2.2 动物细胞工程 2.2.1动物细胞培养和核移植技术（第二课时） 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 教学目标： 知识目标：简述通过体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用 能力目标：运用动物细胞的基础知识，分析核移植技术的理论基础，搜集有关动物细胞核移植研究进展和应用方面的资料，进行整理、分析和交流情感目标：讨论动物细胞核移植的社会意义，关注动物细胞核移植的发展和应用前景。 旧课复习： 我们已经学习了植物的组织培养，植物体细胞杂交，知道植物细胞可以培养成一棵植株，这说明植物细胞具有全能性，而动物的体细胞离开了母体，却不能培养成一只动物个体难道是动物细胞没有全能性吗？不是。而是动物细胞高度分化，全能性比较低。 导入新课： 假如生活中我们碰到这样的问题,比如：（展示幻灯片，问题的提出） 1997年,美国威斯康星洲的一个奶牛场有一头高产奶牛叫“卢新达”,年产奶量为30.8吨,而我国奶牛年平均产奶量仅为3~4吨.用什么方法能得到更多的“卢新达”呢?学生回答克隆，其实克隆的研究从1938年就开始了。（幻灯片——克隆的历史，多利之后还有许多的动物被克隆，今天，我们要先从多利讲起） 听说过克隆羊多利吧，可以请一位同学来说说来多利的诞生过程。(学生上台讲述多利的培育过程)我们一起来看看多利的培育过程，请问多利像谁呢？母羊A，因为多利的核基因全部来自母羊A。100%象吗？，不，因为还有来自母羊B的细胞质基因。这里哪个细胞是供体细胞呢，乳腺细胞，它是高度分化的体细胞。
来看课本中对克隆的定义：请大家阅读，并划线。 教师板书：1、概念 克隆的定义：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体. 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物. 分类:体细胞核移植和胚胎细胞核移植（根据提供细胞核的供体不同而区分）多利羊之所以轰动全世界，并非因为它是首只克隆动物，你知道为什么它能一夜成名呢？请一位同学回答：（首先，它选用的细胞是高度分化的体细胞，其次，它是哺乳动物，意味着人可以进行体细胞核移植。所以它的诞生标志着体细胞核移植成功。胚胎时期的细胞进行细胞核移植比体细胞核移植更容易成功，这是为什么呢？原来胚胎细胞分化程度低，所以全能性较高，而体细胞分化程度高,所以全能性也就比较低了。其实我国早在20世纪70年代，就在童第周教授的带领下，克隆出了鱼，但是，多利一夜成名，中国的克隆鱼却默默无闻20年，这是为什么呢？（因为我们的闭塞，导致中国科学的进展不为世界所知。所以要与世界进行交流，同享科技进步成果）。 那么刚才那只卢新达奶牛能用胚胎细胞克隆吗？（请一位同学回答）。不行，本身自己已经过了胚胎期，如果用它的下一代的胚胎细胞，那么已经加入了另一只公牛的基因。所以用体细胞核移植技术。因此，说体细胞核移植技术比较常用于优秀动物个体的克隆。 下面我们通过我国成功克隆高产奶牛的过程来学习动物体细胞核移植的过程。请大家结合课本，看以下的幻灯片
动物细胞培养和核移植技术 备课日期2014年 3 月 4 日课型新授课 教学目标 知识与技能 1\简述动物细胞养的含义。 2\说出动物细胞养的所需条件。 3\简述动物细胞培养的基本程序。 4\简述动物细胞核移植的概念。 过程与方法 情感态度 与价值观 1\通过学习基因工程的概念，使学生认识到科学研究需要的严谨，激 发为祖国而奋斗的精神。 2\通过学习基因操作的工具，使学生树立结构与功能相统一的辩证唯 物主义观念。 教学重点 1\动物细胞培养的过程及条件； 2\用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景 教学难点用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 教学方法以探究法、谈话法、材料教学法相结合。 教学用具多媒体课件 课时安排1课时 教学内容设计与反思 板书设计:
教学内容设计与反思一、复习导入: 教师活动：投影幻灯片，引导学生思考、分析讨论。 （1）植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养 植物体细胞杂交 （2）植物体细胞杂交的结果是产生了？ （3）植物体细胞杂交过程中涉及的原理是？ 二、讲授新课: （一）动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术手段 动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体、动物细胞培养 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 （二）动物细胞培养 1.发展历史: 单20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形 成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问 题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的 脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神 经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验 不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后， 在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物 细胞培养。 2、动物细胞培养的应用和概念： 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关 的组织,将它分散成个细胞,然后,放在适宜的 培养基中,让这些细胞生长和增殖. 3、动物细胞培养过程： 引导学生阅读课文44--46面相关内容。
综述 体细胞核移植的研究进展 核移植供体细胞与 受体细胞的选择 乔岩岩,史小林* (首都医科大学生殖医学研究中心,北京 100054) 摘要 根据近年来国外的研究进展,对核移植研究中的有关内容,如供体核的获得、受体卵母细胞与去核、核卵重组进行了综述,望能对核移植研究有所帮助。 关键词 核移植; 供体细胞; 受体细胞 中图分类号 Q243 文献标识码 A 文章编号 1004 3845(2005)02 0113 04 Advances in somatic cell nuclear transfer:the selection of donor cell and recipient cell QI A O Yan y an,S H I X iao lin* Rep roductive M edical Center,Cap ital Univ er sity of M edical Science,Beij ing100054 Abstract This article is to review the latest developm ent of nuclear tr ansfer,m ainly focusing on the selectio n of do no r cell and recipient cell and the reco mbinatio n of nucleus and o ocy te.We ho pe that it w ill be helpful to the pr ofessional researchers in this field. Key words Nuclear tr ansfer; Donor cell; Recipient cell (J R epr od M ed2005,14(2):113 116) 细胞核移植是通过显微操作和细胞融合技术,将单细胞核供体(卵裂球或体细胞的核)移入去核的受体(卵母细胞或受精卵)胞质的工程,细胞核移植结果是构成重组胚,通过对重组胚的激活、培养和移植,最后达到扩繁同基因型哺乳动物胚胎及其种群的目的。现将当今核移植供体细胞,受体细胞的研究进展综述如下。 一、核移植供体细胞 (一)供体细胞类型:核移植所用细胞包括动物干细胞、胎儿体细胞和成年体细胞等,供核细胞的类型可直接影响核移植的成功率。目前,核移植研究多用后两种细胞,成功的核供体细胞有乳腺细胞、肌细胞、性腺细胞和肝细胞等,特别是卵丘细胞与胎儿成纤维细胞,成功地用作多种动物核供体。 1 乳腺上皮细胞:1997年英国首次报道,采用血清饥饿法即先将成年母羊乳腺上皮细胞在含10%的胎牛血清(FCS)的培养基中培养,然后转入FCS含量仅为0.5%的培养基中连续培养5d,将其作为核供体克隆绵羊 多莉 成功,指出了高度分化的乳腺上皮细胞在导入受体卵母细胞后,可以去分化,恢复全能性。 2 卵丘细胞:1998年美国以小鼠卵丘细胞为核供体,采用吸移管注入,利用机械和化学激活方式进行细胞融合,成功培育出三代克隆小鼠。小鼠、牛体细胞移植的相关研究发现休眠(G0)的卵巢颗粒细胞核与去核M II期卵母细胞构成的体细胞重构胚,其发育率及克隆后代的能力远高于其他类型的休眠体细胞,这可能颗粒细胞存在着与卵母细胞紧密联系的胞质微绒毛桥有助于供体核同受体核胞质因子的交换。还有研究表明,以卵丘细胞组成的重构胚有较高的卵裂率和囊胚发育率[1]。卵丘细胞适宜于核移植的可能原因:(1)卵丘细胞是自然静止在G0/ G1期的细胞;(2)卵丘细胞是包围在卵母细胞周围的细胞,核移植后两者胞质更易互融;(3)卵丘细胞内端粒酶活性较高,不会因染色体端粒变短而老化。 3 颗粒细胞:用牛成熟卵周围的卵丘细胞核移 收稿日期 2004 09 06; 修回日期 2004 10 18 作者简介 乔岩岩(1974~),女,山东济宁人,硕士生,讲师,生殖医学专业(*:通讯作者)
2. 2. 动物细胞工程 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 课标要求 1、能力要求 了解动物细胞培养的过程 比较动物细胞培养与植物组织培养区别 掌握动物体细胞核移植技术的过程和意义 2、内容要求 了解动物细胞培养的过程。 重难热点归纳 1 2、动物细胞培养与植物组织培养的区别。 动物细胞培养与植物组织培养有许多相似之处，也有许多不同点。一是它们用的培养基 不同，植物组织培养用的一般是固体培养基，而动物细胞培养用的一般是液体培养基。第二 是它们的培养基的成分不同。动物细胞培养的培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐和 维生素，另外还有动物血清。植物组织培养所需要的培养基包含植物生长和发育的全部营养 成分，如矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素和有机添加物，没有动物血清。第三是植物组 织培养最后一般得到新的植物个体，而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能 性，因此得到的是同一种的细胞。 3、把握动物体细胞移植的特点 动物体细胞移植依据的原理还是细胞的全能性，与植物组织培养一样属于无性生殖。虽 然细胞核内具有发展成为一个完整个体所需的全套基因，但动物体细胞分化程度较高，因 此很难表达全能性。卵细胞体积大，易于操作，含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条 件。将体细胞核移植入去核卵细胞内，既保证了重组细胞的完整性，又能刺激体细胞核表达 其全能性，发展成为一个新的个体。动物体细胞移植产生的新个体的亲本有三个：体细胞核 供体、卵细胞细胞质供体、代孕母体。新个体细胞核基因型与体细胞核供体完全一样，因此 新个体性状与体细胞核供体基本相同。卵细胞细胞质中也有少量的DNA ，新个体性状与卵 动物胚胎或幼物器官、组织 50代细胞 …… 细胞株 细胞系 传代培养
动物体细胞核移植技术和克隆动物 许昌实验中学万沛沛 一、教学目标： 1．简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 2．培养理解分析、信息获取、归纳总结和交流合作能力。 3．体验科学发现、技术发明和社会发展之间的关系。 二、教学重点和难点： 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 三、教学方法： 讲解讲述、阅读指导、讨论引导、归纳总结等。 四、课时安排：1课时 五、教学过程： Ⅰ、课前准备： 1、搜集相关电子图片（西游记的孙悟空）和克隆动物的图片，并制作成教学课件。 2．制定学生课前预习的学案，并及时检查，了解学生情况，制定上课计划。 Ⅱ、新课讲授： （屏幕展示课前寄语）上课前先送给同学们5个词：博学，审问，明辨，慎思，笃行，希望同学们在学习过程中能广览知识，对问题多思，多问多辩，并切实力行，用我们的努力开启“成功基因”的表达。 好，言归正传，今天我们共同探究的课题是关于克隆动物的培育过程。【导入】 投影幻灯片1——西游记插图 我们每个同学几乎都看过《西游记》，其实唐僧师徒西天取经途中，最大的一个科学发现就是——无性繁殖。他们发现女儿国的女人生孩子不需要与男人结婚，只要喝一口子母河的水，就可以如愿以偿。同时也开了男人也可以怀孕生子的科学先河。 在西游记中，人们最崇拜的一位偶像，怕是要数孙悟空了。孙悟空不但有神出鬼没的七十二变，更神奇的是：他只要从自己身上拔出一根毫毛，放在嘴边一吹，就可以变出无数个跟自己一模一样的小猴子。复制自身，这不就是克隆技术吗？所以说孙悟空是当之无愧的克隆技术的鼻祖。 这个克隆猴的古代神话如今正逐渐变成现实：2000年，科学家第一次成
拓展视野《核移植技术发展简史》教学设计 一.教学目标 1.了解核移植技术发展过程 2. 简述核移植技术发展过程中的里程碑事件及意义 3.举例说出几种克隆生物 二.教学重点难点 1.重点：移植技术发展过程中的里程碑事件及意义 2.难点：移植技术发展过程中的里程碑事件及意义 三.教学过程 上课！同学们好！（老师好！）请坐！ 上课前老师先介绍两位新星（图片：中中和华华） 问：有没有同学认识这两位明星？ 答：中中和华华是2017年底我国科学家克隆出来的两只小猴子 问：什么是克隆动物？ 答：用核移植的方法得到的动物 非常好，掌声送给这位同学更应该送给克隆出“中中”和“华华”的我国的科学家们，这是我们中国人的骄傲。 关于核移植大家并不陌生，上节课我们刚刚讲过，那接下来我们就来一起回顾一下上节课的内容，以抽签的形式找人回答下列问题： 1．什么是动物核移植？ 答:动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。 2．哺乳动物核移植的分类？ 答：胚胎细胞核移植和体细胞核移植 3．核移植过程中为什么选择减二中期的卵母细胞？ 答：体积大，易操作；细胞质内营养物质丰富，含有促进细胞核全能性表达的物质 4．核移植过程中普遍使用的去核方法是什么？ 答：显微操作去核法 非常好，体细胞核移植技术在畜牧业，医药卫生等领域都有广泛的应用前景，那么，如此尖端而又重要的生物技术经历了怎样的发展历程呢？我们一起来学习本节的拓展视野《核移植技术发展简史》 阅读教材51页，小组讨论后派一名代表告诉大家相应时间发生的事件。 第一组1952年 第二组20世纪70年代 第三组1981年 第四组1997年 早在1938年就有人提出核移植技术，将它作为研究细胞分化的一种方法。到了1952年发了什么呢？ 第一组1952年 答：美国学者布里格斯和金将豹蛙囊胚细胞的核移植到去核卵中，得到了能够发育的胚胎。 老师：研究结果表明，高度分化细胞的细胞核仍保持有全能性。 第二组20世纪70年代
动物体细胞核移植技术和克隆动物 教学目标： 1．简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 2．培养理解分析、信息获取、归纳总结和交流合作能力。 3．体验科学发现、技术发明和社会发展之间的关系。 教学重点： 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 教学难点： 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 教学方法：讲解讲述、阅读指导、讨论引导、归纳总结等。 课时安排：1课时 教学过程： 【导入】 《西游记》中,孙悟空拔出身体上的毫毛,用嘴一吹,每根毫毛都能变成一个和自己一模一样的猴子来。这个克隆猴的古代神话如今正逐渐变成现实：2000年，科学家第一次成功地用猴的胚胎细胞克隆出了猴。2007年，又成功地用一只成年猴的体细胞克隆出了猴胚胎，离发育成猴只有一步之遥。你还知道哪些克隆动物？大家知道，将离体的植物组织或细胞在适当的条件下培养，可获得完整植株，我们称之为植物组织培养。克隆动物能采用类似的方法吗？（学生阅读P47第三段后回答）由此导入课题——动物体细胞核移植技术和克隆动物（红字作为板书，下同）。 【正课】 投影幻灯片1（什么是动物核移植和克隆动物），并讲述：用于核移植的核供体细胞既可以用分化程度较低的动物胚胎细胞，也可以用高度分化的成年动物的体细胞。胚胎细胞核移植和体细胞核移植的原理、方法基本相同，只是体细胞分化程度高，恢复其全能性比胚胎细胞困难得多。如何进行体细胞核移植呢？ （一）体细胞核移植技术过程 投影幻灯片2（体细胞核移植技术过程），以克隆高产奶牛为例，边讲解大致过程，边板书如下：
去核、移核、融合 取体细胞体外培养传至10代 核质重组细胞构建重组胚胎 取卵母细胞体外培养至MⅡ期 胚胎移植（至代孕母体假孕子宫）生出克隆动物 “听完了过程介绍，你有没有什么问题要问？”如果有，从中提炼出有价值的若干问题加以讨论；如果一时没有，投影幻灯片3（讨论题），组织学生讨论： 1.为什么通过核移植的方法能够克隆出完整的动物个体？ 2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞。这是为什么？ 3.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么要对卵母细胞去核？卵母细胞起什么作用？（为什么选择卵母细胞作为核移植的受体细胞?） 4.你认为应用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 5. 和动物的自然繁殖相比，用体细胞核移植技术克隆动物有什么特点？ 过渡：如果你掌握了这套体细胞核移植技术，你想应用它来解决什么问题？ （二）体细胞核移植技术的应用前景 如果学生提出了一些应用体细胞核移植技术的合理设想，就据此进行小结，并对其在构建生物反应器和器官移植两方面的应用借助课件加以适当点拨；如果有学生提出克隆人引起课堂纷争，那就告诉他们以后会有专题涉及，本节暂不讨论；如果学生一时提不出设想，那就让他们阅读P49两段正文和P50第1段，通过下列问题进行引导，再做总结。 【问题1】在畜牧生产中，怎样保持良种家畜产奶量大、生长快、瘦肉多等优良性状？濒危动物自然繁殖率低，怎样增加这些动物的存活数量？能无限制地推广你的解决办法吗？ 【总结1】利用体细胞核移植技术克隆动物（生殖性克隆），可以—— ●促进优良畜群繁育 ●扩大濒危动物种群
课时跟踪检测(七) 动物细胞培养和核移植技术 (满分：50分时间：25分钟) 一、选择题(每小题2分，共20分) 1．在动物细胞培养过程中，使用胰蛋白酶的目的是( ) A．使动物组织分散为单个细胞 B．去掉细胞壁，使其成为原生质体 C．去掉细胞膜，暴露出原生质体便于细胞融合 D．促进蛋白质水解为多肽 2．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件( ) ①无毒的环境②无菌的环境③培养液中需加血浆④温度与动物体温相近⑤需要O2，不需要CO2⑥加CO2维持培养液的pH A．①②③④⑤⑥B．①②③④ C．①③④⑤⑥ D．①②③④⑥ 3．下列有关动物细胞培养的叙述，正确的是( ) A．动物细胞培养的目的就是获得大量的分泌蛋白 B．对动物组织块和分散的细胞进行培养，效果是基本相同的 C．细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中 D．培养高度分化的动物体细胞一般不能发育成幼体 4．动物细胞培养过程的顺序是( ) ①原代培养②传代培养③胰蛋白酶处理组织，形成单个细胞，制成细胞悬液 A．①②③ B．①③② C．②①③ D．③①② 5．一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能( ) A．有选择地繁殖某一性别的家畜 B．繁殖家畜中的优秀个体 C．用于保存物种 D．改变动物的基因型 6．右图为哺乳动物(羊)的生殖过程，下列叙述不．正确的是( ) A．个体2为克隆动物，c为高度分化的体细胞 B．个体2的遗传性状与提供c细胞的羊不完全相同 C．产生动物个体1与动物个体2的生殖方式是不同的 D．e细胞为完成减数分裂的卵细胞 7．用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是( )
专题二2.2.1动物细胞培养和核移植技术 一、教材分析 《动物细胞培养和核移植》是人教版高中生物选修三《现代生物科技专题》第2章第2节《动物细胞工程》第1节课的教学内容，主要学习叶绿体动物细胞培养这一基础技术和核移植技术的过程和应用。本节内容是本章的重点同时又是近几年的热点，，又是后面学习动物细胞融合和单克隆抗体的基础。 二、教学目标 1．知识目标： （1）．简述动物细胞培养的过程、条件及应用。 （2）．简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 2．能力目标： (1)运用细胞的基础知识，分析细胞工程的理论基础 (2)通过小组间的交流与合作，提高学生的语言表达能力及思维的严密性。 3．情感、态度和价值观目标： (1)通过对动物细胞培养和核移植的学习体会生物科学技术的发展和进步。 (2)通过联系知识与生产实践的关系，激发学生对生物学科的兴趣热爱。 三、教学重点难点 重点：（1）动物细胞培养的过程及条件。 （2）用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 难点：用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 四、学情分析 我们的学生基础较差，有些学生必修模块的知识掌握不牢固，所以本节知识的学习有一定的难度，讲解时需要详细。并且这一节的知识离现实生活较远，需仔细分析，但学生对这一块的学习兴趣很浓厚。 五、教学方法 1．讲授法：对细胞培养和核移植的过程进行疑难讲解。 2．自学法：学生先自学基本知识。 3．学案导学：见后面的学案。 4．新授课教学基本环节：预习检查、总结疑惑→情境导入、展示目标→合作探究、精讲点拨→反思总结、当堂检测→发导学案、布置预习 六、课前准备 1．学生的学习准备：预习实验“动物细胞培养和核移植”，初步把握过程和条件及应用2．教师的教学准备：多媒体课件制作，课前预习学案，课内探究学案，课后延伸拓展学案。 七、课时安排：1课时 八、教学过程 (一)预习检查、总结疑惑 检查落实了学生的预习情况并了解了学生的疑惑，使教学具有了针对性。 （二）情景导入、展示目标。 教师首先提问：利用植物细胞可以培育成植物体，那么，你利用动物细胞能不能大量繁殖动物体，以提高繁殖率呢？这节课我们来学习动物细胞工程 （三）合作探究、精讲点拨。
2.2 动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 在治疗烧伤病人时，通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对一个大面积烧伤的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源不足，而且会产生排异反应。那么，怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢? 许多动物的细胞能够分泌蛋自质，如抗体等。但是，单个细胞产生的蛋白质量是很少的，怎样才能获得大量的分泌蛋白呢? 细胞工程中的动物细胞培养技术为解决这些问题找到了出路（图2-15）。 动物细胞培养 动物细胞培养(animal cell culture)就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。那么，动物细胞培养的过程是怎样的?培养时又需要提供哪些必要的条件呢? 动物细胞培养的过程 成块的组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了细胞的生长和增殖，因此，进行细胞培养时(图2-16)，首先将组织分散成许多单个细胞。方法是从健康动物体内取出组织块，剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间，这样组织就会分散成单个细胞。然后，用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬液，再将细胞悬液放入培养瓶内，置于适宜环境中培养。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。培养贴附性细胞时，细胞要能够贴附于底物上才能生长增殖(图2-17)，这就要求培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒，易于贴附。以后，细胞进行有丝分裂，数量不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。这样的培养过程通常被称为传代培养。传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去了。一般来说，细胞在传至10~50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。当继续传代培养时，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性，这些细胞已经发生了突变，正在朝着等同于癌细胞的方向发展。目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。 △寻根问底： 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？ ？旁栏问题： 进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？
淮阳一高高效课堂自主学习型生物导学稿 高二年级班姓名编写人段芳编号 025 审核人日期20XX年3月31日课题：动物体细胞核移植课型设置【自研·互动45分钟+展示45分钟】 一、学习目标：1、理解动物体细胞核移植的概念 2、简述动物体细胞核移植的过程 二、重难点：动物体细胞核移植的过程
完成等级分 基础题： 1．一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能() A．有选择地繁殖某一性别的家畜 B．繁殖家畜中的优秀个体 C．用于保存物种 D．改变动物的基因型 2．英国科学家应用哪一种关键技术的细胞工程技术，培育出著名的克隆绵羊——多莉() A．细胞和组织培养B．细胞融合 C．动物胚胎移植D．细胞核移植 3.下列哪项不是体细胞核移植的应用： A.加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 B.保护濒危物种 C.获得组织器官异体移植的供体 D.大量产生紫杉醇 发展题： 4.世界上第一只克隆绵羊“多利”和我国第一只转基因牛“滔滔”的培育程序分别如下图所示，请据图回答： (1)请写出培育克隆绵羊中①②所指的细胞工程技术名称： ①；②。 (2)培育克隆绵羊实施细胞工程①时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是。 (3)培育转基因牛过程中的关键环节是如图的() A．①B．②C．③D．④ (4)在转基因牛的培育中，图中D与亲本A、B牛的最根本区别是___________________________________________________________。 (5)继植物组织培养之后，克隆绵羊的培育成功，证明动物细胞的细胞核也具有____________________。 (6)如果要使出生的动物整合率在理论上提高到100%，那么，应在什么时候进行鉴定？_______________________________________ 四、【培辅课】（附培辅单） 疑惑告知： 效果描述： 五、【反思课】： 今日心得： 今日不足：
36．在动物的胚胎发育过程中，早期原肠胚的细胞从一个部位移植到另一个部位，被移植的细胞能适应新的的部位并参与那里的器官形成，但如果在原肠胚的末期把未来发育为蝾螈下肢的部分移植到另一蝾螈胚胎不长下肢的部分，将发育为一条多余的腿，这说明( C ) A．原肠胚末期已经出现了组织和器官的形成 B．细胞的全能性 C．原肠胚末期出现了细胞分化 D．原肠胚末期出现了细胞癌变 37．如右图所示某哺乳动物生殖过程示意图。若图中动物个体②是克隆动物，则②的遗传性状主要由图中哪种细胞所决定?（C） A．a B．b C．c D．d 38．在目前现有技术条仟下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而是必须将体细胞的细胞孩移植到去核的卵细胞中才能发育成新个体，你认为原因最可能是（C） A．卵细胞大，便于操作 B．卵细胞含有的营养物质多 C．卵细胞的细胞质可使体细胞核全能性得到表达 D．重组细胞才具有全能性 29．植物细胞培养和动物细胞培养所用的培养基成分中特有的物质分别是（D） A．植物激素，无机盐B．氮，水 C．氨基酸和琼脂D．植物激素，氨基酸 30．中科院动物研究所成员通过将大熊猫体细胞核移植到去核后的兔子卵细胞中，成功地培育出大熊猫的早期胚胎……这项研究成果属于（B） A．杂交育种B．细胞工程C．基因工程D．染色体工程 34．下列哪种细胞的全能性最容易表达出来（B） A．青蛙的上皮细胞B．胡萝卜的韧皮部细胞 C．大白鼠的肝脏细胞D．人皮肤生发层细胞 35．克隆羊“多莉”的培育成功证明了（D） A．动物细胞的再生能力B．原癌基因百激活 C．动物细胞的全能性D．动物细胞核的全能性 41．在动物细胞培养中，不会发生的是（D ） A．酶促反应B．细胞生长C．细胞增殖D．细胞融合 5.下列关于动物细胞培养的有关叙述中正确的是( ) A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中 B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等 C.动物细胞培养的目的主要是获得大量的细胞分泌蛋白 D.动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理培养过程中不需要用胰蛋白酶处理7. 最近，科学家利用猪的动脉血管以及能够模拟胚胎环境的新型生物反应器，成功的在实验室内培育出新的动脉血管。这种培养新血管的技术除哪项外是可能需要( ) A．“克隆”技术B．去核卵细胞 C．激发血管细胞的“全能性” D．激发血管细胞发育成血管的潜能11. ①试管婴儿；②试管苗；③克隆羊，这三者可以说是现代生物工程技术的杰出成就，它们的诞生所依据的生物学原理最接近的是( ) A.①② B.①③ C.②③ D.①②③10利用下列细胞工程技术培养出的新个体中，只具有一个亲本遗传性状的是( ) ①细胞和组织培养②细胞融合③动物胚胎移植④克隆羊技术（多利） A．①②B．②③C．①D．①④ 12.用于动物细胞培养的组织细胞大都取自动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，除哪项外不是选取这样的组织细胞的主要原因是( ) A．容易产生各种变异 B．具有易分化能力 C．取材十分方便容易D．分化程度低分裂能力强= 17. 下图是某克隆羊的培育过程模式图，则与获得该克隆羊接近的生殖方式和其发育成熟时所分泌的主要性激素依次是（） A. 无性生殖、雌性激素 B. 无性生殖，雄性激素 C. 有性生殖、雄性激素 D. 有性生殖、雌性激素 14.一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件( ) ①无毒的环境②无菌的环境③CO2能调节培养液的pH ④合成培养基需加血浆⑤温度与动物体温相近⑥需要O2，不需要CO2 A．①②③④⑤ B．①②③④⑥ C．①③④⑤⑥ D．①②③④⑥ 20．下图为某哺乳动物生殖过程示意图（b为卵细胞,C为体细胞），下列叙述不正确的是( ) A.动物个体①②的产生分别属于有性生殖和无性生殖 B.动物个体②的产生表明，高度分化的动物细胞核也具有发育成完整个体的潜在能力 C.按照动物个体②的产生方式，后代的性别比例为1∶1 D.产生图中a、b、c三种细胞的方式，仅c为有丝分裂 23．动物细胞培养和植物组织培养的主要区别是（） A．动物细胞培养是培养单个细胞，植物组织培养是培养组织 B．动物细胞培养可以传代培养，而植物组织培养不能传代培养 C．动物细胞培养过程中可发生遗传物质的改变，而植物组织培养不能 D．动物细胞培养所用的培养基的成分与植物的不同 25．将甲绵羊体细胞的细胞核移入乙绵羊的去核卵细胞中，再将此卵细胞植入丙绵羊的子宫内发育，出生的小绵羊即“克隆绵羊”，此“克隆绵羊”( ) A．基因型与甲相同，性别一定与甲不同 B．基因型与乙相同，性别一定与乙相同
核移植与体细胞克隆 教学目标 1．知识目标： （1）．简述克隆动物的概念含义和基本原理 （2）．简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 2．能力目标： 通过小组间的交流与合作，提高学生的语言表达能力及思维的严密性。 3．情感、态度和价值观目标： (1)通过对动物细胞核移植的学习体会生物科学技术的发展和进步。 (2)通过联系知识与生产实践的关系，激发学生对生物学科的兴趣热爱。 教学重点与难点 重点：（1）用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 难点：用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 教材分析 《核移植与体细胞克隆》是苏教版高中生物选修三《现代生物科技专题》第二章第3节《动物细胞工程》第2节课的教学内容，主要学习核移植技术的过程和应用。 教学设计建议 有了第二节的基础，学生对本节内容易于理解。因此，本节教学采用讲授、自学、讨论等相结合的教学方法。具体建议如下。 在动物体细胞核移植技术及克隆动物的教学中，可首先让学生列举所知道的克隆动物，调动学生已有的知识。随后可向学生提问：克隆动物的方法与植物组织培养一样吗？然后向学生说明目前动物体细胞克隆是通过核移植技术来实现的，以引入本节课的主题。关于核移植技术发展简史，可让学生在课堂上阅读，本节课的重点和难点是在动物体细胞核移植技术过程，教材中选用了一个非常好的素材──以诞生在我国的高产克隆奶牛为例，来说明体细胞核移植的过程。教师应充分利用和挖掘教材内容，带领学生一步步弄清动物体细胞核移植技术的过程。对于体细胞核移植技术的应用前景和存在的问题这部分内容，可结合本节教材“思考与探究”中的有关问题，以及“拓展视野”中的有关克隆羊多利的早衰问题等，让学生讨论。 教学过程设计 (一)预习检查、总结疑惑 检查落实了学生的预习情况并了解了学生的疑惑，使教学具有了针对性。 （二）情景导入、展示目标。 教师首先提问：利用植物细胞可以培育成植物体，那么，你利用动物细胞能不能大量繁殖动物体，以提高繁殖率呢？这节课我们来学习动物细胞工程
2.2.1动物体细胞核移植技术和克隆动物 【学习目标】简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 【学习重点】用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 【学习难点】用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 【学习过程】 A 、 了解感知 1.通过动物细胞培养能产生一个个体吗?为什么？ 2.勾画动物体细胞核移植的概念。分类是什么？ 3.动物细胞核移植的原理是什么？ 4.体细胞核移植的过程 5、体细胞核移植技术的应用前景 ①在畜牧业中，加速优良种畜改良进程； ②保护濒危物种； ③作为生物反应器生产医用蛋白； ④转基因克隆动物作为异种移植供体； ⑤人核移植胚胎干细胞诱导分化后提供组织、器官用于移植； ⑥研究胚胎发育及衰老过程； ⑦做疾病模型。 6、体细胞核移植技术存在的问题 ①成功率非常低； ②绝大多数克隆动物存在健康缺陷等。 B 、深入学习 供体细胞（供核） 细胞培养 体细胞 卵巢卵母细胞（M Ⅱ中期：供质） 去核 无核卵母细胞注入 重组 细胞 构建重组胚胎 胚胎移植 代孕母牛 生出与供体奶牛遗传物质基本相同的个体
①为什么必须先去掉受体卵母细胞的细胞核？ ②受体细胞为___________时期的细胞，此时期的细胞为次级卵母细胞，与第一极体同时存在，去核要同时去除第一极体。注入受体细胞的是_________________。 ③动物体细胞核移植过程用到的具体技术有_________________、动物细胞融合、早期胚胎培养、胚胎移植。该过程有细胞融合体现了：生物膜的__________________特点。 ④动物体细胞核移植技术形成重组细胞发育成一个新个体，体现的是___________的全能性而非动物细胞的全能性。 C、迁移运用 1.一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能（） A、有选择地繁殖某一性别的家畜 B、繁殖家畜中的优秀个体 C、用于保存物种 D、改变物种的基因型 2.从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状（） A、难以预测 B、像甲 C、像乙 D、像丙 3.世界上第一只克隆绵羊“多利”的培育程序如图所示， 请据图回答： （1）写出图中a、b所指的细胞工程名称：a ； b （2）实施细胞工程a时，所需的受体细胞大多采用动物卵母细 胞的原因是 （3）“多利”面部的毛色是。请根据遗传学原理说明 判断依据： （4）继植物组织培养之后，克隆绵羊的培育成功，证明动物 细胞核也具有。 （5）请试举一例，说明克隆绵羊培育成功的实际意义。
2.2 动物细胞工程 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 【目标导航】 1.结合图2－16及相关内容，归纳动物细胞培养的过程、条件及应用。 2.结合图2－21，归纳通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程及应用前景。 一、动物细胞工程(阅读P 44) 基础 技术手段 应用 动物细胞培养技 术 动物细胞培养、体细胞核移植、细胞融合 ①深入探索并改造生物的遗 传特性 ②大量培养细胞 ③单克隆抗体的制备等 44－461．概念 从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2．过程 动物组织块或器官――――――――――――→剪碎胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理 单个细胞――→加培养液细胞悬液――→初次培养原代培养―→传代培养 3．相关概念 (1)细胞贴壁：悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上。 (2)接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞停止分裂增殖的现象。 (3)原代培养：指动物组织消化后的初次培养。 (4)传代培养：贴满瓶壁的细胞，出现接触抑制后，需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖的培养过程。 4．培养条件 (1)无菌、无毒的环境：培养液中添加一定量的抗生素，并定期更换培养液，以清除代谢产物，防止对细胞自身造成危害。 (2)营养????? 无机物：无机盐、微量元素等有机物：糖、氨基酸、促生长因子、和天然成分：血清、血浆等
(3)温度和pH ? ???? 温度：哺乳动物多以36.5±0.5 ℃为宜pH ：多数细胞适宜pH 为7.2～7.4 (4)气体环境????? O 2：细胞代谢所必需CO 2：维持培养液的pH 5．应用 (1)生产生物制品：如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 (2)应用于基因工程：动物细胞是基因工程技术中常用的受体细胞。 (3)应用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。 (4)用于生理、病理、药理等方面的研究，如筛选抗癌药物等。 三、动物体细胞核移植技术和克隆动物(阅读P 47－50) 1．概念 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，最终发育为动物个体。 2．分类 包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植，其中胚胎细胞核移植较易成功。 3．过程 4．应用前景 (1)加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育。 (2)保护濒危物种。 (3)转基因克隆动物可作为生物反应器，生产许多医用蛋白。 (4)转基因克隆动物细胞、组织和器官可作为异种移植的供体。 (5)人的核移植胚胎干细胞经过诱导分化，形成相应的组织、器官后，可以用于组织器官的移植。 (6)研究胚胎发育及衰老过程，追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病。 5．存在问题 (1)成功率非常低(低/高)。 (2)绝大多数克隆动物还存在健康问题。 (3)克隆动物食品的安全性存在争议。 判断正误：
动物体细胞核移植技术 高二、十一李婧琦 1997年,美国威斯康星洲的一个奶牛场有一头高产奶牛叫“卢新达”,年产奶量为30.8吨,而我国奶牛年平均产奶量仅为3—4吨.用什么方法能得到更多的“卢新达”呢?克隆是最好的方法 一、核移植 虽高度分化的植物组织仍保持着全能性，但动物细胞与植物细胞不同，动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能逐渐变弱。用动物体细胞克隆的动物，实际是通过核移植来实现的。 动物体细胞核移植将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。 二、核移植过程 1.细胞核的采集和卵母细胞的准备 从供体身体的某一部位上取体细胞，并通过体细胞培养技术对该体细胞进行增殖。 采集卵母细胞，体外培养到减数第二次分裂中期，通过显微操作去除卵母细胞中的核，由于减二中期细胞核的位置靠近第一极体，用微型吸管可以一并吸出细胞核和第一极体。
2.细胞促融 将供体细胞注入去核卵母细胞通过电刺激使两细胞融合，供体细胞进入受体卵母细胞内构建重组胚胎，通过物理或化学方法（如电脉冲、钙离子载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等）激活受体细胞，使其完成细胞分裂和发育进程。 3.植入代孕母体 体外完成早期胚胎培养后，将胚胎移植入代孕母体内，使其继续发育为新个体。 三、核移植注意事项 1、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞，因此必须先去掉受体卵母细胞的核。 2、因10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，未发生突变，所以用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞。 3、克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞，体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物并不是100%的复制。 四、体细胞核移植技术的应用前景 体细胞核移植技术可应用于：畜牧业、医药卫生方面，还可以保护濒危物种。 1．转基因克隆动物（转基因后的动物进行克隆，如转基因羊进行
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30270490),重庆市科技计划项目(7452) 作者单位:400037 重庆,第三军医大学新桥医院神经内科[周竹娟 郑 健(通讯作者)] 体细胞核移植技术进展 周竹娟(综述) 郑 健(审校) 中图分类号 Q 23 文献标识码 A 文章编号 1007-0478(2008)04-0251-03 转基因动物的研究和生产是动物胚胎工程中最诱人和 最有发展前景的课题之一。早期用受精卵原核内注射外源基因和利用精子作为载体将外源基因导入受精卵的方法,其缺点是整合效率低,而且很难实现定点整合,出生的转基因动物外源性基因的表达也不稳定[1]。著名的多丽羊的诞生使体细胞核移植技术成为一种新的生产转基因动物的方法。核移植(nuclear transfer,N T )通常是指将外源性细胞核作为供体转入到去核卵母细胞中,细胞核发生基因程序重编获得多能性,开始新的胚胎发育。细胞核移植能更为有效地对动物基因进行修改,是唯一可以用来生产大量相同基因型动物的方法[2,3]。1997年前核移植的供体核主要来源于胚胎细胞,多丽羊的诞生表明成年体细胞核也可以作为核移植的供体核。近年的研究将基因修饰与核移植技术相结合,通过质粒转染的方法将某基因整合到细胞核中,再将此类细胞筛选出来,把这些细胞核转入到去核卵母细胞中,建立重组胚,产生的胚胎中所有的细胞均携带这种基因,使其生物技术应用价值得到进一步提高[4]。应用核移植技术比原核内注射更能有效转入和结合更大的(>100kb)DN A 片断,也有利于强化有利的等位基因和/或去除不利的等位基因[4]。 1 细胞去核的方法 在核移植技术中细胞去核的方法有三种。一是用机械方法去核。常见机械去核方法有用显微操作仪将核吸出[5~7]或是用梯度离心的方法将细胞核和胞质体分开[8]。近年又发展了改良的微操作法去核,且对去除透明带的卵母细胞进行微操作法去核较不去除透明带的传统微操作法去核成功率更高[7];二是用X 线照射的方法去核[9]。有研究比较用显微操作仪去核的机械方法和用X 线照射的方法去核,重组胚发育到两细胞阶段、八细胞阶段、胚泡阶段的比例没有明显差异,但X 线照射可能产生其它意想不到的副作用,如减少了重组胚的发育潜能,可能与X 线去核引起D NA 诱变有关。因此,尚需大规模实验来证实X 线去核法的安全性[9];三是应用秋水仙胺的化学方法去核。有研究显示化学方法去核作用的起始时间和持续时间长短对去核率有很大影响,去核效率从3.4%~91.7%不等,用这种方法产生的 去核卵母细胞可成功用于核移植[10~12]。现也有研究将化学方法和机械方法去核相结合,用秋水仙胺处理卵母细胞,再去除卵丘细胞、消化部分透明带,用显微刀片对形成单极体的卵母细胞进行定向切开,从而获得胞质体;其去核效率较单用显微刀片机械去核效率高[13]。2 核移植的方法 目前用于细胞转核的方法有以下几种:(1)电融合法;(2)PEG 介导法;(3)微注射法。 2.1 电融合法 电诱导细胞融合是20世纪80年代发展起来的一项细胞工程技术。它是使细胞在电场中极化成偶极子,并沿电力线排列成串,然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。该方法具有融合过程容易控制、融合效率高、无毒性、可重复性强、作用机制相对比较清楚等 优点[14] 。进行电融合时融合槽中细胞悬液的细胞密度通常为105/ml,电介质电泳的交流电场振幅为10~30V /mm,频率为1~3M H z,在80%以上细胞形成串珠时加用10~50 s 的100~1000V/mm 的直流高压使细胞发生融合[15]。 电融合的参数如电融合的时间、脉冲强度、融合介质的平衡,都与胞质体和核来源细胞的物种有很大的相关性[4]。核供体细胞来源相同时,电融合参数相近。细胞融合效率随物种和细胞类型不同而不同[16,17]。N agashima 等采用10 s 的200V/mm 的高压直流脉冲使猪胚胎成纤维细胞核与猪成熟去核卵母细胞胞质体中发生融合[2]。Shin 等采用15 s 的175~185V/mm 的高压直流脉冲作为将成年牛耳成纤维细胞细胞核转入牛去核卵母细胞胞质体中的电融合条件[6]。Das 等的研究显示将山羊胚胎成纤维细胞细胞核转入山羊去核卵母细胞胞质体中,给予20 s 的250V /mm 、300V/mm 和350V /mm 的直流脉冲可分别有7.7%、18.8%和33.3%的重组胚胎形成单侧切迹,10.2%、18.8%和16.7%的重组胚胎形成双侧切迹;给予5 s 的250V/mm 、300V/mm 和350V /mm 的直流脉冲可分别有12.5%、17.1%和8.3%的重组胚胎形成单侧切迹,25%、20%和16.7%的重组胚胎形成双侧切迹;给予10 s 的250V /mm 的直流脉冲有4.8%的重组胚发育到两细胞阶段;给予5 s 的300V/mm 的直流脉冲有8.3%的重组胚发育到两细胞阶段;给予10 s 的300V /mm 的直流脉冲有6.3%的重组胚胎发育到两细胞阶段。从山羊胚胎成纤维细胞核与山羊去核卵母细胞胞质 体融合后重组胚的形成和发育情况来看,用300V /mm 的直流脉冲进行融合较为理想[5]。 融合后需对重组胚进行激活,成功的激活能促进胚泡的发育,胚泡发育至一定阶段后才能植入合适的受体动物体 251 卒中与神经疾病2008年8月第15卷第4期