植物蛋白质提取方法总汇 一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清液，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml 1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml 2、甘油(Glycerol)75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！ 二、植物组织蛋白质提取方法 氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。 3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时)，然后真空干燥沉淀，备用。 4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心(15℃8000rpm 以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准)，可临时保存在4℃待用。 5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。 药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS 溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml)，使用前再加入1M的DTT65ul/ml。 这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！ 三、组织：肠黏膜 目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达 应用TRIPURE提取蛋白质步骤： 含蛋白质上清液中加入异丙醇：(1.5ml每1mlTRIPURE用量) 倒转混匀，置室温10min
酵?母蛋?白质快速微量提取试剂盒 Yeast Protein Miniprep Kit 常温运输、4℃保存（溶液B成分二需-20℃保存），有效一年。 自备酵母培养基 产品及特点 本产品用于快速提取微量酵母蛋白用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。本产品结合玻璃珠破壁和化学法破壁两种方法，适合于各种形态的 各种酵母材料。本产品的其主要特点是： 1.破壁效率高，能达到80-90%。 2.可以处理各种酵母样品。 3.操作简单，得到的裂解液可以直接用于SDS-PAGE和Western印迹分 析。 规格及成分成份 50次包装 溶液A 100 mL 溶液B成分一 50 mL 溶液B成分二 1.5 g 玻璃珠，400μL 5 g 使用方法准备工作：将溶液B成分二（干粉）全部加到50mL溶液B成分一中，充分摇晃使之全部溶解，成为溶液B，然后分装成小分（体积根据每次实验的样 品数决定）并放-20℃长期保存。
1、 将酵母细胞接种到5mL YPD 培养基中，30℃摇晃（250rpm/分钟）过 夜培养使其OD600达到0.5～2.0。 2、 把酵母细胞培养物转到装有2mL 预冷溶液A 的10-15 mL 离心管中， 混匀。 3、 4℃ 5000g 离心5分钟沉淀酵母细胞，吸出上清液。 4、 用30μL 溶液B 悬浮酵母细胞，并快速转移到1.5mL 塑料离心管中。 5、 100℃下保温3分钟，使蛋白酶失活，样品存放于-20℃。 6、 加入0.1g 的玻璃珠。 7、 在旋涡振荡器上剧烈振荡混合2-10分钟。 8、 加入70 μl 溶液B，稍加振荡，置100℃保温1分钟。 9、 取5-20μl 抽提液上样直接进行SDS-PAGE 凝胶电泳。 关联推荐 4X 蛋白上样缓冲液 BCA 蛋白检测试剂盒 蛋白marker ECL 发光检测液
植物蛋白行业发展现状调研及投资前景分析报告(2020-2026) 恒州博智(QYResearch) 2020年
2019年全球植物蛋白市场总值达到了750亿元，预计2026年可以增长到1622亿元，年复合增长率(CAGR)为11.5%。 本报告研究全球与中国植物蛋白的发展现状及未来发展趋势，分别从生产和消费的角度分析植物蛋白的主要生产地区、主要消费地区以及主要的生产商。重点分析全球与中国的主要厂商产品特点、产品产品类型、不同产品类型产品的价格、产量、产值及全球和中国主要生产商的市场份额。主要生产商包括： DowDuPont ADM CHS Manildra Group Roquette Midwest Grain CropEnergies Tereos Syral Showa Sangyo Fuji Oil Cargill Cosucra Nisshin Oillio Tate & Lyle
World Food Processing Topagri Gushen Biological Shansong Biological Tianguan Yuwang Group Scents Holdings Chinalotus Goldensea Industry Sinoglory Health Food Shuangta Food Harbin Hi-tech Soybean Fiber Source Biological Engineering Oriental Protein Tech Wonderful Industrial Group Tianjing Plant Albumen 按照不同产品类型，包括如下几个类别： >80% <80% 按照不同应用，主要包括如下几个方面：食品和饮料 饲料
Brain Nuclear Extracts (2/97, AG; modified from David Frank) Lysis Procedure 1. Place small piece of frozen ctx (approx one hemisphere of E18 Ctx) in 1 ml PBS lysis buffer. 2. Homogenize with dounce homogenizer (5 strokes with A, 5 strokes with B). 3. Transfer homogenate to eppendorff tube. Spin at 4 C for 5 mins. 4. Discard supernatant, resuspend pellet (nuclei) in 1 ml Extraction Lysis Buffer. 5. Sonicate nuclei with two 15 sec bursts. 6. Spin at 4 C for 15 mins. 7. Recover supernatant and transfer to new tube. 8. Quantify protein concentration by Bradford Assay. Label tubes and freeze at -70 C. 9. To run lysate in gel, suspend required amount in 2X SDS sample buffer (50 μl) with b-mercapto-ethanol, boil, cool on ice, and load. Note: To make whole brain lysate, go directly to step 4 and start by placing tissue in 1 ml extraction buffer.
一提取植物总蛋白（以植物花粉为例）： 1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质 花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度2个小时(必要时过夜)，4度25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2%ampholyte,PH:3-10) 20度震荡1小时，20度25000g离心20min，收集上清，沉淀再次用IEF缓冲液离心收集上清，可为后续试验做准备。 2．苯酚（phenol）提取法 花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，添加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）继续研磨5min,加提取缓冲液（0.1mol/L 8.8 Tr i s –HCl，5mmEDTA,20mmDTT,30%sucrose）。将样本转移至离心管中，4度震荡30min，25000g离心10min，将上层的phenol层转移进另一个试管，将下边的水相层加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）及提取缓冲液，震荡，离心，将再次收集到的phenol与前边收集的混合，加5倍体积的0.1 M ammonium acetate in 100%methanol，在-20度震荡沉淀蛋白质，必要时过夜，4度 25000g离心10min，将沉淀用0.1 M ammonium acetate in 100%methanol及80% acetone各洗两次, 含10mmDTT的80% acetone再洗一次，在每一步中蛋白沉淀都要完全重悬— -20度震荡30min，4度 25000g离心20min，洗剂完成后，沉淀真空干燥，IEF buffer提取蛋白质，如方法1。3．直接IEF buffer提取蛋白质 直接IEF buffer提取蛋白质，花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，然后加入IEF buffer(8M尿素，20mmDTT,4%CHAPS，5mmEDTA，5mmTris base,2%ampholyte,PH:3-10).如方法1。 4．Tris-HCL缓冲液法 花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，加入Tris-HCL缓冲液（50mm,8.8,Tris-HCL, 5mmEDTA,20mmDTT,100mmKCL,2mmPMSF）,在融化后，混合液在4度放30min, 25000g离心20min,收集上清，对沉淀重新提取一次，将收集到的上清混合，用5倍体积的100%丙酮沉淀蛋白质，-20度孵育2h,离心后，用80%的丙酮洗剂沉淀2次，IEF buffer重悬沉淀，方法如1 5．利用Bradford试剂法估测提取的总蛋白浓度，并调整浓度行蛋白电泳，-80度保存。 本人翻译的，具体方法流程见附件原文。 ·
细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 产品简介： 碧云天的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便地从培养细胞或组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白的方法。抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的膜蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜和高尔基体膜等上的膜蛋白。 本试剂盒通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。 约90分钟即可完成培养细胞或组织的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白的分离和抽提。抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性测定等后续实验。 膜蛋白抽提试剂中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂和EDTA等，后续不适合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受这些抑制剂影响的酶的活性测定，但抽提获得的膜蛋白或细胞浆蛋白适合用于检测蛋白的磷酸化水平。 本试剂盒按照本说明书的操作步骤可以抽提100个细胞或组织样品。 保存条件： -20℃保存，一年有效。 注意事项： 需自备PMSF。PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。 PMSF(ST506)可以向碧云天订购。 使用本试剂盒抽提到的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白均可直接用碧云天生产的BCA法蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。抽提获得的细胞膜蛋白不适合用Bradford法测定蛋白浓度。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1.准备试剂：室温融解并混匀膜蛋白抽提试剂A和B，融解后立即置于冰浴上。取适量的膜蛋白抽提试剂A和B备用，在 使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 2.准备细胞或组织样品： a. 对于细胞 (1) 收集细胞 对于贴壁细胞：培养约2000-5000万细胞，用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的膜蛋白。 对于悬浮细胞：培养约2000-5000万细胞，直接离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。 (2) 洗涤细胞：用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞4℃，600g离心5分钟沉淀 细胞。弃上清，随后4℃，600g离心1分钟，以沉淀离心管管壁上的残留液体并进一步沉淀细胞，尽最大努力吸尽残留液体。 (3) 细胞预处理：把1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A加入至2000-5000万细胞中，轻轻并充分悬浮细胞， 冰浴放置10-15分钟。 b. 对于组织： 取约100毫克组织，用剪刀尽量小心剪切成细小的组织碎片。加入1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A，轻轻悬浮组织碎片，冰浴放置10-15分钟。注：如果组织样品比较少，也可以使用更少的组织量，例如30-50mg，后续试剂的用量及操作步骤不变；组织用量较少时，最后获得的膜蛋白也较少。
凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒 Cat Number：For Research Use Only Store at -20℃for one year Expire date： 一、试剂盒说明 本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白，提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究。 二、试剂盒组份 三、操作步骤 Ⅰ 实体组织蛋白的提取 1、组织样本，将组织剪切成小块，加入适量的冰冷PBS均浆后，静置5 min ， 弃沉淀，小心吸取上清转移至另一离心管中； 2、上清4℃离心500×g，3 min，弃上清，估计细胞压积PCV（离心后的 紧实细胞体积）； 3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min； 4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min； 5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后，4℃离心，16000×g,5min； 6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白； 7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡 15 seconds； 8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管， 即得核蛋白； 9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法）， 分装并保存于-80℃，避免反复冻融。 Ⅱ 培养细胞蛋白提取
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目录 植物蛋白主要上下游产品分析 (2) 第一节植物蛋白上下游分析 (2) 一、与行业上下游之间的关联性 (2) 二、上游原材料供应形势分析 (2) 2、豆类 (3) 3、谷类 (3) 4、螺旋藻蛋白 (4) 三、下游产品解析 (5) 第二节植物蛋白行业产业链分析 (5) 一、行业上游影响及风险分析 (5) 二、行业下游风险分析及提示 (6) 三、关联行业风险分析及提示 (6) 1
植物蛋白主要上下游产品分析 第一节植物蛋白上下游分析 一、与行业上下游之间的关联性 植物蛋白的上游主要由油料种子、大豆、谷类、螺旋藻等原材料厂商组成。植物蛋白下游主要应用于食品、医疗、饲料、饮料等领域。 图表- 1：植物蛋白产业链分析 杭州先略整理 二、上游原材料供应形势分析 1、油料种子 油料种子主要包括花生、油菜子、向日葵、芝麻等，其蛋白质种类主要以球蛋白为主。其中花生中蛋白质含量为26%～29%，其中球蛋白含量可以达到90%，其加工后溶解性高、黏度低，可用于制作面包及饮料等。向日葵是重要的油脂原料来源，其含有较高的球蛋白，但其赖氨酸含量有限。油菜籽产量很高，油菜籽含蛋白质25%，去油后的菜籽粕含有35%～45%的蛋白质。在植物蛋白质中，油菜籽蛋白的营养价值最高，没有限制性氨基酸，特别是含有许多在大豆中含量不足的含硫氨基酸。以油菜籽的脱脂物为原料可以加工浓缩蛋白。蛋白质在提取、分离等加工过程中，容易受到因加热而变性的影响，使蛋白质溶解度降低，不能 2
3 形成胶体，而油料种子蛋白质具有很好的保水性与持油性。此外，经分离得到的变性少的蛋白质，其发泡性、乳化性、凝胶性都很好。 2、豆类 豆类中蛋白质的含量丰富，其主要存在于蛋白质体中，豆类的蛋白质含量高达40%，蛋白质体中达80%。一般而言，豆类蛋白质中碱性氨基酸含量较少，谷氨酸、天冬氨酸等酸性氨基酸含量较多，其中也以球蛋白为主，还含有丰富的不饱和脂肪酸、钙、磷、铁、膳食纤维等，不含胆固醇，具有很高的营养价值。现代营养学家研究证实，豆类蛋白质具有降低高血压、减少心血管病、促进营养吸收和降血脂的功效。不仅如此，豆类中还含有皂苷、异黄酮等活性成分，具有抗衰老、提高免疫力、促进钙物质吸收的功能。豆制品生产中普遍存在蛋白质提取率偏低的问题，以大豆提取为例，目前大豆蛋白质的提取率大多在60%以下。大多数大豆蛋白都可溶于水，所以提高大豆蛋白质的提取率具有很大的潜力。根据蛋白质溶解特性大豆蛋白可分为清蛋白和球蛋白2类；又根据离心分离系数（即沉降系数）不同，大豆分离蛋白可分为2S 、7S 、11S 和 15S 等4种组分。 图表- 2：2012-2016年中国大豆产量分析 数据来源：中国食品工业协会豆制品专业委员会 3、谷类 谷类主要包括玉米、小麦、黑麦等，谷类中的蛋白质不溶于水或盐溶液，其
第五章植物蛋白质 目前，人类在对蛋白质代谢的研究和认识过程中，逐步得出了以下四个方面的结论：（1）任何生物细胞并不会合成全部自身遗传信息中所具有的蛋白质。但那些维持细胞生命活动基本代谢过程所需要的酶和蛋白质是必须合成的。 （2）由于细胞分化作用导致了各种专业化细胞的生成，使得不同的生物细胞所拥有的蛋白质各不相同，而且细胞的专业化可导致某些基本酶和蛋白质的合成终止。例如，在种子中，专门贮存蛋白质的细胞所含有的蛋白质，在叶片细胞中就没有；反之，在叶片细胞中专门进行光合作用的蛋白质在种子中也不存在。 （3）在一个细胞内，其合成和拥有的蛋白质种类，将随着生物的生长发育过程而发生一定的变化。例如，同工酶谱的变化。 （4）由人类DNA测序结果可知，真核生物基因不是一个基因决定一种蛋白质多肽链。由于DNA转录产物RNA可剪接和编辑，因而一个基因可以编码两条以上蛋白质多肽链。 第一节种子贮存蛋白质 人们通常将植物在某发育阶段合成、需保存到另一发育阶段才能发挥作用的蛋白质称为贮存蛋白质（storage proteins）。典型的贮存蛋白质一般都具有水溶性低、细胞中存在量大和脱水状态下几乎无生物活性的特征。 在粮食作物中最重要的种子贮存蛋白主要有两种，即谷类作物种子蛋白和豆类作物种子蛋白。 一、谷类作物种子蛋白 禾谷类种子的胚乳除含有大量淀粉外，还含有许多蛋白质。虽然胚中的蛋白质含量很高，但由于胚比胚乳小得多，所以从种子蛋白的总量上看，大部分蛋白质存在于胚乳中。 禾谷类种子蛋白质的分离提取通常按溶解性不同分为四个组分，即清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白。其中清蛋白可溶于水；球蛋白则溶于稀盐溶液中。由于这两种蛋白在胚乳中含量较少，所以，有人认为它们可能是种子形成过程中酶蛋白的剩余物，并不是典型的种子贮存蛋白。 禾谷类种子中的蛋白质含量因品种、气候和栽培条件而异，其主要谷类蛋白质含量变化幅度见表1。 由表1可见，燕麦与其它谷物不同，其主要贮存蛋白是一种球蛋白。这种球蛋白由6条α-链和6条β-链组成，α-链分子量为22000Da，β-链分子量为32000Da。 用甲醇、乙醇、异丙醇提取的种子蛋白称为醇溶谷蛋白。它是大部分禾谷类作物种子中最主要的贮存蛋白，而且它常集中分布于一种专门用于贮存蛋白质的特化细胞器——蛋白体
全蛋白提取试剂盒 Tissue or Cell Total Protein Extraction Kit 产品编号：C510003 包装规格：50 Assays 产品简介 本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白，用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer 匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效,可以提取出培养细胞或动物组织中的决大多数蛋白质。获得的全蛋白可 用于Western Blot 、免疫共沉淀，酶活性分析，Pull down 和EMSA 等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀 的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂，可以每次从107 个培养细胞或200 mg 动物组织提取蛋白质，本试剂盒可以 使用50次。 产品特点 1. 提取的蛋白质包括膜,核,核基质和胞质蛋白,而且最大限度保持蛋白质活性 2. 整个操作过程只需要30分钟左右 3. 即可以用于培养细胞（50x107 个），有可以用于动物组织（50x200 mg ）蛋白质的提取 4. 避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解，保持蛋白质的完整性和天然活性 5. 不需要超速度离心，可以同时处理多个样品 运输和保存条件 常温运输，收到后请将磷酸酶抑制剂，蛋白酶抑制剂和PMSF 于 -20℃保存，其余2-8℃保存，保质期一年。 试剂盒组成 成分 C510003 Lysis buffer 50 mL 蛋白酶抑制剂 50 μL 磷酸酶抑制剂 250 μL PMSF 500 μL 操作步骤 A. 实体组织蛋白的提取 1. 在每1 mL 预冷的Lysis Buffer 加入5 μL 磷酸酶抑制剂,1 μL 蛋白酶抑制剂和10 μL PMSF 混匀。冰上保存数分钟待用。 2. 将100-200 mg 固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3 mm ×3 mm 左右的小块，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，用PBS 洗涤两次，离心取沉淀后加入0.5～1 mL 上述配制好的预冷的Lysis Buffer ，4℃玻璃匀浆器上下手动匀浆15-30次。或超声破碎细胞，每次30s ， 3～4次，每次间隔1 min ，置于冰上冷却。均质匀浆或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％，同时没有明显的组织小块。 3. 取组织匀浆液转移到1.5 mL 预冷的离心管，冰上放置10 min 左右, 期间取出剧烈震荡2-3次； 4. 15000 g （13000 rpm)，4℃离心10 min ，取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，进行蛋白定量和其他蛋白质相关实验。 5. 分装保存于-70℃，避免反复冻融。 s a n g o n b i o t e c h
提取细胞核蛋白的步骤： 1.向培养细胞的平皿中加入少量（保证在1.5ml TUBE内能放下）冷PBS(或1*D-Hanks) 2.，用细胞刮刀尽可能多的刮下细胞，收集到1.5ml的离心管中。 在预冷的离心机中，４度，1000rcf，1－3分钟，沉降细胞。 为尽可能多的获得细胞，可将一次离心后的上清再重复刮细胞一次； 2. 将细胞重悬于cell lysis buffer中（加入体积106细胞/200uL，体积估计方法还是没确 定,should be sufficient; 一般就是一个10cm平皿加1ml cell lysis buffer）,添加蛋白酶抑 制剂；先破细胞膜，得到细胞核（没有用B DOUNCE）； 冰上放置（不震荡，可偶尔用枪轻吹）30分钟至1小时（此时核膜没有破，有核染色为证），充分裂解； cell lysis buffer： 5mM PIPES pH 8.0 85mM KCL, 0.5% NP40, 1% protein inhibitor; 3. ４度，1000rcf，20分钟，上清为胞质蛋白（蛋白浓度比较低，如需要检测，建议先 浓缩一下），沉淀为细胞核； 此时可以将沉淀冻存于－70℃； 4. 将沉淀重悬于100-200 ul nucleai lysis buffer（体积视目的蛋白表达丰度而定，一般 50-100ul）中，添加蛋白酶抑制剂，冰上放置30分钟至1小时（每5分钟震荡一次），充分裂解；可以观察到沉淀慢慢消失，溶液变澄清； nucleai lysis buffer：成分同SDS lysis buffer； 50mM Tris-Cl pH 8.1, 10mM EDTA, 1% SDS, 1% protein inhibitor; 5. 四度，最大转速离心，10分钟以上（尽可能沉淀完全），上清即为细胞核蛋白； （此文档部分内容来源于网络，如有侵权请告知删除，文档可自行编辑修改内容， 供参考，感谢您的配合和支持） 编辑版word
中国植物蛋白饮料市场消费者调研及投资策略研究报告（2013-2018） 第一章植物蛋白饮料的行业定位及投资特性 第一节植物蛋白饮料行业定位 一、行业定义 二、产品分类 三、行业发展生命周期研判 第二节植物蛋白饮料行业投资特性分析 一、市场发展特点 二、市场成长及行业集中度 三、竞争范围分析 四、技术水平及研发能力 五、现代化及标准化趋势 第二章2011-2013年中国植物蛋白饮料行业发展现状概述 第一节植物蛋白饮料国际发展概述 一、产品重点生产国家和地区概况 二、国外行业发展成熟度分析 三、2011-2013年国外市场运行特点 四、2013-2018年国际发展趋势分析 第二节中国植物蛋白饮料发展概述 一、行业发展历史沿革 二、国内行业发展成熟度分析 三、2011-2013年国内市场运行特点 四、2013-2018年国内市场发展趋势分析、 第三节2010年国内市场发展中存在问题分析
第三章2011-2013年中国植物蛋白饮料行业市场发展环境分析第一节2011-2013年中国宏观经济环境分析 一、国民经济增长 二、中国居民消费价格指数 三、工业生产运行情况 四、房地产业投资情况 五、中国制造业采购经理指数 第二节2011-2013年中国植物蛋白饮料行业政策环境分析 一、植物蛋白饮料行业政策分析 二、植物蛋白饮料相关政策影响分析 第三节2011-2013年中国植物蛋白饮料行业社会环境分析 一、人口环境分析 二、教育环境分析 三、文化环境分析 四、生态环境分析 第四章2007-2013年中国植物蛋白饮料制造行业主要数据监测分析第一节2007-2013年中国植物蛋白饮料制造行业规模分析 一、企业数量增长分析 二、从业人数增长分析 三、资产规模增长分析 第二节2013年中国植物蛋白饮料制造行业结构分析 一、企业数量结构分析 1、不同类型分析 2、不同所有制分析 二、销售收入结构分析 1、不同类型分析 2、不同所有制分析 第三节2007-2013年中国植物蛋白饮料制造行业产值分析
全蛋白提取试剂盒（中） 货号：BC3711 规格：50T/100T 有效期：至少1年。 产品组成： 名称50T100T Storage 裂解液（中）50ml100ml2-8℃ 磷酸酶抑制剂（100×）0.5ml1ml -20℃ 蛋白酶抑制剂（100×）0.5ml1ml PMSF（100×）0.5ml1ml 产品说明： 本试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取总蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，作用较为温和，可快速获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。 操作方法： 1、组织总蛋白的提取 1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF；混匀，放置在冰上备用； 2)称取0.1g的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入 0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作； 3)将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中，4℃12000g离心30min； 4)吸取上清至新的管中； 5)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。 （提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。） 2、细胞总蛋白的提取 1)裂解液的用量：107个细胞需要裂解液1ml； 2)贴壁细胞：弃去培养基，用冷的PBS洗两次，弃去PBS，然后加入计算好的细胞裂解液；在冰上用细胞
刮刀进行刮离细胞，将刮离的细胞裂解液移入EP管中，颠倒裂解20-30min。 3)悬浮细胞：4℃400g离心收集细胞，用冷的PBS洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，涡旋10s， 放置冰上裂解10min，重复3-4次； 4)裂解完毕之后，将细胞裂解液4℃12000g离心30min； 5)将上清移入新的EP管中；进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。 （提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。） 注意事项： 1.实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境。 2.PSMF（有毒）现用现加，因为PMSF在水溶液中会快速降解。
植物奶油是"慢性毒药": 中国缺乏限量标准(组图) 导读： 近日央视《经济半小时》报道了植物奶油存在健康隐患的消息后，引起社会广泛关注。我们大家突然意识到身边95%的洋快餐、蛋糕、面包都含有这种物质，植物奶油产生的反式脂肪酸一时成为众矢之的。其实，关于反式脂肪对人体健康的隐患并不是最近新的研究成果。反式脂肪会导致人体内生理功能出现多重障碍，容易造成心脑血管疾病。近年来，欧美很多国家都对食品中反式脂肪的含量有明确的规定，并且对食品包装上的标注也由严格规定。但中国没有国家限量标准，市场上的标注也混乱不清，消费者在缺乏知情权的情况下，面临着反式脂肪对健康的严重威胁。 ★植物奶油反式脂肪成分对人体危害大 植物奶油，也称作“人造奶油”或“氢化油”，德国化学家威罕?诺门所发明，1902年取得专利。原理是在加热植物油时，加入金属催化剂，通入氢气，使液体油脂变成半固体油脂。人造奶油由于呈固态，比液态天然植物油好储存，价格又低于天然动物脂肪，而且保质期长口感好，因此受到人们的欢迎。然而在“氢化”的过程中部份的脂肪改变为反式脂肪。反式脂肪对人体健康并无益处，也不是人体所需要的营养素。人造奶油对人体危害大即是因反式脂肪而起。 植物奶油有着各种好听的名字：“植物奶精”、“植脂末”、“起酥油”、“人造黄油”、“植物黄油”或“麦淇琳”。 2007年哈佛大学公共卫生学院进行的一项新研究发现，反式脂肪酸与心脏病患病风险之间关系密切。 研究人员发现红血球中的反式脂肪酸水平越高，患冠心病风险越大。 反式脂肪酸难以被身体代谢，易诱发糖尿病
早在10年前，欧洲8个国家就联合开展了多项有关人造脂肪危害的研究。由于反式脂肪酸在人体里是完全不被接受的，所以会导致体内生理功能出现多重障碍。科学家发现反式脂肪酸，很难被身体分解，也无法被代谢出去，一般的脂肪吃在身体里7天就代谢了，反式脂肪吃在身体里50天甚至更长的时间才可以代谢。没有代谢掉的反式脂肪最后只能留在体内，囤积在细胞或血管壁上。德国营养医学协会负责人安德雷?菲格教授告诉记者，研究结果显示，对于心血管疾病的发生发展，人造脂肪负有极大的责任，它导致心血管疾病的几率是饱和脂肪酸的3―5倍，甚至还会损害人们的认知功能。此外，人造脂肪还会诱发肿瘤（乳腺 癌等）、哮喘、2 型糖尿病、过敏等疾病，对胎儿体重、青少年发育也有不利影响。菲格教授打了这样一个比方：如果在一份看上去“大油大肉”的浓汁肉排和一盘用人造脂肪做出来的炸薯条之间进行取舍，那么选择前者更有利于健康。医学研究还证实，人们过多摄入反式脂肪会诱发糖尿病；通过胎盘以及母乳转运给胎儿，对其视网膜、中枢神经系统和大脑功能发育产生不利影响；还可影响神经、生殖系统的发育，减少男性荷尔蒙分泌，抑制儿童的正常身体发育。 哈佛大学研究：提高患心血管疾病概率 2007年哈佛大学公共卫生学院进行的一项研究发现，反式脂肪酸与心脏病患病 风险之间关系密切。在研究过程中，研究人员共对从32826人身上采集的血样进行了检测，这些人参与了1989年至1990年针对布里哈姆妇女医院的护士进行的研究。在随后的6年时间里，参与者中共有166人被确诊为冠心病患者，此外，研究人员还将他们与327名控制组成员进行了比较。在调整年龄、吸烟及其他与饮食和生活方式有关的心血管风险因素之后，研究人员发现红血球中的反式脂肪酸水平越高，患冠心病风险越大。反式脂肪酸水平处于最高四分位值的女性患冠心病风险是处于最低四分位值女性的3倍。 由于人体无法自身生成反式脂肪酸，因此人体中的反式脂肪酸均由食品中摄入。临床试验结果显示，反式脂肪酸包括饱和脂肪酸，能够提高LDL（低密度脂蛋白）胆固醇水平，同时降低HDL（高密度脂蛋白）胆固醇水平，是唯一一个可 以产生这种双重影响的脂肪酸。HDL被视为一种“有益”的胆固醇，LDL则被视 为一种“有害”的胆固醇。 什么食品含植物奶油 并不是所有人都了解植物奶油，似乎在市场上的食品成分中也并不是很常见。其实，植物奶油在市场上有着各种好听的名字：“植物奶精”、“植脂末”、“起酥油”、“人造黄油”、“植物黄油”或“麦淇琳”。根据中国人民解放军301医院与福州大学联合做的反式脂肪酸最新调查研究，从2005年到2009年，专家对国内市场上 52个著名食品品牌、167种加工食品进行测定。抽检食品中发现，87%的样品含有反式脂肪酸，包括所有的奶酪制品、蛋糕、面包、油炸薯条类小吃，以及95%的“洋快餐”、90%的冰激凌、80%的人造奶油、71%的饼干。
一、植物蛋白质提取 1. TCA-丙酮法 （1）称量一定量的样品置于液氮预冷的研钵中，加少许PVPP，反复加液氮研磨至粉末。 （2）研磨好的样品用10 倍体积（w/V）的10%的TCA-丙酮溶液悬浮，加入0.1 M PMSF、 1 M DTT 至终浓度为1 mM PMSF、10mM DTT，超声5 分钟，于-20℃静置6 小时或 过夜后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。 （3）沉淀用10 倍体积于样品的丙酮溶液重悬浮，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离 心15 分钟，弃上清。 （4）重复步骤（3）一次。 （5）沉淀用10 倍体积于样品的乙醇/乙醚=1:1 洗，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离 心15 分钟，弃上清。 （6）重复步骤（3）一次。 （7）取出沉淀真空干燥约5 分钟，除尽有机溶剂。 （8）按10mg 干粉末加200 微升裂解液的比例，加入1 mM PMSF、10mM DTT，超声5 分钟，充分溶解1 小时，10℃，35000g 离心30 分钟，上清为所需的蛋白溶液。（9）用Bradford 法测定蛋白样品的蛋白浓度。 （10）蛋白样品溶液小量分装，-80℃保存。 注意事项： （1）TCA 有利于去除酚类色素等物质，但不利于蛋白的抽提，使用浓度不宜过高，在后 面丙酮处理中，尽量除去。 （2）蛋白样品保存：样品浓度不宜过高，建议将高浓度样品适度调整，为避免反复冻融 应分装保存，长期保存用-80℃，短期保存用-20℃。 （3）1M DTT：0.1542g DTT 用1ml MilliQ 水溶解，-20℃保存。 （4）0.1M PMSF：0.0174g PMSF 用1ml 异丙醇溶解，-20℃保存。
双缩脲法蛋白质含量测定试剂盒使用说明 货号:PC0040 产品简介: 样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。 形成紫色络合物；紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度强碱性溶液中，双缩脲与CuSO 4 成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。该方法测定范围为1~10mg蛋白质，适用于蛋白质浓度高的样品，尤其是动物材料。 自备仪器和用品: 可见分光光度计、移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 标准品：液体×1瓶，5mg/mL，4℃保存。 样品中可溶性蛋白质提取: 1.液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。 2.组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取 约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水））冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释） 3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比 例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定步骤: 1.分光光度计预热30min以上，调节波长到540nm，蒸馏水调零。 2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL蒸馏水，1000μL试剂一，混匀后 室温静置15min，于540nm比色，记为A空白管。 3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL标准液，1000μL试剂一，混匀后 室温静置15min，于540nm比色，记为A标准管。 4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL待测液，1000μL试剂一，混匀后 室温静置15min，于540nm比色，记为A测定管。 样品中蛋白质浓度计算： C待测（mg/mL）=C标准管×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) =5×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) 注意事项： 1.样品蛋白浓度须在1~10mg/ml范围内，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml 须做相应稀释。因此测定前用1~2个样做预实验，确保蛋白浓度在1~10mg/ml范围内。 2.待测样品蛋白提取可用生理盐水、双蒸水或不含蛋白的PBS提取。该法受硫酸 铵、Tris缓冲液干扰，提取液中应不含这些物质；否则改用BCA蛋白质含量测定试剂盒。
真核细胞裂解和总蛋白提取试验的标准操作规程（编号：032） 1、目的及适用范围 该SOP用来规范真核细胞裂解以及细胞中总蛋白提取的操作。 2、主要仪器 细胞刮刀、冰盒、冷冻台式高速离心机、垂直混匀仪、微量移液器 3、试剂及配制方法 3.1 PBS（pH7.4）：NaCl 8g、KCl 0.2g、Na2HPO4·12H2O 3.58g、 KH2PO4 0.24g，定容至1L。3.2细胞裂解液：1% NP40、150mM NaCl、20mM Hepes pH7.5、10% glycerol、mM EDTA；使用时在每40mL细胞裂解液中加入1片蛋白酶抑制剂cocktail，保存于-20℃。 4、相关器皿的预处理 所有相关容器和器具均需要预冷 5、操作步骤 5.1 吸出要收获的细胞的培养基。 5.2 用PBS洗细胞2次，以完全除去培养基，置于冰上。 5.3 加入合适体积的细胞裂解液（具体加入的量可参照问题向导2），用细胞刮刀将细胞刮下后用移液器将细胞裂解液收集至离心管中。 5.4 将离心管置于冰上10min。 5.5 将离心管放入垂直混匀仪，于4℃中快速垂直混匀30min，以使细胞充分裂解。 5.6 30min后，将离心管拿出，于4℃下12000rpm离心15min。 5.7 吸取上清于新的离心管中，上清即为收获的细胞总蛋白；弃去沉淀，沉淀为细胞核和未破碎的 细胞。 6、问题向导 6.1如果要收取的蛋白为核内蛋白，可以在细胞裂解液里加入0.1%-0.5% 的Triton-100，以裂解核膜，释放核蛋白。 6.2加入的细胞裂解液的量根据收获细胞的培养皿规格以及想要获得的目的蛋白的浓度来决定，正常情况下的比例为： 100mm 皿：1.0mL-1.2mL 63
蛋白质是人类生命活动的基础，为人类提供营养的同时也对人体生理代谢起着重要的调控作用。过去人们认为动物（肉、奶、蛋）是优质蛋白质的主要来源，但随着人口的增长和消费水平的提高，动物蛋白质的供应模式已难以满足人们对蛋白质的需求，尤其在发展中国家，普遍陷入了蛋白质资源短缺的危机。近年来的研究表明，大量摄入动物性蛋白质会导致一系列的健康危机，如肥胖、心血管疾病等。因此，现在人们对植物性蛋白质越来越重视。而在中国传统饮食文化中，也提倡摄入植物性蛋白质。 植物蛋白质来源 目前，植物是食用及饲用蛋白质的主要来源，全球蛋白产量的80%为植物蛋白质。植物蛋白质来源广泛，其营养价值与动物蛋白相仿。但植物蛋白还具有一些特殊的功能，如降低胆固醇，抗肿瘤和改善心脑血管系统等。现在提取技术成熟的优质植物蛋白主要来源于大豆、大米、小麦和玉米等农作物。 大豆蛋白特点及营养 大豆自古以来都是我国人民重要的膳食蛋白来源。大豆种子富含蛋白质，比重约占种子重量的40%，在某些野生豆品种中含量甚至高达55%。大豆贮藏-的蛋白质主要是大豆球蛋白，其中11s大豆球蛋白（glycinin）和7s伴大豆球蛋白（β-conglycinin）占了总量的70%。除此之外，大豆中还含有胰蛋白酶抑制剂、植物凝集素、蛋白酶和磷酸酶等其他一些蛋白质。 大豆蛋白质的消化率高。临床研究表明，大豆蛋白的消化率可以同肉、奶、蛋的蛋白消化率相媲美。大豆蛋白质营养价值评价的通用标准是氨基酸分数（aas）。aas法是将待测蛋白与标准蛋白中各个必需氨基酸的含量进行比较，得到该待测蛋白的必需氨基酸得分。如果同时考虑到蛋白的消化率，对待测蛋白的aas值进行修正，可以得到蛋白质消化率修正后的氨基酸得分（pdcaas）。这种方法能准确反映出大豆蛋白的营养价值，被世界卫生组织等机构广泛采用。表2列出了几种常见食品的pdcaas值，通过比较可以发现大豆分离蛋白同鸡蛋清蛋白一样是满分，远高于其他植物蛋白的得分，也高于动物蛋白牛肉的得分。所以大豆蛋白不但氨基酸种类平衡，含量高，而且容易被人体消化吸收，是一种不多见的优良植物性完全蛋白质。 大豆蛋白除了可以满足2岁以上人体对各种必需氨基酸的需求之外，对人体的健康还有特别的益处。随着人们生活水平的提高，心血管疾病成了导致死亡的重要原因。血液中的胆固醇含量过高是引起心血管疾病的主要原因。相对于食用动物蛋白，食用大豆蛋白可以避免摄入过多胆固醇。人体内的胆固醇有两种，一种是低密度脂蛋白（ldl）胆固醇，它会引起动脉粥样硬化，造成心血管疾病。还有一种是高密度脂蛋白（hdl）胆固醇，可以清除血管壁沉积，保持动脉血管的畅通。大豆蛋白可以显著降低前者在血液中的浓度，并对后者没有影响，因此可以起到预防心血管疾病的作用。 含硫氨基酸含量较低是大豆蛋白的一个缺点，但因此也让大豆蛋白在减缓人体钙流失方面起到帮助作用。研究表明，含硫氨基酸同尿钙流失有关。与动物蛋白相比，大豆蛋白造成的尿钙损失较少，进而能有效防止骨质疏松。同样道理，在饮食中利用大豆蛋白代替动物蛋白可以减少血液中含硫氨基酸的水平，而血液中高含量的同型半胱氨酸（蛋氨酸的代谢产物）会导致肾脏病人患血管病，食用大豆蛋白对肾病患者有很大的帮助。研究还发现大豆球蛋白（7s和11s）中含有3个可以抑制血管紧张肽原酶活性的短肽片断。血管紧张肽原酶与人体血液循环和血压关系紧密，因此大豆蛋白还有抗高血压的功能。但大豆的抗营养因子会限制大豆的适用范围，如大豆中较高的嘌呤含量不适宜痛风病人食用。 其他谷物蛋白特点及营养 水稻、小麦等禾本科作物种子的蛋白含量一般在7%-15%，其含量相对于大豆来说较少，但考虑到每年水稻和小麦的庞大产量，大米和小麦蛋白年产量仍相当可观。