芽孢杆菌概况及其作用机理
引言：也许您已加入微生态制剂行业数年，对该行业的发展和现状如数家珍；也许您刚刚踏入这个行业，对此行业还感到有些不甚明了，但是，只要您选择了宝来利来公司，选择了宝来利来公司的微生态产品，您就不难发现，公司的几款拳头产品，如产酶益生素系列、肽菌素系列、固本康系列等等，都有一个共同的菌株——芽孢杆菌，有的产品含枯草芽孢杆菌、有的产品含地衣芽孢杆菌、有的产品是二者的组合。
我们再来看宝来利来公司发展的历程：
1996年宝来利来公司第一份产品枯草芽孢杆菌问世，这是中国第一家取得生产批准文号的动物微生态产品，从此开端了一个产业的萌芽。
2001年产酶益生素问世，枯草芽孢杆菌产酶菌株N9正式选育成功，并在引进消化国家948项目的基础上突破乳酸菌的真空冷冻干燥技术，从此将益生素引入营养微生态、免疫微生态新纪元。产酶益生素也被国家科技部、国家经贸委评为国家重点新产品。
2006年，宝来利来产酶益生素进一步完成了产品的升级换代，在N9的基础上选育出N9-1-35，产酶能力再次提高300%，达到国际领先水平；抗感染菌株枯草芽孢杆菌B7348和乳酸菌LP-11的选育成功，使
产酶益生素真正进入到营养微生态、免疫微生态、抗感染微生态的时代。
截至目前，公司承担6项“国家863计划”课题，拥有6项国家重点新产品。在中国整个动保行业取得如此殊荣的，目前仅宝来利来一家企业。
宝来利来公司所取得的成就，产品得到的广泛认可，除了与公司强大的研发实力外，更与公司准确定位、成功选育的菌株有直接关系。现在我们重点学习一下芽孢杆菌的相关特性。
1 芽孢杆菌的概况
芽孢杆菌属于芽孢杆菌科、芽孢杆菌属，能形成内生孢子——芽孢的革兰氏阳性杆菌，需氧或兼性需氧，具有鞭毛。芽孢杆菌广泛分布于土壤、空气、水和动物肠道中，其稳定性强，芽孢一旦形成，便能耐受各种不利条件，如干热(150℃干热1h仍有芽孢存活)、湿热、紫外线、强酸、强碱、有机溶剂、极度干燥、真空干燥、氧化剂的氧化作用等。在一定条件下，芽孢能够长时间保存，可以保证益生菌制品的有效期。
所有菌属中芽孢杆菌是最理想的微生物添加剂。大量试验证明，芽孢杆菌添加剂具有类似于泰乐菌素的效果，可明显改善机体内菌群组成和具有促生长的功效，并且芽孢杆菌在颗粒料、粉料的加工过程中以及酸性环境中具有较高稳定性，在肠道内环境中能发挥作用而增殖，符合微生物添加剂的条件。
芽孢杆菌在肠道酸性环境中具有高度的稳定性，能分泌较强活性的蛋白酶及淀粉酶，促进饲料营养物质的消化。芽孢杆菌可以减少粪和消化道中的大肠埃希氏菌数量。目前使用的菌株有枯草芽孢杆菌(Bacillussbtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)、东洋芽孢杆菌(Bacillustoyoi)等。
2 芽孢杆菌的作用机理
芽孢杆菌主要作用机理有以下四点：
（1）生物夺氧芽孢杆菌在肠道主要通过生物夺氧维持肠道生态平衡，这是因为肠道原籍优势菌大多属厌氧菌，而有害菌和外来菌多为需氧菌。芽孢杆菌属于无害需氧菌，到达肠道复活后，能消耗肠道内的氧气，造成厌氧环境，降低氧化还原电势，增强肠道对厌氧菌的定植抗力。如在断奶仔猪日粮中添加芽孢杆菌，可增加十二指肠内乳酸杆菌菌数，并显著降低大肠杆菌的数量。
（2）拮杭动物病原菌，维护并调节肠道生态平衡在正常情况下，动物肠道微生物种群处于动态的微生态平衡状态。当机体受到某些应激影响，肾上腺功能亢进，肾上腺皮质酮分泌增加，由消化道分泌的作为厌氧菌主要营养源的黏蛋白数量增加，有机酸生成减少，使大肠杆菌大量增殖，兼性厌氧菌或需氧菌菌数增加，而蛋白质分解产生胺、氨等有毒物质，进一步造成肠道菌群紊乱。同时，生成有害物质，刺激肠道蠕动增强和分泌异常，造成腹泻、肠炎，阻碍动物生长发育，降低其生产性能。研究证明：饲喂芽孢杆菌能显著降低肠道大肠杆菌、
产气荚膜梭菌、沙门氏菌，使肠道微生物有利于动物体的微生态平衡。产生蛋白多肽类抗菌物质，拮抗肠道病原细菌，增加空肠内容物乳酸、丙酸、乙酸等含量，降低pH值，抑制有害菌的生长繁殖。
（3）产生有益代谢产物产生有机酸：芽孢杆菌在肠道内生长繁殖过程中，产生乳酸或蛋白多肽类拮抗物质，一方面，肠道pH值降低和拮抗物质的产生可抑制有害微生物；另一方面，肠道pH降低，有助于动物特别是幼小动物营养物质消化，尤其是对蛋白质的消化吸收。
产生多种酶类：产生较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶。同时，还具有降解植物性饲料中复杂碳水化合物的酶，如果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等，其中，很多是体内不能合成的。
生成营养物质：产生维生素、氨基酸、促生长因子等，参与机体新陈代谢。
（4）改善动物体内的免疫功能，增强杭病力大多数学者认同的观点是动物摄入饲用枯草芽孢杆菌后，调整肠道菌群，使肠道微生态系统处于最佳的平衡状态。同时，各正常菌群包括芽孢杆菌在肠道具有抗原识别部位的淋巴组织集合下发挥免疫佐剂作用，活化肠黏膜内的相关淋巴组织，提高免疫识别力，并诱导T、B淋巴细胞和巨噬细胞产生细胞因子，通过淋巴细胞再循环而活化全身免疫系统，从而增强机体的非特异性和特异性免疫功能。
为了保证食品卫生安全，发展绿色畜牧业，禁用抗生素作为饲料添加剂势在必行，抗生素替代物的研究应用已是必然趋势。以芽孢杆菌制
剂为代表的微生态制剂具备无毒副作用、无残留、无耐药性、不污染环境的性能，而且在使用过程中具有很高的稳定性，可在饲料中直接添加，因此越来越受到专家学者和生产经营者的重视，应用前景非常广阔。
当然，宝来利来公司的微生态制剂产品不仅含有芽孢杆菌，还含有其他优秀的菌种菌株，如乳酸菌、酵母菌、丁酸梭菌及其代谢产物等，这些菌株的作用机理及用途将会在后面跟大家分享，敬请期待！
枯草芽孢杆菌，学名Bacillus subtilis，是一种被广泛应用于工业生产的革兰氏阳性细菌。与大肠杆菌不同，枯草芽孢杆菌没有外层膜，分泌的蛋白能直接释放到培养基中，是一种理想的原核蛋白分泌表达菌株。那么作为一种潜能巨大的原核表达系统，它究竟强在哪些方面呢？且让AtaGenix为您一一道来。 枯草芽孢杆菌的安全性是食品级的，收录于FDA的GRAS菌中，欧洲食品安全局认为枯草芽孢杆菌可用于食品发酵。很多常用食品工艺中都能见到它的身影。与大肠杆菌相比，枯草芽孢杆菌的细胞壁组成简单，只含肽聚糖和磷壁酸，在分泌的蛋白质产品中不会混杂有类似革兰氏阴性菌细胞壁成分中的热源性脂多糖（内毒素）等物质。该表达系统用于药用蛋白的表达纯化时还可省掉去除内毒素这一步。 同为原核生物界的明星，虽然大肠杆菌和枯草芽孢杆菌都只需短时间就可表达和积累大量目标蛋白。但大肠杆菌在后续发酵工艺中需要对收集的菌体进行破胞处理，而枯草芽孢杆菌得益于其本身所拥有的一套高效分泌信号肽及分子伴侣系统，只要简单处理发酵上清就能得到较纯的蛋白，并且表达的蛋白在多数情况下具有天然构象和生物活性。 蛋白质组学研究表明，枯草芽孢杆菌中至少有四种蛋白质分泌途径，其中Sec 分泌途径是主要分泌途径。另外枯草芽孢杆菌拥有良好的发酵生产技术，目前大部分商业化的蛋白水解酶和淀粉酶都是由其发酵得到的。AtaGenix拥有的5 L、20 L、150 L及其他型号的发酵罐（上图就是真相），可满足各种大规模发酵的需求。 虽然枯草芽孢杆菌表达外源蛋白潜力无限，但也有其短板，如自身胞外蛋白酶对表达产物的降解、遗传操作相对困难、外源蛋白有时得不到有效的表达等等。但AtaGenix却能成功避免以上问题使外源目标蛋白在枯草芽孢杆菌表达系统中有效表达，这主要得益于以下三个方面的优势： ①丰富的表达宿主
发酵床中常用菌种,目前可以查找到得菌种配方如下: １、枯草芽孢杆菌菌种50—70％、酿酒酵母菌菌种3０—５0%。 2。由酵母菌、乳酸菌、放线菌、光合细菌与丝状真菌按比例组合制成发酵剂3、取枯草芽孢杆菌粉末2—4份,植物乳杆菌粉末３－５份,产朊假丝酵母粉末3—５份,白地霉粉末2—4份,米曲霉菌粉末3—５份,充分混匀 4、乳酸菌、芽孢杆菌、光合细菌、酵母菌、放线菌 5。乳酸菌、枯草芽孢杆菌、粪链球菌、纤维素分解菌 发酵床中益生菌得主要作用: 禽类得消化道较短,粪便中约有７０％左右得有机物没有被分解,水度大,有机养分高,易变质发臭。益生菌可以将粪便分解成为菌体蛋白,禽类甚至可以采食这些菌体蛋白补充营养,还能提高免疫力、同时,禽类在使用这些菌体蛋白或粪便中未分解得饲料得过程中,垫料中得大量益生菌随之进入禽类得消化道中,这些有益菌中得一些纤维素酶、半纤维素酶类能够分解饲料中得纤维素、半纤维素等。接入菌剂能加快堆肥得升温速度,提高最高温度,加速堆肥中Ｃ得下降,促进粪便中生物毒性物质得分解,且可能有利于粪便堆肥中养分得保存与矿化。 ,还发酵床中得益生菌可降低垫料环境得PH值,对粪便降解过程中产生得ＮH 3 可加速粪便中得碳氮代谢 由于禽只得粪便得到及时分解,加上垫料得吸附作用, 。 禽舍内无粪便污染,也没有氨味得刺激,禽只呼吸道疾病发病率自然而然得降低;消化道环境得改善则直接减少了禽只消化道疾病发病率。 各种益生菌可以明显得增加垫料得酶活性,包括:过氧化氢酶、脲酶、纤维素酶、蛋白酶。 益生菌如乳酸菌会产生生物抗菌素如乳酸链球菌素、过氧化氢、嗜酸菌素等,再加上发酵床高温环境会使有害菌大量死亡或者全部死亡。 益生菌种类: 益生菌种类很多,目前主要有4大类细菌、⑴严格厌氧得双歧杆菌属:该属现有32个种,其中能在肠道内顶置并能用于制备保健食品得双歧杆菌主要有两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、短双歧杆菌与长双歧杆菌5种;⑵耐氧得乳杆菌属:已报道得有５6种,常用于肠道微生态制剂得约有10种,有嗜乳酸杆菌、植物乳杆菌、短乳杆菌、干酪乳杆菌与德氏乳杆菌保加利亚种等;⑶兼
由于具有防病、治病、促进动物生长、提高饲料转化率等功效，抗生素作为饲料添加剂在畜禽养殖业生产中被普遍使用。 大量科学研究已经证明，对动物长时间地使用抗生素添加剂，会导致动物体内微生物的耐药性不断增加，动物自身对疾病的抵抗能力越来越差，治疗时使用的抗生素剂量也随着越来越大。人食用了含有抗生素的食物，相应地也会增加人体内微生物的抗药性。30年前，人注射青霉素20万单位就可以了，后来逐渐发展到80万、100万甚至更高。不但危害人民的身体健康，而且还影响养殖业的健康发展。 生物无抗生素饲料可从仔猪营养方面着手，通过添加柠檬酸、酶制剂、益生素、氧化锌、纳米蒙脱石等措施控制仔猪腹泻。 乳酸杆菌 乳酸菌在动物体内能发挥许多的生理功能。大量研究资料表明，乳酸菌能促进动物生长，调节胃畅道正常菌群、维持微生态平衡，从而改善胃肠道功能；提高食物消化率和生物效价；降低血清胆固醇，控制内毒素；抑制肠道内腐败菌生长：提高机体免疫力等。 乳酸菌通过发酵产生的有机酸、特殊酶系、细菌表向成分等物质具有生理功能，可刺激组织发育，对机体的营养状态、生理功能、免疫反应和应激反应等产生作用。 1．提供营养物质，促进机体生长 乳酸菌如果能在体内正常发挥代谢活性，就能直接为宿主提供可利用的必需氨基酸和各种维生素（维生素B族和K等)，还可提高矿物元素的生物活性，进而达到为宿主提必需营养物质、增强动物的营养代谢、直接促其生长的作用。研究报道乳酸菌可以改良水质，提高斑节对虾的存活率、生长速率和健康状况。试验证明，小麦、稻米等谷物进行乳酸发酵后，营养价值大大提高。此外，乳酸菌产生的酸性代谢产物使肠道环境偏酸性，而一般消化酶的最适PH值为偏酸性(淀粉酶6.5、糖化酶4．4)，这样就有利于营养素的消化吸收。何机酸的产生还可
甜菜碱的营养作用和效果 甜菜碱(Betaine)是首先在欧洲被发现的，它主要存在于甜菜糖的糖蜜中，故而得名，但其功效直到二十世纪七十年代才渐被认识。甜菜碱普遍存在于动植物体内，是动物代谢的中间产物，在营养物质的代谢中起着十分重要的作用，近年来，欧美一些国家相继在畜禽生产和水产养殖中进行了大量的研究，证实了甜菜碱是动物机体内重要的甲基供体，参与氨基酸和脂肪的代谢，调节动物体内渗透压，具有促进生长、改善胴体组成、提高肉质、提高水产饵料的诱食性等功效。 随着甜菜碱化学合成方法的进一步成熟，生产成本不断降低，已广泛应用于畜禽配合饲料中，在水产饲料和观赏动物饲料中使用也已十分普遍，大量试验研究表明，甜菜碱是一种无毒、害、无污染的新型多功能添加剂。 一、甜菜碱的理化特性。 (一)、甜菜碱的化学结构 甜菜碱是—种季铵型生物碱，又名甘氨酸甜菜碱、三甲基甘氨酸等，化学名称为N-N-N-三甲基甘氨酸内盐，分子式C5H11NO2,分子量117.15，其化学结构与氨基酸、胆碱相似 (二)、甜菜碱的理化特性 纯品天然甜菜碱为微棕色流动性结晶粉末，能耐高温，熔点293℃；合成纯品甜菜碱则为白色或淡黄色结晶粉末，熔点301℃～305℃；有较强的吸水性，极易潮解，并释放出三甲胺；在水中极易溶解(160g／100g水)，易溶于甲醇，微溶于乙醇，在氯仿或乙醚中不溶。 (三)、甜菜碱的安全性 甜菜碱本身是动物体内的代谢中间产物，经大量实验证明，甜菜碱及其盐类无毒、无害、无污染，其小鼠半数致死量(LD50)在11，000m9／kg，对动物无致畸、致癌、致突变作用，是公认的安全物质。 二、甜菜碱的生产工艺 (一)、天然提取法 甜菜糖蜜是提取天然甜菜碱的主要原料，提取工艺主要有两种，一是离子交换法，此方法是将稀释的糖蜜流经强阳离子交换树脂柱和其它成份分离而留在柱内，后用稀氨水洗脱甜菜碱，洗脱液再流经强阴出了交换树脂，洗出液经蒸发、脱色、结晶、过滤制得甜菜碱；另一种普遍使用的方法是离子排斥法，此方法是将糖蜜导入填充有聚乙烯-二乙烯树脂的色谱分离柱(树脂交联二乙烯苯5.5％，柱温80℃左右，料液流速接近色谱系统临界速度)，用水洗脱色谱分离树时，盐、糖及甜菜碱依次排出得以分离，再将收集液经蒸发、浓缩、三段结晶、过滤制得纯度约98％的无水或一水甜菜碱。 (二)、化学合成法
枯草芽孢杆菌使用技术 制剂：1000亿活芽孢/克可湿性粉剂毒性：低毒级 枯草芽孢杆菌特点： 1、绿色环保――对人畜微毒、对环境无污染、对作物安全（本剂虽属细菌活体杀菌剂，但不会侵染作物引起病 害，亦不会对作物产生药害） 2、高效广谱――对水稻稻瘟病，西瓜、黄瓜、草莓、番茄等多种作物白粉病、灰霉病，马铃薯晚疫病，大豆、油菜菌核病，瓜类、谷物、三七等作物根腐病等多种真菌性病 害具有优良防效。 3、增产提质――枯草芽孢杆菌还能够分泌促进作物生长的活性物质，使植株叶片浓绿肥厚，提高作物免疫力，增产提质效果显著，发酵过程中产生多种氨基酸，对作物有生 长调节的作用。 枯草芽孢杆菌防治机理 １、竞争作用：通过生物间争夺氧气、营养物质及竞争
排它性，形成局部生物优势种群，防止其它菌侵入；同时争夺周围菌的营养，抑制病原菌生长―起到疫苗的作用。 ２、溶菌作用：枯草芽孢杆菌吸附于病原菌的菌丝上，随着菌丝生长而生长，从而消耗病原菌的营养，使病原菌菌丝发生断裂、解体、细胞质消解，使病原菌失去进一步侵染 能力―起到寄生作用。 3、生物拮抗作用：枯草芽孢杆菌生长过程中能产生细菌素（枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌素）、有机酸、天然脂肽类化合物等，对病原菌抑制其生长或溶解其细胞壁、使细胞穿孔、畸形，最终杀死病原菌，。 ４、杀灭作用诱导作物产生抗病性、促进作物生长，增产提质。据统计，使用枯草芽孢杆菌可有效增产 5.6-20.2%。 枯草芽孢杆菌使用方法 1、稻瘟病、纹枯病、稻曲病。施药方法：水稻孕穗破口期和齐穗期各施药一次。每亩用枯草芽孢杆菌10克均匀 喷雾，喷药药间隔7-12天，
2、枯草芽孢杆菌与咪鲜胺、三环唑、井冈霉素等混用，有明显的相互增效作用。在病害集中、急性暴发时，更能显 示出混用的效果。 枯草芽孢杆菌使用注意事项 1、本品用量少，为减少浪费，兑药时应用小容器将所需用量药剂充分溶解后再倒入喷雾器中，加水至喷雾器最佳 水平线进行喷雾； 2、早上10点前或下午4点后施药，避免阳光直射，杀死芽孢。尤其是4点后用药，夜间潮湿的环境更有利于芽孢 萌发。 3、不能与铜制剂、链霉素等杀菌剂及碱性农药混用； 4、病害初期或发病前施药效果最佳，施药时注意使药 液均匀喷至作物各部位。
一、名词解释 生物制品：是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防、治疗和诊断的药品。 GMP: 是英文Good Manufacturing Practice 的缩写，中文的意思是“良好作业规范”，或是“优良制造标准”，是一种特别注重在生产过程中实施对产品质量与卫生安全的自主性管理制度。 疫苗：一切通过注射或黏膜途径接种，可以诱导机体产生针对特定致病原的特异性抗体或细胞免疫，从而使机体获得保护或消灭该致病原能力的生物制品。 抗原：在机体内能刺激免疫系统发生免疫应答，并能诱导机体产生可与其起特异反应的抗体或效应细胞物质。 灭活疫苗：又称死疫苗，是指利用加热或甲醛等理化方法，将人工大量培养的完整的病原微生物杀死，使其丧失感染性和毒性而保持其免疫原性，并结合相应的佐剂而制成的疫苗。 减毒活疫苗：又称弱毒疫苗，是指将微生物的自然强毒株通过物理的、化学的和生物学的方法，连续传代，使其对原宿主丧失致病力或只引起亚临床感染，但仍保持良好的免疫原性、遗传特性，由此制备的疫苗称为减毒活疫苗。 类毒素：细菌外毒素经甲醛作用及加温处理后可以除去毒性而保留其免疫原性。亚单位疫苗：指提取或合成细菌、病毒外壳的特殊蛋白结构及抗原决定簇制成的疫苗。因不是完整病毒而是病毒的一部分物质，故称亚单位疫苗。 基因工程疫苗：也称遗传工程疫苗，是指使用重组DNA技术克隆并表达保护性抗原基因，利用表达的抗原产物或重组体本身制成的疫苗。 抗原提呈细胞：指在免疫应答过程中，能将抗原物质提呈给T细胞的一类辅佐细胞。 免疫佐剂：能非特异地通过物理或化学的方式与抗原结合而增强其特异免疫性的物质。 细菌类疫苗：用细菌、支原体、螺旋体或其衍生物制成，进入人体后使机体产生抵抗相应细菌能力的生物制品。 病毒类疫苗：用病毒、衣原体、立克次体或其衍生物制成，进入人体后使机体产生抵抗相应病毒能力的生物制品。 正常人免疫球蛋白：又称丙种球蛋白或多价免疫球蛋白，是采用低温乙醇蛋白分离法或经批准的其他蛋白质分离方法从健康人血浆中分离制得的免疫球蛋白浓缩剂。 特异性免疫球蛋白：是由对某些病原微生物具有高滴度抗体的血浆制备的特异的高效价免疫球蛋白。 细胞因子：是一组由机体的免疫细胞和非免疫细胞合成和分泌的小分子或中等分子量的可溶性蛋白质（多肽）与糖蛋白。 血液制品：由健康人血浆或特异免疫人血浆分离、提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分或血细胞组分制品，可用于疾病的诊断、治疗或被动免疫预防。基因治疗：通过基因转移技术将外源正常基因直接导入患者病变部位的靶细胞，通过控制目的基因的表达、抑制、校正、替代或补偿缺陷或异常基因，从而恢复受体细胞、组织器官的正常生理功能。 集落刺激因子（CSF)：能刺激多能造血干细胞和不同发育阶段的造血干细胞进行增殖分化, 并在半固体培养基中形成相应的集落的细胞因子。 干扰素（IFN）：机体在病毒感染时合成释放的，能干扰病毒DNA或RNA的复制，
枯草芽孢杆菌简介及应用 枯草芽孢杆菌简介 枯草芽孢杆菌（Bacillaceae）编号为Strain Number ACCC 11060，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭，需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚[1]。早在1835 年，Ehrenberg 所描述的“Vibrio subtilis”即是现在大家熟悉的“枯草芽孢杆菌”，它是由Cohn 于1872 年正式命名的，现作为芽孢杆菌科(Bacillaceae) 的模式菌株，芽孢杆菌是人类发现最早的细菌之一。 枯草芽孢杆菌应用 枯草杆菌(B acillus Subtilis) 是一种重要的α-淀粉酶生产菌。同时枯草芽孢杆菌作为一种安全、高效、多功能和极具开发潜力的微生物菌种已广泛应用于工业、农业、医药、卫生、食品、畜牧业、水产及科研诸领域。随着经济的发展、科研水平的提高，枯草芽孢杆菌与人们的日常生活将更为密切，它也必将作为一种十分重要的工业微生物菌种越来越引起人们的普遍关注和青睐。 ①枯草芽孢杆菌在工业酶生产中的应用 工业酶的生产是工业微生物发酵的重要组成部分。枯草芽孢杆菌是当今工业酶生应用最广泛的菌种之一，据不完全统计，枯草芽孢杆菌所产的酶占整个酶市场的50 %。由于其产酶量高、种类多、安全性好和环保等优点，在现代工业生产中被广泛用作生产菌种，其发酵生产的酶已在食品、饲料、洗涤、纺织、皮革、造纸和医药等领域均发挥着十分重要的作用。 ②枯草芽孢杆菌在生物防治领域中的应用 枯草芽孢杆菌作为植物病害生防细菌之一，具有较强的防病作用美国迄今已有4 株枯草芽孢杆菌生防菌株获得环保局商品化或有限商品化生产应用许可，如美国AgraQuest公司用枯草芽孢杆菌QST713 菌株开发出活菌制剂杀菌剂SerenadeTM，并于2000 年通过美国环保局(EPA) 的登记，用于防治多种作物的白粉病、霜露病、疫病、灰霉病等病害。我国利用枯草芽孢杆菌防治植物病害的应用研究也达到了世界先进水
甜菜碱对皮肤的作用 甜菜碱天然存在于很多植物中，例如菠菜、麦芽、蘑菇和水果等,也存在于部分动物体内,例如龙虾的螯、章鱼、鱿鱼以及水生甲壳类动物,甚至在人体肝脏中也含有此类物质。 甜菜碱在欧洲被发现，通常被人为是生命体新陈代谢的中间产物，甲基提供者参与合成蛋氨酸，同时又被称为三甲基甘氨酸，是一种天然的可食用的氨基酸，效果要优于市面上流行的氨基酸 医药级甜菜碱多用于化妆品医药，食品中。她是从甜菜根中的蜜糖中提取制得。是一种天然的氨基酸保湿剂。 甜菜碱是两性离子，具有盖度的生物兼容性，极易溶于水，性质稳定。 保湿作用： 在实验中，稀释的溶液中，一个水分子能暂时占据甜菜碱两性离子的中间，很容易的把自身携带的水分子释放到周边的液体中去，不同于保湿剂（甘油）一样固定水分子，甜菜碱是允许水分子完全被全活细胞利用吸收。水分子在甜菜碱附近停留的时间比其他保湿剂停留的时间短，所以说他是真正意义上的水分子携带者。 独特的保湿和保护细胞性能作用： 众所周知水是所有生物细胞的基本元素，所有细胞都含有85%~95%得水，水分可以依靠活跃的渗透质透过细胞进行渗透和扩散。 而甜菜碱就是一种最主要的有机渗透质，实验证明环境中演的含量越高同时干燥，生物细胞中甜菜碱的含量越高，用来平衡细胞体积和水分的平衡。 在外界高渗透压力如皮肤表层脱水和紫外线照射下，会引起皮肤细胞内渗透质的大量流失，从而造成细胞凋亡，而甜菜碱渗透质就能明显的抑制这一过程，在洗护用品中，就是因为这种有机渗透质，通过皮肤角质层渗透进来保护细胞的平衡，增加表层皮肤含水量的作用。 甜菜碱独特的保湿机理性能要优于其他的保湿剂透明质酸钠，氨基酸，甜菜碱在低浓度下依然可以达到持久保湿的效果。被称为“自来水”保湿（可以把皮肤深层的水分吸引到缺水的表层是的肌肤表层也含有充足的水分） 低刺激性和中和作用： 甜菜碱有抗过敏，降低皮肤刺激的作用，细化产品中添加了甜菜碱，可以明显降低表面活性剂对皮肤的刺激作用。 抗过敏和保湿作用： 在洗发水肿，添加甜菜碱可以明显降低表面活性成分对头皮的刺激作用，还可以改善洗发后头皮发痒和头发干枯的情况。由于优良的保湿报税效果，可以增加头发的保水性能，还可以赋予头发光泽，对于烫染的头发，可以保护不受外界因素的伤害。目前甜菜碱被用于洁面乳，沐浴露，等产品中特别适合用于婴幼儿的喜欢产品中。 中和酸碱度 甜菜碱在水溶液中呈弱酸性，在果酸护肤中可以显着地改善果酸护肤抗衰产品种果酸的PH 值过低对皮肤的刺激和减少过敏现象的发生 油包水乳化体系 一般的乳霜种会加入氯化钠和硫酸镁来改善产品的耐寒的稳定性，但是甜菜碱的水溶液凝固点要优于两者，完全可以替代，同时还可以改善乳霜涂抹后发干的缺点，富裕肌肤丝般感受。 目前来说甜菜碱适合婴幼儿洗护用品，对婴幼儿娇嫩肌肤具有很好的保湿补水效果，是天然的皮肤润肤剂，目前市场上有一些品牌的婴儿洗护用品中含有甜菜碱，像是国货中比较低调的伊儿咔婴儿洗护系列，面霜和洗发沐浴产品添加了甜菜碱成分。对于宝宝来说是最
枯草芽孢杆菌表达载体 产品信息和说明 2005年11月
目录 1.简介 (3) 2. pHT 载体 (3) 2.1. pHT01载体图谱 (4) 2.2. pHT43载体图谱 (5) 2.3. pHT01衍生物中标签的定位 (5) 3. 实验方案 (6) 4. 参考文献 (6) 5. 订单信息，运输和存储 (6) 本载体系统由德国拜罗伊特大学遗传研究所的沃尔夫冈·舒曼实验室 开发。 仅用于科研！ 本手册由wy135033405翻译百度文库首发任何意见请PM
枯草芽孢杆菌表达载体 通过质粒在枯草芽孢杆菌中高效表达胞内/胞外重组蛋白 1.简介 革兰氏阳性菌因其在农业，医疗和食品生物技术和重组蛋白生产等方面的贡献而广为人知。在所有革兰氏阳性菌中，枯草芽孢杆菌载体因下列原因尤为引人瞩目。（一）无致病性，且一般认为安全的有机体；（二）无明显的密码子偏好性；（三）可直接将功能性胞外蛋白分泌到培养基中（目前，大约60％的市售酶由芽孢杆菌生产）；（四）具备包含转录，翻译，蛋白质折叠、分泌机制，遗传操作和大规模发酵的大信息量机体。 但是下述两个障碍减少了枯草芽孢杆菌的使用：（一）产生一定数目的识别并降解外源蛋白的胞外蛋白酶；（二）载体质粒稳定性。第一个障碍已因蛋白酶缺失株的构建而基本解决。第二个因引入使用θ-复制模式质粒被完全克服，如由天然质粒pAMβ1和pBS72衍生的一些质粒（Jannière等，1990；Titok等，2003）。 最近，基于大肠杆菌 - 枯草杆菌穿梭质粒pMTLBS72的四种不同表达载体的构建和使用展示出全面的结构稳定性，业已出版（Nguyen等，2005）。 两个新的载体pHT01和pHT43允许在细胞质中高水平表达重组蛋白，其中pHT43载体引导重组蛋白到培养基。这两个载体基于强σA-依赖性启动子的枯草杆菌gro E操纵子通过添加lac操纵子改造成为一种高效可控的（IPTG诱导的）启动子。pHT01衍生载体可与8×His 标签（pHT08），链球菌标签（pHT9）或C - Myc的标签（pHT10）相结合。 2. pHT 载体 所有在枯草芽孢杆菌的gro ESL操纵子之前使强启动子与lac操纵子融合的载体都可通过加入IPTG进行诱导。尽管当未添加诱导物时表达组件的背景表达水平很低，还是成功从约1300种诱导因子中筛选出一种来使用bga B报道基因（Phan等，2005）。当分别将htp G 和pbp E基因融合到gro E启动子时，加入IPTG后，表达的重组蛋白可能分别占细胞总蛋白的10%和13%（Phan等，2005）。热纤梭菌的amyQα-淀粉酶和纤维素酶A、B的高水平表达实验证实。该载体还插入了一个高效SD序列以及一个多克隆位点（BamH I, Xba I, Aat II, Sma I）。编码α-淀粉酶的amyQ基因的信号肽编码区域与pHT01的SD序列融合，构成了pHT43，以此获得分泌的重组蛋白。
解淀粉芽孢杆菌 【作用机理】 解淀粉芽孢杆菌的作用机理主要包括分泌抗菌物质，产生拮抗作用，营养与空间的竞争，诱导寄主产生抗性和促进植物生长等。 1、分泌抗菌物质：产生低分子量抗生素以及抗菌蛋白或多肽等活性物质，抑制植物病原菌，并且可作为根围细菌促进植物生长。通过非核糖体途径合成分子量小热稳定性好、含有D-氨基酸、耐受蛋白酶水解以及有机溶剂作用的脂肽类抗生素，在生物防治应用中对植物病原细菌、真菌、病毒、线虫的抑制起到主要作用。 2、拮抗作用：微生物通过同化作用产生抗菌物质抑制有害病原物的生长或发展或直接杀灭病原物。与病原菌直接作用。除了产生抗菌素等次级代谢产物外，还会产生一系列对病原菌抑制起到重要作用的胞外水解酶。 3、营养和空间的竞争：可以迅速地抢占果蔬伤口的营养空间生长存活并大量繁殖，并尽可能快地消耗掉伤口营养，使得病原菌得不到合适的营养与空间条件而不能繁殖从而抑制病害的发生。 4、诱导寄主产生抗性：植物组织在遭受机械损伤或者病原菌浸染时，体内会自发产生一系列生理生化反应来抵抗这些因素对自身的伤害。解淀粉芽孢杆菌可以诱导植物这种自然防御机能。 5、促进植物生长：解淀粉芽孢杆菌可以产生赤霉素、吲哚乙酸、细胞分裂素等多种生理活性物质和氨基酸类物质，促进植物根系及植株生长，增强植物抗病性，从而间接地减少病害发生。 【主要功效】 1、抗病抑菌广谱高效：经试验证明，本品对番茄叶霉病菌、早疫病菌、灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌、炭疽病菌、甜瓜枯萎病菌、辣椒晚疫病菌、小麦、水稻纹枯病菌、玉米小斑病菌、大豆根腐病菌等土传病害具有显着防效。 2、抗逆防衰促进生长：解淀粉芽孢杆菌能诱导作物产生超氧化物歧化酶（SOD），加多酚氧化酶（PPO），过氧化物酶（POD）等，提高作物抗逆性；能诱导植物快速分泌内源生长素，促进作物快速生根，提高根系发育能力，促进植物健壮生长。 3、改良土壤增进肥力：解淀粉芽孢杆菌可改善作物根际微生态，活化土壤中难溶的磷、钾等潜在养分，改良土壤，疏松板结，遏制土壤退化，提高土壤肥力。 4、降低农残优质增产：解淀粉芽孢杆菌可降解土壤及果实中的残留农药，减少亚硝酸盐含量，提高果蔬维生素和糖含量，改善农产品品质，提高作物产量，易贮藏运输。提高并延长肥效、减少化学肥料的用量。
目录 第一章芽孢杆菌的简要介绍 (1) 第一节芽孢杆菌种类 (1) 第二节芽孢杆菌表达系统发展简史 (2) 第二章枯草芽孢杆菌的转化系统 (3) 第一种方法：电转化 (3) 第二种方法：Spizizen转化 (3) 第三种方法：原生质体法(Takashi) (4) 第四种方法：原生质体转化之二 (4) 第五种转化方法：质粒混合法（BGSC推荐） (5) 第三章芽孢杆菌表达系统发展简史 (6) 第一节芽孢杆菌表达系统的优点（相对于大肠杆菌） (7) 第二节芽孢杆菌的缺点 (7) 第三节助表达系统 (7) 第四节芽孢杆菌基因表达的主要特点 (7) 第四章枯草芽孢杆菌转录翻译系统 (8) 第一节：转录系统 (9) 第二节：翻译系统 (9) 第五章芽孢杆菌常用的宿主和载体 (10) 第六章芽孢杆菌表达系统应用实例 (11) 1 中国 (11) 2 日本 (12) 3 加拿大 (12) 第七章芽孢杆菌其他产品 (13) 第一节核苷类产品 (13) 第二节核黄素 (13) 第三节微生物制剂/益生菌 (13) 第八章结语 (14) 附录一. 芽孢杆菌的相关经典文章 (14) 附录二. 枯草芽孢杆菌相关数据库 (15) 致谢及参考文献 (15)
第一章芽孢杆菌的简要介绍 芽孢杆菌作为一个属，于1872年被首次提出，至今已有一百多年。目前人们对芽孢杆菌的研究几乎涉及到了革兰氏阳性可生孢细菌的各个领域。尤其是在感受态、芽孢形成及其调控、遗传操作、菌种改良、生物技术等领域进行了大量的工作。芽孢杆菌是一个泛泛的概念，而科学研究中应用最多的当属枯草芽孢杆菌，例如168菌株及其大量的衍生菌株。枯草杆菌的研究之所以领先于其他芽孢杆菌的种，主要是由于他的转化、转导方法较完善，以及大量的衍生菌株。 目前应用最多的芽孢杆菌属菌种有枯草芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌和耐碱的芽孢杆菌以及病原菌炭疽芽孢杆菌等12种。 第一节芽孢杆菌种类 目前，芽孢杆菌属很多菌株的全基因组序列已经报道，截至2011年10月，在KEGG 上公布全基因组序列的芽孢杆菌属菌种有： 简称菌种名称测序时间测序链接 bsu Bacillus subtilis1997RefSeq bss Bacillus subtilis subsp. spizizenii W232010RefSeq bst Bacillus subtilis subsp. spizizenii TU-B-102011 RefSeq bsn Bacillus subtilis BSn52011RefSeq bha Bacillus halodurans2000RefSeq ban Bacillus anthracis Ames2003RefSeq bar Bacillus anthracis Ames 05812004RefSeq bat Bacillus anthracis Sterne2004 RefSeq bah Bacillus anthracis CDC 6842009 RefSeq bai Bacillus anthracis A02482009 RefSeq bal Bacillus cereus biovar anthracis CI2010RefSeq bce Bacillus cereus ATCC 145792003RefSeq bca Bacillus cereus ATCC 109872004RefSeq bcz Bacillus cereus ZK2004RefSeq bcr Bacillus cereus AH1872008 RefSeq bcb Bacillus cereus B42642008 RefSeq bcu Bacillus cereus AH8202009 RefSeq bcg Bacillus cereus G9******* RefSeq bcq Bacillus cereus Q12009RefSeq
微生物益生菌的作用机理 益生菌素的定义： 益生菌素是能够用来促进生物体微生态平衡的有益微生物或其发酵产物。（也称促生素、生菌剂、微生物制剂、活菌制剂等） 一. 益生菌对病原菌的拮抗效应 1. 通过改变肠道环境抑制有害菌生长很多有益菌，通过产生有机酸来提高肠道酸度。 于乳酸菌较致病菌（如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等）更耐受酸性条件，可以在较低pH值下生存，而致病菌则受到抑制。同时还有益生菌具有很强的耗氧能力，可使肠道内形成相对的氧化环境，从而抑制了具有好氧特性的病原菌的生长。 2. 通过产生某种抗菌物质抑制有害菌生长有益菌除产生有机酸外，还可产生醇、过氧 化氢、丁二酮等，还可合成溶菌酶以及其它抗菌物质，如乳酸菌素、乳链菌素、嗜酸菌素等。这些产物对肠道病原菌都具有抑制作用。 3. 在肠道内与有害菌竞争营养素肠道内虽然富含营养素，很难对微生物菌系产生影响 。但如果某种营养素能够成为限制因素时，营养素的竞争机制就会充分发挥作用。 4. 通过占据肠道位置阻止病原菌附着沙门氏菌粘附于肠膜或滞留在盲肠内，是病原微 生物存在于寄主消化道，产生临床症状的前提条件。试验表明，当给猪饲喂乳酸菌时，其肠道内乳酸杆菌的数量多于腹泻猪或未饲喂含乳酸菌饲料的猪，而大肠杆菌的数量则减少，可避免仔猪的红痢、白痢、黄痢疾发生。同样，给雏鸡喂养服用，可健康鸡的肠道微生物，可抵制饲料中污染的有害菌的影响，各种疾病显著低于未饲喂益生菌的鸡，并可以建立起良好的微生物菌系。这是因为体内微生物与病原微生物之间存在竞争附着小肠上皮位点的作用，即竞争性排斥作用。如果这些位点被较多的良性菌株占据，病原微生物会被排斥。 二. 营养素的提供 益生菌素可为动物机体提供多种对其生长发育有益的物质，如维生素（尤其是B 族维生素）、氨基酸、核酸、多种酶类，以及其它促生长物质。幼畜禽消化道的各种消化酶类通常是比较缺乏的，益生菌为其所提供的各种消化酶可起到帮助消化、促进生长的作用；这些酶可将碳水化合物和脂肪分解为糖和氨基酸等可利用的成分，促进能量的供应；益生菌所提供的纤维素酶等还可帮助饲料中纤维素等不易消化的成分分解，以利于消化和吸收；酶还可降低食糜的粘稠度，有利于动物对能量和蛋的吸收；益生菌素中的细菌聚磷酸盐还参与糖向细胞内的转运，执行己糖激酶的功能。 益生菌素除可直接为机体提供多种营养素以外，还可通过多种途径提高机体对养分的利用率。例：产酸菌对肠道环境的酸化作用等。因为机体对养分的消化过程依赖于此过程中的PH值和理想的温度。各种消化酶都有其发挥活性的最适PH值和温度。淀粉酶的最适PH值为6.5，糖化酶的最适PH值为4.4。因此某些益生菌素对肠道的酸化作用有助于动物对养分的消化吸收。另外，有机酸还可加强肠的蠕动和分泌，从而促进饲料的消化，提高钙和镁等重要元素的吸收。 三. 剌激机体的免疫功能 对初生的（乳）猪、鸡来说，都存在着自身免疫力下降，主动免疫逐渐建立的时期，益生菌素类的产品可刺激动物主动免疫系统的较早建立，增加其防病抗病能力。因为动物体内正常的微生物菌系对机体的免疫系统具有重要的刺激作用，含有活性微生物的益生菌素的使用可刺激动物肠道管免疫系统细胞，提高局部免疫机能和抗病能力。另外，作为发酵饲料的含益生菌素，其剂量的持续刺激可使动物机体的一般
蛋白分泌表达,枯草芽 孢杆菌来表达 Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】
枯草芽孢杆菌，学名Bacillus subtilis，是一种被广泛应用于工业生产的革兰氏阳性细菌。与大肠杆菌不同，枯草芽孢杆菌没有外层膜，分泌的蛋白能直接释放到培养基中，是一种理想的原核蛋白分泌表达菌株。那么作为一种潜能巨大的原核表达系统，它究竟强在哪些方面呢？且让AtaGenix为您一一道来。 枯草芽孢杆菌的安全性是食品级的，收录于FDA的GRAS菌中，欧洲食品安全局认为枯草芽孢杆菌可用于食品发酵。很多常用食品工艺中都能见到它的身影。与大肠杆菌相比，枯草芽孢杆菌的细胞壁组成简单，只含肽聚糖和磷壁酸，在分泌的蛋白质产品中不会混杂有类似革兰氏阴性菌细胞壁成分中的热源性脂多糖（内毒素）等物质。该表达系统用于药用蛋白的表达纯化时还可省掉去除内毒素这一步。 同为原核生物界的明星，虽然大肠杆菌和枯草芽孢杆菌都只需短时间就可表达和积累大量目标蛋白。但大肠杆菌在后续发酵工艺中需要对收集的菌体进行破胞处理，而枯草芽孢杆菌得益于其本身所拥有的一套高效分泌信号肽及分子伴侣系统，只要简单处理发酵上清就能得到较纯的蛋白，并且表达的蛋白在多数情况下具有天然构象和生物活性。 蛋白质组学研究表明，枯草芽孢杆菌中至少有四种蛋白质分泌途径，其中Sec 分泌途径是主要分泌途径。另外枯草芽孢杆菌拥有良好的发酵生产技术，目前大部分商业化的蛋白水解酶和淀粉酶都是由其发酵得到的。AtaGenix拥有的 5 L、20 L、150 L及其他型号的发酵罐（上图就是真相），可满足各种大规模发酵的需求。 虽然枯草芽孢杆菌表达外源蛋白潜力无限，但也有其短板，如自身胞外蛋白酶对表达产物的降解、遗传操作相对困难、外源蛋白有时得不到有效的表达等等。但AtaGenix却能成功避免以上问题使外源目标蛋白在枯草芽孢杆菌表达系统中有效表达，这主要得益于以 下三个方面的优势： ①丰富的表达宿主 由于枯草芽孢杆菌没有明显的密码子偏爱性，表达外源蛋白时无需对DNA序列进行优化。在不同宿主中表达时，蛋白表达情况可能有差异。在AtaGenix拥有的多种枯草芽孢杆菌表达宿主中，1012 wild type宿主菌是最常用到的，可作为胞内和胞外表达的通用菌；168 Marburg遗传背景清楚，是研究枯草芽孢杆菌的标准菌株；AS1作为胞内表达的备用菌株，常用于表达外源蛋白。而胞外蛋白酶缺陷菌株WB800N能有效解决由于枯草芽孢杆菌丰 富的蛋白酶导致的蛋白表达产物降解问题。 ②给力的表达载体 大部分的枯草芽孢杆菌不含内源性质粒，并且一般不能识别大肠杆菌中的启动子。最初的枯草芽孢杆菌载体源于金黄色葡萄球菌，其结构不稳定并易丢失。现在普遍使用的质
发酵床中常用菌种，目前可以查找到得菌种配方如下： 1.枯草芽孢杆菌菌种50-70％、酿酒酵母菌菌种30-50％。 2.由酵母菌、乳酸菌、放线菌、光合细菌和丝状真菌按比例组合制成发酵剂 3.取枯草芽孢杆菌粉末2-4份，植物乳杆菌粉末3-5份，产朊假丝酵母粉末3-5份，白地霉粉末2-4份，米曲霉菌粉末3-5份，充分混匀 4.乳酸菌、芽孢杆菌、光合细菌、酵母菌、放线菌 5.乳酸菌、枯草芽孢杆菌、粪链球菌、纤维素分解菌 发酵床中益生菌的主要作用： 禽类的消化道较短，粪便中约有70%左右的有机物没有被分解，水度大，有机养分高，易变质发臭。益生菌可以将粪便分解成为菌体蛋白，禽类甚至可以采食这些菌体蛋白补充营养，还能提高免疫力。同时，禽类在使用这些菌体蛋白或粪便中未分解的饲料的过程中，垫料中的大量益生菌随之进入禽类的消化道中，这些有益菌中的一些纤维素酶、半纤维素酶类能够分解饲料中的纤维素、半纤维素等。接入菌剂能加快堆肥的升温速度，提高最高温度，加速堆肥中C的下降，促进粪便中生物毒性物质的分解，且可能有利于粪便堆肥中养分的保存与矿化。 发酵床中的益生菌可降低垫料环境的PH值，对粪便降解过程中产生的NH 3，还可加速粪便中的碳氮代谢 。由于禽只的粪便得到及时分解，加上垫料的吸附作用，禽舍内无粪便污染，也没有氨味的刺激，禽只呼吸道疾病发病率自然而然的降低；消化道环境的改善则直接减少了禽只消化道疾病发病率。 各种益生菌可以明显的增加垫料的酶活性，包括：过氧化氢酶、脲酶、纤维素酶、蛋白酶。 益生菌如乳酸菌会产生生物抗菌素如乳酸链球菌素、过氧化氢、嗜酸菌素等，再加上发酵床高温环境会使有害菌大量死亡或者全部死亡。
枯草芽孢杆菌研究概况 国内外关于枯草芽孢杆菌的研究与应用已有100多年的历史，早期大部分工作集中在形态观察、分类鉴定、生理机制、功能发掘及防治等方面。近年来，对枯草芽孢杆菌的研究渐进到遗传学与分子生物学领域，研究内容体现在特定功能基因的寻找并克隆到需要的物种中或者通过诱变、基因工程等手段对枯草芽孢杆菌生产菌进行遗传改造等。 2.1国外研究概况 1945年Johnson等报道，枯草芽孢杆菌具有防治植物病害的作用。此后，用枯草芽孢杆菌制备生防制剂防治植物病害的研究成为国内外研究的热点。1980年Papavizas G C报道，枯草芽孢杆菌可以防治水稻等作物的多种土传真菌病害。1992年Hwang等报道，用枯草芽孢杆菌可以防治豌豆的Rhizoctoni根腐病。20世纪90年代后，国外已有多种枯草芽孢杆菌制剂投放市场。美国Agraquest公司用枯草芽孢杆菌(B.subtilis)QST 713菌株和QST 2808菌株分别开发出活菌杀菌剂Serenade TM和Souata AS，已在美国登记使用，叶面施用可防治蔬菜、樱桃、葡萄、葫芦和胡桃的白粉病、霜霉病、疫病、灰霉病等细菌和真菌病害。GBO3(商品名为Kodiak)和MBI 600(商品名为Subtilex)分别由美国Gustafson公司和Microbio Ltd公司开发，根部施用或拌种可防治镰刀菌(Fusarium spp.)、曲霉属(Aspergillus spp.)、链格孢属(Alternaria spp.)和丝核菌属(Rhizoctonia spp.)引起的豆类、麦类、棉花和花生根部病害。2001年Gustafson将解淀粉枯草芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合制成混合生防药剂，称为BioYield。解淀粉枯草芽孢杆菌变种(B.subtilis var.amyloliquefaciens FZB24)作为植物促长剂被Taensa公司商品化生产，商品名Taegro TM。施用于温室或室内栽培树苗、灌木和装饰植物根部，可防治由镰刀菌和丝核菌引起的根腐病和枯萎病。俄罗斯全俄植保所开发了枯草芽孢杆菌可湿性粉剂Alifine-B，可用于防治多种作物真菌(Fusarium，Rhizoctonia，Ascohyta，Colletotrichum，Sclerotinia，Botrytis，etc)病害，田间防效高达60％~95％，增产达25％~35％；另一枯草芽孢杆菌产品Gamair由活菌和代谢物组成，主要防治由Clavibacter michiganense subsp.Michiganense，Erwinia caratovota
地衣芽孢杆菌的作用机理及应用 一、形态特征 地衣芽孢杆菌(Bacillus Subtilis) 是芽孢杆菌属的一种，细胞大小0.8卩1.5?3.5)卩m，细胞形态和排列呈杆状、单生，细胞内无聚-伊羟基丁酸盐颗粒，革兰氏阳性杆菌。菌落为扁平、边缘不整齐、白色。为兼性厌氧菌。 二、作用机理 1 、生物夺氧 枯草芽孢杆菌为需氧菌，在生长过程中需要大量的氧气，进入动物肠道内，消耗大量的游离氧，降低肠道内氧浓度和氧化还原电势，改善了乳酸杆菌、双歧杆菌等厌氧菌的生长环境，保持肠道微生态系统的稳衡，提高动物机体抗病能力，减少胃肠道疾病发生几率。 2、拮抗致病微生物，改善体内外生态环境动物饲喂芽孢杆菌 后，能显著降低肠道大肠杆菌、产气 荚膜梭菌、沙门氏菌的数量，使机体内的有益菌增加而潜在的致病菌减少，因而排泄物、分泌物中的有益菌数量增多，致病性微生物减少，从而净化体内外环境，减少疾病的发生 3、增强动物体的免疫功能枯草芽孢杆菌能促进动物肠道相关 淋巴组织处于高度 的“免疫准备状态”，同时使免疫器官发育加快，免疫系统成熟快
而早，T、 B 淋巴细胞数量增多，动物体液和细胞免疫水平提高。 4、产生营养物质枯草芽孢杆菌在动物肠道内生长繁殖，能产生多种营养物质如维生素、氨基酸、有机酸、促生长因子等，参与动物机体新陈代谢。 5、产生多种消化酶枯草芽孢杆菌能提高动物生产性能是其产生多种消化酶的一个重要体现。研究表明，枯草芽孢杆菌能产生多种消化酶，帮助动物对营养物质的消化吸收。芽孢杆菌具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同时还具有降解饲料中复杂碳水化合物的酶，如果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等，这些酶能够破坏植物饲料细胞的细胞壁，促使细胞的营养物质释放出来,并能消除饲料中的抗营养物质。 三、产品功效 1、环境污水处理、废物处理、景观水处理强效去除DOD 、COD 及TSS ，消除硫化氢、氨氮等臭味及气泡，降解有机质。 2 、生态畜牧业 A、畜牧、家禽、特种动物及宠物养殖消除动物废料臭味，分解动物舍内的残渣，降解粪浆，消除臭味*本品能有效降解高分子物质为低分子物质，促进营养成分的吸收，提高饲料的利用率，同时还能抑制病害微生物的生长，提高动物的免疫力，增强动物的抗病能力，减少疾病的发生，提高成活率。 B 、水产养殖净化水质，有效降解水中有机质，改善水色，
肉毒梭状芽孢杆菌 （一）、肉毒梭菌的生物学特性 肉毒梭状芽孢杆菌(Clostridium botulinum)又称肉毒梭菌，属于厌氧性的梭状芽孢杆菌属，革兰氏染色阳性，杆菌。形成芽孢，由于芽孢比营养体宽，故呈梭状。无荚膜，但有鞭毛。 肉毒梭菌生长最适温度为25～35℃。当pH低于4.5或大于9.0时，或环境温度低于15℃或高于55℃时，肉毒梭菌芽胞不能繁殖，也不产生毒素。各型肉毒梭菌芽胞对热抵抗力有一定差异，但一般而言，对热抵抗力较强，干热180℃5～15分钟，或湿热100℃3小时，或高压蒸汽121℃10分钟才能将其杀死。肉毒梭菌是引起食物中毒病原菌中热抵抗力最强的菌种之一，所以罐头杀菌效果如何，一般以该菌作为指示细菌。在厌氧条件下，含水分较多的中性或弱碱性食品适于肉毒梭菌生长和产生毒素。反之，食物的性质偏酸，水分含量少或食盐浓度在8%以上，可抑制该菌的生长和毒素的形成。 根据所产生毒素的抗原性不同，将肉毒毒素分为A、B、C 、D、E、F、G型，引起人类中毒的有A、B、E、F型，其中A、B型最为常见。 （二）、食品中肉毒梭菌的来源 肉毒梭状芽孢杆菌是一种腐物寄生菌。在自然界广泛分布于土壤、江河湖海淤泥沉积物、尘土及动物粪便中。粮谷、豆类等食品受其污染的机会很多。A型菌多分布于山区和未开垦的荒地；B型多分布于草原区耕地；E型多分布于土壤、湖海淤泥和鱼类肠道中；F型
分布于欧、亚、美洲海洋沿岸及鱼体。 我国肉毒中毒多发地区新疆土壤中该菌检出率为22.2%，未垦荒地该菌检出率为28.5%，该地区粮谷、豆类及其发酵制品并有厌气条件者该菌检出率分别为12.6%和14.88%。该地区菌型分布以A型占多数，B型及A、B混合型次之，E型较少。 我国发生的肉毒梭菌食物中毒，91.48%由植物性食品所引起，8.52%由动物性食品所引起。引起中毒的食品以家庭自制的豆酱、臭豆腐为最多，其次为面酱和豆鼓等。此外，肉类罐头、腊肉、熟肉等也可引起中毒。 食物中肉毒梭菌主要来源于带菌土壤、尘埃及粪便。尤其是带菌土壤可污染各类食品原料。受肉毒梭菌芽胞污染的食品原料在家庭自制发酵食品、罐头食品或其它加工食品时，加热的温度及压力均不能杀死肉毒梭菌的芽胞。此外，食品在较高温度、密闭环境(厌氧条件)中发酵或装罐，提供了肉毒梭菌芽胞成为繁殖体并产生毒素的条件。食品制成后，一般不经加热而食用，其毒素随食物进入人体，引起中毒的发生。 肉毒梭菌食物中毒一年四季均可发生，但大部分发生在3～5月，其次为1～2月。自1896年Van Ermengein首次报道荷兰因火腿引起肉毒中毒暴发，并分离出肉毒梭菌以来，世界各地陆续报告本病。我国吴朝仁等1958年报道新疆察布查尔县由于食用面酱半成品(米送乎乎)引起肉毒毒素中毒之后，相继报告该地区由臭豆腐及其它发酵食品等引起的肉毒中毒事件。