2013版 苏微黄曲霉毒素M1免疫亲和柱 使用说明书 【产品用途】 免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒 素M1, 从而对黄曲霉毒素M1样品起到特异性的纯化作用, 过柱净化后的样品液可直接用于高效液相色谱进行黄曲霉毒素M1含量的检测。 亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的, 以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。 【产品性能】 柱吸附能力：≥100ng/支； 回收率：75%~90%。 【测定原理】 本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素M1（AFM1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFM1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFM1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFM1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。最后采用乙腈洗脱AFM1，然后进行相关分析。 【产品组成】 标准品（选配）； 20支/盒，3mL柱管/支 说明书1份； 【所需材料】（不提供） （1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL 玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（whatman934-AH，直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。 （2）试剂：乙腈（色谱级）、蒸馏水或去离子水。【样品制备及净化】 ----乳：将试样在水浴中加热至35℃~37℃。用中速定性滤纸过滤（根据情况，可使用多层滤纸进行过滤），或者在7000rpm离心15min。至少收集20mL试样。----乳粉：称取10g样品（精确至0.01g）,置于250mL 的烧杯中。将50mL已预热到50℃的水加入乳粉中，搅拌溶解。若乳粉不能完全溶解，将烧杯在50℃的水浴中放置至少30min，仔细混匀。将溶解的乳粉冷却至20℃，移入100ml容量瓶中，用少量的水分次淋洗烧杯，淋洗液一并移入容量瓶中，再用水定容至刻度。用中速定性滤纸过滤（根据情况，可使用多层滤纸进行过滤），或者在7000rpm离心15min。至少收集20mL试样。 ----取20mL上样检测。 * 根据需要可以增加样品量，但水溶液的量也应相应增加。 【亲和柱净化】 注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥！ ----取出免疫亲和柱，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上； (3ml的免疫亲和柱去掉上方塞子，安装上转接头，将转接头另一端与针筒固定后使用) ----将柱子与气控操作架上的针筒连接固定，20mL 处理后的溶液上样； ----去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以 1d/2~3s的速度流出； ----待液体排干后，用蒸馏水或去离子水洗涤2次，每次10mL，流速1d/s； ----待液体排干后，上样3mL乙腈，用玻璃样品瓶接洗脱液，流速1d/2~3s； ----洗脱后洗脱液用氮气吹至仅含少量液体，并用流动相稀释，再用于HPLC。 * 使用前，免疫亲和柱恢复至室温（22~25℃）。* 每次上样前都要将上次液体完全排干。 * 洗脱液要用玻璃样品瓶装，且避光保存于-20℃，
百奥思科赭曲霉毒素A免疫亲和柱操作说明书 【概要】 赭曲霉毒素A （Ochratoxin A）是曲霉属和青霉属的真菌形成的次级代谢产物，属烈性的肾脏毒和肝脏毒，广泛存在于各种食物中，谷物及其副产品是赭曲霉毒素A的主要来源。动物实验表明摄入了被这种毒素污染的饲料后，会发生急性或慢性中毒症。防止污染赭曲霉毒素A的食品和饲料直接或间接地进入人类食物链，加强对赭曲霉毒素A的检测十分重要。 【适用范围及性能】 本公司真菌毒素免疫柱系列产品测试形式是一个高性能的免疫亲和柱，设计用于在进行HPLC（高效液相色谱法）、GC-MS（气相色谱-质谱联用仪）、ELISA（酶联免疫吸附剂测定）之前清理（净化）或浓缩样本。 用于定性、定量检测谷物、酒类等食品和饲料等样本中的赭曲霉毒素A时的样品前处理。 柱容量：≥200ng 回收率：≥90% 【试验原理】 本产品的测定的基础是抗原抗体反应，赭曲霉毒素A单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的赭曲霉毒素A经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过赭曲霉毒素A 免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，赭曲霉毒素A与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱赭曲霉毒素A，然后注入到分析仪器中用于检测。 【包装组成】 25支/盒，3mL柱管/支 产品说明书1份 【需要而未提供的设备及试剂】 设备： ┅┅高速均质器或组织匀浆机 ┅┅粉碎机 ┅┅200ml/50ml量筒┅┅天平：感量0.1g ┅┅微量移液器：单道100μl～1000μl ┅┅槽纹滤纸（折叠快速定性或定量滤纸） ┅┅玻璃微纤维滤纸（1.5μm孔径） ┅┅50ml漏斗 ┅┅一次性玻璃试管 ┅┅泵流操作架（包括空气泵，不同容积的玻璃注射器等）试剂： ┅┅甲醇（色谱级） ┅┅蒸馏水或去离子水 ┅┅pH7.0磷酸盐缓冲溶液（PBS缓冲液）：称取8.0g氯化钠， 1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用 990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000mL ┅┅清洗缓冲液：25g 氯化钠+5g碳酸氢钠+0.1mL吐温-20 用纯水稀释至1000 mL 【试剂配制】 样品提取液：配制甲醇-水（8：2）溶液作为样品提取液 【样本处理步骤】 （一）花生，玉米，大米，小麦及其制品和饲料 ┅┅称取20g粉碎的样品于100mL容量瓶中，加入5.0g氯化钠，以甲醇-水（8：2）溶液定容； ┅┅转移到均质杯中，以均质器高速搅拌，提取2分钟； ┅┅4000r/min离心5min或用定量滤纸过滤； ┅┅取10mL滤液并加入40mLPBS缓冲液稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，取过滤后液体待测； ┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取 10.0mL样品提取液注入玻璃注射器； ┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1滴/S流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体； ┅┅以10.0mL清洗缓冲液淋洗柱子1次，流速为1滴-2滴/S，弃去全部流出液， ┅┅再以10.0mL水淋洗柱子1次，流速为1滴-2滴/S，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；
苏微呕吐毒素免疫亲和柱 使用说明书 【产品用途】 呕吐毒素（DON）免疫亲和柱适合于和DON酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测DON。适用于谷物、饲料等样本中的DON净化处理，提高了样品的纯度，纯化后的提取液可用不同的分析方法测定。 【产品性能】 柱吸附能力：≥1000ng/支； 回收率：75%~90%。 柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶 特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。 【测定原理】 本产品测定的基础是抗原抗体反应，呕吐毒素（DON）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的DON经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过DON免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，DON与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。最后采用甲醇洗脱DON，然后进行相关分析。 【产品组成】 标准品（选配）； 25支/盒；125μL凝胶/每支柱管 说明书1份。 【所需材料】（不提供） （1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。 （2）试剂：甲醇（色谱级）、聚乙二醇8000（PEG）、蒸馏水或去离子水。 【样品制备及净化】 ----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5g聚乙二醇8000，并与125mL水混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min， ----用快速定性滤纸过滤，并用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。【亲和柱净化】 注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥！ ----将柱子上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上；----将20mL注射器连接于免疫亲和柱上部，用5~10mL pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）或者去离子水平衡柱子，以1滴/秒的速度缓慢通过免疫亲和柱，（用注射器加以正压或用真空泵施加负压，也可以使用泵流操作架配合免疫亲和柱）； ----准确移取2mL上述滤液（相当于0.4g样品）注入注射器中，调节针筒压力使其以1滴/2秒的速度缓慢通过免疫亲和柱； ----用20mL 水冲洗柱子，弃去流出液，流速1滴/秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体； ----准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速1滴/2~3秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液，可根据实际测定条件进行稀释或氮气吹干后流动相定容，再进行相关测定。 【注意事项】 （1）呕吐毒素对人体有害，应戴手套操作。凡接触到标样的玻璃器皿都要用5%次氯酸钠浸泡过夜。 （2）不要使用过有效期的免疫亲和柱。 （3）免疫亲和柱应在2~8℃保存。不要冷冻。 （4）使用前，免疫亲和柱需至少提前半小时回温至室温（25℃左右）。 （5）按以上的提取过程，样品通过柱子的实际体积等于0.4g 原物质，分析方法的检测限可以通过改变进柱的样品体积而改变。 （6）样本中DON含量高于柱容量时，需适当降低上样体积。 （7）必须保证过柱的样品提取液pH在6~8之间，可用盐酸或氢氧化钠调整。 （8）称取的样品量以及提取液的体积可根据实际情况按比例调整，建议最低不少于5g样。 【保存期】 有效期为12个月。 生产日期见包装盒。
苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱 使用说明书 【产品用途】 黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。纯化后的样品可用不同的分析方法测定。 【适应范围及产品性能】 用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。 柱吸附能力：≥50ng/支，≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）； 回收率：75%~90%。 柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶 特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。 【测定原理】 本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。 【产品组成】 标准品（选配）； 25支/盒；1mL柱管/支； 说明书1份； 【所需材料】（不提供） （1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。 （2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。【样品制备及净化】 （1）谷物、花生及其制品 ----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min， ----用定量滤纸过滤， ----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。 ----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。 （2）酱油 ----准确称取50.0g样品，加入2.5g氯化钠， ----加入甲醇-水溶液（8+2）至100mL，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min， ----用定量滤纸过滤， ----准确移取10.0mL滤液并加入40.0mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。 ----将滤液调至PH为中性。 ----准确移取10.0mL混合液进行过亲和柱。 （3）醋 ----准确称取5.0g样品，加入1.0g氯化钠， ----用pH7.0的磷酸盐缓冲液稀释至25.0mL，混匀， ----用定量滤纸过滤， ----加10.0mL滤液加入10.0mL pH7.0的磷酸盐缓冲液，混匀，用玻璃微纤维滤纸过滤至滤液澄清，备用。 ----将滤液调至PH为中性。 ----准确移取10.0mL混合液进行过亲和柱。 （4）植物油脂 ----准确称取25.0g样品，加入5.0g氯化钠， ----加入甲醇-水（7+3）至125.0mL，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min， ----用定量滤纸过滤， ----准确移取15.0mL滤液加入30.0mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。 ----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。 （5）草药、香料及茶叶 ----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠， ----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min， ----用定量滤纸过滤，
2013版 苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱 使用说明书 【产品用途】 黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。纯化后的样品可用不同的分析方法测定。 【适应范围及产品性能】 用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。 柱吸附能力：≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）； 回收率：75%~90%。 柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶 特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。 【测定原理】 本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。 【产品组成】 标准品（选配）。 25支/盒，1mL柱管/支；20支/盒，3mL柱管/支。 说明书1份。 【所需材料】（不提供） （1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。 （2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。【样品制备及净化】 （1）谷物、花生及其制品 ----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min， ----用定量滤纸过滤， ----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。 ----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。 （2）酱油 ----准确称取50.0g样品，加入2.5g氯化钠， ----加入甲醇-水溶液（8+2）至100mL，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min， ----用定量滤纸过滤， ----准确移取10.0mL滤液并加入40.0mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。 ----将滤液调至PH为中性。 ----准确移取10.0mL混合液进行过亲和柱。 （3）醋 ----准确称取5.0g样品，加入1.0g氯化钠， ----用pH7.0的磷酸盐缓冲液稀释至25.0mL，混匀， ----用定量滤纸过滤， ----加10.0mL滤液加入10.0mL pH7.0的磷酸盐缓冲液，混匀，用玻璃微纤维滤纸过滤至滤液澄清，备用。 ----将滤液调至PH为中性。 ----准确移取10.0mL混合液进行过亲和柱。 （4）植物油脂 ----准确称取25.0g样品，加入5.0g氯化钠， ----加入甲醇-水（7+3）至125.0mL，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min， ----用定量滤纸过滤， ----准确移取15.0mL滤液加入30.0mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。 ----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。 （5）草药、香料及茶叶 ----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠， ----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min， ----用定量滤纸过滤，
河豚毒素（TTX）免疫亲和柱说明书 产品编号：MC01B 1、用途： 免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的河豚毒素，从而对样品起到非常针对性的纯化作用，过柱净化后的样品液可直接用于HPLC分析。 亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，提高检测方法的准确度。 2、概述： 河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)是豚鱼类（俗称河豚鱼）及其它生物体内含有的一种生物碱（氨基全氢喹唑啉型化合物），是自然界中所发现的毒性最大的神经毒素之一；其毒性比剧毒的氰化钠还要高1250多倍，0.5mg 即可致人于死命。 3、原理： 测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、稀释，缓慢的通过河豚毒素免疫亲和柱，在免疫亲和柱内河豚毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用洗脱液洗脱河豚毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。 4、包装组成： 盒中包括各种规格的河豚毒素免疫亲和柱及1份说明书。 5、需要的材料但盒中不提供： 5.1设备 ----HPLC ----气控操作架 ----空气泵 ----天平 ----涡旋仪 ----离心机 ----25mL/50mL量筒 ----离心管 ----1mL移液器 ----刻度试管 ----针头滤器 ----注射器 ----样品瓶 ----转接头（配3mL免疫亲和柱使用） 5.2 试剂
----甲醇(样品处理用分析纯，分析用色谱纯) ----乙酸（分析纯） ----NaCl（分析纯） ----十二水合磷酸氢二钠（分析纯） ----二水合磷酸二氢钠（分析纯） ----蒸馏水或去离子水。 6、注意事项： ----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22～25℃）； ----亲和柱2～8℃储存，不得冻存； ----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱； ----取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变； ----柱容量：柱容量是1000ng，当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当降低上样液体积，重新检测。 ----上机检测的溶剂与流动相保持一致可以消除溶剂效应影响； ----河豚毒素具有强烈的神经毒性，应戴手套口罩操作； ----使用过的容器及河豚毒素溶液最好用次氯酸钠溶液（5%V/V）浸泡过夜。 7、溶液配制： 7.1 1%乙酸-甲醇溶液 ----移取5mL乙酸，用甲醇溶液稀释并定容至500mL； 7.2 PBS溶液（0.05M pH7.3）： ----称取十二水合磷酸氢二钠6.45g，二水合磷酸二氢钠1.0875g，氯化钠4.25g，用去离子水溶解并定容至500mL； 7.3 洗脱液（2%乙酸-甲醇） ----移取10mL乙酸，用甲醇溶液稀释并定容至500mL； 8、样品处理： ----称取2g样品，加入10mL 1%乙酸-甲醇溶液，涡旋振荡3min； ----于40℃水浴超声提取15min； ----冷却至室温后，于6000r/min离心5min； ----取上清，7mL上清液加入28mL PBS溶液进行稀释【用适量的1N 氢氧化钠溶液调整pH值至7左右】；----用玻璃微纤维滤纸过滤； ----移取10mL滤液作为上样液检测。 稀释倍数：2.5 9、操作程序： ----取出免疫亲和柱，将注射器筒的下端直接穿透亲和柱上方的塞子，完成亲和柱筒与亲和柱的连接，将其放置在气控操作架上进行固定，去掉亲和柱下方堵头，排尽柱内保存液； ----取10mL步骤8中的待上样液，注入到注射器筒中； ----调节开关，使液体以1~2滴/秒的速度流出； ----待液体排干，用10mL蒸馏水洗涤1次，流速2~3滴/秒； ----待液体排干，往柱管内加入2mL洗脱液，堵上亲和柱堵头静置2min，用试管收集洗脱液，流速1滴/秒，再加入2mL洗脱液，收集洗脱液，待液体排干后，将洗脱液于40℃下氮气吹至近干，用流动相定容至1mL；----混匀后用0.22μm滤器过滤至样品瓶进行液相检测。 * 使用前，免疫亲和柱需回至室温（22~25℃）。
抗黄曲霉毒素M1免疫亲和柱的制备 （黑龙江八一农垦大学食品学院，黑龙江省大庆市 163319） （齐齐哈尔大学食品与生物工程学院，黑龙江省齐齐哈尔市 161006） （北京华安麦科生物技术有限公司，北京市 102200） 摘要：【目的】制备黄曲霉毒素M1污染样品的净化前处理免疫亲和柱。【方法】利用无血清培养基制备的高纯度抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体和溴化氰活化的Sepharose 4B进行偶联、装柱后通过IC-ELSIA对免疫亲和柱的性能评价确立了最佳反应条件。【结果】免疫亲和柱的有效柱容量为500ng, 经添加回收试验测定的平均回收率为92.46%,变异系数2.3%～7.2%。【结论】利用高纯度抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体和溴化氰活化的Sepharose 4B制备的免疫亲和柱可应用于乳制品等食品中黄曲霉毒素M1污染度测定的样品快速前处理。 关键词：黄曲霉毒素M1；免疫亲和柱；无血清培养基 Preparation of Immunoaffinity Column for Anti-AFM1 Sun Xing-Rong1，Pei Shi-Chun2，Liu Jia-Peng3，Wang Ying4 (1 Food Science College, HLJ August First Land Reclamation University, Daqing 163319, China) (2 Food and Biological Engineering College, Qiqihar University, Qiqihar 161006, China) (3，4Beijing Huaan Magnech Bio-Tech Co., Ltd.,Beijing 102200, China) Abstract:[objective] preparation of aflatoxin M1immunoaffinity column for clean-up contaminated samples. [Method] prepared high-purity anti-aflatoxin M1monoclonal antibody with serum-free medium and coupled with CNBr Activated Sepharose 4B, the column has been evaluated through IC-ELISA and established the optimum reaction conditions. [Results] the capacity of immunoaffinity column was 500 ng , the average recovery of aflatoxin M1was 92.46 %,the variation coefficients were 2.3% ~ 7.2%. [Conclusions] the immunoaffinity columns was prepared by coupling high-purity anti-aflatoxin M1 monoclonal antibody with CNBr Activated Sepharose 4B can be applied to detect contamination samples fast, such as aflatoxin M1 in dairy products. Keywords: aflatoxin M1, immunoaffinity column, serum-free medium 黄曲霉毒素(Aflatoxin, AF）是食品中广泛存在的一种高致癌性真菌毒素，是Asperillus flavus 和Asperillus parasiticus 的二次代谢产物, 黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1, AFM1）
T2毒素免疫层析亲和柱说明书 1、用途： 免疫亲和层析柱可选择性吸附样品液中的T2毒素，从而对T2毒素样品起到非常针对性的纯化作用，过柱净化后的样品液可直接用于液相进行T2毒素含量的检测。 亲和层析柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。 2、概述： T2毒素（T2）是由多种镰刀菌产生的一种霉菌毒素。主要污染小麦、大麦、玉米等粮食作物及其制品，对人类健康及畜牧业构成了较大危害。T-2毒素主要影响血液，肝脏，肾脏，胰腺肌肉及淋巴细胞的功能，T-2毒素中毒后的一般临床症状为厌食、呕吐、腹泻、生长停滞、
繁殖和神经机能障碍等。
3、原理： 测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过离心、脱脂后，缓慢的通过T2毒素免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱T2毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。 4、包装组成： 每一个盒中包括25支或15支T2毒素免疫亲和层析柱及1份说明书。 5、操作程序： ----取出免疫亲和层析柱，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上； ----将柱子与泵流操作架上的玻璃针筒连接固定，处理后的溶液上样； ----去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以1d/s的速度流出； ----待液体排干后，更换新玻璃针筒，用10mL水溶液洗涤2次，流速2d/s； ----待液体排干后，更换新玻璃针筒，上样1mL甲醇，用样品瓶/玻璃试管接洗脱液，流速1d/s； ----洗脱后液体可用于检测。 * 使用前，免疫亲和层析柱需回至室温（22~25℃）。 * 每次上样前都要将上次液体完全排干。 * 也适用于GB/T 23501-2009及SN/T 1771-2006。 6、贮藏条件及保存期
黄曲霉毒素M1免疫亲和柱工作手册 一、溶剂的配置和准备： 1．蒸馏水/去离子水（配合液相使用）； 2．色谱级甲醇、乙腈； 3．磷酸盐缓冲液 1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)0.27g，磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.42g，氯化钠(NaCl)8g，氯化钾(KCl)0.2g，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1L。 4．黄曲霉毒素M1标准品（货号：TSL-143，浓度为0.5 μg/ml） 5．氢氧化钠、浓盐酸（用于调节pH） 二、其他耗材及设备的准备 1.滤纸； 2.免疫亲和柱架或固定支座； 3.注射器（建议玻璃材质，易于清洗，10 ml）或5 ml或10 ml枪头； 4.1升容积的搅拌器； 5.离心机； 6.量筒，漏斗，移液管，烧杯，带螺盖的瓶子等玻璃器具； 三、标准曲线的配制： 黄曲霉毒素M1总量液态标准品：500 ng/ml 100%乙腈溶液。 取100μl 500 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至500μl，得到100ng/ml 的溶液。 绘制一条3点的校准曲线： 取50 μl 100 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2.5 ml（=2 ng / ml）。 取1 ml 2 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2 ml（=1 ng / ml）。
取1 ml 1 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2 ml（=0.5 ng / ml）。 每种取100 μl注射进HPLC系统。 四、样品回收率的测定 --针对奶粉添加浓度为0.5 ppb的样品： 取50 μl浓度为100 ng/ml的标准品溶液，加入到10 g阴性奶粉样品中，（此样品最后上HPLC 的浓度相当于1 ng/ml） --针对奶添加浓度为0.1ppb的样品： 取50 μl浓度为100 ng/ml的标准品溶液，加入到50ml阴性奶样品中，（此样品最后上HPLC 的浓度相当于2 ng/ml） 五、样品处理 A）牛奶 -- 加热牛奶至35 - 37 ℃，用Waterman 4号滤纸或者Waterman 113号滤纸过滤 或者在4000 rpm下离心15分钟。 -- 收集至少50 ml牛奶（如果必要，使用多层滤纸）。 B）奶粉 -- 称取10 g奶粉至1个250 ml的烧杯中 -- 加热100 ml蒸馏水至30 - 40 ℃，移取80 ml预热的蒸馏水至奶粉中，不断地搅拌得到均匀的混合物。将其转移到100 ml量筒中，并加入预热的蒸馏水至100 ml -- 用Waterman 4号滤纸或者Waterman 113号滤纸过滤 或者在4000 rpm下离心15分钟。 以下步骤奶与奶粉一致 -- 取50ml过滤或离心后的样品，分5次加入到注射器中，其中注射器需与免疫亲和柱相连接，以2 ml/min的流速（或在以重力下的自然速度）缓慢，稳定的通过免疫亲和柱。 -- 用10 ml的PBS 缓冲液以5 ml/min的流速冲洗柱子，加压吹干柱子确保残余液体流出。-- 用1.25 ml甲醇乙腈溶液（20:30 v/v）以1滴/秒的流速将毒素从柱子上缓慢洗脱，收集洗脱液在琥珀色玻璃瓶中，此洗脱过程推荐使用“反冲洗”操作。 -- 取1.25 ml的蒸馏水过柱，收集到相同的玻璃瓶中，总体积为2.5 ml。
免疫亲和层析技术 原理、目的、仪器、方法、步骤、结果、讨论、体会 一、实验背景 亲和层析技术是纯化各种生物大分子的有效方法。最初是将抗体作为一种结合剂用于免疫亲和层析，根据抗原抗体结合后形成大量多聚体和不溶性基质原理来收集抗原。随后，利用抗体与惰性微珠共价交联,虽然这种反应是一种简单的结合，但抗体的活性因交联缺乏定位作用或抗体的过量交联而丧失。通过研究发现，抗体与蛋白A或蛋白G微珠共价交联后更容易与抗原结合。将具有良好抗原结合特性，且来源广泛的各种单克隆抗体制成免疫亲和层析柱，已成为一种实用和有效的纯化方法。 免疫亲合层析具有以下特点：①抗体与其相应抗原结合具有高度亲和力和特异性,能大量分离天然状态或近似天然状态的抗原；②不是所有的抗体都适用于免疫亲和层析，但一旦获得一种性能良好的抗体，纯化过程就简单、快速、可靠；③可按照不同规模进行，半天内即可完成，而且可以获得其他层析法不可比拟的纯化效果；④经过简单的改进，免疫亲和层析法也可用于纯化针对抗原的特异性抗体。 免疫亲和层析是一种既简单又非常有效的分离抗原的技术。即将抗体共价结合到一种惰性的微珠上，然后将微珠与含有待纯化抗原的溶液混合。当抗原被交联在微珠上的抗体捕获后，通过洗涤去除无关的抗原，然后用洗脱缓冲液处理微珠，结合的抗原被洗脱，从而得到纯化的抗原。如果洗脱条件掌握较好而且比较温和，纯化的抗原仍能保持其天然状态。虽然下述的所有实例都是以蛋白质抗原作为研究对象，但凡是能与抗体有效结合的分子都能用这种方法进行纯化。 只需简单地改变操作程序，免疫亲和层析法同样也可以用来分离经过初步纯化的抗体。此时抗原和抗体所起的作用正好相反，抗原共价交联在微珠上，再与抗体结合，然后通过洗脱，得到纯化的抗体。 在条件合适的情况下，应用免疫亲和层析法通常只需一次就可以达到1000~10000倍的纯化效果。使用性能特别优良的抗体，并且掌握好洗脱条件，也可以达到10000倍以上的纯化效果。 二、实验原理 亲和层析是吸附层析技术的一种。它是近十多年来迅速发展并被广泛用于分离纯化生物大分子的一种十分有效的方法，具有分离速度快、纯化效率高等优点；尤其适合于含量少、杂质多，采用常规方法难于分离的生物活性分子。亲和层析的主要依据是生物分子与其特定的固相化的配基或者配体之间具有一定的亲和力而使生物分子得以分离。生物分子的理化特性使其可以与某些分子发生可逆的特异性结合（如分子间通过氢键等次级键结合，但条件改变后即可分离）的特性。 本实验利用抗原/抗体和相应的抗体/抗原可以发生特异性的结合，而这种结合在一定的条件下可逆的性质将牛血清白蛋白（BSA，抗原）固相化后，使存在于液相中的抗体选择性地结合到固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分离，以此来达到分离纯化抗体的目的。实验所用载体为葡聚糖凝胶，所用交联剂为1,4-丁二醇二缩水甘油。其原理如图所示：
免疫亲和层析技术 Prepared on 24 November 2020
免疫亲和层析技术 原理、目的、仪器、方法、步骤、结果、讨论、体会 一、实验背景 亲和层析技术是纯化各种生物大分子的有效方法。最初是将抗体作为一种结合剂用于免疫亲和层析，根据抗原抗体结合后形成大量多聚体和不溶性基质原理来收集抗原。随后，利用抗体与惰性微珠共价交联,虽然这种反应是一种简单的结合，但抗体的活性因交联缺乏定位作用或抗体的过量交联而丧失。通过研究发现，抗体与蛋白A或蛋白G微珠共价交联后更容易与抗原结合。将具有良好抗原结合特性，且来源广泛的各种单克隆抗体制成免疫亲和层析柱，已成为一种实用和有效的纯化方法。 免疫亲合层析具有以下特点：①抗体与其相应抗原结合具有高度亲和力和特异性,能大量分离天然状态或近似天然状态的抗原；②不是所有的抗体都适用于免疫亲和层析，但一旦获得一种性能良好的抗体，纯化过程就简单、快速、可靠；③可按照不同规模进行，半天内即可完成，而且可以获得其他层析法不可比拟的纯化效果；④经过简单的改进，免疫亲和层析法也可用于纯化针对抗原的特异性抗体。 免疫亲和层析是一种既简单又非常有效的分离抗原的技术。即将抗体共价结合到一种惰性的微珠上，然后将微珠与含有待纯化抗原的溶液混合。当抗原被交联在微珠上的抗体捕获后，通过洗涤去除无关的抗原，然后用洗脱缓冲液处理微珠，结合的抗原被洗脱，从而得到纯化的抗原。如果洗脱条件掌握较好而且比较温和，纯化的抗原仍能保持其天然状态。虽然下述的所有实例都是以蛋白质抗原作为研究对象，但凡是能与抗体有效
结合的分子都能用这种方法进行纯化。 只需简单地改变操作程序，免疫亲和层析法同样也可以用来分离经过初步纯化的抗体。此时抗原和抗体所起的作用正好相反，抗原共价交联在微珠上，再与抗体结合，然后通过洗脱，得到纯化的抗体。 在条件合适的情况下，应用免疫亲和层析法通常只需一次就可以达到1000~10000倍的纯化效果。使用性能特别优良的抗体，并且掌握好洗脱条件，也可以达到10000倍以上的纯化效果。 二、实验原理 亲和层析是吸附层析技术的一种。它是近十多年来迅速发展并被广泛用于分离纯化生物大分子的一种十分有效的方法，具有分离速度快、纯化效率高等优点；尤其适合于含量少、杂质多，采用常规方法难于分离的生物活性分子。亲和层析的主要依据是生物分子与其特定的固相化的配基或者配体之间具有一定的亲和力而使生物分子得以分离。生物分子的理化特性使其可以与某些分子发生可逆的特异性结合（如分子间通过氢键等次级键结合，但条件改变后即可分离）的特性。 本实验利用抗原/抗体和相应的抗体/抗原可以发生特异性的结合，而这种结合在一定的条件下可逆的性质将牛血清白蛋白（BSA，抗原）固相化后，使存在于液相中的抗体选择性地结合到固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分离，以此来达到分离纯化抗体的目的。实验所用载体为葡聚糖凝胶，所用交联剂为1,4-丁二醇二缩水甘油。其原理如图所示： 图1. 免疫亲和层析原理图 三、实验目的
Instructions 71-7086-00 AF Affinity media GE Healthcare CNBr-activated Sepharose? 4B CNBr-activated Sepharose 4B is a pre-activated medium for immobilization of ligands containing primary amines. It provides a very convenient way to immobilize ligands by the cyanogen bromide method. The coupling reaction is spontaneous, rapid and easy to carry out. The application area covers immobilization of proteins, peptides and nucleic acids. 通用电气医疗集团CNBr-activated琼脂糖?4 b CNBr-activated琼脂糖4 b是固定地激活介质的包含一级胺配体。它提供了一个非常方便的方法固定溴化氰配体的方法。偶联反应是自发的,快速和容易执行。应用领域涵盖固定的蛋白质、多肽和核酸。 Table 1. Medium characteristics. Bead structure: 4% agarose Spacer: None Coupling capacity: 25–60 m g α-chymotrypsinogen/ml drained medium Bead size range: 45–165 μm Average bead size: 90 μm Max linear flow rate*: 75 cm/h at 25°C, HR 16/10 column, 5 cm bed height pH stability**: 表1。媒介的特征。 琼脂糖珠结构:4%
苏微黄曲霉毒素总量（B1、B2、G1、G2）免疫亲和柱说明书 1、用途： 免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2, 从而对黄曲霉毒素样品起到特异性的纯化作用, 过柱净化后的样品液可直接用于高效液相色谱进行黄曲霉毒素含量的检测。 亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的, 以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。2、产品性能 柱吸附能力：≥100ng/支； 回收率：75%~90%。 3、测定原理： 测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，免疫亲和柱中抗体与毒素结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用乙腈洗脱黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2，然后注入到分析仪器中用于检测。 4、包装组成： 标准品（选配）； 20支/盒，3mL柱管/支 说明书1份； 5、需要的材料但盒中不提供： 5.1设备 ----HPLC ----气控操作架 ----空气泵 ----天平 ----组织匀浆机（或摇床） ----粉碎机 ----分样筛 ----100mL/10mL量筒----50mL漏斗 ----针筒 ----快速定性滤纸 ----微纤维滤纸（Whatman 934-AH） ----样品瓶 ----转接头（配3ml免疫亲和柱使用） 5.2 试剂 ----甲醇，氯化钠，乙腈，蒸馏或去离子水。 6、注意事项： ----黄曲霉毒素可致癌，应戴手套操作。 ----使用过的容器及黄曲霉毒素溶液最好用次氯酸钠溶液（5%,V/V）浸泡过夜。 ----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。 ----2~8℃储存，不得冻存。 ----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22~25℃）7、样品处理： 方法：适用于玉米、花生或中药等样品 ----玉米花生或中药等样品粉碎，过2mm分样筛；----25g过筛粉碎的样品加入5g 氯化钠与125mL 60%甲醇-水溶液混匀； ----高速匀浆1min（或用摇床剧烈振荡20min），用快速定性滤纸过滤； ----用20mL蒸馏水稀释10mL滤液，再用微纤维滤纸过滤； ----取15mL上样检测。 * 根据需要可以增加样品量，但甲醇溶液的量也应相应增加。 8、操作程序： ----取出免疫亲和柱，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上； (3mL的免疫亲和柱去掉上方塞子，安装上转接头，将转接头另一端与针筒固定后使用) ----将柱子与气控操作架上的针筒连接固定，10mL
《粮油检测商品化免疫亲和柱评价规范》编制说明免疫亲和净化柱（IAC）是一种以免疫结合反应原理为基础，利用抗体与待测物分子具有高度亲和性和专一性特点，实现待测样品净化和富集的净化材料。该产品主要用于样本分析前处理阶段的高选择性分离，是免疫分析法、HPLC和LC/MC测定方法的重要配套前处理产品，被广泛应用于食品检验等领域。目前，针对真菌毒素等的各类免疫亲和柱产品已经成为食品安全相关国家和行业标准的关键材料，其质量对检验监测结果有显著影响。 近年来，IAC因其操作简单、溶剂消耗少、特异性高、净化效果好而在国内外得到广泛应用，将IAC作为前处理的检测标准越来越多，使IAC生产规模不断扩大，并推动了国内IAC产业的迅速发展，市场上的IAC产品种类很多，但目前各类免疫亲和柱产品性能和质量差异较大，参次不齐的现象严重，导致实验室间检测结果准确性不高，可比性差的问题，严重影响国家监测和社会第三方检测质量。因此，急需建立一个关于商品化免疫亲和柱评价规范指导性标准，制定统一的免疫亲和柱评价方法，规范对市售各类免疫亲和柱评价，指导相关检测实验室对免疫亲和柱的选择和使用。 本标准通过研究制定统一的免疫亲和柱评价方法，规范对市售商用免疫亲和柱的评价，指导相关检测实验室对免疫亲和柱的选择和使用。通过评测明确使用过程中的问题（误差）来源（操作过程、提取率还是免疫亲和柱的质量问题），为基于免疫亲和柱的质量、稳定性及实用测评情况进行分级和鼓励、促进企业采用先进技术提高免疫亲和柱的质量提高支持。 1工作简况 1.1任务来源及起草单位 根据全国粮油标准化技术委员会制定计划的要求，由国家粮食局科学研究院负责《粮油检测商品化免疫亲和柱评价规范》起草工作。起草单位成立的标准起草组负责进行本标准的各项工作。 1.2标准研制主要工作过程 （1）针对免疫亲和柱市场混杂，缺乏实用评价规范，难以指导用户和企业科学正确使用免疫亲和柱，提出《粮油检验商品化免疫亲和柱评价规范》制订计划。根据行业标准制修订工作的要求成立了本标准起草组，确定标准制修订方案和工作计划。
2013版 苏微赭曲霉毒素（OA）免疫亲和柱 使用说明书 【产品用途】 赭曲霉毒素（OA）免疫亲和柱适合于和OA酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测OA。用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。纯化后的样品可用不同的分析方法测定。 【适应范围及产品性能】 用于定性、定量检测粮食、食品等样本中OA的样本前处理。柱吸附能力：≥40ng/支（可根据要求选择相应柱容量）； 回收率：70%~90%。 柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶 特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。 【测定原理】 本产品测定的基础是抗原抗体反应，赭曲霉毒素（OA）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的OA经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过OA免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，OA与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。最后采用甲醇洗脱OA，然后进行相关分析。【产品组成】 标准品（选配）； 25支/盒；1mL柱管/支； 说明书1份； 【所需材料】（不提供） （1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。 （2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。 【试剂配制】 提取液1：甲醇+水（80+20） 提取液2：称取150g氯化钠、20g碳酸氢钠，于约950mL水中溶解后，加水定容至1L。 冲洗液（用于酒类样品）：称取25g氯化钠、5g碳酸氢钠，于约950mL水中溶解后，加水定容至1L。 清洗缓冲液（用于粮食等样品）：称取25g氯化钠、5g碳酸氢钠，加入0.1mL吐温-20，加水定容至1L。 PBS缓冲液（pH7.0）：分别称取8g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾，用990mL水将上述试剂溶解，然后用浓HCl调pH至7.0，最后用水定容至1L。 【样品制备及净化】 （1）粮食及粮食制品 ----准确称取20.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠， ----与100.0mL提取液1混合，以均质器高速搅拌提取2min 或振荡提取30min， ----用定量滤纸过滤， ----准确移取10mL滤液并加入40mLPBS（pH7.0）稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。 ----准确移取10.0mL混合液进行过亲和柱。 （2）酱油、醋类 ----准确称取25.0g样品， ----用提取液1定容至50mL，以均质器高速搅拌提取2min 或振荡提取30min， ----用定量滤纸过滤， ----准确移取10.0mL滤液并加入40.0mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。 ----准确移取10.0mL混合液进行过亲和柱。 （3）酒类 ----准确称取20.0g脱气样品（含二氧化碳的酒类样品先置于4℃冰箱冷藏30min，过滤或超声脱气）， ----用提取液2定容至25.0mL，混匀， ----用玻璃微纤维滤纸过滤至滤液澄清，备用。 ----准确移取1.0mL混合液进行过亲和柱。 【亲和柱净化】 注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥！ ----将柱子上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上；----将20mL注射器连接于免疫亲和柱上部，用5~10mL pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）或者去离子水平衡柱子，以1滴/秒的速度通过免疫亲和柱，样品提取液必须缓慢地连续