MTT法测细胞毒性
试剂
MTT溶液四甲基偶氮唑盐（MTT）溶于PH7.2的磷酸盐缓冲液中，浓度为5mg/ml，除菌后2ml分装，于4℃避光保存。
含10%SDS的0.01M HCl SDS 10g
浓HCl（36%）86.2 ul
定容至100ml，过滤除菌
方法
1.将SP2/0细胞计数，调节细胞数至105/ml，制备10ml细胞悬液，加入96孔
板，100ul/孔，即细胞数104/孔。空白孔不加细胞悬液。
,37℃条件下培养24小时。
2.5%CO
2
3.每孔加入用含5%血清的DMEM 10倍系列稀释的毒素100ul。阴性对照孔不
加毒素。
,37℃条件下培养72小时。
4.5%CO
2
5.吸除药液120 ul, 每孔加入新鲜配制的MTT溶液20ul,即终浓度为1mg/ml，
37℃条件下培养4小时。
6.吸去上清50 ul，每孔加入150 ul含10%SDS的0.01M HCl溶液，震荡30
分钟。
7.酶标仪上测定A570。
8.计算细胞死亡率：
细胞死亡率（%）=（1-实验组A570/对照组A570）×100%
注意
1．细胞数范围：（0.5~2）×104。
2．MTT终浓度为0.5~2.5mg/ml，但一般浓度在0.5~1mg/ml就可以获得满意的结果。
3．加入MTT后，37℃条件下培养4~6小时。
4．设置空白与对照
空白孔：——+——+MTT+有机溶剂
对照孔：细胞+——+MTT+有机溶剂
5．DMSO易结冰（其溶点为18~20℃），室温偏低的条件下影响甲肷的溶解，使检测的光吸收值降低，且有机溶剂溶解的时间不能过长，如10分钟就可以获得结果。用SDS作溶剂可使所测光吸收值数日不变。
细胞毒性实验总结 一、抗HBV药物细胞毒性实验背景知识 (1) 二、细胞毒性实验方案的确立 (3) 三、细胞毒性实验方法稳定后的部分数据 (4) 四、细胞毒性实验质量评价指标 (5) 五、细胞毒性实验SOP (6) （一）目的 (6) （二）适用范围 (6) （三）责任人 (6) （四）规程 (6) 1. 试验准备 (7) 2. 试验操作 (8) 3．数据处理和分析 (8) 六、总结 (9) 一、抗HBV药物细胞毒性实验背景知识 细胞毒性是化学物质（药物）作用于细胞基本结构和/或生理过程，如细胞膜或细胞骨架结构，细胞的新陈代谢过程，细胞组分或产物的合成、降解或释放，离子调控及细胞分裂等过程，导致细胞存活、增殖和/或功能的紊乱，所引发的不良反应。按作用机制可分3种类型：①基本细胞毒性，涉及一种或多种上述结构或功能的改变，作用于所有类型的细胞；②选择细胞毒性，存在于某些分化细胞上，主要通过化学物质的生物转化，与特殊受体结合或特殊的摄入机制所引发；③细胞特殊功能毒性，对细胞结构和功能损伤轻微，但对整个机体损伤非常严重。类似毒性作用可通过细胞因子、激素和递质的合成、释放、结合和降解影响细胞与细胞间的交流或特殊的转运过程而实现。毒性作用也可能来自化学物质对细胞外过程的干扰，任何一种非动物检测系统对多种因素都应加以考虑。1983年Ekwall提出“基本细胞功能”的概念，即多数化学物质毒性作用是对细胞功能的非特异性损伤，却可引起器官功能的特异性改变甚至机体死亡。有研究显示化学物质体外细胞毒性与其引起的动物死亡率及人体死亡的血药浓度之间都存在良好的相关性。化学物质产生的损伤和死亡，最终可表现为细胞水平上的改变，由此推测体外细胞毒性可以预测体内急性毒性。体外方法有助于预测化学物质急性暴露引发的全身和局部影响，并评估体内毒性浓度。 目前较为理想的抗HBV药物有拉米夫定（3TC）、恩替卡韦（ETV）等。3TC是核苷左旋对呋体，早期用于艾滋病的治疗。拉米夫定体外能抑制艾滋病毒1、2型及乙型肝炎病毒逆转录酶，在人淋巴细胞和单核细胞内抑制艾滋病毒逆转录酶活性，在HBV-DNA转染的人肝癌细胞内有抑制HBV-DNA复制，在HBV感染黑猩猩体内有抑制病毒作用。拉米夫定作用原理是药物进入细胞器，为细胞脱氧胞嘧啶激酶和细胞激酶磷酸化为活性5-三磷酸拉米夫定，竞争性抑制
MTT法测细胞毒性 试剂 MTT溶液四甲基偶氮唑盐（MTT）溶于PH7.2的磷酸盐缓冲液中，浓度为5mg/ml，除菌后2ml分装，于4℃避光保存。 含10%SDS的0.01M HCl SDS 10g 浓HCl（36%）86.2 ul 定容至100ml，过滤除菌 方法 1.将SP2/0细胞计数，调节细胞数至105/ml，制备10ml细胞悬液，加入96孔 板，100ul/孔，即细胞数104/孔。空白孔不加细胞悬液。 ,37℃条件下培养24小时。 2.5%CO 2 3.每孔加入用含5%血清的DMEM 10倍系列稀释的毒素100ul。阴性对照孔不 加毒素。 ,37℃条件下培养72小时。 4.5%CO 2 5.吸除药液120 ul, 每孔加入新鲜配制的MTT溶液20ul,即终浓度为1mg/ml， 37℃条件下培养4小时。 6.吸去上清50 ul，每孔加入150 ul含10%SDS的0.01M HCl溶液，震荡30 分钟。 7.酶标仪上测定A570。 8.计算细胞死亡率： 细胞死亡率（%）=（1-实验组A570/对照组A570）×100% 注意 1．细胞数范围：（0.5~2）×104。 2．MTT终浓度为0.5~2.5mg/ml，但一般浓度在0.5~1mg/ml就可以获得满意的结果。 3．加入MTT后，37℃条件下培养4~6小时。 4．设置空白与对照 空白孔：——+——+MTT+有机溶剂 对照孔：细胞+——+MTT+有机溶剂 5．DMSO易结冰（其溶点为18~20℃），室温偏低的条件下影响甲肷的溶解，使检测的光吸收值降低，且有机溶剂溶解的时间不能过长，如10分钟就可以获得结果。用SDS作溶剂可使所测光吸收值数日不变。
细胞毒性实验 细胞毒性实验是评价化学物质对细胞生长的毒性的一种常用方法。该实验通常运用化 学物质的浓度或暴露时间，评估细胞的代谢活性、细胞增殖或细胞死亡等指标来判断其毒 性程度。 该实验可以通过直接在细胞培养物中加入一定浓度的化学物质，或将化学物质预处理 后再加入培养物中等方式进行。不同的实验方法，评价的指标也有所区别，例如：MTT法、WST法、细胞计数法、流式细胞术等，均可用于评价细胞毒性。 MTT法是一种基于细胞色素体代谢的细胞毒性评估方法。该方法主要基于细胞色素氧 化酶还原MTT后产生的紫色产物的数量作为评估指标。实验中通常将化学物质加入至细胞 培养物中，培养一定时间后，加入MTT试剂，并通过光学密度检测方法测定样品OD值。在实验过程中，所测得的OD值通常可以反映出样品中细胞活力和细胞增殖的变化情况。当化学物质的浓度或暴露时间超过一定阈值时，MTT实验结果将显示出细胞毒性效应。 细胞计数法是一种直接测定细胞数量的方法。该方法主要基于通过细胞计数仪或显微 镜直接计数样品中的细胞数量来评估毒性。在实验中，一般需要先将细胞培养物制成单细 胞悬液，再通过细胞计数仪或显微镜等工具直接观察计数。该方法的优点是操作简单，结 果直接。但是，由于人为操作的不确定性，对实验人员的技能水平要求较高。 流式细胞术是一种结合光学和电子学技术的先进工具，可同时评估多种参数的细胞毒 性评估方法。该方法主要基于细胞表面和内部成分的特异性标记，通过激光扫描和电子检 测等检测方式来捕捉和分析细胞不同部位标记物的强度和分布情况。通过分析不同实验组 的流式细胞术数据及其之间的差异，可以评价化学物质的毒性效应。 总之，细胞毒性实验是一种常用的毒性/生物活性测试方法，是评价化学物质对细胞 的毒性作用非常重要的实验方法之一。相对于动物体内实验，细胞毒性实验具有快速、简单、可重复性高、成本低等优点，并且具有高度预测性，往往可以作为快速筛选化学物质 毒性的重要工具。但是，需要注意的是，细胞毒性实验仅能反映化学物质对细胞的毒性作用，不能完全代表其在整个生物体系中的毒性效应。因此，在实际应用中，还需要结合其 他方法和指标进行综合评价。
用0.25%胰蛋白酶消化单层培养的细胞（293T细胞、MDCK细胞、Vero 细胞、CEF细胞），用DMEM培养基或MEM培养基（10%胎牛血清，1%双抗）制成单细胞悬液，以每孔104个细胞接种于96孔板，每孔加入200ul培养基。将培养板放到CO2培养箱中，在37℃、5%CO2条件下培养24h，在细胞板孔内分别加入polyMAG/DNA复合物（0.5ul/0.25ug, 0.25ul/0.25ug, 0.25ul/0.5ug），Lipofectamine 2000/DNA复合物（0.5ul+0.2ug），质粒DNA（0.5ug），每个处理设三个复孔。继续培养24h后，每孔加入20ul的MTT(5mg/ml)，37℃培养4h，终止培养，吸去孔内上清液；每孔加入150ul DMSO，摇床上振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶标仪上测定490nm各孔光吸收值，以不加细胞只加培养液的空白对照孔调零（其他实验步骤一致），以未经处理的空白细胞作为对照（三个复孔）。根据公式计算细胞存活率，细胞存活率(%)=[OD490(样品)/OD490（对照)]x100。 The toxicity of nanoparticles was evaluated by MTT (3-(4,5-dimethylthiazolyl-2)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) test. PK15 cells were planked in a 96 well plate with a concentration of 104 cells/well and cultured in 37℃5%CO2for 24 h. Then PK15 cells were treated with nanoparticlesat different concentrations(1:1, 1:2, 1:4), PEI, superfectand lipofectamine especially.PK15 cells untreated were used as control. After incubationfor 6 h,the medium was removed. PK15 cells were cultured in 37℃5%CO2 for 24 h, and were cultured for another 4 h inMTT(0.5%)containing DMEM, then the medium was carefully removed. 150ul/well dimethyl sulfoxide was added and oscillated gentlyto make crystal dissolved. The absorbance at 490 nm was measuredusing a microplate reader. The cell viability was expressed asa percentage of OD490(sample)/OD490(control).
细胞毒性检测方法总结！ 细胞毒性(cytotoxic)是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件，不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。有时需要进行特定物质细胞毒性的检测，比如药物筛选。 细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法： MTT、XTT法：利用线粒体内部酶的活性，可以将特定的四唑盐类进行转化，然后通过酶标仪进行检测 一.LDH的方法：通过检测细胞培养上清中LDH的酶活性，来检测细胞毒性 其它酶方法：如检测上清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性等 细胞增殖能力分析试剂 原理：正常细胞代谢旺盛，其线粒体内的琥珀酸脱氢酶，可将四唑盐类物质（如MTT、XTT、WST-1等）还原为紫色的结晶状的物质，沉积在细胞周围，然后通过酶标仪读取OD值，从而检测到细胞增值状态 优点：1）快速：96孔培养板形式，可进行高通量检测。2）灵活：可直接通过显微镜观察，也可通过酶标仪进行定量检测。 二.荧光素发光法细胞生存能力检测 原理：腺苷酸激酶（AK）存在于所有真核和原核细胞的胞浆中，AK具有激活ADP 生成ATP。当细胞受损后，细胞膜发生破损，AK会释放到培养上清中。该试剂盒利用荧光素酶和荧光素在ATP作用下可以发光，通过化学发光仪可以定量进行检测。 特点： 1）简单、快速。2）板式检测，可进行高通量 。 三.LDH法细胞毒性检测 原理：LDH（乳酸脱氢酶）是一种稳定的蛋白质，存在于正常细胞的胞质中，一旦细胞膜受损，LDH即被释放到细胞外； LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT（四唑盐类）反应形成紫色的结晶物质，可通过500nm酶标仪进行检测。通过检测细胞培养上清中LDH的活性，可判断细胞受损的程度 特点：1）方法简单，安全，不使用放射性物质2）可进行高通量检测
南京恩晶生物MTT细胞增殖及细胞毒性检测方法 一、产品简介 EnoGene? MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT是噻唑蓝（3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide），可以被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物甲臜（formazan）。formazan可以被DMSO完全溶解，然后通过酶标仪测定490nm波长附近的吸光度。细胞增殖速度越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则细胞增殖减慢从而导致吸光度降低。 二、操作步骤 1. 细胞消化、计数、制成浓度为2～10×104个/ml的细胞悬液,96孔板中每孔加入100ul 细胞悬液（每孔0.2～1X104个细胞）； 2. 96孔板置于37℃，5% CO2培养箱中培养24小时； 3. 用完全培养基稀释药物至所需浓度，每孔加入100μL相应的含药培养基，同时设立阴性对照组，溶媒对照组，阳性对照组，每组五个复孔； 4. 96孔板置于37℃，5% CO2培养箱中培养72小时； 5. 将96孔板进行MTT染色，λ=490nm，测定OD值。 1) 每孔加入20μL MTT，在培养箱继续培养4小时； 2) 弃去培养基(贴壁细胞可直接弃培养基，悬浮细胞需1000R，离心10min再弃培养基)，每孔加入150μL DMSO溶解，摇床10分钟轻轻混匀； 3) λ=490nm，酶标仪读出每孔的OD值，计算抑制率，及IC50值。 三、注意事项 1.悬浮细胞用此法时必须经离心后才能吸出上清再加DMSO。 2. Formazan的生成不仅与活细胞数成比例，也受作用时间的影响，因此当样品较多时测定的OD值可能随时间而变。 3. MTT溶液为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。MTT溶液在4℃或较低温度情况下会凝固，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。 4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 5. 请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞毒性实验 简介 细胞毒性实验是一种常用的生物学实验方法，用于评估物质对生物体的细胞毒性。通过测量物质对细胞的影响，可以判断其是否对细胞产生有害作用。细胞毒性实验常被应用于药物研发、化学品评估以及毒性测试等领域，旨在确保物质的安全性和对生物体的可接受性。 实验步骤 1. 细胞培养 在进行细胞毒性实验之前，首先需要培养细胞。选择适当的细胞系，如人类肺癌细胞株A549，将其放入细胞培养皿中，并添加培养基（常用的培养基包括DMEM、RPMI 1640等）。将细胞培养在恒温恒湿的培养箱中，通常培养温度为37°C，CO2含量为5%。 2. 细胞处理 将待测试物质加入培养基中，与细胞一同培养。通常会设置不同浓度的待测物质组，以便研究其剂量依赖性毒性效应。同时，还需设置一个阴性对照组（仅含培养基）和阳性对照组（含有已知毒性的物质，如阿霉素）。
3. 细胞存活率检测 根据细胞系的不同，可以选择合适的方法检测细胞的存活率。常用的方法包括MTT法、SRB法和细胞计数法等。 - MTT法 MTT法是一种测定细胞代谢活性的方法。MTT（3-(4,5-二甲基-2-噻吩基)-2,5-二苯基-2H-四唑）是一种黄色溶液，可以被活细胞中的代谢酶还原为紫色的形式。使用MTT溶液处理细胞后，将细胞溶胀后的产物溶解，通过分光光度计测量溶液的吸光度，间接反映细胞存活率。 - SRB法 SRB法是通过测量细胞中蛋白质含量来评估细胞数量的一种方法。在SRB实验中，细胞在培养皿中固定后，使用SRB染色剂染色。待染色剂固定后，通过溶解并测量其吸光度，可以间接反映细胞存活率。 - 细胞计数法 细胞计数法是直接计数细胞数量来评估细胞存活率的方法。将细胞用适当的缓冲溶液（如PBS）稀释后，使用血细胞计数器或显微镜进行细胞计数。通过对细胞数量的统计，可以计算出细胞存活率。 4. 数据分析 将实验得到的数据进行统计和分析。使用适当的统计方法，比如t检验或方差分析，来判断待测物质对细胞的毒性作用是否存在显著差异。同时，还可以画出存活率曲线或柱状图等来直观地展示不同浓度下的细胞存活率。
细胞毒性实验报告 细胞毒性实验报告 细胞毒性实验是一种常见的科学实验方法，用于评估化合物对细胞的毒性作用。本实验旨在研究不同浓度的化学物质对细胞的影响，并探讨其可能的毒性机制。实验材料与方法： 1. 细胞系：本实验选择了人类肺癌细胞系A549作为研究对象。这是一种常用 的细胞系，具有较高的增殖活性和易于培养的特点。 2. 化学物质：选择了化学品A、B和C作为实验物质，分别为已知对细胞具有 不同程度毒性的化合物。 3. 细胞培养：将A549细胞系培养在含有适宜营养物质和生长因子的培养基中，保持在37摄氏度、5%二氧化碳的恒温培养箱中。 4. 细胞处理：将A549细胞分成不同组，每组细胞分别加入不同浓度的化学物 质A、B和C，同时设置一个对照组，不加入任何化学物质。 5. 细胞存活率检测：使用MTT法检测细胞的存活率。MTT是一种黄色的化学试剂，它能够被活细胞内的线粒体酶还原为紫色的产物。通过测量产物的光密度，可以反映细胞的存活率。 实验结果与讨论： 经过一定时间的培养和处理后，我们观察到不同浓度的化学物质对A549细胞 的影响。通过MTT法测定细胞存活率，我们得到了以下结果： 在化学物质A的处理下，细胞存活率呈现浓度依赖性的下降趋势。随着化学物 质A浓度的增加，细胞存活率逐渐降低。这表明化学物质A对A549细胞具有 明显的毒性作用。进一步的研究发现，化学物质A可能通过抑制细胞的DNA
合成和蛋白质合成来导致细胞死亡。 与化学物质A相比，化学物质B对A549细胞的毒性作用较弱。在较低浓度下，细胞存活率相对较高，但随着浓度的增加，细胞存活率逐渐降低。这可能是因 为化学物质B对细胞的毒性作用与其浓度成正相关。进一步的研究发现，化学 物质B可能通过干扰细胞的氧化还原平衡和细胞膜的完整性来导致细胞死亡。 化学物质C对A549细胞的毒性作用相对较弱。在较低浓度下，细胞存活率接 近对照组水平，但随着浓度的增加，细胞存活率逐渐降低。进一步的研究发现，化学物质C可能通过干扰细胞的代谢过程和细胞凋亡通路来导致细胞死亡。 综合以上实验结果，我们可以得出结论：化学物质A具有较强的细胞毒性作用，化学物质B具有中等的细胞毒性作用，而化学物质C具有较弱的细胞毒性作用。这些毒性作用可能是通过不同的机制实现的，如抑制DNA合成、干扰氧化还原平衡和细胞膜完整性等。 细胞毒性实验在药物研发和毒性评估中具有重要的应用价值。通过评估化合物 对细胞的毒性作用，可以为药物筛选和安全性评估提供重要依据。此外，细胞 毒性实验还可以帮助我们深入了解化合物的毒性机制，为相关疾病的治疗提供 理论依据。 总结： 细胞毒性实验是一种常见的科学实验方法，通过评估化合物对细胞的毒性作用，可以为药物研发和毒性评估提供重要依据。本实验通过研究化学物质A、B和C 对A549细胞的影响，揭示了不同化合物的毒性作用和可能的毒性机制。细胞 毒性实验在未来的研究和应用中将发挥重要的作用，为人类健康和药物安全做 出贡献。
下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5 个，否则难以反应真实情况 3.5%co2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。 4.每孔加入20ulmtt溶液（5mg/ml，即0.5%mtt），继续培养4h。若药物与mtt 能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用pbs冲2-3遍后，再加入含mtt的培养液。 5.终止培养，小心吸去孔内培养液。 6.每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪od490nm处测量各孔的吸光值。 7.同时设置调零孔（培养基、mtt、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、mtt、二甲基亚砜） 悬浮细胞： 1）收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml，按次序将①补足的1640（无血清）培养基40ul ；②加actinomycin d（有毒性）10ul用培养液稀释 l?g/ml，需预试寻找最佳稀释度，1:10-1:20)；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）。每板设对 照（加100?(储存液100 1640）。 2）置37℃，5%co2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
3）每孔加入10 ul mtt溶液（5 mg/ml，即0.5%mtt），继续培养4 h。（悬浮细胞推荐使用wst-1，培养4 h后可跳过步骤4），直接酶联免疫检测仪od570nm （630nm校准）测量各孔的吸光值） 4）离心（1000转x10min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪od570nm（630nm 校准）测量各孔的吸光值。 5）同时设置调零孔（培养基、mtt、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、mtt、二甲基亚砜），每组设定3复孔。 （三）mtt的配制 mtt一般最好现用现配，过滤后4oc避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把mtt粉分装在ep管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当mtt变为灰绿色时就绝对不能再用了。 液器比移液管精确得多，但是如果操作不熟，cv会在8%左右。另外，吹散次数过多也会影响细胞活力。所以要熟练些、快些上板。 首先说说我的一点经验： 1.吹打时悬液总量不能太多，达到吸管吸液量的3到4倍，可能比较容易混匀。
mtt检测原理 MTT检测原理 MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide）是一种常用的细胞代谢活性检测试剂，被广泛应用于生物医学研究中。本文将介绍MTT检测的原理和应用。 一、MTT检测原理 MTT检测原理是基于细胞代谢活性的变化而设计的一种细胞毒性测定方法。MTT是一种黄色的晶体，可通过细胞内还原酶的作用而转化为紫色的结晶体形式。这种还原酶主要是细胞内的线粒体呼吸链中的NAD(P)H脱氢酶。MTT的转化过程主要包括以下几个步骤： 1. 细胞摄取MTT：MTT溶液添加到细胞培养基中，进入细胞内。 2. 还原酶作用：细胞内的还原酶将MTT还原为紫色的结晶体。 3. 结晶体形成：紫色结晶体沉积在细胞内部的线粒体中。 4. 结晶体溶解：细胞溶解液（如DMSO）加入，将结晶体溶解。 5. 检测吸光度：通过读取样品的吸光度，可间接判断细胞的代谢活性。 二、MTT检测的应用
MTT检测广泛用于细胞毒性和细胞增殖活性的研究中，可应用于药物筛选、毒理学评价、细胞增殖和细胞凋亡等方面。 1. 药物筛选：MTT检测可用于评估药物对细胞的毒性作用。通过给予不同浓度的药物处理细胞，再进行MTT检测，可以确定药物的毒性效应和半数致死浓度（IC50）。 2. 细胞增殖：MTT检测也可用于评估细胞的增殖活性。细胞在不同处理下，如药物刺激、基因敲除等，通过MTT检测细胞的活性变化，从而研究细胞增殖的调控机制。 3. 细胞凋亡：MTT检测可用于评估细胞凋亡的程度。凋亡细胞的代谢活性降低，通过MTT检测细胞的吸光度变化，可以间接判断细胞凋亡的程度。 4. 毒理学评价：MTT检测可用于评估化学物质对细胞的毒性作用。通过给予不同浓度的化学物质处理细胞，再进行MTT检测，可以确定化学物质的毒性效应和半数致死浓度（IC50）。 5. 细胞代谢活性研究：通过MTT检测细胞的代谢活性变化，可以研究细胞代谢的调控机制，如细胞内能量代谢的变化等。 三、总结 MTT检测原理简单、可靠，被广泛应用于生物医学研究中。通过
MTT比色法评价医用一次性输血器的细胞毒性 摘要】目的:为研究医用一次性输血器的细胞毒性。方法:参照中华人民共和国关 于输血器具生物学试验的标准，采用能快速评定细胞增殖率和细胞毒性的比色分 析方法-MTT比色法，检测医用一次性输血器对小鼠成纤维细胞L929细胞相对增 殖率的影响，评价其细胞毒性。结果:根据细胞毒性反应的评价标准，该次检测的 医用一次性输血器呈现高的细胞相对增殖率，其细胞毒性为1级，即无细胞毒性。结论一次性输血器采用MTT法检测表明，其无细胞毒性，具有良好的安全性。【关键词】MTT；比色法；一次性输血器；细胞毒性 Evaluation on the Cytotoxicity of Disposable blood transfusion device for Medical Use by MTT assay ZHOU YixinPU Xiangke 【Abstract】Objective To explore the cell toxicity of a kind of medical disposable blood transfusion apparatus. Methods MTT colorimetric analysis, a method which can quickly assess the cell proliferation rate and the cell toxicity, was used to detect the impact on the cell proliferation rate of L929(a mouse fibroblast cell line) caused by the medical disposable transfusion device. The experiment was carried out to evaluate the cell toxicity of the transfusion set according to the biological tests standard of the People's Republic of China(RPC). Results According to cell toxicity evaluation criteria, cells cocultured with the disposable transfusion apparatus still showed high relative growth rate and the cytotoxicity is grade 1 with the reference to the national stands. Conclusion There is no obvious toxicity to cells by using the disposable transfusion device and it will be safe to patients. 【Key words】MTT; colorimetric analysis; disposable blood transfusion device;cells toxicity 【中图分类号】R385【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)07-0023-02 医用一次性输血器是医疗行业中常用的一类医疗器械，使用量极大，由于一 次性输血器直接应用于人体，其材料的安全性直接关系到患者的生命安全。医用 一次性输血器一般是采用高分子材料制成的，此类医疗器械在应用于人体之前， 首先要进行材料的生物安全性评价。细胞毒性反应试验是医用生物材料生物安全 性评价的初步筛选试验。细胞毒性反应试验是在离体状态下模拟生物体生长环境，检测材料和器械接触机体组织后生物学反应的体外试验，它在生物安全性评价体 系中是最重要的检测指标之一，是首选和必选的项目。自从1983年Mosman首 次提出了一种快速评定细胞增值和细胞毒性的比色分析方法，即MTT比色法。MTT比色法最初被广泛应用于肿瘤学、免疫学等生物学相关研究[1-2]，如今已经 已经成为评价医用生物材料细胞毒性的重要试验。我们参照国家关于医用生物材 料生物安全性测试的标准，对抽检的医用一次性输血器的细胞毒性进行了测试评估。 1材料与方法 1.1待测样品医用一次性输血器来自奥雅索医疗器件（昆山）有限公司，随 机抽取二个不同批次的产品进行检测，批号分别为B5051、B5058。 1.2对照样品阴性对照采用经确认的不产生细胞毒性反应的高密度聚乙烯材料。阳性对照样品采用经确认的可重现细胞毒性反应的质量浓度为5g/L的苯酚溶液。 1.3主要试剂 MTT（3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-
MTT法测定药物对细胞生长抑制作用 MTT法测定药物对细胞生长的抑制作用是一种常用的细胞毒性测定方法。该方法基于细胞内巯基苯并噻唑(MTT)的还原反应，通过检测细胞生 长所需的线粒体呼吸功能的活性来评估药物对细胞的毒性。以下是关于MTT法测定药物对细胞生长抑制作用的详细内容。 首先，MTT是一种无色的化合物，被存活的细胞吞噬并在细胞的线粒 体中还原为产生紫色的可溶性四氧化换硫基苯并噻唑盐 (formazan)。这 种紫色的产物能够通过溶解作为代表细胞数量的指标，用于测定细胞的代 谢活性和增殖情况。 MTT法的步骤如下： 1.培养细胞：首先，需要选择适当的细胞系，并进行培养。细胞培养 应保证细胞处于良好的生长状态，并且细胞数量要足够用于实验。 2.制备实验组：将药物溶解或稀释到适当的浓度。根据实验需要，设 计不同的药物浓度梯度。一般来说，浓度梯度从高到低分别为100%、50%、25%、12.5%等。 3.预处理细胞：将细胞分装到含有培养基的孔板中，每个孔中的细胞 数量要相同，以便结果的可比性。 4.细胞暴露：将预处理好的药物加入到细胞孔中。同时，在其他孔中 加入适当的阳性对照和阴性对照。 5.孔板孵育：将装有药物和细胞的孔板放入CO2培养箱中，在37℃ 的恒温条件下孵育适当的时间，通常为24-72小时。
6. MTT添加：将MTT添加剂加入每个孔中，使其浓度达到0.5mg/ml 至1.0mg/ml。MTT添加剂一般是MTT溶解在无菌培养基中。 7. 孔板孵育：继续将孔板放回CO2培养箱中，在37℃的恒温条件下孵育2-4小时。期间，MTT会被还原为紫色的formazan产物。 8. 溶解formazan：去除培养基，加入适当的溶剂(例如二甲基亚砜)溶解formazan产物，使其溶解彻底。 9. 分析：利用比色计或酶标仪检测每个孔中formazan的光密度。光密度与细胞的数量成正比，因此可以通过光密度的变化来评估药物对细胞生长的抑制效果。 通过MTT法测定药物对细胞生长抑制作用，可以为药物筛选提供有关药物毒性和抑制效力的信息。此外，MTT法还可以用于评估细胞增殖、细胞毒性机制等方面的研究。但需要注意的是，MTT法只是一种初步的细胞毒性测定方法，针对不同类型的细胞和药物，还需要根据特定的要求进行优化和验证。 总之，MTT法是一种简单、可靠且广泛应用于细胞毒性测定的方法。通过测定药物对细胞生长抑制的作用，可以为药物筛选和细胞毒性机制研究提供重要的参考数据。
（一）实验前应明确的问题 1。选择适当的细胞接种浓度.一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞.但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样,才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系.否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。 2.药物浓度的设定。一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛.根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛.切记!否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间. 3. 时间点的设定.在不同时间点的测定OD值,输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显). 4。培养时间.200ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养不够的话,细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止,影响结果，我们是在48h换液的。 5.MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。做MTT时，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。 6。理论未必都是对的。要根据自己的实际情况调整. 7.实验时应设置调零孔,对照孔,加药孔.调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照孔加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。 8.避免血清干扰。用含15%胎牛血清培养液培养细胞时，高的血清物质会影响试验孔的光吸收值.由于试验本底增加，会试验敏感性.因此，一般选小于10％胎牛血清的培养液进行.在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。 (二）实验步骤 贴壁细胞： 1.收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000—10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。 2。5%CO2,37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板），加入浓度梯度的药物，原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时,或半天时间,但我们常在前一天下午铺板,次日上午加药.一般
细胞毒性分级标准mtt 细胞毒性分级标准mtt是一种常用的细胞毒性评价方法，通过对细胞代谢活性 的测定，可以评估化合物对细胞的毒性作用。该方法常用于药物筛选、毒性评价、环境污染物检测等领域，具有操作简便、结果可靠的特点。下面将介绍细胞毒性分级标准mtt的原理、操作步骤和数据分析方法。 原理： 细胞毒性分级标准mtt的原理是利用细胞内还原酶的活性，将黄色的mtt（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物）显色为紫色的甲醛溶液，然后用 溶剂将细胞内的紫色产物溶解出来，最后用酶标仪测定其吸光值，从而反映细胞的代谢活性。细胞毒性程度与mtt还原的程度成正比，细胞毒性越强，mtt还原的程 度越低。 操作步骤： 1. 细胞接种，将细胞悬液均匀地加入到培养皿中，使细胞在培养皿底均匀分布。 2. 处理试剂，将待测化合物按照一定浓度加入到培养基中，与细胞共同培养一 定时间。 3. 加入mtt溶液，在培养基中加入mtt溶液，使细胞与mtt溶液充分接触。 4. 加入甲醛溶液，将mtt溶液吸除后，加入甲醛溶液，使mtt还原产物显色。 5. 加入溶剂，将甲醛溶液吸除后，加入溶剂将mtt还原产物溶解出来。 6. 吸光值测定，用酶标仪测定吸光值，计算出细胞的代谢活性。 数据分析方法： 根据吸光值的测定结果，可以计算出细胞的存活率或细胞毒性程度。一般来说，吸光值越高，代表细胞的代谢活性越强，细胞存活率越高；吸光值越低，代表细胞
的代谢活性越弱，细胞毒性越大。根据实验需要，可以将数据进行统计分析，得出化合物对细胞的毒性分级标准。 细胞毒性分级标准mtt是一种简便、可靠的细胞毒性评价方法，广泛应用于药物筛选、毒性评价等领域。通过对mtt的还原程度进行测定，可以快速准确地评估化合物对细胞的毒性作用，为药物研发和环境监测提供重要参考。希望本文对您了解细胞毒性分级标准mtt有所帮助。