高效液相色谱仪操作培训综合评价建议
1.培训过程中，操作示范明确，步骤清晰易懂。
2.培训讲师耐心细致，回答问题及时准确。
3.提供了大量的实际操作练习机会，加强了学员的操作技巧。
4.实践环节与理论知识相结合，使学员更好地理解仪器原理。
5.培训教材编写详尽，内容全面。
6.提供了操作故障排除的案例，培养了学员解决实际问题的能力。
7.培训班组织紧密，时间合理分配，充分利用了每个学员的时间。
8.培训设备齐全，并保持良好的工作状态，让学员有更好的操作
体验。
9.培训中提供了实际样品的分析案例，增加了学员的实践经验。
10.培训过程注重培养学员的团队合作能力，进行小组合作实验。
11.培训中的交互式问题解答环节增加了学员的主动学习参与度。
12.学员实际操作环节的评估和指导及时有效，帮助学员发现和改
正错误。
13.培训过程中设置了小测验，检验学员的掌握程度，激励学员更
好地学习。
14.提供了培训反馈表，学员能够及时反馈培训过程中的意见和建议。
15.培训场地布置整洁舒适，环境安全可靠。
16.培训讲师声音洪亮清晰，表达流畅，容易理解。
17.培训过程中充分利用多媒体设备，提高学员的学习效果。
18.培训班以小班授课的方式进行，使学员能够充分参与讨论和互动。
19.培训过程中注重实用性和应用性，使学员能够将所学知识应用
到实际工作中。
20.培训师资力量雄厚，有丰富的实际操作经验和教学经验。
21.培训结束后提供了培训总结材料，方便学员复习巩固所学知识。
22.培训机构提供了售后服务，学员在学习过程中遇到问题能够及时获得解决。
高效液相色谱实验The document was prepared on January 2, 2021
高效液相色谱实验I. 色谱柱的评价 请在实验前预习基础分析化学实验第二版137－140页. 目的 (1)了解高效液相色谱仪的工作原理； (2)学习评价液相色谱反相柱的方法. 原理 高效液相色谱是色谱法的一个重要分支.它采用高压输液泵和小颗粒的填料,与经典的液相色谱相比,具有很高的柱效和分离能力.色谱柱是色谱仪的心脏,也是需要经常更换和选用的部件,因此,评价色谱柱是十分重要的.而且对色谱柱的评价也可以检查整个色谱仪的工作状况是否正常. 评价色谱柱的性能参数主要有： （1） 柱效理论塔板数n 式中t r 为测试物的保留时间,W 1/2为色谱峰的半峰宽. （2） 容量因子k’ 式中t 0为死时间,通常用已知在色谱柱上不保留的物质的出峰时间作死时间. (3)相对保留值选择因子α 式中k 1’和k 2’分别为相邻两峰的容量因子,而且规定峰1的保留时间小于峰2 的. (4)分离度R s 式中t r1、t r2分别为相邻两峰的保留时间,W b1、W b2分别为两峰的底宽.对于高斯峰 来讲,W b =2. 为达到好的分离,我们希望n 、α和R s 值尽可能大.一般的分离如α=,R s =,需n 达到2000.柱压一般为104 kPa 或更小一些.本实验采用多核芳烃作测试物,尿嘧啶为死时间标记物,评价反相色谱柱. 仪器和试剂 Waters 510高效液相色谱仪由Waters 510高压输液泵,Rheodyne 7725i 进样器,440检测器和记录仪组成 色谱柱：5 cm × mm ., YWG-C 18H 37 ODS,10 μm 流动相：甲醇－水80+20 样品I ： 含尿嘧啶 mg ·mL －1、萘 mg ·mL －1、联苯 mg ·mL －1、菲 mg ·mL －1的甲醇混合溶液； 样品I I ：尿嘧啶的甲醇溶液；萘的甲醇溶液；联苯的甲醇溶液；菲的甲醇溶液.溶液浓度约为·mL －1； 实验内容 （1） 准备流动相.将色谱纯甲醇和色谱纯水按比例配制200mL 溶液,混合均匀 并经超声波脱气后加入到仪器储液瓶中. （2） 检查电路连接和液路连接正确以后,接通高压泵、检测器和记录仪的电源. 设定操作条件为：流速 mL ·min －1,压力上限2′104 kPa 约3000 psi,检 2 2/1r )/(54.5W t n =0 0r /)('t t t k -=1 2'/'αk k ＝) /()(2b2b1r1r2s W W t t R +-=
第二章高效液相色谱法 高效液相色谱法特点 1、高压，150×105-350×105Pa 2、高速 3、高效，3万塔板/m 4、高灵敏度 高效液相色谱与气相色谱比较 ●分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物，而这些物质 只点有机物总数的20%；HPLC可以分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物总数的80%。 ●流动相：GC采用的流动相中为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用， 对组分作用小；HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合，可供选择的机会多。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。 ●操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。 二、影响分离的因素 基本概念及理论基础与气相色谱一致，主要区别为流动相不同，液相色谱流动相为液体，气相色谱流动相为气体 H = A + B/u + Cu 对于分子扩散项，当流动相线速度大于0.5cm/s时可忽略不计 三、HPLC主要类型 1、液-液分配色谱法：早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相, 现多为化学键合固定相，即用化学反应的方法通过化学键将固定液结合在担体表面。 2、液-固色谱：以固体吸附剂为固定相，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂。流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。 3.离子色谱：水溶液中阴离子分析的最佳方法，固定相为离子交换树脂，流动相为无机酸或无机碱的水溶液。各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力的不同而得到分离。 4.空间排阻色谱：以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同孔径的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶、琼脂糖等软质凝胶；多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶； 液-液分配色谱法 在液-液色谱中,流动相和固定相都是液体,它能适用于各种样品类型的分离和分析，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非离子型的化合物。 分离原理： 液-液分配色谱的分离原理基本与液液萃取相同，都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。所不同的是液液色谱的分配是在柱中进行的，使这种分配平衡可反复多次进行，造成各组分的差速迁移，提高了分离效率，从而能分离各种复杂组分。 在液液色谱中为了避免固定液的流失。对流动相的一个基本要求是流动相尽
篇一：高效液相色谱实验报告 高效液相色谱实验报告 一、实验目的 1了解液相色谱的发展历史及最新进展 2 学习液相色谱的基本构造及原理 3 掌握液相色谱的操作方法和分析方法，能够通过hplc分离测定来对目标化合物的分析鉴定。 二、实验原理 液相色谱法采用液体作为流动相，利用物质在两相中的吸附或分配系数的微小差异达到分离的目的。当两相做相对移动时，被测物质在两相之间进行反复多次的质量交换，使溶质间微小的性质差异产生放大的效果，达到分离分析和测定的目的。液相色谱与气相色谱相比，最大的优点是可以分离不可挥发而具有一定溶解性的物质或受热后不稳定的物质，这类物质在已知化合物中占有相当大的比例，这也确定了液相色谱在应用领域中的地位。 高效液相色谱可分析低分子量、低沸点的有机化合物，更多适用于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化合物。80%的有机化合物都可以用高效液相色谱分析，目前以已经广泛应用于生物工程、制药工程、食品工业、环境检测、石油化工等行业。 三、高效液相色谱的分类 吸附色谱法、分配色谱法、空间排阻色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、化学键合相色谱法 四、高效液相色谱仪的基本构造 高效液相色谱至少包括输液系统、进样器、分离柱、检测器和数据处理系统等几部分。 1 输液系统： 包括贮液及脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置。贮液装置用于存贮足够量、符合hplc要求的流动相。高效液相色谱柱填料颗粒比较小，通过柱子的流动相受到的流动阻力很大，因此需要高压泵输送流动相。 2 进样系统： 将待测的样品引入到色谱柱的装置。液相色谱进样装置需要满足重复性好、死体积小、保证柱中心进样、进样时引起的流量波动小、便于实现自动化等多项要求。进样系统包括取样、进样两项功能。 3 分离柱： 色谱柱是色谱仪的心脏、柱效高、选择性好、分析速度快是对色谱柱的一般要求。商品化的hplc微粒填料，如硅胶和以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球（包括离子交换树脂）等的粒度通常在3μm、5μm、7μm、以及10μm。采用的固定相粒度甚至可以达到 1μm，而制备色谱所采用的固定相粒度通常大于10μm。hplc填充柱效的理论值可以达到50000/m～160000/m理论板，一般采用100-300mm的柱长可满足大多数样品的分析的需要。由于柱效内、外多种因素的影响，因此为使色谱柱达到其应有的效率。应尽量的减小系统的死体积。 4 检测系统： hplc检测器分为通用型检测器和专用型检测器两类。通用型检测器可连续测量色谱柱流出物（包括流动相和样品组分）的全部特性变化。这类检测仪器包括示差折光检测器、介电常数检
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项 一，高效液相色谱仪操作过程： 1、开机操作： （1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）； （2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）； （3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准； （4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液； （5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。 2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命； 3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果； 4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡； 5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤； 6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯； 7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关； 8、使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。 （续） 1、操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。当出现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。 2、连接柱子与管线时，应注意拧紧螺丝的力度，过度用力可导致连接螺丝断裂。柱接头处易发生漏液，可能情况为接头Fittings中间的管子未和接口处贴紧。不同厂家的管线及色谱柱头结构有差异，最好不要混用，必要时可使用PEEK管及活动接头； 3、操作过程若发现压力非常高，则可能管路已堵，应先卸下色谱柱，然后用分段排除法检查，确定何处堵塞后解决。若是保护柱或色谱柱堵塞，可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗，还可采用小流量反冲的办法（新柱不提倡），若还是无法通畅，则需换柱； 4、运行过程中自动停泵，可能为压力超过上限或流动相用完； 5、样品瓶中样品较少，自动进样器进样针无法到达液面，可采用调低进样针进样高度的办法，注
高效液相色谱仪理论及组合培训 高效液相色谱仪（HPLC）是一种基于液相的分析技术，不仅用于化学分析、生物分析、医药检测等领域，还是环保、食品、材料科学等领域中必不可少的分析工具。本文将详细介绍HPLC的理论和组合培训。 一、HPLC理论 HPLC的原理是将分离物质通过液体移动相在填充柱中的固定相上进行分离，通俗地讲，就是利用强化固定相和构造强烈的相互作用力，将混合物分离成不同的组分。相较于传统的液相色谱法，HPLC的操作速度更快，分离效率更高，分离结果也更加精准和可靠。 具体来说，HPLC的分离过程主要通过如下三个步骤来实现： 1. 进样待分离的混合物被吸入自动进样器中，再通过管路进入分离柱； 2. 分离进入分离柱中的分子将根据它们与固定相的交互作用力或化学性质的不同而以不同的速度被分离； 3. 检测分离后的不同物种被识别，并被解析出来。如荧光检测器，质谱检测器等。
以上是HPLC的基本过程，其中液相移动相、固定相和进 样器的选择以及柱温度、流速等条件的调控对分离效果有着重要的影响。 二、HPLC组合培训 HPLC的应用越来越广泛，许多人需要通过培训来学习HPLC理论、仪器使用技能以及操作流程。能够在行业内领先 的培训课程应该是一种综合性的课程，应该覆盖以下几个方面： 1. HPLC理论知识培训应该包括HPLC的原理、仪器的构造、液相或固定相的特性等理论知识，帮助学习者理解HPLC 的分离过程和如何选择正确的仪器配置。 2. 设备操作培训课程应该包括如何正确使用HPLC设备，包括如何设置参数、如何进行校准和维护，以及保持仪器性能和稳定性的方法。 3. 样品制备及进样培训应着重介绍如何正确制备样品，并进行进样操作，确保精确可靠的检测结果。 4. 数据分析培训课程应该包括数据分析的方法和工具，如何处理和解释HPLC所得数据的相关技巧。 5. 安全实践培训课程应该包括如何保持实验室安全， 如何正确处理实验室废液和化学品，如何防止意外和急救措施等方面的安全实践培训。
液相实验室操作要点及注意事项 液相实验室操作要点及注意事项 1. 液相色谱仪应臵于稳定的工作台上，避免震动、阳光直射和气流。环境温度为10-30℃(应恒定)，相对湿度25%-75%。电源电压220±20V。应保持仪器放臵房间的清洁、卫生，每天打扫房间、擦洗操作台和仪器外壁。 2. 流动相使用前必须经过0.45m的滤膜，有机相的流动相必须为色谱纯，水相必须为新鲜制备的纯化水，并规定使用有效期，以防止长菌或长藻类。 3. Agilent HPLC色谱仪用于清洗用的10%异丙醇每15天更换一次，Waters HPLC色谱仪用于清洗密封垫和进样针的10%甲醇每15天更换一次。 4. 色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（如ACN适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。 5. 对于手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。 6. AgilentHPLC色谱仪每3个月或当玻璃滤头发黑时，用30%硝酸浸泡玻璃滤头30min(禁止超声) ， WatersHPLC色谱仪每3个月用纯化水超声金属滤头30min。 7. Agilent HPLC色谱仪使用5ml/min的流速排气时，如果压力大于10bar，更换过滤用白色滤头; Waters HPLC色谱仪应定期（说明）清洗在线过滤器。 8. 紫外检测器的氘灯有一定的寿命，进样前一小时左右打开即可。实验完成冲洗柱子时即关闭以延长使用时间。每3个月用色谱纯的异丙醇（或甲醇）冲洗检测池。 9. 仪器如较长时间不用应使高效液相色谱仪处于所有电源开启、检测器紫外灯关闭的待机状态，不能频繁的开启/关闭电源。 10. 发现泵漏液、紫外灯能量不足或损坏、仪器无法启动等等较严重的情况，应报告室主任，室主任安排进行检查，维修，并做好记录。
开机顺序 1．检查溶剂托盘托盘上的溶剂是否足量，以溶剂液面超过过输液管过滤头5厘米以上为宜。 2．检查输液管内部有否气泡，若有，应及时通过排液阀排出。 3．对溶剂（针对第1项看是否需要补充溶剂）和样品进行处理，过滤，脱气。4．打开主机电源，依次打开检测器，泵A，泵B，柱箱的电源 5．打开电脑，开启色谱工作站 6．先在工作站中开启活塞泵，以所需的流动相平衡系统（约需30min） 7．打开氘灯，等待系统基线走稳 8．开始进样检测 关机顺序 1．样品测定完毕，先关闭氘灯，减少损耗。 2．清洗系统和手动进样阀：根据所作样品不同，关机清洗的方式不一，具体方法如下： A．如果流动相是有机相，只包括：甲醇，乙腈，异丙醇，水等；清洗时，只需用：甲醇100%清洗40～60分钟即可关机。即将水相所对应的溶剂瓶更换为甲醇，将泵的比例调到95%冲洗。 B．如果流动相是包含了缓冲盐类，如：弱酸，弱碱（强酸碱绝对禁止注入本机！），乙酸，乙酸铵，三氟乙酸，磷酸，氨水，三乙胺，磷酸盐等。清洗时，需要用：95%水+5%甲醇清洗80～100分钟，再用甲醇100%清洗40分钟方可关机。即将放置缓冲盐的溶剂瓶换成水相，将泵的比率调到95%，清洗80～100分钟，再将水相的溶剂瓶换到甲醇，泵的比率不变，清洗40分钟方可关机。 C．色谱柱清洗的时候，不推荐用纯水洗，加入5%甲醇才能保证湿润，否则色谱柱的碳链会发生塌陷，破坏柱子。 D．进样阀的清洗原则同上，只是在laod和inject两档都要用清洗液清洗两遍。进样阀严禁停留在，Laod和inject中间。 E．清洗的最终原则是在各条管道中都保存足够多的甲醇（最好都用100%甲醇充满），以防霉变。因此在清洗的最后阶段，最好把各个输液瓶都换成
lc-16高效液相色谱仪操作流程LC-16高效液相色谱仪是一种用于化学分析和质量控制的现代高端仪器，其功能强大且操作复杂，需要经过专业的培训和实践才能熟练使用。下面是LC-16高效液相色谱仪的操作流程： 步骤一：打开电源 首先，需要将液相色谱仪的电源开关打开，同时检查主机电源是否接地稳定。启动过程中，需要仔细观察仪器各个部位是否存在异常现象，确保设备处于正常工作状态。 步骤二：准备样品 根据待测物质的类型和检测对象的要求，准备相应的样品。在使用液相色谱仪前，需要确保所测定的样品在样品处理过程中不要失去原有的特性和性质。同时，需要注意样品的体积、浓度、pH值等，确保样品在进入液相色谱柱前符合测试要求。 步骤三：打开软件
在样品准备完毕后，需要打开LC-16高效液相色谱仪的控制软件，常见的软件有Agilent Chemstation和Waters Empower等，通过软件 对仪器进行控制和操作。 步骤四：建立分析方法 建立一个合适的分析方法是LC-16高效液相色谱仪测定样品的前提，所有的分析工作都是根据分析方法执行。分析方法包括：建立色 谱分离条件、设置检测波长、选择检测模式等，确保获取到准确可靠 的数据。 步骤五：配置液相色谱系统 配置液相色谱系统包括：设置样品进样器的参数、安装色谱柱、 调整互联管路和流速等，确保液相色谱系统的各个组成部分均匀、安全、正常运行。 步骤六：执行分析流程 将待测样品注入到液相色谱系统进样器内，设置合适的进样量， 开始执行分析流程。在自动化运行过程中，需要仔细观察和检查实验 数据是否准确，确保数据可靠。
步骤七：分析数据处理 当分析流程结束后，使用软件对实验数据进行分析处理，对测试 结果进行了解，正确解释测试现象。处理结果可以通过数据的比较、 计算与结论来发现规律，根据最终结果对样品进行评价。 步骤八：关闭仪器 在确认实验结果准确可靠后，需要关闭液相色谱仪的电源、极盒、进样器等外设设备，关掉计算机和软件，并清理仪器及实验室，确保 环境卫生和安全。 总之，LC-16高效液相色谱仪操作流程需要熟练掌握，仔细操作和认真的记录，才能够得到准确、可靠的结果。
高效液相色谱仪 用户需求文件（URS） 用户需求文件审批
注：本文件所描述为高效液相色谱仪技术要求，请文件审核和批准人员在仔细阅读每一页后，将意见和建议单独附页在本件后，在本页签名即代表自己审阅并批准本文件的每一页。 目录 1. 项目概述 2．目的 3．范围 4．缩写与定义 5．依据的法律、法规及标准
6．主要技术指标 运行能力 性能/系统要求 安全要求 其他要求 7．用户项目实施要求 包装及运输 仪器安装及验收 仪器验证要求 培训要求 售后服务要求 提供文件 8．附件 1．项目概述 本文件所要求的高效液相色谱仪安装于四川禾邦实业集团公司针剂项目QC实验室，用于本公司产品的检验，仪器必须符合我国2010年版GMP，现行版EUGMP、中国药典及各类相关法规的要求。 2．目的 提供书面文件证明拟采购的高效液相色谱仪，与我国2010年版GMP，现行版EUGMP、中国药典和我国医药法规要求一致，并符合本公司生产质量要求。本文件将作为商务合同附件，具有法律效力。 本文件（URS）是作为仪器选型、采购、招标及验收的依据，是开展后续相关验证工作的基础。
3．范围 本文件（URS）适用于公司成品、中间产品、原料、辅料等样品的鉴别、有关物质、杂质检查、含量测定等检验所购买的高效液相色谱仪的选型、采购、招标、验收、验证和维护等过程的需要。 文件中“必需”条款，需供方仪器必须达到部分，供方不可用其它技术代替。“期望”条款，供方仪器可采用不同的技术，但最终需符合使用方的需求。 本URS中用户仅提出仪器的基本技术要求，并未涵盖和限制供方仪器具有更加完善的功能、配置和性能、更优异的部件和更高水平的控制系统。投标方应在满足本URS的前提下，提供供方能够达到的更高标准和功能的高质量仪器及其相关服务。供方的仪器应满足中国有关设计、制造、安全、环保等规程、规范和强制性标准要求。如遇与供方所执行的标准发生矛盾时，应按最高标准执行（强制性标准除外）。 由于高效液相色谱仪将采购成熟品牌的标配仪器，因此不再单独进行设计确认（DQ），签署合同前，仪器供应商应对已批准的URS的附件（即：附件一 URS符合性确认表）进行书面反馈，确保URS各项需求都得到了响应，该附件可作为简化的设计确认（DQ）文件。 高效液相色谱仪的供货、安装和调试 供货范围：目前根据品种质量标准，需购置2台高效液相色谱仪才能保证生产正常运行和GMP要求，每台主要配置如下表（但不限于以下配置）： 公用工程的要求 由用户提供的公用设施条件如下： 仪器供电：220V、50 Hz电源。 环境：温度5~35℃；湿度＜85%；良好的通风系统。
液相色谱工作总结 篇一：高效液相总结 高效液相色谱中的速率理论 范氏方程：H＝A＋Cu A = 2λdp 在 HPLC中为了降低涡流扩散的影响:采用了3－10um的小颗粒球形固定相采用高压匀浆 Cd－为常数 Cs－常数 Bu?CdDm u Ds－为组分在固定相中的扩散系数 df_ －为固定液涂层厚度 Hs?CSdfuDs2 在HPLC中，流动相是液体其粘度比气体大得多，而且是在室温下进行操作。因此组分在流动相中的扩散系数Dm 比GC中的Dg要小得多。另外HPLC流动相的流速快，所以纵向扩散项对谱带扩张的影响很小，可以忽略不計。故在H －u曲线中没极小值 根据速率理论HPLC的实验条件为： 1.小粒度、均匀的球形化学鍵合相； 2.低粘度流动相，流速不宜快； 3.柱温适当 流动相 在高效液相色谱中所用的流动相也称洗脱剂，溶解样品用的溶剂最好就是洗脱剂。由于高效液相色谱中流动相是
液体，它对组分有亲和力，并参与固定相对组分的竞争。因此流动相不仅起洗脱作用，还参与分离过程，在固定相一定时， HPLC中,n由色谱柱质量决定，α主要受溶剂种类的影响，κ受溶剂配比的影响。若固定相一定，改变流动相的组成就可以r21使改变；改变流动相中各种溶剂的配比，就能有效地控制k值。用分离方程讨论流动相对分离的影响注意HPLC与GC 不同 在HPLC中，当固定相一定时，流动相的种类影响选择因子，配比影响容因子。因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。在GC中，流动相是惰性的，它对组分没有作用力，仅起运载作用，因此，α主要受固定相性质影响,κ主要受柱温影响，在GC中，以选择固定相和改变柱温来改善分离度。 （1）不允许使用能引起柱效能损失或柱保留特性变化的溶剂。（ 2）溶剂对于试样，必须具有适当的溶解度和良好的选择性。3）溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选择检测波长比溶剂的紫外截止波长要长。对于折光率检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达最高灵敏度。（4）溶剂的纯度要高，使用前应过滤、脱
高效液相色谱仪的正确使用及故障排除方法高效液相色谱仪(HPLC)是分析实验室常用的测试仪器之一，其应用越来越广泛。此种仪器在使用过程中，难免会出现各种各样的问题，并将直接影响到所测数据的准确性和仪器的正常工作。 一、使用试管的问题 1、试管的洁净问题。 高效液相色谱分析法是一个很灵敏的分析方法，如果因使用不洁净的试管，便会影响试验结果的准确性。例如，在用甲醇作溶剂来溶解样品时，所用的小试管是用橡胶塞来做盖子的，因此，在每次进样时，都有一个保留时间固定的干扰峰存在，后经证实，此干扰峰是由甲醇浸泡橡胶塞而溶下的组分所产生，换用玻璃试管后，干扰峰消除。 2、塑料试管的溶解问题。 近年来，一次性塑料试管给试验人员带来了极大的方便，但是，在使用过程中一定要注意有机溶剂对试管的溶解现象，在利用此种试管提取样品时，有些有机溶剂(如氯仿等)对管壁有溶解现象，这些被溶解下来的物质有时也能在检测器上产生信号，从而干扰样品的测定。这时，可用相同的实验条件先行试验一下，看看不含被抽提物时，提取液在检测器上能否产生干扰信号，如确有干扰信号存在，就只能换用耐有机溶剂的玻璃试管了。 3、被测样品在试管壁上的吸附问题。 这个问题也应引起注意，否则也会影响测试结果的准确性，在治疗药物监测(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中，有些被测药物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃试管的管壁上，因此，操作中宜采用聚丙烯管，为
防止提取中吸附现象的发生，可采用0.5%的已二胺已烷液做为提取剂，可有效地防止吸附。 二、操作进样阀的问题 目前，在分析型高效液相色谱仪中常用的进样阀是7725型进样阀，其内部的六通阀结构使进样操作非常方便，但是，如果使用不当，也会带来问题。例如，在高效液相色谱法的试验过程中，有时会有异常色谱峰的出现以及重现性不好的问题，这主要是由于操作方法不当所引起，要想解决此类问题，需从以下几个方面入手。 1、进样量的控制。 用进样阀来进样时，阀内的样品环是定量的，(一般分析型进样阀的样品环体积为20ul)，由于进样时，注射到进样阀内的样品溶液在样品环的管路中有径向的速度梯度(即管轴处比管壁处的液流速度快)。因此，要想使样品环中充满样品溶液，从而使用进样阀来准确地定量，则必须使进样量大于样品环体积的2倍。如果用注射器来控制进样量，则最大只能注射样品环体积1/2的量，这样才能防止部分样品由溢流管溢出从而导致定量分析的误差。 2、进样阀的清洁问题。 如果样品环中有上次进样时样品的残留，必然会污染下次注射进的样品，为防止这种现象的发生，应按下列步骤操作：a.进样阀有2个位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置时，以注射器将流动相注入进样阀内清洗几次，每次用量大约40ul；b.然后将进样阀板手扳至INJECT位置时，
高效液相色谱仪检测的影响因素及解决 策略 【摘要】上世纪六七十年代高压、高速、高效液相色谱仪的问世取代了传统液相色谱仪的应用，这一仪器具有流动相流速高、分离速度快且柱效高等优势，得到了广大科研工作者的青睐。但液相色谱技术与相应的仪器设备在发展过程中愈发复杂，为了避免环境及人为等因素对色谱仪测量结果造成影响，本文分析了影响高效液相色谱仪测量时的几点因素，并提出了相应的解决策略。 【关键词】高效液相色谱仪；检测；影响因素 因色谱仪测量过程中会对其造成干扰的影响因素繁多，无法实现统一归类，笔者以色谱仪的构造为切入点，根据各个系统可能受到的干扰因素进行分析并提出处理方式，主要有溶剂、温度、压力以及稳定性等方面。下面对各部分可能对色谱仪测量结果造成影响的因素展开详细分析。 一、流动相储器和溶剂处理系统的影响因素与选择 高效液相色谱仪通常配备有流动相溶剂储器，这一设备的主要作用是通过输液泵将其中的液体输送至色谱仪内部。但是在使用过程中通常会存在部分微量气体残存于容器与缝中，这些气体通过色谱注释就会产生气泡并引发谱带展宽，最终对检测器的正常工作造成干扰。因此储器的放置位置必须比泵体更高，从而保障二者之间存在输液静压差，使得微量气体能够顺利通过放气阀并排出。与此同时，为了让容器能够更彻底地脱气，在使用过程中，还会对容器进行相应的预处理工作，一方面在搅拌的作用下真空或超声脱气，另一方式是通过氦气或氮气等惰性气体溶解于其中的空气带出[[1]]。在此基础上，为了尽可能地规避杂质进入色谱仪，对泵体、进样阀造成损坏，或者出现色谱柱堵塞，还会将过滤器安装于储器的溶剂导管入口位置，以此来将容器中的灰尘及残渣颗粒等物质去除。 二、高压泵系统
实验室高效液相色谱安全使用及注意事 项 摘要：21世纪以来，全球经济市场飞速发展，实验室的应用频率也逐渐提高。高效液相色谱是实验室常用的定性和定量分离分析仪器。HPLC由于具有高分离率 和高灵敏度特性在药品、化工、食品、环境和生物分子中应用越来越广泛。近年 来高效液相色谱法在药品检验中的应用更是不断增多,2010年版《中国药典》高 效液相分析方法约2000种,高效液相色谱为医药业发展发挥重要作用。现在实验 室使用的高效液相色谱多为高性能精密仪器,因此在配件、耗材相对价格比较高, 为了避免能高效液相色谱效能下降,保证高效液相色谱的正常使用,高效液相色谱 使用管理和日常的维护非常必要。 关键词：实验室；高效液相色谱；安全使用；注意事项 引言 结果有效性是实验室的生命线，而测量设备的准确性是保证结果有效性的关 键因素之一，设备准确性主要通过检定、校准等计量溯源方式予以保证。 GB/T27025—2019《检测和校准实验室能力的通用要求》6.4.6、RB／T214—2017《检验检测机构资质认定能力评价检验检测机构通用要求》4.4.3均明确提出，对测量结果准确性有影响的测量设备应实施计量。国家市场监督管理总局令第39 号《检验检测机构监督管理办法》第十三条规定，检验检测机构不得出具不实检 验检测报告，检验检测机构出具的检验检测报告，使用未经检定或者校准的仪器、设备、设施，并且数据、结果存在错误或者无法复核的，属于不实检验检测报告。该规定进一步明确了测量设备计量溯源工作的重要性。 1高效液相色谱简介 高效液相色谱技术始于20世纪60年代末期，在气相色谱和经典液相色谱法 基础上发展起来的新型分离分析技术，具有高压、高效、高灵敏度、分析精准、
高效液相色谱仪的性能检查 一、实训目标 1．了解HPLC仪器的基本构造和工作原理，把握高效液 相色谱仪的基本操作； 2．认识高效液相色谱仪仪器性能检查的项目和办法； 3．把握液相色谱柱性能指标（如理论塔板数、峰不对称因子、柱的反压等）的测定办法，学会判别其性能优劣。二、实训原理 1．高效液相色谱仪的性能指标 (1)流量精度仪器流量的精确性，以测量流量与指示流量的相对偏差表示。 (2)检测限本试验用法紫外检测器，其检测限为某组分产生的信号大小等于2倍噪声时，每毫升流淌相所含该组分的量。 (3)定性重复性在同一试验条件下，组分保留时光的重复性，通常以被分别组分的保留时光之差的相对标准偏差来表示（RSD≤1％认为合格）。 (4）定量重复性在同一试验条件下，组分色谱峰峰面积（或峰高）的重复性，通常以被分别组分的峰面积的相对标准偏差来表示（RSD≤2％认为合格）。 2．液相色谱柱的性能指标一支色谱柱的好坏要用一定的指标来举行评价。通常评价色谱柱的主要指标包括：理论塔板数N；峰不对称因子；两种不同溶质的挑选性（(a)；色谱柱的反压；键合固定相的浓度；色谱柱的稳定性等。一个合格的色谱柱评价报告起码应给精彩谱柱的基本性能参数，如柱效能（即理论塔板数N)、容量因子k、分别度R、柱压降等。评价液相色谱柱的仪器系统应满足相当高的要求：一是液相色谱仪器系统的死体积应尽可能小；二是采纳的样品及操作条件应该合理，在此合理的条件下，评价色谱柱的样品可以彻低分别并有适当的保留时光。不同类型色谱柱性能评价所需的样品与所采纳的操作条件是不同的，可查阅相关参考资料。三、实训仪器与试剂 1．仪器 PE200型高效液相色谱仪或其他型号液相色谱仪（一般配置，带紫外检测器）；TC4色谱工作站或其他色谱工作站；色谱柱［PEBrownleeC18反相键合相色谱柱（5μm,4.6mmi.d.×150mm)];100μL平头微量注射器；超声波清洗器；流淌相过滤器；无油真空泵；容量瓶等玻璃仪器。 2．试剂；；；菲（A.R.）；(HPLC纯）；等。四、实训步骤 1．预备工作 (1）流淌相的预处理