实验一 复方对乙酰氨基酚片的含量测定
一、目的要求
1掌握亚硝酸钠滴定法测定胺类药物含量的基本原理
2熟悉复方制剂含量测定的特点
二、实验原理
复方对乙酰氨基酚片由对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸、咖啡因三种药物组成，根据其结构的不同，可通过亚硝酸钠滴定法测定对乙酰氨基酚的含量.
1、对乙酰氨基酚的测定：
第一步，水解，得到芳香伯胺
第二步，重氮化定量反应: 三、仪器与试药
1恒温水浴锅、酸式滴定管、碱式滴定管、三角瓶
2氯仿、乙醇、酚酞指示剂、0.1mol/L 氢氧化钠液；稀硫酸、溴化钾、含锌碘化钾淀粉指示液、0.1mol/L 亚硝酸钠液
3复方对乙酰氨基酚片（市售品）
四、操作步骤
精密称取上述细粉适量，(约相当于对乙酰氨基酚0.3g ），加稀硫酸40mL ，附回流冷凝管，加热回流1小时，冷却，加水50mL 、盐酸20mL 、溴化钾3g ，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处,用0.1mol/L 亚硝酸钠液迅速滴定,随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水将尖端洗涤，洗液并入溶液中,继续缓缓滴定，至用细玻璃棒蘸取溶液少许，划过涂有含锌碘化钾淀粉指示液的白瓷板上,即显蓝色条痕，停止滴定，5分钟后，再蘸取溶液少许划过一次，如仍显蓝色条痕,即为终点,即得.每1mL 亚硝酸钠液（0.1mol/L ）相当于15。12mg
的对
NH.COCH 3 OH
+ H 2O 稀H 2SO 4 △
OH NH 2 + CH 3 COOH
OH + NaNO 2 + 2HCl
+ N. Cl - OH + NaCl +2 H O
乙酰氨基酚（C8H9NO2）.
五、计算
复方氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚含 量测定 摘要： 目的建立复方氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚含量的高效液相色谱法[1] [2] [3] 的检测方法，方法方法色谱柱采用Aglea Venusll MP C18（4.6*150mm，5μm），流速1.0ml/min，流动相为甲醇：水（40:60），柱温30℃，检测波长为216nm， 进样量为20μl，结果对乙酰氨基酚在300~700μg/ml浓度范围内线性关系良好 （r=0.9998），平均回收率为99.8%，RSD为0.16%（n=9），溶液稳定性、精密度、耐用性试验含量的RSD均小于2.0%。结论用高效液相色谱法简便准确，专属 性强，重复性好，适用于小儿氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚含量的检测。 关键词：复方氨酚黄那敏颗粒，对乙酰氨基酚，含量，高效液相色谱法 一、试验方法 色谱柱：十八烷基键合硅胶为填充剂（C18,150*4.6mm，5μm）；溶剂：10% 乙醇 流动相：甲醇-水（40:60）；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；波长：216nm；进样量：20μl； 含量对照品溶液（0.5mg/ml）：取对照品约25mg，精密称定，置50ml量瓶，用乙醇溶解（乙醇量控制在最后溶液约含10%乙醇）并用水稀释至刻线，摇匀即得。 供试品溶液：取装量差异项下的内容物，研细，精密称取适量（约相当于对 乙酰氨基酚0.125g）置具塞锥形瓶中，精密加乙醇25ml振摇使溶解，用干燥滤 纸过滤，精密量取续滤液5ml，置50容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供 试品溶液。
空辅：取空白辅料1.875g置具塞锥形瓶中，精密加乙醇25ml振摇使溶解， 用干燥滤纸过滤，精密量取续滤液5ml，置50容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。 二、结果 2.1专属性 溶液配制：按照上述溶液配制步骤配制溶剂，空辅及对照品溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，进行含量测定。结果表明溶剂及空辅均不干扰对乙酰氨基酚检测。 2.2进样精密度 溶液配制：按照上述溶液配制步骤配制对照品溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，进行测定。结果表明同一溶液连续6次进样，峰面积RSD为0.10%小于1.0%，表明仪器进样精密度良好。 2.3滤膜吸附性 溶液配制：按照上述溶液配制步骤配置对照品与供试品溶液，分别采取未过滤，经0.22μm滤膜过滤，弃去初滤液0.5ml、1ml及2ml，去续滤液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，进行测定。结果表明弃去0.5ml、1ml及2ml均不干扰 样品检测，因此，本品含量供试品溶液采用0.22μm滤膜过滤弃去1ml。 4.4溶液稳定性 溶液配制：按照上述溶液配制步骤配置对照品与供试品溶液，分别在室温下 0h，4h，8h，12h，24h，48h进样，精密量取20μl，注入液相色谱仪，进行测定。结果表明对照品溶液、供试品溶液室温下48h内相对于0h的峰面积变化值 均小于2.0%，对照品溶液、供试品溶液室温下48h内稳定性良好。 4.5线性 线性贮备液：取对照品约100mg，精密称定，置100ml量瓶中，用乙醇溶解 并用水稀释至刻线，摇匀即得，作为线性贮备液。分别精密量取线性贮备液
验证性试验 实验十七 对乙酰氨基酚片的含量测定 一、目的要求 1.掌握对乙酰氨基酚片的含量测定的原理。 2.掌握紫外可见分光光度法测定药物含量的方法及计算。 二、仪器与试药 1.仪器 Mettler AL204电子天平 752型紫外可见分光光度仪 刻度移液管 规格：5mL 、10mL 定量滤纸（直径10cm ） 容量瓶 规格：100mL 500mL 研钵 HHS 型电热恒温水浴锅 2.试药 对乙酰氨基酚片 规格0.3g 氢氧化钠 三氯化铁试液 蒸馏水 三、实验原理 利用对乙酰氨基酚结构中有共轭结构，在紫外区有吸收，最大吸收波长为257nm ，测定其最大吸收波长处的吸收度即可计算其含量。 四、实验内容 本品含对乙酰氨基酚（C 8H 9NO 2）应为标示量的95.0%～105.0%。 【鉴别】本品的水溶液加三氯化铁试液，即显蓝紫色。 【含量测定】取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚40mg ），置250mL 量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50mL 与水50mL ，振摇15分钟，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL,置100mL 量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液，加水至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在257nm 的波长处测定吸光度，按C 8H 9NO 2的吸收系数（%11cm E ）为715计算，即得。 计算： 对乙酰氨基酚片标示量%＝ A ：供试品在257nm 的波长处测得的吸收度； D ：供试品的稀释倍数； %11cm E :吸收系数; W ：对乙酰氨基酚片片的平均片重； W ：称取对乙酰氨基酚片粉的量。 五、注意事项 1.移液管、容量瓶的使用方法。 2.振摇充分，使样品溶解完全。 %100100D 1%1??????标示量W E W A cm
对乙酰氨基酚片剂的相对生物利用度的测定 一、实验目的 1. 掌握尿药法测定相对生物利用度的实验设计与方法 2. 了解尿药法的特点和对乙酰氨基酚的体内过程 二、实验原理 对乙酰氨基酚在体内以原型（约5%）及葡萄糖醛酸结合物（55%~75%）和硫酸结合物（20%~40%）自尿中排出。因此，可采用尿药法测定生物利用度，其测定原理是对乙酰氨基酚及其代谢物水解成对氨基酚，对氨基酚在次氯酸钠的存在下与百里酚产生反应，生成蓝色染料，此染料在601nm 的波长处有最大吸收。 生物利用度是指药物或制剂服用后，主药到达大循环的相对数量和速度。它是药物制剂的质量的重要指标。绝对生物利用度的测定以静脉注射剂作为标准参比制剂，相对生物利用度常采用口服溶液剂，或市场认可、吸收较好且临床有效的制剂作为标准参比制剂。在评价生物利用度的参数中，相对生物利用度常用AUC 或尿药排泄总量的相对比值Fr 来反映吸收程度。 尿药数据法与血药浓度法一样，可以通过给药后收集各时间的尿样，经测定后拟合出动力学参数以及生物利用度数据。尿药法要求有较多的原形药物从尿中排出，并且药物的肾排泄过程符合一级速度过程。单室模型口服给药尿药法基本公式为： dX u dt =k e X =k e k a FX 0k a −k (e −kt −e −k a t ) 式中，X0是给药剂量；F 为生物利用度；ka 为表观一级吸收速度常数；X 为体内药量；k 为一级消除速度常数；X 与Xu 为t 时间体内药量与排泄于尿中的原形药物累积；ke 为肾排泄速度常数。 当时间趋向无穷大时，后面一项相对于前面一项可以忽略不计，即变为单指数方程。取对数，并以平均尿药速度t X u ∆∆代替瞬时速度 dt dX u ，以集尿中点时间t 中代替t,则 得到下式： k k FX k k t k t X a a e u --=∆∆0lg 303.2lg ＋中 因此，给药后收集尿样，以 () t X u ∆∆lg 对t 中作图得一曲线，由末端直线斜率可求出k ，
实验一 复方对乙酰氨基酚片的含量测定 一、目的要求 1掌握亚硝酸钠滴定法测定胺类药物含量的基本原理 2熟悉复方制剂含量测定的特点 二、实验原理 复方对乙酰氨基酚片由对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸、咖啡因三种药物组成，根据其结构的不同，可通过亚硝酸钠滴定法测定对乙酰氨基酚的含量. 1、对乙酰氨基酚的测定： 第一步，水解，得到芳香伯胺 第二步，重氮化定量反应: 三、仪器与试药 1恒温水浴锅、酸式滴定管、碱式滴定管、三角瓶 2氯仿、乙醇、酚酞指示剂、0.1mol/L 氢氧化钠液；稀硫酸、溴化钾、含锌碘化钾淀粉指示液、0.1mol/L 亚硝酸钠液 3复方对乙酰氨基酚片（市售品） 四、操作步骤 精密称取上述细粉适量，(约相当于对乙酰氨基酚0.3g ），加稀硫酸40mL ，附回流冷凝管，加热回流1小时，冷却，加水50mL 、盐酸20mL 、溴化钾3g ，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处,用0.1mol/L 亚硝酸钠液迅速滴定,随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水将尖端洗涤，洗液并入溶液中,继续缓缓滴定，至用细玻璃棒蘸取溶液少许，划过涂有含锌碘化钾淀粉指示液的白瓷板上,即显蓝色条痕，停止滴定，5分钟后，再蘸取溶液少许划过一次，如仍显蓝色条痕,即为终点,即得.每1mL 亚硝酸钠液（0.1mol/L ）相当于15。12mg 的对 NH.COCH 3 OH + H 2O 稀H 2SO 4 △ OH NH 2 + CH 3 COOH OH + NaNO 2 + 2HCl + N. Cl - OH + NaCl +2 H O
乙酰氨基酚（C8H9NO2）. 五、计算
实验十五高效液相色谱法测定扑热息痛的含量 一、目的与要求 1、掌握用外标法对比法测定药物含量的实验步骤和结果计算方法。 2、熟悉高效液相色谱仪的使用方法。 二、基本原理 扑热息痛即对乙酰氨基酚，其稀碱溶液在257土1nm波长处有最大吸收，可用于定量测定。由于在其生产过程中，有可能引入对氨基酚等中间体，这些杂质也有紫外吸收。如果用紫外分光光度法测定，杂质会对含量测定的准确性造成干扰。因此，可采用具有分离能力的高效液相色谱法将待测物和杂质分离开测定，则杂质对被测物含量测定的干扰即被消除． 三、仪器与试剂 SHIMADZU LC—10ATvp高效液相色谱仪 色谱柱：ODS柱（250mm×4.6mm，5μm)； 流动相：甲醇一水（40:60)流速：1.0mL／min； 检测波长：257nm。 SGE 50μL微量注射器。 四、操作步骤 (一) 实验步骤 1、对照品溶液的配制：精密称取扑热息痛对照品约50mg置于100m1容量瓶中，加甲醇适量，振摇，使溶解，并稀释至刻度，摇匀待用。 精密量取上述溶液1.0mL，置于50mL。容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。 2、样品溶液的配制：精密称取扑热息痛样品约50mg置于100ml。容量瓶巾，加甲醇适量，振摇，使溶解，并稀释至刻度，摇匀待用。 精密量取上述溶液1.0mL，置于50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。 3、进样分析：用微量注射器吸取样品和对照品溶液各50μL、进样，各重复3次，记录色谱图的峰面积。 (三) 结果计算
按照下式计算扑热息痛原料药的百分含量： Ci%=A sample A standard × m sample m standard ×100% 上式中：Ci为扑热息痛的含量；A standard为标准品的峰面积；A sample为样品的峰面积。m standard为所称量标准品的重量；m sample为所称量样品的重量。 五、注意事项 1、此实验过程中应注意进样量的一致，因此，采用注射过量的样品体积，通过进样环（loop）来定量进样。 2．如果出现色谱峰分离不完全的现象，则可以通过调整色谱柱的长度，调整流动相中甲醇和水的比例，以改善分离效果，使杂质峰和样品峰完全分离。 六、思考题 1、此实验中需要对样品的线性关系进行考察吗？ 2、我们欲每次进样20μL，为何却要进样50μL? [参考文献] 1．戴荣华等，HPLC法测定氯唑沙宗胶囊含量，沈阳药科大学学报，1997：14(2)126—127。 2．冯学标等，反相HPLC法测定氯酚待固片中扑热息痛及磷酸可待因的含量，广东药学院学报．1997：13(1)21—23。 3．杨富国等，速故伤风胶囊中扑热息痛含量的高效液相色谱法测定，中南工业大学学报，1997：28(2)201—202。 4．国家药典委员会，中华人民共和国药典(2000年版，二部)，化学工业出版社。
HPLC法测定对乙酰氨基酚泡腾片含量对乙酰氨基酚也称为对羟基乙酰苯胺、醋氨酚或扑热息痛，是一种常用的退热和止痛药物。对乙酰氨基酚有解热镇痛作用，用于感冒发烧、关节痛、神经痛、偏头痛、癌痛及手术后止痛等。对乙酰氨基酚是非那西丁在体内的代谢产生，其抑制中枢神经系统前列腺素合成的作用与阿司匹林相似，但抑制外周前列腺素合成作用弱。本实验采用高效液相色谱法对对乙酰氨基酚泡腾片中的对乙酰氨基酚的进行了含量测定。 1.仪器与试药 1.1仪器 FL2200-2高效液相色谱仪（浙江福立分析仪器有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（上海子期实验设备有限公司）；R-215旋转蒸发仪（瑞士步琦有限公司）；HQ-50高端试剂级超纯水机（郑州华新电气公司）；ABS220-4分析天平（德祥科技有限公司）；AP-01P无油隔膜真空泵（杭州格图科技有限公司）；JL_720DTH超声波清洗器（南京科捷分析仪器有限公司）；TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。 1.2色谱柱 安捷伦 C18色谱柱（218 mm×4.6mm，5μm）。 1.3对照品 对乙酰氨基酚购自中国药品生物制品检定所。 1.4试剂 甲醇（上海谱振生物科技有限公司）、磷酸二氢钠（抚顺市新光精细化工有限责任公司）、溴化四丁基铵（北京迈瑞达科技有限公司）、乙腈（上
海谱振生物科技有限公司）、冰醋酸（武汉宏信康精细化工有限公司）、三乙胺（郑州皇朝化工产品有限公司）、四丁基硫酸氢铵（上海谱振生物科技有限公司）、庚烷磺酸钠（沈阳试三生化科技开发有限公司）、四氢呋喃（武汉宏信康精细化工有限公司）。 1.5试药 对乙酰氨基酚泡腾片。 2.测定方法确定 2.1色谱条件 依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-10]。流动相：磷酸盐缓冲液（pH4.5）-甲醇-乙腈（85：5：10），检测波长：254nm，流速：1.0ml?min-1。柱温：30℃。理论板数按对乙酰氨基酚峰计算应不得低于2000。 2.2对照品溶液的制备 精密称取对乙酰氨基酚对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL 含20μg的溶液，即得。 2.3供试品溶液的制备 取对乙酰氨基酚泡腾片适量，研细，精密称取，置50mL量瓶中，加水溶解，加水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。 2.4专属性试验 在处方中去对乙酰氨基酚制成阴性样品，依上述方法测定，结果在对乙酰氨基酚出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
对乙酰氨基酚片的质量分析 一、 实验原理： 对乙酰氨基酚结构中含有苯环共轭系统，在0.4%氢氧化钠溶液中，于257nm 波 长处有最大吸收，其吸收系数为%11cm E 715。 C 8H 9NO 2 151.16 二、主要仪器和试剂： 电子天平、容量瓶、分光光度计、移液管等 对乙酰氨基酚片（0.3g ），三氯化铁试液，稀盐酸，亚硝酸钠试液，碱性β-萘酚试液，0.4% NaOH 等 三.实验流程： 四、实验方法： 【鉴别】 （1）本品的水溶液加三氯化铁试液，即显蓝紫色。 （2）取本品约0.1g ，加稀盐酸5ml ，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5ml ，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml 稀释后，加碱性β-萘酚试液2ml ，振 对乙酰氨基酚质量标准 项 目 法 定 标 准 企 业 内 控 标 准 性 状 本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦，在热水或乙醇中易溶，在丙酮中溶解，在水中略溶 本品为白色结晶或结晶性粉末；无 臭，味微苦，在热水或乙醇中易溶， 在丙酮中溶解，在水中略溶 熔 点 应为168～172℃ 为168～172℃ 鉴 别 应均呈正反应 均呈正反应 检 查 酸 度 pH 值应为5.5～6.5 pH 值应为5.5～6.5 乙醇溶液的澄清度与颜色 应符合规定 符合规定 氯 化 物 应不大于0.01% 小于0.01% 硫 酸 盐 应不大于0.02% 小于0.02% 有关物质 应符合规定 符合规定 对氨基酚 应不大于0.005% 小于0.005% 干燥失重 应不得过0.5% 小于0.5% 重 金 属 应不得过百万分之十 小于百万分之十 含量 含量测定 按干燥品计算含对乙酰氨基酚应为98.0%～102.0% 按干燥品计算含对乙酰氨基酚应为98.0%～102.0% 类 别 解热镇痛药 解热镇痛药
实训六对乙酰氨基酚片的质量检验 一、实训目标 通过本实训，要求掌握对乙酰氨基酚片的质量检验的程序、方法与操作技能，掌握检验结果的处理与判断，能够规范书写检验原始记录及检验报告书。 二、质量标准 对乙酰氨基酚片 Duiyixian’anjifen Pian Paracetamol Tablets 本品含对乙酰氨基酚（C8H9NO2）应为标示量的95.0％~105。0％. 【性状】本品为白色片、薄膜衣或明胶包衣体，除去包衣后显白色。 【鉴别】取本品的细粉适量（约相当于对乙酰氨基酚0.5g)，用乙醇20ml分次研磨使对乙酰氨基酚溶解，滤过，合并滤液，蒸干，残渣照对乙酰氨基酚项下鉴别(1）(2)项试验，显相同反应. 【检查】溶出度取本品，照溶出度测定法（附录1[1]ⅩC第一法），以稀盐酸24ml 加水至1000ml为溶出介质，转速为每分钟100 转，依法操作，经30分钟时，取溶液5ml 滤过，精密量取续滤液1ml，加0。04％氢氧化钠溶液稀释至50ml，摇匀,照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA）,在257nm 的波长处测定吸光度，按C8H9NO2的吸收系数（E cm%11）为715计算出每片的溶出量，限度为标示量的80％，应符合规定。 其他应符合片剂项下有关的各项规定(附录ⅠA）. 【含量测定】取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚40mg),置250ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml及水50ml,振摇15分钟,加水至刻度，摇匀,用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，照对乙酰氨基酚含量测定项下方法，自“置100ml量瓶中”起，依法测定，即得. 【类别】同对乙酰氨基酚。 【规格】（1）0.1g（2) 0。3g（3）0.5g 【贮藏】密封保存。 四、实训过程 (一）仪器、试药准备及实训用液的制备
实验六紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚片的含量的方法学研究 一、目的要求 1.掌握确证分析方法的效能指标内容和要求。 2.熟悉建立分析方法的基本思路。 3.掌握紫外分光光度法的原理及操作。 二、实验原理 对乙酰氨基酚结构中含有苯环共轭系统，在0.4%氢氧化钠溶液中，于 257nm波长处有最大吸收，其吸收系数为E 1cm715。C8H 9NO 2151.16 三、仪器与试剂 对乙酰氨基酚片，对乙酰氨基酚对照品，氢氧化钠，容量瓶，量筒，紫外分光光度计，研钵。 四、实验步骤 1.线性与浓度范围取对乙酰胺基酚对照品约40mg，精密称定，置250mL量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50mL溶解后，加水稀释至刻度，摇匀。分别精密量取2，4，6，8，10，12mL，置100mL量瓶中，加入0.4%氢氧化钠溶液 10mL，加水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在257nm的波长处测定吸收度。将浓度C对吸收度A回归，得线性回归方程： A=a+bC(r= ,n=6)。线性浓度范围0.0032～0.0192mg/mL. 2.供试品测定法取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚40mg），置250ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液50ml及水
50ml，振摇15分钟，加水至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，照分光光度法，在257nm的波长处测定吸收度，1%E1 按C 8H 9NO 2的吸收系数（cm）为715计算，即得。 1% 3.回收率试验取本品10片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于对乙酰氨基酚40mg），共6份，置250ml量瓶中，按1：1比例，分别向其中加入对乙酰氨基酚对照品，其余照“供试品测定法”项下的方法操作，按标准曲线法或百分吸收系数法计算回收率。 4.精密度试验照“供试品测定”项下的方法操作，计算片剂含量相当于标示量的百分数，6份测定结果的相对标准偏差（RSD）即为精密度试验结果。 五、注意事项 1.为减少误差，各样品应尽量平行操作。 2.比色皿每次用完后应清洗干净。 六、思考题 1.测定方法的效能指标包括哪些内容？ 2.精密度的表示方法有哪几种？ 补充： 1.结果应给出平均片重 2.注意是浓度对吸光度作图
外观性状：完整光洁，色泽均匀，无异物，无杂斑，有效期内保持不变 片重差异 取供试品20片——精密称定总的质量——求平均片重——再分别精密称定每片的重量。 标准判断: 每片重量与平均片重相比较（凡无含量测定的片剂，每片重量应该与标示片重比较）按下表中的规定，超出重量差异限度的不得多于2片，并不得有1片超出限度1倍。 含量测定： 供试品的制备：取本品10片——精密称定——研细——精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚40mg）——置250ml量瓶——加0.4%氢氧化钠溶液50ml——加水定容——摇匀——滤过——精密量取续滤液5ml ——置１００ml量瓶——加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水定容，摇匀——紫外257nm下测定吸光度，测定3次求均值。 空白溶剂的制备: 以0.4%氢氧化钠溶液50ml，置250ml量瓶中，加水至刻度，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度。 标示量百分含量的计算 溶出度： 实验原理：溶出度系指药物从片剂或胶囊剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度。凡检查溶出度的制剂，不再进行崩解时限检查。药物只有固体制剂中的活性成分溶解之后，才能为机体吸收。溶出度试验能有效地区分同一药物制生物利用度的差异，是控制固体制剂内在的重要指标之一。对乙酰氨基酚的溶解度大小、辅料的亲水性程度和制片工艺都会影响制剂的溶出度，对乙酰氨基酚溶出度测定采用转篮法。 操作方法：量取的人工胃液900ml，注入每个操作容器内，加温使溶剂温度保持在37℃土0.5℃，调整转速100转/min使其稳定。 取供试品6片，分别投入6个转篮内，将转篮降入容器中，立即开始计时，至45分钟时，在规定取样点吸取溶液5ml，立即经不大于0.8µm微孔滤膜滤过，自取样至滤过应在30秒钟内完成。精密量取续滤液1ml，加0.04%氢氧化钠溶液稀释至50ml，摇匀，照紫
对乙酰氨基酚的鉴定结构确证与含量测定 一、实验目的 （1）掌握对乙酰氨基酚的鉴定的方法 （2）了解对乙酰氨基酚结构确证的过程 （3）运用仪器分析手段对对乙酰氨基酚进行含量测定 二、实验原理 （1）对乙酰氨基酚（2 98 NO H C ）为白色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。在热水或乙醇中易溶，在丙酮中溶解，在水中微溶。熔点 168-172℃。对乙酰氨基酚是临床常用的解热镇痛药物，且毒副作用小，较适合儿科患者使用。已成为全世界应用最广泛的的药物之一，是国际医药市场上头号解热镇痛药。 （2）以一定浓度的对乙酰氨基酚溶液充分水解全部生成对氨基酚溶液，对氨基酚溶液在碱性条件下与亚硝基铁氢化钠试剂作用，生成蓝色配位化合物。利用721 － 分光光度计测定其波长确定最大吸收，并通过分光光度计进行条件优化，依据比尔定律绘制标准曲线。通过标准曲线法求得对乙酰氨基酚的浓度，从而求得对乙酰氨基酚的含量。 （3)取对乙酰氨基酚溶解于流动相后于200 ~ 400波长范围扫描, 结果在250的波长处有最大吸收, 故选择此波长作为测定波长。对乙酰氨基酚易溶于热水中, 用温水浴溶解15分钟以上时对乙酰氨基酚已全部溶解。以甲醇- 水- 磷酸( 22 - 78- 0. 1) 为流动相, 能使对乙酰氨基酚得到很好的分离。采用外标法，用对乙酰氨基酚标准溶液作为对照品，求得样品对乙酰氨基酚的浓度，从而求得对乙酰氨基酚的含量。 三、实验过程 （1）鉴定 ①本品的水溶液加三氯化铁试液，即显蓝紫色。 ②取本品约0.1g ，加稀盐酸5ml ，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5ml ，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml 稀释后，加碱性β-萘酚试液2ml ，振摇，即显红色。 ③本品的红外吸收图谱应于对照的光谱一致。 （2）结构确证 ①红外光谱图 ②核磁共振氢谱
对乙酰氨基酚实训报告 本次实训目的：了解对乙酰氨基酚（APAP）的化学性质、药理学作用、药代动力学过 程等并能正确使用相关实验仪器，从而掌握对乙酰氨基酚的常见分析方法，并运用所学知 识进行定量分析，提高实验操作和数据分析的能力。 一、实验介绍 对乙酰氨基酚，又称扑热息痛，是一种常用的解热镇痛药。其化学名称为N-乙酰基 -para-氨基酚，分子量为151.16g/mol，结构式如下： 本次实验是通过比色法测定对乙酰氨基酚的含量。通过将样品溶解于酸性环境中，将 其还原成对应的酚酞钠，然后在弱碱性条件下，反应生成强吸收峰，利用分光光度计进行 测定，得到样品中对乙酰氨基酚的浓度。 二、实验步骤 1.制备工作液 将1.0g酚酞钠粉末加入到100mL的0.1mol/L盐酸中，加热至溶解，冷却至室温，稀 释到100mL。 2.标准溶液的制备 将10mg的对乙酰氨基酚粉末称入10mL量筒中，加入2mL氢氧化钠，用水稀释成10mL，摇匀后得到质量浓度为1mg/mL的对乙酰氨基酚标准溶液。 3.分析样品的制备 4.测定样品的吸光度 取标准溶液和待测样品，均衡到室温后，分别使用溶剂和0.1mol/L盐酸对测量液进行校正，并进行空白对照后，使用分光光度计测量吸光度值，得到样品的吸光度数据。 5.计算结果 根据吸光度值和标准曲线计算出待测样品中对乙酰氨基酚的含量。 三、实验结果 根据实验步骤2制备出质量浓度为1mg/mL的对乙酰氨基酚标准溶液，使用分光光度计在吸光度为280nm处测定了不同浓度的标准溶液的吸光度，利用 Excel 绘制标准曲线，如下所示：
标准曲线的斜率为1.0156，截距为0.0193，相关系数为0.9998。 2.实验数据 实验数据如下表所示： | 样品 | 浓度(mg/mL) | 吸光度值 | | -------- | ----------- | -------- | | 1号待测 | 1.001 | 0.267 | | 2号待测 | 0.497 | 0.128 | | 3号待测 | 0.275 | 0.069 | | 纯水 | -- | 0.003 | | 校正液 | -- | 0.020 | | 标准药液 | 0.5 | 0.130 | | 标准药液 | 1.0 | 0.262 | | 标准药液 | 1.5 | 0.395 | | 标准药液 | 2.0 | 0.525 | 3.计算扑热息痛样品的含量 将待测样品的吸光度值代入标准曲线中计算出质量浓度，再乘以样品体积，得到待测 样品中对乙酰氨基酚的质量。计算结果如下所示： 四、结果分析 本实验采用分光光度计比色法分析待测样品中对乙酰氨基酚的含量。实验结果表明， 待测样品中对乙酰氨基酚的质量分别为1.004mg、0.250mg、0.076mg，样品含量测定准确 度较高。同时，实验数据符合 Beer-Lambert 定律，标准曲线斜率与截距的计算结果也证 明了此次实验的可行性和准确性。 五、实验心得 通过实际操作，我对对乙酰氨基酚的化学性质、药理学作用、药代动力学过程等方面 有了更深入的了解，并学习并掌握了如何使用分光光度计实现药物含量的定量分析。同时，也加强了实验操作技能和数据分析能力。本次实验让我充分认识到了科学实验的细致和严谨，将有助于我提高实验技能和科研素养。
高效液相色谱法测定复方对乙酰氨基酚片的含量 复方对乙酰氨基酚的概述：复方对乙酰氨基酚是对乙酰氨基酚、异丙基安替比林和咖啡因的 复方制剂，主要用于治疗头痛、牙痛、月经痛、神经痛、风湿痛及感冒引起的发热等。异丙 基安替比林的极性弱，与对乙酰氨基酚和咖啡因的极性相差很大，且这3组分的紫外吸收特 征及溶解度也有较大差异, 因此建立同时测定这3 组分血药浓度的色谱方法存在较大困难，目前尚未见相关报道。 二、实验部分 1.仪器与试剂 (1)仪器。日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，配UV检测器，N-2000双通道色谱工作站，BS 224 S型电子天平。 （2)试剂。对乙酰氨基酚标准品，咖啡因对照品，异丙安替比林标准品；复方对乙酰氨基酚 片II；甲醇。 2.溶液的配制 (1)标准储备液的配制。分别精密量取对乙酰氨基酚标准品（约25mg）、咖啡因标准品（约 10mg）、异丙安替比林标准品（约15mg）置于50ml容量瓶中，加混合溶剂甲醇-水 （70∶30）溶解并稀释到刻度。其中对乙酰氨基酚的浓度约为0.5mg/ml，咖啡因的浓度约为0.2mg/ml，异丙安替比林的浓度约为0.3mg/ml。 (2)对照液的制备。精密量取对乙酰氨基酚储备液10ml，咖啡因储备液5ml、异丙安替比林储备液10ml，并分别置于50ml容量瓶中，加混合溶剂甲醇-水（70∶30）稀释至刻度，使其浓 度分别约为0.1mg/ml、0.02mg/ml、0.06mg/ml，作为对照液。 (3)标准溶液的配制。分别精密移取三组分的储备液，置于25ml容量瓶中，加混合溶剂稀释 至刻度，配成五种不同浓度的标准溶液。 (4)供试品溶液的制备。取20片复方对乙酰氨基酚片，精密称定（平均片重0.6539g），充分研细，精密量取适量（约相当于对乙酰氨基酚250mg）置50ml容量瓶中，加混合溶剂甲醇- 水（70∶30）30ml，超声提取15min，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤 液2ml，置50ml容量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，作为供试液。 结果表明：对乙酰氨基酚、咖啡因、异丙安替比林的出峰时间分别为2.765min、3.290min、12.990min；对乙酰氨基酚、咖啡因、异丙安替比林的分离度分别为1.92、1.92、7.28。 4.线性关系试验 精密移取各标准液依次经0.45微孔滤膜过滤，各进样20ul，以浓度对峰面积作线性回归。 结果表明：对乙酰氨基酚在浓度为0.02008-0.1004mg/ml范围内线性良好，回归方程为 Y=98.681x+0.0145，r=0.9990。异丙安替比林在浓度为0.013-0.066mg/ml范围内线性良好，回 归方程为Y=241.29x+0.1578，r=0.9996。咖啡因在浓度为0.004-0.021mg/mi范围内线性良好，回归方程为Y=332.14x+0.2912，r=0.9995. 5.稳定性试验 将供试品溶液分别放置0h、1h、2h、4h、6h、8h和24h，进样20μl，测定三组分峰面积。 结果表明，峰面积的RSD为0.23%，对乙酰氨基酚在24小时内稳定。峰面积的RSD为0.56%，异丙安替比林在24小时内稳定。峰面积的RSD为0.25%，咖啡因在24小时内稳定。
苏州医药科技学校苏州市医药化工技工学校 教案（首页） 教师姓名戎筱卿科目药物分析技术授课形式讲授、实训授课日期班级教学时数8 授课章节项目八对乙酰氨基酚的检验 使用教具（教学资源）仪器、试剂资源：酸度计、紫外-可见分光光度计、分析天平（感量为0.1mg）、容量瓶（250ml、100ml）、移液管（5ml）；对乙酰氨基酚、三氯化铁试液、稀盐酸、水浴锅、亚硝酸钠试液、碱性β-萘酚试液和氢氧化钠。 信息资源：电子阅览室或图书馆 环境资源：天平室、仪器室、药物分析检验实验室应在环境布置上将相关检验规程上墙。 教学目标 知识目标 了解对乙酰氨基酚的结构和性质。 掌握对乙酰氨基酚的鉴别、检查和含量测定方法。 能力目标 能正确使用分析天平进行称量操作； 会使用酸度计测定PH值； 会正确使用紫外-分光光度计； 能准确进行对乙酰氨基酚含量的测定。 德育目标 情感目标 （素质目标） 锻炼自我学习、熟练的操作技能 培养团队协作、精益求精、严谨求实的良好工作作风。教学重点 对乙酰氨基酚含量的测定。 会数据处理、评价结果及记录方法。
教学难点紫外分光光度法测定含量的基本原理；对乙酰氨基酚含量测定计算方法。 课改设计背景分析 本教学项目是药物分析技术中的第八个学习项目，是学生进一步掌握药物化学检验基本技能的项目。学生在已经学习了分析化学、药物化学等专业基础课程，初步掌握了药物的一般鉴别方法、一般检查方法以及紫外分光度法等化学检验技术的前提下，进一步将所学技能运用于具体药物的分析。 本教学项目需配备多媒体教室，天平室，仪器室、药物分析实验室。 教学情境 学生作为某企业QC化验员根据药典的质量标准对对乙酰氨基酚原料药进行分析，教师作为质检科长负责审核检验结果。 课外作业课后及补充题
药物分析 实验讲义 （制药09、药剂09级使用） 2011.11
实验一葡萄糖中一般杂质检查 一、目的要求 1.了解药物中一般杂质检查的目的和意义 2.掌握葡萄糖中一般杂质检查的项目和限量计算方法。 3.掌握葡萄糖中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属限量检查的基本原理和方法。 二、一般杂质检查的基本原理 1.氯化物检查法 氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银作用，生成氯化银微粒而显白色浑浊，再与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下用同法处理生成的氯化银浑浊程度相比较，测定供试品中氯化物的限量。 Cl-+AgNO3 →AgCl↓ 2.硫酸盐检查法 药物中微量硫酸盐与氯化钡在酸性溶液中作用，生成硫酸钡微粒而显白色浑浊液，同一定量标准硫酸钾溶液与氯化钡在同样条件下，用同法处理生成的浑浊比较，判断药物中含硫酸盐的限量。 SO42-十BaCl2 → BaSO4↓ 3.铁盐检查法 三价铁盐在硝酸酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色可溶性的硫氰酸铁配位离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。 Fe3+ + 6SCN—→[Fe(SCN)6]3- 红色 加硝酸3滴，煮沸5分钟，可使Fe2+氧化为Fe3+。 4.重金属检查法 重金属是指在弱酸性 (pH3～3.5)溶液中，能与硫代乙酰胺或硫化钠作用生成硫化物的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、铋、砷、锑、锡、锌、钴、镍等。在药品生产过程中遇到铅的机会较多，铅又易积蓄中毒，故检查时以铅为代表。 由于硫代乙酰胺在弱酸性(pH约3.5)溶液中水解，产生硫化氢，可与重金
属离子作用，呈有色硫化物的均匀沉淀，可与对照标准液按同法处理比较。 CH3CSNH2+H2O→CH3CONH2+H2S Pb2+十H2S→PbS↓ 三、实验方法 1.氯化物 取本品若干克（取用量按所提供的药品中杂质的限量计算，g），加水溶解使成25ml(溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性)，再加稀硝酸10ml;溶液如不澄清，应滤过;置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。另取标准氯化钠溶液(10μg Cl/m1)6.0ml，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成约40ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较，供试溶液不得比对照溶液更浓。 2.硫酸盐 取本品若干克（取用量按所提供的药品中杂质的限量计算，g），加水溶解使成约40ml(溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性);溶液如不澄清，应滤过;置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2 ml，摇匀，即得供试溶液、另取标准硫酸钾溶液(100μg SO4/ml)2.0 ml，置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2m1，摇匀，即得对照溶液，于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5m1，用水稀释使成50ml，充分摇匀，放置10分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较，供试溶液不得比对照溶液更浓。 3.铁盐 取本品若干克（取用量按所提供的药品中杂质的限量计算，g），加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使成45m1，加硫氰酸铵溶液(30→100) 3m1，摇匀，如显色、与标准铁溶液（10μg Fe/ml）2.0 ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深。 4.重金属 取50纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液 (l0μg Pb/ml)2 m1与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2 m1后，加水稀释成25 m1。