牛初乳蛋白粉 主要作用： 1.增强抵抗力和免疫力，预防感冒 2.促进生长发育和脑部发育 3.消除疲劳，延缓衰老 4.增强体质，提高运动性能 5.病后和术后恢复 6.调节肠道菌群适用人群： 1.体质差，易感冒，呼吸道感染，非母乳喂养儿童 2.婴幼儿及断奶后儿童，厌食、生长发育迟缓儿童 3.手术前后及烧伤病人 4.病毒感染，胃肠道功能差，久病体弱者 5.孕产妇、中老年，常患腹泻者 规格及价格：400g/罐，100元
牛初乳咀嚼片 主要作用： 1.含丰富免疫球蛋白，提高抵抗力，防止病毒入侵 2.富含多种生长因子，帮助人体骨骼、肌肉、神经、软骨关节的生长和再生，促进儿童生长发育 3.提高肠道对病毒的免疫活性，改善肠胃功能 适用人群： 1.体质差，容易感冒，免疫力低下者 2.肠胃功能差，反复腹泻儿童 3.生长发育迟缓儿童 规格及价格：100粒/瓶，45元
螺旋藻片 主要作用： 1.增强细胞免疫功能，延缓细胞衰老，抗疲劳，耐缺氧，抗辐射 2.对胃酸中和及胃肠道粘膜修复、再生和正常分泌功能极为有效 3.螺旋藻含极为丰富的铁质和叶绿素，改善贫血效果显著 4.螺旋藻能为肝病患者提供高蛋白质和高纤维素，使病人得到改善和好转 5.螺旋藻能调整新陈代谢，对减肥者有帮助适用人群： 1.贫血、肝炎、糖尿病、胃及十二指肠溃炎、视力减退人群 2.细胞免疫功能低下调节生理功能 3.蔬菜摄入少，营养不良的人群 规格及价格：1000片/瓶，50元
铁质叶酸片 主要作用： 1.制造血红素和肌红素的主要物质 2.刺激血红蛋白、肌红蛋白的合成，预防和治疗因缺铁而引起的贫血 3.促进药物在肝脏的分解，增强解毒能力 4.舌炎、舌疮 5.胃肠功能紊乱、虚弱无力 6.失眠、躁动不安、健忘、迷糊 适用人群：女性，尤其是贫血、怕冷、手脚冰冷者。偏食、易疲劳、头晕头痛。注意力不集中，学习力、记忆力衰退者。较少食用动物肝脏及绿色蔬菜，伤口不易愈合、手指甲易断裂者。 规格及价格：60片/瓶，30元
一、抗体纯化部分 1、腹水/血清的亚型测定完成后，IgG亚型的腹水/血清使用Protein G 抗体纯化柱纯化；IgM 亚型的腹水/血清则使用饱和硫酸铵沉淀法沉淀。 1.1 Protein G 抗体纯化步骤： （1）新柱子先用DDW 5ml过柱； （2）10倍柱体积的Binding Buffer (pH 7.0) 平衡纯化小柱； （3）抗体过柱，过程中要求缓慢过柱，以求抗体蛋白更好的结合在结合位点上； （4）继续10倍柱体积的Binding Buffer (pH 7.0) 平衡纯化小柱； （5）5倍柱体积甘氨酸-盐酸缓冲液（pH 2.7）洗脱结合位点上的抗体，并加入Tris-HCI(pH 9.0)中和甘氨酸，使pH保持为适合抗体保存的中性； （6）10倍柱体积的Binding Buffer (pH 7.0) 平衡纯化小柱； （7）5倍柱体积20%乙醇溶液过柱，于4℃条件下保存纯化小柱； （8）将洗脱的抗体用聚乙二醇浓缩并透析，以彻底去除不相干离子。 其中所用试剂配方： DDW：超纯水 Binding Buffer（100ml）：A液，0.2M磷酸氢二钠61ml B液，0.2M磷酸二氢钠39ml 磷酸氢二钠4.37g 磷酸二氢钠1.22g 甘氨酸-盐酸缓冲液：0.1M甘氨酸溶液加浓盐酸调pH 2.7 Tris-HCL缓冲液：1M Tris溶液加浓盐酸调pH 9.0 1.2 饱和硫酸铵沉淀法步骤： （1）配制饱和硫酸铵溶液，再用氨水调节pH至8.5 （2）沉淀：a、腹水/血清离心去除细胞碎片，保留上清液并测定体积； b、边搅拌边逐滴滴入等体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀使蛋白充分沉淀； c、上述蛋白质溶液经过离心弃上清取沉淀，并用PBS溶液（pH 7.0）溶解； d、继续向上一步蛋白溶液中滴入1/2体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀使蛋 白充分沉淀； e、继续离心沉淀弃上清去沉淀，用PBS溶液（pH 7.0）溶解； （3）透析：每隔3-6小时换一次透析液，以彻底去除硫酸铵。 其中所用试剂配方： PBS缓冲液（1L pH 7.0）：氯化钾0.2g 磷酸二氢钾0.2g 磷酸氢二钠3.35g 氯化钠8g
乳铁蛋白与牛初乳 乳铁蛋白极其广阔的市场前景，吸引了多家国际原料供应商投入巨资进行大规模的商业化生产，而这其中 一、安全保障： 1、做得最好的是荷兰的DMV公司，为全球最大的乳铁蛋白供应商，欧洲绝大部 分奶粉所采用的乳铁蛋白即由其供应。 2、其所生产的乳铁蛋白纯度高达95%，是目前全球唯一一个通过美国FDA的GRAS 认证的乳铁蛋白原料，具有极高的安全性。 3、因此荷兰DMV是美国FDA大量乳铁蛋白临床试验的乳铁蛋白原料供应商。 4、我国的江苏四环生物股份有限公司与荷兰DMV合作推出了全国首款且唯一具 有国家食品药品监督管理局保健食品认证的乳铁蛋白产品 5、2011年6月1日卫生部颁布新的食品安全法规，将乳铁蛋白从食品添加剂升为营养 强化剂，强化婴幼儿营养。 6、上市制药企业生产，质量保证 四环医药： 江苏四环生物股份有限公司，是在深圳证券交易所上市的大型制药企业，注册资本10个亿，股票代码000518. 7、国家认证证书
三、保健功能（功能性）： ◆抗微生物/抗病毒活性；◆参与铁的代谢；◆消炎作用；◆抗氧化功能 1、抗微生物活性 有报道表明乳铁蛋白可以抑制多种细菌、真菌、寄生虫和病毒生长发育，具有较广谱的抗病毒性能，包括脊髓灰质炎病毒，单纯疱疹病毒，丙型肝炎病毒，艾滋病毒，人巨细胞病毒，流感病毒，呼吸道合胞病毒，轮状病毒及猫杯状病毒。 发生的机理有几种。乳铁蛋白具有结合铁离子的能力，而铁离子为许多微生物生长所必需，这样，乳铁蛋白可以通过结合铁离子使其周围的铁离子浓度大大降低，从而抑制了微生物的生长。 不仅如此，乳铁蛋白还可以形成抗微生物的肽，这些肽能破坏或者穿过细菌。Saito等人研究发现，牛乳铁蛋白在酸性条件下加热产生的水解物（肽）具有抗菌活性，这一活性的最佳水解度约为10%（pH2.0，在120℃加热15分钟水解）。与原乳铁蛋白相比，这些水解物没有结合铁的能力，且在富含铁的基质中也能很好地保持活性，其抗菌活性与铁的螯合无关，因此其抗菌机理不同于乳铁蛋白。进一步的假设机理则是其本身结合到细菌的细胞膜上，改变细胞的渗透性，导致细菌死亡。 可能是由于乳铁蛋白能阻止病毒与宿主细胞的结合，乳铁蛋白表现出在体外实验条件下降低各种病毒的活性。要深入了解乳铁蛋白在阻止病毒感染中的作用还需要在人体内作进一步的研究。 参与铁的代谢 乳铁蛋白与转铁蛋白（人体中主要的铁传递蛋白）相似性暗示其可能在正常的铁代谢途径中起重要作用。近期的研究结果却显示事实并非如此。乳铁蛋白可能在感染和发炎时在人体的铁代谢中起重要作用。 2、消炎功能 如今，乳铁蛋白可直接影响发炎反应的猜想已获证实。乳铁蛋白具有结合LPS（脂多糖）的能力。LPS是一种细菌内毒素，是细菌感染引起发炎时重要的介质。乳铁蛋白与LPS的结合将阻止LPS与其受体结合，从而减少发炎细胞因子。乳铁蛋白另外一个抗发炎效应是通过与发炎部位的铁结合从而阻止有害自由基的产生。 3、抗氧化功能 由于具有结合铁离子的能力，乳铁蛋白可能具有抗氧化的功能。在组织受损产生自由基的过程中，铁作为重要的催化剂。自由基可促进多种疾病的发生和机体的老化。现在已知自由基在疾病发展和老化过程中扮演着重要的角色。自由基产生于身体受损损伤，如感染或者发炎的部位。这些部位的铁离子能加速自由基的生成。乳铁蛋白在这些部位结合铁离子起到局部抗氧化的作用。 乳铁蛋白可能是乳汁中最重要的生物活性物质，对保护机体、治疗疾病都有重要作用。
抗体纯化的方法有哪些？ 抗体制备出来之后，需要进一步纯化得到纯的多抗或单抗，既有利于保存也有利于排除杂蛋白对结果的影响。常规用于纯化的材料是腹水和细胞培养上清，而通常经过免疫制备的 硫酸铵沉淀法： 基本原理：高浓度的硫酸铵通过与球蛋白竞争水分子破坏蛋白表明的水化膜，降低球蛋白的溶解性，是分离免疫球蛋白的常用方法，而且不同的免疫球蛋白适宜的硫酸铵浓度也稍有差别，一般用来分离抗体的硫酸铵饱和度在33~50%。 适用于：鼠抗所有亚类、其他种属抗体、任何种属的IgM、IgG、IgA 基本操作： 1.过滤、离心腹水或者培养上清得上清； 2.加入饱和硫酸铵至终浓度45%，静置沉淀蛋白； 3.沉淀蛋白用最小体积PBS或硼酸盐缓冲液溶解，用PBS或硼酸盐缓冲液透析除盐； 4.过聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶柱，PBS或硼酸盐（含0.02%叠氮钠）缓冲液洗脱； 5.电泳检测分子量大小，分光光度法测定抗体浓度； 6.抗体保存浓度在0.1-30 mg/mL适宜，-20℃保存不超过一个月，避免反复冻融。 亲和层析法 基本原理：基因工程改造的protein A和protein G能特异性结合哺乳动物IgG的Fc区段，将protein A和protein G结合到柱料上，通过亲和层析的方式，可将IgG及其亚类与片段纯化出来。 成员介绍：protein A分离自Staphylococcus aureus的细胞壁，分子量42 kDa，由spa 基因编码，具有五个同型的免疫球蛋白结合结构域，每个结构域由三个α螺旋构成。 protein A的B结构域
protein A的各个结构域 protein A可结合多数免疫球蛋白的Fc段（尤其是人的IgG1、IgG2、IgG4，豚鼠，猕猴，鼠类IgG2a、兔）以及人VH3家族的Fab段。基因工程改造的protein A通常使用大肠杆菌作为表达宿主，表达产物仍含有五个Fc结合结构域。对其结构上的改造主要是为了增加与多孔性材料的偶联性能，也有的改造protein A含有四个或六个同型Fc结合结构域，另外结构域数目较少的protein A能得到更好的抗体纯化效果。 protein G分离自G Streptococcus的细胞壁，分子量65 kDa，由spg基因编码，可结合抗体的Fc段、Fab段以及血清中的白蛋白。基因工程改造的protein G去掉了与白蛋白的结合位点仅仅保留Fc结合结构域，其结合力较protein A更强。 protein G的B结构域 protein G的各个结构域 还有一种protein A/G蛋白，是基因工程改造产物，是将protein A的4个Fc结合结构域与protein G的2个Fc结合结构域融合表达得到的。protein A/G结合了二者的特性，能结合人和鼠的IgG所有亚型，不结合鼠的IgA、IgM。 ①proteinA亲和层析 适用于：人（IgG3除外）、兔、豚鼠、猪的抗体； 基本操作： 1.过滤、离心腹水或者培养上清得上清； 2.调节pH到8.0：腹水以10倍体积pH8.0 PBS稀释、培养上清用pH8.0 PBS透析或强氧化钠调节； 3.过proteinA琼脂糖凝胶柱，pH8.0 PBS洗杂； 4.柠檬酸缓冲液洗脱抗体（小鼠IgG1用pH6.5，IgG2a用pH4.5，IgG2b和IgG3用pH3.0），并注意收集管内需加入Tris缓冲液中和滴下的抗体溶液； 5.用PBS透析；
那个免疫球蛋白是从人的血液的提取出来的 如果那个人的血是有病毒的话不一定可以百分百的杀死 那个人的病毒就会跑到BB那里去 比如艾滋，梅毒，常见是丙肝 真的要验血检查过是缺乏免疫球蛋白的才打 国内是很流行打这些的，我们这边从来不打，除非真的是缺乏免疫球蛋白的BB才会建议打BB又是母乳喂养的，应该不会缺乏的啦 过了4岁就不会经常病的了 以前我们小时候也是经常病啊，所以不用太担心 以上是妹妹咨询她们医院的医生说的，以下是百度了一下的 球蛋白的种类球蛋白有两种：丙种球蛋白和胎盘球蛋白。丙种球蛋白是从健康人的血液中提取的。丙种球蛋白又称抗体，是健康人在和疾病作斗争的过程中产生的。胎盘球蛋白是从健康产妇的胎盘中提取制成的，其主要成分是丙种球蛋白。球蛋白可以增强人体抵抗疾病的能力，属于人工被动免疫制剂。球蛋白不能代替预防接种有些家长迷信球蛋白，把它看成是万能预防针，常常要求医生给孩子打球蛋白针。这种做法是不对的，球蛋白虽然有一定的抗病能力，但绝不是万能药。通常人体在注射球蛋白后3-4周，体内保持一定浓度的抗体，可以预防有关的疾病，以后抗体含量逐渐减少以致消失，就没有防病作用了。而且它只能对麻疹、脊髓灰质炎、肝炎等有一定效果。由此可见，球蛋白的抗病时间是比较短的，适用的疾病范围也是有限的，它不能长时间对各种传染病都有效，不能代替预防接种。为了预防传染病还是应该按免疫程序接种各种疫苗。使用球蛋白的时间要恰当使用球蛋白制剂，应选择恰当的时间，过早过晚都不起作用。如孩子接触了麻疹病人，应在一周内注射球蛋白制剂才有保护作用，注射晚了仍然可能发病；如在接触病人前2个月注射的球蛋白，因为抗体已经消失，则不可能起到防病的作用。/
单克隆抗体制备的基本原理 一、单克隆抗体的概念 抗体（antibody）是机体在抗原刺激下产生的能与该抗原特异性结合的免疫球蛋白。常规的抗体制备是通过动物免疫并采集抗血清的方法产生的，因而抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分。一般的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇，所以常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。即使是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体，仍是由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成。因而，常规血清抗体又称多克隆抗体（polyclonal antibody），简称多抗。由于常规抗体的多克隆性质，加之不同批次的抗体制剂质量差异很大，使它在免疫化学试验等使用中带来许多麻烦。因此，制备针对预定抗原的特异性均质的且能保证无限量供应的抗体是免疫化学家长期梦寐以求的目标。随着杂交瘤技术的诞生，这一目标得以实现。 1975年，Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术，他们把用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与能在体外培养中无限制生长的骨髓瘤 细胞融合，形成B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征，既像骨髓瘤细胞一样在体外培养中能无限地快速增殖且永生不死，又能像脾淋巴细胞那样合成和分泌特异性抗体。通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系，即杂交瘤细胞系，它所产生的抗体是针
对同一抗原决定簇的高度同质的抗体，即所谓单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb），简称单抗。 与多抗相比，单抗纯度高，专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应。单抗技术的问世，不仅带来了免疫学领域里的一次**，而且它在生物医学科学的各个领域获得极广泛的应用，促进了众多学科的发展。 德国科学家柯勒（Georges Ko1er）和英国科学家米尔斯坦（Cesar Milstein）两人由此杰出贡献而荣获1984年度诺贝尔生理学和医学奖。 二、杂交瘤技术 （一）杂交瘤技术的诞生 淋巴细胞杂交瘤技术的诞生是几十年来免疫学在理论和技术两方面 发展的必然结果，抗体生成的克隆选择学说、抗体基因的研究、抗体结构与生物合成以及其多样性产生机制的揭示等，为杂交瘤技术提供了必要理论基础，同时，骨髓瘤细胞的体外培养、细胞融合与杂交细胞的筛选等提供了技术贮备。1975年8月7日，Kohler和Milstein 在英国《自然》杂志上发表了题为“分泌具有预定特异性抗体的融合细胞的持续培养”（Continuous cultures of fused cells secreting antibody of
各大品牌牛初乳的对比 生命阳光、邦阳、培芝、纽乐、爱宝氏、亨氏、乳珍、优瑞斯、蕊盛蕊、新澳康邦阳：免疫1+2、金装邦阳、纯粉。——48小时内分娩的乳汁 生命阳光：免疫1+1（0-1岁、1-3岁）、安孕哺、纯粉——48小时分娩的乳汁培芝：纯粉、金装初乳奶粉、初乳片、百立乐金装牛初乳复合粉、百立乐纯牛初乳1段45克、3段30克——48小时内分娩的乳汁 纽乐：牛初乳粉300g——最初4次挤出的乳汁 爱宝氏：金装纯牛初乳粉的——72小时分娩的乳汁 亨氏：金装纯牛初乳粉——48小时内分娩的乳汁 乳珍：颗粒针对幼儿3岁后的宝宝更加适合，3岁前的宝宝不利于吞咽和吸收，打开胶囊服用，容易浪费。、 优瑞斯：纯粉、牛初乳粉（分0-1岁、1-6岁）、牛初乳片——48小时内分娩的乳汁 蕊盛蕊：普装、金装、顶级装——72小时内分娩的乳汁 新澳康：牛初乳粉（300、500g）、纯粉（30、60g）、牛初乳澳大利亚进口，12小时分娩的乳汁 Symbiotics：牛初乳粉、胶囊、片美国
邦阳免疫1+2牛初乳：在补充免疫球蛋白IgG的基础上，特别添加了调节肠道的益生菌和脑部营养素DHA、牛磺酸及乳钙等维生素、矿物质。牛初乳本身是高热量高蛋白的食物，不容易消化，易引起上火，而益生菌可以改善此情况，帮助各大营养素的更好吸收和利用，避免上火便秘的情况发生。胎儿期和婴幼儿期是大脑发育和视网膜发育的关键期，所以特别添加了DHA，促进脑细胞和视网膜的发育，提高智力和视力，提高学习能力，思维能力，提高记忆力。其中还添加了乳钙，促进骨骼和牙齿的发育，乳钙是婴幼儿最好的钙来源，吸收率高达92%，不刺激肠胃，不上火便秘，作为日常的补充，可以无需额外补充钙剂。 生命阳光免疫1+1：添加了益生菌成分，帮助消化吸收，且不含脑部营养素DHA 和牛磺酸。蛋白质含量相对较高，宝宝的肠胃系统和肾脏发育还不成熟完善，容易造成消化的负担。 邦阳免疫1+2是建立在免疫1+1的基础上研发而成的，特别添加了脑部营养素DHA和牛磺酸，促进婴幼儿脑组织和智力发育，提高神经传导和视觉机能，改善
常乳中牛乳铁蛋白的纯化及抗菌活性研究 杨鹏华,倪凤娥 (长江大学生命科学学院,湖北荆州434025) 摘要 [目的]研究从常乳中纯化牛乳铁蛋白的工艺条件,探讨牛乳铁蛋白的抗菌活性。[方法]选用SP sepharose HP 作为强阳离子交换介质,利用AKT A purifier 10高效液相色谱仪纯化牛乳铁蛋白。[结果]结果表明,牛乳铁蛋白在pH 值7.5、浓度0.85mol/L 的NaCl 洗脱液中可以被洗脱下来,且产品纯度为90%以上。牛乳铁蛋白浓度为5mg/m l 时对大肠杆菌的生长具有显著的抑制作用。[结论]该研究建立了从常乳中纯化牛乳铁蛋白的方法,为大规模生产具有活性的牛乳铁蛋白奠定了基础。关键词 牛;乳铁蛋白;纯化中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2009)16-07351-02Pur i f ica tion and Antibacter i a l Activ ity of Bov i ne Lactoferr i n from Cows ′M ilk YANG Peng 2hua et a l (College of L ife Science,Yangtze University,J ingzhou,Hubei 404325) Abstract [Objective ]The ai m was to research the purification p r ocedures of bovine lactoferrin fr om cows πm ilk,and t o discuss the antibacte 2rial activity of bovine lactoferrin .[Method ]U sing SP sepharose HP as exchange medium of str ong cation,bovine lact oferrin was purified by u 2sing AKT A purifier 10high perf or mance liquid chr omat ograph .[Result]The results showed that bovine lact oferrin was eluted at 0.85mol/L NaCl and 7.5pH value,and the purity was over 90%.The growth of E.coli was evidently supp ressed with 5mg/m l bovine lactoferrin .[Con 2clusi on ]This study constructed the purification method of lactoferrin fr om cows ′m ilk,and p rovided bases f or large scale p roduction of active bovine lactoferrin . Key words Cow;Lactoferrin;Purification 作者简介 杨鹏华(1977-),男,河北保定人,博士,讲师,从事动物基 因工程方向研究。 收稿日期 2009204220 牛乳铁蛋白(Bovine Lact oferrin,b LF )是一种多功能蛋白质,在牛初乳和干乳期乳腺分泌物中含量较丰富[1] ,而在常乳中含量较少。它具有广泛的抗病毒[2] 、抗细菌感染作 用 [3] ,能有效增强免疫细胞增殖,提高机体免疫力[4] 。故对 牛乳铁蛋白的研究一直以来都是人们关注的焦点。由于初乳中含量丰富,所以目前牛乳铁蛋白均来自于初乳,但是由于初乳的来源有限,在一定程度上限制了牛乳铁蛋白的大规模生产,导致牛乳铁蛋白的价格不菲。该研究尝试应用强阳离子交换色谱法从常乳中纯化牛乳铁蛋白,为其工业化生产奠定基础。 1 材料与方法 1.1 材料、仪器、试剂 牛乳采自普通奶牛的常乳。 色谱柱H i L oad 16/10SP sephar ose HP colu mn,美国GE Healthcare 公司;高效液相色谱仪AKT A purifier 10,美国GE Healthcare 公司;DYY -Ⅲ2稳压电泳仪,北京六一仪器厂; 超滤管,M illi pore 公司;Freez one 6冷冻干燥机,美国Labconco 公司。 大肠杆菌为长江大学生命科学学院实验室保存,肉汤琼脂培养基购自青岛海博生物公司,其他试剂均为国产分析纯。 1.2 方法 1.2.1 牛乳清制备。将乳样于4℃、4500r/m in 离心15m in,将下层液体吸出转移到另一个离心管。将脱脂乳用浓 度1mol/L 盐酸调节pH 值,使其pH 值在3.8～4.6,将调好 pH 值的乳样于4℃、12000r/m in 离心20m in,取出,将上清 转移到另一个离心管。用浓度1mol/L 氢氧化钠调pH 值为 7.5,将调好pH 值的奶样于4℃、12000r/m in 离心30m in, 将上清收集到一个烧杯中,准备上样。 1.2.2 牛乳铁蛋白纯化工艺的建立。乳清通过注射器上 样,进入上样环。色谱柱预先用浓度0.4mol/L NaCl 、浓度 20.0mmol/L Na 3P O 4、pH 值7.5的平衡液平衡5个柱体积。 然后用浓度0.4～1.0mol/L NaCl 、浓度20.0mmol/L Na 3P O 4、pH 值7.5洗脱液线性洗脱15个体积,浓度1.0mol/L NaCl 、浓度20.0mmol/L Na 3P O 4、pH 值7.5洗脱液继 续洗脱5个体积,流速设为3m l/m in 。收集分离到的各个峰值蛋白,每10m l 收集一管,合并同一峰值的洗脱液,洗脱液经5K D 的超滤管5000r/m in 离心10m in,双蒸水恢复原体积,再5000r/m in,离心10m in,即得纯化除盐的b LF 。纯化得到b LF 浓缩液,-55℃冷冻24h,取出立即放入Freez one 6冻干机中冻干至粉末状,取出4℃保存。 1.2.3 S DS 2P AGE 检测纯化效果。配制浓度15%S DS 2P AGE, 取10μl 纯化液加入10μl 蛋白上样缓冲液,100℃水浴5min,取出电泳。浓缩胶电压设置50V,分离胶电压设置90V,电泳结束后用考马斯亮蓝染色,结果用凝胶成像仪拍照。 1.2.4 抗菌活性分析。在试管中把大肠杆菌用肉汤琼脂培 养基稀释浓度为2×104 个/m l,分别添加终浓度为0.5、2.0、 5.0mg/m l 的b LF,37℃、180r/m in 摇床培养。分别在1、2、4h 测定菌液的OD 600。同时设一不加b LF 的空白对照组。每 组设3个重复,试验重复3次。 2 结果与分析 2.1 牛乳铁蛋白的纯化工艺 高质量乳清的获得采用了pH 值法,调pH 值至酪蛋白等电点,通过离心得到了几乎不 含酪蛋白的乳清(图1W )。这对于其后的阳离子交换色谱来说至关重要。因为酪蛋白是乳蛋白中的主要蛋白,酪蛋白的去除有利于提高乳铁蛋白的纯化效率。阳离子交换色谱采用了SP sephar ose HP 介质,洗脱液为含浓度20.0mmol/L Na 3P O 4、pH 值7.5的浓度0.4～1.0mol/L NaCl 的线性洗脱。 在流速为3m l/m in 的条件下,在NaCl 浓度0.85mol/L 时纯化得到了一个明显的蛋白峰,见图2C,经电泳检测证明为 b LF,灰度扫描表明得到的b LF 纯度为91.3%(图1C )。在C 峰前出现了一个不明显的蛋白峰,分别收集到2个收集管中 A 和B,但是经电泳检测未见到明显条带(见图1A 、 B )。 安徽农业科学,Journal of Anhui Agri .Sci .2009,37(16):7351-7352责任编辑 张彩丽 责任校对 王业政
实验九 多克隆抗体的制备，纯化及免疫电泳 【实验目的】 ⒈ 加深对抗体基本知识的了解。 ⒉ 了解多克隆抗体的制备及纯化的基本方法。 ⒊ 了解免疫电泳的基本过程和实验依据。 一、多克隆抗体的制备 【实验原理】 当将抗原注射入实验动物体内时，一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合，受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体，这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体中不同的抗体分子可以以不同的亲和能力与抗原分子表面不同的部分—抗原决定簇相结合。 将抗原导入敏感动物体内后，可刺激网状内皮细胞系统，尤其是淋巴结和脾脏中的淋巴细胞大量增殖。如图所示，实验动物对初次免疫和二次免疫的应答有明显的不同。通常初次免疫应答往往比较弱，尤其是针对于易代谢，可溶性的抗原。首次注射后大约7天，在血清中可以观察到抗体但抗体的浓度维持在一个较低的水平，在大约10天左右抗体的滴度会达到最大值。但同种抗原注射而产生的二次免疫应答的结果明显不同，和初次免疫应答相比抗体的合成速度明显增加并且保留时间也长。 免疫应答的动力学结果取决于抗原和免疫动物的种类，但初次和二次免疫应答之间的关系是免疫应答的一个重要特点。三次或以后的抗原注射所产生的应答和二次应答结果相似：抗体的滴度明显增加并且血清中抗体的种类和性质发生了改变，这种改变被称为免疫应答的成熟，具有重要的实际意义。通常在抗原注射4-6周后会产生具有高亲和力的抗体。 【实验材料】 ⒈ 实验动物 初次抗原注射后的周次 0 1 2 3 4 5 6 7 初次免疫 二次免疫 血 清 中 抗 体 的 水 平
成年兔。 ⒉实验器材 特制兔盒；刀片；25G针头；1ml注射器；20 ml 血液收集管；药铲；离心机以及塑料离心管；加样器及加样管；烧杯。 ⒊实验试剂 ⑴抗原；乙醇；20mM 磷酸缓冲溶液pH7.2。 ⑵福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂： 【实验方法】 ⒈抗原的制备 抗原制备的主要目的在于在免疫动物体内产生最强、最适当的抗体。由于纯化的抗原适合产生抗体，因此在注射前通常采用一些经典的方法，比如柱层析、分级萃取、亚细胞分离等进行抗原的分离和纯化。如果多肽抗原在SDS/PAGE中为可见的单一带，抗原从凝胶中的抽提可作为纯化的最后一个步骤。 ⒉预放血 轻轻的将兔子放在特制兔盒中，处于放松状态的兔子采血会较容易。按压兔子耳根部直至血管突出,然后将针头插入耳部血管的中上部，观察到进针后小心推出活塞收集血液1ml -5ml。结束收集后，退出针头并按压伤处以制止血流，再用乙醇消毒。取收集的血液在37°C 恒温箱中放置30分钟以防止激活补体系统，再将试管在4°C放置过夜使血液凝固。用药铲将血凝块从管壁上拨落，将血液转移至塑料离心管中，4°C，10,000g离心10分钟，收集上清液在4°C保存。 ⒊注射抗原 ⑴准备两只成年兔，将100μg抗原/兔溶入1ml磷酸缓冲溶液中待用。在1ml福氏不完全佐剂中加入分枝杆菌制成完全佐剂，并加入1ml抗原溶液，剧烈震荡使之充分乳化，用3ml注射器抽取该乳化液，接上25G针头，排除注射器中的气泡。从笼中取出兔子放在平坦处，在4个不同的部位进行皮下注射，两处在后背，两处在大腿处。抚去注射处的兔毛并用乙醇消毒暴露的皮肤。捏出皮肤，将针头以相对皮肤15度的角度进针，进针深度为1cm-2cm，小心不要刺入肌肉中，在4个不同部位分别各注射约500μl抗原溶液。注射结束后，将针在注射处放置几秒钟后再轻轻拔出，并用乙醇在注射处消毒。在4个部位重复上述操作。用相同方法免疫另一只家兔。 ⑵每4-6周注射抗原，并在注射后的7天-10天按照步骤2收集血液。将收集的血液与注射前收集的血液进行比较，检查是否有抗体产生。待确定产生抗体后可大量收集血液，但每只兔子收集血液不能多于40ml以防止休克。 ⒋收集血液 ⑴将家兔轻轻放入固定架上,二甲苯涂于耳部血管的上中部，用刀片倾斜45°在该处切出0.23cm-0.3cm的切口使血液能自由的流出。用消毒后的管收集滴出的血液，若在结束之前出现凝固可用温水轻擦切口处，再继续收集。收集适量血液后可用消毒后的纱布轻擦患处，轻按患处10秒-20秒确定血流停止后方可结束。
牛初乳的新标准和规范 众所周知牛初乳的营养健康价值应给予充分肯定，国家出台相关政策的目的更是为了引导和促进牛初乳产业的规范发展。湖北省营养学会荣誉理事长、华中科技大学同济医学院营养与食品卫生系周韫珍教授在华中科技大学同济医学院营养与食品卫生学系就牛初乳对婴幼儿免疫调节的影响作进一步研究；课题组以随机抽样方法对武汉市妇幼保健机构健康体检的4800例婴幼儿的喂养与免疫健康状况做了流行病学调查；成功回收了1083名婴儿、1257名幼儿进行了调查，研究发现牛初乳具有明显改善婴幼儿腹泻、呼吸道感染的发病情况。 北京召开的“中国牛初乳产业发展研讨会”上关专家和相关部门领导明确地向媒体和广大消费者传达了明确表示，除“婴幼儿配方食品中不得添加牛初乳”以外，其他食品，只要符合相关标准和规范，如纯牛初粉、牛初乳普通食品、婴幼儿辅食、保健食品等，都可以正常生产、销售和放心食用”，并不存在所谓对牛初乳的禁令等科学信息，而这也使得一度处于尴尬境地的初牛初乳将重新焕发新春。 相关政府主管部门领导及以及营养、乳业和保健产业的权威专家的参会代表了自己的立场，给了牛初乳这种集聚营养健康价值的乳品提供了强有力的信心支撑。 同时在国际上，牛初乳在新西兰、澳大利亚、美国、欧洲、亚洲等许多国家已有多年研究和应用。针对国内质疑牛初乳安全性的问题，新西兰国家发来新西兰天然产品协会的声明：新西兰牛初乳行业和新西兰政府产业部门证实全人类食用新西兰牛初乳是安全的，并且有20年以上的历史。有很多研究试验数据的支撑。（详见新西兰天然产品协会声明）除此之外，例如：牛初乳特别值得推崇，它能抑制许多呼吸系统疾病，尤其是能抵抗流感病毒。对动物或人体突变而产生的亚洲流感病毒的潜在致命性暴发具有独特的控制效果。——《儿科热带病杂志》牛初乳对腹泻，尤其是轮状病毒引起的小儿秋季腹泻具有显著的改善作用。——《外科杂志》牛初乳中所含的生长因子能促进骨骼、肌肉生长和神经再生。——《斯堪的纳维亚儿科杂志》牛初乳能刺激淋巴组织，使免疫力差的人（尤其是老年人）增强免疫功能。通过口服方式摄入免疫因子十分简便，且价格低廉。——《生物学杂志》牛初乳能加速 B 淋巴细胞成熟，促进抗体形成，并能刺激巨噬细胞的活动。——《科学新闻》牛初乳对孕、产妇也相当重要，经常食用，不仅可增强自身体质，因而不易生病，更不会受抗生素困扰。此外，牛初乳中免疫球蛋白还可以传递给胎儿和幼儿，增进孩子的身体健康。——《新英格兰医学杂志》等众多杂志专栏都有详细的介绍。 闻名遐迩新西兰培芝牛初乳在此具有更多发言权，自1998年培芝来到中国，直到现在的2012年，整整14年，十四年的耕耘，十四年的磨砺。旗下产品传承健康的奥秘，萃取大自然的初乳精华，以卓越的品质和服务赢取了消费者越来越多的信赖继而沉淀下了健康与爱的品牌印记。在这十四年的时间里，培芝在中国取得过许多的成就：1998年，培芝来到中国，引进“牛初乳”健康生活理念，成为中国牛初乳行业的导航者。2000年，培芝协助有关研究专家完成中国首部牛初乳研究专著《初乳功能性食品》。2003年，培芝协助中国卫生部制定免疫球蛋G(lgG)的中国国家检测标准。2004年，培芝获新西兰前任总理克拉克亲颁“新中贸易杰出贡献奖”2005年，培芝协助中国乳制品工业协会制定中国牛初乳行业规范。2006年，培芝获新西兰商务部最高奖项“新西兰出口大奖”2008年，培芝再享总理级别待遇。作为新西兰著名品牌和杰出企业的商业代表，培芝很荣幸被邀请，见证了温总理与克拉克总理签署《中新双边自由贸易协定》。2009年，新西兰总理约翰·基访问培芝生产基地。2010年，培芝成为世博会新西兰国家馆唯一指定牛初乳、孕妇奶粉供应商。2011
单克隆抗体的制备技术和纯化及鉴定 一、实验目的： 单克隆抗体制备是细胞免疫学的一个重要里程碑，它涵盖了细胞培养、细胞融合、免疫动物和抗体效价检测等各个方面内容。了解单克隆抗体制备的原理、主要步骤和方法。 二、实验原理： 骨髓瘤细胞在体外培养能大量无限增殖，但不能分泌特异性抗体；而抗原免疫的B淋巴细胞能产生特异性抗体，但在体外不能无限增殖。将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞，继承了两个亲代细胞的特性，既具有骨髓瘤细胞能无限制增殖的特性，又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。经在HAT培养基[含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)]中进行选择性培养，未融合的脾细胞因不能在体外长期存活而死亡；未融合的骨髓瘤细胞合成DNA的主要途径被培养基中的氨基蝶呤阻断，又因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶（HGPRT），不能利用培养基中的次黄嘌呤完成DNA 的合成过程而死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，因此能在HAT培养基中存活和增殖。经过克隆选择，可筛选出能产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，在体内或体外培养，即可无限制地大量制备单克隆抗体。 三、试剂与器材： 细胞培养板、解剖器械、平皿、酶标仪、加样器、细胞计数板、CO2培养箱、倒置显微镜等。 四、操作方法： 1、抗原制备； 一般而言，抗原的纯度不很重要，特别是免疫原性较强的抗原。 A．可溶性抗原（蛋白质）以1mg/ml～5mg／ml的溶液加等量的弗氏完全佐剂乳化，分多点小鼠皮下注射，总量为～，间隔３～５周再同样注射一次，
１０天后，断尾取血一滴，测抗体效价，选滴度高的小鼠做融合试验。一个月后可以经静脉（尾静脉）给予无佐剂抗原～，３～４天后，杀死小鼠取脾做融合用。 B. 颗粒性抗原如抗原来源方便，可以不加佐剂而增加免疫次数，缩短间隔时间。例如用羊红血球免疫小白鼠，以１％浓度每只皮下注射０.２ml，每周２次，共免疫５～８次，取脾前３天，再免疫一次即可。有人认为最后一次免疫剂量要大，大到近于免疫耐受的程度更好。 2、免疫动物； 目前应用最广的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠为好。就品系而言以Balb/ c小白鼠应用最广，因为所有的小白鼠骨髓瘤系均从Balb/c小白鼠系诱导出来。Balb/c系小白鼠必须用纯系的，雌雄均可，以8~12周龄为宜。 大白鼠也可，能产生较多量的单克隆抗体。现在已经在小鼠杂交瘤的基础上，发展了小鼠－大鼠，小鼠－人以及人－人杂交瘤技术。 免疫程序、剂量和方法是关系到是否能得到所需要的单克隆抗体的关键之一。 正常小鼠脾脏含有能产生各种不同抗体的B淋巴细胞，一只纯种小白鼠估计能产生×107~×107种不同的抗体。因此一只正常的小白鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤融合，只能有千万分之一的机会获得某一种特定抗体。所以为了提高得到某种杂交瘤的机会，必须加强免疫，使产生特异性抗体的B淋巴细胞大量增加。 B淋巴细胞的不同发育阶段对获得阳性杂交瘤也有很大影响。有人认为处在转化时期的B淋巴细胞可能更易于融合，而免疫以后7~8天，虽然是抗体产生的高峰时期，但形成有活力的杂交瘤细胞的可能反而减少。故一般认为加强免疫后的第三天应杀鼠取脾做细胞融合。 3、免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备； 脾细胞制备 (1) 免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠，拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2) 将小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌条件下取脾。
辛酸—硫酸铵沉淀法提取免疫球蛋白G 一、实验目的： 1、了解蛋白质纯化的基本技术； 2、学习辛酸—硫酸铵法纯化抗体的方法。 二、实验原理： 根据免疫球蛋白的性质利用生物化学各种纯化方法进行抗体的纯化，主要有常规生物化学和特异性亲和层析两类方法。本实验采用辛酸—硫酸铵沉淀法从动物血清中纯化抗体，纯度和回收率较高，且抗体活性不被破坏；同时此方法操作简便、周期短、成本低、不需要复杂的仪器设备，不仅使用于小量抗体的纯化，也适合大批量抗体的制备。 三、实验材料试剂和器材： 1、实验材料：兔血清。 2、试剂：乙酸-乙酸钠缓冲液、10×磷酸盐-NaCl缓冲液、透析液、5 mol/LNaOH、0.1mol/L NaOH。 3、器材：电磁搅拌器、离心机、透析袋。 四、操作方法： 1、动物血清用4倍体积乙酸-乙酸钠缓冲液稀释，0.1mol/L NaOH调整血清稀释液pH至4.5。 2、室温下用电磁搅拌器边搅拌边缓慢滴加辛酸（加入量为1L血清稀释液加25ml），滴加完 后继续搅拌30min。 3、离心（10000转/分，20分钟）,收集上清液，弃去沉淀，上清液用滤纸过滤除去悬浮物， 量体积。 4、按照10%体积加入10×磷酸盐-NaCl缓冲液，用5 mol/LNaOH调pH至7.4。 5、上清液4℃预冷10min，测量溶液总体积，在4℃按277g/L缓慢加入硫酸铵粉末（终浓 度达到45%饱和度），边加边搅拌，加完后继续搅拌30min。 6、离心（5000转/分，15分钟）,弃去上清液，收集沉淀。 7、沉淀用少量透析液溶解（一般为原血清体积的1/10），透析并更换两次透析液。 8、透析后的抗体溶液在50～55℃水浴中加热20min，离心（5000转/分，20分钟）,上清液于-20℃保存。
关于牛初乳必须知道的6件事 （高培奶粉：https://www.doczj.com/doc/7b14829713.html,/） 牛初乳作为一种特殊的营养食品，从国外进入中国市场已经有了一段时间。随着营养界对其增强免疫功能的广泛肯定，越来越多的人开始接受这种较为昂贵的营养食品。但许多人仍然存在着消费误区，商家甚至利用消费者的常识缺乏打起了“擦边球”。对此，营养专家指出，牛初乳必须食用得当，才能物有所值。 营养优势：提高免疫力 究竟什么是牛初乳呢？根据2005年12月中国乳制品工业协会发布的《生鲜牛初乳》和《牛初乳粉》行业规范，牛初乳是指“从正常饲养的、无传染病和乳房炎的健康母牛分娩后72小时内所挤出的乳汁”，这是我国目前最权威的牛初乳定义。母牛分娩3天后分泌的乳汁，就是普通的牛奶了。 牛初乳其实也属于奶制品，只是它富含免疫因子和生长因子，含量比一般牛奶高出许多倍，所以被区别开来另立“门户”。有了免疫因子IgG，这种可以对抗外来病毒及细菌的天然抗体，机体就能对疾病产生对抗作用。这也就是为什么欧美一些国家最早将牛初乳当成天然抗生素使用的原因。对于婴幼儿来说，到6个月时，之前从母体带来的抗体便会逐渐减少，而其自身的免疫系统又尚未发育完全，因此很容易生病。这时如果反复进行药物治疗，容易破坏娇嫩的胃肠道，所以最根本的方法就是提高免疫力。而牛初乳中的活性免疫球蛋白IgG、IgA、IgM能帮助提高宝宝的抵抗力。 在中国乳制品工业协会出版的《牛初乳的功能和行业规范》一书中，明确指出牛初乳的四大功能：免疫调节、调节肠胃道功能、有助生长发育、改善衰老。 最好买“纯粉”，甄别有要领 正是因为牛初乳和普通牛奶的这种营养区别，选择牛初乳产品主要要看免疫因子IgG含量。《生鲜牛初乳》和《牛初乳粉》行业规范中规定，牛初乳的标志性指标是免疫球蛋白（IgG）含量不得低于10%。而目前我们在市场上看到的多是牛初乳奶粉，消费者误以为买回的这一大罐里面都是牛初乳，其实并非如此，这些牛初乳奶粉95%是普通脱脂奶粉，添加的牛初乳只有少量。一般100克牛初乳奶粉中IgG含量仅在0.5克～3克之间，根本不到10%。 严格来说，牛初乳奶粉并不属于牛初乳种类，应该称为“脱脂奶粉（含牛初乳）”，免疫功效被打了折扣。消费者最好选购以牛初乳为主要原料、每100克牛初乳中IgG含量大于10克的牛初乳纯粉。这些指标在外包装上应该有标示。同时，选购时还可以认准一些食品方面的国际质量认证体系，例如，HACCP（风险管理体系认证）、GMP（食品良好生产规范认证）、ISO管理体系认证等标示。 避免性早熟，有方可循 医学界曾有声音质疑，牛初乳里含有激素，可能使宝宝性早熟。对此，中山大学公共卫生学院营养学系的一位教授指出，一般来说，可能导致宝宝出现性早熟症状的性激素是脂溶性的，在牛初乳生产过程中通过脱脂及过滤等程序就已经被去除了。专家建议消费者购买时选择一些知名品牌，注意奶源地，尽量选择高品质、口碑好的国家出产的牛初乳，最后
免疫球蛋白的提取方法 根据猪血中含有的各种蛋白质的分子大小、电荷多少、溶解度以及免疫学特征等,从血液中提取免疫球蛋白,常用的有盐析法、有机溶剂沉淀法、有机聚合物沉淀法、变性沉淀法等。 免疫球蛋白的提取盐析法盐析法是分离蛋白质的重要方法之一,是利用抗体与杂质之间对盐浓度敏感程度的差异性进行的。选择一定浓度范围的盐溶液使部分杂质呈“盐析”状态,抗体成分呈“盐溶”溶解状态。离心去除盐析沉淀状态的杂蛋白,得到的上清液再选择一定浓度范围的盐溶液使抗体成分呈盐析状态,离心得到的沉淀物即为纯化的目标抗体。目前常用的盐析法有饱和硫酸铵分步盐析法、辛酸沉淀法、氯化铁沉淀法、多聚磷酸盐盐析法等。饱和硫酸铵分步盐析硫酸铵是盐析法最常用的无机盐,主要原因是它溶解度大,随温度变化小,对蛋白质有保护作用,高浓度时可抑制微生物和蛋白酶的活性,价格也不贵。 免疫球蛋白的饱和硫酸铵分步盐析法操作简单,对设备和操作条件要求不高,便于工业化生产。其具体步骤为:取一定量血浆,加生理盐水稀释,边搅拌边缓慢加入饱和硫酸铵溶液至硫酸铵终浓度20%,4℃静置1h,4000r/min离心10min,弃沉淀,上清液中继续加入饱和硫酸铵溶液至硫酸铵终浓度50%,浓氨水调pH值至7.0,4℃静置2h,4000r/min离心20m弃上清,将沉淀溶于生理盐水,超滤除盐浓缩,滤液中无S2- 4为止,即得IgG粗提物。 免疫球蛋白的辛酸沉淀法辛酸沉淀法提取IgG时,对设备和操作条件要求较高,在离心时,转速为10000 r/min,普通离心机达不到要求。在调节溶液pH值时,要控制得当,pH值稍低或稍高对IgG的得率和纯度都有很大影响,这些都限制了它的广泛应用。其具体步骤为:取一定量0.1mol调pH值至4.5;室温下边搅拌边缓慢加入辛酸(按辛酸25 μl/mL血清混合液添加),继续搅拌30min 后,10000r/min离心30min,弃沉淀,留上清液,上清液用多层纱布过滤,留滤液,然后将滤液装入透析袋中析48h,每8～10h换一次透析液,最后超滤浓缩即得1gG粗提液。 免疫球蛋白的氯化铁沉淀法氯化铁沉淀法的原理是据蛋白质分子与金属离子反应形成盐复合物的形式和种类的不同,达到分离不同蛋白质的目的。其具体步为:取一定量的血浆(加抗凝剂),用生理盐水稀释后,边搅拌边缓加入三氯化铁溶液,调pH值至4.5,搅拌混,40℃水浴保温60min后,4000r/min离心15min,弃去沉淀,上清液调pH值至9.0,常温静置2h,离心去沉淀过滤,上清液经超滤浓缩即得IgG粗提。 免疫球蛋白多聚磷酸盐盐析法多聚磷酸盐作为一种食品添加剂,常被添加在肉制品中以提高产品的保水性或者作为絮凝剂在食品加工中使用。多聚磷酸盐作为沉淀剂具有安全和高效的特点,是解决猪血清IgG大规模分离制备有效途径之一,但目前尚未有深入系统的研究。其具体步骤为:取一定量的血清加入相应量的多聚磷酸盐溶液,以0.1mol/L盐酸调至所需pH值,在一定温度水浴中保温反应一段时间后,取出8000r/min离心10min,弃沉淀,收集上清液,即为IgG粗提液。 免疫球蛋白的有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法广泛用于生产蛋白质制剂,常用的试剂是丙酮和乙醇等,其中以乙醇最为常用。目前,国际上常用冷乙醇法有两种,一种是美国等国主要使用的Cohn-Oncley法,另一种是西欧等国主要使用的Kistler和Nitschmann法。冷乙醇分离法是WHO规程和中国生物制品规程推荐用的方法,不仅分离物质多,可同时分离多种血浆成分,分辨率高,提纯效果好,而