋酸钠缓冲溶液、乙醇■乙艇混合液（95%乙醇、无水乙瞇体积比1： 1）、0.9%NaCl溶液、标准蛋白液（0.1mg/mL牛血清蛋白）、考马斯亮蓝G520染液 三、实验操作记录 1、酪蛋白的制备 将20mL牛奶盛于100mL的烧杯中加热到40*C,在搅拌下慢慢加入预热至40?C、pH4.7的醋酸缓冲溶液20mLo用冰醋酸调节溶液pH至4.7,此时即有大量的酪蛋白沉淀析出。将上述悬浮液冷却至室温，离心Smin (4000r/min),弃去上清液，沉淀即为酪蛋白粗品。
一、实验目的 1、掌握一种提取蛋白的方法。 2、掌握一种检测牛乳质量的方法。 二、实验原理 酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。 酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，经牛乳调到pH4.6，酪蛋白就从牛乳中分离出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。 三、仪器和试剂 仪器：温度计、布氏漏斗、pH 试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、量筒、表面皿、天平等。 试剂： 1. 95%乙醇、乙醚 2. pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L 3. 乙醇、乙醚混合液：乙醇∶乙醚=1∶1（体积比） 4. 市售牛乳 四、实验步骤 1.酪蛋白等电点沉淀 将100ml牛乳放到500ml烧杯中，加热至40℃左右的乙酸钠缓冲液，直到pH达4.6左右，用pH试纸或酸度计调试。将上述悬浮液冷却至室温，然后放置5min，用细布过滤，收集沉淀。 2.除脂类杂质 将上述沉淀用少量水洗数次，然后悬浮于30ml95%的乙醇中。将此悬浮液倾于布氏漏斗中，抽滤除去乙醇溶液，再倒入乙醇—乙醚混合液洗涤沉淀两次，最后再用一米洗涤沉淀两次，抽干。将沉淀从布氏漏斗中移去，在表面皿上摊开以除去乙醚，干燥后得到的是酪蛋白纯品。准确称重后，计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量（g%），并与理论产量（3.5g%）相比较，求出实际获得百分率。 一、实验目的 酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶制剂即可，而有些工作则要求较纯的酶制剂，需根据不同情况区别对待。在酶的提取和纯化过程中，自始至终都需要测定酶的活性，通过酶活性的测定以监测酶的去向。 二、实验原理 （一）酶的提取 1.酶的存在位置? 存在于动植物以及微生物的细胞的各个部位。 2.如何将酶从细胞中分离? 从高等植物中提取酶常遇到一些实际问题，首先是细胞中含有许多种酶，每种酶的浓度又很低，只占细胞总蛋白质中的极小部分（叶中的双磷酸核酮糖羧化酶除外），而许多植物组织中蛋白质的含量又很低。此外，各种酶的存在状态不同，有在细胞外的外酶，在细胞内的内酶，内酶中又有与细胞器一定结构相结合的结合酶，也有的存在于细胞质中，提取时都应区别对待，作不
实验四酪蛋白的制备 一、目的要求 学习和掌握从牛乳中制备蛋白的原理和方法；掌握等电点沉淀法提取蛋白质的原理和方法；掌握离心方法。 二、实验原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 三、材料、器材与试剂 1〉材料 鲜牛奶。 2〉器材 离心机、抽滤装置、精密pH试纸、电炉、烧杯、温度计、玻棒、漏斗、滤纸、滴管。3〉试剂 (1) 95%乙醇。 (2) 无水乙醚。 (3) 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液。 A液：0.2mol/L醋酸钠溶液，称取CH3COON a·3H2O 54.44g，用蒸馏水定容至2000ml。 B液：0.2mol/L醋酸溶液，称取优级纯醋酸(含量大于99.8%)24.0g，定容至2000ml。 取A液1770ml，B液1230ml混合即可得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。 (4)乙醇-乙醚混合液的配制：乙醇-乙醚=1:1(体积分数)。 四、实验步骤 (1)将20ml牛奶加热至40°C，在搅拌下慢慢加入预热至40°C、pH4.7的醋酸缓冲液20ml。用精密pH试纸调pH至4.7，将上述悬浮液冷却至室温，离心15min(3000r/min)，弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。 (2)用水洗1次，离心10min，弃去上清液。 (3)在沉淀中加30ml乙醇，搅拌片刻，将全部悬浮液转移至布氏漏斗中离心10min，弃上清液，用乙醇-乙醚混合液洗1次。最后用乙醚洗沉淀1次，抽干或滤纸过滤得到湿的酪蛋白。 (4)将沉淀摊开，风干；得到酪蛋白纯品。 五、结果及处理 准确称重，得20ml牛乳中酪蛋白含量(g)，按下式计算酪蛋白的得率： 测得含量 得率(%)= 理论含量×100 式中，理论含量为3.5g/100ml牛乳。 实验结果： (1.426-0.795) ×5 得率(%)= 3.5 ×100=90.14%
牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及鉴定 班级：2011级化学班学号：2011111102 姓名：陈雄志【摘要】牛奶是我们日常生活中常见的具有较高营养价值的乳制品，尤其是在婴儿及青少年时期，每天一定量的牛奶能促进身体健康成长，其主要营养成分为酪蛋白和乳糖，本实验将从新鲜牛奶中分离出酪蛋白和乳糖，并分别对其进行鉴定。 【关键词】牛奶酪蛋白乳糖分离鉴定 一、实验目的 1.熟悉查阅文献，从而提取新的设计方案 2.了解分离纯化生物大分子物质的一些方法和手段 3。掌握鉴定酪蛋白和乳糖的实验方法 二、实验原理 1.酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，是含磷蛋白质的复杂混合物。蛋白质是两性化合物，当调节牛奶的pH达到酪蛋白的等电点(pH=4．8)时，蛋白质所带正、负电荷相等，呈电中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会从牛奶中沉淀出来，以此分离酪蛋白。因酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，可用此两种溶剂除去酪蛋白中的脂肪。而乳糖不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖水溶液中，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。 2.酪蛋白的鉴定：在小试管中加入10滴酪蛋白溶液，然后加4滴茚三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现，则为酪蛋白。乳糖的鉴定：乳糖是还原性糖，绝大部分以α-乳糖和β-乳糖两种同分异构体型态存在，α-乳糖的比旋光度为+86o，而β-乳糖的比旋光度为+35o,水溶液中两种乳糖可互相转变，因此其水溶液有变旋光现象。 三、仪器与试剂 仪器：恒温水浴槽、100mL量筒、真空泵、布氏漏斗、250mL烧杯、玻璃棒、胶头滴管、精密pH计、旋光仪、电子天平。 试剂：牛奶、10%醋酸溶液、无水乙醇、乙醚、碳酸钙粉末、氢氧化钠溶液、氨水、茚三酮试剂。 四、实验步骤 1.酪蛋白的分离：取100mL新鲜牛奶，在恒温水浴中加热至40℃，恒温5分钟左右，边搅拌边慢慢加入10％醋酸溶液，使牛奶pH=4．8，放置冷却、澄清后，用尼龙布过滤酪蛋
中华人民共和国粮食行业标准《酪蛋白磷酸肽》编制说明 前言 酪蛋白磷酸肽(CPP)是以牛乳酪蛋白为原料，通过生物技术制得的具有生物活性的多肽，是一种功能性食品添加剂，可用于各种营养、保健食品中，能有效促进人体对钙、铁、锌等二价矿物营养素的吸收和利用。 酪蛋白磷酸肽是使用蛋白酶水解后的酪蛋白，经过精制、纯化制成，其核心结构为：—Ser（P）－Ser（P）－Ser（P）－Glu－Glu－（Ser：丝氨酸，Glu：谷氨酸，P：磷酸基）。这一结构中的磷酸丝氨酸残基（－Ser（P）－）成簇存在，在肠道PH弱碱性环境下带负电荷，可阻止消化酶的进一步作用，使CPP不会被进一步水解而在肠中稳定存在。国内研究发现，CPP中氮与磷的摩尔比值越小，CPP的肽链越短，磷酸基的密度越大，则CPP纯度越高，促进钙的吸收和利用作用也就越强。 从我国民众的钙营养状况看，我国民众膳食组成以植物性食物为主，其中含有大量的影响钙、铁、锌吸收因子，如植酸、草酸、等，因此，中国人缺钙尤为严重。目前，我国从儿童到中老年人各年龄组的人群，普遍存在缺钙问题。这就使得国内补钙多年以来保持长盛不衰的现象，消费者的补钙意识已由“接受”转变为“自发”。除了钙以外，中国人最易缺乏的矿物质是铁和锌。CPP不仅可促进钙的吸收，对铁、锌的吸收利用也有良好的促进效果，这更使得CPP在营养强化食品和保健食品中的应用备受瞩目。因此开发添加CPP的营养食品和保健品，能真正达到有效补充人体缺乏的矿物质的目的，满足人们的营养需求，必能产生巨大的经济效益和社会效益。 在我国，酪蛋白磷酸肽的规模化生产技术已经成熟，产业规模也在逐步扩大，与之相配套的国家标准才刚刚发布。由于国家标准规定的指标比较宽泛，为了能把握行业规模化发展方向，有效规范和监管酪蛋白磷酸肽产品市场，切实提升该类产品质量水平，推动酪蛋白磷酸肽进入健康发展的轨道，制定能反映本行业整体水平，又符合行业发展规律的酪蛋白磷酸肽行业标准势在必行。 1.工作简况（包括任务来源、协作单位、主要工作过程、行业标准主要起草人及其所做工作等） 任务来源、协作单位 酪蛋白磷酸肽在我国属于食品营养强化剂，它是牛乳或酪蛋白经过进一步加工的产物。目前该行业已经初步形成规模，但不可避免的存在行业管理机制不健全、市场准入政策法规
牛奶中酪蛋白的制备 一、实验目的 1. 学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。 2. 掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。 二、实验原理 利用酪蛋白的等点点为4.7，所以调节牛奶的pH4.7使酪蛋白沉淀洗出。等电点是调节溶液的pH,使蛋白质所带的正电荷和负电荷恰好相等，总净电荷为零，以两性离子存在，不想阳极移动也不想阴极移动，此溶液的pH称为蛋白质的等电点。酪蛋白不溶于乙醇、乙醚等试剂。因而加入乙醇乙醚洗涤沉淀物除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 三、实验材料、试剂与仪器 （一）材料与试剂 95%乙醇、新鲜牛奶、乙醇-乙醚混合液（乙醇：乙醚=1：1） 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液 A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2O 27.22g，定容至1000 mL。 B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）6.0g定容至500 mL。 取A液590mL，B液410mL混合即得pH 4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液1000 mL。 （二）器具 离心机、抽滤装置、精密pH试纸、玻璃棒、量筒、恒温水浴 四、实验步骤 （一）酪蛋白的粗提 100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000 r /min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 （二）酪蛋白的纯化 1. 用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3 000r/min），弃去上清液。 2. 在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇-乙醚混合液30 mL洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。 3. 将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。 （三）准确称重，计算含量和得率。
酪蛋白磷酸肽 1 范围 本标准规定了酪蛋白磷酸肽的相关术语和定义、质量要求、检验方法、判定规则、标签标识以及包装、储存和运输的要求。 本标准适用于以牛乳或酪蛋白制品为原料，用酶解法生产制得的商品酪蛋白磷酸肽。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 191 包装储运图示标志 GB 2761 食品安全国家标准食品中真菌毒素限量 GB 2762 食品安全国家标准食品中污染物限量 GB 5009.3 食品安全国家标准食品中水分的测定 GB 5009.4 食品安全国家标准食品中灰分的测定 GB 5009.5 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定 GB/T 5491 粮食、油料检验扦样、分样法 GB/T 5492 粮油检验粮食、油料的色泽、气味、口味鉴定 GB 7718 食品安全国家标准预包装食品标签通则 GB 28050 食品安全国家标准预包装食品营养标签通则 GB 31617 食品安全国家标准食品营养强化剂酪蛋白磷酸肽 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 酪蛋白磷酸肽 casein phosphopeptides 以牛乳或酪蛋白制品为原料，用酶解法生产制得的，主要有效成分为含有1—6个磷酸丝氨酸残基的多肽。 3.2 酪蛋白磷酸肽含量 the content of casein phosphopeptides 酪蛋白磷酸肽占试样的质量分数。 4 质量要求 4.1 感官要求
酪蛋白磷酸肽感官指标见表1。 表1 感官要求 4.2 质量指标 酪蛋白磷酸肽感官指标见表2。 4.3 微生物要求 应符合GB 31617和国家有关的规定。 4.4 食品安全要求 4.4.1 真菌毒素限量应符合GB 2761的规定。 4.4.2 污染物限量应符合GB 2762的规定。 5 检验方法 5.1 扦样：按GB/T 5491执行。 5.2 感官检验：按GB/T 5492执行。 5.3 水分含量检验：按GB 5009.3直接干燥法执行。 5.4 灰分含量检验：按GB 5009.4执行。 5.5 总氮检验：按GB 5009.5凯氏定氮法执行。 5.6 酪蛋白磷酸肽含量检验：按GB 31617-2014附录A执行。 6 判定规则 有一项不符合本标准质量要求的，判定为不合格产品。 7 标签标识
【关键字】报告 酪蛋白粗提取实验报告 篇一：实验一蛋白质含量测定方法的研究 生物化学实验预习报告 实验一蛋白质含量测定方法的研究 一、研究背景 蛋白质含量的测定广泛应用于生产实践、医药卫生等各个领域，如测定牛奶等食品中蛋白质的含量作为其营养成分的参考值，测定病人尿液中蛋白质的含量以检测其是否患有某种疾病等，因而测定蛋白质的含量具有非常重要的意义。由于蛋白质本身具有一系列的特点（如具有等电点、富含有机氮、含有肽键、存在某些含共轭双键的氨基酸残基、可与某些染料结合等），利用它的这些特点可以通过特定的化学反应或者某些物理手段，将一定量的蛋白质转化为可以方便定量测定的其他量，从而达到测定蛋白质含量的目的。蛋白质诸多特点的存在决定了它会有不同的测定方法，同时由于多种非蛋白组分的存在和干扰以及各种方法本身的局限性（适用条件），每一种测定方法都有各自的优缺点，某一种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，所以多种测定方法的共存是有意义的。目前常用的蛋白质含量测定方法有四种：凯氏定氮法、Folin-酚法、考马斯亮蓝（G-250）法、紫外法，其中后三种方法最常用。在实际工作中，需要根据所测定对象的具体情况综合考虑各种因素(如实验器材的限制、实验所要求的灵敏度和精确度、所测定蛋白质的种类与性质、溶液中存在的干扰物质、测定所花费的时间等)，有选择性地使用某种方法。 二、研究目标 1.掌握常用的蛋白质含量测定方法的原理和操作流程；（基础目标） 2.了解不同测定方法的优点和局限性，掌握在实际工作中不同测定方法的选择条件；（基础目标） 3.证明非蛋白组分在蛋白质含量测定中存在干扰，并通过分析实验结果确定该干扰在实际工作中是否可以忽略。（高级目标） 三、研究策略 本实验最重要的目的是为了确定非蛋白组分在蛋白质含量测定中存在的干扰是否可以忽略。思路有两种：一种方法是先测定纯蛋白质溶液中蛋白质含量，随后在该溶液中加入非蛋白组分（如嘌呤、嘧啶等吸光物质，Ca2+等金属离子，无机酸或无机碱，甚至某些色素等），测定此时蛋白质含量，对比两次测定结果，计算相对误差，从而得出非蛋白组分的影响程度；另一种方法是直接使用天然的蛋白质粗提取物（含有非蛋白组分，并将其中包含的所有非蛋白组分看成一个影响因素），来测定粗提取物中的蛋白质含量。考虑到第一种方法中涉及到的非蛋白组分的加入量没有标准，这些非蛋白材料（影响因素）实验室内也不一定有，更重要的是该实验所具有的实际意义不大，故决定采用第二种方案。但是方案二所存在的一个问题是所测组分蛋白质含量的真实值未知，测得的结果没有可以参考比较的依据，所以需要另外找一个可以参考的标准。 所采取的策略是先用不同的方法测定已 知标准蛋白质溶液的浓度，三个测定值之间会有一定的相关性（或者说测定值之间的变化符
酪蛋白磷酸肽的概况 第一节：酪蛋白磷酸肽的基本概况 中文名称：酪蛋白磷酸肽 英文名称：Casein Phosphopeptides 钙是人体内含量最丰富的元素之一，对人体健康起着十分重要的作用，然而它也是最易缺乏的矿物质元素之一。当今世界上缺钙已成为一大营养问题，即使经济很发达的国家也未能幸免，在我国表现得尤为突出。据报道，我国老年人因缺钙引起的骨质疏松发病率高达30%-50%，儿童因缺钙引起的佝偻病高达40%，妊娠妇女缺钙比例也非常高，严重威胁着人们的健康。因此，补钙是众所需求。 现代研究已证实钙缺乏的主要原因并不是食物不足，而是由于吸收率低下。如何提高钙的吸收率，是人们长期以来一直在进行的研究。而今从牛奶中分离的一种生物活性肽——酪蛋白磷酸肽（CPP），由于具有很强的促钙吸收活性，正成为功能性食品添加剂的开发和研究热点。 酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphopeptides），简称CPP，是以牛奶酪蛋白为原料，经单一酶或复合酶水解，再对水解产物进行分离纯化而得到的含有簇磷酸丝氨酚的多肽。专家们认为，将钙和CPP应用于各类食品中，作为一种食品基料，可提高食品的附加值，使人们长期存在的钙摄取量不足的问题得以解决，有效地预防骨质疏松症和儿童缺钙症。 CPP具有促进成长期儿童骨骼和牙齿发育的作用，并能预防和改善骨质疏松症，促进骨折患者的康复，预防和改善缺铁性贫血；还具有抗龋齿作用。 CPP可添加于各类食品。包括饮料、烘烤食品、冷饮、乳制品、发酵食品、快餐食品、糖果、果酱、儿童咖喱饭、口香糖及保健品和调料中，可满足各种年龄段人群的需要。CPP还可用于动物饲料中，促进动物体外受精。纯CPP和高纯CPP可应用于制药工业，能进一步促进钙质吸收，防止矿物质流失。
酪蛋白 内容提要：蛋白质是由氨基酸构成的高分子化合物。蛋白质同氨基酸一样是两性电解质，调节蛋白质溶液的pH值可使蛋白质分子所带的正负电荷数目相等，即溶液中的蛋白质以兼性离子形式存在，在外加电场中既不向阴极也不向阳极移动。这时溶液的pH值称为该蛋白质的等电点。在等电点条件下，蛋白质溶解度最小，因此就会有沉淀析出。牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。酪蛋白是白色、无味的物质。不溶于水、乙醇及有机溶剂，但溶于碱溶液。牛乳在pH 4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称乳清蛋白。乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水合能力强、分散性高，在乳中呈高分子状态。提取到酪蛋白后，可以用双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应来鉴定分析。 关键词：酪蛋白制备定性分析鉴定 1、实验目的 （1）学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。 （2）对酪蛋白进行分析鉴定。 2、实验原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白食一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 双缩脲：尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与铜离子结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。 茚三酮反应：一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成二氧化碳、氨分子和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。反应的适宜ｐＨ为５－７，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同ｐＨ条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。 3、实验试剂、材料与器材 3、1试剂与材料
竭诚为您提供优质文档/双击可除酪蛋白的制备实验报告 篇一：酪蛋白的制备----生化实验 酪蛋白的制备 一、目的 1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。 二、原理 牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的ph调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 三、材料、试剂与器具 （一）材料 新鲜牛奶 （一）试剂 1、95%乙醇1200mL
2、无水乙醚1200mL 3、0.2mol/Lph4.7醋酸——醋酸钠缓冲液300ml先配A液与b液 A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称naAc·3h2o54.44g，定容至2000ml。b液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。 取A液1770ml，b液1230ml混合即得ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。 4、乙醇——乙醚混合液 乙醇：乙醚=1：1（V/V） （二）器具 1、离心机 2、抽滤装置 3、精密ph试纸或酸度计 4、电炉 5、烧杯 6、温度计 四、操作步骤 （一）酪蛋白的粗提 100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、ph4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密ph试纸或酸度计调ph至4.7。 将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000r/min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 （二）酪蛋白的纯化 1、用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r/min），弃
去上清液。 2、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。 3、将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。 （三）准确称重，计算含量和得率。 含量：酪蛋白g/100mL牛乳（g%） 式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。 五、注意事项 1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。最好用酸度计测定。 2、精制过程用乙醚是挥发性、有毒的有机溶剂，最好在通风橱内操作。 3、目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品，不是纯净牛奶，所以计算时应按产品的相应指标计算。 六、实验报告 1、根据实际操作，以流程图形式总结酪蛋的制备方法。 2、合理分析实验所得率 七、思考题 1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？ 2、试设计另一种提取酪蛋白的方法？ 篇二：实验四、酪蛋白的制备
实验5 酪蛋白的制备 一、目的 1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。 二、原理 牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 三、材料、试剂与器具 （一）材料 新鲜牛奶 （一）试剂 1、95%乙醇 1 200mL 2、无水乙醚 1 200mL 3、0.2mol/L pH4.7醋酸——醋酸钠缓冲液300ml 先配A液与B液 A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2O 54.44g，定容至2000ml。 B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。 取A液1770ml，B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。 4、乙醇——乙醚混合液 乙醇：乙醚=1 ：1（V/V） （二）器具 1、离心机 2、抽滤装置 3、精密pH试纸或酸度计 4、电炉 5、烧杯 6、温度计 四、操作步骤 （一）酪蛋白的粗提 100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。 将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000 r /min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。（二）酪蛋白的纯化 1、用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3 000r/min），弃去上清液。 2、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。 3、将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。 （三）准确称重，计算含量和得率。 含量：酪蛋白g/100 mL牛乳（g%）
酪蛋白磷酸肽 酪蛋白磷酸肽(CPP)是以牛乳酪蛋白为原料，通过生物技术制得的具有生物活性的多肽，可用于各种营养、保健食品中，能有效促进人体对钙、铁、锌等二价矿物营养素的吸收和利用。 目录 概述 结构和功能 生产工艺及产品 特性 作用及作用机理 应用 概述 结构和功能 生产工艺及产品 特性 作用及作用机理 应用 酪蛋白磷酸肽是用胰酶或胰蛋白酶水解的酪蛋白，经过精制、纯化制成，其核心结构为：—Se r（P）－Se r（P）－Se r（P）－G lu－G lu－（Se r：丝氨酸，G lu：谷氨酸，P：磷酸基）。这一结构中的磷酸丝氨酸残基（－Se r（P）－）成簇存在，在肠道PH弱碱性环境下带负电荷，可阻止消化酶的进一步作用，使CPP不会被进一步水解而在肠中稳定存在。国内研究发现，CPP中氮与磷的摩尔比值越小，CPP的肽链越短，磷酸基的密度越大，则CPP纯度越高，促进钙的吸收和利用作用也就越强。 钙只有以离子形态存在时才易被吸收，而且在中性和弱碱性环境中又容易与酸根离子形成不溶性盐而流失。CPP对钙的吸收作用主要表现为，在中性和弱碱性环境下能与钙结合，抑制不溶性沉淀的生成，避免钙的流失，最终因游离钙浓度的提高而被动吸收。目前研究表明， CPP促钙吸收的作用主要表现在以下几个方面： 促进小肠对钙的吸收 人的饮食中的谷类食物含有大量的植酸、肌醇六磷酸等高磷成分，在小肠下端PH7～8环境下与钙结合而生成磷酸钙沉淀。而CPP能抑制磷酸钙沉淀的形成，使游离钙保持较高的浓度，促进钙的被动吸收，成为维生素D作为钙吸收促进剂的又一途径。
促进骨骼对钙的利用 动物实验表明，CPP能促进钙的吸收和利用，减弱破骨细胞作用及抑制骨的再吸收。 促进牙齿对钙的利用 过去认为，餐后咀嚼乳酪能刺激唾液分泌，使碱性的唾液缓冲牙斑上的酸性物质对牙釉质的腐蚀，有助于防止龋齿的发生。近年研究发现，乳酪中含有的CPP能将食物中的钙离子结合在龋齿处，减轻釉质的去矿物化，从而达到抗龋目的。 研究发现，在含有CPP的培养液中的精子，明显具有更高的穿透卵细胞的能力，还能减少精子的变异程度而使胚胎发育更加稳定。CPP还能提高铁、锌、镁等金属离子的生物利用度，因而被称为具有金属载体功能的肽类物质。目前，国外已将CPP应用于儿童咖喱饭、饮料、口香糖等食品和保健品中。对儿童缺钙、老年人骨质疏松、不育症的治疗和牙齿保健方面的研究和应用也在进行之中。因为CPP是从天然蛋白质中提取的多肽，具有不良反应小、安全可靠的优点，因而将会得到更广泛的应用。国外研究了酪蛋白、脱脂乳蛋白和CPP的致敏反应，发现CPP的致敏性很小，表明它能够适用于对牛奶过敏的体质。但也应注意到，影响CPP作用的因素非常复杂，在钙代谢过程中的作用还须进行深入的研究。 结构和功能 酪蛋白磷酸肽（CaseinPhosphopeptides，简称CPP）是以牛乳酪蛋白为原料，通过生物技术制得的具生物活性的多肽。CPP分子由二十到三十几个氨基酸残基组成，其中包括4～7个成簇存在的磷酸丝酰基。大量试验证明，CPP能有效地促进人体对钙、铁、锌等二价矿物营养素的吸收和利用。 生产工艺及产品 CPP生产的基本工艺为： 酪蛋白→酶解反应→酶失活→干燥→CPP成品由上述工艺所得产品CPP 含量为12%～20%，若经分离纯化可得到含量更高的产品。高含量的产品（含量达80%左右）主要用于含钙量较高的液态产品，固态产品和一般液态营养、保健食品中则大多使用含量为12%以上的CPP产品。除了工艺较简单，成本较低外，低CPP含量的产品中还含有类啡肽、免疫调节肽、抗高血压肽等多种生物活性肽，除了促进钙、铁、锌吸收功能外，还能向人体提供其他保健功能，其综合营养保健效果更好。因此国内外市场上以低含量CPP产品的使用和贸易量最大。 CPP主要应用于强化钙、铁、锌的营养保健食品
牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定 一、实验目的 1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法 3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用 4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度 二、实验原理 1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。 3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。 在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。 三、实验器材与试剂 1、制备酪蛋白： 烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅 牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚 2、紫外光吸收法： 紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿 0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液 3、考马斯亮蓝法： 紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿 牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl 四、实验步骤 制备酪蛋白
CPP(酪蛋白磷酸肽) 英文名称：Casein phosphopeptides(CPP);Casein calcium peptide 中文名称：酪蛋白磷酸肽(酪蛋白钙肽) 化学名称： 化学分子式： 特性与用途：是富含磷酸丝氨酸的多肽。由牛乳蛋白用胰蛋白 酶水解后精制而成。当CPP进入小肠后，磷可与 小肠内的钙结合而使钙保持可溶状态，以促进钙 的吸收和骨质形成。也有提高铁的吸收率的作 用。用于强化营养，促进婴幼儿骨骼形成，预防 和改善骨质疏松。 质量标准：日本企标，1990 项目结果 CPP-I CPP-II CPP-III 外观白色粉末白色粉末白色粉末水分% ≤10 ≤10 ≤10 蛋白质(干基计)/% ≥90≥90≥78 酪蛋白磷酸肽(干基计)/% ≥12≥12≥85 灰份/% ≤7≤7≤18 As(As2O3计)/(mg/kg) ≤0.1 ≤0.1 ≤0.1 10%水溶液pH值7+1 7+1 7+1 异味有苦味无无 异物无无无 农药残留和抗生素检不出检不出检不出 功用： 1.促进小肠对钙的吸收。人的饮食中的谷类食物含有大量的植酸、肌醇六磷酸等高磷成分，在小肠下端PH7～8环境下与钙结合而生成磷酸钙沉淀。而CPP能抑制磷酸钙沉淀的形成，使游离钙保持较高的浓度，促进钙的被动吸收，成为维生素D作为钙吸收促进剂的又一途径。 2.促进骨骼对钙的利用。动物实验表明，CPP能促进钙的吸收和利用，减弱破骨细胞作用及抑制骨的再吸收。 3.促进牙齿对钙的利用。过去认为，餐后咀嚼乳酪能刺激唾液分泌，使碱性的唾液缓冲牙斑上的酸性物质对牙釉质的腐蚀，有助于防止龋齿的发生。近年研究发现，乳酪中含有的CPP能将食物中的钙离子结合在龋齿处，减轻釉质的去矿物化，从而达到抗龋目的。
生物技术学院 课程论文 课程名称：高级生物化学成绩： 教师签名：
酪蛋白研究进展综述 提纲：酪蛋白简介－酪蛋白亚基结构－酪蛋白酶特性－酪蛋白活性肽研究进展 摘要：酪蛋白是一种含磷钙的结合蛋白，常见于哺乳动物及其乳汁中，如母牛、羊 以及人奶。酪蛋白对酸敏感，pH较低时会沉淀，因此本科生实验室常用其进行蛋 白质的沉淀反应。哺乳动物的主要蛋白是α-酪蛋白，然而人类乳汁中没有α-酪蛋 白，人乳中的酪蛋白主要是β-酪蛋白形式。对于人类幼儿而言，酪蛋白是氨基酸 的来源，但同时，它也是钙和磷的主要来源，同时，因为胃的酸性环境，酪蛋白还 能在胃中形成凝乳以便消化。本文综合中外文献，对酪蛋白进行了研究进展综述。 关键词：酪蛋白；蛋白亚基；活性肽 酪蛋白简介 在20℃，pH值为4.6时，牛乳中能沉淀下来一种呈酸性的蛋白质，我们将其称为酪蛋白。酪蛋白又名干酪素、乳酪素、酪朊，在牛奶中含量非常丰富。它是一种含磷的蛋白质，具有极高的营养价值，其中含有多种生物活性肽，因此它具有抗菌、降血压、抗氧化和促进双歧杆菌增殖等功能。 酪蛋白在母体蛋白质序列内是无活性的，通过体内或体外酶水解的方式释放出来后，它们即可作为具有类似激素活性的调节物质。这些产物可用作肽类药物、肽类试剂，主要用于科学试验和生化检测;也可用于活性肽功能性食品中，具有增强机体防御功能、调节生理节律、预防疾病和促进康复等功能。 酪蛋白的亚基结构 酪蛋白的分子质量约为20－25ku，由4类遗传变种组成，分别为αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白、β-酪蛋白和K-酪蛋白。其中，αs2-酪蛋白是牛乳中的主要酪蛋白，占总含量的38%；β-酪蛋白含量仅次于αs-酪蛋白，占总含量的35%，
酪蛋白磷酸肽采购标准 1 范围 本标准规定了酪蛋白磷酸肽的要求、标志、运输、贮存、保质期等。本标准适用于以牛乳或酪蛋白制品为原料，用酶解法生产制得的食品营养强化剂酪蛋白磷酸肽。 本标准适用于公司酪蛋白磷酸肽采购及验收判定。 2 要求 2.1 感官要求 应符合表1规定。 表1感官要求 2.2理化指标 理化指标应符合表2规定。 表2理化指标
2.3 微生物指标 微生物指标应符合表3的规定。 表3微生物指标 2.4 包装要求 包装必须完好，直接接触产品的包装材料必须为食品级，包装规格为5kg/袋，4袋/箱。 包装标签按GB 7718规定执行。 包装纸箱标志按GB/T 191规定执行。 2.5 产品的到货期距产品的生产日期应小于保质期的一半。 3 检验 供方每年提供一次型式检验报告，每次到货都需带有一份相对就批号的出厂检验报告，品控部对照供方出厂检验报告进行到货验证。 4 交付及接收方式 4.1 交付方式，到公司指定地点或仓库交付。 4.2 接收方法：原料到货后，由品控部按到货批次进行取样，每个批次取两个样品，分别按2.1、2.2、2.3规定的各项指标进行检测感官、理化、微生物等各项指标（进厂必检项目），检测结果符合2.1、2.2、2.3规定
的各项指标，由品控部出据原辅料检验报告通知仓储部做入库手续，如到货原料经品控部验收后不符合验收标准规定的，按不合格品进行退货处理，退货费用由供方承担。 5 运输 运输工具必须清洁，干燥，车船要有遮盖，避免产品雨淋受潮，暴晒变质，不得与有毒性或易污染物品混装混运。 6 贮存 产品应贮存在洁净，阴凉、干燥、避光的环境，不得同有毒、有害、有异味、易挥发、易腐蚀物品同库存放。