免疫细胞的观察与小鼠脾脏淋巴细胞的提取 一、实验目的 1、明确各免疫器官分布与形态结构，能熟练找到各免疫器官，弄清中枢免疫器官与外周免疫器官的区别与联系。 2、掌握密度梯度离心法分离小鼠脾脏淋巴细胞的方法，熟悉脾脏淋巴细胞的形态与功能。 二、实验原理 脾脏是外周免疫器官之一，是人体最大的淋巴器官。它生在腹腔左上方，质地比较脆，容易外伤。一般来讲，脾脏有三大功能： 首先它是人体的“血库”，当人体休息、安静时，它贮存血液，当处于运动、失血、缺氧等应激状态时，它又将血液排送到血循环中，以增加血容量； 其次，脾脏犹如一台“过滤器”，当血液中出现病菌、抗原、异物、原虫时，脾脏中的巨噬细胞、淋巴细胞就会将其吃掉； 此外，脾脏还可以制造免疫球蛋白、补体等免疫物质，发挥免疫作用。脾是血循环中重要的滤过器，能清除血液中的异物、病菌以及衰老死亡的细胞，特别是红细胞和血小板。因此，脾功能亢进时可能会引起红细胞及血小板的减少。脾脏还有产生淋巴细胞的功能。 我们利用小鼠来观察脾脏的淋巴细胞。 小鼠淋巴细胞的比重为1.088，利用比重为1.088的淋巴细胞分离液，将脾细胞悬液置于分离液上层，通过梯度离心的方法，在分离液与脾细胞悬液交界液面处分离得到脾脏淋巴细胞。 三、实验器材 KM种小鼠，PBS缓冲液，淋巴细胞分离液，200目不锈钢网，解剖器械 四、实验步骤 1、杀死老鼠，取出小鼠的脾脏，在pbs缓冲液中冲洗干净。 2、将小鼠脾脏至于200目铜网中，铜网绑定在烧杯上面，剪碎、碾磨，边碾磨边加PBS 冲洗，制得脾细胞悬液。 3、将制得的脾细胞悬液转移到10ml的离心管中，1000r/min 5min离心洗涤，倒掉上清，加入5mlPBS再离心洗涤一次。 4、加入5mlPBS将洗涤的脾脏细胞吹散、悬浮，缓慢加入淋巴细胞分离液上层，细胞悬液与分离液体体积比为1:1。 5、2000r/min离心30min。 6、小心吸取中间层细胞，1000r/min 5min离心洗涤两次。 7、将制得的淋巴细胞滴于玻片，镜检。
趋化因子及其受体在免疫细胞中的作用研究概述 趋化因子是目前成员最多的细胞因子家族，在人和小鼠中大概有50个内源性趋化因子。这些因子大约结合20多个跨膜受体。趋化因子的主要作用是控制免疫细胞的迁移模式，对细胞运动至关重要。趋化因子系统在初始T细胞产生，决定细胞的分化（如效应细胞和记忆细胞），影响调节性T细胞的功能，调节免疫细胞迁移和定位，已达到体内平衡。趋化因子在急性炎症和淋巴系统中对免疫反应的产生和调节具有重要作用。趋化因子在炎性疾病及癌症中的作用使其成为新的药物靶点。 趋化因子可以控制骨髓、血液及外周组织中的免疫细胞运输。CXCL12由CAR细胞产生，可以使发育中的中性粒细胞、B细胞和单核细胞保留在骨髓中。DC前体、肥大细胞前体和发育中的嗜酸性粒细胞通过未知机制保留在骨髓中。在没有CXCR4信号传导或CXCR2信号传导的情况下，嗜中性粒细胞离开骨髓并进入血液。B细胞通过CB2信号进入骨髓，并通过S1P1信号传导进入血液。B细胞可以使用CCR7、CXCR4和CXCR5信号进入淋巴结构。单核细胞响应CCR2信号进入血液以及CXCR4信号传导减少。单核细胞分化为促炎症（CCR2+）和抗炎（CX3CR1+）单核细胞。抗炎单核细胞可以通过CX3CL1进入外周组织。DC前体通过未知机制进入血液，并可以通过CCL20离开外周组织。在人类中，CXCL14也可能在抗炎单核细胞和DC前体迁移到外周组织中起作用。肥大细胞前体通过未知机制离开骨髓，并在CXCR2介导的信号后迁移至肠道。CCR3信号通过CCL11和CCL24（人和小鼠）以及CCL26（人）后，嗜酸性粒细胞进入血液并离开外周组织。
小鼠脾脏单个核细胞分离及细胞计数 实验时间：____________ 实验地点：_____________ 实验人：__________________ 1实验原理 小鼠脾脏位于上腹部左后侧，体积较大，长条形，属于外周免疫器官。 外周血中淋巴细胞可经再循环驻如脾脏等外周免疫器官的特定区域，所以富含各 类免疫细胞。 免疫细胞的分离：采用红细胞裂解法，是根据细胞对渗透压变化的敏感度。 红细胞由于细胞结构较为简单，仅有细胞膜结构，对于膨胀的耐受能力较差，因此绝大部分就会涨破，受到破坏。是一种比较温和的去除红细胞最简便易行的方法。 2实验材料： 1）健康小鼠 2）手术器械（剪刀、镊子）、解剖板 3）70汇醇 4）PBS缓冲液、红细胞裂解液（ACK 5）0.2%台盼蓝 6）细胞计数板、计数器 7）离心机 8）显微镜 3实验方法： 3.1取小鼠脾脏 将小鼠颈椎脱位处死，用酒精消毒。 用剪刀剪开背部皮肤，再找到脾脏，用镊子夹出脾脏并剪除周围组织。 3.2制备单个核细胞悬液
将取出的脾脏置于盛有3mlPBS缓冲液的平皿中，然后再置于尼龙指套中，用 针芯轻轻碾压使得单个核细胞悬浮于平皿中。 吸取平皿中细胞悬液置于刻度离心管（15ml）中，以1500rpm离心10min, 弃去上清液，加入ASK至2-3ml，轻轻吹打混匀并放置2min,以破坏红细胞。然后加入PBS缓冲液至10ml，以1500rpm离心10min。 弃去上清液，用PBS缓冲液定容至2ml，吹打混匀即为小鼠脾脏单个核细胞悬液。3.3 计算细胞浓度 稀释十倍，随机选取一个大方格计数 细胞计数为324个，计算细胞浓度为324X 104X 10=3.24 X 107/ml 3.4 计算细胞活力 在总计为324个细胞中计数，死亡细胞有16 个，计算细胞活力为： 324- 16/324 X 100%=95.1% 在理论范围之内 4 实验结果 4.1 研磨脾脏得到细胞悬液 本实验中将小鼠的脾脏放入尼龙指套内，置于少量PBS液中缓慢研磨，获得细胞悬液。实验中，我们发现尼龙指套不能滤去所有结缔组织，操作中会有结为絮状团块的结缔组织。这些结缔组织在离心后会和细胞绞缠在一起，去除十分麻烦，而且会损失细胞。应该在离心之前尽早用吸管吹打后小心弃去（这样损失的细胞比较少，造成较小的误差）。 研磨脾脏时的力度、时间、温度都会影响细胞的活性。所以应置于冰上快速、轻柔地研磨，置于液体中避免干磨。我们在实验室室温下碾磨，造成细胞破碎较多，影响最终实验结果。 4.2 白细胞计数
第一节电视景别的作用及其分类 一、景别——被摄主体在画面中呈现的范围。 二、景别的分类：远景、全景、中景、近景、特写、大远景、远景、大全景、全景、中全景、中景、中近景、近景、特写、大特写。（5） 通常有两种分类方法： 一种是：以不同景别所具有的结构方式为标准，凡表现一个相对完整的事物或一个相互紧密联系的事物的整体画面为全景画面。 一种是：以成年人身体标准为尺度，以表现或截取人体部位多大范围来划分景别。 景别的作用： 1、景别的变化带来了视点的变化，它能满足观众从不同的视距不同的视角观看景物的心理要求。 2、景别的变化使画面表现被摄主体的范围发生变化，它使画面在再现或表现被摄对象时具有了更加明确的指向性。 3、景别的变化是形成影片节奏的变化因素之一。影响节目节奏的因素是多方面的，景别的变化是其中重要的一点 4、两极景别对被摄景物和物体超距离，超比例的表现具有某种移情作用。所谓两极景别——大远景和大特写 第二节远景（抒情） 一、远景——表现开阔场面空间的画面，它是景别中表现空间范围最大的一种景别。 二、远景画面的功用 1、远景画面呈现的视野开阔，包容的景物范围大，画面容量也大，可以同时提供较多的视觉信息，注重对景物和事件的宏观表现。 2、远景画面视野开阔，场面壮观，对事件和景物有一种量的冲击和震撼。量，一是事物数目的量，二是空间范围上的量。 3、以景物为主体的远景画面具有借景抒情的意味。 4、远景不仅可以写景，而且也是写人的景别。 5、片子中多用远景作为开篇或结尾画面。 三、拍摄远景画面应注意的几个问题 1、拍摄远景画面要有一定的长度。
2 、拍摄时以追求画面的总体效果为主，构图时从大处着眼，重点处理好景物在画面中所呈现的主要线条、色调和影调。注意画面的整体结构和气势。 3、远景画面的构图时要经营好地平线在画面中的位置，并注意地平线的水平。 4 、镜头运动速度一般放慢，要平稳、均匀。 5 、多选逆光、侧逆光且注意选择前景。 总结： 远景具有广阔的视野，常用来展示事件发生的时间、环境、规模和气氛。比如表现开阔的自然风景、群众场面、战争场面等 一般重在“取势”，不细琢细节。在远景画面中，不注重人物的 远景除了表现规模、气氛、气势之外，还可以表现一定的意境。远景画面，包容的景物多，时间要长些。一般不少于10秒。 第三节全景（交代） 一、全景——表现成年人的全身或场景全貌的画面 二、全景画面的功能 1、表现一个事物或场景的全貌（表现一物体的完整形象）使观众对所表现的事物和场景有一个完整的了解 2、完整地表现人物的形体动作 3、通过人物形体动作的表现，揭示人物内心的情感和心理状态。 4、表现特定环境中的特定人物 5、在一组蒙太奇镜头组接中，全景画面具有某种定位作用。 三、拍摄全景画面应注意的几个问题 1、确保主体形象的完整 2、由于全景画面集纳的造型表现元素最多，要注意各元素间的关系，防止喧宾夺主。 3、全景画面往往是该场景的拍摄总角度，全景镜头要先拍。 总结： 全景用来表现场景的全貌或人物的全身动作，用于表现人物之间、人与环境之间的关系。全景画面，主要表现人物全身，活动范围较大，体型、衣着打扮、身份交代的比较清楚，环境、道
生长素的生理作用优秀教案
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课题：生长素的生理作用 一.教学目标 （一）知识目标 1. 概述植物生长素的生理作用,通过实例理解生长素作用的两重性 2. 了解生长素及类似物在农业生产上的应用。 （二）能力目标 学会分析生物图表. （三）情感目标 建立尊重事实、严谨治学的科学观。结论，训练逻辑思维的严密性。 二．教学重点和难点 教学重点：生长素的生理作用。 教学难点：顶端优势、根的向地性、茎的背地性产生的原因的分析 三.教学方法:引导学生进行图表分析与教师讲授相结合. 四.教学过程 引言:前面一节我们一起学习了“植物生长素的发现”,知道什么是植物激素,理解了植物发生向光性的原因以及生长素的产生、运输和分布的特点。下面我们来看一道题，请分析现象及原因。 教师的组织与引导学生活动意图 1、现有两株燕麦幼苗的胚芽鞘尖端部分，给予不同的处理（见 下图），培养一段时间后，胚芽鞘的生长情况如何？为什 么？ 提出问题：那是不是任意浓度的生长素溶液都能促进植物生长呢？ 请分析“问题探讨”中的“生长素浓度与所起作用关系”曲线图。结合“问题”讨论我们从中能解读到哪些信息？ 总结:一、生长素的生理作用 1、作用特点表现两重性： 2、一般情况下，生长素在浓度较低时促进生长，在浓度过高时则会抑制生长，甚至会杀死植物。 3、不同器官对生长素反应的敏感性不同，根＞芽＞茎说出胚芽 鞘的生长 情况并分 析产生的 原因 结合“问 题”讨论此 曲线图所 隐含的信 息。 复习巩固生长 素的产生、运输 特点以及能说 出生长素具有 促进生长的作 用 培养学生学会 分析图表能力 和语言表达能 力。 黑 暗 单侧光
小鼠免疫 免疫是单抗制备过程中的重要环节之一。即用目的抗原免疫小鼠，抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B 淋巴细胞。 一、血清效价的影响因素 小鼠免疫效价的高低直接影响单抗的制备。单抗免疫程序不同，包括免疫用的动物，抗原的性质、抗原量、免疫途径、免疫间隔时间、是否应用佐剂均会影响免疫效果。 二、免疫材料 1．免疫用的动物 抗原与免疫动物种属差异越远越好，小鼠、大鼠、亚美尼亚仓鼠和兔中分离的淋巴细胞的杂交瘤技术已经很成熟。小鼠是极好的免疫接种对象，原因是：1）小鼠易操作；2）多个纯系株易得到且价格合理；3）有很多试剂可用以检测鼠源免疫球蛋白；4）小鼠对外来蛋白质能产生良好的免疫应答；5）小鼠淋巴细胞能够和多种鼠源骨髓瘤细胞系发生有效融合。 2．免疫原（抗原） 颗粒性抗原：颗粒性抗原免疫原性强，如肿瘤细胞、淋巴细胞、?细菌等可作为抗原，不加佐剂直接进行免疫，就可获得较好的免疫效果。 可溶性抗原：因其免疫原性较弱，一般要加佐剂，如系半抗原，?应先制备成人工免疫原，再加佐剂。 免疫原的形式会影响宿主体液免疫产生的抗体谱，因此选择免疫原制备抗体时应该考虑到所制备抗体的最终用途，并应该根据其用途决定何种方法筛选抗体
更合适。一般认为，影响免疫血清中lg亚类谱的因素主要包括免疫原、接种途径、佐剂和动物遗传背景等。且主要由初次基础免疫所决定，加强免疫的作用主要是提高特异性抗体的滴度。 3．佐剂 目的：1）增强抗原对机体的免疫原性；2）增强抗体的产生能力；3）为制备出高效价的免疫血清；4）增强可溶性抗原的免疫原性；5）在某种情况下，改变Ag免疫应答类型；6）延长抗原在免疫动物的时间；7）改变抗原的分布；8）增强共刺激信号和激活免疫系统而刺激淋巴细胞增殖。 种类：氢氧化铝佐剂、明矾佐剂（常用于肌肉、皮下注射）、弗氏佐剂。 弗氏佐剂是最主要的免疫佐剂，热处理杀死的分歧杆菌可以引起炎症反应，募集淋巴细胞到抗原沉积部位，但若重复刺激可导致肉芽肿的形成，故不能重复使用。 三、免疫策略 1．免疫途径 途径的选择取决于抗原的生物学特性和理化特性。有静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮内注射、脾内注射、皮下注射、淋巴结注射等。 脾内免疫会产生IgM 类抗体，分泌该类抗体的杂交瘤细胞株相对IgG 类较不稳定，且IgM 类抗体的一些性质测定会有困难，一般不建议使用。脾内免疫操作困难，实验动物极易死亡，所以也不常用此种方法。 一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1ml左右。 2．免疫方案 典型的免疫策略依赖于抗原的反复刺激，以增强特异性免疫应答并使其成熟。
景别得分类与作用 由于电影、电视表现得主要对象就是人,因此,划分景别得一般标准就是以成年人身体为标准尺度,以画面表现出人体部位多大范围来划分景别。在没有人物得画面中,仍以成年人与被摄物体得大致比例作为划分景别得依据。△例如:一辆完整得汽车被认为就是全景画面,而一只完整得手表画面则被认为就是特写镜头。 1、远景 远景一般表现广阔空间或开阔场面得画面。如果以成年人为尺度,由于人在画面中所占面积很小,基本上呈现为一个点状体。 远景视野深远、宽阔,主要表现地理环境、自然风貌与开阔得场景与场面。远景画面还可分为大远景与远景两类。大远景主要用来表现辽阔、深远得背景与渺茫宏大得自然景观,像莽莽得群山、浩瀚得海洋、无垠得草原等。 远景得画面构图一般不用前景,而注重通过深远得景物与开阔得视野将观众得视线引向远方,要注意调动多种手段来表现空间深度与立体效果。所以,远景拍摄尽量不用顺光,而选择侧光或侧逆光以形成画面层次,显示空气透视效果,并注意画面远处得景
物线条透视与影调明暗,避免画面得平板一块,单调乏味。 远景就是电视景别中视距最远、表现空间范围最大得一种景别。一般表现比较开阔得场景与场面。 作用: ①远景可以提供较多得视觉信息; ②远景呈现出极其开阔得空间与壮观得场面; ③远景以景物为主,借景抒情; ④远景也就是写人得景别; ⑤远景常用于开篇或结尾; 远景画面注重对景物与事件得宏观表现,力求在一个画面内尽可能多地提供景物与事件得空间、规模、气势、场面等方面得整体视觉信息。提供广阔得视觉空间与表现景物得宏观形象就是远景画面得重要任务,讲究“远取其势”。 在电视片中常以远景镜头作为开篇或结尾画面,或作为过渡镜头。 2、全景 全景一般表现人物全身形象或某一具体场景全貌得画面。全景画面能够完整地表现人物得形体动作,可以通过对人物形体动作得表现来反映人物内心情感与心理状态,可以通过特定环境与特定场景表现特定人物,环境对人物有说明、解释、烘托、陪衬得作用。
小鼠巨噬细胞功能的检测 伍国强 （兰州大学草业学院兰州730020） 摘要：本实验用CFA免疫小鼠后，检测小鼠腹腔巨噬细胞的数目以及用中性红检测巨噬细胞的吞噬能力。结果表明，免疫小鼠的腹腔巨噬细胞的数目和吞噬能力均有所提高。 关键词：巨噬细胞；功能；检测 1 前言 巨噬细胞是一种多功能免疫细胞,在机体的特异性和非特异性免疫反应中发挥重要功能。主要作用有：（1）吞噬杀伤作用：直接吞噬、调理吞噬作用。（2）抗原提呈作用：即外来的抗原性异物通过巨噬细胞的捕获、加工和处理后，与胞内合成的MHC-1/II类分子形成抗原肽－MHC分子复合物，并被呈递到细胞膜表面，被TCR 识别的作用。具有此作用的细胞叫抗原呈递细胞（antigen presenting cell,APC)。此外，巨噬细胞表面还表达多种共刺激分子，如B7、ICAM-1、LFA-1,3等分别与T细胞上的CD28、LFA -1(CD11)、LFA-2(CD2)等相互作用，为T细胞的活化提供第二信号。（3）抗肿瘤作用：Mφ被某些细胞因子如IFN-γ激活后能有效杀伤肿瘤等靶细胞，其吞噬杀菌能力也显著提高。（4）分泌生物活性介质，产生免疫应答和其它免疫效应：如 IL-1,12、IFN、TNF、PGE等;以及某些补体成份和凝血因子、组织修复因子等。为了检测巨噬细胞的吞噬功能，我们用CFA免疫的小白鼠作为实验材料检测其腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用。 2 材料与方法 2．1 材料 2．1．1 药品：生理盐水、0.6%环磷酰胺、Hank’s溶液、1640培养基、细胞裂解液、中性红等。 2．1．2 仪器：血球计数板、细胞培养箱、分光光度计等。 2．1．3 动物：小白鼠2只，由兰大医学院动物实验中心提供。 2.2、方法 2．2．1 小鼠腹腔巨噬细胞制备取小白鼠2只，分为对照组和实验组，对照组注射0.1ml生理盐水，试验组注射0.1mlcFA。48小时后，小鼠眼眶放血，断颈处死。腹腔注射3ml预冷的生理盐水。吸取腹腔渗出液5ml离心管（冰浴）。1600rpm离心10 分钟，弃上清，4℃生理盐水定容至5ml。血球计数板镜下巨噬细胞计数。用生理盐水调mΦ浓度为1×106，取4ml 1600rpm 离心10分钟，弃上清加4ml 1640定悬。将mΦ加入24孔板，每组4孔，每孔1ml。37℃，5%CO2细胞培养箱贴壁培养纯化2小时。2．2．2 巨噬细胞吞噬中性红试验将贴壁纯化好的mΦ弃1640培养液，对照孔加0.5ml生理盐水，其余每孔加0.5ml0.075%中性红,继续培养1小时。倾去上清液,用温PBS 洗细胞3 次,每孔加入细胞溶解液(为体积分数50 %的乙酸和体积分数50 %的无水乙醇) 2ml ,室温下放置30分钟,待细胞溶解后,即用分光光度计测定OD值。以OD 值表示巨噬细胞功能的强弱。 3 结果与讨论表：mΦ的浓度及吸光值 mΦ细胞个数mΦ浓度 （个/ml) 0D值 对照组256 6.4×105 0.252 试验组2176 5.44×106 0.283 3．1 免疫小鼠腹腔巨噬细胞浓度从上表可以看出，用cFA免疫的小鼠腹腔巨噬
第三章免疫细胞 Chapter 3 Immunocytes 第一部分教学内容和要求 一、目的要求 掌握：淋巴细胞的种类、T、B细胞膜表面分子及功能，T、B细胞的功能、抗原提呈细胞的种类和功能，NK细胞的功能；熟悉：淋巴细胞的分化发育，单核-巨噬细胞和NK细胞的表面受体；了解：TCR基因和重排。 二、教学内容 1.T淋巴细胞的分化发育、膜表面分子、亚群及其功能。 2.B淋巴细胞的分化发育、膜表面分子、亚群及其功能。 3.NK细胞的膜表面分子、功能；NK细胞识别和杀伤靶细胞的机制。 4.巨噬细胞、树突状细胞、B细胞和非专职性抗原提呈细胞的分布及其在免疫中所发挥的作用。 5.中性粒细胞、嗜酸粒细胞、嗜硷粒细胞、肥大细胞、红细胞和血小板等细胞在免疫应答中的作用。 第二部分测试题 一、选择题 （一）单项选择题（A型题） 1.可刺激B淋巴细胞增殖转化的刺激物 A.PWM B.PHA C.ConA D.MHC E.BCG 2.中性粒细胞在血循环中存活的时间 A.数小时 B.十几小时 C.数天 D.数周 E.数月 3.可刺激T细胞增殖的刺激物是 A.ConA B.MHC C.SPA D.AFP E.LPS 4.具有特异性杀伤功能的细胞 https://www.doczj.com/doc/ad3836217.html,K 细胞 B.巨噬细胞 C.中性粒细胞 D.细胞毒性T细胞 E.NK细胞 5.淋巴细胞增殖试验可用来检测 A.细胞免疫功能 B.体液免疫功能 C.淋巴细胞数量 D.抗原提呈功能 E.补体功能 6.既具有抗原加工提呈作用又具有杀菌作用的细胞 A.树突状细胞 B.巨噬细胞 C.中性粒细胞 D.B细胞 E.T细胞 7.NK细胞表面的杀伤细胞抑制受体可识别 A.自身组织细胞表面的糖类配体复合物 B.肿瘤细胞表面的糖类配体 C.自身组织细胞表面的MHC-Ⅰ类分子 D.自身组织细胞表面的MHC-Ⅱ类分子 E.表达于感染细胞表面的病毒蛋白 8.具有SRBC受体的细胞是 A.T 细胞 B.B细胞 C.肥大细胞 D.NK 细胞 E.巨噬细胞 9.含有T细胞百分率最高的部位是 A.胸导管 B.胸腺 C.脾脏 D.外周血 E.扁桃体 10.参与非特异性免疫作用的细胞是 A.CD4+Th1细胞 B.CD4+Th2细胞 C.γδT细胞 D.αβT细胞 E.CD8+Tc细胞 11.B细胞识别抗原的表面分子是 A.C3 受体 B.mIg C.SRBC 受体 D.EB病毒受体 E.HIV受体
光的分类及其效果 1、直射光自然光中的直射光主要是指直射的太阳光;人工光中的直射光主要是指大功率的回光灯、聚光灯、摘钦灯等。由于直射光具有发光强度高，有明显的方向性，照射物体时，明暗面对比强烈，界限分明卜过渡层次少，有清晰的明暗交界线，投影实而鲜明，而且光质较为强硬，所以，在影视中，直射光又叫硬光。硬光适于用来表现景物的轮廓形态、立体形态、粗糙物体的表面质感以及某种特定的大反差戏剧效果和人物的心理描写。 2、散射光自然光中的散射光，主要是指散射的太阳光(夭空光)、地面及周围环境对阳光的反射形成的散射光、阴天时天空的散射光。人工光中的散射光，主要有小功率的聚光灯、散光灯、碘钨灯等。散射光的光质柔和，没有明显的方向性，照射物体时，受光面与背光面之间过渡层次较多，没有鲜明的明暗交界线，光照平柔，也没有鲜明清晰的投影。因此，散射光在影视中被称为软光。由于软光具有柔和的特性，它适于用来表现影物所固有的色调反差，以及表现人和物的柔和平滑的表面质感。软光又可以柔化影像，是表现儿童和女性的常用光线。第二种分类方法按光源、机位与被摄物所处的不同方位，而形成不同的光线效果分类，自然光与人工光都可以分为: 1、正面光(又称顺光、平光)当光源照射方向和摄影机拍摄方向一致，与被摄体相对时，如果以摄影机和被摄体划一直线为少，光源与直线构成的水平角度在少左右，属于正面光(如图)。一般的正面光在处理时角度应尽量小，即光源尽量*近机位，其垂直角度根据具体情况，有时与机位等高，有时略高于机位。运用正面光，可将被摄对象普遍照明，同一景物没有明显的明暗贯差，光照均匀柔和。正面光照明的优点是可以很好地表现物体寮有的色彩，消除或掩饰粗糙物
1材料与方法 1. 1. 2 主要试剂环磷酰胺、RPMI 1640 培养 液( 含L-谷氨酰胺，)、Hanks 液( HyClone)、MTT 试剂、 PBS 缓冲溶液( pH 值7. 2 ～ 7. 4，HyClone)、丝裂霉素C、SA 缓冲液，绵羊红细胞，补体( 豚鼠血清)、都氏试剂、LDH 基质液、 P815 细胞( 购于协和医科大学基础医学细胞中心)、YAC-1 细 胞、FITC-Anti-CD3、PE-Anti-CD4、PerCP-Anti-CD8 荧光抗体)。 1. 2 动物与分组 Balb /C 小鼠90 只，雌性，6 ～ 8 周龄，体重18 ～ 22g。颗粒饲料，室温(22 ± 2)℃，湿度60% ～ 80% 。 动物在实验室条件下检疫1 周后，实验分为3 项处理进 行，(1) 处理一:测定动物体重、脾脏重量及系数;(2) 处理二: 测定NK 细胞活性，细胞毒性T 细胞活性;(3) 处理三:测定血 清半数溶血值。每项处理随机分为空白对照组、CTX-1 组和 CTX-2 组。 1. 3 实验方法和测定指标 1. 3. 1 剂量选择试验前经急性经口毒性试验确定CTX 的LD50为240mg / kg，以1 /4 LD50做为本试验中CTX-1 组的 CTX 剂量，即60 mg / kg 环磷酰胺，用蒸馏水配制，每日经口给予。CTX-2 组每日经口给予蒸馏水，试验结束前一天经腹腔 注射给予动物200 mg / kg 环磷酰胺［2，3］( 用蒸馏水配制)。另设空白对照组，蒸馏水代替受试物，每日经口给予。动物灌胃 容积为0. 3ml /10g，每周称量体重调整灌胃量，连续灌胃4 周 后测定各项免疫指标。 1. 3. 2 血液中T、B 淋巴细胞分类计数［4］动物处死前眼 眶内眦静脉取血，EDTA-K2抗凝，每只设定3 支流式试管进行 测定，每管加入50μl 抗凝血。分别在3 管中加入CD3 /CD19 ，CD3 /CD4 /CD8.不同荧光素标记的单克隆小鼠抗体。每管加 入2ml FACS 红细胞裂解液，室温下避光保存20min。1200r / min 离心5min，弃去上清液。每管再加入2ml PBS，1200r /min 离心5min，弃去上清液。加入0. 5ml PBS 混匀后上流式细胞仪进行检测。 1. 3. 3 细胞毒性T 淋巴细胞活性试验［5，6］ 1. 3. 3. 1 脾细胞悬液的制备( 效应细胞) 无菌取脾，用4 层 纱布将脾磨碎，制成单细胞悬液。用Hank＇s 液洗2 次，每次离 心10min(1000r /min)。弃上清将细胞浆弹起，加入0. 5ml 灭 菌水20s，裂解红细胞后再加入5ml Hank’s 液，混匀后1000r / min，10min 离心，用1ml 含10% 小牛血清的RPMI1640 完全培 养液重悬，调整细胞浓度为2 × 107 个/ml;加0. 5ml 此细胞悬 液于24 孔培养板，留一孔不加脾细胞作为对照孔。 1. 3. 3. 2 制备刺激细胞1000r /min，10min 离心处于对数生 长期的P815 细胞，用5ml DMEM 培养液悬浮P815 细胞于 15ml 离心管中，计数细胞。加入丝裂霉素C，相当于50μg / (2 ～ 5) × 107 个细胞。用锡纸包裹离心管以避光，在37℃水浴 30min。用Hank’s 液洗P815 细胞3 次，之后Hank’s 液悬浮
细胞免疫的概念 凡是由免疫细胞发挥效应以清除异物的作用即称为细胞免疫。参予的细胞称为免疫效应细胞。目前认为具有天然杀伤作用的天然杀伤细胞（NK）和抗体依赖的细胞介导的细胞毒性细胞（antibody dependent cell-mediatedcytotoxicity,ADCC）如巨噬细胞（Mφ）和杀伤细胞（K）以及由T细胞介导的细胞免疫均属细胞免疫的范畴。前二类免疫细胞在其细胞表面不具有抗原识别受体，因此它们的活化无需经抗原激发即能发挥效应细胞的作用，故可视之为非特异性细胞免疫。而效应T细胞则具有抗原识别受体，因此它们必需经抗原激发才能活化发挥其效应细胞的作用，故可视之为特异性细胞免疫。 由T细胞介导的细胞的免疫有二种基本形式，它们分别由二类不同的T细胞亚类参与。一种是迟发型超敏性的T细胞（TDH，CD4+），该细胞和抗原起反应后可分泌细胞因子。这些细胞因子再吸引和活化巨噬细胞和其它类型的细胞在反应部位聚集，成为组织慢性炎症的非特异效应细胞。另一种是细胞毒性T细胞（TC，CD8+），对靶细胞有特异杀伤作用。 上述二种类型的效应T细胞的存在虽然均可经体外实验分别证实。但通常在体内反应过程中，二种类型的效应细胞均有不同程度的表现。 引起细胞免疫的抗原多为T细胞依赖抗原（TD抗原），与体液免疫相同，参与特异细胞免疫的细胞也是由多细胞系完成的。即由抗原呈递细胞（巨噬细胞或树突状细胞）、免疫调节细胞（TH和TS）以及效应T细胞（TDTH和TC）等。 在无抗原激发的情况下，效应T细胞是以不活化的静息型细胞形式存在。当抗原进入机体后，在抗原呈递细胞或靶细胞的作用下使静息型T细胞活化增殖并分化为效应T细胞。即由T细胞介导的细胞免疫应答也需经过抗原识别（诱导期）、活化与分化（增殖期）和效应期才能发挥细胞免疫作用。 由T细胞介导的主要细胞免疫现象有：①迟发型超敏性反应；②以胞内寄生物的抗感染作用；③抗肿瘤免疫；④同种移植排斥反应；⑤移植物抗宿主反应；⑥某些药物过敏症； ⑦某些自身免疫病。
实验目的：验证小鼠在接受抗原之后机体产生了特异性免疫反应，并观察小鼠各项生理指标以及免疫器官的反应状况，再观察T细胞和B细胞在此应答的反应状况。 实验假设：小鼠免疫灭活疫苗之后，机体会逐渐产生特异性免疫应答，一方面T 细胞在接受抗原刺激之后，经过阳性和阴性选择，T细胞从CD4，CD8双阳性选择为单阳性T细胞，并逐步转移，最终到达淋巴结等组织产生效应；另一方面，B细胞也会发育分化为浆细胞和记忆细胞，相应的浆细胞产生抗体以应对抗原。由于小鼠在接受抗原之后，免疫细胞在胸腺和脾脏的数量和种类将发生变化，另外小鼠血清中也会产生相应的抗体。 因此假设，在排出其他偶然因素引起的误差的情况下，有以下结果： 1. 免疫后的小鼠胸腺大小比对照组更小，脾脏大小比对照组更大；另外免疫后小鼠的淋巴结比对照组更大。 2. 免疫后的小鼠胸腺免疫细胞数量小于对照组，脾脏免疫细胞数量大于对照组。 3. 免疫后小鼠胸腺中的单阳性淋巴细胞比对照组单阳性淋巴细胞更多，双阳性淋巴细胞比对照组更少；免疫后小鼠的脾脏中单阳性淋巴细胞数量多于对照组单阳性淋巴细胞数量。 4. 免疫后小鼠血清里面的抗体检测呈阳性，对照组小鼠血清抗体检测呈阴性。预期结果： 预计结果与假设一致，即： 1. 免疫后的小鼠胸腺大小比对照组更小，脾脏大小比对照组更大；另外免疫后小鼠的淋巴结比对照组更大。 2. 免疫后的小鼠胸腺免疫细胞数量小于对照组，脾脏免疫细胞数量大于对照组。 3. 免疫后小鼠胸腺中的单阳性淋巴细胞比对照组单阳性淋巴细胞更多，双阳性淋巴细胞比对照组更少；免疫后小鼠的脾脏中单阳性淋巴细胞数量多于对照组单阳性淋巴细胞数量。 4. 免疫后小鼠血清里面的抗体检测呈阳性，对照组小鼠血清抗体检测呈阴性。实验方法：
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/ad3836217.html, CaMKIV在免疫细胞中的作用 作者：彭雪峰游捷 来源：《中国医学创新》2011年第14期 基金项目：福建省自然科学基金（C0710017） 作者单位：350001 福建医科大学附属内分泌研究所 通讯作者：游捷 【摘要】钙调蛋白激酶（CaMK）IV是Ca2+信号转导过程中的一个关键激酶，主要表达在神经组织和免疫系统。研究表明，在经过一系列级联反应激活后，CaMKIV转位至细胞核，通过调节转录因子CREB、MEF2及AP-1等活性，参与调节T细胞发育和激活，树突状细胞 分化和存活，以及骨髓造血干细胞的维护。新近关于骨免疫学方面的研究显示，CaMKIV参与调节免疫应答，本文针对部分表达该蛋白的免疫细胞，探讨CaMKIV在免疫炎症中的作用。 【关键词】钙调蛋白激酶IV；炎症反应； T淋巴细胞；树突状细胞 Ca2+是一个通用而普遍存在的第二信使，广泛参与各种基础细胞进程，钙调蛋白（CaM）是Ca2+的一个主要受体，在所有真核细胞中表达。Ca2+与CaM结合形成复合体，使得CaM内部构象改变，进而可与许多不同靶酶相互作用，这些靶酶中较重要的是钙调蛋白激酶（CaMKs）家族，包括磷酸化酶激酶、肌球蛋白轻链激酶（MLCK）、CaMKⅠ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ［1］。CaMKs家族目前研究较多的是CaMK Ⅱ和Ⅳ，主要在神经组织和免疫系统。 1 CaMKIV概述 1.1 基因和蛋白 CaMKIV主要表达于脑组织和胸腺，脾脏、卵巢和睾丸也有少量表达。在免疫系统中表达于T细胞、树突状细胞、造血干细胞，在B细胞及单核细胞中未见报道。编 码CaMKIV的基因由42 kb DNA组成，包括12个外显子和11个内含子，由于剪接差别和转 录起始位点的不同，能够产生多种mRNA。CaMKIV的分子量约为60 KDa，基本结构包括一个N-末端激酶区域，一个自动调整区域和一个重叠的CaM结合区域。CaMKIV蛋白包括α、β两种亚型，后者包含一个由28个氨基酸残基组成的N-末端扩展，其余结构基本相同［2］。 1.2 激活过程在细胞质中CaMKIV是一个由钙调蛋白激酶激酶（CaMKK）和蛋白磷酸酶2A（PP2A）组成的复合体，是无活性的。当胞内Ca2+浓度增加时，部分Ca2+结合CaM，然后Ca2+/CaM复合物结合CaMKIV，由于Ca2+/CaM的结合位点与PP2A相同，故而取代PP2A， 并且使得CaMKIV构象改变，进而使CaMKIV具备最基础的激酶活性，暴露出可被CaMKK 磷酸化的活性环。CaMKK磷酸化Thr200（在鼠类为Thr196）位点，使CaMKIV完全激活，之后Ser12-Ser13位点自发磷酸化，称为“自主激活”［3］。只有自主激活的CaMKIV才能转位至核内，参与基因转录的调控。此后，PP2A在细胞核内重新结合CaMKIV，并使活性环上的苏氨
景别的分类和作用 由于电影、电视表现的主要对象是人，因此，划分景别的一般标准是以成年人身体为标准尺度，以画面表现出人体部位多大范围来划分景别。在没有人物的画面中，仍以成年人与被摄物体的大致比例作为划分景别的依据。△例如: 一辆完整的汽车被认为是全景画面，而一只完整的手表画面则被认为是特写镜头。 1、远景 远景是电视景别中视距最远、表现空间范围最大的一种景别。一般表现比
较开阔的场景和场面。 作用： ①远景可以提供较多的视觉信息； ②远景呈现出极其开阔的空间和壮观的场面； ③远景以景物为主，借景抒情； ④远景也是写人的景别； ⑤远景常用于开篇或结尾； 远景画面注重对景物和事件的宏观表现，力求在一个画面内尽可能多地提供景物和事件的空间、规模、气势、场面等方面的整体视觉信息。提供广阔的视觉空间和表现景物的宏观形象是远景画面的重要任务，讲究远取其势”。
在电视片中常以远景镜头作为开篇或结尾画面，或作为过渡镜头。 2?全景 摄取人物全身或场景全貌的电影画面。全景具有较为广阔的空间，可以充分展示人物的整个动作和人物的相互关系。在全景中，人物与环境常常融为一体，能创造出有人有景的生动画面。 全景和特写相比，视距差别悬殊。如果两者直接组接，会造成视觉上和情绪上大幅度的跳跃，常能收到特有的艺术效果。
全景——表现人物全身形象或某一具体 场景全貌的画面。 的作用： ①表现一个事物或场景的全貌； ②完整表现人物的形体动作； 全景画面与远景相比，有明显的内容中心和结构主体，重视特定范围内某一具体对象的视觉轮廓形状和视觉中心地位。 ③通过形体动作揭示人物内心；△《》以人物全身动作表现内心活动例。同时，全景画面能够完整地表现人物的 形体动作，可以通过对人物形体动 作的表现来反映人物内心情感和心理状态；可以通过特定环境和特定场景表现特定人物。人是电视艺术表现的中心，
NK细胞(Natural Killer Cell)又称自然杀伤细胞。属于大颗粒淋巴细胞，来源于骨髓，占外周血淋巴细胞总数的5％-10％，是机体重要的免疫细胞，具有广谱抗肿瘤细胞作用，其不依赖于抗原刺激作用，就可以非特异直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染的靶细胞，对肺癌、肝癌、卵巢癌、食道癌、结肠癌、胃癌、宫颈癌、骨癌等均有效果，以NK细胞为中心的巨噬细胞，24小时加以监视，一旦发现癌细胞，就陆续加以清除。特别是对造血细胞来源的肿瘤细胞更为敏感。特别是对淋巴瘤和白血病细胞作用更为明显，因此，在机体免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要作用，是抗瘤免疫的第一线细胞，能迅速溶解某些肿瘤细胞。 人体的健康是由免疫系统来保证的，因此绝大多数的保健品都是为了提高机体免疫力的。NK细胞作为免疫系统中最重要的效应杀伤细胞，就像免疫系统中的巡警，时刻游弋在人体的血液中，一旦遇到入侵体内的细菌、病毒和体内产生的癌变、病变、衰老细胞，便启动免疫攻击和免疫稳定功能，当自己无法独立完成攻击和清除任务，就会发出信号，调集其他类型的免疫细胞来共同完成清除任务。 ·人体的健康是由免疫系统来保证的。免疫系统被医学专家誉为世界上最好的医生，就像一支不知疲倦的部队，24小时保护着我们的健康。 ·NK细胞作为先天免疫系统中最重要的效应细胞，是免疫系统在进化过程中所分化出的广谱性防御机制，对外清除病毒、细菌及其他有害物质，对内清除衰老、病变及癌变细胞,维护着我们机体的相对健康状态，被医学界誉为“人体第一道防线”。 ·NK细胞平时像巡警一样游弋在人体的血液中，行使着免疫监视功能，当遇到癌变，疾病及衰老的细胞时，便启动免疫攻击和免疫稳定功能。 ·NK细胞与我们的生活息息相关，它可以抑制病毒和细菌的入侵，清除体内癌变、病变及衰老细胞，具有延缓机体衰老的功能。 NK细胞功能在人生不同阶段呈现不同趋势和特征。科学研究发现，在人的一生中，NK细胞功能变化大致可分为五个阶段：
【教学课题】第四章画面特性第一节镜头画面的分类——镜头景距的变化【课程类型】理论课 【课时】1学时（45min） 【教学目的】1.掌握镜头画面中以景距变化形成的分类及区别。 2.理解景别的特点及作用。 【教学重点】五种景别的分类及特点。 【教学难点】将五种景别的相关理论知识转化为在能够实际拍摄当中应用的实践性知识。 【教学方法】讲授式、启发式、讨论式 【教学过程】 一、课前回顾 提问：画面的构成部分（1.主体；2.陪体；3.前景；4.后景；5.留白） 二、新课导入 情境设置（拍摄同学聚会时的照片）——讨论（不同照片所传递的不同信息）——设置悬念（镜头画面有哪些分类） 三、讲授新课 （一）镜头景距的变化——景别 1.含义：根据镜头景距变化对镜头画面的分类即景别，是指由于摄影机与被摄体的距离不同，而造成被摄体在摄影机寻像器中所呈现出的范围大小的区别。 外形上：画框包容景物的大小与范围，或者说画面主体（主要对象）占据画面空间的大小。 创作角度：是一种表现手段。 拍摄者角度：是拍摄者主观决定受众的接受内容、接受方式以及对画面内容接受程度的一种有效造型手段。 表达效果：①观看景物的视距的变化； ②代表人眼视线分散和集中的反映； ③景别是创作人员对观众视觉心理的限定； ④景别的变化可以使作品形成不同的节奏；
⑤参与和解说功能。 2.景别的划分的方法： （1）根据主要被摄对象（画面主体）在画面中的大小比例来划分； （2）是以人物在画面中占据比例的大小来划分。 我国影视画面景别多分为五种：远景、全景、中景、近景和特写。（二）、景别的划分 1、远景——是指表现广阔空间或者开阔场面的景别，是所有景别中视距最远、表现空间范围最大的一种景别，可以分为大远景和远景两类。 （1）远景的特点 ①对场景整体、宏观的表现； ②人物视觉形象弱化。 （2）远景的作用 ①表现环境和气氛； ②将人物与环境结合产生特殊情绪效果； ③获得被摄主体的活动范围和运动轨迹，联系周围环境得出新的信息； ④远景的景别特征会在受众的心理上表现出一种过渡感和退出感。 （3）拍摄远景时应注意的问题 ①注意画面的整体结构和气势； ②对被摄主体的表现目的性要强，从大处着手； ③大远景和远景的画面构图一般不用前景，而注重通过深远的景物和开阔的视野将观众的视线引向远方； ④重点处理好画面的主要线条、色调和影调； ⑤在操作时必须考虑画面视觉变化及产生的运动节奏。 2、全景——是指表现人物全身或者某一具体场景全貌的画面。 （1）全景的特点 ①被拍摄主体与环境在视觉关系上是相当的； ②全景可以表现被拍摄主体或物体在实际空间中的方位或多个被拍摄景物相互间的关系。 （2）全景的作用
. 免疫系统的组成及作用 免疫系统具有以下功能： 抵抗各种细菌、病毒、污染物及疾病对人体造成的攻击。 清除新代谢的废物及免疫细胞与敌人打仗时遗留下来的病毒死伤尸体。 修补受损的组织器官，使其恢复原来的功能。 免疫系统的组成及作用
. . 免疫系统是一个由免疫细胞和有机器官构成的网状系统，它遍布整个人体，能自动对抗外来的有害物质，清除坏死细胞，并毁灭可能致癌的突变细胞。免疫系统的结构是繁多而复杂的，其主要的免疫器官有骨髓、扁桃体、胸腺、脾脏、盲肠、骨髓、淋巴结、淋巴管。这些关卡都是用来防堵入侵的毒素及微生物。 扁桃体位于咽部，是制造淋巴球与产生抗体的地方，人的淋巴球会对由口腔（食物及空气）进入的细菌产生反应。 胸腺属于中枢淋巴器官，位于胸腔顶部，是系统发展功能的中心，它负责训练免疫细胞让它们知道自己的责任。能供应具有免疫力的细胞到所有周边淋巴组织，也是淋巴干细胞增生并分化成T淋巴球之处。 脾脏位于腹腔内，近似卵圆形或指形是人体内最大的淋巴器官， 是血液的过滤器。脾脏常会因疾病而肿大，没有脾脏者，较易受到病菌的感染。 骨髓为白血球、红血球衍生与形成的主要器官，能产生定型与成熟的淋巴球，并将其释放进入其它淋巴器官及血液循环系统，进
行特定免疫功能。 盲肠最明显的特征是有大量的淋巴小结，它们会在此互相融合并伸入粘膜下层。 淋巴结为体内重要的防御关口。沿着淋巴管的途径分布，具有过. . 滤免疫反应、再循环的功能，还具有清除淋巴异物的功能。细菌进入淋巴结后，约有99%会陷在其中，并受摧毁。 淋巴管为淋巴液在体内特定部位循环的管道，负责将淋巴液由组织带入血液中。 B细胞和T细胞都来自于骨髓，但T细胞形成于胸腺，它的主要功能是消灭外来侵袭物。 成熟且经过启发的T细胞将演变为以下各种细胞： 辅助细胞：确认入侵者，发送讯号，召集B细胞及巨噬细胞进入备战状态；
景别的分类有哪些 一部电影的影像就是这些能够产生不同艺术效果的景别组合在一起的结果。 下面由给大家介绍一下景别的分类。 景别的分类：大全景大全景一般用来表现远离摄影机的环境全貌，展示人物及其周围广阔的空间环境，自然景色和群众活动大场面的镜头画面。 它相当于从较远的距离观看景物和人物，视野宽广，能包容广大的空间，人物较小，背景占主要地位，画面给人以整体感，细部却不甚清晰。 大全景通常用于介绍环境，抒发情感。 在拍摄外景时常常使用这样的镜头可以有效的描绘雄伟的峡谷、豪华的庄园、荒野的丛林，也可以描绘现代化的工业区或阴沉的贫民区。 电影诞生以来，卢米埃尔就发现并运用远景画面善于表现大的物象的特点。 《工厂的大门》与《火车进站》所表现的就是众多工人上工和火车到站时站台上熙熙攘攘的景象。 格利菲斯1916年导演的《党同伐异》，制作了最雄伟的巴比伦宫殿布景，纵身达1600米，仅拍摄“巴尔泰萨尔盛宴一个场面，就动用了4000多名群众演员，摄影师坐在气球上拍摄。
也只有运用大全景，才能摄入如此浩大的场面。 随着宽银幕的出现，大全景越来越成为电影营造视觉奇观的手段。 一些气势恢宏的大场面出现在很多影片中。 景别的分类：全景全景用来表现场景的全貌与人物的全身动作，在电视剧中用于表现人物之间、人与环境之间的关系。 全景画面，主要表现人物全身，活动范围较大，体型、衣着打扮、身份交代的比较清楚，环境、道具看的明白，通常在拍内景时，作为摄像的总角度的景别。 在电视剧、电视专题、电视新闻中全景镜头不可缺少，大多数节目的开端、结尾部分都用全景或远景。 远景、全景又称交代镜头。 因此，全景画面比远景更能够全面阐释人物与环境之间的密切关系，可以通过特定环境来表现特定人物，这在各类影视片中被广泛地应用。 而对比远景画面，全景更能够展示出人物的行为动作，表情相貌，也可以从某种程度上来表现人物的内心活动。 全景画面中包含整个人物形貌，既不像远景那样由于细节过小而不能很好地进行观察，又不会像中近景画面那样不能展示人物全身的形态动作。 在叙事、抒情和阐述人物与环境的关系的功能上，起到了独特的作用。