第24卷第6期
V ol 124 N o 16长春师范学院学报(自然科学版)Journal of Chang Chun T eachers C ollege (Natural Science )2005年12月Dec 12005
实验室检测方法确认技术研究
卢利军,马书民,董 奥,李爱军,赵庆松
(吉林出入境检验检疫局,吉林长春 130062)
[摘 要]本文讨论研究了方法确认的目的、意义、原则、条件及方法确认的内容和技术。
[关键词]检测方法;确认技术
[中图分类号]O69 [文献标识码]A [文章编号]1008-178X (2005)06-0069204
[收稿日期]2005-11-02
[作者简介]卢利军(1956-),男,吉林出入境检验检疫局技术中心副主任,研究员,中国实验室国家认可委员会
(C NA L )评审员,从事进出口商品实验室检测和实验室管理研究。
1 方法确认的目的、意义
在全世界每天都有成千上万个实验室在进行着无数次的检测分析,这些操作的目的可能涉及到社会各个领域的不同需求。但是,检测分析的结果如果缺乏可信性,那么这个操作就毫无价值,并且这个操作也不应该实施。而通过对检测方法的确认,可以确保操作者足以证明其个人或其所在实验室能够正确运用某方法,或该方法能够满足某一特定预期用途的特殊要求。因此,方法确认过程是分析操。
2 方法使用、制定原则
为了促进检测方法的良好操作,应该遵从以下六项原则,这些原则普遍适用于独立工作的实验室或需要将本实验室结果与其他实验室进行比较的实验室。①检测方法应该经过一致同意;②检测方法应该经过检验,可以确保实验能够满足某一特定预期用途的特殊要求;③应该由有资格和能力的人员制定检测方法;④对于一个实验室在技术上的操作应该有一个定期和独立的评价;⑤检测方法在任何地方都应该适用;⑥制定检测方法的组织应该有良好的质量控制体系。
3 方法确认的条件和原则
311 方法确认条件
确认或者重新确认总是发生在方法、实验室、操作人员、仪器和环境的不同或发生变化时,当需要验证对某一特定预期用途所采用的方法是否能够满足特殊要求时,这就需要进行方法确认。例如:①特殊问题的新方法进展;②对已确认(包括标准Π非标准Π自制Π偏离方法)的方法进行修改或扩充时;③当质量控制体系表明方法过期或无效或已被重新修订时;④在不同的实验室、不同的分析人员或使用不同仪器曾经制订的方法时;⑤对两种不同方法进行平行比较时,例如新方法和标准(或已确认)方法。
312 方法确认原则
(1)实验室正在使用的方法必须是经过充分验证并且可靠的,有必要进行进一步的工作补充一些已有的资料。例如,当一种方法已经过了诸如AOAC 权威组织的论证,使用者仅仅需要确定他们使用这种方法的操作资料即可。
(2)很多关于方法的确认公开发表的文献都是经过合作研究完成的,并且也会有很多方法和这种确认相关,如果一种方法在很大范围内已经被使用,或已经制定为一种标准程序,那么一系列实验室的合作研究可能首选确认的这种方式。
(3)对那些没有使用由基本方法所衍生出的方法,方法确认往往依赖于同常规方法直接比较进行。(4)AOAC 已经实施把多个实验室进行实验用来作为方法确认的首选方式。
4 方法确认的内容
按照中国实验室国家认可委员会(C NA L )准则性文件C NA L ΠAC O1:2003《检测和校准实验室认可准则》(等同采用IS O ΠIEC17025:1999)51415规定,需要确认的方法包括四类:实验室设计/制定的方法、实验室采用的非标准方法、超出其预定范围使用的标准方法、经过扩充和更改的方法。若对已确认的方法进行了更改,则应将更改的影响文件化,适当时进行重新确认。方法确认包括:①详细
说明有关要求(指被确认的方法应满足的某一具体预期用途的特定要求);②确定检测方法的特性;
③检查核实使用方法能够满足有关要求;④声明有效性。
5 方法确认的技术
按照C NA LΠAC O1:200351415规定,用于确定方法性能的技术包括:①使用参考标准或标准物质(参考物质)进行比较;②与其他方法所得结果进行比较;③实验室间比对;④对影响结果的因素做系统性评价;⑤根据对方法原理的科学理解和实践经验,对所得结果不确定度进行评价。
对方法预期用途进行评价时,由经过确认的方法所得数据的范围和准确度,如结果的不确定度、检出限量、方法选择性、线性、重复性限和/或复现性限的极限值、抵御外来影响的稳健度和Π或抵御来自样品(或检测物)基体干扰的交互灵敏度应满足客户需要。
511 使用标准物质(参考物质)进行方法确认
51111 方法准确度检验
准确度是指检测结果与真实结果的接近程度,而真实值的实际评价依赖于同已知结果的方法比较,也就是说真实值同参考物质的参考值相关。参考值可通过两种方法获得:①从特征物质检查参考值;②从特征方法检查参考值。
参考值最好从国际标准得来,参考物质通常作为量值溯源的追溯值而被接受,因此参考值通常被认为是绝对正确的(如从SI得来)或约定俗成的,通常是为了特征的目的。
为了检查真实值使用参考物质,决定一系列重复实验的标准偏离和比较参考物质的特征值。理想的参考物质是已经被确认非常接近样本性质(基体)的物质,这样的物质是有限的,用于确认的参考物质至少应该满足:①通过检测得到纯的鉴定的参考物质或其他适合的纯的稳定物质;②典型的具有良好特征的物质和在室内保留用做质量控制的物质。
5111111 当使用已经被确认其基体与样本非常接近的参考物质时,往往会得到有关参考物质中被测量的不确定度的信息(μ±U),这时可通过使用拟被确认的方法对提供的参考物质相关量进行重复性检测,检测结果的平均值 X与参考物质标示值(μ±U)比较,若 X落在(μ±U)之间,表示被检测的均值差异不显著,反之,差异显著。
5111112 当使用已经被确认其基体与样本非常接近的参考物质,而没有获得有关参考物质中被测量的不确定度的信息或使用的是5111111中a)、b)所描述的参考物质时,可使用以下技术进行方法确认:
a)t检验法
(1)选定所用检验统计量,当检测样本平均值 X与总体均值μ是否有显著性差异时,使用统计量
t= X-μsΠn
式中n———测定次数。
(2)计算统计量值,如果由样本计算的统计量值大于t分布表中相应显著性水平α和相应自由度f下的临界值tα,f,则表明被检验的均值有显著性差异,反之,差异不显著。
b)加标回收试验
5111111a)中所描述的参考物质,按照t检验法往往缺乏可比性,因为该参考物质的基体可能会和样本的基体有显著差异,因此可采用加标回收试验技术进行方法确认。
加标回收试验是在被检测样本中加入已知浓度(与样本中被测组分浓度相当)的参考物质,进行同时检测,按下式计算回收率
回收率(%)=C1-C2
C3
×100
C1—样本添加参考物质后检测值;C2—样本检测值;C3—添加参考物质浓度。
用回收率评价准确度时须注意:
a)样品中待测物质浓度和加入参考物质的浓度对回收率的影响。参考物质常加入量与待测物质浓度水平相等或接近为宜。若待测物质浓度较高,则加标后的总浓度不宜超过方法线性范围上限的90%;若其浓度小于检出限量,可按测量下限加标。在任何情况下,加标量不得大于待测物质含量的三倍。
b)对回收率的要求数值是个比较复杂的问题,依分析测量方法的难易和不同类型的分析方法而变化。一般mgΠkg级,应在90%以上;μgΠkg级80%;更复杂的方法可低至70%;但最小不能低于70%。51112 检出限量确认
当被检测物质浓度不是很高并且特性不是很明显时,我们非常有必要知道通过方法检测所能达到
可信结果时所需的最低浓度。由于检测的可能性并不是恰好从零开始至整数值出现的,因此按照惯例可使用“空白+3s”的方法进行确认。
a)检测10个独立空白样本,计算空白样本的标准偏差s,3s即可作为方法的检出限量,此时需空白样本的标准偏差不等于零。
b)检测10个最低可接受的浓度加强的样本空白,计算标准偏差,3s或空白+3s即可作为方法的检出限量。此时空白样本值可以为零。
51113 线性确认
对于任何定量的方法,都需要确定被分析物浓度的适用范围,这里提到的浓度范围是实际测量的溶液,而不是原始样本的浓度(或含量)。对特定的样本测量可能会涉及稀释和浓缩的过程。因为在工作范围内可能存在线性反应范围,在线性范围内信号反应与被分析物的浓度呈线性相关,因此,过高的浓度通常会受到反应系统各种因素的影响,过低的浓度可能会受到检测限量的限制。
建立标准曲线确定线性范围必须建立多个标准点,一般分两个步骤:
a)空白附加参考物质:在不同浓度(或数量级)范围的参考物质+空白样本(除空白外至少需要6个浓度),以操作反应信号为y轴,以操作浓度为x轴,制作标准曲线,确定各种浓度范围的最大和最小线性范围。
b)回归计算:在各浓度(或数量级)范围,用至少6个不同浓度的参考物质或加强空白样本,以操作反应信号为y轴,以操作浓度为x轴,制作标准曲线,或进行线性回归计算,或通过操作系统确定回归方程。
在一定情况下或许可以尝试使用非线性回归,一般不建议使用二次方程以上的运算。
512 利用其他方法比较进行方法确认
在化学分析中方法确认通常可以利用一种方法与另一种(标准方法)方法所得结果的平均值进行比较,采用t检验法或f检验法进行检验和判断方法的显著性问题。
51211 t检验法
5121111 两个平均值的比较
使用拟被确认的方法和标准方法分别进行重复性试验,通过统计量,检验两个平均值之间是否存在显著性差异。
(1)选定所用统计量
t= X1- X2
s
n1-n2
n1+n2
式中, s—合并标准差,按下式计算
s=(n1-1)s21+(n2-1)s22
n1+n2-2
式中,s2
1
-第一个样本的方差;s22-第二个样本的方差;n21-第一个样本的测量次数;n22-第二个样本的测量次数。
(2)计算统计量值,如果由样本计算的统计量值大于t分布表中相应显著性水平α和相应自由度f下的临界值tα,f,则表明被检验的均值有显著性差异,反之,差异不显著。自由度:f=n1+n2-2。5121112 配对比较
在方法确认时,为了判断某一个因素对结果是否有显著影响,往往取若干批试样(或若干种不同试样),将其他因素固定下来,对某一因素进行配对比较试验。这样的试验可以消除其他因素的影响而把被检因素突出出来,以便从随机误差覆盖下找出被检因素是否存在真正的差异。
配对比较试验数据的判断,不是根据两组数据的平均值来进行比较,而是根据各组配对数据之差D来进行显著性检验的。
首先计算配对数据之差D的平均值 D与标准差S
D
D=∑D i
n
S D=∑(D
i
- D)2
n-1
=
∑D2
i
-(∑D i)2Πn
n-1
然后计算统计量t
t D= D×n s D
如果由样本计算的统计量值大于t分布表中相应显著性水平α和相应自由度f下的临界值tα,f,则表明被检验的均值有显著性差异,反之,差异不显著。
需要注意的是应用t检验法时,要求被检验的两组数据具有相同或相近的方差。因此,在进行t 检验之前必须先进行F检验。
51212 F检验法
F检验是通过计算两组数据的方差之比来检验两组数据是否存在显著性差异。
F检验步骤如下:
(1)计算统计量方差之比 F=s21 s22
式中,s2
1
,s22分别为两组测量值的方差,其中s21>s22。
(2)查F分布表
(3)判断:当计算所得F值大于F分布表中相应水平α和自由度f1,f2下的临界值Fα(f
1?f
2
)时,则
两组方差之间有显著性差异,反之无显著性差异。
513 利用实验室间(内)比对进行方法确认
a)重复性—在相同条件下,对同一被测量进行连续多次测量所得结果的一致性。
b)复现性—在改变了的测量条件下,同一被测量结果之间的一致性。
利用重复性试验和复现性试验得出重复性限r和复现性限R。根据JJ F1059-1999,重复性限r等s×2183
复现性限R等于复现性标准偏差s×2183
514 利用对影响结果的因素做系统性评价进行方法确认
利用对影响结果的因素做系统性评价—加强性检验,对抵御外来影响的稳健度和Π或抵御来自样品(或检测物)基体干扰的交互灵敏度进行方法确认。一个好的方法的本身应该是易于操作和控制,但是,对于任何方法都会存在一些严格的操作条件和样本基体限制等问题。操作条件的改变设计方法稳健度问题,基体的变化,要求操作条件随之变化,设计各种因素的交互影响问题。因此会对方法的进行和结果产生一定影响,这些问题应该被确认。这一技术用于检验对结果的精密度和准确度的影响上。
515 利用对测量结果不确定度评定进行方法确认
按照C NA LΠAC O1:2003检测和校准实验室认可准则(IS OΠIEC17025:1999)51416规定:“检测实验室应具有并应用评定测量不确定度的程序”“合理的评定应依据对方法性能的理解和测量范围,并利用诸如过去的经验和确认的数据”。测量不确定度的评定与表示主要以《测量不确定度表示指南》(G UM)和JJ F1059—1999《测量不确定度评定与表示》为依据,按照基本程序进行:①详细描述测量过程;②给出被测量的数学模型;③定不确定度的来源;④分析和量化不确定度分量;⑤计算合成标准不确定度;⑥给出各不确定度分量的相对贡献;⑦计算扩展不确定度;⑧报告测量结果。
综上所述,方法确认是必须的,按照IS OΠIEC17025要求,需要确认的方法主要有四种情况,确认的技术主要有五种。但是必须强调的是,当我们使用的是一种公认的标准方法时,是不是就不需要进行方法确认了呢,答案是仍然需要。原因是,一、已经存在的确认数据为了需要的目的是否足够;
二、如果已存在的数据已经足够,实验室是否能够达到方法需要的操作水平,也就是说,分析人员是否有能力胜任,仪器设备(状态)是否达到要求的水准。因此方法的确认在分析操作中,无论何时都是必须的。
[参考文献]
[1]DN(S ANC O)Π1030Π2000-MR final.
[2]IS OΠIEC17025:1999检测和校准实验室能力的通用要求.
[3]JJ F1059-1999测量不确定度的评定与表示.
The Study of A ffirmed T echnology of Determination Measure in Laboratory
LU Li-jun,MA Shu-min,DONG A o,LI Ai-jun,ZH AO Qing-s ong
(Jilin Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of The people’s Republic of China,Changchun130062,China)
Abstract:In this paper,affirmed technology of determination measure’s purpose,significance,principal,conditions and content were discussed.
K ey w ords:measure;affirmed technology of determination measure
检验分析方法的验证和确认 一、法规要求二、分析方法验证三、分析方法确认四、分析方法验证和确认总结一、法规要求：新版GMP（2010年修订）第二百二十三条物料和不同生产阶段产品的检验应当至少符合以下要求：（一）企业应当确保药品按照注册批准的方法进行全项检验。（二）符合下列情形之一的，应当对检验方法进行验证。1. 采用新的检验方法；2. 检验方法需变更的；3. 采用《中华人民共和国药典》及其他法定标准未收载的检验方法；4. 法规规定的其他需要验证的检验方法。（三）对不需要进行验证的检验方法，企业应当对检验方法进行确认，以确保检验数据准确、可靠。法规要求：中国药典（2010年版）凡例1. 检验方法和限度。2. 二十三、本版药典正文收载的所有品种，均应按规定的方法进行检验。如采用其他方法，应将该方法与规定的方法做比较试验，根据试验结果掌握使用，但在仲裁时仍以本版药典规定的方法为准。法规要求：分析方法确认或验证相关指南二、分析方法验证 1. 分析方法验证的定义 2. 分析方法验证的目的 3. 分析方法验证范围 4. 分析方法验证的时机 5. 需验证的分析方法类型 6. 分析方法验证的具体内容 7. 验证检测项目小结 8. 分析方法验证的方式和步骤 9. 分析方法验证常见问题1. 分析
方法验证的定义是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。 2. 分析方法验证的目的（1）证明采用的分析方法是科学、合理。（2）证明分析方法能有效控制药品的内在质量。? 验证过程和结果均应记载在标准起草或修订说明中。 3. 分析方法验证范围（1）适用范围：化学药品的理化分析方法和仪器分析方法的验证与确认；清洁验证方法的验证。（2）不适用：化学药品的微生物方法；生物制品分析方法验证。 4. 分析方法验证的时机（1）建立新的药品质量标准；（2）药品生产工艺变更；（3）制剂的组分变更；（4）对原分析方法进行修订时。方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准起草说明或修订说明中。 5. 需验证的分析方法类型（1）鉴别试验（2）杂质定量或限度检查（仪器或非仪器检测方法）（3）原料药或制剂中活性成分以及制剂中选定组分（如防腐剂等）的定量测定含量测定（4）化学药品/中药制剂中其他需控制成分(如残留物、添加剂等）的测定（5）制剂溶出度、释放度等检查（6）原料药粒度检测 6. 分析方法验证的具体内容（1）专属性（2）线性（3）范围（4）准确性（5）精密度（6）检测限（7）定量限（8）耐用性（9）系统适用性根据检测的类型，采用的技术检测方法，确定具体方法拟订验证的内容。专属性1. 鉴别、杂质和含量测定的方法学
3 定义 3.1 检验方法验证：证明采用的方法适用于相应检测要求。 3.2 检验方法确认：证明使用法定方法在目前实验室条件下是否能获得可靠结果，是否适用于相应的检测工作。在本质上和验证一样，但不一定是验证项目的全部。 3.3 药典方法：经过国家药监部门批准的药典收载的质量标准和检验方法 3.4 法定方法：法定方法包括药典方法、国标方法等。 3.5 准确度：是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率表示。 3.6 精密度：是指在规定的测试条件下同一个均匀供试品经多次取样测定所得结果之间的接近程度。 3.7 重复性：在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性。 3.8 中间精密度：在同一个试验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度称为中间精密度。 3.9 重现性：在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度称为重现性。 3.10 专属性：是指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物质的特性。 3.11 检测限：是指供试品中被测物能被检出的最低量。 3.12 定量限：是指供试品中被测物能被定量测定的最低量。 3.13 线性：是指在设计围，测试结果与试样中被测物浓度直接成正比关系的程度。3.14 围：是指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低浓度或量的区间。 3.15 耐用性：是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。 4 职责 4.1 标准验证岗 4.1.1 提升现行质量标准工作时，对研究后确定的标准草案进行检验方法验证工作，以确保检验方法的适用性、科学性。 4.1.2 对技术部移交的新品质量标准草案进行确认，以确保检验方法适用性、科学性。 4.1.3 对技术部移交的新品应研究建立设备清洁验证残留物检验方法，并进行方法学验证。
常用血清学检测方法介绍 一、酶联免疫吸附试验诊断技术 目前，该项技术已在兽医学上得到广泛的应用,大多数动物传染病都已经研制成 ELISA检测方法。 1、酶联免疫吸附试验的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的 抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应o用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。 再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相矢，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 2、ELISA的类型根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于动物疫病检测的ELISA主要有以下几种类型： ①?双抗体夹心法测抗原 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质、微生物病原体第二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。例如猪瘟病毒检测ELISA、禽流感病毒抗原捕获ELISA，就是根据这种原理设计的。 ②?双抗原夹心法测抗体 反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。乙肝HBs的检测 常采用本法。本法尖键在于酶标抗原的制备，需要根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。 此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于于间接法。此外，该方法不受被检动物种属差异的限制。 ③?间接法测抗体
检测方法及方法确认程序 l 目的 为保证检测结果的正确性和有效性，对检测活动中所采用的方法进行有效控制制定程序。 2 范围 适用于检测活动中检测方法的选用，以及检测方法的变更和偏离。 3 职责 3.1 技术负责人的职责 负责授权与客户签立检测合同或协议，批准检测作业指导书等文件，维护本程的有效性。 3.2 检测室负责人的职责 提出本检测部门的执行标准，制定本部门检测活动的检测程序及抽样、检测的职责和活动以及不确定度分析。 3.3 资料管理员的职责 负责对标准、规程及其他技术规范等有效性确认，建立检测标准管理档案。 4 工作程序 4.1 检测方法的选择 4.1.1 为减少检测风险，本检测中心的检测依据首选以下正式颁布的标准。其中优先选用国家标准、行业标准、地方标准：对新旧标准处于过渡期间并均可采用的，优先选择新版标准。 4.1.1.1 国际标用； 4.1.1.2 国家标准； 4.1.1.3 行业标准或政府发布的技术规范； 4.1.1.4 地方标准； 4.1.1.5 企业标用； 4.1.1.6 知名技术组织或科学书籍与期刊公布的方法： 4.1.1.7 制造商指定的方法； 4.1.1.8 自行制定的非标方法。 4.1.2 当老标准己经过期作废时，以上标准应当保证是现行有效的。为此资料管理员首先应当负责检索和收集、查新最新标准及其他技术规范，并按《文件控制程序》保持检测人员所用标准是最新有效版本；其次是每月向检测部门提供中文核心期刊题录，供检测人员参考。当使用外部企业标准检测时，要防止导致可能发生的所有权侵权问题。 4.1.3 当所用标准存在理解、操作等困难对，技术负责人应组织各个检测室负责人编写检测作业指导书，以保证对标准实施的一致性。检测作业指导书应形成正式的书面文件并应经过编制人、审核人和批准人的书面审批手续和保持该文件的
1.目的 确保实验室所采用的标准方法、非标准方法、实验室自制方法、超出其预定范围使用的标准方法及经过扩充和更改的标准方法得到有效确认，保证上述方法适合于预期用途，并满足特定要求。 2.适用范围 适用于标准方法、非标准方法、实验室自制方法、超出其预定范围使用的标准方法以及经过扩充和更改的标准方法的确认。 3.职责 3.1技术负责人负责方法确认计划的制定； 3.2技术负责人负责检测方法的确认； 3.3实验室主任负责验证报告的审核； 3.4实验室主任负责确认方法计划和确认结果的审批。 4.控制程序 4.1实验室技术负责人根据检测工作需要，收集检测方法材料和制定检测方法。 4.2实验室技术负责人实施检测方法的确认，指派人员进行方法确认。 4.3确认范围包括：标准方法、非标准方法、实验室自制方法，确认也可能包括对取样、处置和传送程序的确认。 4.4确认的方式和技术应用应为下列一项或多项的组合： a.使用参考标准或标准物质校准； b.与其他方法所得结果对比； c.实验室间比对； d.系统评价影响结果的因素； e.评价结果不确定度。 4.5非标/自制方法确认工作完成后，由确认人员填写《非标/自制方法验证报告》，并与有关资料一起交主任审定。标准方法确认完成后，由确认人员填写《检测方法确认报告》。 4.6经确认的检测方法交实验室主任审批。实验室主任根据确认方法的准
确性是否适合预期用途和客户要求，决定是否批准使用。 4.7确认的方法应确保在所有有关人员中进行有效交流。 4.8确认报告、确认方法及有关资料由档案管理人员统一归档，并作为实验室的受控文件。 4.9如果对已确认的方法进行了某些更改，应将这些更改文件化，并应重新进行确认。 5.相关文件 《人员培训程序》WHHDSPJT/QM02－502A－00 《文件控制程序》WHHDSPJT/QM02－403A－00 6.记录 《采用非标准检验方法申请表》 WHHDSPJT/QM04－24 《非标/自制方法验证报告》 WHHDSPJT/QM04－63 《检测方法确认报告》 WHHDSPJT/QM04－35
狂犬病病毒实验室检测方法 摘要：狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，近年来又有感染上升的趋势。一种准确、灵敏、快速的实验室检测诊断方法就显得极为重要。现就酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光抗体方法（FAT）、快速荧光抑制灶技术（RFFIT）、反转录－聚合酶链反应（RT-PCR）、荧光定量 RT-PCR，基因芯片技术和恒温扩增技术等狂犬病病毒实验室诊断方法做一综述。 关键词：狂犬病狂犬病病毒检测方法 狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，以恐水、畏光、吞咽困难、狂躁、急性致死性脑脊髓炎，进行性麻痹和最终死亡为主要临床特征。RV可感染多种温血动物引起死亡，表现为高度嗜神经性。脑组织感染RV后遭到破坏，使得狂犬病感染的病死率几乎 100%。 据WHO数据显示狂犬病在全世界150个国家和地区出现过狂犬病病例。尽管狂犬病可以通过疫苗免疫进行预防，全世界每年仍有超过 5.5 万人死于该病，主要集中在亚、非、拉等发展中国家[1]。中国狂犬病疫情较严重，居世界第2位[2~3]，近年来，狂犬病疫情呈现回升的趋势[4]。检测狂犬病抗原抗体、分析狂犬病的流行特点，并建立高效、快速、可靠的实验室检测方法可以有效控制此病的流行。下面主要针对RV的形态特征和分子结构及主要的检测技术进行概述。 1、狂犬病病毒形态特征 RV属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus）血清/基因 1 型，单股负链RNA病毒。电镜下观察病毒粒子直径为70～80nm，长160～240nm，一端钝圆，另一端平凹，整体呈子弹状[5]。病毒有双层脂质外膜，其外面镶嵌有1072-1900个8-10nm长的纤突(spike)，为糖蛋白，每个糖蛋白呈同源三聚体形式，电镜还显示了糖蛋白具有“头”和“茎”结构。病毒双层脂质包膜的内侧主要是膜蛋白
检验方法确认方案
目录确认方案 1、概述 2、验证依据 3、验证范围 4、验证目的 5、验证内容 6、验证人员分工
1、概述 单硝酸异山梨酯注射液收载于《中华人民共和国药典》2010年版二部。质量标准中采用高效液相色谱法测定单硝酸异山梨酯的含量，为进一步确认药典方法的可行性及有效性，更好控制产品质量，现对药典方法进行确认。 2、验证依据 《中华人民共和国药典》2010年版二部“单硝酸异山梨酯注射液”项下规定 《高效液相色谱法标准操作规程》（SOP-E-5-009-A01） 《中华人民共和国药典》2010年版二部附录XIXA“药品质量标准分析方法验证指导原则” 3、验证范围 本方案适用于单硝酸异山梨酯注射液检测方法的验证。 4、验证目的 对单硝酸异山梨酯注射液含量测定方法进行确认，以确保检验结果的准确性和可靠性。 5、验证内容 5.1色谱条件与系统适用性试验 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－水（25：75）为流动相；检测波长为210nm。取单硝酸异山梨酯对照品与2-单硝酸异山梨酯对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中各约含5μg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，理论板数按单硝酸异山梨酯峰计算不低于3000，单硝酸异山梨酯峰与2-单硝酸异山梨酯峰的分离度应大于2.0。 对照品溶液的制备取单硝酸异山梨酯对照品，用流动相定量稀释制成每1ml约含单硝酸异山梨酯0.1mg的溶液，作为对照品溶液。 供试品溶液的制备精密量取本品适量，用流动相定量稀释制成每1ml约含单硝酸异山梨酯0.1mg的溶液，作为供试品溶液。 5.2 线性和范围 取单硝酸异山梨酯对照品12μl、16μl、20μl、24μl、28μl进样，线性范围1.2μg～2.8μg 按上述色谱条件进样，相应的色谱峰面积为纵坐标（Y），进样量为横坐标（X，μg），绘制标准曲线，计算线性方程，相关系数R。
非标准检测方法的确认要求一、检测方法确认要求 1、检测方法的区分：
（1）标准方法－可以直接认可的检测方法； ①以国际、区域或国家发布的标准方法； ②国标委批准的行业标准化委员会发布的行业标准方法。 （2）公定方法 知名的技术组织公布的检测方法； （3）标准方法中未包含的其他方法、需要确认后才能采用的方法,如： ①扩充和修改过的标准方法； ②超出其预定范围使用的标准方法； ③实验室制定（设计）的方法或企业标准； ④部分由设备制造商指定的方法； ⑤部分有关科学书籍和期刊公布的方法。 2、对非标准方法的确认要求： （1）实验室针对上述非标准方法申请确认时，必须按照相应文件的要求，履行完整的技术文件验证、确认和审批程序，并保留相应记录； （2）在申请对非标准方法进行确认时，实验室必须提交该方法的文本文件、相关验证材料及技术特点的说明材料； （3）CNAL检测方法研究工作组在识别和决定是否受理非标准方法的确认申请时，可根据该方法的技术难易程度，作出决定。对标准方法和公定方法重新组合、或者是对标准方法和公认方法的简单扩充，由于此类型的非标准方法对已有方法的继承性较好，技术难度也较小，可以通过由项目负责人直接提出意见；征求CNAL技术委员会相关技术专家的意见，提交CNAL检测方法研究工作组进行审议。 （4）在对非标准方法进行确认时，工作组应对方法的相关资料进行审查，对非标准方法自身的科学性作出评价。 二、检测方法的评价 在对非标准方法进行确认时，专业组应通过下列方面进行评价： 1、资料审查：检测方法文件、方法研究报告或试验报告、比对试验或参加能力验证试验的结果； 2、技术审核：对非标准检测方法的检测原理、可操作性、准确性、重复性及再现性进行评价。
实验室检验方法的验证和确认 1、检验方法验证的基本内容 检验方法验证的基本内容包括方案的起草及审批，检测仪器的确认，适用性验证(包括准确度试验、精密度测定、线性范围试验、专属性试验等)和结果评价及批准四个方面。 2、检验方法验证的基本步骤 首先是制定验证方案，然后对大型精密仪器进行确认，最关键的一步是检验方法的适用性试验，最后是检验方法评价及批准。 1）验证方案的制定 检验方法的验证方案通常由质量验证小组提出。根据产品的工艺条件、原辅料化学结构、中间体、分解产物查阅有关资料，提出规格标准，确定检查项目，规定杂质限度，即为质量标准草案。根据质量标准草案确定检查和试验范围，对检验方法拟定具体操作步骤，最后经有关人员审批方可实施。 2）大型精密仪器的确认 分析测试中所用的检测仪器一般可分为三类 (1)普通仪器：崩解仪，折光仪、分析天平、酸度计、溶点测定仪、电导仪等： (2)较精密仪器：旋光仪、永停滴定仪、费休氏水分测定仪、自动滴定仪、药物溶出度仪、可见分光光度计、电泳仪等； (3)大型精密仪器：紫外分光光度计、红外分光光度计、气相色谱仪、高效液相色谱仪、薄层扫描仪等。 为了保证分析测试数据准确可靠，每台检测仪器在投入正式使用之前都应进行确认。检测仪器的确认是检验方法验证的基础，应在其它验证试验开始之前首先完成。检测
仪器确认工作内容应根据仪器类型。技术性能而定，通常包括：安装确认、校正、适用性预试验和再确认。 校正 校正是仪器确认及检验方法验证中的一个重要环节，应当在验证试验以前进行校正。紫外分光光度计校正包括波长校正、吸收度测试、准确度测试、杂散光检查。 气相色谱仪与高效液相色谱仪均要求做系统适用性试验。在规定的色谱条件下测定色谱柱的最小理论塔板数。分离度和拖尾因子，并规定变异系数应不大于2％。 对于化学检验中使用的计量仪器包括容量瓶、移液管、滴定管、分析天平亦均应校正。适用性预试验 仪器的安装确认完成以后，在其功能试验符合要求的情况下，应用标准品或对照品对其进行适用性检查，以确认仪器是否符合使用要求。例如对熔点测定仪的适用性预试验是采用已知溶点的甲硝唑做试验，测试结果与已知熔点比较。紫外分光光度计可用已知含量的某标准品试验，测得结果与已知数值对比，确定仪器是否符合使用要求。在完成上述各项试验工作的同时，应做好相应的文件记录等资料归档工作，每一台仪器均应有一套完整的档案资料。 再确认 为了确保仪器处于良好的使用状态，对于一台新购买的仪器在确认工作结束以后，应根据仪器的类别。确认的经验制定再确认的计划。再确认的时间间隔和内容要根据仪器类别和使用情况决定，一般是3个月、6个月或1年。仪器再确认的内容通常包括线路连接、附件备品消耗品检查、清洁工作、功能试验、工作日记等，其中重点是安装确认中的功能试验。 3、检验方法的适用性验证
检测方法的验证及确认
加标回收率的测定可以反映测试结果的准确度。当按照平行加标进行回收率测定时，所得结果既可以反映测试结果的准确度，也可以判断其精密度。在实际测定过程中，有的将标准溶液加入到经过处理后的待测样品中，这不够合理，尤其是测定有机成分而试样须经预处理时，或者测定易挥发物等需要蒸馏预处理的成分时，不能反映预处理过程中的沾污或损失情况，虽然回收率较好，但不能完全说明数据准确。进行加标回收率测定时，还应注意以下几点： 1)加标物的形态应该和待测物的形态相同。 2)加标量和加标回收率测量的精密度应予以控制，一般情况下作如下规定： ①加标量应尽量与样品中待测物含量相等或相近，并应注意对样品容积的影响； ②当样品中待测物含量接近方法检出限时，加标量应控制在校准曲线的低浓度范围； ③加标量尽量不大于待测物含量的3倍； ④加标后的测定值不应超出方法的测量上限的90%； ⑤当样品中待测物浓度高于校准曲线的中间浓度时，加标量应控制在待测物浓度的半量。 3)由于加标样和样品的分析条件完全相同，其中干扰物质和不正确操作等因素所导致的效果相等。当以其测定结果的差值计算回收串时，常不能确切反映样品测定结果的实际差错。
国家标准 GB/T 27404-2008 《实验室质量控制规范食品理化检测》中对回收率试验做了如下规定： 对于食品中的禁用物质，回收率应在方法测定低限、两倍方法测定低限和十倍方法测定低限进行三水平试验；对于已制定最高残留限量（MRL）的，回收率应在方法测定低限、MRL、选一合适点进行三水平试验；对于未制定MRL的，回收率应在方法测定低限、常见限量指标、选一合适点进行三水平试验。回收率的参考范围见表F.1.
CODcr实验室检测标准方法 1、应用范围 本标准适用于各种类型的含COD值大于30 mg/l的水样，对未经稀释的水样的测定上限为700 mg/l。 本标准不适用于含氯化物浓度大于1000mg/l(稀释后)的含盐水。 2 、定义 在一定条件下，经重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)氧化处理时，水样中的溶解性物质和悬浮物所消耗的重铬酸盐(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)相对应的氧的质量浓度。 3 、原理 在水样中加入已知量的重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)溶液，并在强酸介质下以银盐作催化剂，经沸腾回流后，以试亚铁灵为指示剂，用硫酸亚铁铵滴定水样中未被还原的重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)由消耗的硫酸亚铁铵的量换算成消耗氧的质量浓度。 在酸性重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)条件下，芳烃及吡啶难以被氧化，其氧化率较低。在硫酸银催化作用下，直链脂肪族化合物可有效地被氧化。 4、试剂 除非另有说明，实验时所用试剂均为符合国家标准的分析纯试剂，试验用水均为蒸馏水或同等纯度的水。 4.1 硫酸银(Ag2SO4)，化学纯。 4.2 硫酸汞(HgSO4)，化学纯，（汞，氯离子屏蔽剂，一类污染物，严禁向环境水体排放）。 4.3 硫酸(H2SO4)，p＝1.84g/ml。 4.4 硫酸银-硫酸试剂：向1L硫酸(4.3)中加入10g硫酸银(4.1).放置1-2天使之溶解，并混匀，使用前小心摇动。 4.5 重铬酸钾（六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放）标准溶液：
4.5.1 浓度为C(1/6K2Cr2O7)＝0.250mol/l的重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)标准溶液：将12.258g在105℃干燥2h后的重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)溶于水中，稀释至1000ml。 4.5.2 浓度为C(1/6K2Cr2O7)＝0.0250mol/l的重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)标准溶液：将4.5.1条的溶液稀释10倍而成。 4.6硫酸亚铁铵标准滴定溶液 4.6.1 浓度为C[(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O]≈0.10mol/l的硫酸亚铁铵标准滴定溶液；溶解39g硫酸亚铁铵[(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O]于水中，加入20ml硫酸(4.3)，待其溶液冷却后稀释至1000ml。 4.6.2 每日临用前，必须用重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)标准溶液(4. 5.1)准确标定此溶液(4. 6.1)的浓度。 取10.00ml重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)标准溶液(4.5.1)置于锥形瓶中，用水稀释至约100ml，加入30ml硫酸(4.3)，混匀，冷却后，加3滴(约0.15ml)试亚铁灵指示剂(4.7)，用硫酸亚铁铵(4.6.1)滴定溶液的颜色由黄色经蓝绿色变为红褐色，即为终点。记录下硫酸亚铁铵的消耗量(ml)。 4.6.3 硫酸亚铁铵标准滴定溶液浓度的计算： C[(NH4)2Fe(SO4)2]=0.250×10.00/V[(NH4)2Fe(SO4)2] 式中：V--滴定时消耗硫酸亚铁铵溶液的毫升数。 4.6.4 浓度为C[(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O]≈0.010mol/l的硫酸亚铁铵标准滴定溶液：将4.6.1条的溶液稀释10倍，用重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)标准溶液(4. 5.2)标定，其滴定步骤及浓度计算分别与4. 6.2及4.6.3 类同。 4.7 邻苯二甲酸氢钾标准溶液，C(KC6H5O4)＝2.0824mmol/l：称取105℃时干燥2h的邻苯二甲酸氢钾(HOOCC6H4COOK)0.4251g溶于水，并稀释至1000ml，混匀。以重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)为氧化剂，将邻苯二甲酸氢钾完全氧化的COD值为1.1768氧/克(指1g邻苯二甲酸氢钾耗氧 1.176g)故该标准溶液的理论COD值为500mg/l。
页次第 52 页共 4页文件名称检测方法选择和验证程序发布日期2019年1月1日 1 目的 对在检测中选用的检测方法进行有效的控制，保证检测方法的适宜性、有效性，从而确保检测结果准确可靠。 2 范围 本程序适用于中心所用检测方法选择和验证的全过程。 3 职责 3.1 技术负责人负责组织进行检测方法的验证，提交方法验证报告。 3.2 检测组组长负责检测方法验证的实施。 3.3 主任负责批准后检测方法的投入使用。 4程序 4.1 开展检测时，应采用满足客户需要并适用的检测方法（优先使用国家标委会、国际、地方发布的方法），针对不同检测项目由检测人员按客户的要求进行选择，技术负责人应确保这些标准、规范为最新有效版本。 4.2 当由于缺乏检验指导书，造成检测人员对标准理解、操作方法、判定的不同而影响检测质量时，部门应依据标准编制检验指导书。如果标准方法已包含了如何进行检测和判定的信息，并且这些信息检测人员完全理解并熟练操作时，不需编制检验指导书。 4.3 如果客户要求不适用于检测标准时，综合组应与客户沟通，并在合同中注明。当客户提出的方法已过期时，负责合同评审人员应通知客户，并且在《检测委托单》中说明，建议其采用有效的标准。 4.4 当客户未指定方法，检测组应优先采用国家标委会、国际、地方发布的方法；如实验室制定的方法能满足预期用途并经过验证，也可使用，所选方法由综合组通知客户。
页次 第 53 页 共 4页 文件名称 检测方法选择和验证程序 发布日期 2019年1月1日 4.5 开始检测前，技术负责人对选用方法进行验证，确保能够满足预期的用途时，才能进行检测。验证的内容应包括以下七个方面： a.对执行新标准所需的人力资源的评价，即检测人员是否具备所需的技能及能力；必要时应进行人员培训，经考核后上岗； b.对现有设备适用性的评价，诸如是否具有所需的标准/参考物质，必要时应予补充； c.对设施和环境条件的评价； d.对样品制备，包括前处理、存放等各环节是否满足标准要求的评价； e.对作业指导书、原始记录、报告格式及其内容是否适应标准要求的评价； f.对新旧标准进行比较，尤其是差异分析与比对的评价； g.准确度的确认(具体方法见4.6)。 方法的验证还可包括以前参加过的实验室间比对或能力验证的结果、结果的不确定度、检出限、留样复测的结果。技术负责人填写《使用新方法确认记录表》。当方法发生变化时，应重新进行确认，确认的结果记录于《使用新方法确认记录表》上。 4.6 准确度的验证 准确度的确认由精密度和正确度两个参数决定。 4.6.1 精确度检验。 4.6.1.1 用需要验证的方法对标准物质(r V )在重复性条件下测量多次，得到n 个 的量结果，计算方差： 2 21 1()1n r i k S x x n ==--∑ 其中： 1 1 n i k x x n == ∑
检验方法确认程序 一．目的：适应医学技术的发展，确保检验方法准确可靠，以满足临床需要。 二．适用范围：实验室所有开展的检验方法。 三.工作程序： 1．实验室必须使用能保证准确和可靠的检验结果的检验方法、器材、仪器、试剂、质控品和校准品、供应品。 2．必须选择能保证检给结果在实验室所确定的方法性能规格内的方法。在检测标本前，实验室必须对使用方法的下述的性能规格进行确认：准确度、精密度。如有必要，可添加特异性和分析灵敏度，以及检验结果的报告范围、参考值以及其它适合的特性。 2．1．实验室引进我国注册登记的国外方法（试剂盒）或我国取得生产许可证和方法（试剂盒）时，在报告检验结果前，必须得到下列特性的性能规格：准确度、精密度、检验结果的报告范围（或者线性）、参考值。实验室至少应检查其准确度、精密度。必要时增加特异性和分析灵敏度，以及报告范围，参考值是否符合本实验室的服务人群等。如与厂商提供的数据进行比较，应取得相符结果。 2．2．实验室自行建立的方法，在报告结果患者前： 2．2．1建立每一方法的性能规格，包括：准确度、精密度、特异性、干扰因素的影响、分析灵敏度、检验结果的报告范围（或者线性）、参考范围、其它需要检测的性能。 2．2．2．建立该方法的校准程序和ICQ规则。 2．3实验室必须有上述活动的记录和文件。并保存到停止到使用这些方法后半年。 3．实验室必须有与所做检验的专业和工作量相适应的，足够的器材、仪器、试剂、质控品和校准品、供应品。 4．实验室必须确定正确制备、储存和使用上述体外诊断用品的条件。 4．1．这些条件包括：水的质量、温度校准。保护器材和仪器，不致由于电流的波动各中断引起对检验结果的不利影响。 4．2．必须将纠正由于达不到规定所采取的改正措施文件化。 5．用商品试剂盒时，对于国家规定应有生产许可证，注册登记证的品种，决不能使用没有生产许可证、注册登记证的商品试剂盒。尚未规定者，生产厂家应提供该产品性能规格以及质量保证书。 6．试剂、溶液、培养基、校准品、质控品和其它供应品，必须加以标记，标记上应有：6．1．识别名：当有意义时应标明浓度，效价，滴度等 6．2．储存要求 6．3．制备日期和失效期 6．4．其它与正确使用有关的信息 7．应根据仪器制造商说明或依据权威机构的要求来选择和使用校准品和质控品。实验室自行选用的校准品或质控品，应有实验依据证明其不影响检验结果的准确性和可靠性。
实验室内部质量控制方 法分析 Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998
实验室内部质量控制方法分析 评审资料 （1）能力附表； （2）标准汇总（所有参数中包含的参数全覆盖）； （3）标准查新； （4）原始记录模版的编制及清单汇总； （5）练兵报告（每个参数的练兵至少5 次）； （6）新项目开发表； （7）方法验证（所有扩项参数全覆盖）； （8）实验室之间比对及分析表（每月至少2次,并且全员覆盖）； （9）内部的比对及分析表（每月至少2次,并且全员覆盖）； （10）内部的质量监督记录（每月至少2次,并且全员覆盖）； （11）培训记录（所有扩项参数全覆盖）； （12）仪器的检定证书及检定确认表（包括玻璃仪器的自校记录）； （13）仪器的期间核查记录； （14）仪器的作业指导书； （15）仪器的检测台账； （16）样品的检测记录（每周一次）； （17）标准物质的期间核查记录； （18）试剂标准品的采购验收记录； （19）留样登记记录； （20）留样处理记录； （21）温室度的登记记录； （22）溶液配制记录等。 内部控制 实验室内部的质量控制主要是用于评价实验室检测质量的精密度，同时反映了实验室分析质量的稳定性。实验室内部的质量控制的方法主要有：人员比对、方法比对、仪器比对、留样再测、有证标准物质检测、加标回收等。 实验室内部质量控制的特点：（1）比较方便简单灵活。实验室内部质量控制都是有实验室内部自行组织实施的，组织者和实施者均为实验室内部的人员。可以根据实验室的实际工作情况进行调整，是比较灵活自由的；如果实验室数据出现
实验室认证资料非标准检测方法的确认程序 The following text is amended on 12 November 2020.
非标准检测方法的确认程序 一、总则 1、为规范中国实验室国家认可委员会检测方法的确认工作，保证方法确认 结果的公正、准确和可靠性，特编制本程序。 2、本程序适用于非标准检测方法的确认，包括对拟纳入CNAL检测方法库 的文件的建议或申请、受理、文件初审、技术评审、审核确认、通报、批准发布全过程。 3、非标准检测方法确认工作由能力验证分委员会检测方法研究工作组 (CNAL／TC／SC5／WG4，下简称工作组)负责。工作组由聘请的各领域分析测试专家组成，设组长1人负责全面工作。工作组下设办公室和若干个专业组。 二、基本要求 需要确认的非标准检测方法应符合以下三方面的要求： 1、方法来源 可由各专业组依托国家分析测试体系或其他权威资源库直接提出； 也可由相关实验室经本单位同意并推荐提出申请。 2、文件格式 文件格式符合有关的规定，提交的方法应同时包括按要求格式填写的将用于发布的文本和方法研究、验证等用于证明方法可靠性的背景材料，用于发布的文本材料应同时提交电子版本和书面材料。 3、技术内容 方法应可靠、实用，其技术指标应符合相关规定。提交验证材料应齐全，包括非标准检测方法的检测原理、操作性、准确性、重复性及再现性等方面的内涵、可选择以下方式进行验证： (1)利用参考标准或标准物质作校准或比较； (2)与其他方法所得结果的比较； (3)通过能力验证或实验室间的比对； (4)影响结果诸多因素的系统评估； (5)建立在对方法原理的科学理解和实际经验基础上对结果不确定度的评
检验检测方法的确 认
检验检测方法的确认 检验检测方法是指实验室用于实施检验检测工作所依据的标准检验检测方法和技术规范。检验检测方法是实验室实施检验检测工作的主要依据，是开展检验检测工作所必须的资源，如果方法及程序不同就会造成结果不同。 《实验室资质认定评审准则》5.3.2条款中规定：“实验室应确认能否正确使用所选用的新方法。如果方法发生了变化，应重新进行确认。实验室应确保使用标准的最新有效版本。”在《GB/T 27025- 检测和校准实验室能力的通用要求》条款中也有相应的规定。实验室采用的检验检测方法包括样品的抽取、处理、运输、存储和制备等各个环节，确认时应当记录确认所获得的结果、使用确认的程序、确认对方法是否适合于预期的用途等，必要时还应包括不确定度和分析数据的统计学处理技术。 方法发生变更时或颁布新标准时，对方法如何进行确认： 1.在首次对外出具数据之前应确认标准方法已被正确的运用。 2.标准方法发生了变化应重新确认。 3.对标准方法定期清理或者查新，以确保最新有效版本。 一、检测方法的选择及使用要求 实验室资质认定(或认可)现场考核时确定的检测项目的依据是国家标准、行业标准和地方标准。因此说，当没有国际、国家、
行业、地方规定的检验检测方法时，实验室应尽可能选择已经公布或由知名的技术组织或有关科技文献或杂志上公布的方法，但应经实验室技术主管确认。如是在实验室计量认证或认可批准业务范围内，因客户的特殊要求而发生的情况，其检验检测结果和报告上应有明确的说明。 另外需要使用非标准方法时，这些方法应征得委托方同意，并形成有效文件，使出具的报告为委托方和用户所接受。这是指必须在实验室计量认证或认可批准业务范围内使用，所谓有效文件是指甲乙双方对使用非标准方法检测达成协议，一般来说应有双方签字盖章，也能够在检测委托（协议）书上注明，实验室在检测报告中也必须加以说明。因此，在检测方法的选择上，优先使用国家标准，然后是行业标准、地方标准，非标准方法仅限于委托方同意才使用。 对于实验室完成的每一项或每一系列检验检测的结果，均应按照检验检测方法中的规定，准确、清晰、明确、客观地在检验检测证书或报告中表述，应采用法定计量单位。证书或报告中还应包括为说明检验检测结果所必须的各种信息采用方法所要求的全部信息。除上述明确的要求外，检测报告中必须有检测数据和结论。 因此说，检测方法选择的核心就是方法有效性，要特别注意的是：要使用最新有效版本的方法。 二、检测方法的验证及确认
. 实验室检测结果的质量控制方法 质量控制是指为达到质量要求所采取的作业技术和活动。目的在于监视过程并排除导致不合格、不满意的原因以取得准确可靠的数据和结果。 采取合理有效的质量控制手段可监控检测/ 校准工作过程，预见到可能出现问题的征兆或及时发现问题的存在，使实验室可有针对性地采取纠正措施或预防措施，避免或减少不符合工作的发生。因 此, 如何在日常的检测工作中对检测结果进行有效的监控成为很多实验室急需解决的课题。实验室检测结果的质量监控可分为外部监控和内部监控。
一是借助外部力量实施实验室间比对验证活动，实验室间的 能力验证是一种检测质量的全面的审核工作，它不但包括了对检测人 员、设备、环境等的比对，也包括对检测报告、数据处理的验证等， 是实验室能力确认的重要方法之一，也是实验室质量控制的重要手段， 它有助于实验室检测能力的提高。 二是内部质量监控。利用内部手段如对盲样检测、留样检测、人员比对、方法比对等验证检测工作的可靠性，具体方法有以下几种：
1．对保留样品再检验 对无标准物质的检测参数如蛋白质、脂肪、灰分等指标并易保存的样品采取留样再检 测的方法对检测结果的准确性进行控制， 这 . . 样不但使检验人员认真对待每一次检验工作，从而提高自身素质和技术水平，也有 助于发现检测中存在的问题并得到及时有 效地纠正。 2．定期使用标准物质 （1）按计划定期对有证标准物质进行检测，将检测结果与标准值进行比较，如果检测
结果异常应查明原因排除异常因素，使检 测体系恢复正常。 （2）通过对标准物质的检测来完成仪器的期间核查，判断仪器是否处于正常状态的校准状态，对经分析发现仪器设备已经出现 较大偏离导致检测结果不可靠时，应按相 关规定处理，直到经验正的结果满意时方 可投入使用。 （3）利用对标准物质的检测对检验人员进行考核，以查明检验人员是否熟练掌握检验技术，是否能够检出符合要求的准确数据 及结果，这也是对检测质量控制的重要手段。3．利用质量控制图 质量控制图是把检验的性能数据与所计算 出来的预期的“控 制限”进行比较的图，此方法通过统计技术，将指控样用于检测中，
1目的 为确保满足客户要求和检测数据准确可靠，对本公司开展的检测活动中所采用的方法进行控制。 2范围 适用于检测活动中的方法选择、执行能力的证实和方法的确认。 3职责 3.1技术负责人负责检测方法的选用、制定和确认及对测量不确定度的评定和分析数据的统计技术，以及《受控文件清单》的审核；负责组织检测实施细则、作业指导书的编制和批准，并负责对在用检测方法进行有效控制。 3.2收样员负责对客户要求方法的认可或选择。 3.3管理室负责检测标准的追踪确认，并发放《受控文件清单》，及时将检测标准的现时有效性信息通知检测人员；对在用受控技术标准的现时有效性负责。 3.4技术负责人每季度在相关官方网站及各类报刊、书籍、杂志上查询各类相关标准文件的最新修订情况，提出修订建议。 4工作程序 4.1本公司使用合适的方法进行抽样、样品制备、检测、测量不确定度评定、对检测数据的处理和统计分析。 4.2检测方法的选用 4.2.1当客户指定检测方法时，应采用满足客户要求并且适用于所进行的检测的方法。应优先使用国际、区域或国家标准发布的方法。收样员负责检查客户指定方法的适用性、有效性，若客户提供的方法不适用或已过时，收样员应告知客户，共同另选合适的方法，必要时联系检测室或技术负责人确定合适的方法。 4.2.2当客户未指定检测方法时 a）应优先选择以国际、区域或国家、行业标准发布的方法； b）或选择由知名的技术组织或有关科学书籍和期刊公布的方法； c）或选择由设备制造商指定的方法； d）本公司自行制定或采用的方法如能满足检测的预期用途并经过技术或专家验证，也可以使用。
4.2.3 对于按照国家或行业标准生产的产品，检测方法按照产品标准中规定的方法。 4.2.4所有检测方法的选定均应得到客户的确认，尤其是与客户原提出方法不一致，或客户无要求等情况，在与客户商讨检测方法时的情况均应按《要求、标书和合同评审程序》规定在《检测委托单》中留有记录，并经客户确认。 4.3 标准方法执行能力的确认 本公司在选择每一检测方法进行检测之前，除应证实能满足客户的预期要求外，还需证实能够正确地运用这些检测方法，并得到准确可靠的检测数据。对首次采用的检测方法进行技术能力的验证，如检出限、回收率、正确度和精密度等。如果在验证过程中发现标准方法中未能详述但影响检测结果的环节，应将详细操作步骤编制成作业指导书，作为标准方法的补充。标准方法已被证实其能满足特定的预期要求，直接按本条进行执行能力的确认。 当检测标准发生变更涉及到检测方法原理、仪器设施、操作方法时，需要通过技术验证重新证明正确运用新标准的能力，由技术负责人组织检测室负责人及相关人员对变更方法的确认进行全面策划并实施。 4.3.1 技术负责人组织相关检测室负责人对方法使用人员的执行能力进行确认和评审。 4.3.2 确认该方法的预期用途、适用范围、测试过程及技术要领、数据处理等已被正确掌握。 4.3.3 确认执行该方法所需的仪器设备、环境条件等已能满足要求。 4.3.4确认所需的技术文件和记录表格、检测报告格式已准备齐全。如果所采用的方法标准对检测工作的描述尚不够明确时，技术负责人应组织编制和批准相应的作业指导书，以保证检测不受影响及其结果的可靠性。 4.3.5 确认检测人员已能通过试验方法的检出限、精密度、回收率、适用的浓度范围和样品基体等特性来对检测方法进行确认，提供准确可靠的检测数据并核发了相应的上岗证。 数据的正确可靠按《检测结果质量控制程序》执行，可以通过下列方法之一或其组合来评定： (1) 同一检测人员重复测试和不同人员间测试结果的比较； (2) 使用标准物质进行校核； (3) 与其他方法所得结果进行比较； (4) 实验室间对比或能力验证计划（测量审核）； (5) 对影响结果的因素作系统评审。
页次第 56 页共 4页文件名称检测方法确认程序发布日期2019年1月1日 1 目的 为了保证非标准方法、实验室制定的方法、超出预定范围内使用的标准方法、扩充或修改过的标准方法能够满足预期用途或应用领域的需要，特制定本程序。 2 范围 非标准方法、实验室制定的方法、超出预定范围内使用的标准方法、扩充或修改过的标准方法的方法确认。 3 职责 3.1 技术负责人负责组织进行检测方法的确认，提交方法确认报告。 3.2 检测组组长负责检测方法确认的实施。 3.3 主任负责批准后非标方法投入使用。 4 职责 4.1需要进行确认的方法 4.1.1 实验室自发明的方法。 4.1.2 超范围使用的标准方法。 4.1.3 更改的标准方法。 4.1.4 实验室采用的非标方法。 4.1.4.1 非标准方法在使用前，必须具备两个条件，一是征得顾客的同意，二是对方法进行确认。非标准方法经确认后，下次使用时，就只需考察适用性了。 4.1.4.2 有的非标准方法不需要经过确认。例如：有关国家正在使用的官方确认的方法，我国质检总局确认的方法、国际上普遍采用、行业广泛认同的等，其方法不需要实验室再进行确认，仅需要验证。 4.2确认的方法
页次第 57 页共 4页文件名称检测方法确认程序发布日期2019年1月1日 确认的方法可用以下一种或多种技术进行方法确认： a.使用参考标准或标准物质进行校准或评估偏倚和精密度； b. 对影响结果的因素进行系统性的评审； c. 通过改变控制检验方法的稳健度，如温度、加样体积等； d. 与其他已确认的方法进行结果比对； c. 实验室间比对； d. 根据对方法原理的理解以及抽样或检测方法的实践经验，评定结果的测量不确定度。 4.3方法确认应考虑的方面 4.3.1 准确度； 4.3.2 检出限(测量范围)； 4.3.3 经济性； 4.3.4 时效性； 4.3.5 环保性； 4.3.6 可操作性。 4.4方法确认的阶段 4.4.1 确认顾客的需求，说明试剂的检测/校准问题，制定相应要求。 4.4.2 选择确认的方法，并记录和分析该方法的特性。 4.4.3 评估方法的特性是否满足顾客的要求。 4.5 准确度的确认 准确度的确认由精密度和正确度两个参数决定。 4.5.1 精密度的确认方法(重复性，方法摘自ISO 5725.6) 4.5.1.1 假设A方法是标准方法，B方法是非标方法。对标准物质( V)用A方法 r