实验三环境微生物的检测
一、实验目的
1.了解周围环境中微生物的分布情况。
2.懂得无菌操作在微生物实验中的重要性。
3.了解四大类微生物的菌落特征。
二、实验原理
在我们周围的环境中存在着种类繁多的、数量庞大的微生物。土壤、江河湖海、尘埃、空气、各种物体的表面以及人和动物体的口腔、呼吸道、消化道等都存在着各种微生物。由于它们体积微小，人们用肉眼无法观察到它们个体的存在。但是只要稍加留意，我们就可以在发霉的面包、朽木上看到某些微生物群体。这些现象表明，自然界只要有微生物可以利用的物质和环境条件，微生物就可以在其上生长繁殖。据此，我们在实验室里就可以用培养基来培养微生物。
培养基是用人工配制的、适合微生物生长繁殖和产生代谢产物用的混合养料。其中含有微生物所需要的六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、气体和水分。此外，根据不同的微生物的要求，在配制培养基时还需用酸液或碱液调节至适宜的pH。配制好的培养基必须进行灭菌。所谓灭菌是指采用各类的物理或化学因素，使物体内外的所有微生物丧失其生长繁殖能力的措施。经过灭菌后的物体是无菌的。消毒是与灭菌完全不同的概念，它是指用较温和的物理因素杀死物体表面和内部病原微生物的一种常用的卫生措施。
灭菌的方法较多，广泛使用的是高温灭菌，其中最常用的是高压蒸汽灭菌法。此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的。在1.05kg/cm2的蒸汽压力下，温度可达121℃。一般只要维持15~20min，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。
微生物的接种技术是生物科学研究中的一项最基本操作技术。为了确保纯种不被杂菌污染，在整个接种过程中，必须进行严格的无菌操作。在实验过程中必须牢固树立无菌概念，经常保持实验台及周围环境的清洁，严格无菌操作，避免杂菌的污染，这是保证实验成功的必要条件。
如将微生物接种到适合其生长的固体培养基表面，在适宜的温度下(一般细菌37℃：霉菌等28℃)，培养一段时间(一般24~48h)后，少量分散的菌体或孢子就可生长繁殖成肉眼可见的细胞群体，此即菌落。如平板上的菌落是由单个细胞(或单个孢子)生长繁殖而成的，就是一个纯种细胞群或克隆；若培养后大量菌落聚集在一起形成的为菌苔。不同种的微生物可形成大小、形态各异的菌落，根据微生物菌落形态的不同，可初步鉴别出四大类微生物：细菌、放线菌、酵母菌和霉菌。
细菌的菌落呈圆形、较小而薄、透明或不透明、质地“细腻”，有的具有色泽，有的边缘不整齐，有的表面湿润、光滑，有的表面干燥有褶皱。此外，细菌常因分解含氮化合物而产生臭味。
酵母菌的菌落通常比细菌菌落大，圆形、厚、不透明、色素单一，多为乳白，少数为橙或红色。酵母菌因普遍能发酵含碳有机物产醇，故菌落多伴有酒香味。
防线菌菌落小而致密，或坚硬、或呈粉状。不少放线菌还产生特殊的土腥味。
霉菌菌落大而疏松、或大而紧密。气生菌丝会发育形成一定形状、构造和色泽的子实器官，所以菌落表面往往有肉眼可见的构造和颜色。
三、实验材料
人体表和空气中的微生物。
四、实验器材与试剂
1.器材
恒温培养箱、无菌平皿、电炉、酒精灯、火柴、无菌棉签和记号笔。
2.试剂
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、酵母膏葡萄糖培养基(简称YPD)、高氏一号培养基和查氏培养基。
五、实验操作
I.融化培养基
将装有无菌培养基的三角瓶置水浴中煮沸，待培养基融化后取出，当冷至50~60℃左右时，进行下一步。
II、倒平板
有持皿法和叠皿法，操作要点如下：
1.持皿法
(1)将无菌培养皿叠放在酒精灯左侧，以便拿取。
(2)点燃酒精灯。
(3)酒精灯旁，左手握三角瓶底部，倾斜三角瓶，右手旋松棉塞，用右手小指与小尾鱼际(即小指边缘)夹住棉塞并将其拔出(切勿将棉塞放在桌上)，随之将瓶口在火焰上过一下(不可灼烧，以防爆裂)，以杀死可能沾在瓶口的杂菌。然后将三角瓶从左手换至右手(用拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部)。操作中瓶口应保持在火焰2~3cm，瓶口始终向着火焰，以防空气中微生物的污染。左手拿起一套平皿，用无名指和小指托住皿底，用中指和拇指夹住皿盖，食指于皿盖上为支点，在火焰旁，打开皿盖，让三角瓶伸入，随后倒入培养基。一般倒入15ml左右培养基即可铺满整个皿底。盖上皿盖，置水平位置待凝。然后将三角瓶移至左手，瓶口在次过火并塞紧瓶盖。
2. 叠皿法
此法适于在超干净台上操作，基本步骤同持皿法。不同之处是左手不必持皿，而是将瓶皿叠放在酒精灯的左侧并靠近火焰。按上述方法用右手拿三角瓶，左手打开最上面的皿盖，倒入培养基，盖上皿盖后即移至水平位置待凝。再依次倒下面的平皿。操作中瓶口始终向着火焰，以防空气中微生物的污染。
III、贴标签
待培养基完全凝固后，在皿底帖上标签，注明检测类型，组别及日期(也可用记号笔书写在皿底)
IV、检测方法
环境中微生物种类多样，检测方法也各异，先选几种列举如下：
1.空气检测实验室空气中的微生物时，只要打开无菌平板的皿盖，让其暴露在空气中一段时间(5~10min)然后将皿盖盖上即可。
2.桌面检测实验台桌面微生物是，可用一根无菌棉签，先在无菌平板的
图4-1 含菌棉签平板划线示意图
左：开启皿盖法右：划线示意图
一个区域内湿润和试划几下，然后用其擦抹桌面等物体表面，在以此棉签在平板的另一区域作来回划线接种(如图4-1)。本操作应以无菌操作要求进行，即在火焰旁用左手拿起平板，用中指无名指和小指托住皿底部，用食指和大拇指夹住皿盖并开成一缝，右手持棉签在培养基表面划线接种，无菌棉签湿润和试剂区可作为无菌对照。
3.头发移去放在桌面上的无菌平板的皿盖，是头发部位位于平板的上方，并用手指拨动头发数次，在盖上皿盖即可。
4.手指可用未洗的手指先在无菌平板的培养基一侧(约一半的面积)作划线接种，并在皿底作好标记。然后用肥皂、流水洗手，用洗净的手指于平板培养基的另一侧作同样的划线接种，盖好皿盖。待培养后比较两杂菌生长的情况。
5.口腔打开无菌平板培养基的皿盖，使口对着平板培养基的表面，以咳嗽或打喷嚏的方式接种，然后盖上皿盖。
V、培养
将以上各种检测平板倒置于28℃培养箱中培养，至下周实验时观察并计数各平板上的菌落数。
VI、观察
注意观察不同类型菌落的大小、外形和颜色等特征，将观察结果记录在实验报告上。
VII、清洗
观察记录完毕后，将含菌平板放在沸水中煮30min以上，杀死培养基表
面生长的各种微生物，然后清洗并晾干培养皿。
六、思考题
1.通过本实验后，谈谈你对微生物的分布以及数量的认识。
2.本实验中那些步骤属无菌操作？为什么？
3.如何描述菌落的形态特征？
环境工程微生物学讲义 本课程是环境学院各专业学生的专业基础课；与另一门课《环境微生物学实验》相结合，构成一个完 整的体系；本课程强调每个学生要动手，通过实验，加深对讲课内容的理解和记忆；本课程内容分两大部分：一是微生物学的基础知识；二是微生物学在环境领域中的应用。 绪论 主要内容： 环境微生物学的研究对象和任务研究对象研究任务微生物学概述微生物的定义微生物的特点原核微生物与真核微生物微生物的命名与分类第一节环境工程微生物学的研究对象和任务一、环境微生物学的研究对象定义：环境微生物学是研究与环境领域（包括环境工程、给水排水工程）有关的微生物及其生命活动 规律。?其内容包括：微生物个体形态、群体形态；细胞结构功能、生理特性、生长繁殖、遗传变异 等；微生物与环境的关系（尤其是微生物与污染环境之间的关系）；微生物对物质的转化分解作用（特 别是应用微生物来处理各种污染物质，如废水、废气和固体废弃物）。二、环境工程微生物学的研究任务 总的归纳起来有两大方面的任务： （1）防止或消除有害微生物 （2）充分利用有益的微生物资源 三、微生物在环境污染治理（水处理）中的应用
１）在环境监测方面（水污染的监测） 利用在环境中生存的生物的种类、数量、活性等特征，来判断环境状况的好坏。这些生物称为指示生 物。 生物监测的优缺点： 生物监测的主要优越性： (a)长期性——汇集了生物在整个生活时期中环境因素改变的情况，可以反映 当地的环境变化； (b)综合性——能反映环境诸因子、多成分对生物有机体综合作用的结果； (c)直观性——直接把污染物与其毒性联系起来； (d)灵敏性——有时甚至具有比精密仪器更高的灵敏性，有助于提早发现环境 污染。生物监测的主要缺点： (a)定量化程度不够； (b)需要一定的专业知识和经验。 ２）在环境治理方面 包括水、大气、固体废弃物处理方面其中特别在水处理方面，有着大量成功应用的例子。 第二节微生物概述一、微生物的定义 微生物是指所有形体微小，用肉眼无法看到，须借助于显微镜才能看见的，单细胞或个体结构简单的 多细胞，或无细胞结构的低等生物的统称。 Too small to be seen with naked eyes 二、微生物的特点
中国海洋大学本科生课程大纲 课程属性：公共基础/通识教育/学科基础/专业知识/工作技能，课程性质：必修、选修 一、课程介绍 1.课程描述： 随着各种环境问题的日趋严重，微生物实验技术在环境领域得到广泛应用和迅速发展，为人们改造环境和保护环境提供重要的技术手段。本课程以环境工程领域常用的微生物实验技术的教学为主要内容，并以具体的环境问题为依托，使学生掌握专业知识在实践中的应用，提升学生的实践技能。 Microbiology experimental technology has been widely used and rapidly developed in the environmental field with the increasingly serious environmental problems. It plays an important role in transforming the environment and protecting the environment. The main teaching contents of the course are the common microbiology experimental technologies in various environmental issues. The course will enable students to master the professional skills. 2.设计思路： 本课程主要学习和掌握环境领域常用的微生物实验技术，了解其在环境保护和环境改造过程中的实践应用及其重要作用。课程内容的设置注重实用性和可操作性，分为基础实验部分和综合实验部分。基础实验部分以常用微生物实验技术的学习为重点，并注重实验内容的系统性和连贯性；综合实验部分以具体环境问题为依托，进行微生物实 - 7 -
微生物实验 微生物实验 细菌形态观察 细菌分布 消毒灭菌
细菌形态观察 一、实验目的 1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护 2.掌握细菌的三种形态 3.掌握临床常见细菌的形态及染色 4.掌握细菌的特殊结构 5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点 二、实验原理 1. 普通光学显微镜（油镜）的使用 1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头 2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时 停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰 3. 根据需要调节显微镜亮度 2. 普通光学显微镜的维护 1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前 2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最 后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头 3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内 4.做好使用记录 3．微生物知识 1．细菌按形态分类： 球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等） 杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等） 螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等） 2．细菌的基本结构 细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体 3．细菌的特殊结构 荚膜：如肺炎双球菌 鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。如：变形杆菌为周毛菌 菌毛 芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌 4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。 原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体 真核类：真菌、原生动物、显微藻类 非细胞类：病毒、亚病毒 5．真菌 单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌
1.使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察 油镜指的是为了减少高倍镜的折光，在物镜和玻片之间滴上松节油等。所以油镜其实就是给高倍镜物 镜和玻片之间加油。而所有高倍镜之前都先要用低倍镜观察，是因为低倍镜下好找目标。低倍镜放大 10 倍，高倍镜放大40 倍，油镜放大100 倍，先用低倍镜、高倍镜，既便于找到目标，又方便调焦距。 要使显微镜视野明亮，除采用光源外，还可以采取哪些措施 加大聚光器光圈，同样设置下低倍物镜比高倍物镜视野亮 把材料切薄一点透光较好 使用滤光片，增加反差和清晰度。 向上调节聚光器。 2.怎样区别活性污泥中的几种固着型纤毛虫 大多数情况下，会遇到钟虫、柄纤毛虫、累枝虫等。三种虫形态均类似钟的形状，钟虫每个都是独 立的，相互之间没有连接；柄纤毛虫类似钟虫，量很大，只是在根部汇聚在一根柄上，可以理解成一 根柄上分出很多个钟虫；而累枝虫就像是树，一根柄上分出很多个柄，然后很多个柄上又分出很多个 “钟虫”。 用压滴法制作标本片时注意什么问题 1. 使用的载玻片和盖玻片都要干净； 2. 制成的标本片不能有气泡 4. 涂片为什么要固定，固定时应注意什么问题 如果不固定的话你进行染色后水洗去多余染料的同时会将菌体一并冲走 注意的就是不要弄死细胞咯！不知道你用什么方法，如果是用火，那就是不要烧死它们，用 载玻片背面靠近火源，过两次就好。 Over 一般我都是用酒精灯的外焰烤的但是要注意温度。温度过高挥出现变形细胞。温度已载玻片接触手背，手背不觉得烫为宜。加热只水分蒸发完全后，再在酒精灯外焰上通过两到三次，就成了。 革兰氏染色法中若只做1~4 步，不用番红染液复染，能否分辨出革兰氏染色结果为什么 能。在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。 革兰氏染色原理和番红复染本身并无关系。 但是，但是， 你能指着一片空白的照片说这些细菌没有被结晶紫染色所以是阴形吗鬼 知道那里有没有细菌。 革兰氏染色在微生物学中有何实践意义 细菌大多可以按照革兰氏法划分，在杀菌方面自然管用， 还有实验方面， 比方说，实验需要G阳性细菌作为研究材料，如果最后需要杀死细菌获取什么代谢产物，已知是G阳性细菌，那就有目的地杀除了，摒除了盲目手段。
《环境工程微生物学》期末考试试卷（A卷） （2002-2003年度上学期） 姓名班级学号成绩 一、选择题（单选或多选，20×2=40） 1、对微生物的概念，以下最正确、最完整的叙述是。 A、微生物是一类个体微小、结构简单，必须借助显微镜才能观察清楚的生物。 B、微生物是一类结构简单，具有单细胞结构，必须借助显微镜才能观察清楚其结构的生物。 C、微生物是一类个体微小、结构简单，具有单细胞结构，必须借助显微镜才能 观察清楚其结构的最低等生物。 D、微生物是一类个体微小、结构简单，具有单细胞、简单多细胞结构或非细胞 结构，必须借助显微镜才能观察清楚其结构的最低等的生物 2、生物五界分类系统包括。 A、原核生物界、原生生物界、真菌界、动物界、植物界。 B、病毒界、原核生物界、真核生物界、动物界、植物界。 C、原核生物界、真核生物界、真菌界、动物界、植物界。 D、病毒界、原核生物界、真核生物界、动物界、植物界。 3、以下微生物属于环境工程微生物范畴的是。 A、病毒、蓝细菌、真细菌、粘细菌。 B、原生动物、蓝细菌、真核藻类、放线菌、粘细菌。 C、微型后生动物、酵母菌、霉菌、真细菌。 D、病毒、螺旋体、细菌、放线菌、 真菌、原生动物、微型后生动物。
4、关于细菌的形态和大小的描述，以下正确的是。 A、细菌的形态包括球菌、杆菌、螺旋菌、丝状菌。 B、杆菌有长杆菌、短杆菌、弧杆菌、链杆菌和芽孢杆菌之分。 C、在任何情况下，细菌的形态都是稳定的。 D、多数球菌的直径为0.5~2.0μm。 5、以下物质属于细胞质内含物的是。 A、细胞膜 B、核糖体 C、荚膜 D、异染粒 E、气泡 6、荚膜具有的功能包括。 A、荚膜可以维持细菌的细胞形态。 B、荚膜为鞭毛提供支点，使鞭毛运动。 C、荚膜是细菌在其表面分泌的一种粘性物质，它可以保护细菌免受干燥的影响； 当营养缺乏时可以作为碳源和氮源被利用。 D、细菌的荚膜有生物吸附的作用，将废水中有机物、无机物及胶体吸附在细菌体表面上。 7、细菌在固体培养基上的菌落特征是细菌分类鉴定的重要依据，描述菌落特征应包括。 A、菌落的形态 B、菌落的大小 C、菌落的光泽 D、菌落的颜色 E、菌落的质地及透明度 F、菌落的边缘特征 8、古菌具有的特点有。 A、古菌有精确的方角和垂直的边构成直角几何形态的细胞； B、古菌的细胞膜组分大多数是脂蛋白，蛋白质是酸性的；
环境微生物学试题答题要点(精华版) 一、名词解释（每题1.5分，计30分） 噬菌体：是侵染细菌、放线菌、霉菌等微生物的病毒。 菌落：菌落是指在固体平板培养基上，微生物的单细胞经过生长繁殖，形成肉眼能看到的，具有一定形态特征的微生物群体。PHB：是细菌细胞中含有的叫聚羟基丁酸盐的贮藏物质。 初生菌丝体：担子菌的孢子直接萌发而成的菌丝体，一般不会繁殖成为子实体。 分生孢子：分生孢子是由菌丝分枝顶端细胞或者由菌丝分化成的分生孢子梗的顶端细胞分割缢缩而成的单个或者成簇的孢子。间歇灭菌法：是利用常压蒸气反复灭菌的方法。 生物氧化：物质在生物体内经过一系列连续的氧化还原反应逐步分解并释放能量的过程。 化学杀菌剂：能够抑制和杀死微生物的化学物质。 共生：两个微生物在一起时形成特殊的结构和功能，两者高度的协调和彼此得利。 启动子：是一个“开始”的信号，它含有与RNA聚合酶结合并启动转录的保守序列。 操纵子：负责合成特殊蛋白质的基因簇。 生态系统：是生物群落与其生存环境组成的整体系统。 活性污泥：污水处理过程中的具有活性的微生物絮凝体。 联合固氮：是指某些生活在植物根的表面至根皮层细胞间而不进入植物根细胞的微生物进行固氮作用的现象。 反硝化细菌：反硝化作用是指微生物还原硝酸产生气态氮的过程。 活性污泥法：以活性污泥为主体的污水生物处理技术。 生物反应器：是通过酶、微生物、动植物细胞等的固定化，进行物质转化的反应器。 根际微生物：生长在植物根系直接作用土壤范围内的微生物。 纯培养：是指在实验室条件下，从一个微生物细胞繁殖得到的后代。 细胞壁：细胞壁是包在细菌细胞表面、内侧紧贴细胞质膜的较为坚韧并略具弹性的结构。 二、是非题（每题1分，计10分） ?溶源性细菌在一定条件诱发下,可变为烈性噬菌体裂解寄主细胞。( + ) ?细菌形态通常有球状、杆状、螺丝状三类。自然界中杆状最常见，球状次之，螺旋菌最少。( - ) ?某些藻类如团藻属存在群体形态。( + ) ?光合磷酸化和氧化磷酸化一样都是通过电子传递系统产生ATP。( - ) ?在固体培养基中，琼脂的浓度一般为0.5—1.0%。( - ) ?称为嗜碱菌的那些细菌是能在pH 7.0以上的环境中生长的细菌。( + ) ?在真核微生物细胞的染色体中，DNA是与组蛋白结合形成染色体的。( + ) ?EMP、ED等糖酵解途径的共同特点是将葡萄糖降解到丙酮酸。( + ) ?精确定量某些成分而配制的培养基是所有成分的性质和数量已知的培养基，称为天然培养基。( - ) ?在实验室中细菌不能形成菌落。( - ) 三、选择题（每题1分，计20分） 1. 适合所有微生物的特殊特征是__c__。 (a)它们是多细胞的（b)细胞有明显的核 (c)只有用显微镜才能观察到（d）可进行光合作用 2. 病毒缺乏__b___。 (a)增值能力(b)独立代谢的酶体系 (c)核酸 (d)蛋白质 3. G－菌由溶菌酶处理后所得到的缺壁细胞是___d__。 (a) 支原体(b) L型细菌(c) 原生质体(d) 原生质球 4. 酵母菌的细胞壁主要含___d__。 (a) 肽聚糖和甘露聚糖 (b) 葡聚糖和脂多糖 (c) 几丁质和纤维素 (d)葡聚糖和甘露聚糖 5. 下列能产子囊孢子的霉菌是__c__。 (a) 毛霉和根霉 (b) 青霉和曲霉
实验一、微生物的简单染色思考题 1油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？ 答：油镜在使用时必须在载玻片与物镜之间滴加镜头油。油镜使用过程中要注意两点： （1）、使用后镜头的清洁：镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度，用完 油镜必须进行“三擦” （观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜 纸沾取少量二甲苯（或者乙醇乙醚溶液）擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯， 后将镜体全部复原）。 （2）、 .观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别 在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 2、使用油镜时，为什么必须用镜头油？ 答：在使用普通显微镜时，当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 3、镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？ 答：低倍镜视野比较大，能看到的范围大，容易找到观察的目标，然后在用放大倍数高的高倍镜或油镜有目的的观察。 实验二、革兰氏染色 （1）为什么必须用培养24 h 以内的菌体进行革兰氏染色？ 答： 24h 以内的菌体处于活跃生长期，菌体细胞壁具有典型特征，而处于老龄的革兰氏阳 性细菌壁结构开始发生变化，染色时会被染成红色而造成假阴性 （2）要得到正确的革兰氏染色结果，必须注意哪些操作？哪一步是关键步骤？为什么？ 答：应注意如下几点： 其一，选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性； 其二，涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性； 其三，脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性 （3）当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操作正确，结果可靠？ 答：当要确证未知菌的革兰氏反应时，可用已知菌进行混合涂片，使二者染色条件保持一致，如果已知菌的结果与预期相符，则证明操作操作正确，结果可靠。 实验三、微生物的显微镜直接计数法 1、在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？ 答： 1）优点：直观、快速、操作简单。 2）缺点：
《环境工程微生物学》课程综合复习资料 一、填空题 1．细菌按形态可分为球菌、杆状；螺旋状；丝状四种。 2 3.各种微生物有一些共同特点，包括个体极小；分布广，种类繁多；繁殖快，易变异。 4.细菌的呼吸类型分为发酵；好氧呼吸；无氧呼吸。 5.细菌营养物质吸收和运输的四种途径分别是单纯扩散；促进扩散；主动运输；基团转位。 6.列举几种微生物所需的生长因子：B族维生素；维生素C；氨基酸；嘌呤；嘧啶；（生物素；烟酸）。 7.细菌连续培养有恒浊连续培养；恒化连续培养两种。绝大多数污（废）水生物处理方法均采用恒化连续培养 8.微生物需要的营养物质有水；碳素营养源；氮素营养源；无机盐；生长因子。9．菌种保藏方法有定期移植法；干燥法；隔绝空气法；蒸馏水悬浮法；综合法5种。 10．生态系统有四个基本组成：环境；生产者；消费者；分解或转化者。 11．细菌的基本结构包括细胞壁细胞膜细胞质细胞核。 12．病毒的化学组成有蛋白质；核酸。少数个体大的病毒，还含有类脂质；多糖13．微生物按照细胞结构的有或无可划分为非细胞结构生物；细胞结构微生物；按照细胞核膜、细胞器及有丝分裂等的有无，可划分为原核微生物；真核微生物。14．细胞质的化学组成有蛋白质；核酸；多糖；脂类；无机盐；水。
15．细菌表面带负电荷。 16．原生动物可划分为四类：鞭毛纲；肉足纲；纤毛纲；孢子纲 17．酵母菌有发酵型；氧化型两种类型，其中前者是将糖转化为乙醇；二氧化碳的一类酵母菌。 18．各种辅酶和辅基中，作为电子传递体系的组成成分的有NAD和NADP；FMN和FAD；辅酶Q，它们各自的功能是传递氢；传递氢；传递氢和电子。 19．污（废）水生物处理中，好氧活性污泥要求碳氮磷比为BOD ：N：P＝100：5： 5 ：N：P＝100：6：1。 1，厌氧消化污泥中的厌氧微生物群体为BOD 5 20．细菌衰亡的原因包括营养物被耗尽，细菌进行内源呼吸；有毒代谢产物积累，抑制生长繁殖。 21．细菌的营养类型有光能自养型、化能自养型、光能异养型、化能异养型 22．根据细菌对温度的最适生长需求，可将细菌分为4类：嗜冷菌；嗜中温菌；嗜热菌；嗜超热菌。 23．微生物之间的关系有竞争关系；原始合作关系；共生关系；偏害关系；捕食关系；寄生关系 24．好氧活性污泥的结构和功能的中心是菌胶团 25．核糖体的功能是合成蛋白质的部位，鞭毛的功能是运动。 1.病毒（Virus）： 没有细胞结构，专性寄生在活的敏感宿主体内，可通过细菌过滤器，大小在μm以下的超微小生物。 2.菌胶团： 多个细菌个体排列在一起，由公共荚膜包藏形成的一定形状的细菌集团。
实验三环境微生物的检测 一、实验目的 1.了解周围环境中微生物的分布情况。 2.懂得无菌操作在微生物实验中的重要性。 3.了解四大类微生物的菌落特征。 二、实验原理 在我们周围的环境中存在着种类繁多的、数量庞大的微生物。土壤、江河湖海、尘埃、空气、各种物体的表面以及人和动物体的口腔、呼吸道、消化道等都存在着各种微生物。由于它们体积微小，人们用肉眼无法观察到它们个体的存在。但是只要稍加留意，我们就可以在发霉的面包、朽木上看到某些微生物群体。这些现象表明，自然界只要有微生物可以利用的物质和环境条件，微生物就可以在其上生长繁殖。据此，我们在实验室里就可以用培养基来培养微生物。 培养基是用人工配制的、适合微生物生长繁殖和产生代谢产物用的混合养料。其中含有微生物所需要的六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、气体和水分。此外，根据不同的微生物的要求，在配制培养基时还需用酸液或碱液调节至适宜的pH。配制好的培养基必须进行灭菌。所谓灭菌是指采用各类的物理或化学因素，使物体内外的所有微生物丧失其生长繁殖能力的措施。经过灭菌后的物体是无菌的。消毒是与灭菌完全不同的概念，它是指用较温和的物理因素杀死物体表面和内部病原微生物的一种常用的卫生措施。 灭菌的方法较多，广泛使用的是高温灭菌，其中最常用的是高压蒸汽灭菌法。此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的。在1.05kg/cm2的蒸汽压力下，温度可达121℃。一般只要维持15~20min，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。 微生物的接种技术是生物科学研究中的一项最基本操作技术。为了确保纯种不被杂菌污染，在整个接种过程中，必须进行严格的无菌操作。在实验过程中必须牢固树立无菌概念，经常保持实验台及周围环境的清洁，严格无菌操作，避免杂菌的污染，这是保证实验成功的必要条件。
微生物实验报告模板 淀粉与微生物篇一：实验十分离产淀粉酶的微生物 第十次实验分离产淀粉酶微生物 学院：生命科学学院 专业：生物科学类 年级：20XX级 姓名： 学号：1007040085 20XX年XX月XX日 实验十分离产淀粉酶的微生物 一、实验目的 1、熟悉常用微生物培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的配制方法。 2、学习各种无菌操作技术，并用此技术进行为微生物稀释分离、划线分离接种。 3、用平板划线法和稀释涂布平板发分离微生物。 4、认识为微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。 5、掌握分离产淀粉酶微生物的试验方法和步骤，了解产淀粉酶的微生物种类及形态。 二、实验原理 土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。一般
在较干燥，偏碱性、有机质丰富的土壤中放线苗数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些。本次实验从土壤中分离产淀粉酶的微生物，应该取那些富含产淀粉酶的微生物的土样。从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一类型微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有 1、简单单细胞挑取法 2、平板分离法和稀释涂布平板法 此次实验采取的是平板分离法和稀释涂布平板法结合，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。其原理包括： 1)稀释后的细胞悬液图不在平板上可以分离得单个菌株 2)在适合于待分离微生物的生长条件（如营养、酸碱度、温度与氧等）下培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 3)微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。 以淀粉作为惟一碳源的培养基培养未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能生长，且菌落周围出现透明圈（淀粉不透明，被消化后变透明），则产淀粉酶微生物被分离出来。本实验
环境工程微生物学综合实验- 功能菌（絮凝菌）的分离、筛选与性能研究 实验须知* 一、环境工程微生物学实验目的 1. 通过实验进一步加深理解课堂讲授的理论内容。 2. 训练学生掌握微生物学最基本的操作技能，建立无菌概念并掌握无菌操作技术。 通过实验，培养学生分析问题、解决问题的能力及创新能力，提高学生的综合素质，为将来能够独立工作打下坚实的基础。 二、环境工程微生物学实验基本要求 1. 每次实验前必须对实验内容进行充分预习，弄清实验目的、原理及操作步骤，以免手忙脚乱，影响实验课效果。 2. 实验前，按内容要求仔细检查所需仪器、药品是否齐全，若有问题及时提出。 3. 整个实验过程要严格按操作步骤进行，不得马马糊糊，否则会造成错误，甚至出现事故。 4. 实验过程中要做好记录，特别是对于连续观察的实验，必须认真记下每次观察到的现象与结果，然后进行整理分析，写出实验报告。 5. 使用贵重精密仪器时要特别小心，注意保护，用毕要复原，并进行登记。实验使用的一切物品实验完毕均放回原处。损坏仪器照价赔偿。 6. 实验室要保持整洁、干净，不准大声喧哗，勿随意走动，严禁吸烟，不许吃东西，不准随便乱丢废物。 7. 实验过程中，一些易燃品如乙醇、丙酮等切勿接近火焰。如遇火险，要先切断火源，再用沙土或湿布灭火，必要时应使用灭火器。 8. 使用过的废液及琼脂培养基不得直接倒入水池内，应先进行灭菌处理，然后再将废液倒入下水道，将琼脂培养基埋掉。 9. 离开实验室前要将桌面擦净，清扫卫生，检查电源、火源、自来水、门窗
是否关闭，以确保安全。 实验一、絮凝菌分离、筛选准备实验 （器皿的包装、无菌水、培养基的制备与灭菌） 一、器皿的包装 （一）实验目的 学会微生物技术实验中所用器皿的包装方法及意义。 （二）包装方法 1.培养皿的包装 用牛皮纸或旧报纸进行包装。包好后灭菌备用。 2. 吸管的包装 在已干燥的吸管的平头端距0.5cm处，塞长约1.5cm的棉花，松紧要合适。过松，棉花易脱出；过紧，吹吸费力，甚至吹吸不动。棉花的作用是防止吸管中的细菌吸入口中，同时又防止口中的细菌吹入管中。将塞好棉花的吸管的尖端，放在裁成4cm ~ 5cm宽的长报纸条的一端，吸管与纸条约成45o角。折叠纸角，包住吸管尖端，然后以螺旋式在桌面上用力向前搓转，纸条将吸管包紧，余下的纸尾打成结。将这样包好的几根或几十根吸管放一起，再用一张牛皮纸或两张报纸包装，然后干热灭菌。 3.三角瓶的包装 在三角瓶的瓶口上塞上合适大小的瓶塞（棉塞或泡膜塑料塞），在瓶口外面包上2层至 3层报纸，扎好灭菌。若进行湿热灭菌，最好再包一层牛皮纸或铝铂，以免打湿棉塞。 二、培养基的制备与灭菌 （一）实验目的 1．掌握培养基和无菌水的制备方法。 2．掌握高压蒸汽灭菌技术。 3．了解灭菌前的准备工作。 （二）材料
环境微生物学实验报告 一、实验目的 （1）了解普通光学显微镜的构造及原理，掌握显微镜的操作及保养方法。（2）观察、识别几种原核微生物。真核微生物的个体形态，学会生物图的绘制。 二、实验器皿与材料 （1）器皿：显微镜、擦镜纸、二甲苯。 （2）材料：示范片：细菌三形（球状、杆状、螺旋状）、弧状（硫酸盐还原菌）、丝状（浮游球衣菌等）、细菌鞭毛及细菌荚膜。放线菌、颤蓝细菌、微囊蓝细菌或念珠蓝细菌等。 三、实验步骤 （1）将标本片放在载物台上，使观察的目的物置于圆孔正中央。（2）将镜头换成低倍镜，将粗调节器向下旋转（或载物台向上旋转），眼睛注视物镜。当物镜的尖端距离载玻片约0.5cm 处时停止旋转。 （3）左眼对着目镜观察，将粗调节器向上旋转，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细调节器调节，直至目的物清晰。此时找到目的物并移至中央。（4）换成高倍镜，观察目的物，旋转细调节钮，直至视野清晰。（5）观察示范片，绘出其形态图。 四、思考题 （1）使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察？答：为了
找到目的物并移动到中央。 （2）要使视野明亮，除采用光源外，还可采取哪些措施？ 答：调大孔径光阑，调整光源。如果是用反光镜的显微镜，用凹面镜可使视野明亮。 五、生物图 实验二、微生物培养基的配制与灭菌 一、实验目的 （1）熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。 （2）了解配置微生物培养基的基本原理，掌握配置、分装培养基的方法。（3）学会各类物品的包装、配置（稀释水等）和灭菌技术。 二、实验器皿与材料 （1）实验器皿：高压蒸汽灭菌器、干燥箱、煤气灯、培养皿、试管、刻度移液管、锥形瓶、烧杯、两桶、药物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉网、药匙、铁架、表面皿、pH试纸和棉花等。 （2）材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和琼脂等。 三、实验原理 培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁及微量元素和水，按一定的体积分数配置而成。调整合适的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。由于微生物种类及代谢类型
微生物实验报告 一环境中的微生物的检测和分离纯化 实验目的： 1 学习并掌握无菌操作技术原理和方法 2 学习用稀释涂布法分离微生物 3 认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的原理 实验材料： 1 土样溶液0.5ml，无菌生理盐水 2 取液器(1000μL一支，100μL一支)，培养箱，培养皿(12个)，无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂棒，接种环，1000μL无菌吸头若干，记号笔，酒精灯，火柴，试管架 实验步骤： A培养基的制备(已提前制备好) B周围环境中的微生物的检测，在牛肉膏蛋白胨培养基平板上作如下实验 1 取三个平板，用100μL的取液器分别吸取100μL的河水、豆浆、豆奶，均匀加在三个培养基上，并用无菌玻璃涂棒涂布均匀(要多涂几次，时间约1-2分钟，使细菌均匀分布)。 2 再取三个平板，三个同学分别用手指(未洗过)在培养基上涂抹几秒钟，一个同学对应一个平板。 3 再取一个平板，其中一个同学将手用肥皂洗过后，再在培养基上涂抹。 4 再取一个平板，打开皿盖，一个同学对着培养基咳嗽，使口腔中的气流和飞沫落到培养基上。 5 再取一个平板，打开皿盖，在空气中放置10min左右，关上皿盖。 6 将上述9个平板放置在35℃的培养箱中培养24h。 C土壤中分离微生物 1 采土样，制备土壤稀释液(已准备好) 2 取三个平板，每个培养基上用取液器添加100μL的土壤稀释液，并用无菌玻璃涂棒涂布均匀(要多涂几次，时间约1-2分钟，使细菌均匀分布)。 3 将平板依旧放在35℃的培养箱中培养24h。 D菌落计数 培养24h后，取出培养平板，算出每个平板上的菌落数量。其中，土样中的微生物含量可用以下式子计算 土壤中的细菌含量(个/g土壤)=菌落平均数×10×稀释倍数 实验结果及数据： 实验结果如附图。
1原生动物中各纲在水体自净和污水生物处理中如何其指示作用？ 答： (1)鞭毛纲： 在污水生物处理中系统中，活性污泥培养初期或在处理效果差时鞭毛虫大量出现，可作污水处理的指示生物。 (2)肉足纲： 变形虫喜α-中污带或β-中污带的自然水体中生活。在污水生物处理中系统中，活性污泥培养中期有出现。 (3)纤毛纲： 纤毛纲中的游泳型纤毛虫多数是在α-中污带或β-中污带，少数在寡污带中生活。在污水生物处理中系统中，活性污泥培养中期或在处理效果差时纤毛虫会出现。 2.如何判断某水样是否被粪便污染？ 答： 如果水样中检测出有大肠杆菌群，则认为该水样被粪便污染。 3.微生物呼吸作用的本质是什么？可分为哪几种类型？各类型有什么特点？答： 微生物呼吸作用的本质是氧化与还原的统一过程，这过程中有能量的产生和转移。 微生物呼吸作用的可分为发酵、好氧呼吸和无氧呼吸。 第五章微生物的生长繁殖与生存因子 1．什么叫灭菌？灭菌方法有哪几种？试述其优缺点。
答： 灭菌是通过超高温或其他的物理、化学因素将所有的微生物的营养细胞和所有的芽孢或孢子全部杀死。灭菌的方法有干热灭菌法和湿热灭菌法。湿热灭菌法比干热灭菌法优越，因为湿热的穿透力和热传导都比干热的强，湿热时微生物吸收高温水分，菌体蛋白易凝固变性，所以灭菌效果好。 2．什么叫消毒？加热消毒的方法有哪几种？ 答： 消毒是用物理、化学因素杀死致病菌，或是杀死所有微生物的营养细胞或一部分芽孢。 方法有巴斯德消毒法和煮沸消毒法两种。 3．细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、藻类和原生动物等的正常生长繁殖分别要求什么样的pH？答： 大多数细菌、藻类和原生动物的最适宜pH为 6.5~ 7.5，它们的pH适应范围在4~10之间。 放线菌为 7.5~ 8.0。酵母菌和霉菌在3~6。 第六章微生物的遗传和变异 1.什么是微生物的遗传性和变异性？遗传和变异的物质基础是什么？如何得以证明？答： 微生物将其生长发育所需要的营养类型和环境条件，以及对这些营养和外界条件产生的一定反应，或出现的一定性状传给后代，并相对稳定的一代传下去。这时微生物的遗传。
实验四环境中微生物的检测和分离纯化 一、实验目的 1.熟悉常用微生物培养基的配置方法。 2.学习并掌握各种无菌操作技术，并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。 3.用平板划线法和稀释法分离微生物。 4.认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。 二、实验原理 土壤中有数量巨大、种类丰富的微生物，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的是平板分离法。 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。 三、实验器材 土样10g，牛肉膏蛋白胨培养平板20个，未知菌种平板，当天降雪； 平皿，涂棒，接种环，无菌200ul, 1000ul吸头，记号笔，酒精灯，取液器:1000ul 、200ul 各一支，培养箱； 0.9% 无菌生理盐水，250ml三角瓶中装99ml生理盐水,每瓶加约20粒玻璃珠，250ml 三角瓶中99ml生理盐水,作100倍稀释用。 四、实验步骤 1.配置培养基：取牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，蒸馏水1000ml配置培养基，调 pH至7.2，灭菌。于讲课前倒板20块。 2.采集野外样品：选择肥沃土壤,去表层土,挖5~20cm深度的土壤数10g,装入烧杯,带 回实验室;取校河水装入烧杯，带回实验室；取新积雪中间层转入烧瓶，带回实验 室。 3.制备土壤稀释液：称取土样1.0g，放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中， 用手振荡5min使土壤均匀分散成为土壤悬液（10-2）。用200ul的无菌吸头从中吸 取0.1ml土壤悬液，注入事先分装有0.9ml无菌水的试管中，吹吸3次，摇匀（10-3）。 类推制得10-4、10-5的土壤悬液。 4.涂板： 1）土壤稀释液（9块）：用无菌吸头，分别吸取10-3、10-4、10-5浓度土壤稀释液100ul，较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用无菌玻璃 涂棒涂匀。每个浓度做3个平板。 2）单菌落划线（4块）：用接种环挑取未知平班上的菌落，做单菌落划线分离，每人2板。 3）手指（1块）：分别用未洗过的手指头, 用自来水打湿的手指头，用自来水洗过的手指头，用肥皂洗过的手指头和用酒精棉球擦过的手指头(不用毛巾擦)在同 一平板的不同分区涂抹（用力一致）。
微生物实验 Prepared on 22 November 2020
环境因素 对微生物生长的影响 班级：食品科学与工程102班 指导老师：郭玉宝 学号：14 姓名：何月 实验目的： 1、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。 2、了解常用化学消毒剂对微生物生长的影响。 实验原理： 微生物的生长繁殖受外界因素的影响。物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的机制不同，而，不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。 1、生物因素 在自然界中普遍存在网速间的颉颃现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性的一致或杀死其他微生物。不同抗生素的抗菌谱是不同的。当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上向四周扩散后可形成抗生素浓度由高到低的梯度，将不同试验菌与滤纸条划线接种。培养后，根据抑菌带的长短可判断出该抗生素对不同试验菌生长的影响程度，初步确定其抗菌谱。 2、化学消毒剂 常用的化学消毒剂包括有机溶剂、重金属盐、卤族元素及其化合物。燃料和表面活性剂。 实验器材： 1、菌种 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 2、培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 3、溶液和试剂 青霉素溶液、无菌生理盐水、%碘酒、5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、%新洁尔灭 4、仪器和其他用品 酒精灯，接种环，玻璃棒，报纸，牛皮纸，镊子，无菌平皿，无菌滤纸片，滴管，无菌滤纸片，涂布棒，记号笔，高压蒸汽灭菌锅、三角瓶，量筒，棉线 实验过程： 一、生物因素对微生物生长的影响 （1）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基熔化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀。 （2）贴滤纸条：无菌操作，用镊子取无菌滤纸条浸入青霉素溶液中润湿，在容器内壁沥去多余溶液，再将滤纸贴在平板上。
从土壤中分离纯化培养微生物并作初步观察鉴定 【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离与纯化，根据细菌在选择培养基的存活情况，确定该菌种的固氮解磷解钾属性。 【关键词】细菌芽孢杆菌培养基、选择培养基的配制高压蒸汽灭菌 前言： 在自然条件下，微生物常常在各种生态系统中群居杂聚。群落是不同种类微物的混和体。为了生产和科研的需要，人们往往需要从自然界混杂的微生物群体中分离出具有特殊功能的纯种微生物；或重新分离被其他微生物污染或因自发突变而丧失原有优良性状的菌株；或通过诱变及遗传改造后选出优良性状的突变株及重组株。这种获得单一菌株纯培养的方法称为微生物的分离纯化技术。 分离纯化技术主要由采集样品、富集培养、纯种分离和性能测定等几个基本环节组成。 实验目的： 1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。 2、学习、掌握微生物的鉴定方法。 3、对提取的土样进行微生物选择培养、分离、纯化，根据菌落的存活状况来判断未知 菌的属性。 实验原理： 菌种来源:选择无机磷农药含量较高的土壤,有机磷农药化工厂 旁边的土壤和排污口区的污水. 培养基的选取：五组选择培养基，分别以辛硫磷、甲胺磷、敌敌畏、草甘膦及五种有机磷农药混合为微生物生长的唯一氮源磷源。 分离纯化微生物：稀释倒平板法、涂布平板法、稀释摇管法、平板划线分离法。 此次实验采取的是平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：（一）选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部
分不需要的微生物。（二）微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。 微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态，也可以用肉眼观察其菌落形态。前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。 1. 实验器材、试剂与实验方法： 1.1器材： 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布、培养皿、自动立式压力蒸汽灭菌器、烘箱、玻璃珠、移液枪、枪头、称量纸、药匙、试管架、接种环、酒精灯、超净工作台, 粉碎机，接种环，移液枪配枪头。 1.2试剂： 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、1mol/L NaOH、1mol/LHCl、NaCl、95%乙醇、75%酒精，草甘膦，甲甘磷，敌敌畏，辛硫磷。 1.3土样、样品： 取自二十三冶草莓园的土壤，建设北路的大棚蔬菜菜地土壤，化工厂污水口。 1.4 实验方法 1.4.1配制培养基： (一）配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基200ml(用2个100ml三角瓶和2支试管分装）牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普遍的细菌基础培养基。 配方如下：牛肉膏 0.6g 蛋白胨 2g NaCl 1g 琼脂 3~4g 水 200ml pH 7.4-7.6 1、称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏和蛋白 胨可分别放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2、加热溶解在烧杯中加入少于所需的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用 玻璃棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，在此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补充所失水分。 3、调pH 用pH试纸或酸碱度计检测培养基的pH值，若pH偏酸，可滴加1mol/L NaoH， 边加边搅拌，并随时检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用１mol/l HCL进行调节。 pH调节通常放在加琼脂之前。注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的
培养基的配制和灭菌 细菌的纯种分离、培养 接种技术及菌落形态的观察 姓名：张世凡 学号：201330480123 课程名称：环境工程微生物实验
一、实验目的 1、熟悉玻璃器皿的洗涤与灭菌前的准备工作。 2、了解微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。 3、学习各类物品的包装、配制、灭菌技术。 4、从环境中分离、培养微生物，掌握一些常用微生物和纯化微生物的方法。 5、学会几种接种技术。 6、平板菌落计数。 7、抗Cu菌的筛选。 8、观察实验分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落的形态特征。 9、通过观察和比较细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的菌落形态，达到初步鉴别微生物的能力。 二、实验原理 1、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的 需要，有碳、氢‘氧、氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。调整适合的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。 本实验采用肉汤蛋白胨培养基、查氏培养基（筛选霉菌）、高氏1号淀粉琼脂培养基（筛选放线菌）。 2、灭菌原理:本次实验中培养基、移液枪头等采取加压蒸汽灭菌法。加压蒸汽灭 菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。培养皿等玻璃器皿用具采用干热灭菌法，另外还有膜过滤灭菌法。接种时对接种针等采用灼烧灭菌。 3、分离纯化原理：本实验使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起的群体分散 成能在培养基上长成单个菌落的分离方法。此法加样量不宜太多，只能在 0.5mL以下，培养时起初不能倒置，现正置一段时间等水分蒸发后倒置。平 板划线法也可以分离从而获得单一菌落以观察其形态特征。 4、微生物的接种原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另 一无菌的并适合该菌生长繁殖所需的培养基中的过程。本次实验采取斜面接种法、穿刺接种法，使用到的接种工具是接种环，接种针。 5、菌落形态观察原理：由于微生物个体表面结构、分裂方式、运动能力、生理 特性及产生色素的能力等各不相同，因而个体及它们的群体在固体培养基上生长状况各不一样。按照微生物在固体培养基上形成的菌落特征，可从菌落的形状、大小、表面结构、边缘结构、菌丛高度、颜色、透明度、气味、粘滞性、质地软硬、表面光滑粗糙等情况，初步辨别是何种类型的微生物。
微生物学实验总结 高熹 1120152430 时间如清风般从你我指间滑过,无声无息,快得我们都不曾驻足一望,莫然回首间,本学期的微生物学实验已接近尾声。一学期的时间虽短，但老师的谆谆教诲、同学们的良好配合和严格的实验操作，都将为微生物学实验课程画上一个完美的句号。 众所周知，微生物学是一门实验与理论高度结合的科目，是一门以实验为基础与生活生产息息相关的课程。需要我们不断地做实验，在实验中观察、分析相应的结果。所以我认为，要做好微生物学实验要有以下的四个能力： 1、独立思考能力 我想，在这个过程中，其中一个重要的感悟就是独立思考的重要性。当在试验中发现与预料过程所不符，那么必定是过程中出现错误，而寻找并解决的这个过程是书本中无法给予的。做实验绝对不能人云亦云，要有自己的看法，这样就要有充分的准备，若是做了也不知道是个什么实验，那么做了也是白做。在实验过程中，自己看书，独立思考，最终解决问题，从而也就加深了我们对课本理论知识的理解，达到了“双赢”的效果。 2、突破创新能力 实际上，在弄懂了实验原理的基础上，我们的时间是充分的，做实验应该是游刃有余的，如果说创新对于我们来说是件难事，那改良总是有可能的。试着通过自己现有的知识，多想，多做，多总结，我想首先是作为一个求知者在追求知识的道路上必须坚守的原则，其次就是要敢于突破，我们都站在巨人的肩膀上，踮起脚尖即使触不到天空，也可以更加拓宽自己的视野。 3、现代信息技术的使用能力 在微生物学实验学习中，有很多特殊的、特定的实验，如有毒有害物质参与且不易排污的实验、不易操作或难以成功的实验、需要反复观察的实验、反应慢导致单位课时中难以完成的实验等。我们在研究改进措施的同时，也可以借助于现代信息技术手段制作视频资料或多媒体课件进行辅助学习。 4、动手能力 动手操作对激发微生物学学习兴趣、帮助理解微生物学知识、培养解决问题能力、创新能力等具有重要作用。尤其是微生物学这样一种学科，动手能力的强弱与知识的掌握其实是同等重要的。如果动手能力太弱，所学习到的知识就无法通过有效的方式真正组织起来，那么学到的知识就只是输入而没有输出，只有理论而没有实践，对于这样一门学科，这样的缺陷是致命的，而这样的能力是必须具备的。 本学期我们一共完成了十个实验，分别是：显微镜油镜的使用、细菌形态观察和细菌的革兰氏染色、放线菌、酵母菌、霉菌的形态观察和微生物的显微镜计数法、培养基的制备、周围环境中微生物的观察以及从土壤中分离纯化微生物、 细菌生长曲线的测定、环境因素对微生物生长发育的影响、细菌鉴定中常 用的生理生化反应、微生物的诱变育种、水中大肠菌群的计数—MPN法、乳酸菌发酵实验、甜酒酿发酵实验、固定化酵母细胞发酵啤酒实验。 通过这些微生物学实验，不仅是对我理论课程的加深，更是对我实验能力的