课时跟踪检测(七) 动物细胞培养和核移植技术
(满分：50分时间：25分钟)
一、选择题(每小题2分，共20分)
1．在动物细胞培养过程中，使用胰蛋白酶的目的是( )
A．使动物组织分散为单个细胞
B．去掉细胞壁，使其成为原生质体
C．去掉细胞膜，暴露出原生质体便于细胞融合
D．促进蛋白质水解为多肽
2．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件( )
①无毒的环境②无菌的环境③培养液中需加血浆④温度与动物体温相近⑤需要O2，不需要CO2⑥加CO2维持培养液的pH
A．①②③④⑤⑥B．①②③④
C．①③④⑤⑥ D．①②③④⑥
3．下列有关动物细胞培养的叙述，正确的是( )
A．动物细胞培养的目的就是获得大量的分泌蛋白
B．对动物组织块和分散的细胞进行培养，效果是基本相同的
C．细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中
D．培养高度分化的动物体细胞一般不能发育成幼体
4．动物细胞培养过程的顺序是( )
①原代培养②传代培养③胰蛋白酶处理组织，形成单个细胞，制成细胞悬液
A．①②③ B．①③②
C．②①③ D．③①②
5．一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能( ) A．有选择地繁殖某一性别的家畜
B．繁殖家畜中的优秀个体
C．用于保存物种
D．改变动物的基因型
6．右图为哺乳动物(羊)的生殖过程，下列叙述不．正确的是( )
A．个体2为克隆动物，c为高度分化的体细胞
B．个体2的遗传性状与提供c细胞的羊不完全相同
C．产生动物个体1与动物个体2的生殖方式是不同的
D．e细胞为完成减数分裂的卵细胞
7．用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是( )
A．都需用CO2培养箱
B．都需用液体培养基
C．都要在无菌条件下进行
D．都可体现细胞的全能性
8．某研究小组对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行培养，下列叙述正确的是( )
A．制备肝细胞悬浮液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶处理
B．肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO2刺激细胞呼吸
C．为了防止培养过程中杂菌的污染，可向培养液中加入适量的干扰素
D．用血球计数板计数的方法，可推断乙细胞比甲细胞增殖周期长
9．下列关于细胞培养的叙述，正确的是( )
A．植物细胞能进行光合作用，因此培养基中不需要添加有机营养物
B．培养植物细胞时，必须先用纤维素酶和果胶酶对其处理以去除细胞壁
C．动物细胞培养只是为了获得有特殊基因突变的细胞
D．培养动物细胞时，要用胰蛋白酶处理动物组织以获得单个细胞
10．生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下提供的“复生”野驴个体的方法中能够成功的是( ) A．将野驴的体细胞取出，利用细胞培养技术，可培育成新个体
B．将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体
C．取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体
D．将野驴的一个基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体
二、非选择题(共30分)
11．(9分)科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛，如果要加速转基因奶牛的繁育，可以对此转基因奶牛进行克隆(如下图所示)。请结合图示回答下列问题：
(1)在进行细胞培养时，要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分离，形成单个细胞，这个过程中需要利用________酶处理。
(2)用于核移植的供体细胞，一般都选用传代10代以内的细胞，原因是___________
________________________________________________________________________。
(3)在进行原代培养时，细胞增殖的方式是________，此外，细胞增殖还表现出________和接触抑制等特点。
(4)将进行培养的供体细胞注入去核的卵细胞中，去除卵母细胞细胞核的目的是
______________________________________。
(5)将重组细胞在培养液中培养成的重组胚胎移入受体母牛后，该母牛就会生出与供体奶牛遗传物质相同的牛犊，但也不是100%地复制，原因最可能是_________________ ________________________________________________________________________。
(6)上述动物细胞工程中涉及的技术有_________________________________
______________________。转基因奶牛的克隆成功，说明了动物____________具有全能性。
12．(11分)根据以下资料回答问题。
资料：美国科学家已经在实验室中成功培育出膀胱，并顺利移植到7名患者体内。该培育过程是：从患者的膀胱上取下普通邮票一半大小的活细胞样本，膀胱从外到内由三层构成，即肌肉、胶原质和膀胱上皮。将活细胞样本中胶原质剥下，将肌肉细胞和膀胱上皮细胞分别置于不同的培养皿中培养，约一周后将这些细胞放在一些海绵形状的可生物降解的由胶原质制成的“支架”上继续培养，再过7周左右，原先的数万个细胞已经繁殖到15亿个左右，布满“支架”，膀胱上皮在内，肌肉在外。医生将“新膀胱”移植到患者膀胱的上面。这样新器官会继续生长并与老器官“重组”取代老器官中丧失功能的部分。培育过程如下图所示：
(1)a过程属于细胞工程中的______________，其培养基与植物组织培养的培养基含有的营养成分的主要不同点是前者含有________。
(2)b过程由数万个细胞繁殖到15亿个细胞是________的结果，上述过程中不但需要无菌、无毒的环境，适宜的营养，还需要适宜的________________、________环境。
(3)新器官与老器官的“重组”________(填“是”或“不是”)基因重组，因为新器官与老器官的________相同。
(4)“新膀胱”移植后，________(填“会”或“不会”)成为抗原，因为新老器官具有________蛋白质等物质。
(5)除上述方法外，还可将患者的体细胞核移入去核的________中，这是利用体细胞________技术，形成相应组织、器官。
13．(10分)现有甲、乙两种可能有一定致畸、致癌作用的化学物质，利用动物细胞培养的方法能够鉴定它们是否有毒性，并比较二者毒性的强弱，请完成下列实验报告。
Ⅰ.实验材料：小白鼠胚胎。
Ⅱ.药品用具：胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、细胞培养箱、载玻片、盖玻片、光学显微镜、小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片。
Ⅲ.实验原理：______________________________________________，
根据这些变异细胞占全部培养细胞的百分数(以下称Q值)，可判断该化学物质的毒性。
Ⅳ.实验步骤：
(1)制备细胞悬液：把小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎，转入锥形瓶中，加入胰蛋白酶液处理，使胚胎组织离散成单个细胞，再加入动物细胞培养液，制成细胞悬液。
(2)进行细胞培养：
①取A、B、C三个洁净的培养瓶，_______________________________________。
②_______________________________________________________________。
③__________________________________________________________________。
(3)制作临时装片：
①当细胞繁殖到大约第8代左右时，同时从细胞培养箱中取出三个培养瓶，用胰蛋白酶液处理，使培养的细胞从瓶壁上脱落，再加入动物细胞固定液迅速固定细胞，将细胞固定在不同的分裂时期。
②静置一段时间后，分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬液，滴在与培养瓶有相同编号的载玻片中央，加1～2滴一定浓度的__________染色，3～5 min后，盖上盖玻片，制成临时装片。
(4)镜检和统计：把临时装片放在显微镜下，寻找处于_______期的细胞，并与________________________________________________________________________ 对比以确认发生上述变异的细胞，同时统计该期变异的细胞占细胞总数的百分数(Q 值)。
Ⅴ.实验结果：
培养瓶 A B C
Q值 1.3% 12.5% 0.1%
Ⅵ.实验结论：__________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案
1．选A 在进行动物细胞培养前，先用胰蛋白酶使组织块中的细胞相互分散开，以增加与培养液的接触面积，便于培养。
2．选D 动物细胞体外培养要求环境无菌、无毒，在细胞培养液中要添加血清、血浆等一些天然成分，培养温度一般与动物体温相近。动物细胞培养还需要O2和CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2可维持培养液的pH。
3．选D 获得大量的分泌蛋白仅仅是动物细胞培养应用的一个方面。分散的动物细胞比组织块更容易培养。细胞遗传物质的改变发生在传代培养中。
4．选D 动物细胞培养是用动物胚胎或幼龄动物器官通过胰蛋白酶处理制成细胞悬液，再通过原代培养和传代培养得到细胞株。
5．选D 该题考查动物体细胞核移植的用途。由于核基因来自体细胞，所以不会改变动物的基因型。
6．选D 在核移植过程中，去核卵细胞一般选用处于减数第二次分裂中期的细胞，而不是完成减数分裂的卵细胞。
7．选C 动、植物成体的体细胞进行离体培养都要在无菌条件下进行。动物成体的体细胞离体培养用液体培养基，不能体现细胞的全能性；植物成体的体细胞离体培养不一定用液体培养基，能体现细胞的全能性。
8．选D 制备肝细胞悬浮液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO2维持培养液pH。为了防止培养过程中杂菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素。
9．选D 植物细胞培养中用到的培养基要含有丰富的有机营养物；培养植物细胞时，不需要用纤维素酶和果胶酶对其处理，在植物体细胞杂交的过程中才需要去除植物细胞的细胞壁；动物细胞培养的目的是获得细胞或细胞代谢产物；培养动物细胞时要用胰蛋白酶处理动物组织以获得单个细胞。
10．选C 野驴的体细胞的全能性已经受到限制，不能经过培养形成新个体；将野驴的一个基因导入家驴的受精卵中，培育成的是带有野驴基因的家驴；野驴的体细胞核中具有发育成野驴的全部基因，因此通过核移植技术，可使野驴“复生”。
11．解析：(1)实践中常用胰蛋白酶处理动物组织细胞使其分离开来。(2)传代10代以内的细胞代谢旺盛、分裂能力强，遗传物质没有发生改变，适于作为核移植的供体细胞。(3)在进行原代培养时，细胞以有丝分裂的方式进行增殖，同时表现出贴壁生长和接触抑制的现象。(4)去除卵母细胞细胞核的目的是使克隆出的动物个体的遗传物质几乎全部来自供体细胞。(5)生物的性状是细胞核基因和细胞质基因共同作用的结果，同时，生物的性状还受环境因素的影响，因此，克隆动物不可能是供体奶牛100%的复制品。(6)该克隆动物的培育过程涉及核移植、动物细胞培养和胚胎移植等技术，说明了高度分化的哺乳动物体细胞的细胞
核仍具有全能性。
答案：(1)胰蛋白(2)该种细胞代谢旺盛、分裂能力强，且遗传物质没有发生改变(3)有丝分裂贴壁生长(4)使克隆出的动物个体的遗传物质几乎全部来自供体细胞(5)①生物的性状受细胞核基因和细胞质基因共同控制；②生物的性状还受环境因素的影响(6)核移植、动物细胞培养、胚胎移植技术体细胞的细胞核
12．解析：(1)图中a过程为动物细胞培养过程，动物细胞培养基成分与植物组织培养的培养基含有的营养成分的主要不同点是前者中含动物血清。(2)动物细胞培养时，不但需要无菌、无毒的环境，适宜的营养，还需要适宜的温度、pH及气体环境。(3)由于新器官与老器官的遗传物质相同，新器官与老器官的“重组”不是基因重组。(4)因为新老器官细胞具有相同的表面抗原等物质，“新膀胱”移植后不会成为抗原。(5)利用体细胞核移植技术将患者的体细胞核移入去核的卵母细胞中，重组细胞经培养也可形成相应组织、器官。
答案：(1)动物细胞培养动物血清
(2)有丝分裂(细胞分裂) 温度和pH 气体
(3)不是遗传物质
(4)不会相同的
(5)卵母细胞核移植
13．解析：有毒物质会引起细胞变异，物质的毒性越强，引起的细胞变异数目越多，依此可判断物质的毒性。实验可通过观察细胞染色体来判断细胞是否变异。由实验结果可知，C组是对照组，A、B是实验组，在自然状态下，细胞也会发生变异，但频率较低。
答案：Ⅲ.将有毒物质加入细胞培养液后，培养的动物细胞会发生染色体数量和结构变异(答出有毒物质使细胞发生变异)
Ⅳ.(2)①分别加入等量的细胞悬液②向A、B两个培养瓶中分别加入等量的化学物质甲、乙，并将培养瓶摇匀；C瓶不作处理，作为对照③把三个培养瓶放在37 ℃(或适宜温度)的细胞培养箱中培养(3)②龙胆紫溶液(4)有丝分裂中小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片
Ⅵ.甲、乙两种化学物质均有一定毒性，且乙的毒性比甲的毒性大
动物细胞培养和核移植技术 备课日期2014年 3 月 4 日课型新授课 教学目标 知识与技能 1\简述动物细胞养的含义。 2\说出动物细胞养的所需条件。 3\简述动物细胞培养的基本程序。 4\简述动物细胞核移植的概念。 过程与方法 情感态度 与价值观 1\通过学习基因工程的概念，使学生认识到科学研究需要的严谨，激 发为祖国而奋斗的精神。 2\通过学习基因操作的工具，使学生树立结构与功能相统一的辩证唯 物主义观念。 教学重点 1\动物细胞培养的过程及条件； 2\用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景 教学难点用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 教学方法以探究法、谈话法、材料教学法相结合。 教学用具多媒体课件 课时安排1课时 教学内容设计与反思 板书设计:
教学内容设计与反思一、复习导入: 教师活动：投影幻灯片，引导学生思考、分析讨论。 （1）植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养 植物体细胞杂交 （2）植物体细胞杂交的结果是产生了？ （3）植物体细胞杂交过程中涉及的原理是？ 二、讲授新课: （一）动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术手段 动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体、动物细胞培养 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 （二）动物细胞培养 1.发展历史: 单20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形 成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问 题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的 脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神 经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验 不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后， 在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物 细胞培养。 2、动物细胞培养的应用和概念： 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关 的组织,将它分散成个细胞,然后,放在适宜的 培养基中,让这些细胞生长和增殖. 3、动物细胞培养过程： 引导学生阅读课文44--46面相关内容。
动物生物化学试题 (A) 2006.1 一、解释名词（20分，每小题4分） 1. 氧化磷酸化 2. 限制性核酸内切酶 3. Km 4. 核糖体 5. 联合脱氨基作用 二、识别符号（每小题1分，共5分） 1.SAM 2.Tyr 3.cDNA 4.PRPP 5.VLDL 三、填空题（15分） 1. 蛋白质分子的高级结构指的是（1分）， 稳定其结构的主要作用力有（2分）。 2. 原核生物的操纵子是由 (1分)基因， (1分)基因及其下游的若干个功能上相关的（1分）基因所构成。 3. NADH呼吸链的组成与排列顺序为 （3分）。 4. 酮体是脂肪酸在肝脏中产生的不完全分解产物，包括（1分），
（1分）和（1分），在肝外组织中利用。 5. 脂肪酸的氧化分解首先要（1分）转变成脂酰辅酶A，从胞浆转入线粒体需要一个名为（1分）的小分子协助；而乙酰辅 酶A须经过 （1分）途径从线粒体转入胞浆合成脂肪酸。 四、写出下列酶所催化的反应，包括所需辅因子，并指出它所在的代谢途径 （10分） 1. 氨甲酰磷酸合成酶I 2. 谷丙转氨酶 五、问答题（50分） 1. 什么是蛋白质的变构作用（4分），请举例说明（4分）。（8分） 2. 以磺胺药物的抗菌作用为例（4分），说明酶的竞争抑制原理（4分）。（8分） 3. 一摩尔的乙酰辅酶A经过三羧酸循环完全氧化分解可以生成多少ATP？（3分）请说明理由（5分）。（8分） 4.比较在原核生物DNA复制过程中DNA聚合酶III和聚合酶I作用的异同。（8分） 5.真核基因有什么特点，简述真核生物mRNA转录后的加工方式。（8分） 6.简述由肾上腺素经PKA途径调控糖原分解代谢的级联放大机制。（10分）
2.2 动物细胞工程 2.2.1动物细胞培养和核移植技术（第二课时） 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 教学目标： 知识目标：简述通过体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用 能力目标：运用动物细胞的基础知识，分析核移植技术的理论基础，搜集有关动物细胞核移植研究进展和应用方面的资料，进行整理、分析和交流情感目标：讨论动物细胞核移植的社会意义，关注动物细胞核移植的发展和应用前景。 旧课复习： 我们已经学习了植物的组织培养，植物体细胞杂交，知道植物细胞可以培养成一棵植株，这说明植物细胞具有全能性，而动物的体细胞离开了母体，却不能培养成一只动物个体难道是动物细胞没有全能性吗？不是。而是动物细胞高度分化，全能性比较低。 导入新课： 假如生活中我们碰到这样的问题,比如：（展示幻灯片，问题的提出） 1997年,美国威斯康星洲的一个奶牛场有一头高产奶牛叫“卢新达”,年产奶量为30.8吨,而我国奶牛年平均产奶量仅为3~4吨.用什么方法能得到更多的“卢新达”呢?学生回答克隆，其实克隆的研究从1938年就开始了。（幻灯片——克隆的历史，多利之后还有许多的动物被克隆，今天，我们要先从多利讲起） 听说过克隆羊多利吧，可以请一位同学来说说来多利的诞生过程。(学生上台讲述多利的培育过程)我们一起来看看多利的培育过程，请问多利像谁呢？母羊A，因为多利的核基因全部来自母羊A。100%象吗？，不，因为还有来自母羊B的细胞质基因。这里哪个细胞是供体细胞呢，乳腺细胞，它是高度分化的体细胞。
来看课本中对克隆的定义：请大家阅读，并划线。 教师板书：1、概念 克隆的定义：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体. 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物. 分类:体细胞核移植和胚胎细胞核移植（根据提供细胞核的供体不同而区分）多利羊之所以轰动全世界，并非因为它是首只克隆动物，你知道为什么它能一夜成名呢？请一位同学回答：（首先，它选用的细胞是高度分化的体细胞，其次，它是哺乳动物，意味着人可以进行体细胞核移植。所以它的诞生标志着体细胞核移植成功。胚胎时期的细胞进行细胞核移植比体细胞核移植更容易成功，这是为什么呢？原来胚胎细胞分化程度低，所以全能性较高，而体细胞分化程度高,所以全能性也就比较低了。其实我国早在20世纪70年代，就在童第周教授的带领下，克隆出了鱼，但是，多利一夜成名，中国的克隆鱼却默默无闻20年，这是为什么呢？（因为我们的闭塞，导致中国科学的进展不为世界所知。所以要与世界进行交流，同享科技进步成果）。 那么刚才那只卢新达奶牛能用胚胎细胞克隆吗？（请一位同学回答）。不行，本身自己已经过了胚胎期，如果用它的下一代的胚胎细胞，那么已经加入了另一只公牛的基因。所以用体细胞核移植技术。因此，说体细胞核移植技术比较常用于优秀动物个体的克隆。 下面我们通过我国成功克隆高产奶牛的过程来学习动物体细胞核移植的过程。请大家结合课本，看以下的幻灯片
动物生物化学试题(A) 2006.1 一、解释名词（20分，每小题4分） 1. 氧化磷酸化 2.限制性核酸内切酶 3. Km 4.核糖体 5.联合脱氨基作用 二、识别符号（每小题 1 分，共 5 分） 1.SAM 2.Tyr 3.cDNA 4.PRPP 5.VLDL 三、填空题（15分） 1.蛋白质分子的高级结构指的是（ 1分）， 稳定其结构的主要作用力有（2分）。 2.原核生物的操纵子是由(1分 ) 基因，(1分 ) 基因及其下游 的若干个功能上相关的（ 1 分）基因所构成。 3.NADH呼吸链的组成与排列顺序为 （ 3 分）。 4.酮体是脂肪酸在肝脏中产生的不完全分解产物，包括（ 1分）， （ 1 分）和（ 1 分），在肝外组织中
利用。 5.脂肪酸的氧化分解首先要（ 1 分）转变成脂酰辅酶A，从胞浆转入线粒 体需要一个名为（ 1 分）的小分子协助；而乙酰辅酶 A 须经过 （ 1 分）途径从线粒体转入胞浆合成脂肪酸。
四、写出下列酶所催化的反应，包括所需辅因子，并指出它所在的代谢途径 （10分） 1. 氨甲酰磷酸合成酶I 2.谷丙转氨酶 五、问答题（50分） 1.什么是蛋白质的变构作用（4 分），请举例说明（ 4 分）。（8 分） 2. 以磺胺药物的抗菌作用为例（ 4 分），说明酶的竞争抑制原理（ 4 分）。（8 分） 3. 一摩尔的乙酰辅酶A经过三羧酸循环完全氧化分解可以生成多少ATP？（ 3 分）请说 明理由（ 5 分）。（8分） 4. 比较在原核生物DNA复制过程中DNA聚合酶III和聚合酶I 作用的异同。（8分） 5.真核基因有什么特点，简述真核生物mRNA转录后的加工方式。（8分） 6.简述由肾上腺素经PKA途径调控糖原分解代谢的级联放大机制。（10分）
动物生物化学试题（中国农业周顺伍） 一、填空题（每空１分，共３０分） １．核酸的基本组成单位是_____，它由____、____和____三部分组成。２．单纯蛋白质的基本组成单位是_______。 ３．多肽链的序列测定常采用___________法。 ４．聚糖一级结构铁测定可选择_______、___________和_____等多种仪器分析方法。 ５．蛋白聚糖是由______和_______通过共价键连接所形成的糖复合物。６．维生素ＰＰ即搞癞皮病因子，它包括_______和_______。 ７．_____是唯一含金属的，而且是相对分子质量最大，结构最复杂的维生素。８．糖原是人体内糖的贮存形式，主要存在于______和______中。 ９．食物中脂质物质主要包括______、_____、____及____，以_____最多。 １０．人体含有的不饱和脂肪酸主要有_______、______、_____、____以及_____。 １１．胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，在体内主要以_______和______两种形式存在。 １２．氨基酸分解代谢最首要的反应是____________。 １３．ＤＮＡ指导的_______________是ＲＮＡ合成中最主要的酶类。 二、列举题（每题５分，共２５分） １．列举ＤＮＡ分子的一级结构？ ２．列举蛋白质的一级结构？ ３．列举常见的酶的必需基团？ ４．列举生物氧化的特点？ ５．列举DNA分子的碱基组成？ 三、名词解释（每题５分，共２０分） １．蛋白质的氨基酸组成： ２．维生素；
３．核酸的一级结构： ４．免疫球蛋白： 四、问答题（每题５分，共２５分） １．变性蛋白质有哪些表现？ ２．温度对酶反应速度有哪些影响？ ３．柠檬酸循环的特点？ ４．胆固醇的生物合成途径可分为哪三个阶段？５．肝脏在脂类代谢中的作用有哪些？
动物体细胞核移植技术和克隆动物 许昌实验中学万沛沛 一、教学目标： 1．简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 2．培养理解分析、信息获取、归纳总结和交流合作能力。 3．体验科学发现、技术发明和社会发展之间的关系。 二、教学重点和难点： 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 三、教学方法： 讲解讲述、阅读指导、讨论引导、归纳总结等。 四、课时安排：1课时 五、教学过程： Ⅰ、课前准备： 1、搜集相关电子图片（西游记的孙悟空）和克隆动物的图片，并制作成教学课件。 2．制定学生课前预习的学案，并及时检查，了解学生情况，制定上课计划。 Ⅱ、新课讲授： （屏幕展示课前寄语）上课前先送给同学们5个词：博学，审问，明辨，慎思，笃行，希望同学们在学习过程中能广览知识，对问题多思，多问多辩，并切实力行，用我们的努力开启“成功基因”的表达。 好，言归正传，今天我们共同探究的课题是关于克隆动物的培育过程。【导入】 投影幻灯片1——西游记插图 我们每个同学几乎都看过《西游记》，其实唐僧师徒西天取经途中，最大的一个科学发现就是——无性繁殖。他们发现女儿国的女人生孩子不需要与男人结婚，只要喝一口子母河的水，就可以如愿以偿。同时也开了男人也可以怀孕生子的科学先河。 在西游记中，人们最崇拜的一位偶像，怕是要数孙悟空了。孙悟空不但有神出鬼没的七十二变，更神奇的是：他只要从自己身上拔出一根毫毛，放在嘴边一吹，就可以变出无数个跟自己一模一样的小猴子。复制自身，这不就是克隆技术吗？所以说孙悟空是当之无愧的克隆技术的鼻祖。 这个克隆猴的古代神话如今正逐渐变成现实：2000年，科学家第一次成
第二章核酸 一、比较mRNA 、tRNA、rRNA的分布，结构特点及功能 mRNA主要分布在是以游离状态的存在于细胞质中，tRNA主要分布在细胞核中，rRNA是核糖体的组成部分。 1.mRNA的结构与功能：mRNA是单链核酸，其在真核生物中的初级产物称为HnRNA。大多数真核成熟的mRNA分子具有典型的5?-端的7-甲基鸟苷三磷酸（m7G）帽子结构和3?-端的多聚腺苷酸(polyA)尾巴结构。mRNA的功能是为蛋白质的合成提供模板，分子中带有遗传密码。原核生物的mRNA一般是多顺反子。真核生物的mRNA一般是单顺反子。 2. tRNA的结构与功能：tRNA是分子最小，但含有稀有碱基最多的RNA。tRNA 的二级结构由于局部双螺旋的形成而表现为“三叶草”形，故称为“三叶草”结构，可分为：①氨基酸臂：3?-端都带有-CCA-顺序，可与氨基酸结合而携带氨基酸。 ②DHU臂/环：含有二氢尿嘧啶核苷。③反密码臂/环：其反密码环中部的三个核苷酸组成三联体，在蛋白质生物合成中，可以用来识别mRNA上相应的密码，故称为反密码（anticoden）。④TψC臂/环：含保守的TψC顺序。⑤可变环。3. rRNA的结构与功能：rRNA是细胞中含量最多的RNA，可与蛋白质一起构成核蛋白体，作为蛋白质生物合成的场所。原核生物中的rRNA有三种：5S，16S，23S。真核生物中的rRNA有四种：5S，5.8S，18S，28S。 二．简述DNA双螺旋结构模型要点 1两条平行的多核苷酸链，以相反的方向(即一条由5…—3?，另一条由3…—5?)围绕同一个(想像的)中心轴，以右手旋转方式构成一个双螺旋。 2疏水的嘌呤和嘧啶碱基平面层叠于螺旋的内侧，亲水的磷酸基和脱氧核糖以磷酸二酯键相连形成的骨架位于螺旋的外侧。 3内侧碱基成平面状，碱基平面与中心轴相垂直，脱氧核糖的平面与碱基平面几乎成直角。每个平面上有两个碱基(每条链各一个)形成碱基对。相邻碱基平面在螺旋轴之间的距离为0.34nm,旋转夹角为36度。每十对核苷酸绕中心旋转一圈，故螺旋的螺距为3.4nm. 4双螺旋的直径为2nm.沿螺旋的中心轴形成的大沟和小沟交替出现。DNA双螺旋之间形成的沟为大沟，两条DNA链之间的沟为小沟。 5两条链被碱基对之间形成的氢键稳定地维系在一起。双螺旋中，碱基总是腺嘌呤与胸腺嘧啶配对，鸟嘌呤与胞嘧啶配对。 第三章蛋白质
一、实验目的 1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2、学习并掌握细胞传代培养的方法。 3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。 二、实验原理 细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。 动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。 动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。 原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。 传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。 高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。 三、细胞培养相关设施及材料 1、细胞培养室 无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。 孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。 制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。 储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。 清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。 2、细胞培养常用基本设施： 荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。 细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧杯、量筒等。 3、细胞培养用品的清洗、消毒 新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗： 硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水； 冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。 所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。使用时放入超净工
宁夏大学 2017年攻读博士学位研究生入学考试初试试题卷 考试科目：高级动物生物化学 适用专业：动物遗传育种与繁殖动物生产系统与工程 （不用抄题，答案写在答题纸上，写明题号，答案写在试题卷上无效） 一、Explain the Following Biochemical Terms in Chinese or in English(20分)， （每题4分) 1．Operon 2．hyperchromic effect 3．cis-acting element 4．salting out 5．citriate shuttle 二、简述题（40分）（每题10分） 1．举例说明核酸结构（构象）多态性及其生物学意义？ 2、胞浆中的NADH如何参加氧化磷酸化过程？试述其具体机制。 3．试述DNA复制的特点。 4．氨在血液中如何转运？ 三、论述题（40分） 1．论述糖的有氧氧化代谢途径、产能及生理意义。（20分） 2．如何利用蛋白质的性质进行蛋白质的分离纯化？（20分）
宁夏大学 2018年攻读博士学位研究生入学考试初试试题卷 考试科目：高级动物生物化学 适用专业：动物遗传育种与繁殖动物生产系统与工程 （不用抄题，答案写在答题纸上，写明题号，答案写在试题卷上无效） 一、简答题（共8小题，每小题8分，共64分） 1．比较蛋白质的变性与沉淀。（8分） 2．比较酶的别构调节与共价修饰。（8分） 3．肌肉内代谢产生的乳酸在肌肉内不能异生为糖，乳酸会产生积累，机体是如何处理的？简述代谢过程。（8分） 4．氨基酸一般分解代谢有哪些途径？产物是什么？哪条途径是氨基酸分解代谢的主要途径？为什么？（8分） 5.比较脂肪酸β氧化与生物合成的异同。（8分） 6.何谓基因文库？何谓cDNA文库？两者有何不同？（8分） 7.核酸有无营养价值？如果供给动物缺乏核酸的食物，动物能否生存？为什么？（8分） 8.分析DNA复制、修复和重组之间的关系。（8分） 二、论述题（共2小题，共36分） 1．以反刍动物为例，当机体处于低血糖生理状态时，三大营养物质的代谢关系如何？阐述代谢过程。（20分） 2．如何看待RNA功能的多样性？它的核心作用是什么？（16分）
《动物细胞培养技术》复习思考题 1.动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？如果 器皿中有杂质，会对细胞培养产生什么样的影响？ 答：①离体细胞对各种毒物都很敏感，若所用器材清洗效果未达到要求，各种毒物会损坏细胞影响实验。②器皿使用高压灭菌锅，121.3℃，20~30分钟，在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿，避免造成污染。③ 2.叙述超净工作台的工作原理？ 答：超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程，在这个过程中风机起到了心脏的作用。鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。 3.正压过滤器为何会除菌？ 答：正压式过滤器没有内置灭菌灯，正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜，这层膜可以将细菌阻挡在膜上，过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程 4.各种细胞培养用液的配制需要很精确吗？如果不精确，会导致什么后果？请举例说明。 你认为精确配制各种溶液？ 答： 5.配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化？ 答：配制后的液体应呈桃红色，PH值为7.4左右。苯酚红的变色域：1.2（橙）~3.0（黄），6.5（棕色）~8.0（紫色），若为黄色，则液体呈酸性，不利于细胞的生存。 6.用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制 答：Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。 7.L-谷氨酰胺在营养液中有何作用？ 答： L－谷氨酰胺是细胞的能量来源；是一种必须氨基酸，是使物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶的重要前体，也是蛋白质合成分解的调节物；是细胞内氨的清除剂，氨对一些细胞有毒性。 8.HEPES溶液的作用机理？ 答：它是一种氢离子缓冲剂。主要作用是防止培养基pH迅速变动 9.平衡盐溶液的组成与基本作用？小牛血清在细胞培养中有哪些作用？ 答：①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。②作用：a提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物，以及某些低分子营养物质；b提供结合蛋白，识别维生素、脂类、金属离子，并与有毒金属和热源物质结合，起解毒作用；c是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源；d起酸碱度缓冲液作用； e提供蛋白酶抑制剂，细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受损伤。 10.营养液制备后为什么要小剂量分装？ 答：避免营养液被污染后，全部的营养液都被污染。 营养液一次用完过后，下一次的实验就不能用，会引起污染，影响实验，若冷冻营养液，则营养液的营养成分会有所损失，影响细胞的生长 11.10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法？ 答：用注射器吸10毫升双蒸水溶解100万单位的链霉素，弃去2ml，用剩余的8ml链霉素溶解80万单位的青霉素，配制成每毫升青霉素、链霉素各10万单位的母液。
动物细胞培养总结 一．实验准备 1.实验器械、器皿的清洗和消毒 （1）清洗和包装 离心管，2ml,15ml)若干，冻存管若干放进铝饭盒，用牛皮纸包裹，系紧棉绳，用笔在饭盒上和牛皮纸上标记盒内所装物品名称、数量、日期和所属人名称。 蓝枪头两盒，黄枪头白枪头各一盒用牛皮纸包裹，用棉绳扎紧。 取适量蒸馏水于4L玻璃瓶，瓶盖拧松半圈。 过滤器，250ml玻璃瓶，500ml玻璃瓶用自来水毛刷洗涤剂刷洗，蒸馏水润洗，烘干。 过滤器两部分分别包裹，先将瓶口部位用锡纸包裹后，再罩以牛皮纸，再用棉布密包起来，用棉绳扎紧。 玻璃瓶拧下瓶盖，瓶身浸酸。浸酸时应注意安全，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁以便浸酸结束后清洗耐酸手套，防止走动时酸液滴到地板上不好清洗。瓶口慢慢沉入液面下，注意缓慢降低瓶身，使液体慢慢浸入瓶内，以免产生气泡溅出酸液，发生危险。浸酸时器皿要充满酸液，勿留气泡，浸泡过夜。取出瓶身时，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁，取出后将瓶身放入盆内水中在转移至水池边清洗，以免酸液滴落地板不好清洗。换水洗几次，待水澄清后开始冲洗，每瓶都用自来水灌满，倒掉，重复15次，再用
蒸馏水漂洗5次，去离子水漂洗3次，烘干备用。 （2）消毒灭菌 1>全自动高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，放入物品，瓶类物体须拧松盖子后放最上面一筐，盖上灭菌锅盖，拧紧盖子至温度显示栏的左上角有一红点亮灯，按start开始升温。若灭有无菌水或玻璃瓶待降温至常温再打开，打开后立即拧紧，无菌水瓶口封上封口膜。若没灭瓶类物品，降温至80度左右即可打开灭菌锅，须戴上线手套取出。 2>手提式高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，检查设定是否为121度20分钟，放入物品，盖上灭菌锅盖，注意导气管一定插到锅底并不能堵塞，用手对称地拧紧锅盖螺栓，再用扳手继续拧紧。加温升压之前，先打开排气阀门，加温约半小时后见排气阀处开始排残留在锅内的冷空气，排气五分钟，关闭排气阀，继而开始升压。灭菌后不要立即打开气阀放气以免水汽喷出。待自然降温至常压才能打开气阀。 玻璃瓶须拧紧，饭盒，枪头灭菌后放入烘箱烘干备用。 2.无菌间消毒及设备检查 用84消毒液拖地，用原液按照1：29的比例兑水，抹布、拖把擦洗。配400ml 75%酒精于盆中，用酒精棉仔细擦拭CO2培养箱，超净台，超净台内物品，显微镜，桌面，若培养箱内未培养细胞可以再打开高温灭菌模式将培养箱灭菌一次。 用蒸馏水擦拭清洗水浴锅内壁，注意底座不要沾水。
细胞培养技术
细胞培养发展史及其应用 （一）前言 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harriso n)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。 所谓动物细胞培养(亦称组织培养)既有别于植物细胞培养，又与微生物的培养完全不同。所谓动物细胞培养是指离散的动物活细胞在体外人工条件下的生长、增殖过程，在此过程中细胞不再形成组织。 由于动物细胞培养是在人工条件下进行的，便于调控和观察，因而成为现今研究动物的物质代谢过程、染色体的形态变化、以及遗传物质的表达调控等高难领域的既便利而又有效的新方法。同时，随着现代生物化学、分子生物学、分子遗传学、以及现代医学的发展，细胞培养也在许多应用领域充分展示了其巨大的发展潜力，并已为世人所关注。尽管如此，动物细胞培养仍是一门年轻的新学科，在发展之初被混淆于动物组织培养之中。 （二）细胞培养技术及其历史 细胞培养的历史最早可追溯到19 世纪末，据可考证的资料记载W ilhelm Roux是第一个进行动物组织培养实验的人。 1885年Wilhelm Roux 将鸡胚髓板放置于温热盐水中使之维持存活了数天，是有记录的第一个体外移植成功的例子。 1887年Arnold把恺木的木髓碎片接种到蛙的身上。当白细胞侵入这些木髓碎片后，他把这些白细胞收集在盛将盐水的小碟中，接下来观察到这些白细胞在运动，并存活了一个短的时间。
动物体细胞核移植技术和克隆动物 教学目标： 1．简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 2．培养理解分析、信息获取、归纳总结和交流合作能力。 3．体验科学发现、技术发明和社会发展之间的关系。 教学重点： 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 教学难点： 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 教学方法：讲解讲述、阅读指导、讨论引导、归纳总结等。 课时安排：1课时 教学过程： 【导入】 《西游记》中,孙悟空拔出身体上的毫毛,用嘴一吹,每根毫毛都能变成一个和自己一模一样的猴子来。这个克隆猴的古代神话如今正逐渐变成现实：2000年，科学家第一次成功地用猴的胚胎细胞克隆出了猴。2007年，又成功地用一只成年猴的体细胞克隆出了猴胚胎，离发育成猴只有一步之遥。你还知道哪些克隆动物？大家知道，将离体的植物组织或细胞在适当的条件下培养，可获得完整植株，我们称之为植物组织培养。克隆动物能采用类似的方法吗？（学生阅读P47第三段后回答）由此导入课题——动物体细胞核移植技术和克隆动物（红字作为板书，下同）。 【正课】 投影幻灯片1（什么是动物核移植和克隆动物），并讲述：用于核移植的核供体细胞既可以用分化程度较低的动物胚胎细胞，也可以用高度分化的成年动物的体细胞。胚胎细胞核移植和体细胞核移植的原理、方法基本相同，只是体细胞分化程度高，恢复其全能性比胚胎细胞困难得多。如何进行体细胞核移植呢？ （一）体细胞核移植技术过程 投影幻灯片2（体细胞核移植技术过程），以克隆高产奶牛为例，边讲解大致过程，边板书如下：
去核、移核、融合 取体细胞体外培养传至10代 核质重组细胞构建重组胚胎 取卵母细胞体外培养至MⅡ期 胚胎移植（至代孕母体假孕子宫）生出克隆动物 “听完了过程介绍，你有没有什么问题要问？”如果有，从中提炼出有价值的若干问题加以讨论；如果一时没有，投影幻灯片3（讨论题），组织学生讨论： 1.为什么通过核移植的方法能够克隆出完整的动物个体？ 2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞。这是为什么？ 3.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么要对卵母细胞去核？卵母细胞起什么作用？（为什么选择卵母细胞作为核移植的受体细胞?） 4.你认为应用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 5. 和动物的自然繁殖相比，用体细胞核移植技术克隆动物有什么特点？ 过渡：如果你掌握了这套体细胞核移植技术，你想应用它来解决什么问题？ （二）体细胞核移植技术的应用前景 如果学生提出了一些应用体细胞核移植技术的合理设想，就据此进行小结，并对其在构建生物反应器和器官移植两方面的应用借助课件加以适当点拨；如果有学生提出克隆人引起课堂纷争，那就告诉他们以后会有专题涉及，本节暂不讨论；如果学生一时提不出设想，那就让他们阅读P49两段正文和P50第1段，通过下列问题进行引导，再做总结。 【问题1】在畜牧生产中，怎样保持良种家畜产奶量大、生长快、瘦肉多等优良性状？濒危动物自然繁殖率低，怎样增加这些动物的存活数量？能无限制地推广你的解决办法吗？ 【总结1】利用体细胞核移植技术克隆动物（生殖性克隆），可以—— ●促进优良畜群繁育 ●扩大濒危动物种群
动物生物化学习题库 班级 姓名 教师 汇编人:李雪莲 新疆农业职业技术学院动物科技分院 2016、2 教学单元一核酸与蛋白质化学 核酸化学 一、单选题 1、维持DNA分子中双螺旋结构得主要作用力就是: A.范德华力 B.磷酸二酯键 C.疏水键 D.氢键 D 2、DNA得戊糖在哪个位置脱氧: A、l B、2 C、3 D、4 C 3、连接核苷与磷酸之间得键为: A、磷酸二酯键 B、糖苷键 C、氢键 D、磷酸酯键 D 4、核苷酸去掉磷酸后称为: A、单核苷酸 B、核苷
C、戊糖 D、碱基 B 5、核酸得基本组成成分就是: A、组蛋白、磷酸 B、核糖、磷酸 C、果糖、磷酸 D、碱基、戊糖、磷酸 D 6、RNA分子中得碱基就是: A、TCGU B、TAGU C、AGCU D、ATGC C 7、不参与DNA组成得就是: A、dUMP B、dAMP C、dTMP D、dGMP A 8、稀有碱基主要存在于: A、mRNA B、tRNA C、rRNA D、DNA B 9、在DNA与RNA中都含有得就是: A、腺苷二磷酸 B、环磷酸腺苷 C、磷酸
D、脱氧核糖 C 10、RNA代表: A、脱氧核糖核酸 B、核糖核酸 C、单核苷酸 D、核苷 B 11、属于戊糖得就是: A、蔗糖 B、乳糖 C、核糖 D、葡萄糖 B 12、核酸中不存在得碱基就是: A、腺嘌呤 B、黄嘌呤 C、胞嘧啶 D、尿嘧啶 B 13、核酸一级结构得主要连接键就是: A、肽键 B、氢键 C、磷酸二酯键 D、盐键 C 14、在DNA中,A与T间存在有: A、3个氢键 B、2个肽键 C、2个氢键 D、l个磷酸二酯键
?一、半连续式培养 1.半连续式培养又称为重复分批式培养或换液培养。采用机械搅拌式生物反应器系 统，悬浮培养形式。在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，从中取出部分培养物，再用新的培养液补足到原有体积，使反应器内的总体积不变。这种类型的操作是将细胞接种一定体积的培养基，让其生长至一定的密度，在细胞生长至最大密度之前，用新鲜的培养基稀释培养物，每次稀释反应器培养体积的1/2~3/4，以维持细胞的指数生长状态，随着稀释率的增加培养体积逐步增加。或者在细胞增长和产物形成过程中，每隔一定时间，定期取出部分培养物，或是条件培养基，或是连同细胞、载体一起取出，然后补加细胞或载体，或是新鲜的培养基继续进行培养的一种操作模式。剩余的培养物可作为种子，继续培养，从而可维持反复培养，而无需反应器的清洗、消毒等一系列复杂的操作。在半连续式操作中由于细胞适应了生物反应器的培养环境和相当高的接种量，经过几次的稀释、换液培养过程，细胞密度常常会提高。 2.半连续式特点： ·培养物的体积逐步增加； ·可进行多次收获； ·细胞可持续指数生长，并可保持产物和细胞在一较高的浓度水平，培养过程可延续到很长时间。该操作方式的优点是操作简便，生产效率高，可长时期进行生产，反复收获产品，可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。在动物细胞培养和药品生产中被广泛应用。 二、连续式培养 1.连续式培养是一种常见的悬浮培养模式，采用机械搅拌式生物反应器系统。该模 式是将细胞接种与一定体积的培养基后，为了防止衰退期的出现，在细胞达最大密度之前，以一定速度向生物反应器连续添加新鲜培养基；同时，含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出，以保持培养体积的恒定。理论上讲，该过程可无限延续下去。
2015年湖南农业大学硕士招生自命题科目试题 科目名称及代码：动物生物化学618 适用专业（领域）：动物遗传育种与繁殖、动物营养与饲料科学、动物生产与畜牧工程、基础兽医学、预防兽医学、临床兽医学、中兽药学 考生需带的工具： 考生注意事项：①所有答案必须做在答题纸上，做在试题纸上一律无效； ②按试题顺序答题，在答题纸上标明题目序号。 一、单项选择题（共计20分，每小题1分） 1．维持蛋白质二级结构—α-螺旋的化学键主要是： A.疏水键 B.配位键 C.氢键 D.二硫键 2．tRNA3′端的共有序列为： A.-ACC B.-CAC C.-ACA D.-CCA 3．某一符合米曼氏方程的酶，当[S]=2Km时，其反应速度V等于：A．Vmax B．2/3Vmax C．3/2Vmax D．1/2Vmax 4．下列构成一碳基团转移酶系辅酶的维生素是： A．维生素B1B．维生素B6C．维生素B7D．维生素B9 5．嘌呤核苷酸的合成中，第4位及5位的碳原子和第7位氮原子来源于：A.天冬氨酸 B.谷氨酸 C.谷氨酰胺 D.甘氨酸 6．呼吸链中不具备质子泵功能的复合体是： A.复合体Ⅰ B.复合体Ⅱ C.复合体Ⅲ D.复合体Ⅳ 7．线粒体基质中脂酰CoA脱氢酶的辅酶是： A．FAD B．NADP+C．NAD+D．FMN 8．在原核生物复制子中除去RNA引物并加入脱氧核糖核苷酸的酶是：A．DNA聚合酶ⅠB．DNA聚合酶Ⅱ C．DNA聚合酶ⅢD．DNA连接酶
9．一个线性双链DNA分子经过连续2代复制后，原始DNA占总DNA的比例是： A. 2.5% B.25%1 C.7.25% D.3.125% 10．氨酰tRNA结合的部位是： A．核糖体的小亚基B．核糖体的P位点 C．核糖体的A位点D．转肽酶所在的部位 11．能够识别UAA、UAG和UGA的因子是： A．ρ因子B．延长因子C．起始因子D．释放因子12．DNA编码链为5′-ACTGTCAG-3′，转录后RNA产物中相应的碱基序列是： A．5′-CUGACAGU-3′B．5′-UGACAGUC-3′ C．5′-ACUGUCAG-3′D．5′-GACUGUCA-3′ 13．哺乳动物嘌呤分解代谢的终产物是： A．尿酸B．尿素C．尿囊素D．尿囊酸 14．真核生物RNA聚合酶II催化转录的产物是： A.45S-rRNA B.hnRNA C.5S-rRNA D.tRNA 15．密码的简并性是指： A．一种氨基酸只有一种密码子B．一种以上密码子为同一种氨基酸编码 C．一种密码子不为任何氨基酸编码D．一种密码子具有兼职性 16．为蛋白质生物合成中肽链延伸提供能量的是： A．ATP B．CTP C．GTP D．UTP 17．构成α-酮酸脱羧酶的辅酶是： A．CoA B．FAD C．FH4D．TPP 18．肌糖原不能直接补充血糖，是因为肌肉中缺乏： A.葡萄糖-6-磷酸酶 B.磷酸化酶 C.果糖激酶 D.已糖激酶19．含有稀有碱基比例较多的核酸是： A．DNA B．rRNA C．tRNA D．mRNA
一.细胞增殖周期（cell proliferatinal cycle）概念 细胞周期是描述细胞增殖和分化交替发生变化的概念。而细胞增殖周期主要是从细胞增殖角度赋予细胞活动的概念，两者不应混为一谈。细胞增殖周期是指细胞从一次分裂结束开始生长，到下一次分裂结束所经历的过程。根据细胞增殖周期不同时期的生化特点，划分为四个连续的时期，即G1期（DNA合成前期），S期（DNA合成期），G2期（DNA合成后期），M期（有丝分裂期）。如以G1期为起点，那么细胞增殖周期的各时期应循着G1-S-G2-M的顺序进行，G1、S、G2三期合称为细胞间期，此期完成细胞生长过程。M期完成遗传物质的分配。 因此，细胞增殖周期=间期（G1期+S期+G2期）+分裂期（M期）。 二.培养细胞生命期（life span of culture cells） 很多细胞特别是正常细胞，在体外的生存不是无限的，而是具有一个生命期。索维培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。培养细胞的生命期与细胞的种类、性状和原供体的年龄、健康等情况有关。人胚二倍体成纤维细胞，在不冻存和反复传代条件下，科传30~50代，相当于150~300个细胞
增殖周期，能维持1年左右的生存时间，最后衰老凋亡。如供体为成体或衰老个体，则生存时间较短；其他细胞如肝细胞或肾细胞，生存时间更短，仅能传几代或十几代。只有当细胞发生遗传性改变，如获永生性或恶性转化时，细胞的生存期才可能发生改变。正常细胞培养时，不论细胞的种类和供体的年龄如何，在细胞生命的全过程中，大致都经历以下三个阶段：原代培养期、传代期、衰退期。 三.培养细胞一代生存期 培养细胞的生存空间和营养是有限的，当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代（Passage或Subculture）。每次传代以后，细胞的生长和增殖过程都会受一定的影响。传代的频率或间隔与培养液的性质、接种细胞的数量和细胞增殖的速度等有关。接种细胞数量大，细胞基数大。相同增殖速度条件下，细胞数量增加与饱和速度相对要快（实际上细胞接种数量大时细胞增殖速度比稀少时要快）；连续细胞系和肿瘤细胞系比初代培养细胞增值快；；培养液中血清含量多时细胞增殖比少时快。以上情况都会缩短传代时间。 所谓细胞“一代”一词，仅指从细胞接种到分离培养时的一段时间，这已成
动物生物化学试题（A） 2006.1 一、解释名词（20 分，每小题4 分） 1.氧化磷酸化 2. 限制性核酸内切酶 3. Km 4. 核糖体 5. 联合脱氨基作用 二、识别符号（每小题1 分，共5 分） 1.SAM 2.Tyr 3.cDNA 4.PRPP 5.VLDL 三、填空题（15 分） 1.蛋白质分子的高级结构指的是（1 分）， 稳定其结构的主要作用力有（2分）。 2.原核生物的操纵子是由（1 分）基因，（1 分）基因及其下游 的若干个功能上相关的（1 分）基因所构成。 3.NADH呼吸链的组成与排列顺序为 （3 分）。 4.酮体是脂肪酸在肝脏中产生的不完全分解产物，包括（1分），（1 分）和（1 分），在肝外组织中 利用。 5.脂肪酸的氧化分解首先要（1 分）转变成脂酰辅酶A，从胞浆转入线粒 体需要一个名为（1 分）的小分子协助；而乙酰辅酶A 须经过 （1 分）途径从线粒体转入胞浆合成脂肪酸。
四、写出下列酶所催化的反应，包括所需辅因子，并指出它所在的代谢途径（10 分） 1.氨甲酰磷酸合成酶I 2.谷丙转氨酶 五、问答题（50 分） 1.什么是蛋白质的变构作用（4分），请举例说明（4分）。（8 分） 2.以磺胺药物的抗菌作用为例（4 分），说明酶的竞争抑制原理（4 分）。（8 分） 3.一摩尔的乙酰辅酶A经过三羧酸循环完全氧化分解可以生成多少ATP？（3 分）请说 明理由（5分）。（8 分） 4.比较在原核生物DNA复制过程中DNA聚合酶III 和聚合酶I 作用的异同。（8 分） 5.真核基因有什么特点，简述真核生物mRNA转录后的加工方式。（8 分） 6.简述由肾上腺素经PKA途径调控糖原分解代谢的级联放大机制。（10 分）
2007年 一．名词解释（15×2’）： 核小体α-螺旋chargraff’s规则顺反子糖酵解 二．问答题（70’）一共10道题，分值不同 1．蛋白质的结构层次分为那些？他们间的关系是什么？ 2．DNA双螺旋结构的结构特征。 3．说明16C脂肪酸完全氧化的全过程，及能量的耗费和释放。4．比较体内DNA复制与体外PCR间的异同点。 5．试述你对RNAi的认识。 6．试述谷氨酸在氨基酸的代谢中的作用。 7．叙述甘油经过异生生成糖的过程。 8．机体饥饿状态下体内营养物质代谢的变化。 2003年 一、名词解释（12分共6个每题2分） β-氧化氧化磷酸化鸟氨酸循环糖有氧氧化半保留复制核糖体 二、填空（共32分1空1分） 三、问答题（共56分7道题每题8分） 1．苯丙氨酸的代谢途径。 2．三大营养物质的相互转化。 3．机体清除强酸的途径。 4．写出糖代谢为脂肪合成提供的所有原料。 5．试述tRNA的结构特点及其在蛋白质合成中的作用。 6．DNA聚合酶和RNA聚合酶的相同点和不同点。 2002年 a)名词解释 1．半抗原 2．中心法则 3．抗原决定族 4．脂肪酸氧化 b)填空 1．氨基酸脱氨产物——、——、——、——、—— 2．抗体的种类——及进化序列—— 3．葡萄糖代谢的关键物质——、——、—— 4．密码子序列从——到——、启始密码子——其代表——5．mRNA前体—— 6．酮体在——生成，在——利用 c)简答题 1．在饥饿状态下三大营养物质代谢 2．单克隆抗体和多克隆抗的区别
多抗和单抗特性比较： 1.均一性。一种单抗中，每个抗体的化学结构和氨基酸顺序都相同，只有一种Ig亚类。即单抗是一种纯度很高的均一抗体。而从不同动物，不同时期所得到的多抗，各有不同的化学组成。多抗是多种种类和亚类Ig的混合物。 2.稳定性。单抗的稳定较差，对PH变化敏感，对热不稳定，提纯过程中易变性，而多抗的稳定性则较好。 3.特异性。单抗是单一地针对抗原的某一决定簇，所以用它进行血清学反应时，特异性强，敏感性高，一般不发生交叉反应。而多抗能与抗原上的多种抗原决定簇结合，所以特异性较差，较易引起交叉反应。 4.重复性。单抗的重复性好，而多抗每批都不一样。 5.沉淀反应。多抗由于与抗原多价结合容易形成网络样沉淀，而单抗只与抗原结合产生二聚体，不能直接形成抗原抗体沉淀物。 3．酪氨酸的代谢 4．抗体的克隆选择学说的作用和意义 1、单克隆抗体与多克隆抗体的定义、区别，是谁提出的？内容？ 2、与谷氨酸代谢有关的所有途径 3、生糖氨基酸和生酮氨基酸生成糖的途径 1．试述血红蛋白的结构特点，血液中的氧分压，二氧化碳浓度、氢离子浓度对其与氧结合的调节作用 2．如何保证蛋白质翻译的忠实性 3．肉毒碱在脂肪代谢中的生理功能 4．名词解释 蛋白质变性、增色效应、磷酸果糖激酶、ATP/ADP 5．脂肪、糖和蛋白质代谢的关系，说明其联系的关键酶 6．羊毛缩水的机制 2000年 1、概念：K m、过瘤胃蛋白、遗传密码。 2、反刍动物蛋白质代谢。 3、为什么说复制比转录更精细？ 4、血液中氨的浓度过高，动物会中毒，为什么喂牛尿素，牛不会中毒，且能正常生长？1999年 1、1、反刍动物蛋白质代谢特点。 2、说明下列问题：（1）脂肪组织缺乏己糖激酶；（2）肝脏缺乏葡萄糖-6-磷酶酶；（3）肌 肉组织中缺乏酰基转移酶。 3、双链DNA变性后，为何紫外吸收增加。 4、生长膜为双分子层，说明Pro嵌入其中的机理。 5、乳糖操纵子为正调控，说明其机理。 6、AA分类，各举一例说明。 7、能否由多肽AA顺序推导出mRNA碱基顺序，说明其理由。 8、何谓wobble假说。 9、说明抗体多样性的分子基础。 10、说明反刍动物糖原异生的重要性。 1998年