正置显微成像系统
1.主机
（1）光学系统：无限远校正光学系统，保证光通过目镜到物镜整个光路中的所有棱镜及镜片时的绝对平行；
（2）具有明场具有顶部摄像出口；
（3）五位物镜转换器；
（4）放大倍数：40X-400X；
（5）透射光照明：卤素灯光源；
（6）调焦：带有同轴粗、微调焦装置；调焦旋钮高度可调节、操作舒适；
（7）宽视野三目镜筒，倾角30度
（8）载物台：低位置同轴驱动旋钮的高抗磨损性陶瓷覆盖层载物台；
2. 光学部件
（1）万能聚光镜：带有孔径光阑的聚光镜
（2）物镜：4X或5X（NA=0.12）工作距离≥12mm
10X（NA=0.25）工作距离≥6mm
40X（NA=0.65）工作距离≥0.36mm
100X（NA=1.25）工作距离≥0.17mm
（3）目镜：10X宽视野目镜
3. 图像捕捉及分析系统
摄录系统：与显微镜同品牌高分辨率显微成像系统
有效像素≥1000万像素
像素面积：3.4u x 3.4u
彩色深度：36位RGB色彩深度
4. 软件：图像分析系统基本平台：
（1）用户界面，工作流程导向用户界面，操作容易和符合人工学要求。优化的数据处理为快速采集图像和大量数据集显示，直观的设定实验条件给快速设置和采集单色通道图像，多次采集后做图像叠加。（2）采图，高速图象采集。完全控制照相机性能如曝光，增益，binning，黑的，白的和伽马值，局部图象采集。图象显示和管理，大图象视窗在采集中或后复览显示单通道，多通道图像。
（3）图象滑动杆作快速地在大量数据集中滚动，实验树结构管理数据如储存、重新命名、拷贝、删除、输出为tif,avi,jpeg.接触实验条件来输出为XML或使用在另外的实验中。
品名型号数量供货单价备注 奥林巴斯生物成像系统显微镜CX31 1套30000元见配置清单奥林巴斯生物显微镜CX23 1套25000元见配置清单备注：以上为人民币含税报价单，含运费和包装培训费，壹年保修期。 生物显微镜CX31技术规格： 用途：可观察普通染色的切片观察。 1．工作条件 1.1 适于在气温为摄氏-40℃～＋50℃的环境条件下运输和贮存，在电源220V （ 10%）/50Hz、气温摄氏-5℃～40℃和相对湿度85%的环境条件下运行。 1.2 配置符合中国有关标准要求的插头，或提供适当的转换插座。 2．主要技术指标 2.1 生物显微镜 *2.1.1 光学系统：无限远光学矫正系统，齐焦距离必须为国际标准45mm。 2.1.2 放大倍率：40-1000倍 *2.1.3 载物台：钢丝传动，无齿条结构，尺寸为188mm × 134mm，活动范围为 X轴向76mm × Y轴向50mm，双片标本夹 2.1.4 调焦机构：载物台垂直运动由滚柱（齿条—小齿轮）机构导向，采用粗 微同轴旋钮，粗调行程每一圈为36.8mm，总行程量为25mm，微调行程为每圈 0.2mm，具备粗调限位挡块和张力调整环 2.1.5 聚光镜：带有孔径光阑的阿贝聚光镜，N.A. 1.25，带有蓝色滤色片 *2.1.6 照明系统：内置6V30W卤素灯，内置透射光柯勒照明 *2.1.7 三目观察筒：视场数≥20，瞳距调节范围为48-75mm，铰链式 2.1.8 目镜：10X，带眼罩，视场数≥20带目镜测微尺 *2.1.9 物镜：平场消色差物镜4X（N.A.≥0.1）、10X（N.A.≥0.25）、40X（N.A.≥0.65）、 100X（N.A.≥1.25）
1、目的：制定显微镜的操作规程，使检验人员正确使用显微镜。 2、适用范围：适用于显微镜的操作。 3、责任人：检测员。 4、正文： 4.1.仪器调整 4.1.1.将亮度调节轮调至最小，并关上开关。 4.1.2 将电源插头插入外接电源插座（插入前应检查外接电源电压与仪器所需输入电压是否一致）。 4.1.3 开启开关，拨动亮度调节轮至适当位置。 4.1.4 转动物镜转换器，将4×物镜置入光路中。 4.1.5 转动聚光镜升降手轮，使聚光镜上升至定位位置。 4.1.6 将标本置于载物台上，用片夹将其固定，利用载物台纵横移动手轮，将标本欲观察部分移入可观察的光路中。 4.1.7 拨动光栏拨杆，将孔径光栏升至中间位置。 4.1.8 用右眼观察，转动粗手轮使载物台缓慢上升至标本轮廓可见，再用微调手轮精细调焦到标本物象清晰。 4.1.9 视度调节，通常人的左右眼视度不完全一致，显微观察时应进行视度补偿。此时用左眼观察，并转动左目镜筒上的视度调节圈，使之成像清晰。 4.1.10 瞳距调节，双手握住双目外壳转动，使两目镜出瞳中心距离适合您的两眼瞳距（使两眼观察图像重叠合一为止）。 4.1.11 根据需要，选择10×, 40×, 100×等物镜后通过微调，对物体进行精调焦直至清晰。 注意：使用高倍物镜时，标本盖玻片厚度应为0.17±0.01mm，否则会影响图像的清晰度。 4.2 物像衬度调整：一般情况下，目镜视场中像的衬度依赖于标本物体本身的衬度，然而对于同一标本物体，合理地调整光源亮度，孔径光栏大小，会得到良好的物像衬度。所以不应只靠关小孔径光栏来降低视场中的亮度，当取下目镜向镜筒内观察时可看见孔径光栏像，调整孔径光栏，使其像充满物镜后光孔的70%-80%，通常效果会比较好。
编号： 凝胶成像系统可行性论证报告 设备名称凝胶成像系统 申购单位（公章）申请人 填表日期 论证日期
一、申购仪器设备概况 设备名称 中文凝胶成像系统 英文Gel imaging system 型号规格GelDoc TM XR+ 国别美国厂商Bio Rad 申购数量壹台价格?万人民币安装地点 经费来源 主要功能功能涵盖以下几个方面： -溴化乙锭等荧光物质标记的核酸琼脂糖凝胶检测； -银染或考马斯亮蓝染色聚丙烯酰胺凝胶检测； -其他常见紫外激发荧光染料标记的生物大分子检测； -曝光显影后的X光胶片等成像材料的检测。 -确定生物分子的分子量；可以应用于生物分子的定量分析中。 技术指标可成像样品：不透光样品如照片、纸张、杂交膜等；荧光样品如EB染色的DNA 凝胶、SYBR Safe荧光染色DNA凝胶、Radiant Red荧光染色的RNA凝胶等；各种染色的蛋白质凝胶如考染、银染、SYPRO Ruby或Oriole荧光染色等 1. *CCD分辨率：1360 ×1024（1.4M） 2. 动态范围>3个数量级，12 bit灰度级（非插值） 3. *CCD控制：马达自动控制 4. 镜头缩放：8.5-51mm镜头 5. 暗箱：密封暗箱可用于化学发光检测，并可通过更换CCD和镜头升级至化学 发光成像仪 6. 滤光片：标配2个，3个可选 7. 备有校正镜头曲面度的专用滤光片 8. 平场校正板，美国专利号5,951,838（可选） 9. 三块自动对焦校正板，确保成像过程无需再次调节
10. 灵敏度：0.1ngEB染色的DNA 11. 信噪比：>=56dB 12. 曝光时间：最短0.001s，每0.001s步进 13. 样品大小：28x36cm 14. *成像区域大小：25x26cm 15. 光源：透射白光，反射白光，透射紫外，透射蓝光（可选） 16. 紫外光源：302nm，可选254nm/365nm 17. 紫外光源：制备型紫外模式保护要回收的核酸样品 18. 紫外自动光闭保护 19. UV防护板：方便直接用紫外平台进行样品肉眼观察 20. 切胶尺：切割凝胶 21. 荧光尺：系统检测并用于测量长度 22. 具体应用范围： -核酸凝胶：Ethidium bromide、SYBR? Green、SYBR? Safe、SYBR? Gold、GelGreen?、GelRed?、Fast Blast?； -蛋白凝胶：Coomassie Blue、Copper stain、Zinc stain、Flamingo、Oriole、Silver stain、Coomassie Fluor Orange、SYPRO Ruby、Krypton； -印迹膜：Colorimetric、Qdots 525、Qdots 565、Qdots 625、CY2、Alexa 488、DyLight 488、Fluorescein。 23. 软件功能 -全自动ImageLab专业成像及分析软件对系统进行自动控制，包括采集、优化、定量、分析图像及报告输出。 -软件可编程，所编程序可重复调用或再编辑 -软件可自由安装于多台电脑，同时分析 -软件可控制曝光时间以看到微弱信号 -显示过饱和像素保证精确定量 -所有成像过程均保持自动对焦 -添加各种格式的文字注释 -自动条带检测，自动分子量测算，自动条带浓度测算
2014年的诺贝尔理综奖颁发给了“超分辨荧光显微技术”。也许接下来的几天，媒体会关注StefanHell、EricBetzig二人的传奇经历，或者另一名华人女科学家与该奖项失之交臂的遗憾。但是八卦之外，这项成果背后的科学本身也非常有意思。 这里面有三个关键词：“超分辨”、“荧光”和“显微技术”，我希望能够解释清楚以下几个问题，尤其是后两个问题： 1.为什么需要（光学）显微技术？ 2.为什么光学显微镜的分辨率存在理论极限？ 3.用怎样的方法可以突破这个理论极限以达到“超分辨”？为什么这个理论极限可以被突破？ 5.为什么非得是荧光显微技术，而非普通的明场（透射光）显微技术？ 1.采样定理与显微镜 我们用肉眼观察或者用相机拍摄一个物体时，物体上的每一个细微的点都会在眼睛的视网膜或是相机的感光芯片上成像。那么我们为什么不能看到细菌等微小的东西，为什么不能把照片无限放大以看清远处树木上面的每一片叶子呢？ 这个问题的答案比较简单：因为组成视网膜的每一个感光细胞（视杆细胞和视锥细胞）、相机芯片上的每一个感光元件（CCD、CMOS等）都是有大小的。比如视网膜中央凹区域的视锥细胞直径平均约为5微米。而由于奈奎斯特-香农采样定理的限制，视网膜上能分清的两个相邻像点的距离是视锥细胞直径的两倍，即10微米。再结合眼球的构造，大致可以推断出，在距离眼睛25厘米的位置，我们能分辨物体上相距为80微米的两个点，换算成点阵密度就是大约320ppi，这也是苹果所谓“视网膜屏”分辨率的来历。
如果要观察小于80微米的物体，比如细菌，就需要先将物体放大，再用眼睛或者相机观察。现代光学显微镜的构造其实非常简单，样品放置在物镜的焦点处，从样品上发射或散射的光经过物镜变成平行（准直）光，再经过一个结像透镜，然后会聚到相机的感光芯片上成像。 按照前面的方法来推算，要区分物体上相距为200纳米的两个点，如果使用科研级相机，比如最近火起来的sCMOS相机（每个感光像素尺寸为6.5微米），只需要使用放大倍率为65倍的物镜就足够了。 那么是否可以通过提高物镜的放大倍率来观察低于200纳米的物体，比如细胞里面微管呢？ 答案是不可以。 2.光学衍射极限 由于光是一种电磁波，具有衍射和干涉的特性。 图1.光学显微镜简化示意图 如上面的简图所示，紫色箭头表示的物体PQ经过物镜等之后在相机上成像为 P'Q'。由于光的衍射，物体上的点如P、Q，在相机上并不是单独的点，而是一个个有一定大小的斑，被称为夫琅禾费衍射斑（或称艾里斑），如右侧的同心圆所示。那么，当P'、Q'相距太近的时候，两个斑会叠加导致难以分辨。这就要求物体上的P、Q要相距一定的距离。 1873年，德国物理学家、卡尔蔡司公司的恩斯特·阿贝（ErnstAbbe）首次推算出衍射导致的分辨率极限。根据瑞利判据——“当一个像斑的中心落到另一个像斑的边缘时，就算这两个像刚好能被分辨”，显微镜能分辨的物体上两点P、Q 的最小距离h为：
XSP-BM生物显微镜操作规程 一、工作环境： 室内使用；海拔最高2000米。环境温度：5-35℃.相对湿度：＜80% 供电电压波动：不超过正常电压的±10% 二、安全注意事项： 1.把显微镜安放在坚固平坦桌面或工作台上，不要堵塞镜基底座下面的通风口，不要 把显微镜放在柔软表面上，这样会堵住通风口，造成灯室过热。 2.显微镜安放时不要受阳光直射，离开墙壁20公分以上。 3.显微镜连接电源是，要把开关拨到关的位置，插上与镜体连接插头，然后确认墙上 的电源插座与镜体标示电压一致后，再把电源插头插上墙上电源插座。电源插头上的接地端必须与墙上电源插座的接地端可靠连接，如果墙上电源插座无接地端孔，不准用接线板连接供显微镜用电。 4.更换灯泡时，主开关拨到关，电源线插头从墙上电源插座拔下，切不可用手直接拉 电源线强行拉下。待灯室灯泡冷却后才能更换。 5.千万不要把金属物插入显微镜镜架底座的通风孔中，这样会造成触电、人身伤害和 仪器损坏。 6.显微镜是精密光学仪器，使用时要小心并避免突然剧烈的震动或撞击。 7.移动显微镜时，要用双手握住镜架主体和基座底部，不能拎观察镜筒。 8.显微镜不能从低温环境中，马上移入高温环境中，这样会造成光学零件、玻璃表面 结霉发霉，图像调焦不清，无法观察。 三、使用前的准备 1.样品标本：把采集的样品经过专业技术处理，制作成标本供显微镜检验观察。在使 用之前，先把采集的样品进行专业技术处理，如把采集的样品培养、稀释、切片、染色等等。 2.准备一些辅料和用具：如酒精、乙醚、浸油、试剂、脱脂纱布、脱脂棉花、镊子钳 和吹耳球等。桌面抢劫整齐，不放与工作无关的其他物品。 四、使用方法 1.开启电源开关到“I”，通过调节钮进行光亮度调节。
光学显微镜的原理及构造显微镜是人类认识物质微观世界的重要工具，是现代科学研究工作不可缺少的仪器之一。显微镜自1666年问世以来已有300多年的历史了，其间随着科学技术不断发展，显微镜的品种不断增加，结构和性能逐步得到完善和提高。 根据不同的使用用途，光学显微镜可分为普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、倒置显微镜、体视显微镜、偏光显微镜等10多种。目前，世界上许多国家都可以生产光学显微镜，牌名、种类繁杂，其中德国、日本等国制造的显微镜品质、数量占优势，但价格昂贵。 对于现代的光学显微镜，包括各种简单的常规检验用显微镜、万能研究以及万能照相显微镜等，首先要认识其构造及各部件的功能，同时要掌握正确的调试、使用和保养方法，才能在实际应用中面对各种要求时以不同的显微镜检方法，充分发挥显微镜应有的功能，提高常规检验工作效率. 光学显微镜的原理和构造 随着科学技术的发展，显微镜检方法由最传统的明视野、暗视野发展出了相差法、偏光方法；荧光方法也由透射光激发进展为落射光激发，使荧光效率大为提高；微分干涉相衬方法基于偏光方法，而巧妙地利用了微分干涉棱镜，使之能应用于医学与生物学的样品，又能应用于金相样品的分析与检验。 下面以德国ZEISS公司生产的Axioplan万能研究用显微镜，简单介绍万能显微镜的基本组成部件。 1. 显微镜主机体（stand） 显微镜的主机体设计成金字塔形，而底座的截面呈T字形，使显微镜的整体相当稳固。显微镜的光学部件和机构调节部件、光源的灯室、显微照相装置、电源变压稳压器等，都可安装在主机体上或主机体内。 2. 显微镜的底座（base） 底座和主机体通常组成一个稳固的整体。底座内通常装有透射光照明光路系统（聚光、集光和反光）部件，光源的滤光片组，粗/微调焦机构，光源的视场光阑也安装在底座上。 3. 透射光光源（tranilluminator） 透射光光源由灯室（lamp housing）、灯座（lamp socket）、卤素灯（halogen lamp）、集光与聚光系统（lamp collector and lamp condenser）及其调整装置组成。 4. 透射光光源与反射光光源的转换开关（toggle switch） 这是新一代AXIO系列显微镜特有的装置，透射光和反射光可通用。当具有透/反两用的配置时，利用这一转换开关能方便而又迅速的使透射光 和反射光互相转换。在纯透射光的配置中，这一开关就改为电源开关。
正置显微镜操作规程 1 目的 1.1 规范正置显微镜的使用和维护操作程序和方法，确保检验观察的正确性。 2 范围 2.1 适用于本中心正置显微镜的使用和维护。 3 职责 3.1 设备使用人有责任按本规程进行正确的操作和维护。 4 程序说明 4.1 操作前准备 4.1.1首先根据需要安装好目镜，物镜和光源部分，将准备好的载玻片置于载物台上。 4.1.2旋转物镜转换器，将物镜置于光路中，先自低倍开始，根据被观察物的特征，依次增高显微镜倍数。 4.1.3每次观察前，先将物镜调至与载玻最近距离处，再从目镜注视视野情况，缓慢由下向上凋节升降螺旋至视野内出现物像后，再调节细螺旋，至物像清晰。 4.2 低倍镜观察 4.2.1取镜和放置：显微镜平时存放在台面或箱中，使用时，右手紧握镜臂，左手托住镜座，将显微镜放在自己左肩前方的实验台上，镜座后端距桌边1-2寸为宜，便于坐着操作。 4.2.2对光：用拇指和中指移动旋转器（切忌手持物镜移动），使低倍镜对准镜台的通光孔。打开光圈，上升集光器，直到视野内的光线均匀明亮为止。 4.2.3放置玻片标本：取一玻片标本放在镜台上，一定使有盖玻片的一面朝上，切不可放反，用推片器弹簧夹夹住，然后旋转推片器螺旋，将所要观察的部位推到通光孔的正中。 4.2.4调节焦距：以左手按逆时针方向转动粗调节器，使镜台缓慢的上升至物镜
距标本片约5毫米处，应注意在上升镜台时，切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标本片的损坏。左手顺时针方向缓慢转动粗调节器，使镜台缓慢下降，直到视野中出现清晰的物象为止。如果物象不在视野中心，可调节推片器将其调到中心（注意移动玻片的方向与视野物象移动的方向是相反的）。如果视野内的亮度不合适，可通过升降集光器的位置或开闭光圈的大小来调节，如果在调节焦距时，镜台下降已超过工作距离（>5. 40毫米）而未见到物象，说明此次操作失败，则应重新操作，切不可心急而盲目的上升镜台。 4.3 高倍镜观察 4.3.1选好目标：一定要先在低倍镜下把需进一步观察的部位调到中心，同时把物象调节到最清晰的程度才能进行高倍镜的观察。 4.2.2转动转化器，调换上高倍镜头，转换高倍镜时转动速度要慢，并从侧面进行观察（防止高倍镜头碰撞玻片），如高倍镜头碰到玻片，说明低倍镜的焦距没有调好，应重新操作。 4.2.3调节焦距：转换好高倍镜后，一般能见到一个不太清楚的物象，可将细调节器的螺旋逆时针移动约0. 5-1圈，即可获得清晰的物象。如果视野的亮度不合适，可用集光器和光圈加以调节，如果需要更换玻片标本时．必须顺时针转动粗调节器使镜台下降，方可取下玻片标本。 4.4 油镜观察 4.4.1在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。 4.4.2将集光器上升到最高位置，光圈开到最大。 4.4.3转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。 4.4.4慢慢转动细调节器至物象清晰为止。如果不出现物象或者目标不理想要重找，在加油区之外重找时，应按照低倍→高倍→油镜程序操作；在加油区内重找应按照低倍→油镜程序操作，不得用高倍镜，以免由沾污镜头。 4.4.5油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，
一、超微型显微成像系统产品介绍如下所示： 1.功能和用途 1.1功能 1.1.1系统组件包括显微镜镜体、固定板、GRIN透镜、CMOS、图像采集卡及采集软件等。 1.1.2在单细胞分辨水平，记录一群神经元的钙信号。 1.1.3适用于自由活动动物的在体实验。 1.1.4通过植入GRIN透镜，可以实现深脑成像。 1.1.5系统体积小、重量轻，不影响小鼠自由运动和行为实验。 2.1用途： 2.1.1用于行为动物在体钙成像的超微型显微成像系统。 2.1.2检测新型可遗传编码的乙酰胆碱和多巴胺等探针的荧光变化，即可实时监测乙酰胆碱、多巴胺等浓度的动态变化情况。 二、产品彩图：
Miniature Fluorescent Microscope 1.1 function 1.1.1 System Components include Miniscope body、Base Plate、GRIN Lens、CMOS、DAQ card and software； 1.1.2 Record the calcium signal of a group of neurons at the single cell resolution level; 1.1.3 experiments for freely moving animals; 1.1.4 Deep brain imaging can be achieved by implanting a GRIN lens; 1.1.5 The system is small in size and light in weight, and does not affect the free movement and behavioral experiments of mice. 2.1 Uses: 2.1.1 Ultra-microscopic microscopic imaging system for in vivo calcium imaging of behavioral animals. 2.1.2 To detect the changes in the fluorescence of new genetically-encoded probes such as acetylcholine and dopamine, the dynamic changes of concentrations of acetylcholine and dopamine can be monitored in real time.
中国医科大学实验技术中心 主要实验仪器及相关技术 倒置荧光显微镜CCD 成像系统仪 器 名 称 Inverted Fluorescence Microscope with Digital CCD Imaging System 型 号 IX71/DP70 生 产 厂 OLYMPUS 国 别 日本 所在科室 实验技术中心三部 综合楼10F 负 责 人 赵蕾 薛晓霞 联系电话 23256666转5104，5100 起用日期 2002.09 主要技术指标及配置： IX71倒置荧光显微镜 调焦：粗调/微调机制，最小微调刻度1μm ，一圈100μm 三目镜筒，目镜：10×/FN22.0；通用长工作距离聚光镜NA0.55 WD27mm ； 配置DIC 相差（10×、20×、40×）、相差（4×、10×、20×、40×、60×）装置 物镜： 4×、10×、20×、40×、60×，适于荧光、DIC 相差、相差观察 透射光照明：12V100W 卤素灯，带TTL 触发控制、光标指示 落射荧光：IX-RFA/U-LH100HGAPO 100W 汞灯；装有视场光阑调节机制 激发/发射滤光片组件：UV （U-MWU2, BP330-385）、IB(U-MWIB2 BP460-490,BA515IF)、IG(U-MWIG2 BP520-550,BA580IF)、BV(U-MWBV2 BP400-440, BA455)、IY(U-MWIY2 BP545-580, BA610IF)、IB GFP/FITC(U-MWIBA/GFP BP460-490, BA510-550)； 需用BV 、IY 激发/发射滤光片组件的实验者要提前说明，以便进行实验配置。 DP70数字CCD 成像 2/3”彩色CCD ，有效像素：1.5MP ，经像素转移技术为4080×3072（12.5MP 像素） 最大图像采集速度：3fps （36bit ，最高分辨率），图像预览：1360×1024，15fps 测光/曝光方式：30％平均测光，1％、0.1%点测光；自动、手动和自动超级荧光(SFL)曝光时间控制：1/44,000秒～60秒 灵敏度：相当于胶片ISO200～ISO1600，分档可选；BINNING ：最高4×4 动态范围：36-bit ，文件存储格式48-bit Peltier 半导体制冷：低于环境温度10℃ 图像采集分析软件：图像融合、加校准标尺、测量，序列图像记录和回放、基本的图像处理功能等。图像还可在荧光图像工作站做反卷积去模糊等处理。 可连接35mm 胶片自动显微照像装置（30％平均测光，1％、0.1%点测光；自动、手动和自动超级荧光SFL)。 主要技术功能及适用领域： 1. 细胞静态或动态荧光观察、图像采集；DIC 相差观察、图像采集。 2. 其它在培养器皿内荧光标本或需倒置观察的有关标本的观察、图像采集。 申请实验技术有关事项及自备条件： 1.提前4个工作时预约；使用60×物镜、DIC 观察和35mm 自动显微照像要事先说明。 2.自带纱布或纸，观察前，要擦拭净培养器皿表面水迹。 3.完成实验后，带走样品，不得随意丢弃，并清理实验台面。
显微镜标准操作规程 目的：制订显微镜的标准操作规程。 适用范围：各类检定菌及物料的显微镜鉴别。 责任：显微镜操作人员对本规程实施负责。 程序： 1.显微镜主要包括物镜、目镜、聚光镜、反射镜四部分。还包括照明光源、滤光片、载玻 片和盖玻片。 2.采光 2.1用低倍镜对准栽物台中央之圆孔。 2.2打开光圆对好光源（不能直接对太阳光）。 3.观察照明是否良好，视野是否均匀。 4.调节焦距：从侧面注视物镜头，将大螺旋把镜筒转下，至镜头将接近标本玻片为止（注意 两者不能相碰，避免损坏），再从目镜观察，同时将大螺旋把镜筒慢慢转上，至视野内可见物象为止，再用小螺旋调节光线，以供视野内可见物象为止，再用小螺旋调节至物象清楚。 5.调节光线：使用聚镜或光圈调节光线，以供视野适宜光度。 6.观察步骤 6.1先用低倍镜观察全景，再转高倍镜进行局部观察。 6.2从低倍镜转到高倍镜时，必须在低倍镜下把目视移到视野中心，然后把镜筒转上，再转 动物镜转盘，将高倍镜对准标本，然后调节焦距。 6.3镜检时，须两眼同时睁开、用左眼观察，以便右眼以绘图或记录。 6.4使用完毕，进行使用登记。 7.注意事项 7.1拿镜时必须用右手紧握镜臂，左手平托镜座，注意放平放稳。 7.2使用时必须按步骤小心缓慢转动。 7.3使用高倍镜观察液体标本时，一定要加盖玻片，否则，不仅清晰度下降，而且试液会浸 入高倍镜的镜头内，使镜片受到污染和腐蚀。 7.4显微镜应在清洁、干燥、无震动、无腐蚀性气体存在的工作室操作。
7.5要保持清洁，勿使尘埃、污物、手指等接触光学部分。 7.6镜内零件不得任意拆出，或与他镜调换。 7.7用完后，把镜臂复原，物镜转成人字形，接近载物台。 7.8擦拭光学系统，必须用镜头纸，不准用毛巾、手帕、衣服擦拭，更严禁用手擦拭。乙醚、 酒精不可用得过多，以免脱胶。镜片表面有一层紫兰色的透光膜，不要误作污物来擦拭。
凝胶成像系统 操作规程： 1. 打开成像仪器电源，将样品放入工作台。 2. 双击桌面上图标，打开Quantity One 软件，或从开始-程序-The Discovery Series/Quantity One进入。 3. 从File下拉菜单中选择ChemiDox XRS，打开图像采集窗口。 4. Select Application 选择相关应用： a UV Transillumination 透射UV：针对DNA EB胶或其他荧光； b White Transillumination 透射白光：针对透光样品如蛋白凝胶，X-光片； c White Epillumination 侧面白光：针对不透光样品或蛋白凝胶； d Chemiluminescnec e 化学发光，不打开任何光源。 5. 单击Live/Focus按钮，激活实时调节功能，此功能有三个上下键按钮：IRIS（光圈），ZOOM （缩放），FOCUS（聚焦），可在软件上直接调节或在仪器面板上手工调节，调节步骤：a调节IRIS 至适合大小；b点ZOOM将胶适当放大；c调节FOCUS至图像最清晰。 6. 如是DNA EB胶或其他荧光，单击Auto Expose，系统将自动选择曝光时间成像，如不满意，单击Manual Expose，并输入曝光时间（秒），图像满意后保存。 如是蛋白凝胶，接第5步骤直接将清晰的图像保存即可；如是化学发光样品，将滤光片位置换到Chemi位（仪器上方右侧），将光圈开到最大，输入Manual Expose时间，可对化学发光的弱信号进行长时间累积如30min，或单击Live Acquire 进行多帧图像实时采集，在对话框内定义曝光时间长短，采集几帧图像，在采集的多帧图像中选取满意的保存。
显微镜成像系统技术参数 总体要求：配置三目显微镜、CCD、图文采集系统、电脑等。 一、显微镜技术参数 1、正置显微镜 2、用途：可观察普通染色的切片，适合染色切片观察等广泛生命科学领域的研究。 3、技术要求 3.1、光学系统：IC2S无限远色差反差双重校正光学系统，45mm国际标准物镜齐焦距离。 3.2、调焦：谐波齿轮精细同轴粗微调焦机构，内置免调节防下滑机构，不使用易损坏的外调节松紧调节环，调焦行程25mm，可设置调焦上限。 3.3、明场照明装置： 3.3.1、内置透射光科勒照明器，12V 50W卤素灯； 3.3.2、带杯罩式反射光收集器； 3.3.3、集成式双侧单手亮度调整转盘，可在调焦时方便同时调整光源亮度；3.3.4、集成式减光片转轮和0.25/0.06/0.015减光片； 3.3.5、带白平衡滤色片。 3.4、载物台：高抗磨损性圆角、无槽金属阳极化处理载物台，带控制手柄。3.5、观察镜筒： 3.5.1、超宽视野三目镜筒，视场数≥23mm，倾角30度。 *3.5.2、目镜筒360度自由旋转、上下自由翻转，实现40mm观察高度调节 3.5.3、瞳距48-75mm可调 3.6、目镜 3.6.1、10倍超宽视野目镜，高眼点设计，视场数≥23mm 3.6.2、两个目镜均具有屈光度校正功能 3.6.3、物镜：针对正置显微镜应用优化的高分辨率、高透过率物镜 平场消色差物镜5×，数值孔径：NA≥0.12； 平场消色差物镜10×，数值孔径：NA≥0.25; 平场消色差物镜20×，数值孔径：NA≥0.45; 平场消色差物镜40×，数值孔径：NA≥0.65； 平场消色差物镜100×，数值孔径：NA≥1.25 3.6.4、物镜转换器：6位物镜转盘，一体化设计，增强光路稳定；国际标准的M27物镜接口，具有齐焦功能。 *3.6.7、聚光镜：非摆动式高分辨率多功能聚光镜：NA≥0.9/1.25。在5x物镜观察下，无需摆动操作；带科勒照明调整后锁定装置。
2014 年的诺贝尔理综奖颁发给了“超分辨荧光显微技术”。也许接下来的几天，媒体会关注 Stefan Hell、Eric Betzig 二人的传奇经历，或者另一名华人女科学家与该奖项失之交臂的遗憾。但是八卦之外，这项成果背后的科学本身也非常有意思。 这里面有三个关键词：“超分辨”、“荧光”和“显微技术”，我希望能够解释清楚以下几个问题，尤其是后两个问题： 1. 为什么需要（光学）显微技术？ 2. 为什么光学显微镜的分辨率存在理论极限？ 3. 用怎样的方法可以突破这个理论极限以达到“超分辨”？为什么这个理论极限可以被突破？ 5. 为什么非得是荧光显微技术，而非普通的明场（透射光）显微技术？ 1. 采样定理与显微镜 我们用肉眼观察或者用相机拍摄一个物体时，物体上的每一个细微的点都会在眼睛的视网膜或是相机的感光芯片上成像。那么我们为什么不能看到细菌等微小的东西，为什么不能把照片无限放大以看清远处树木上面的每一片叶子呢？ 这个问题的答案比较简单：因为组成视网膜的每一个感光细胞（视杆细胞和视锥细胞）、相机芯片上的每一个感光元件（CCD、CMOS等）都是有大小的。比如视网膜中央凹区域的视锥细胞直径平均约为 5 微米。而由于奈奎斯特-香农采样定理的限制，视网膜上能分清的两个相邻像点的距离是视锥细胞直径的两倍，即 10 微米。再结合眼球的构造，大致可以推断出，在距离眼睛 25 厘米的位置，我们能分辨物体上相距为 80 微米的两个点，换算成点阵密度就是大约 320 ppi，这也是苹果所谓“视网膜屏”分辨率的来历。 如果要观察小于 80 微米的物体，比如细菌，就需要先将物体放大，再用眼睛或者相机观察。现代光学显微镜的构造其实非常简单，样品放置在物镜的焦点处，从样品上发射或散射的光经过物镜变成平行（准直）光，再经过一个结像透镜，然后会聚到相机的感光芯片上成像。 按照前面的方法来推算，要区分物体上相距为 200 纳米的两个点，如果使用科研级相机，比如最近火起来的 sCMOS 相机（每个感光像素尺寸为 6.5 微米），只需要使用放大倍率为 65 倍的物镜就足够了。 那么是否可以通过提高物镜的放大倍率来观察低于 200 纳米的物体，比如细胞里面微管呢？ 答案是不可以。 2. 光学衍射极限 由于光是一种电磁波，具有衍射和干涉的特性。
为了保证使用过程中对设备操作的规范性,为操作人员提供一份标准的操作方法,避免因人为操作不当造成设备损坏,以保证使用的正常进行和设备的使用寿命。 2.范围： 此标准操作程序适用于XSP-1C显微镜。 3.职责： 实验室人员按此文件正确的使用和维护XSP-1C显微镜。 4.内容： 4.1. 操作前准备： 4.1.1. 将显微镜平稳的放至在实验桌上。 4.1.2.打开开关，调节光源，将10*平场目镜转入通光孔，将聚光器上的虹彩光圈打 开到最大位置，用左眼观察目镜中视野的亮度，转动反光镜，使视野的光照达 到最明亮最均匀为止。光线较强时，用平面反光镜；光线较弱时，用凹面反光 镜。 4.1.3. 用擦镜纸将10*平场目镜、物镜(10*/0.25、100*1.25消色差物镜，半平场物 镜40*/0.65) 擦拭干净。 4.2．操作程序 4.2.1. 低倍镜观察： A. 将标本片放置载物台上，用标本夹夹住；转动横向、纵向移动手轮，使被观察 的标本处在物镜正下方。 B. 转动粗动手轮，使载物台降至最低位置，旋上所需物镜。 C. 把10*平场目镜转入光路，插入目镜，并降聚光镜升至最高位置。 D. 转动粗调节旋钮，慢慢升起载物台，直至物像出现。 E. 再用细调节旋钮使物像清晰为止。 4.2.2. 高倍镜观察： A. 用半平场物镜40*/0.65观察： a. 先按步骤2使物像清晰，转换高倍物镜。 b. 从目镜观察，调节光源亮度。 c. 缓慢调节粗调节旋钮，使载物台上升，直至物像出现。 d. 再用细调节旋钮使物像清晰为止。 B. 用100*1.25消色差物镜观察（油镜）： a. 先按步骤2使物像清晰，转出物镜。 b. 在玻片标本的物检部位滴上一滴香柏油。 c. 从侧面注视，用粗调节旋钮将载物台缓缓的上升，使100*1.25消色差物镜 浸入香柏油，使镜头几乎与标本接触。 d. 重新调节光线亮度：从目镜内观察，放大视场光阑及聚光器上的虹彩光圈， 上调聚光器至顶位，使光线充分照明。
凝胶成像分析系统 产品特点 凝胶图像分析:智能自动识别泳道条带：采用先进的自动识别算法，可以帮您自动识别出泳道/条带并且编号，您还可以根据自己的要求添加或删除泳道或条带，移动泳道和调整泳道。 密度比较：对指定泳道进行光密度扫描，绘出扫描曲线，并计算出该泳道中各条带的密度积分和峰值，此外，还可以对每一条带的光密度测定范围进行微调，并可以对多个泳道进行对比查看。 分子量光密度和迁移率的计算：通过简单易用的向导工具。可以对选定的标准泳道中的条带进行分子量或光密度定标，然后根据定标结果自动计算出各条带的分子量和光密度。通过迁移率向导工具由用户指定的基线和前沿线可自动计算出每个条带的迁移率。 分析结果数据导出：通过无缝当然数据连接技术，可以将分子量、光密度分析结果报表和迁移率分析结果报表导出到文本文件或Excel格式文件。 撤消和重做功能：对所有的分析操作可以无限的撤消和重做，您不必再为一时操作错误而后悔。 注释功能：提供了矩形、空心矩形、椭圆、空心椭圆、直线、多样式箭头、文字框、插入图片等多种注释工具、对图像进行比例放缩 图象处理：图像的负像，图像的旋转，图像的对比度、亮度调整，自动图像优化系统管理：支持Windows98/2000/XP系统，能保存多种格式的图像，图像的打印 系统配置 数码型（推荐产品） 模拟型
技术参数 外型尺寸（L×W×H）：440×430×770mm； 反射紫外光源波长：254nm、365nm； 透射紫外光源波长：312nm； 紫外光透射面积：200×250mm。 环境条件： 环境温度：5℃～40℃； 相对湿度：≤80%RH； 大气压力：86kpa～106kpa。 电源条件： 电源电压：单相正弦交流220V±22V； 频率：50Hz±1Hz。 其它： 各波长的紫外光源的窗口辐照度不小于10μW/cm２； 白光照度≥100LX(勒克司)； 可以连续工作时间4小时。 数字摄像头能够通过与计算机连线实现摄影成像控制，分析软件可实现图像编辑处理，泳道自动识别，分子量计算、上样量分布计算等。
倒置式金相显微镜的操作规程 摘要:倒置式金相显微镜的实用操作规范, 可以保证金相显微观察的效果, 也利于设备保护。但是,更重要的是规程背后包含更加丰富的内容, 这才是金相显微镜操作过程中需要深入了解的。本文介绍了倒置式金相显微镜的操作规程, 规程细节的详细分析, 以及在实践教学中应用、维护。 关键词: 倒置式; 金相显微镜; 操作规范; 日常维护; 在有些专业显微镜的使用频率非常高的, 有必要全面提高学生的显微镜技术。生物显微镜的操作, 可参考的文献比较多, 但是文献中介绍金相显微镜操作的比较少, 特别是倒置式金相显微镜。由于对样品观察面与背面平行度没有要求, 制样困难小,倒置式金相显微镜的实际应用非常多; 但现在还看不到一个比较适用、完整的。我们根据实际操作经验, 在正确使用、维护显微镜方面介绍一些经验, 供大家参考。 1. 现有文献的不足 随着技术的提高显微镜在不断地更新换代, 显微镜使用方法也要不断地调整。生物显微镜如此, 金相显微镜也是如此。而所能见到的有关金相显微镜操作方面的国内文献在这方面动作比较慢,不适应现在的要求。 1. 1. 关于变压器 近十几年来, 金相显微镜的变压器都已经实现了内置, 操作者从一般的角度出发, 不用再关心是否要连接到一个变压器上, 是否处于安全电压伏数的问题。国外在80年代初, 国内在80年代末, 基本实现了这一设计。不过, 很多最新出版的有关这方面的专业书籍, 还是沿用陈旧的说明: 注意不要直接插到220伏的电源上, 这就太落伍了。当然, 对于早期的显微镜还是需要考虑的。不过只应在操作说明的特别关注部分注明即可, 基本操作规范还是应该跟上技术、设计的发展。 1. 2. 偏重于正置式金相显微镜 在较早的文献中, 关于金相显微镜的操作类似如下的说明是主流, 为保证在聚焦过程中使物镜触及试样, 操作的次序应该是先调节粗动螺丝, 使物镜接近试样的表面, 再通过目镜观察试样, 调整粗动旋钮, 使物镜朝着离开试样的方向移动。必须养成这种操作习惯。有关金属显微组织检验方法的国家标准中也是这样的叙述: 聚焦调节时, 物镜头部不能与试样接触, 应先转动粗调旋钮使物镜尽量接近试样(目测), 然后从目镜中观察的同时调节粗调旋钮, 使物镜渐渐离开样品直到看到显微组织映像时, 再使用微调旋钮调至映像清晰为止。这样的描述, 适用于正置式金相显微镜, 而不太适用于倒置式金相显微镜, 因为使用者根本无法实现这样的操作, 尤其是在采用高倍物镜时, 根本无法观察到物镜与样品表面的距离变化。 1. 3. 操作、维护混杂在一起 这是最常见的。维护工作对一般操作者来讲不必一定了解, 混杂在一起, 容易干扰重点关注的地方。应单独列出管理者、维护者关注的部分。 1. 4. 没考虑不同厂家的金相显微镜在机械构造上的差异
全自动凝胶成像分析系统 全自动电脑程序控制，数字摄像头能够通过与计算机连线 实现摄影成像控制，分析软件可实现图像编辑处理，泳道 自动识别，分子量计算、上样量分布计算等。 保证摄录DNA/RNA凝胶、蛋白质凝胶、印迹杂交膜（包 括Western、Southern、Northern、Slot/点杂交膜)、放 射自显影胶片、酶标板、薄层层析板、化学荧光显影等图像 在低照度下的灵敏度、不掉失条带，终可得到凝胶条带的峰 值、分子量或碱基对数、面积、度、位置、体积或样品总量。 较大程度地控制EB污染，有效保障实验操作人员的健康。 有助于研究人员安全、正确、迅速地得到电泳照片和分析结 果，摆脱繁琐操作过程，提工作效率。 可用于DNA/RNA凝胶、蛋白质凝胶、印迹杂交膜(包括Western、Southern、Northern、Solt、点杂交膜)、放射自显影胶片、酶标板、薄层层析板等图像的成像及分析处理，能对条带、斑点及其他任何目标区域进行地总量分析、分子量分析，聚类分析，同源性分析等。 多功能控制面板，触摸按键，功能选择简单方便 可通过软件或机箱面板进行镜头的变焦、聚焦、光圈、透射紫外灯及反射灯的全自动控制；电动镜头：专业变焦镜头，可轻松调整光圈、缩放及聚焦等参数 顶置白光光源：的均匀性对低亮度的图像进行增强 防UV观察窗：无须开启暗箱门就可以观察样品的情况 切胶口：无须开启暗箱门就可以轻松切胶回收 密闭式暗箱：暗箱设计为凝胶成像提供了条件 定时保护功能：10分钟内没有输入任何命令，全部光源自动关闭，延长使用寿命 双侧反射：双波长紫外光源254、365nm 多种配件可选：紫外白光转换屏，紫外/蓝光转换屏，多波长透照台等 类别ZF-258 ZF-288 CCD芯片1280(H)×1024(V) 133万像素2592(H)×1944(V) 500万像素 动态范围 4.5OD.16bit灰阶，低于20Pg经EB染色的双链DN 像数尺寸 5.7μm×4.28μm 镜头通透电动镜头, 8～48mm 曝光时间0.294ms～2000ms 灵敏度低可检测0.01ngEB染色体DNA 检测信噪比≥56dB 激发光源300nm透射UV、254、365nm反射UV 透射台超亮紫外透射台，面积200×250mm ，白光：210×260mm 滤光片：标配590nm，兼容EB、Sybr、GoldView等大部分荧光染料 软件Keebio 1D 图像分析软件
杨拓拓 (苏州大学现代光学技术研究所，江苏苏州215000) 1基本原理 显微镜成像原理及视角放大率 显微镜由物镜和目镜组成。物体AB 在物镜前焦面稍前处，经物镜成放大、倒立的实像A'B'，它位于目镜前焦面或稍后处，经目镜成放大的虚像，该像位于无穷远或明视距离处。 图1-1显微镜系统光路图 牛顿放大率公式： f f x x ''= 'x 是像点到像方焦点的距离，x 是物点到物方焦点的距离。 根据牛顿放大率公式可得物镜的垂轴放大率为 '1'1'11--f f x ?== β 目镜的视觉放大率为： '22250 f =Γ 组合系统的放大率为 '2'121250f f ? -=Γ=Γβ 显微镜系统的像方焦距 ?-=/'2'1'f f f '250 f = Γ 显微镜系统成倒像轴向放大率 ' 1 f
'2'1'2'1/f f x x =β 若物点A 沿光轴移动很小的距离，则通过显微镜系统的像点'2A 将移动很大的距离，且移动 方向相同。 显微系统的角放大率 '2'1'2'1/x x f f =γ 即入射于物镜为大孔径光束，而由目镜射出为小孔径光束。 显微镜的孔径光阑 单组低倍显微物镜，镜框是孔径光阑。 复杂物镜一般以最后一组透镜的镜框作为孔径光阑。 对于测量显微镜，孔阑在物镜的象方焦面上，构成物方远心光路。 显微镜的视场光阑和视场 在显微物镜的象平面上设置了视场光阑来限制视场。由于显微物镜的视场很小，而且要求象面上有均匀的照度，故不设渐晕光阑。 显微镜是小视场大孔径成像，为获得大孔径并保证轴上点成像质量，显微镜线视场不超过物镜的1/20,线视场要求： 1 '120202β?=≤f y 显微镜的分辨率和有效放大率 光学仪器分辨率 瑞利判据：两个相邻的“点”光源所成的像是两个衍射斑，若两个等光强的非相干点像之间的间隔等于艾里圆的半径，即一个像斑的中心恰好落在另一个像斑的第一暗环处，则这两个点就是可分辨的点。当物面在无穷远时，以两点对光学系统的张角可表示两分辨点的距离，其值为：
荧光显微镜 一.荧光显微镜(Fluorescence microscope) ： 荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。 在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。 荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
荧光显微镜的光源所起的作用不是直接照明，而是作为一种激发标本的内荧光物质的能源。我们之所以能观察标本，不是由于光源的照明，而是标本内荧光物质吸收激发的光能后所呈现的荧光现象。 荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别： 1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上； 2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜； 3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人眼。 荧光显微镜也是光学显微镜的一种，主要的区别是二者的激发波长不同。由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。 荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的
光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。 二．工作原理 光源 多采用200W的超高压汞灯作光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形，内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升高，当水银完全蒸发时，可达50～70个标准大气压力，这一过程一般约需5～15m i n。超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质，因此，为荧光显微镜普遍采用。 超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好的散热条件，工作环境温度不宜太高。 新型超高压汞灯在使用初期不需高电压即可引燃，使用一