環境微生物之檢測
●目的：
1.暸解檢測空氣中微生物的目的與檢測方法。
2.瞭解空氣中微生物的分布及其影響分子。
3.學習空氣中微生物的控制方法。
4.比較同一時間不同地點空氣中的微生物數量。
5.比較不同時間同一地點空氣中的微生物數量。
●原理：
自然界中微生物的分布極為廣泛，空氣、廢(污)水、土壤等與人類息息相關的環境均有微生物的蹤跡。清潔乾淨的空氣原本不適合微生物的生長，微生物幾乎由其他環境(例如：土壤、灰塵或人類與其他生物之間的活動等)而來，微生物藉由大氣中自然的流動(例如：風、氣等)、人為機械攪動以及微生物粒子本身的運動，可輕易分佈於空氣中，四處流走至留一段時間，因此空氣算是微生物生存的一種媒介。不同的地理位置所存在的微生物數量及種類也有所不同，一般而言，室外空氣中以土壤微生物佔優勢，而室內空氣中足以人類的呼吸道中所發現的微生物最多。
●實驗器材：
【器材】
玻璃培養皿、量筒、取藥勺、稱藥紙、玻棒、衛生紙、
酒精燈。
【儀器】
電子分析天平、菌落計數器、計時器、恆溫烘箱。
●採樣來源：
實驗室外面一樓水池、實驗室外面一樓花圃、實驗室外面的垃圾
桶。
●實驗步驟：
◎土壤：
去室外取1(g)克之土壤，加入10(ml)毫升培養液，搖晃均
勻後，等培養液中的土壤沉澱，在吸取1毫升，開始做十
倍稀釋，在取稀釋的第4.5.6次的稀釋分別放在6個培養基
上做塗碟，將塗碟好的培養基倒著放在37℃恆溫烘箱，隔
天在取出來觀測菌落數的分布生長。
◎廢(污)水：
取1毫升混合液做10倍稀釋，取第5.6.7次稀釋分別放在
6個培養基上做塗碟，將塗碟好的培養基倒著放在37℃恆
溫烘箱，隔天在取出來觀測菌落數的分布生長。
◎廢棄物：
用一張衛生紙折成5×5大小然後沾濕去擦拭廢棄物，之後
把擦拭廢棄物的衛生紙丟到10毫升的培養液中，均勻搖
晃後在取1毫升混合液作10倍稀釋，取第4.5.6次稀釋分
別放在6個培養基上做塗碟，將塗碟好的培養基倒著放在
37℃恆溫烘箱，隔天在取出來觀測菌落數的分布生長。
◎空氣：
拿4個培養基，同時間在不同地點放置，一段時間後再收
回培養基，再將培養基倒著放在37℃恆溫烘箱，隔天在取
出來觀測菌落數的分布生長。
●實驗結果：
土壤
10^-4
10^-5
10^-6
10^-5
10^-6
10^-7
10^-4
10^-5
10^-6
實驗室內窗邊
走廊垃圾桶上
●問題與討論：
1.在「在相同時間不同地點空氣中微生物數量之比較」實驗
中，試比較四個不同地點實驗結果總菌數是否印證時驗前
所做的假設？
Ans：是，微生物數量還是會受到環境因子的干擾而有所
變化。
2.由實驗結果可嘆坦影響空氣中微生物分布上數量多寡的
因素，請由人潮、不同生活環境或自然環境分別說明之。
Ans：人潮多的時候，由於人體週遭所帶來的微小生物會
使培養皿的細菌數目產生變化。溫度過高可能會使細菌死
亡，陰涼處也會使細菌產生不同改變，所以置於任何環境
皆會影響其數目的變化。
3.簡單說明如何以物理及化學的方法控制空氣中的微生物。
Ans：<物理性方法>清潔：清潔為殺毒的重要手段之ㄧ，
也是保持衛生的基礎。
<化學性方法>用溴、碘、丙烯二醇等去消毒。
●心得：
何冠霖心得：這次的實驗也蠻簡單的，一開始在取水跟土壤還有廢棄
物的時候，想說應該沒有那麼多細菌，直到隔天看到實
驗結果差一點嚇到尿褲子，細菌還真的是多到嚇死人
阿!!!想不到生活中的細菌真的是多到可怕，現在吃東西
以前一定會洗完手後在吃了。
蔡坤廷心得: 這次實驗讓我了解到微生物真的是無所不在，而微生物
的多寡也受到環境因子的影響，由此可見傳染病也是透
過這些媒介所傳播的，所以在日常生活中真的要保持乾
淨。
陳冠諭心得:這是培養害我不敢不洗手吃東西，細菌無所不在。這次細
菌我悶塗抹的有點不均勻，所以造成菌落不分散，不然
就是太多細菌多到讓我們無法數。
貢獻度
常见的微生物检测 方法
摘要：微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常见的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 概述： 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其它生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，一般情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长一般指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同
时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和她们的生长抑制紧密相关。因此有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，因此测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，能够从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 经过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法：
中国海洋大学本科生课程大纲 课程属性：公共基础/通识教育/学科基础/专业知识/工作技能，课程性质：必修、选修 一、课程介绍 1.课程描述： 随着各种环境问题的日趋严重，微生物实验技术在环境领域得到广泛应用和迅速发展，为人们改造环境和保护环境提供重要的技术手段。本课程以环境工程领域常用的微生物实验技术的教学为主要内容，并以具体的环境问题为依托，使学生掌握专业知识在实践中的应用，提升学生的实践技能。 Microbiology experimental technology has been widely used and rapidly developed in the environmental field with the increasingly serious environmental problems. It plays an important role in transforming the environment and protecting the environment. The main teaching contents of the course are the common microbiology experimental technologies in various environmental issues. The course will enable students to master the professional skills. 2.设计思路： 本课程主要学习和掌握环境领域常用的微生物实验技术，了解其在环境保护和环境改造过程中的实践应用及其重要作用。课程内容的设置注重实用性和可操作性，分为基础实验部分和综合实验部分。基础实验部分以常用微生物实验技术的学习为重点，并注重实验内容的系统性和连贯性；综合实验部分以具体环境问题为依托，进行微生物实 - 7 -
环境中微生物的检测和分离纯化 姓名：王韬 班级：生76 组号：7-2组 同组人：袁堂谧 实验日期：2009-11-12 一、实验目的： 1.熟悉常用微生物培养基配置方法。 2.联系无菌操作技术。 3.学习单菌落划线分离法。 4.通过实验认识环境中微生物的分布。 二、实验原理： 1.微生物的分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的 过程称微生物的分离与纯化。常用的是平板分离法。为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、温度和氧的条件要求不同，而供给他们适宜 的培养条件，或加入某些抑制剂造成一支其他菌生长而利于此菌生长的环境。 2.平板菌落计数法：平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分 分散成单个细菌，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长 繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品的一个单细胞。该计数法 最大的优点是可以获得活菌的信息。 三、实验材料： 土壤悬液（稀释100倍），未知菌菌落平板，无菌水，取液器，培养箱，培养皿，无菌涂棒，接种环，接种针，酒精灯。 四、实验步骤： (一)培养基的制备（提前准备）： 肉汤蛋白胨培养基： 牛肉膏 2g 蛋白胨 4g NaCl 2g 蒸馏水 400mL 琼脂 8g 1.称量：按上述配方称量各类物质。 2.溶解：在400mL水中溶解牛肉膏、蛋白胨和NaCl，混合加热溶解。 3.调pH值：调至7.2-7.4 4.过滤（本实验无需过滤） 5.加凝固剂：加入称量好的琼脂，混合均匀。 6.分装 7.包扎和灭菌 8.倒平板 (二)从土壤中分离微生物 1.采土样（已事先准备）：选择较肥沃的土壤，铲去表层土，挖5-20cm深度的或
(一)、概述 食用被微生物污染的食品而导致的疾病，称作食源性疾病。导致这类疾病的微生物叫食源性致病菌。随着人们居住和卫生条件的不断改善，以及抗生素的滥用，人类对病菌的抵抗能力却在不断下降，食源性疾病一直呈上升的趋势。因此，对食品中致病菌的监测和检验也就越显示其重要性，常规的检验大多依靠培养目标微生物的方法来确定食品是否受到此微生物的污染，这些方法需要一定的培养时间，少则2～3天，多至数周，才能确定。而现行有效的一些快速检测方法不仅可以大大缩短检测时间提高微生物检出率并可用于微生物计数、早期诊断、鉴定等方面，以做到快速、简便、准确。快速方法包括了微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等领域。 （二）、常见、常用的快速、简便的检测微生物数量的方法如下： 1、活细胞计数的改进方法 （1）、旋转平皿计数方法 （2）、疏水性栅格滤膜法（HGMF）或等格法（isogrid method） （3）、血膜系统（Pertrifilm） （4）、酶底物技术（ColiComplete） （5）、直接外荧光滤过技术（DEFT） （6）、“即用胶”系统（SimPlate） 2、用于估计微生物数量的新方法 （1）、阻抗法 （2）、A TP生物发光技术 3、其他方法 （1）、微量量热法 （2）、接触酶测定仪 （3）、放射测定法 （三）、食品中沙门氏菌的快速筛检方法 1、沙门氏菌显色培养基法 2、免疫学方法 3、分子生物学方法 4、自动传导法 （四）、大肠杆菌O157：H7快速检测方法 大肠杆菌O157：H7肠出血性大肠杆菌的主要血清型，自1982年在美国被分离并命名以来，陆续发现本菌与轻度腹泻、溶血性尿毒综合症、出血性肠炎、婴儿猝死综合症等多种人类病症密切相关，是食源性疾病的一种重要致病菌。E.coli O157：H7属于肠杆菌科埃希氏菌属，为革兰氏阴性杆菌，有鞭毛。近年来作为食品卫生及流行病学的研究热点，E.coli O157：H7的分离和鉴定方法已取得了较大进展。利用其生化特征、免疫原性建立的方法以及现代分子生物学技术的应用，可以从多方面对E.coli O157：H7进行检测。 1、E.coli O157：H7鉴别培养基及显色培养基 2、免疫学检测方法 3、分子生物学方法 （五）、金黄色葡萄球菌的快速检测方法 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈普通串状排列无芽孢，无鞭毛，不能运动。该菌在自然界中分布广泛，如空气、水、土壤、饲料和一些物品上，是最常见的化脓性球菌之一，食品受其污染的机会很多。金黄色葡萄球菌食物中毒是其肠毒引起的，目前已确认的肠毒素至少有A,B,C1,C2,C3,D,E和F8个型。由金黄色葡萄球菌肠毒素引发的中毒爆发事件，近年来
实验三环境微生物的检测 一、实验目的 1.了解周围环境中微生物的分布情况。 2.懂得无菌操作在微生物实验中的重要性。 3.了解四大类微生物的菌落特征。 二、实验原理 在我们周围的环境中存在着种类繁多的、数量庞大的微生物。土壤、江河湖海、尘埃、空气、各种物体的表面以及人和动物体的口腔、呼吸道、消化道等都存在着各种微生物。由于它们体积微小，人们用肉眼无法观察到它们个体的存在。但是只要稍加留意，我们就可以在发霉的面包、朽木上看到某些微生物群体。这些现象表明，自然界只要有微生物可以利用的物质和环境条件，微生物就可以在其上生长繁殖。据此，我们在实验室里就可以用培养基来培养微生物。 培养基是用人工配制的、适合微生物生长繁殖和产生代谢产物用的混合养料。其中含有微生物所需要的六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、气体和水分。此外，根据不同的微生物的要求，在配制培养基时还需用酸液或碱液调节至适宜的pH。配制好的培养基必须进行灭菌。所谓灭菌是指采用各类的物理或化学因素，使物体内外的所有微生物丧失其生长繁殖能力的措施。经过灭菌后的物体是无菌的。消毒是与灭菌完全不同的概念，它是指用较温和的物理因素杀死物体表面和内部病原微生物的一种常用的卫生措施。 灭菌的方法较多，广泛使用的是高温灭菌，其中最常用的是高压蒸汽灭菌法。此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的。在1.05kg/cm2的蒸汽压力下，温度可达121℃。一般只要维持15~20min，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。 微生物的接种技术是生物科学研究中的一项最基本操作技术。为了确保纯种不被杂菌污染，在整个接种过程中，必须进行严格的无菌操作。在实验过程中必须牢固树立无菌概念，经常保持实验台及周围环境的清洁，严格无菌操作，避免杂菌的污染，这是保证实验成功的必要条件。
江苏自考环境工程大纲-环境微生物学 河海大学编 (高纲号 0727) 一、课程性质及其设置目的与要求 （一）课程性质和特点 《环境微生物学》课程是江苏省高等教育自学考试环境工程专业（独立本科段）的一门基础专业课程，它的特点是包括了生物化学、有机化学和生态学等多学科交叉的一门课程。本课程系统地介绍环境微生物学的基本知识和理论、基本技术和方法。 本课程在内容上分为四篇，第一篇是介绍了环境微生物学基础，包括特点、任务、分类、生长与代谢、遗传与变异、分布及其相关关系和微生物在物质循环中的作用。第二篇是介绍了微生物治理环境，包括降解与转化、污水的生物处理、废渣与废气的生物处理、生物修复、开发应用和资源化。第三篇是介绍了微生物环境污染，包括致病微生物、代谢产物与环境污染和微生物与水体富营养化。第四篇是介绍了微生物环境监测，包括指示微生物、污染物生物毒性的微生物学检测方法、污染物致突变性的微生物检测方法和微生物监测技术的新发展。 通过学习应考者可以了解环境微生物学的基本理论，掌握微生物学在治理环境污染中的基本技术和基本方法，并能够应用在具体的科学研究和实际工作中，为环境微生物学的发展培养专业人才。 （二）本课程的基本要求 通过本课程的学习，应考者应达到以下要求： 1、了解环境微生物学的基本知识； 2、理解微生物学在治理环境污染中基本作用； 3、掌握微生物学在治理环境污染中基本方法和技术； 4、熟练掌握微生物学中常见术语的名称和意义。 （三）本课程与相关课程的联系 本课程的前修课程是生物化学、有机化学和生态学。这三门课程可以帮助学生理解环境微生物学的基本知识，更好地掌握微生物学在治理环境污染中的基本方法和技术。同时为在工作和研究中的具体应用打下良好的基础。 二、课程内容与考核目标
环境微生物学知识点 教材：环境工程微生物周凤霞白京生主编化学工业出版社 单元知识一绪论 1.环境问题与可持续发展 概念现状 2.微生物作用 微生物概念微生物作用（有益、有害） 3.微生物特点 个体小繁殖快种类多结构简单易变异 单元知识二环境微生物主要类群 1.原核微生物 ①细菌（形态结构及作用 ②放线菌（形态菌落培养污泥丝状膨胀的类型） ③蓝细菌（特征作用水华、赤潮类别） 2.真核微生物 ①酵母菌（类型结构特征应用 ②霉菌（类型结构特征应用特种污水处理优势 ③真核微型藻类（分类作用水华、赤潮类别） 3.原生动物 ①鞭毛虫（形状特征指示性作用） ②肉足虫（形状特征分类指示性作用） ③纤毛虫（形状特征分类 ④包囊（形成原因过程指示性作用） 4.微型后生动物 ①轮虫（形状特征分类指示性作用） ②线虫（形状特征分类指示性作用） ③水蚤（形状特征分类指示性作用） 5.病毒 ①病毒特征 ②病毒结构 ③繁殖（5 ④溶原性 单元知识三微生物原理 1.微生物营养 ①营养要素（5大要素 ②营养类型（4个） ③培养基（原则分类作用生化营养保证） 2.生长曲线（曲线多周期过程及对比分析 3.环境因素影响（温度ph 4.微生物代谢（酶 5.遗传变异（遗传变异污泥驯化） 单元知识四微生物生态
1.微生物环境分布（土壤大气水体） 2.微生物间关系（共生互生寄生拮抗 3.微生物与物质循环（C N P 循环污水处理中应用）单元知识五微生物的环境污染 1.水体富营养化（水华赤潮） 2.产生毒素 单元知识六微生物在水污染治理中的作用 1.污水生物处理分类（好氧厌氧兼氧） 2.活性污泥法（微生物组成净化机理培养驯化） 3.生物膜法（微生物组成净化机理培养驯化）
什么是食品微生物检验 吴崇食质12级1班学号：20122629 微生物是个体难以用肉眼观察的一切微小生物之统称。微生物包括细菌、病毒、真菌、和少数藻类等。（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。）病毒是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的“非细胞生物”，但是它的生存必须依赖于活细胞。根据存在的不同环境分为空间微生物、海洋微生物等，按照细胞机构分类分为原核微生物和真核微生物。 微生物对人类最重要的影响之一是导致传染病的流行。在人类疾病中有50%是由病毒引起。微生物导致人类疾病的历史，也就是人类与之不断斗争的历史。在疾病的预防和治疗方面，人类取得了长足的进展，但是新现和再现的微生物感染还是不断发生，像大量的病毒性疾病一直缺乏有效的治疗药物。一些疾病的致病机制并不清楚。大量的广谱抗生素的滥用造成了强大的选择压力，使许多菌株发生变异，导致耐药性的产生，人类健康受到新的威胁。一些分节段的病毒之间可以通过重组或重配发生变异，最典型的例子就是流行性感冒病毒。每次流感大流行流感病毒都与前次导致感染的株型发生了变异，这种快速的变异给疫苗的设计和治疗造成了很大的障碍。而耐药性结核杆菌的出现使原本已近控制住的结核感染又在世界范围内猖獗起来。 微生物千姿百态，有些是腐败性的，即引起食品气味和组织结构发生不良变化。当然有些微生物是有益的，它们可用来生产如奶酪，面包，泡菜，啤酒和葡萄酒。微生物非常小，必须通过显微镜放大约1000 倍才能看到。比如中等大小的细菌，1000个叠加在一起只有句号那么大。想像一下一滴牛奶，每毫升腐败的牛奶中约有5千万个细菌，或者讲每夸脱牛奶中细菌总数约为50亿。也就是一滴牛奶中可能含有50 亿个细菌。 微生物能够致病，能够造成食品、布匹、皮革等发霉腐烂，但微生物也有有益的一面。最早是弗莱明从青霉菌抑制其它细菌的生长中发现了青霉素，这对医药界来讲是一个划时代的发现。后来大量的抗生素从放线菌等的代谢产物中筛选出来。抗生素的使用在第二次世界大战中挽救了无数人的生命。一些微生物被广
微生物检验（完整版） 名解 微生物：是一群个体微小结构简单肉眼不能看见的微小生物的总称 种：亲缘关系较近的微生物群体在进化发育阶段上有一定的共同形态和生理特征 微生物学：生物学的一个分支是研究微生物在一定条件下的形态结构生理生化遗传变异特性及微生物的进化分类生态等生命活动规律以及微生物之间与人类动植物自然界互相关系的一门科学 抗生素：是由某些微生物在代谢过程中产生的能抑制或杀灭某些其他微生物和肿瘤细胞的微量生物活性物质 细菌素：是某些细菌菌株产生的一类具有抗菌作用的蛋白质 条件致病菌：正常菌群在宿主体内具有相对稳定性一般不致病 消毒：指杀死物体上的病原微生物但不一定能杀死细菌芽孢的方法 灭菌：指杀灭物体上所有的微生物的方法 防腐：指防止或抑制微生物生长繁殖的方法 无菌：指没有货的微生物的存在 质粒：是细菌染色体外的遗传物质也是环状闭合的双联DNA分子比染色体小存在于细胞质中可自主复制 突变：是指细菌遗传物质的机构发生突然而稳定的改变所致的变异现象可遗传给后代 基因转移：外源性物质由供体菌转入受体细胞内的过程 基因重组：供体菌的基因进入受体菌细胞并在其中自行复制与表达或矛受体菌DNA整合在一起的过程 病毒：是一类个体微小结构简单只含一种核酸只能在活的易感细胞内以复制方式增殖的
非细胞型微生物 复制周期：病毒的增殖被人为分成吸附穿入脱壳生物合成装配成熟与释放七个步骤的完整过程 缺陷病毒：是指因病毒基因组不完整或因基因某一点改变而不能进行正常增殖的病毒 顿挫感染：病毒进入宿主细胞若细胞缺乏病毒复制所需的酶能量和必要成分等则病毒无法合成自身成分不能够装配和释放子代病毒的现象 干扰现象：两种病毒感染同一种细胞时可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象 人工自动免疫：是将疫苗等免疫原接种于人体刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答使机体获得特异性免疫力 人工被动免疫：是指注射含某种病毒特异性中和抗体的免疫血清等一系列细胞因子是机体立即获得特异性免疫 干扰素：是由病毒或干扰素诱生剂作用于中性粒细胞成纤维细胞或免疫细胞产生的一种糖蛋白 致病性：一定种类的病原微生物在一定的条件下能在特殊的宿主体内引起特定疾病的能力半数致死量：在规定时间内通过一定途径能使一定体重或年龄的某种动物半数死亡或感染需要的最小病原体数量或毒素量 急性感染：发作突然病程较短一般是数天或数周 局部感染：病原体侵入机体后局限就在一定部位生长繁殖引起病变的一种感染类型 毒血症：致病菌侵入宿主体后只在机体局部生长繁殖病菌不进入血液循环但其产生的外毒素入血引起特殊的毒性症状 败血症：致病菌侵入血流后在其中大量繁殖并产生毒性产物引起全身性毒性症状 内毒素血症：革兰阴性菌侵入血流并在其中大量繁殖崩解后释放出大量毒素也可有病灶
环境微生物监测标准操作规程 一、监测指征 1．感染暴发或感染流行时，环境因素在感染传播中有流行病学意义。 2．监测潜在的危险环境状况，证明有危险的病原体存在或证明危险的病原体已被成功清除。 3．当某项感染控制措施改变时，评估其效果；或者根据规范要求，仪器设备或系统启用时监测。 4．目标性监测的需要。 5．循证医学证据支持。 二、空气监测(沉降法) (一)采样时间：消毒处理后与进行医疗活动之前。 (二)采样高度：距地面垂直高度80～150 cm。 (三)采样点设置 1．非洁净房间：室内面积≤30 ㎡，在对角线上设里、中、外3点。里、外两点位置各距墙1 m；室内面积>30 ㎡，设东、西、南、北、中5点。其中东、西、南、北4点均距墙1 m。9 cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5 min后送检培养。 2．洁净房间：清洁房间在空态或静态条件下，根据房间的不同清洁级别进行布点，操作按照GB 50333—2002。9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露30 min后送检培养。 (四)采样注意事项 1．采样人员做好手部卫生，佩戴口罩、帽子等个人防护装备。进入清洁房间采样须穿洁服。 2．皿盖打开顺序应先内后外；手臂及头不可越过培养皿上方；行走及放置动作要轻，尽量减少对空气流动状态的影响；皿盖应扣放，以防污染。 3．采样结束后，由外向内合上皿盖。 4．采样完毕的培养皿应在6 h内培养。 (五)实验室检验 1．培养皿在37℃培养48 h后，进行菌落计数和致病菌检验。普通营养琼脂培养基的配制按照GB／T 4789．28—2003；菌落计数方法按照GB\T 7918．2—1987；致病菌检验：溶血性链球菌检验按照GB／T 4789．11—2003，沙门菌检验按照CB\T 4789．4—2003，铜绿假单胞菌检验按照GB／T7918．4—1987，金黄色葡萄球菌检验按照CB\T 7918．5—1987,， 2．计算结果：非洁净房间以100 c㎡的平皿在空气中暴露5 min即相当于10 L 空气中的细菌数，计算公式为： 细菌数(cfu／m3)=1 000÷(A／100×t×10／5)×N=50 000N／At 式中：t——平皿暴露于空气中的时间(min)；N—一培养后平皿上的菌落数(cfu／平皿)；A——所用平皿的面积(c㎡)。 洁净房间直接以“个／(30 min·Φ90)”平皿为单位计算结果。 (六)结果判断： 参照GB 15982—1995《医院消毒卫生标准》。 三、物体表面监测 (一)采样时间： 消毒处理后4 h内。 (二)采样方法 被采样本面积<100 c㎡取全部表面；如采样面积≥100 c㎡，连续采样4个位置(不可有重叠)，每个位置采5 cm×5 cm的大小，用浸有无菌生理盐水的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10 ml无菌生理盐水试管内。不规则的物体表面，用棉拭子直接涂擦，采样面积≥30 c㎡ (三)采样注意事项
绪论 一、名词解释 1、微生物 微生物是所有形体微小，用肉眼无法看到，需借助显微镜才能看见的单细胞或个体结构简单的多细胞或无细胞结构的低等生物的统称。 “微生物”不是一个分类学上的概念，而是一切细小的、肉眼看不见的微小生物的总称。 2、原核微生物 原核生物：①细胞核发育不完善，只有DNA链高度折叠形成的一个核区，仅有核质，没有定形的细胞核，称为拟核或拟核。②没有特异的细胞器。③不进行有丝分裂。 二、选择题 1．微生物分类中基本的分类单位是（ D ）。 A、科 B、属 C、目 D、种 2．各种微生物具有一些共同点，下列选项中描述错误的是（ C ） A．分布广，种类多B．适应强，易变异C．体积小，表面积小D．生长速，繁殖旺 5．所有微生物的共同特征是（ C ）。 A、单细胞 B、没有真正的细胞核 C、个体微小 D、细胞结构简单 6．在分类系统中，细菌和蓝细菌皆属于（ A ）。 A、原核生物 B、真核生物 C、多细胞 D、单细胞 三、填空题 1. 微生物的命名采用双名法，即由一个___属名____和一个___种名____构成；书写排列上，____属___名在前，___种___名在后。 四、简答题 1. 真核微生物与原核微生物的差异表现在哪些方面？它们各自包括哪些主要类群？ 原核生物：①细胞核发育不完善，只有DNA链高度折叠形成的一个核区，仅有核质，没有定形的细胞核，称为拟核或拟核。②没有特异的细胞器。③不进行有丝分裂。 真核生物：①细胞核发育完善，有核膜将细胞核和细胞质分开，核内有核仁和染色质。②有高度分化的细胞器，如线粒体、中心体、高尔基体、内质网、溶酶体和叶绿体等。③能进行有丝分裂。原核微生物：细菌、古菌、放线菌、蓝细菌、支原体、衣原体、立克次氏体 真核微生物：藻类、真菌（酵母菌、霉菌）、原生动物、微型后生动物 五、论述题 3. 结合微生物的特点，分析微生物在环境保护和环境治理中起着举足轻重的作用。 1、微生物在环境保护和治理中的作用： 保持生态平衡 污染物的降解 废水、废气、废渣的处理 污染水体、土壤的生物修复 2、研究内容包括： 微生物学基础知识 环境工程中的微生物原理 饮用水卫生细菌学 自然环境物质循环与转化 水体和土壤的自净作用 污染水体治理、污染土壤的修复等环境工程净化
微生物检测手段及注意事项
微生物检测手段及注意事项 微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文对生长量测定法、微生物计数法、生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而
测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 1. 微生物计量法 1.1 体积测量法 又称测菌丝浓度法，通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10 mL）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5 min）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法 可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10~20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1~5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105 ℃或100 ℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80 ℃或40 ℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40 ℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（Activity Dry Yeast, ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
空气、物表、器械、医务人员手微生物检测参考标准 一、空气微生物污染检验方法 采用平板暴露法操作 结果计算：按平均每皿的菌落数报告：CFU/(皿·暴露时间)。 结果判断： Ⅱ环境： 手术室、供应室、计生手术室、产房、眼科治疗室 、婴儿室、 ≤4.0cfu/皿（15min ） Ⅲ环境 各科治疗室、处置室、ICU 、胃肠镜室、儿科病房、妇科检查室、急救室、 化验室血库、口腔科。 ≤4.0cfu/皿（5min ） 二、物体表面微生物污染检查方法 检测方法： 把采样管充分震荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml ，接种平皿，将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15~20ml,36℃±1℃恒温培养箱48h ，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。（采样面积都为100cm 2） 结果计算： 物体表面菌落总数（CFU/cm 2）= 结果判断： Ⅱ环境： 手术室、供应室、计生手术室、产房、眼科治疗室 、婴儿室。 ≤5.0cfu/cm 2 平均每皿菌落数×采样液稀释倍数 采样面积（cm 2)
Ⅲ环境各科治疗室、处置室、ICU、胃肠镜室、儿科病房、妇科检查室、急救室、化验室血库、口腔科。≤10.0cfu/cm2 三、消毒医疗器材的检验方法 检验方法： 把采样管充分震荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml，接种平皿，将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15~20ml,36℃±1℃恒温培养箱48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。 检验标准 1、高度危险性医疗器材应无菌 2、中度危险性医疗器材的菌落数应≤20 CFU/件（CFU/g或CFU/100cm2）,不得检 出致病性微生物。 3、低度危险性医疗器材的菌落数应≤200 CFU/件（CFU/g或CFU/100cm2）,不得 检出致病性微生物。 （1）、高度危险性物品： 手术器械、穿刺针、腹腔镜、活检钳、心脏导管、植入物等。 （2）、中度危险性物品： 胃肠道内镜、气管镜、喉镜、肛表、口表、呼吸机管、麻醉机管道、压舌板、肛门压力测量导管、直肠压力测量导管等。 （3）、低度危险性物品： 听诊器、血压计、袖带、病床围栏、床面以及床头柜、被褥、墙面、地面、痰盂（杯）和便器等。 四：医务人员手卫生
环境中微生物的检测和分离纯化 一．实验原理 1.微生物的分离与纯化 土壤中含有丰富的微生物，可以从中分离纯化得到很多有价值的菌株。 微生物常用的分离方法是平板分离法，根据某种微生物对生长条件的不同要求供给它适宜的培养环境，再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离，纯化该微生物，直到得到纯菌株。 2.平板菌落计数法 将待测样品经适当稀释后，其中微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中含的菌落数。 二．实验材料与试剂 1.土壤稀释溶液 2.取液器（1000ml 1支），培养箱，培养皿（12个），无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂 棒，接种环，1000ml无菌吸头若干，记号笔，酒精灯，火柴，试管架。 三．实验步骤 （一）.无菌平板制备 1.采用叠皿法把牛肉冻蛋白膏培养基倒入灭好菌的培养皿中，制作无菌平板 （二）.周围环境中微生物的检测 2.取一平板，分成6个区，做好标记。同一个人同一根手指头按如下要求用力一致进 行操作：分别用未洗过的手指头，自来水打湿的手指头，自来水认真洗过的手指头，洗手液洗过一遍的手指头，洗过两遍的，洗手液洗过又用酒精棉球消毒后的手指头 在六个区上涂抹。（平板1） 3.取一平板，分区，分别用使用过的纸巾，硬币，旧纸币，餐卡在不同区拖动。（平 板2） 4.在培养基上方抖动头发数次。（平板3） 5.取一平板，分区，用无菌接种环分别蘸一滴自来水，河水，豆浆在不同区划线。（平 板4） 6.用无菌牙签取一点牙垢在培养基上划线。（平板5） 7.取两个平板，一个打开在实验台上放置30分钟，另一个在酒精灯火焰边打开皿盖1 分钟。（平板6） 8.取一平板，打开盖，咳几下。（平板7） （三）.从土壤中分离微生物 1.采土样 2.制备土壤稀溶液 3.涂布 吸取100ml稀释好的土壤稀溶液，较均匀地滴在平板上，再用无菌涂棒涂布均匀，涂1—2分钟 4.培养 将培养基平板倒置于37℃下培养24小时 5.菌落计数 四．实验结果
学习指南一、预修课程 环境学、生物化学。 二、授课对象 环境工程、环境科学以及其相关专业本科生。 三、课程结构 （一）理论课结构 （二）实验课结构
四、课程内容 环境微生物学是微生物学与环境科学相互渗透而产生的一门交叉学科。该课程拟系统论述环境微生物学的主要类群、基本理论及其在环境领域的重要作用。以微生物的起源与进化为线索，介绍病毒和亚病毒、细菌、放线菌、蓝细菌、古菌、真菌、原生动物、微型藻类等微生物类群；讨论微生物的营养与代谢、微生物的生长繁殖与遗传变异、微生物生态、微生物与物质循环等基本理论；探析微生物与环境污染、微生物与环境净化、微生物与环境工程、微生物与环境监测等环境微生物的重要作用。 环境微生物学也是一门实践性很强的学科。该课程拟通过验证性实验，使学生巩固课堂知识，掌握单元操作技术（如显微镜观察技术、细胞染色技术、无菌操作技术等）；通过综合实验，使学生学会“组合拳”，联合运用多种单元技术（土壤微生物分离与纯化、微生物对含氮和不含氮有机物的降解与转化、活性污泥或生物膜中生物相的观察等）；通过设计性实验，使学生熟悉科研过程，善用微生物学理论和实验解决实际问题（水质细菌学检查、空气中微生物检测、发光细菌急性毒性试验等）；并通过示范性实验、参观性实验和多媒体演示性实验，使学生了解现代微生物技术，拓宽专业视野。 五、学习方法 [课堂学习] 按教学日历，课前做好课程内容的预习；课中认真听课，做好关键知识点的记录。遇到不理解的问题，及时向教师请教。 [课后学习] 根据课堂内容、教师课件以及课程网站，及时整理笔记，搞清知识点，使课堂所学内容系统化。 [授课练习] 根据课程内容，查阅资料，检索文献，确定重点，制作PPT，预习演讲，通过授课和讨论，培养自主学习能力，拓展专业知识面。
《环境微生物检测——采样方法》场景剧本题目：环境微生物检测——采样方法 主题曲、插曲待定 影片主要角色： 男1号梁总，25岁，业务主管（西装革履） 男或女2号小李，20岁，采样组组长（休闲） 女3号小黄，20岁，前台靓女（时尚的靓女） 男3号** 客户，25岁，（带领的衣服）（演成搞笑的土豪人物） 男或女4号：小王，19岁，某学校的顶岗实习生 第一场： 场景：公司前台（汇标公司的前台，甲在埋头做报表，乙在打电话和客户沟通，前台靓女在接水） 时间：上午 人物：前台靓女、客户，前台靓女以及同事两三个。 从门外来了一个大约25岁男性在张望。前台靓女赶紧走出来打开门。 前台靓女：您好。 客户：这里是汇标检测公司吗？ 前台靓女：是啊，有什么可以帮到您？ 客户：我是来自大中国建筑集团有限公司的××。最近我们一个大楼要竣工验收，需要对水质进行检测，你们能做吗？我们不差钱。 前台靓女指引客户坐下，倒一杯水。 前台靓女：这些业务我们做过很多。我们是第三方检测公司，有对该项目进行检测的资质，严格按照国家标准做的。 客户：对水质都监测什么呀？ 前台靓女：《建筑给水排水及采暖工程施工质量验收规范》GB50242-2002中明文规定：
“4.2.3 生活给水系统管道在交付使用前必须冲洗和消毒，并经有关部门取样检验，符合国家《生活饮用水标准检验方法》方可使用。 生活饮用水标准检验方法GB/T5750 – 2006，具体包括13个分项。包括水样采集和保存、感官性状和物理指标、有机物指标、消毒副产品指标、金属指标和微生物指标等等。 对建筑工程竣工验收水质检测，我们一般取pH、色度、浑浊度、臭味、肉眼可见物、总游离氯、耗氧量、菌落总数、大肠菌群等指标。 客户：听起来很专业，好！我信赖你们公司。 前台靓女：那麻烦您去我们主管办公室对签订合同有关事宜进行协商。 第二场： 场景：办公室 时间：某上午 人物：业务主管梁总、采样组组长小李 梁总：小李，这里刚接和大中国建筑集团有限公司签了一个合同。这可是一个大客户，你们要认真对待。你赶紧安排人过去采样吧。 小李：好的。我会尽快安排人过去采样。您放心吧。 第三场： 场景：公司走廊 时间：某上午 人物：采样组组长小李，实习生小王 小李：小王，我们明天要去广州海珠区琶洲那边对一个大楼的自来水进行采样，你准备一下。 小王：好的。我会马上去做。 第四场： 场景：实验室 时间：任意 人物：小李
微生物快速检测方法及应用进展 随着人们生活水平不断提高，各种安全问题越来越受到人们的重视，微生物的污染问题也相应地备受关注。在食品和环境等各个方面都有微生物污染的可能，一旦污染，微生物将大量繁殖而导致食源性疾病或环境污染甚至医院内感染。特别是近年来随着环境污染的加剧和生态平衡的不断破坏，导致感染的致病菌的种类越来越多，病原微生物对人类的威胁越来越大。传统的检验方法，主要包括形态检查和生化方法，其准确性、灵敏性均较高，但涉及的实验较多、操作烦琐、需要时间较长、准备和收尾工作繁重，而且要有大量人员参与［1，2］。所以，迫切需要准确、省时、省力和省成本的快速检验方法。本文对微生物快速检测方法的进展情况及实际应用进行综述，以利于预防食源性疾病及公共卫生突发事件的发生。 1 即用型纸片法 3M公司的perrifilmTMPlate系列微生物测试片，可分别检测菌落总数、大肠菌群计数、霉菌和酵母计数［3］。由RCP Scientific Inc 公司开发上市的Regdigel系列，除上述项目外还有检测乳杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌的产品［4］，这两个系列的产品与传统检测方法之间的相关性非常好。如用大肠菌群快检纸片检测餐具的表面，操作简便、快速、省料，特异性和敏感性与发酵法符合率高，已经被列为国标方法。使用时应正确掌握操作技术和判断标准，从而达到理想的检测效果［5］。美国3M公司生产的PF(Petrifilm)试纸还加入了染色剂、显色剂，增强了菌落的目视效果，而且避免了热琼脂法不适宜受损细菌恢复的缺陷。霉菌快速检验纸片，应用于食品检验中的霉菌具有操作简便，仅需36℃培养，不需要低温设备；快速，仅需2 d就可观察结果，比现在的国家标准检验方法缩短3～5 d，大大提高了工作效率。纸片法与国标法在霉菌检出率上差异无统计学意义，且菌落典型，易判定。纸片荧光法利用细菌产生某些代谢酶或代谢产物的特点而建立的一种酶—底物反应法。只需检测食品中大肠菌群、大肠杆菌的有关酶的活性，将荧光产物在365 nm紫外光下观察即可。同时纸片可高压灭菌处理，4℃保存，简化了实验准备、操作和判断［6］。但由于它们价格昂贵，限制了在基层单位的实际应用。 2 生物化学技术 2.1 PCR技术PCR技术采用体外酶促反应合成特异性DNA片段，再通过扩增产物来识别细菌。由于PCR灵敏度高，理论上可以检出一个细菌的拷贝基因，因此在细菌的检测中只需短时间增菌甚至不增菌，即可通过PCR进行筛选，节约了大量时间，但PCR技术也存在一些缺点：食物成分、增菌培养基成分和其他微生物DNA对Taq酶具有抑制作用，可能导致检验结果假阴性；操作过程要求严格，微量的外源性DNA进入PCR后可以引起无限放大产生假阳性结果，扩增过程中有一定的装配误差，会对结果产生影响。由于以上原因，PCR技术对操作者的自身素质要求很高，对于基层单位而言难以做到。短时间内也不会有经济效益和社会效益，因此影响了这项技术在基层的应用。 2.2 基因探针技术基因探针技术利用具有同源性序列的核酸单链在适当条件下互补形成稳 定的或链的原理，采用高度特异性基因片段制备基因探针来识别细菌。基 因探针的优点是减少了基因片段长度多态性所需要分析的条带数。如法国生物一梅里埃公司的 基因探针检测系统，对于分离到的单个菌落，30 min完成微生物的确证试验［7］， 基因探针的缺点是不能鉴定目标菌以外的其他菌。 3 选择、鉴定用培养基法
伊犁州友谊医院环境微生物学检测报告（空气） 伊犁州友谊医院环境微生物学检测报告（空气） 以下由送检科室填写 以下由检验科填写培养结果及计算结果 科 别： 房间名称： 放置平皿数：中央区5个，周围区9个。 环境等级：百级 放置时间：30分钟 采 样 者： 采样时间： 年 月 日 中央区 菌落数 （个/每平皿） 细菌名称 结果判定： 百级：中央区 周围区 千级：中央区 周围区 万级：中央区 周围区 1 2 3 结果： 平均菌落总数= CFU 1. 合格 2. 不合格 4 5 报告者： 报告时间： 年 月 日 以下由送检科室填写 以下由检验科填写培养结果及计算结果 科 别： 房间名称： 放置平皿数：中 央区5个，周围区9个。 环境等级：百级 放置时间：30分 钟 采 样 者： 采样时间： 年 月 日 周围区 菌落数 （个/每平皿） 结果判定： Ⅰ类环境：洁净手术部符合GB50333要求； 其他洁净场所≤4CFU /30min ?直径9cm 平皿 Ⅱ类环境：≤4CFU /15min ?直径9cm 平皿 Ⅲ类环境：≤4CFU / 5min ?直径9cm 平皿 1 2 3 结果： 平均菌落总数= CFU 1. 合格 2. 不合格 4 5 报告者： 6 报告时间： 年 月 日
伊犁州友谊医院环境微生物学检测报告（空气） 伊犁州友谊医院环境微生物学检测报告（空气）以下由送检科室填写以下由检验科填写培养结果及计算结果 科别： 房间名称： 放置平皿数：房间面积≤30m3对角线放置3个，＞30m3 放房间中点及四个角5个。 环境等级：Ⅰ类Ⅱ类Ⅲ类 放置时间：Ⅰ类环境放置30分钟Ⅱ类15分钟、Ⅲ类5分钟 采样者： 采样时间：年月日采样点 菌落数 （个/每平皿） 结果判定： Ⅰ类环境：洁净手术部符合GB50333要求； 其他洁净场所≤4CFU/30min?直径 9cm平皿 Ⅱ类环境：≤4CFU/15min?直径9cm平皿 Ⅲ类环境：≤4CFU/ 5min?直径9cm平皿 结果：平均菌落总数= cfu 1. 合格 2. 不合格 报告者： 报告时间：年月日 以下由送检科室填写以下由检验科填写培养结果及计算结果 科别： 房间名称： 放置平皿数：中央区5个，周围区9个。 环境等级：百级 放置时间：30分钟 采样者： 采样时间： 年月日 周围区 菌落数 （个/每平皿） 结果判定： Ⅰ类环境：洁净手术部符合GB50333要求； 其他洁净场所≤4CFU/30min?直径9cm平皿 Ⅱ类环境：≤4CFU/15min?直径9cm平皿 Ⅲ类环境：≤4CFU/ 5min?直径9cm平皿 7 8 9 结果：平均菌落总数= CFU 1. 合格 2. 不合格 报告者： 报告时间：年月日
空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准 1、目的： 检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。 2、参照标准： 中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1－2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。 3、采样与检测方法： 3.1空气的采样与测试方法 3.1.1样品采集： (1)取样频率： a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。 b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。 c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。 d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。 e)正常生产状态的采样，每周一次。 （2）采样方法 在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m。采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直
径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。 3.1.2菌落培养： （1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。 （2）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。 （3）菌落计算： a) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或 在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。 b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2个 以上菌落计数。 3.2工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法： 3.2.1样品采集： (1)取样频率： a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车 间卫生清扫消毒情况。 b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。 c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验 不合格点，整改后再进行擦拭检验。 d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。 e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。 f)正常生产状态的擦拭，每周一次。 （2）采样方法： a) 工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取 与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的