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[收稿日期] 2009204216
3[通迅作者] 朴惠顺(1964—
),女(朝鲜族),副研究员,硕士,研究方向为抗肿瘤药物活性成分分离.
人参皂苷Rh 2含量测定方法及药理作用研究现状
李学哲1,朴惠顺23
(1.延边大学附属医院肿瘤内科;2.延边大学药学院:吉林延吉133000)
[关键词] 人参皂甙类;抗肿瘤剂(中药);黑色素瘤;食管癌;前列腺肿瘤
[中图分类号] R 28515 [文献标识码] A [文章编号] 100021824(2009)022*******
人参是五加科人参属植物,是传统的名贵药材.近年来,众多学者报道了人参单体的药理作用,特别是抗肿瘤作用,而研究发现人参中的抗肿瘤有效成分主要为人参多糖和人参皂苷.随着对人参研究的深入,日本学者首次从红参(人参经蒸制、烘干后得到的制成品)中发现了人参皂苷Rh 2.这种皂苷是次生苷,是加入过程中由某些二醇组皂苷受热降解后生成的.金凤燮等[1]
报道了酶转化法生产Rh 2等人参稀有皂苷,提取效果较传统方法提高了500～700倍,实现了工业化生产,为Rh 2的实际应用提供了
可行性.本文对人参皂苷Rh 2含量的测定方法及药理作用进行了综述.1 Rh 2含量测定方法
蒋磊等[2]报道,采用H PL C 法测定Rh 2准确含量,其测定条件中流动相为甲醇2乙腈2水为8∶8∶1,流动速度为1mL/min ,紫外检测波长为203nm ,
色谱柱为Thermo Hypersil ODS 2(25010mm ×415mm ,510μm ),柱温为室温,回收率高于99174%,RSD 小于1183%,达到了药典规定.在该
色谱条件下,人参皂苷Rh 2的保留时间均为8～10
min ,并确定了人参皂苷Rh 2的R 型和S 型含量的
高效液相色谱条件为Thermo Hypersil ODS 2(25010mm ×415mm ,510μm )色谱柱,流动相为
乙腈2水为1∶1,柱温为室温,流动速度为1mL/min,进样量为10μL,检测波长为203nm,理论塔板数按人参皂苷Rh2峰计算应不低于3700,分离度应大于115,得人参皂苷Rh2中R型与S型之比为6∶4,在该色谱条件下,人参皂甙Rh2的R型保留时间均为17min,S型保留时间均为16min, R型在S型之后出峰.冯林等[3]报道,采用反相高效液相色谱法测定人参Rh2的含量,测定条件中色谱柱为ODS2C18(25010mm×416mm,51μm),流动相为乙腈2水(60∶40),流动速度为110mL/min,检测波长为203nm,柱温为30℃,结果表明人参皂苷Rh2质量浓度在80～240mg/L范围内时进样量与峰面积呈良好的线性关系,r=019992,平均回收率为99175%(n=6).顾轶等[4]报道,采用L C2MS 法测定Beagle犬血浆中人参皂苷20(R)2Rh2的含量,检测条件色谱柱为Cosmosil ODS柱(15010mm×210mm i.d.,5μm,Nacalai Tesque,日本),外加1个C18柱(Security Guard,Phe nomenex,美国),柱温为40℃,流动相为乙腈及500μmol/L氯化铵水溶液,流动速度为012mL/min,梯度为乙腈40mL/L(0min),乙腈60mL/L(0103min),乙腈80mL/L(5100min),乙腈95mL/L(5103min),乙腈99mL/L(7100min),乙腈40mL/L(7150min),Pump Stop(9150min).质谱检测条件中离子化方式为电喷雾(ESI),检测模式为选择性离子检测(SIM),检测离子为负离子, 20(R)2Rh2的m/z为657135,洋地黄毒苷m/z为799155,雾化气流动速度为115L/min,反吹气压力为1M Pa,曲形脱溶剂装置温度为250℃,电压为-5V,加热块温度为200℃,离子源温度为250℃,电压为-415kV,四级杆流电压为0V,交流电压为150V,检测电压为116kV.取具塞离心管数只,各加入Beagle犬空白血浆1mL,精密加入不同质量浓度的20(R)2Rh2标准品溶液10μL,分别制备成含20(R)2Rh2质量浓度为015,110,510,1010, 5010,10010,20010μg/L的溶液,按上述血浆样品处理方法进行操作测定.样品峰面积与内标峰面积的比值(Y)及对血药质量浓度(c)作线性回归,得标准曲线回归方程(n=6)为Y=010244c+010088 (r=019998).按上述方法测得20(R)2Rh2在Beagle犬血浆中最低定量限为015μg/L(信号噪声比大于10),相对标准偏差(RSD)为1717% (n=6),符合FDA对生物样本LLOQ的要求.方亮等[5]报道,采用大孔吸附树脂法测定梅花参芪精中人参皂苷含量,此法回收率为94158%,RSD为1154%.
2 药理作用
211 抗肿瘤作用 人参皂苷的抗肿瘤作用已备受关注,特别是Rh2对多种癌细胞的直接杀伤作用.已发现的作用机制有调节肿瘤细胞信号通路系统,影响细胞端粒酶的活性,阻断肿瘤细胞重要成分的合成与代谢,逆转肿瘤细胞的异常分化及耐药性,增强机体免疫力,提高抗肿瘤能力[6].
21111 对黑色素B16细胞具有明显的分化诱导作用 体外实验证明,10mg/L人参皂甙Rh2可明显抑制黑色素B16细胞的生长,并呈现质量浓度依赖性, IC50为411mg/L;对B16细胞有较强的分化诱导作用,表现为黑色素生成能力明显增强,形态向上皮样细胞分化,黑色素颗粒增多,生长变缓慢.细胞动力学研究结果表明,Rh2可使黑色素B16细胞阻断在G1期,亦提示Rh2对B16细胞具有分化诱导作用[7]. 21112 C6胶质瘤细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用 2,4,8μmol/L人参皂苷Rh2对C6胶质瘤细胞均有抑制增殖作用,且呈现出明显的量效关系; 4μmol/L人参皂苷Rh2作用72h后,对C6胶质瘤细胞诱导凋亡作用最为明显;人参皂苷Rh2作用后,处于G0/G1期细胞百分率明显下降,而处于
S期细胞百分率则显著增高[8].
21113 对食管癌Eca2109细胞周期的影响 研究结果表明,人参皂苷Rh2对Eca2109细胞的生长具有抑制作用,并呈剂量及时间依赖性.人参皂苷Rh2可将人食管癌Eca2109细胞阻滞于G0/G1期,诱导肿瘤细胞分化,并通过影响细胞周期调控因子cy2clinE,CD K2,p21WA F1基因的表达来抑制食管癌细胞的增殖[9].
21114 对前列腺癌细胞株PC23M移行周期的影响 可使PC23M细胞增殖周期阻滞于G1期,延缓肿瘤细胞增殖速度[10].
21115 对人喉癌细胞株H ep22抗增殖作用的影响 人参单体皂苷Rh2可明显抑制Hep22细胞的增殖,并呈剂量及时间依赖性.用30mg/L人参单体皂苷Rh2处理细胞24h后,G期细胞由60109%显著增加至68186%,S期细胞由18189%明显减少至l2130%,G2/M期细胞及凋亡细胞无明显变化,细胞阻滞于G1期[11].提示人参单体皂苷Rh2对人喉癌细胞株Hep22具有明显的抑制增殖作用,使细胞阻滞于G1期.
21116 对人类乳腺癌细胞MCF27增殖的抑制作用 人参皂苷Rh2可显著抑制MCF27细胞的生长,并呈剂量依赖关系,使细胞停留在G1期[12].经Rh2处理细胞,其周期蛋白D3水平下降,而抑制Cdk2活性的p21WA F1/CIP1水平上升.Rh2可显著降低磷酸化p Rb的水平和转录因子E2F21的水平. 21117 对裸鼠体内人卵巢癌细胞肿瘤的生长抑制作用 在体外只需10～60μmol/L的Rh2即可抑制多种人卵巢癌细胞的增殖,且IC50剂量可诱导细胞凋亡[13].Rh2经口服给药较腹腔给药效果佳,经口服给药除具有增加N K细胞活性的功效外,亦可诱导细胞凋亡.
21118 对B el27404细胞及人肝癌SMMC27721细胞的作用 流式细胞术证实人参皂苷Rh2对体外培养的Bel27404细胞具有诱导凋亡的作用,细胞凋亡率(AR)随人参皂苷Rh2质量浓度的增高和作用时间的延长而升高[14215],当人参皂苷Rh2质量浓度由1215mg/L增高至5010mg/L时,AR则由1612%升高至2715%,但人参皂苷Rh2质量浓度由5010mg/L增高至10010mg/L时,A R却未见相应升高.人参皂苷Rh2以时间依赖性和浓度依赖性抑制人肝癌SMMC27721细胞的增殖,10mg/L人参皂苷Rh2作用6d后,抑制率达50%,而20mg/L 人参皂苷Rh2作用4d后抑制率近50%.10, 20mg/L人参皂苷Rh2作用于SMMC27721细胞后,A FP合成量明显下降,分泌量亦从6160±0130显著下降到2135±0106,γ2GT及耐热型AL P活性显著降低,而不耐热型AL P活性及Alb分泌量则显著升高.
21119 对白血病H L260细胞凋亡的诱导作用 M T T结果显示,用0～60μmol/L人参皂苷Rh2分别处理HL260细胞24,48,72h后发现,HL260细胞的增殖明显受到抑制,且呈现浓度依赖性[16].人参皂苷Rh2作用于HL260细胞48h后,IC50为25μmol/L.
212 抑制肿瘤转移的作用 通过人参皂甙Rh2对癌细胞转移影响的实验发现,人参皂甙Rh2对小鼠B162BL6黑色素瘤细胞转移株自发性肺部转移具有显著的抑制作用,25,52mg/kg Rh2作用后小鼠的肺转移抑制率与对照组相比较有显著性差异,813, 1616mg/kg Rh2预先给药后,小鼠肺转移抑制率分别为44%,64%[17].
213 对免疫功能的影响 人参皂苷Rh2注射液可提高荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能及血清溶血素抗体的生成能力,提高小鼠N K细胞杀伤活性和IL22活性[18].
214 抗过敏反应 人参皂苷Rh2可明显抑制IgE 诱导RBL,2H3细胞释放β2氨基己糖苷酶(IC50为
011mmol/L)和小鼠被动皮肤过敏反应,且作用强于色甘酸钠.
215 抗耐药作用 顺铂为临床广谱抗肿瘤药物,可诱导多种肿瘤细胞凋亡[19].通过人参单体皂苷Rh2增强顺铂对PC23M致凋亡效应的研究发现,顺铂与Rh2联合应用可提高顺铂对前列腺癌细胞的诱导凋亡效应[20].
216 抗增生作用 在培养小鼠成纤维细胞过程中发现,人参皂苷Rh2对DNA合成具有抑制作用[21].
[参 考 文 献]
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实验六异烟肼片的质量分析 实验目的： 1、掌握溶出度的测定方法及溶出量的计算。 2、掌握溴酸钾法测定异烟肼的原理与操作。 3、掌握容量法测定药物片剂的含量计算方法。 4、掌握滴定度、片剂取样量、标示量的概念与计算。 5、掌握容量仪器的正确操作。 实验原理： 1、溶出度是指药物从片剂或胶囊剂等口服固体制剂中溶出的速度和程度。溶出度测定法是将某种固体制剂的一定量分别置于溶出度仪的烧杯中，在（37±0.5）℃恒温下，在规定的转速、溶剂中依法操作，在规定的时间内测定其溶出的量. 2、异烟肼在强酸性介质中可被溴酸钾氧化为异烟酸和氮气，溴酸钾被还原为溴化钾，终点时微过量的溴酸钾可将甲基橙指示剂氧化，使粉红色消失而指示终点。 实验器材： 试药：盐酸、甲基橙指示剂、溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）、异烟肼片等 仪器：溶出度测定仪、分光光度计、量筒、容量瓶、酸式滴定管、锥形瓶。 实验内容与方法： 一、性状 本品为白色片。含异烟肼（C6H7N3O）应为标示量的95.0%~105.0%。 二、溶出度检查 取本品，照溶出度测定法，以水1000ml为溶剂，转速为每分钟100转，经30分钟时，取溶液5ml滤过，精密量取续滤液适量，用水定量稀释制成每中含10～20μg的溶液，照分光光度法，在263nm的波长处测定吸收度，按C6H7N3O的吸收系数（E1%1cm）为307计算出每片的溶出量。限度为标示量的60%，应符合规定。 三、含量测定 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于异烟肼0.2g），置100ml量
瓶中，加水适量，振摇使异烟肼片溶解并稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸过滤，精密量取续滤液25ml，加水50ml，盐酸20ml与甲基橙指示剂1滴，用溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）缓缓滴定（温度保持在18～25℃）至粉红色消失。每1ml溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。 实验注意事项： 1、指示剂褪色是不可逆的，滴定过程中必须充分振摇，以避免滴定剂局部过浓而引起指示剂提前褪色，可补加1滴指示剂以验证终点是否真正到达。 2、过滤前必须充分振摇，使异烟肼完全溶解。 3、过滤用漏斗、烧杯必须干燥，弃去初滤液。 实验报告： 实验结束后，书写实验报告。 实验指导要点: 1、滴定终点时，过量1滴的溴酸钾与滴定反应生成的溴化钾在酸性溶液中形成溴，氧化破坏指示剂的呈色结构，使其红色褪去。由于指示剂褪色是不可逆的，故在滴定过程中必须充分振摇，以避免由于滴定剂局部过浓引起指示剂提前褪色，可在指示剂褪色时再补加1滴以验证终点是否真正到达。 2、滴定反应的计量关系与滴定度计算。 3、进一步强调容量分析的称量、定量稀释、定量转移和滴定等的正确操作。
比色法测定总皂苷含量 1、仪器 紫外分光光度计、电热恒温水浴锅、电子分析天平、旋转蒸发器、大孔树脂柱(内径0．8 cm，长20 cm)。 试剂 无水甲醇、无水乙醇、正丁醇、冰醋酸、高氯酸和香草醛等均为分析纯；大孔树脂 DM-301、对照品、洋金花药品。 2、方法 2.1 对照品溶液的制备 取对照品 10 mg,加甲醇溶解定容至 10 ml，制成 1 mg／ml对照品溶液。 2.2供试品溶液的制备 取药材粉末(过4号筛)约0．2 g，准确称定，置于150 ml具塞锥形瓶中。精密加入50 ml 甲醇后，准确称重。浸泡60 min，超声提取30 min，再次称重，补加甲醇至超声前重量。过滤，精密移取续滤液25 ml于蒸发皿中，水浴蒸发至干，用5 ml水溶解残留物，所得溶液缓缓通过已处理好的大孔吸附树脂柱(径高比1：5)，以水50 ml洗脱，弃去水液，之后再以50 ml 95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干。用20 ml水分次将残留物溶解转移至60 ml分液漏斗中，用水饱和的正丁醇萃取(4×20 ml)，合并正丁醇层，减压蒸干。残留物用70％甲醇溶解转移至10 ml量瓶中，定容，摇匀，即得。 2．3测定波长的选择 精密移取1．5 ml的对照品及l ml供试品溶液，于70℃水浴蒸发至干，加入5％香草醛一冰醋酸(临用新配)0．2ml，高氯酸0．8 ml，于60℃水浴显色15 min后流水冷却 lO min。加冰醋酸5 ml，摇匀。立即在紫外分光光度计于400～800 nm波长下扫描，同时空白溶液作参比。对照品及供试品的最大吸收波长均在475 nm，故选取475 nm为检测波长。 2．4线性关系考察 精密量取对照品溶液0．60，1．50，2．40，3．30，4．20 ml，置具塞试管中，于70℃水浴蒸发至干，加入5％香草醛-冰醋酸(临用新配)O．2 ml，高氯酸0．8 ml，于60℃水浴显色15min后流水冷却10 min。各加冰醋酸5 ml，摇匀，以同法平行处理的空白溶剂为空白，在475 nm处测定吸光度。以对照品质量c(mg)为横坐标，吸光度A为纵坐标，使用软件OriginPro 7．0进行回归分析，得到回归方程为：A=0．007 4+1．120 83c, r=0．999 97。在0．096—0．672 mg内线性关系良好。 2．5精密度试验 精密吸取对照品溶液1．5 ml，依“2．4”项下方法显色测定吸收度，连续测定5次，结果RSD为0．254％，说明仪器的测试性能良好。 2．6稳定性试验 取对照品和样品溶液，依“2．4”项下方法操作，按不同时间测定吸光度，结果见表1。2．7样品含量测定 取供试品溶液6份，每份精密吸取80 μ L，按“2．3”项的方法显色后，在540nm测定吸光度，计算样品含量。 2．8加样回收率试验 取供试品溶液8份，每份精密吸取80μL，加入0．2mg／mL齐墩果酸溶液50 u I。，按“2．3”项的方法显色后，在540hm测定吸光度，计算加样回收率。
人参三七皂苷化学成分及药理作用对比研究 王海静 严铭铭 邵 帅 赵大庆 (长春中医药大学·吉林长春·130021) 摘 要:对来源于五加科人参属近缘植物人参和三七的化学成分和药理作用进行了综合比较。两种药 材在化学成分上既具有相似性又存在着差异性,因而在药理作用上也表现出一定的相似性和区别。 关键词:化学成分;药理活性;人参皂苷;三七皂苷 人参、三七均为五加科人参属植物,是临床常用传统中药,二者均以皂苷为其药理活性成分,人参为补益药主要功能是大补元气,滋补强壮,复脉固脱,补脾益肺,生津安神;三七为止血药主要功能是止血、散瘀、消肿、止痛、补虚、强壮等功效。现代研究发现二者在神经系统、心血管系统、免疫系统以及在抗衰老、抗肿瘤等多方面有相似的药理活性,对照化学成分发现二者有许多相同的单体皂苷类成分,但由于各单体皂苷含量的不同又表现出不同药效作用,本文就从人参、三七化学成分及药理作用方面做以比较和综述。1 化学成分 皂苷类成分均为人参和三七的主要有效成分,主要分为三大类即原人参二醇型(P r o t o p a n x a d i o l),如人参皂苷R b1、R b2、R c、R d、R h2、M-R b1、M-R d等,原人参三醇型(P r o t o p a n x a t r i o l)如人参皂苷R e、R f、R g1、R g2、R h1等和齐墩果酸型(o l e a n o l i c a c i d)有人参皂苷R o、R i等;随着研究的深入,最近又有许多新的单体人参皂苷被发现,但主要集中在前两种类型并主要是对原有类型的进一步细化,如丙二酰类皂苷,20位不同构型异构体皂苷(类型A)以及17位不同取代模式的单体皂苷(类型D)[1～3]。据F u z z a t i[4]初步统计,迄今为止从人参的不同部位分离得到的皂苷成分已有80余种,而从三七的不同部位分离得到皂苷成分也有60余种,但未发现齐墩果酸型皂苷,其中在三七中分离得到了人参皂苷F2、R a3、R b1、R b2、R b3、R c、R d、R g3、R h2、R h3、M C、M-R b1、M-R d、R g3、R h2等,主要以人参三醇型为主。 2 药理活性 观察人参和三七的化学组成发现二者的皂苷组成有相同的成分,现代药理研究证明二者在许多方面呈现相同或类似的药理作用;同时,二者也因各单体皂苷所含种类和含量的不同而呈现不同的药效作用。 2.1 对中枢神经系统的作用 人参皂苷R g类有中枢兴奋作用,R b类呈镇静作用[5];R g1与学习过程有关,而R b1与记忆和安定作用有关;R g类和R b类皂苷都是人参和三七所含的主要皂苷成分,因而在药理作用上表现出很多相似性。2.1.1 益智作用 现代研究认为人参皂苷R g1和R b1是人参中益智作用主要成分。药理作用机制研究表明[6],人参皂苷R g1和R b1均可促进幼鼠身体发育,并易化小鼠成年后跳台法和避暗法记忆获得过程,可明显增加小鼠海马C A3区细胞突触数目。这是人参皂苷促进学习和记忆的组织形态学基础。另有报道,三七皂苷G-R b1和G-R g1能显著增强小鼠的学习和记忆能力,对亚硝酸钠及40%乙醇造成的小鼠记忆不良均有不同程度的对抗作用。 2.1.2 镇静、镇痛作用 三七地上部分对中枢神经有抑制作用,表现为镇静、安定与改善睡眠等功用。三七总皂苷(P N S)、三七单体G-R b1均有显著的镇静作用,并能协同中枢抑制药的抑制作用。同时,P N S、G-R b1对化学性和热刺激性引起的疼痛均有明显的镇痛作用。作为镇静、镇痛作用主要成分的人参皂苷R b1是人参的主成分之一,推测人参也应具有一定程度的镇静、镇痛作用。 2.1.3 对神经细胞的作用 江山等[7]研究发现,人参皂苷R b1对缺血性脑损伤有保护作用,但并不呈剂量依赖性;胡堂等[8]人通过实验发现低浓度人参皂苷R b l对雪旺细胞增殖有明显促进作用,高浓度则显示抑制作用。刘雯等[9]实验观察三七总皂苷对模型细胞的保护作用,发现三七总皂苷对能量代谢障碍引起的神经细胞损伤有保护作用。对照人参皂苷对神经细胞的保护作用怀疑三七皂苷G-R b1可能是三七对神经细胞起保护作用的主成分之一。 2人参研究 R E N S H E N Y A N J I U 2008年第1期
成都中医药大学成人学院 学士学位论文 题目：西洋参化学成分和药理作用的研究 进展 专业：中药学 学号： 学生：吴涛 指导教师： 2016年04月
西洋参化学成分和药理作用的研究进展 吴涛（2014级中药学专升本2班） 摘要本文对近年来国内外学者对西洋参的化学成分、药理作用的研究进展作以综述，为西洋参的深入研究和开发利用提供参考。 关键词西洋参；人参皂苷；药理作用 西洋参为五加科植物西洋参Panax quinquefoliumL 的根。又名美国参、花旗参、洋参、广东参。主产于美国、加拿大。我国于上世纪七十年代引种, 1980年获得成功，北京、吉林、辽宁、陕西亦有栽培。其味甘、微苦、性凉。为气血双补清凉之品。归肺、心、肾、脾经。具有补气养阴、清热生津、宁神益智的功效。近年随着人们对养生保健、延缓衰老类补品的不断增需,西洋参及其制品研究的应用也越来越广泛，各方面研究也越来越深入。现对国内外学者对西洋参的化学成分、药理作用、真伪鉴别、临床研究及发展前景作以综述。 1 化学成分研究 西洋参的化学成分主要包括:皂苷类、挥发油类、氨基酸类、聚炔类、脂肪酸类、糖类、甾醇类、无机元素类、酶类、黄酮类等,经研究证明西洋参的主要活性成分是人参皂苷，为此人们对其进行了大量的研究,先后分离出40多种人参皂苷。 1.1 皂苷类 西洋参中主要活性成分为人参皂苷,共分4种类型:（1）母体结构为20(S)原人参二醇,如人参皂苷-Rb1,-Rb2,-Rb3,-Re,-Rd,- RA0, - F2；西洋参皂苷(quinquenoside)-R1, 绞股蓝苷(gypeno side)Ⅺ，Ⅹ，Ⅶ等。（2）线体结构为20(S)原人参三醇型, 如人参皂苷- Re, - Rf, - Rg1, - Rg2, - Rh1, - F3 等。（3）母体结构为齐墩果烷型(Oleanane), 如人参皂苷(ginaenoside)-R0。（4）母体结构为奥克娣隆型(Ocitillol), 如假人参皂苷(pseudoginseno side) F11。（1）和（2）属四环三萜的达玛烷系皂苷,且达玛烷系皂苷生理活性较强,而齐墩果烷系皂苷生理活性较弱,并且西洋参不同组织其所含人参总皂苷及单体皂苷也不同,其根中的总皂苷为5%～10%，茎中的总皂苷为2.18%，叶中的总皂苷为10%～16%，干花蕾中的总皂苷为12%～16%。
摘要 人参皂苷主要有原人参二醇(Protopanaxadiol, PPD) 型、原人参三醇( Protopanaxatriol, PPT) 型、齐墩果酸(Oleanic Acid, OA)型三种类型，其具有广泛的生物学活性，包括免疫调节、抗肿瘤、提高学习记忆、抗衰老、抗炎、抗痴呆、抗疲劳和促进造血等。但是人参皂苷本身不易被吸收，生物利用度较低。大量研究表明,人参皂苷在胃肠道去糖代谢后形成苷元或次苷，这些成分更容易被胃肠道吸收，且活性较皂苷增强。人参皂苷元混合物DS-1226系采用专有技术从人参茎叶中提取、水解、精制而成的一种类似人参皂苷肠代谢组合物的新型中药有效组份,该产品及技术已获得中国、美国、加拿大、欧盟、台湾等8个国家或地区的授权专利,其主要成分为PPT(33 %)和PPD (16 %)。行为学实验表明DS-1226对睡眠干扰所致的学习记忆障碍具有改善作用，此外其还对化疗所致的骨髓抑制有保护作用。 人参是五加科(Araliaceae) 人参属植物人参Panax ginseng C.A.Meyer的干燥根，是珍贵的中药材，始载于《神农本草经》，在我国药用历史悠久。人参主产于我国吉林的长白山等地区，具有大补元气、补脾益肺、生津、安神益智等功效-4。人参中含有多种类型的化学成分，如皂苷类、挥发油类、多糖类、氨基酸和多肽类、微量元素等，其中人参皂苷是主要的活性成分15]。人参皂苷属于三萜类皂苷，目前可分为三类6:-类为原人参二醇( Protopanaxadiol, PPD) 型，主要有人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rh2等;另一类为原人参三醇( Protopanaxatriol, PPT) 型，有人参皂苷Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh1等;还有一类为齐墩果酸(Oleanic Acid, 0A)型，有人参皂苷Ro、Rh3、Ri、F4等。近年来，对于人参皂苷以及其代
本科生毕业论文 异烟肼含量测定方法比较 姓名： XXX 指导教师： XXX 院系：化学化工学院 专业：制药工程 学号： 提交日期： 2012-03-30
目录 中文摘要 (3) 外文摘要 (4) 引言 (5) 1．异烟肼简介 (5) 1.1物理化学性质 (5) 1.2药理作用 (6) 1.2.1作用原理 (6) 1.2.2临床应用 (6) 1.2.3 不良反应 (6) 1.3 异烟肼制剂研究发展 (7) 1.4 异烟肼含量测定方法简介 (7) 2.实验部分 (7) 2.1 实验仪器和试剂 (7) 2.1.1 实验仪器 (7) 2.1.2实验试剂 (8) 2.2 实验应用公式 (8) 2.3溴酸钾滴定法 (8) 2.3.1实验原理 (8) 2.3.2试剂溶液配制 (9) 2.3.3异烟肼含量测定 (9) 2.3.4稳定性实验 (9) 2.3.5回收率实验 (10) 2.3.6精密度实验 (10) 2.3.7 结果分析与讨论 (10) 2.4紫外分光光度法 (11) 2.4.1实验原理 (11) 2.4.2试剂溶液配制 (11) 2.4.3 测定波长选择 (11) 2.4.4 标准曲线绘制 (11) 2.4.5稳定性实验 (12) 2.4.6回收率实验 (13) 2.4.7精密度实验 (13)
2.4.8结果分析与讨论 (13) 2.5 钼磷酸杂多蓝分光光光度法 (14) 2.5.1实验原理 (14) 2.5.2试剂溶液配制 (14) 2.5.3实验方法 (14) 2.5.4测定波长选择 (14) 2.5.5 标准曲线绘制 (15) 2.5.6稳定性实验 (16) 2.5.7回收率实验 (16) 2.5.8精密度实验 (16) 2.5.9结果分析与讨论 (17) 3.实验结论 (17) 参考文献 (18) 致谢 (20)
保健食品中人参总皂苷的含量测定方法研究 发表时间：2014-08-26T15:20:35.077Z 来源：《医药前沿》2014年第20期供稿作者：张高飞于玥邬晓鸥李军 [导读] 本文建立的方法简单、便捷，准确性、重复性好，可用于保健食品中人参总皂苷的含量测定。 张高飞于玥邬晓鸥李军 (深圳市药品检验所 518057) 【摘要】目的建立保健食品中人参总皂苷含量的测定方法。方法用水提取人参总皂苷类成分，经水饱和正丁醇萃取、氨试液洗涤除杂后，试样中的人参皂苷类成分在高氯酸的作用下与香草醛反应，产生特征的紫红色，在560nm下测定吸光度。结果人参总皂苷在0.0722～0.2165mg质量范围内与吸光度线呈良好的线性关系，平均回收率为95.9%。结论本文建立的方法简单、便捷，准确性、重复性好，可用于保健食品中人参总皂苷的含量测定。 【关键词】保健食品人参总皂苷分光光度法 【中图分类号】R93 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）20-0217-02 皂苷类成分是参类中的主要活性物质, 具有滋补强壮，增强免疫，抗疲劳的功效[1]，常用的检测方法为紫外分光光度法[2-5]。目前市售含参类的保健食品有片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液等，均是以总皂苷含量来评价其产品的质量和功效。其测定方法大多都是按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中的方法检测[6]，在实际应用中，主要存在以下问题：1、固定的树脂柱载样量与不确定的样品总皂苷含量之间的矛盾，部分样品存在柱容量超载的情况，测定结果偏差严重。2、部分样品经过大孔树脂柱除杂后，仍存在干扰比色测定的杂质。3、操作步骤欠规范，导致测定结果重现性差。本文针对总皂苷的提取方式、以及测定过程中的参数进行研究，建立了保健食品中人参总皂苷的测定方法。 1 仪器、材料与试药 岛津UV2450紫外分光光度计；瑞士梅特勒XS105DU电子天平；上海一恒电热恒温水浴锅；人参皂苷Re(中检所，批号110754-200822，含量88.8%)；儿童装高丽红参液，舒灵胶囊，舒慰快牌胃肠液均购自市场；水为蒸馏水，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1供试品溶液的制备 固体试样：称取1 g样品，置100 mL容量瓶中，加水80 mL，超声提取30 min，放冷至室温，用水定容至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25 mL，进行萃取。 液体试样：吸取试样10 mL至分液漏斗中(含乙醇的保健食品，水浴挥尽乙醇)，加水至约25 mL，进行萃取。 在已处理好的试样中加入20 mL水饱和正丁醇，振摇萃取3次，取正丁醇层(必要时可离心)，合并提取液，用20 mL氨试液洗涤3次，置蒸发皿中100℃水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，甲醇定容，即得。 2.2 标准曲线的绘制 分别精密吸取人参皂苷Re标准溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL于10 mL具塞比色管中，水浴挥干溶剂，加入0.2 mL 5%香草醛冰乙酸溶液，再加入0.8 mL高氯酸，使残渣溶解，于60℃水浴加热10 min，冰浴冷却后，精密加入冰乙酸5 mL，摇匀，于560 nm波长处测定吸光度。取供试品溶液1 mL于10 mL具塞比色管中，自“水浴挥干溶剂”起操作。 3 方法学考察 3.1线性关系 取人参皂苷Re对照品0.01804 g，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，作为标准溶液，精密量取标准溶液0.4、0.6、0.8、 1.0、1.2 mL分别置10 mL比色管中，水浴蒸干，显色，以对照品的质量(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程：y=4.4807x－ 0.0886，r=0.9997。结果表明，人参皂苷Re对照品质量在0.0722～0.2165 mg之间与吸光度呈良好的线性关系。 3.2 萃取次数 取舒灵胶囊、儿童装高丽红参液，按2.1制备样品水提取液，用水饱和正丁醇分别萃取3、4、5次，结果表明，萃取3次可将人参总皂苷提取完全(表1)。 表1 萃取次数比较结果 3.3热稳定性考察 由于正丁醇沸点较高，为此对人参皂苷的热稳定性进行考察，以便选取合适的水浴温度。取人参皂苷Re标准溶液0.6 mL，分别按60℃、100℃水浴蒸干、100℃水浴蒸干后继续放置30 min处理，测定结果分别为0.663、0.658、0.653，表明人参皂苷的热稳定性良好，因此水浴温度选为100℃。 3.4显色稳定性 取人参皂苷Re标准溶液0.3 mL，显色后每隔10 min测定其吸光度，结果表明，显色后的紫红色溶液不稳定，吸光度呈下降趋势，因此显色完成后需在10 min内完成测定。 3.5重复性试验 取舒灵胶囊按2.1下方法制备6份供试品溶液，分别测定，结果表明本方法重复性良好(表2)。
人参的药用功效 性味归经 人参味甘、微苦，性温。《本经》中称味甘，微寒。《别录》中称微温，无毒。《本草纲要》中称生，甘苦，微凉；熟，甘，温；入脾、肺经。《本草衍义补遗》中称“入手太阴”。《本草汇言》中称入肺、脾二经。《药品化义》中称入脾、胃、肺三经。 药用部位 商品人参的主根、须根、芦头、人参茎叶、人参花蕾、人参果实等全株均可入药。 药用功效 【传统应用】 人参作为名贵药材在我国已有近四千年的应用历史，历代医药名家均视其为“君药之首”。诸多医药名著均记载：人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津止渴、养心安神、开心益智等功效。 《神农本草经》列人参为上品，称其功能“补五脏，安精神,……明目开心益智，久服轻身延年”。 《本草纲目》认为人参“治男、妇一切虚证”。 《本草汇言》指出：“人参补气生血、助精养神之药也，故真气虚弱、短促气虚，以此补之；……惊悸怔仲、健忘恍惚，以此宁之；元神不足、虚赢乏力，以此培之。……若久病元虚、六脉空大者，吐血过多、面色萎白者，疟痢日久、精神萎顿者，中热伤暑、汗竭神疲者，血崩溃乱、身寒脉微者，内伤伤寒、邪实心虚者，风虚眼黑、旋晕卒倒者，皆可用也”。 【现代应用】 现代科学研究结果表明，人参的药用功效是多方面的，除与古代医药文献记载相关内容一致外，现代临床实践证明：人参还具有强心、镇静大脑、调节中枢神经系统的作用；具有提高体力和脑力劳动作用、提高记忆力作用；有恢复疲劳作用；有抗癌和增强肌体免疫功效；有促进代谢、活跃内分泌系统作用；有增强肝脏解毒功能；提高血液中血红素的含量，改善骨髓造血能力；有抗辐射效能；有调节血糖、降低胆固醇、减肥降脂等功效。在美容方面，人参具有减少皱纹生成,增强皮肤弹性，去除色斑,柔顺头发和防止脱发等作用。 人参对疾病的治疗作用和保健效能是多方面的，而最奇特的作用是双向调节和维持生命的恒常作用。久服人参可强身健体、延年益寿。 对中枢神经系统的作用 人参对神经系统有兴奋作用，也有抑制作用，尤以兴奋作用更为明显。人参皂甙Rg类有兴奋作用，Rb类有抑制作用。 人参有益智作用，Rg1与学习过程有关，而Rb1与记忆和安定作用有关。人参皂甙能明显降低小鼠由戊四氮引起的惊厥率及士的宁引起的死亡率。 对免疫系统的作用 人参可全面增强机体的免疫功能，其活性成分主要是皂甙和多糖。 对心血管系统的作用
浅谈中药人参的药理作用与应用研究 中药人参为五加科的干燥根，栽培品称“园参”，野生品称“山参”，主产于东北三省。秋季采挖。园参经晒干或烘干，称“生晒参”；蒸制后的干燥品，称“红参”。切片或研粉用。人参的化学成分主要是人参皂苷、多糖、维生素及人参黄酮类等。多数为达玛烷型皂甙，如人参皂甙Ral，Ra2，Rbl，Rb2，Rb3，Rc，Rd，Re，Rf，Rgl，Rhl，及20-葡萄糖人参皂甙Rf（20-glucoginsenoside Rf）等；少数为齐墩果酸型（C型）皂甙，如人参皂甙R[1]。 人参是我国特产珍贵药材之一，古代医药学书籍《神农本草经》对人参的功效有重要记载，人参药用部分主要为人参的根和须，现在也有将人参叶和人参花蕾作药用的。中医功效为大补元气、复脉固脱、补脾益气、生津、安神、益智。用于体虚欲脱、肢冷脉微、肺虚喘咳、惊悸失眠、神经衰弱、精神倦怠及各种气血津液不足症。 1人参的药理作用和临床功效 1.1对神经系统的作用 人参促进大脑对能量物质利用的有效成分为人参皂苷，其中人参皂苷Rb1，能调节中枢神经系统兴奋过程和抑制过程的平衡，对中枢神经系统均有小剂量兴奋，大剂量则转为抑制的作用。人参皂苷Rb1具有营养神经，促进轴突外生和神经再生的作用，人参皂苷；具有神经保护作用[2]，对脑缺
氧损伤的神经细胞有保护作用[3]，能作为脑细胞和神经细胞的保护剂，人参皂苷Rb1，对许多大脑细胞、神经细胞均有保护作用。姜正林[4]等用立体海马脑片模型研究发现，人参总皂苷对脑缺氧损伤的神经细胞有保护作用，人参皂苷Rb1，可促进抑制细胞死亡的基因产品的表达，抑制凋亡和凋亡细胞的死亡，对治疗或预防大脑和神经系统的疾病是有效的。近几年，人参皂苷抗神经细胞凋亡的作用受到人们的广泛关注，李军庆等[5]提出Rg，可抑制DNA断裂，从而防止细胞凋亡，人参能提高脑力与体力劳动的能力，提高工作效率，并有调节中枢神经系统抗疲劳作用；研究证明人参茎叶皂苷对电休克所致的大鼠较正常大鼠的不同脑区的单胺类递质含量明显增多，能改善大鼠的记忆学习功能[6]。海马与神经记忆活动有关，研究证明Rb1，能够促进海马苔藓纤维出芽等神经元的变化而提高神经元核内核糖核蛋白基因（Rdna）的转录活性，促进蛋白质的合成和增强海马突触的传递效应而增强学习记忆功能[7]，人参对不同记忆障碍的动物模式的记忆与学习能力的改善，充分说明人参在中枢系统的效应。 1.2对心血管系统的作用 人参有抗缺血作用，人参总皂甙（GS）对心肌梗塞和再灌注损伤均具有保护作用。人们对兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用的研究，以20～80mg/L浓度范围内为宜，且该作用随浓度升高而增强，但当浓度达到160mg/L时，反而有加
总皂苷检测方法-总皂苷含量测定法（香草醛法）：实验流程图2017.10 【文献】Xican Li, Qiuping Hu, Shuxia Jiang, Fei Li, Jian Lin, Lu Han,Yuling Hong, Wenbiao Lu, Yaoxiang Gao, Dongfeng Chen. Folium Sennae Protects against Hydroxyl Radical-induced DNA Damage via Antioxidant Mechanism: An in vitro Study. Botanical studies. 2014; 55:16. 【简介】皂苷广泛存在于中药及其他植物中，而且化学结构大同小异的皂苷往往同时存在。为了测定这些皂苷的总含量，便建立了总皂苷的检测方法。总皂苷的检测多使用分光光度法，并以某种标准品绘制工作曲线，依该曲线所建立的回归方程，计算其含量。 【溶液配制】 1.香草醛-冰醋酸溶液（测试液）配制：精密称取25mg香草醛，加冰醋酸定容至5mL。即制成5mg/mL 香草醛-冰醋酸测试液。 2.样品液配制：将待检测的样品用甲醇溶解，配成约5mg/mL的样品液。具体浓度视样品的溶解度而定， 但是必须有精确的数据。 3.齐墩果酸标准品溶液配制：精密称取齐墩果酸1mg，加甲醇定容至5mL，配成0.2mg/mL齐墩果酸标 准品溶液。（也可以使用其他的皂苷物质，如人参皂苷Rg3。但必须是纯的化合物） 4. 高氯酸：分析纯试剂。 5. 冰醋酸：即纯的无水乙酸（分析纯） 【检测方法与实验流程图】 【标准曲线绘制】（齐墩果酸） 取上述齐墩果酸溶液x μL （x=0，40，80，120，160，200），依“实验流程图”，在70℃水浴15mim 后呈桃红色。以第一份溶液（x=0）作为空白对照，测A540nm值。以“产物混合物”时的齐墩果酸的质量，为横坐标，A540nm值为纵坐标，绘制标准曲线。以此标准曲线计算，得线性回归方程。 【样品液的测定】 将上述“实验流程图”中的“齐墩果酸标准品溶液”换成样品液，进行实验，并测定其A540nm值。将此A540nm代入线性回归方程，即可计算出其总皂苷的含量（以齐墩果酸计）。 【说明】 1.此法是以齐墩果酸为标准品测得总皂苷的含量。所以，其结果应表示为，如：“某某提取物中含 有0.12mg/g的总皂苷（以齐墩果酸计）”。这并不意味着该提取物中真的就含有齐墩果酸。 2.“实验流程图”中，在“彻底挥干溶剂”一步中，如果溶剂挥干不彻底，哪怕是有一点点，都 会干扰。水也要彻底挥干。 1
第一章综述 人参皂苷的简介 人参为五加科植物人参(Panax ginseng)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。 人参皂苷（ginsenoside，GS)是人参的主要有效成分，现已明确结果的GS单体约有40余种；在人参中的含量在4%左右。其中研究最多且与肿瘤细胞凋亡最为相关的为Rg3与Rh2。众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活性，对正常细胞无毒副作用，与其他化疗药物（如顺铂）联合应用有协同作用。人参皂苷通过调控肿瘤细胞增殖周期、诱导细胞分化和凋亡来发挥抗肿瘤作用。将肿瘤细胞诱导分化成正常细胞有利于控制肿瘤发展，诱导肿瘤细胞凋亡使细胞解体后形成凋亡小体，不引起周围组织炎症反应。Popovich等研究认为，人参皂苷可以促进人白血病细胞的凋亡，其途径与地塞米松相识，均为受体依赖性。目前我国对人参皂苷的提取分离方法、制剂工艺、抗肿瘤作用机制以及临床应用等方面做了大量研究，而且已经有人参皂苷的新产品推向市场。 人参皂苷成分 人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50余种人参皂苷。 Rh2：具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用。对癌细胞具有明显的抗转移作用，可配合手术服用增强手术后伤口的愈合及体力的恢复. Rg：具有兴奋中枢神经，抗疲劳、改善记忆与学习能力、促进DNA、RNA合成的作用。 Rg1：可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经作用、抑制血小板凝集作用。 Rg2：具有抗休克作用，快速改善心肌缺血和缺氧，治疗和预防冠心病。 Rg3：可作用于细胞生殖周期的G2期，抑制癌细胞有丝分裂前期蛋白质和ATP的合成，使癌细胞的增殖生长速度减慢，并且具有抑制癌细胞浸润、抗肿瘤细胞转移、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长等作用。
作者简介:冯亮(1980-),男,正攻读药剂学专业的博士学位。3通讯作者(C orrespondent author ),jxh1013@https://www.doczj.com/doc/8198514.html, 三七总皂苷中各组分含量测定方法的改进 冯 亮,蒋学华3,叶利民 (四川大学华西药学院,四川成都610041) 摘要:目的 用薄层扫描法(T LSC )和高效液相色谱法(HP LC )测定三七总皂苷中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参皂苷Rg 1(Rg 1)和三 七皂苷R 1(R 1)3种主要成分的含量,并对两种方法进行比较,为修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。方法 T LSC 法用正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上层溶液为展开剂,27%硫酸无水乙醇溶液为显色剂,测定波长λs =535nm ,λR =460nm ;HP LC 法用C 18色谱柱,以乙腈-水线性梯度洗脱,0min (25∶75)～15min (45∶55);流速1.5ml ?min -1;测定波长200nm 。结 果 T LSC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1、R 1的含量分别为31.07%、23.30%、9.35%;HP LC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、 Rg 1、R 1含量分别为30.46%、22.65%、5.83%。结论 HP LC 法能将多种皂苷很好地分离并检测,简便快速,减少了误差。其准 确度和测定结果的稳定性均优于T LSC 法。 关键词:薄层扫描法;高效液相色谱法;三七总皂苷;人参皂苷Rb 1;人参皂苷Rg 1;三七皂苷R 1中图分类号:R927 文献标识码:A 文章编号:1006-0103(2006)02-0187-03 Improvement of determination method of the main components in Panax notoginseng saponions FE NGLiang ,J I ANG Xue -hua 3,YE Li -ming (West China School o f Pharmacy ,Sichuan Univer sity ,Chengdu 610041,China ) Abstract :OBJECTIVE T LSC and HP LC were adopted to determine the contents of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions.And results of the tw o methods were compared ,which could provide the basis of revising the determination method in quality standard.METH ODS T LSC has been established with the upper layer of the mixture of butanol -ethyl acetate -H 2O (4∶1∶5)as developing s olvent ,and 27%sulphuric acid ethanol s olution as coloring reagent ,λs =535nm ,λR =460nm.HP LC was adopted with C 18column ,acetonitrile -H 2O (25∶75at 0min and 45∶55at 15min ,linear gradient elution )was used as m obile phase and detective wave 2length was set at 200nm.The flow rate was 1.5ml ?min -1.RESU LTS The content of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions determined by T LSC was 31.07%,23.30%and 9.35%;and that determined by HP LC was 30.46%,22.65%and 5.83%,respectively.CONC L USION HP LC could separate and determine various components in Panax notoginseng saponions and determine them.Its accuracy and stability are better than T LSC. K ey w ords :T LSC ;HP LC ;Panax notoginseng saponions ;G insenoside Rb 1;G insenoside Rg 1;Sanchinoside R 1C LC number :R927 Document code :A Article I D :1006-0103(2006)02-0187-03 三七是五加科人参属植物Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen 的干燥根;含有皂苷、多糖、氨基酸等多种化学成分。其中三七总皂苷(Panax noto 2 ginseng saponions )为其主要的有效成分,具有活血化 淤的功效。三七总皂苷含有人参皂苷Rb 1、Rb 2、Rc 、Rd 、Re 、R f 、Rg 1、Rg 2、Rh 1和三七皂苷R 1、R 2、R 3、R 4、R 6等20余种皂苷成分,均属达玛烷型(Dammarane type )四环三萜皂苷。其中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参 皂苷Rg 1(Rg 1)是三七总皂苷中含量最高的两个成分,而三七皂苷R 1(R 1)则是三七总皂苷的特征化合物[1]。对于三七总皂苷原料及其口服制剂,文献[2]规定采用比色法测定总皂苷含量。而比色法在操作过程中存在操作烦琐、影响因素多及重复性差等问题[3],尤其是不能分别测定三七总皂苷中各主要成 分的含量。为此,特建立了薄层扫描法(T LSC )测定 三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1和R 1的含量[4];同时建立了HP LC 含量测定法,并与T LSC 法进行比较,为重新修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。 1 实验部分 1.1 仪器与试药 LC -9A 高效液相色谱仪,SPD -6AV 紫外检测 器(日本岛津);CS -930薄层扫描仪;Dikma Diam on 2sil C 18色谱柱(200mm ×4.6mm ,5μ m ,美国Dikma 公司);硅胶G 板(大连化物所)。Rb 1、Rg 1和R 1对照 品(中国药品生物制品检定所);三七总皂苷(云南特 安钠制备厂);乙腈(色谱纯,美国Dikma 公司);水(超纯水);其余试剂均为分析纯。1.2 T LSC 法1.2.1 含量测定 取三七总皂苷样品约50mg ,精 华西药学杂志 W C J ?P S 2006,21(2):187～189
总皂苷的测定方法（分光光度法） 本方法适用于功能性食品中总皂苷的测定。 本方法人参皂苷Re的最低检出量为2μg/mL。 一、方法提要 样品中总皂苷经提取、PT—大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560nm处比色测定。 二、仪器 1.722分光光度计。 2.PT—大孔吸附树脂柱（河北省津杨滤材厂）。 3.超声波振荡器。 三、试剂 1.甲醇（分析纯）。 2.乙醇（分析纯）。 3.人参皂苷Re标准品（中国药品生物制品检定所）。 4.5％香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至l00mL。 5.高氯酸（分析纯）。 6.冰乙酸（分析纯）。 7.人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即每1mL含人参皂苷Re2.0mg。 8.重蒸水。 四、测定步骤 1.样品处理： （1）固体样品 称取1.0g左右样品于100mL烧杯中，加入20～40mL 85%乙醇，超声波振荡30min，再定容至50mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL挥干后以水溶解残渣，进行柱分离。 （2）液体样品 含乙醇的酒类样品：准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液进行柱层析；非乙醇类液体样品：准确吸取1.0mL样品（如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）直接进行柱分离。 2.柱层析
以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离，准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作显色用。 3显色 在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL 5％香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入l0mL比色管中，塞紧盖子于60℃以下水浴上加温15min取出，冷却后准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后以1.0cm 比色皿、于560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。 4标准曲线的绘制： 吸取人参皂苷Re标准溶液（2.0mg/mL）0、20、40、60、80、100μL（相当于人参皂苷Re0、40、80、120、160、200μg），于10mL比色管中，用氮气吹干，同4.（3）显色步骤测定吸光度。并绘制标准曲线。 人参总皂苷浓度为20～200μg/mL之间与吸光度值呈线性关系，相关系数（r）0.999。 五、结果计算 式中X——样品中总皂苷（以人参皂苷Re计）（g/kg或g/L）； m——试样质量或试液体积（g或mL）； V1——样品提取液总体积（mL）； V2——样品提取液测定用体积（mL）； m1——从标准曲线查得待测液中人参皂苷Re量（μg）。
天然产物化学 论文（设计）题目：人参化学成分及生物活性的研究进展 学院：化学与化工学院 专业：化学 班级： 学号： 学生姓名： 2013年11 月22 日
目录 摘要 ..................................................................................................................................... I 第一章前言 (2) 第二章人参的化学成分及药理作用 (2) 2.1人参皂苷 (2) 2.1.1人参皂苷的分类 (3) 2.1.2人参皂苷的药理作用 (6) 2.2脂溶性性成分 (8) 2.2.1脂溶性成分的抗菌作用 (8) 2.2.2脂溶性成分的抗肿瘤作用 (9) 2.3多糖类物质 (9) 2.3.1人参多糖类物质的调节免疫作用 (9) 2.3.2人参多糖类物质的降血糖作用 (10) 2.3.2人参多糖类物质的抗肿瘤作用 (10) 第三章结语 (11) 参考文献 (12)
人参化学成分及生物活性的研究进展 摘要 现代研究证明，人参可增进食欲、强心、抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤，治贫血、神经衰弱等症。本文对人参化学成分及人参的药理研究的新进展给予综述并对人参的研究作简要展望 关键词：人参，化学成分，药理作用
第一章前言 中药人参是五加科人参，属植物人参的干燥根，是一种名贵药材，同样为一种比较常见的药物。经中医临床验证表明人参的主要功效包括有补脾益肺、大补元气、生津安神益智等。临床上人参能够对诸多疾病均能够产生良好的防治效果，特别是对人体滋补强壮作用更加的明显。并且它的化学成分相对较为复杂，具有广泛的生物活性，药理作用相对独特，由于现代分离以及分析技术得到了突飞猛进的发展，人参的化学成分的研究也获得了进一步的进展。目前人们对其药理活性广泛关注，本文针对其化学成分和药理活性展开论述，从而为今后的临床研究提供参考。 第二章人参的化学成分及药理作用 人参的现代研究已有一百多年的历史,这期间对人参的研究大多采用粗制剂或总皂贰成分，固然是由于人参有效成分的含量低和纯化困难，还由于对人参有效成分及其药理作用的多样性认识不足。至今，已阐明的人参化学成分包括皂苷、糖类、蛋白质、多肤、氨基酸、有机酸、维生素、脂溶性成分和其它成分【1】。其中，皂苷被公认为是人参的主要的有效成分之一。 2.1人参皂苷 皂苷是广泛存在于植物中的一类复杂的有机化合物，这类化合物因具有较大的表面活性，在水中震荡或加热时可以产生胶状溶液和泡沫，因而得名皂苷。人参皂苷为人参属植物中主要活性成分，是由皂苷元和糖相连构成的糖苷类化合物，人参中人参皂苷的含量约占人参干重的4%左右。人参皂苷为白色无定形粉末或无色针状结晶，味微甘苦，具有较强的吸湿性。极性大的人参皂苷易溶于水、甲醇、乙醇，可溶于正丁醇、醋酸和