红外分光光度计原理及主要部件
摘要：红外分光光度计目前在我们生活中已经普遍得到运用，本文主要介绍了红外分光光度原理、红外分光光度计原理特点和主要用途、红外分光光度计应用领域以及 红外分光光度及重要主要部件。
红外分光光度原理
由光源发出的光，被分为能量均等对称的两束，一束为样品光通过样品，另一束为参考光作为基准。这两束光通过样品室进入光度计后，被扇形镜以一定的频率所调制，形成交变信号，然后两束光和为一束，并交替通过入射狭缝进入单色器中，经离轴抛物镜将光束平行地投射在光栅上，色散并通过出射狭缝之后，被滤光片滤除高级次光谱，再经椭球镜聚焦在探测器的接收面上。探测器将上述交变的信号转换为相应的电信号，经放大器进行电压放大后，转入A/D转换单位，计算机处理后得到从高波数到低波数的红外吸收光谱图。
红外分光光度计原理特点和主要用途
一般的红外光谱是指2.5-50微米（对应波数4000--200厘米-1）之间的中红外光谱，这是研究研究有机化合物最常用的光谱区域。红外光谱法的特点是：快速、样品量少（几微克-几毫克），特征性强（各种物质有其特定
二、适用范围：适用于TJ270-30A型红外分光光度计的操作、维修保养。 三、编制依据：《TJ270-30A型红外分光光度计使用说明书》 四、责任者：QC检验员。 五、内容： （一）操作规程： 1 开机 首先分别打开计算机、红外系统主机与控制（控制器--升级版）开关，再连接号USB 电缆线，然后点击“开始\程序\TJ270”或双击桌面快捷方式，进行系统初始化并运行系统程序。 2 测试样品 2.1 系统参数设置 点击“文件\参数设置” 单。 参数设置应根据样品要求来确定，若无要求或者要求不明确，一般按照如下设置：将测量模式设置为透过率，扫描速度设置为快，狭缝宽度设置为正常，响应时间设置为正常，X—范围设置为4000-400，Y—范围设置为0-100，扫描方式设置为连续，次数设置为1即可。 2.2 系统校准 此处，样品以真空作为参比物。 在确认样品室中未放置任何物品的情况下，点击菜单栏中的“系统操作\系统校准”或直接按F2快捷键，进行系统0、100%校准。 2.3 扫描 将事先处理好的样品放入样品室中的样品光样品池中，点击“测量方式\扫描”或直接 2.4 数据处理 扫描结束后，可在右侧的信息栏中的“当前谱线\名称”一栏中，输入样品名称及操作者。 点击“文件\ 点击“文件\ 点击“数据处理\读取数据”来进行列表读取火光标读取，或直接点击工具栏中的
点击“数据处理\ 3 退出系统与关机 样品测试结束后，点击“文件\退出系统”或直接点击右上角的关闭按钮退出红外操作系统。分别关闭控制（控制器--升级版）开关、红外主机与计算机。 4 填写仪器使用记录。 （二）维护保养规程 TJ270-30A型红外分光光度计是大型机密光学仪器。仪器在出厂之前，已经过仔细的调制。如给以适当的维护、保养，不仅能保证仪器稳定可靠地进行工作，而且也可延长仪器的寿命。 1 保证使用环境。 2 用户在使用仪器过程中，不得擅自对仪器加以调整更不可拆卸其中的零件，尤其是光学镜面，不可随意擦拭。 3 定期对仪器的性能进行检测，发现问题，请立即与制造厂方联系解决。 4 每次测试结束，首先取出样品，关断电源（最好拔下插头）并取下记录笔，配上笔帽放置。 5 长期不用仪器时，注意环境的温度（20±5℃）和湿度（65%以下）。 6 关于有毒池窗的注意事项 6.1 KRS-5（TL1-TLBr）KRs6(TLBr+TLCL)：可用来短时间测定酸、碱（除浓硝酸外）。用后应立即清洗。也可测量脱水不完全的样品，应避免在高温下使用，100℃以上将产生有毒气体，会使人产生铝中毒的症状。 6.2 C8I：最容易潮解，要在湿度40%以上使用，不能作高温测量，100℃以下亦产生有毒气体。 6.3 As2Se3：50℃以上表面即酸化。对红外光不透明。如温度再高，则与样品发生化学反应，溢出有毒物质。对碱溶液、10%以上的硝酸、王水等的测量均不能使用。 7 及时填写仪器保养、维修记录。 （三）故障的诊断和排除 一般来说出现下列现象时，并非仪器故障，请注意判断。 1 一部分波数范围内的测光值有较大跳动：原因是，由于样品光、参考光同时大幅度减小，比例计算几乎在0%附近进行，这时噪声电平的扰动导致计算结果大幅度地跳动。 2 校准100%值时有跳动。在狭缝太窄或响应太快时将出现此现象。一般来说，在3000cm-1附近，狭缝位于较宽档，响应位于慢档时，如果跳动值在±5%为正常现象。 3 偶尔出现操作键失灵现象。此时屏幕所有显示不能变动，对键盘操作没有反应，这是系统程序受到干扰不能正常运行所至。此时需要重新启动程序，并检查一下样室空间是否有异物挡光，若有需要将异物拿开。 4 仪器的故障诊断和排除 4.1 一般故障及处理方法请参考表1。
在目标：1.掌握比色分析的基本原理 2.规范使用721型分光光度计及利用镨钕滤光片法对其波长的检测实验用品：721型分光光度计、镨钕滤光片、5%CuSO 4液、纱布、比色杯等内容： 一、721型分光光度计的使用 【原理】 利用被测物的有色溶液对某一特定波长的光谱具有选择性吸收的特性，将吸收的光谱按不同强度转变相应的电能，再将电量的变化用检流计显示出来，将显示的电量以光量强度（D或A）计算，根据朗伯-比尔定理，即D=KCL，即吸光度与溶液的浓度与厚度的乘积成正比关系。 【操作步骤】 接通电源→选择波长→粗调透光度T“O”(开盖)和透光度T“100%”(关盖)→预温20min→放入被测液→精确调节透光度T“O”(开盖)和透光度T“100%”(关盖)→测定，读取各管吸光度→收场（关电源、罩仪器罩、登记、清洗比色杯和纱布等） 【注意事项】 1.仪器需防震、防潮、避光。 2.比色时，手拿比色杯的毛面，液体倒杯高的或，比色杯不能用硬毛刷刷洗，也不能用高温烘烤。 二、721型分光光度计波长的检测与校正（镨汝滤光片法） 1.在比色槽的光路上放一张小白纸，调节波长至580nm。 2.旋动光量T100%的旋钮至最大，在小白纸上应看到桔黄色的光斑。 3.若光斑不是橘黄色，左右旋转波长调节旋钮使之出现橘黄色的光斑，粗略判断波长偏离的程度，选择检测的起始波长。
4.调节波长至起始波长，用蒸馏水或空气调T“0”和T“100%”。 5.将镨汝滤光片推入光路中，记录T或A值，退出镨汝滤光片。 6.调节波长至另一值，用蒸馏水或空气调T“0”和T“100%”。 7.再将镨汝滤光片推入光路中，记录T或A值，退出镨汝滤光片8.如此反复测定直至T值为最小或A值为最大，记录此点的指示波长。 9.将A值最大时的波长减去镨汝滤光片最大的吸收波长529nm，即得被校比色计的波长误差。 10.如波长精度超出允许误差. （360~600nm≤3nm;600~700≤5nm;700~800≤8nm），打开分光光度计左侧调节窗口盖板，用螺丝刀试调波长的调节杆。具体位置详见仪器使用说明书。 11.试调波长的调节杆后，再按步骤3~8操作，直至分光光度计的波长精度误差在其允许范围内即可。
Nanjing Simcere Dongyuan Pharmaceutical Co.,Ltd. 南京先声东元制药有限公司 Name: Validation Report Serial Number: VR094-01 类别：验证报告报告号：VR094-01 Location: Instrument Room of QC Page: No.1 of 8 安装位置：化验室页码：共8页第1页 PerkinElmer Fourier-transform Infrared Spectrophotometer Spectrum BXⅡOperational And Performance Qualification Report 傅立叶变换红外光谱仪运行及性能确认报告 (设备编号：DG0202147)
目录 1 Equipment Description 设备描述 (3) 2 History of Prequalification 前确认历史 (3) 3 Spare Parts 仪器备品备件 (3) 4 Safety Inspection 安全检查 (3) 5 Verification of equipment 检验设备的校验 (3) 6 Calibration of instruments 仪表的校验 (4) 7 SOP for OQ OQ中所用标准操作规程 (4) 8 Operating Qualification 运行确认 (4) 8.1 Self-checking仪器自检 (4) 8.2 Resolution仪器的分辨率 (4) 8.3 Accuracy仪器的准确度 (5) 8.4 Repeatability仪器的重复性 (5) 8.5 Baseline（100%）straightness基线（100%）平直度 (6) 8.6 Baseline noise 基线噪声 (7) 9 Performance Qualification性能确认 (7) 10 Deviation and Action 偏离和不符合的纠正行为 (7) 11 Revalidation period 验证周期 (7) 12 Personel Trainning 人员培训 (7) 13 Conclusion验证结论 (7) 14 Report appendix detailed list报告附件清单 (8)
红外分光光度计确认方案 ****药业有限公司
确认报告确认名称：红外分光光度仪确认
红外分光光度计确认方案 ****药业有限公司
目录 1.概述 2.确认目的 3.确定范围 4.职责 5.人员组成 6.风险评估 7.确认方案内容 7.1设计确认及相关文件 7.2安装确认 7.3运行确认 7.4性能确认 8. 偏差处理 9.确认结果及评价 10.再确认周期
1．概述 傅里叶变换红外光谱仪（简称FT-IR）是利用干涉调频的工作原理，根据干涉图和光谱图之间的对应关系，通过测量干涉图和对干涉图进行傅里叶变换来获得光谱图；它能同时测量、记录来自光源所有谱元的信息，高效率地采集来自光源的辐射能量。检测器接收到的随光程差变化的信号强度便是光源所有谱元的贡献。数据处理系统通过对干涉图函数进行傅里叶变换得到按频率（波数）分布的物质的吸收光谱。由于具有多通道的优点，因有具有较高的信噪比、分辩率、检测灵敏度和较快的扫描速度，广泛应用于物质的定性定量及结构成分分析，是测量、研究分子振动、转动光谱的重要工具。 2. 确认目的 确认傅里叶变换红外光谱仪测定数据准确可靠，符合检验要求。 3. 确认范围 本文件适用于傅里叶变换红外光谱仪的确认。 4. 职责 4.1质量控制部职责 负责起草确认方案、总结报告； 负责整个确认方案的实施，并做记录、总结报告； 负责该确认得出可靠的确认结论，适用于产品检验。 4.2质量保证部职责 做好过程监控，确保方案执行过程符合法规要求； 负责确认方案的审核； 负责确认实施的协调； 负责确认档案的管理。 5.人员组成 6.风险评估 6.1风险识别 6.1.1注意仪器是否稳定牢固，防止仪器不稳定。
第一章：产品概述 产品原理： 分光光度计的原理是利用物质对不同波长的选择性吸收现象对物质进行定性和定量分析，通过对吸收光谱的分析，普安短物质的内部结构及化学组成。 光谱系列紫外/可见分光光度计就是根据以上原理，将传统的设计制造经验与现代精密光学和最新微电子等高新科学技术合理的结合在一起，研制开发的具有当代先进水平的新型分光光度计，是化工、药品、生化、冶金、轻工、材料、环保、食品、制药以及教学等行业的必备仪器。 产品特点： 光谱系列紫外/可见分光光度计具有以下特点： 采用经改良的低杂散光、高分辨率的单光束光路以及简捷、可靠的结构设计，使仪器具有良好的单色性、稳定性、重现性和精确的测量读数。2-4nm的光谱带宽可满足大多数分析测试项目的要求。 新型微机技术的运用，使仪器具有自动设置0%T和100%T、浓度计算和数据处理、自动校正波长，自动切换滤光片，自动光源切换点、自动显示出错信息等功能。科学的设计，新技术的运用，将光、机、电以及微机技术有机的结合在一起，使仪器的稳定性指标接近或达到高级紫外可见光光度计的水平。 一起选用2×20位大屏幕点阵式带背光显示器，可现实透射比、吸光度、浓度、波长等参数，还实现了仪器人机对话功能和连接PC等功能。仪器安装了标准的RS—232C通讯接口，可向计算机输送测试参数，并可接受计算机发送的控制指令（需使用SPECTRUM用户应用软件），实现PC机对仪器进行直接操作。外接打印机，可打印实时测试参数。 仪器附有可在视窗95（WIN95）操作平台运行的PC—SPECTRUM基本应用软件，可进行透射比、吸光度测试，浓度计算和直读，并可以打印，保存和调用测试参数，使使用者轻松、方便、准确、可靠地进行分析。 仪器各部件介绍
演示性试验 实验二十六 红外分光光度法鉴别 氢化可的松与醋酸氢化可的松 一、实验目的 1.了解红外分光光度计的基本原理及操作方法。 2.熟悉利用红外光谱鉴别药物的方法。 二、仪器与试药 1.仪器 FI 型光栅红外分光光度计 玛瑙乳钵 2.试药 溴化钾 三、实验原理 1.氢化可的松： 分子中三个羟基的存在，形成分子内及分子间的氢键缔合，使羟基的谱带变宽向低波数移动，V OH 约为3400cm ﹣1，C 20酮的Vc=o 为1715cm ﹣1，△4-3-酮的Vc=o 为1645cm –1，原因是与羟基形成氢 键、与双键共轭，故向低波数移动；Vc=o 为1620cm –1，由于C 3酮基形成氢键向低波数移动时，1620cm –1峰表现为肩峰：Vc=o1140～1000cm –1。 2.醋酸氢化可的松： 酯链羟基，因诱导效应，降低了羟基的极性，增强了双键成分因而增强了键力，使Vc=o 为1750cm –1;C 20酮基的位置在1710cm –1,△4-3-酮的Vc=o 为1635cm ﹣1;Vc-o-c1240cm ﹣1和1060cm ﹣1 是酯类的红外光谱特征。 四、实验内容： 取干燥供试品 1～2mg 与200mg 溴化钾（干燥并过 200目筛）粉末，在玛瑙乳钵中研磨均匀，将样粉适量置压片模具中，均匀覆盖模底，装置模具，联接真空系统，抽气5分钟（除去混于粉末中的湿气及空气，）然后，边抽气边加压至8吨维持5分钟，去除真空，取下模具，去除透明的供试品溴化钾片，置于样品框中，将样品框置于红外分光光度仪的光路中，空白置于参比光路，选择适当的增益、狭缝、程序及扫描时间，扫描区间为4000cm ﹣1～400cm ﹣1,得红外光谱曲线。 五、注意事项 1.供试品的纯度必须符合要求。 2.研磨样品时，应在红外灯下小心操作。 3.实验用溴化钾必须干燥、纯度符合要求并且颗粒均匀。 4.某些供试品在固体状态测定时，可能因为同质多晶型，测得图谱与标准图谱不符，此时应 CH 3O
第四章比色分析及分光光度法 Colorimetric and Spectrophotometric Analysis §1 概述 许多物质本身具有明显的颜色，例如KMnO4溶液显紫色，K2Cr2O7溶液显橙色等。另外，有些物质本身并无颜色，或者颜色并不明显，可是当它们与某些化学试剂反应后，则可以生成有明显颜色的物质，例如Fe3+本身具有黄色，当与一定量的KSCN试剂反应后，生成的Fe(SCN)3具有血红色；浅蓝色的Cu2+与氨水作用后，则生成深蓝色的Cu(NH3) 42+。当这些有色物质溶液的浓度改变时，溶液颜色的深浅液会改变。浓度越大，颜色越深；浓度越小，颜色越浅。因此，可以肯定地说，溶液颜色的深浅与有色物质的含量之间有一定的关系。在分析化学中，把这种基于比较有色物质溶液的颜色深浅以确定物质含量的分析方法称为比色分析。 实践证明，无论物质有无颜色，当一定波长的光通过该物质的溶液中时，根据物质对光的吸收程度，也可以确定该物质的含量。这种方法称为分光光度法。目前的比色分析常用分光光度计将光源变为单色光，并选择对待测物质具有最大吸收的单色光进行比色测定。 比色分析法、分光光度法与前面所讲的容量分析法、重量分析法相比，具有以下优点：1.灵敏度高比色分析法和分光光度法测定物质的浓度，下限一般可以达到10-5～10-6 mol/L，可以测定相当于含量0.001～0.0001%的微量组分。如果将被测物质加以富集，灵敏度还可以提高。 2.准确度高一般比色分析的相对误差为5～20%，分光光度法的相对误差为2～5%，其准确度虽不如容量分析及重量分析，但对微量组分来说，这个灵敏度还是可以的，因为微量组分用容量分析及重量法已无法测定，更谈不上准确了。例如1滴KMnO4滴入100mL水中时，仍可得到明显的适于比色分析的颜色，但这一滴溶液在滴定分析中只相当于它的误差的大小，根本无法进行准确测定。由此看来，比色法的准确度较高，可进行微量组分的分析。 3.操作简便，测定速度快比色法和分光光度法的仪器设备都简单，操作方便。进行分析时，试样处理成溶液后，一般只经历显色和比色两个步骤，就可得出分析结果。近年来，由于新的灵敏度高、选择性好的显色剂和掩蔽剂不断出现，使得一些干扰物可以不经分离，既可以进行测定。在生产过程的分析中，一般只要几分钟就可以得出结果，对于生产中的快速分析，起了很大的作用。 4.应用广泛几乎所有的无机离子和有机化合物都可直接或间接地用比色法和分光光度法进行测定，由此可见，比色及分光光度法应用范围之广泛。在环境监测中，适用最多的也是分光光度法，绝大多数污染物都可以用分光光度法测定，大多数中小型实验室都可以配备分光光度计，因此不受仪器设备条件的限制。
红外分光光度计确认方案 确认报告 确认名称：红外分光光度仪确认
红外分光光度计确认方案
1.概述 2.确认目的 3.确定范围 4.职责 5.人员组成 6.风险评估 7.确认方案内容 7.1设计确认及相关文件7.2安装确认 7.3运行确认 7.4性能确认 8.偏差处理 9.确认结果及评价 10.再确认周期
1概述 傅里叶变换红外光谱仪（简称FT-IR）是利用干涉调频的工作原理，根据干涉图和光谱图之间的对应关系，通过测量干涉图和对干涉图进行傅里叶变换来获得光谱图；它能同时测量、记录来自光源所有谱元的信息，高效率地采集来自光源的辐射能量。检测器接收到的随光程差变化的信号强度便是光源所有谱元的贡献。数据处理系统通过对干涉 图函数进行傅里叶变换得到按频率（波数）分布的物质的吸收光谱。由于具有多通道的优点，因有具有较高的信噪比、分辩率、检测灵敏度和较快的扫描速度，广泛应用于物质的定性定量及结构成分分析，是测量、研究分子振动、转动光谱的重要工具。 2.确认目的 确认傅里叶变换红外光谱仪测定数据准确可靠，符合检验要求。 3.确认范围 本文件适用于傅里叶变换红外光谱仪的确认。 4.职责 4.1质量控制部职责 负责起草确认方案、总结报告； 负责整个确认方案的实施，并做记录、总结报告； 负责该确认得出可靠的确认结论，适用于产品检验。 4.2质量保证部职责 做好过程监控，确保方案执行过程符合法规要求； 负责确认方案的审核； 负责确认实施的协调；负责确认档案的管理。 5.人员组成 6.风险评估 6.1风险识别 6.1.1注意仪器是否稳定牢固，防止仪器不稳定。 6.1.2注意样品室的光学系统及温湿度，防止性能下降。 6.2风险控制
分光光度计基本原理 分光光度计主要用于反射和透射测量。 分三种光源：S偏振光、P偏振光和自然光。 现有设备7台（2台日立U4100、1台JACSO-V650、1台JACSO-V570、2台KT1100、1台瞬间7700）主要由是由分光光度计和电脑组成，由电脑程序驱动。 1 基本部件 光源： 用于提供足够强度和稳定的连续光谱。分光光度计中常用的光源有热辐射光源和气体放电光源两类。 热辐射光源用于可见光区，如钨丝灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。钨灯和碘钨灯可使用的范围在340 -- 2500 nm。氢灯和氘灯。它们可在180 -- 375 nm范围内产生连续光源。 紫外—可见分光光度计通常都配有可见和紫外两种光源。 单色器：是从连续光谱中获得所需单色光的装置。 （1）入射狭缝 （2）准直镜（透镜或凹面反射镜），它使入射光束变为平行光束。 （3）色散元件，棱镜或光栅，它使不同波长的入射光色散开来。 （4）聚焦透镜或聚焦凹面反射镜聚焦，它使不同波长的光聚焦在焦面的不同位置。 （5）出射狭缝。 积分球:它主要用途是测定光源发出的总光通量。它的制造：首先在球内壁上涂一层腻子，作为底层；然后喷点白漆，作为中间层；最后喷一层白涂料（硫酸钡或氧化镁）作为表层。 检测器：检测器的作用是检测光信号。常用的检测器有光电管和光电倍增管。电脑，就是微处理机。一方面可对分光光度计进行操作控制，另一方面可进行数据处理。 2、先用3台光度计的特点 U4100的 V650能测位相
3、日常测量 改参数 1.光源要求（.自然光） 2、扫描速度 3、狭缝 基本的步骤 设备测量种类 U4100测量：合色棱镜（成品、PL、2P）等 V650:单层，小DVD,带位相的零件，AR的反射测量等 4.测量的原理，影响准确性的因素 单光路分光光度计V650 双光路分光光度计 U4100 它的优点：光电传感器就可以交替探测到经过样品的探测光束的强度与参考光束的光强度，然后将两束光强信号进行相除，就可以得到样品的透过率。它可以降低光源稳定性对光谱测试精度的影响。 测量的原则：入射光轴重合，出射光轴重合，难在后着。 商用的光谱仪都有很好的性能，但是如果操作测试不当，就会获得错误的光谱测试结果。主要影响准确性的因素： 透射因素： 1、测量样品口径的影响 在测量中应保证仪器的测量光束全部穿过样品。 1）、在样品室的测量光路和参考光路中同时添加小孔光阑。 2）、只在样品池添加小孔光阑。
72型分光光度计工作原理 72型分光光度计是可见光分光光度计，波长范围为420nm～700nm，它由三大部分组成:磁饱和稳压器、光源、单色光器和测光机构、微电计。 72型分光光度计的基本依据是朗伯—比耳定律，它是根据相对测量原理工作的，即先选定某一溶剂作为标准溶液，设定其透光率为100%，被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的，即让单色光分别通过被测试样和标准溶液，二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。如图所示，白色光源经入射狭缝、反射镜和透光镜后，变成平行光进入棱镜，色散后的单色光经镀铝的反射镜反射后，再经过透镜并聚光于出射狭缝上，狭缝宽度为0.32nm。反射镜和棱镜组装在一可旋转的转盘上并由波长调节器的凸轮所带动，转动波长调节器便可以在出光狭缝后面选择到任一波长的单色光。单色光透过样品吸收池后由一光量调节器调节为适度的光通量，最后被光电电池吸收，转换成电流后由微电计指示，从刻度标尺上直接读出透光率的值。 分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。 分光光度计的简单原理 分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被
吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。 核酸的定量 核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。 事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如EppendorfBiophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值 1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗
1.正磷酸盐含量的测定 （1）方法提要 在酸性条件下，正磷酸盐与钼酸铵反应生成黄色的磷钼杂多酸，再用抗坏血 酸还原成磷钼蓝，于710nm最大吸收波长处用分光光度法测定。 （2）试剂和材料 a.磷酸二氢钾； b.硫酸溶液（1+1）； c.抗坏血酸溶液（20g/L）：称取10g抗坏血酸，精确至0.5g，称取0.2g乙二 胺四乙酸二钠（C10H14O8N2Na2.2H2O），精确至0.01g，溶于200mL水中，加入8.0mL甲酸，用水稀释至500mL，混匀，贮存于棕色瓶中（有效期一 个月）； d.钼酸铵溶液（26g/L）：称取13g钼酸铵，精确至0.5g，称取0.5g酒石酸锑 钾（KSbOC4H4O6.1/2H2O）,精确至0.01g，溶于200mL水中，加入230mL 硫酸(1+1)溶液，混匀，冷却后用水稀释至500mL，混匀，贮存于棕色瓶中 （有效期两个月）； e.磷标准贮备溶液（1mL含有0.5mgPO43-）:准确称取0.7165g预先在 100~105℃干燥并已恒重过的磷酸二氢钾，精确至0.0002g，溶于约500mL水中，定量转移至1L容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀； f.磷标准溶液（1mL含有0.02mgPO43-）：取20.00mL磷标准贮备溶液于 500mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。 （3）仪器和设备 分光光度计：带有厚度为1㎝的吸收池。 （4）分析步骤 a.工作曲线的绘制：分别取0.00（空白），1.00mL，2.00mL，3.00mL， 4.00mL， 5.00mL， 6.00mL， 7.00mL， 8.00mL磷标准溶液于9个50mL容量 瓶中，依次向各瓶中加入约25mL水、2.0mL钼酸铵溶液，3.0mL抗坏血酸溶液，用水稀释至刻度，摇匀，于室温下放置10min.在分光光度计710nm处， 用1㎝吸收池，以空白调零测吸光度。以测得的吸光度为纵坐标，相对应的 PO43-量（μg）为横坐标绘制工作曲线。 b.正磷酸盐含量的测定：从试样中取20.00mL试验溶液，于50mL容量瓶中， 加入2.0mL钼酸铵溶液，3.0mL抗坏血酸溶液，用水稀释至刻度，摇匀，室温 下放置10min。在分光光度计710nm处，用1㎝吸收池，以不加试验溶液的空白调零测吸光度。 （5）分析结果的表述 以“mg/L”表示的试样中正磷酸盐（以PO43-计）的质量浓度X1按下式计算 X1= m1/V1 式中m1------从工作曲线上查得的以“μg”表示的PO43-量； V1-----移取试验溶液的体积，mL。
************有限公司GMP文件 文件名称： WGH-30A双光束红外分光光度计 标准操作规程文件编号： SOP-**-**-***-00 起草人日期年月日第 1 页，共 2 页 审核人日期年月日分发号 QA审核日期年月日生效日期年月日批准人日期年月日颁发部门质量部 分发部门质量部QC 1 目的：建立WGH-30A双光束红外分光光度计的标准操作规程 2 依据：WGH-30A双光束红外分光光度计使用说明书 3 适用范围：WGH-30A双光束红外分光光度计，2010版中国药典二部 4 责任者：QC主任、QC检验员 5 规程内容： 5.1准备工作： 5.1.1检查温湿度计，观察环境是否符合要求，温度为16-25℃，相对湿度为20-50%。确认仪器周围无振动、热源、辐射等。插上电源，打开电源开关，开启仪器，开始自检。 5.1.2开启电脑，运行操作软件，检查电脑与仪器连接是否正常。 5.1.3检查仪器工作是否正常，如有异常需查找原因并进行相应的处理，正常后方可进行测量。 5.1.4在窗口左侧的【参数设置】设置各项测定参数。 5.1.5仪器稳定后，进行测量。 5.2仪器校正 5.2.1 点击【复位】，仪器回复到所设置的最大波数处； 5.2.1 以空气为空白，在样品槽中放入标准聚苯乙烯样本，点击【单程】，开始测试。若所得红外谱图透光率最小值未达5%，则点击【校正】。 5.3 样品测定 5.3.1准备样品
5.3.1.1取适量的KBr于称量瓶中，在红外灯下烘1小时或在恒温105℃下烘3个小时，取出后置于干燥器中待用。 5.3.1.2溴化钾压片法：取供试品约0.3mg（在红外灯下烘1小时或在恒温105℃下烘3个小时，特殊供试品需用其他方法进行干燥，置玛瑙研钵中，加入干燥的溴化钾（溴化钾与供试品的比例应按照具体要求进行混合），充公研磨混匀（同一方向），移至压模中，使分布均匀，把压模水平放置于压片机座上，加压至20MPa，保持3分钟，（压力大小与保持时间应根据实际需要进行调整），取出供试片，有目视检查均匀，表面平滑，透光好。 5.3.1.3浆糊法：取干燥供试品约15mg，置于玛瑙研钵中，同一方向研磨，用滴管加相当量的大石蜡油，混合研匀使成糊状，用不锈钢小铲取出均匀地涂在溴化钾窗片上，放上另一窗片压紧。 5.3.2根据供试器的实验要求，设置参数。 5.3.2.1采集样品：在样品槽中里侧放空白试样，外侧放供试样品。单击【单程】，开始测定。 5.3.2.2 样品测定结束后，对该谱图进行相应的数据处理，单击【保存】，跳出保存窗口，命名和设置保存位置后单击【确定】。 5.4关机 5.4.1退出软件操作系统 5.4.2按仪器电源开关，关闭仪器。 5.4.3移走样品仓中的样品，确保样品仓清洁。 5.4.4清洁光谱仪和模具。 5.5.5关闭电脑 5.5.6作好仪器使用记录。
(一)基本原理 分光光度法是利用物质对某种波长的光具有选择性吸收的特性建立起来的鉴别物质或测定其含量的一项技术。当一束单色光通过溶液时，一部分被吸收，一部分则透过溶液。设入射光强度为Io。，透射光强度为It，，则透光度T=It ／Io，吸光度(A)或光密度(O．D)或称消光度(E)则可表示为A=-lgT。根据Lambert—Beer定律，吸光度与溶液的浓度成正比，与光束通过溶液的距离(即 光程)成正比，用数学表达式表示为： A=KLC 式中C代表该物质的浓度，L代表光程，一般以cm表示，K为摩尔消光系数，即当溶液浓度为lmol／l，光程为1cm时所测得的一定波长下的吸光度。 由于单色光透过溶液时，不仅被待测物质所吸收，而且还被比色容器与溶剂以及其它试剂吸收一部分，这部分需用空白管消除(空白液的做法即用与样本相 同的一切试剂，而不含被测定的物质) (二)波长的选择： 波长的选择一般是选择待测物质最大吸收峰的波长(λmax)。因在λmax测定吸光度，敏感度最高。在吸收峰波长处测吸光度，波长变化影响最小；而在其他波长处，波长变化对吸光度影响大，甚至测得浓度一吸光度曲线不呈直线。 选择测定某一溶液所需的波长，是可以用不同的波长作该溶液的吸收光谱曲线，从曲线上选择最适当的波长来进行这一溶液的测定工作，但是，在分析工作中，尚有个别情况，不能单凭此一原则，而应根据下列三个原则，进行实际试 测，然后全面考虑利弊，再行选定。 1．应使被测溶液有适当的光密度，一般而言，适当的光密度为0.1—0.7，而以0.2—0.6最理想。过低的光密度因仪器的读数误差而产生很大的相对误差，反之，过高的光密度则往往已超过直线范围而引入误差。 2．应使干扰影响降低至最低限度。在反应中，如遇不易去除的干扰色泽， 应选用对此干扰色泽最不灵敏的波长。 3．应使标准曲线在尽可能大的范围内接近直线。 (三)标准曲线的绘制 1．标准曲线的作用 (1)标准曲线又叫做校正曲线或工作曲线，它是比色分析法中不可缺少的步骤。从浓度——光密度直线的直线特性，可以判断所采用方法的呈色反应是 否符合Lamben—Beer氏定律。 (2)作多次平行测定绘制标准曲线，可判断在整个测定过程中操作，仪 器等误差的大小，从而确定该测定方法的可靠性。 (3)从绘制标准曲线的斜率可以比较各种方法的灵敏度。 (4)当进行大批样品分析时，可省略多次计算，从光密度值直接查阅标 准曲线而求得被测物质的浓度。
Lambda 750 紫外/可見/近紅外分光光度計使用說明 Lambda 750資料獲取（Data Collection）頁是一個圖形化的設置介面，但需要設置的參數是類似的，下面就以掃描方法設置為例來看看每一個專案的情況。 以掃描方法為例，資料獲取頁面讓您設置掃描的開始和結束範圍，縱座標類型和狹縫寬度。其他可以設置的參數包括掃描速度（Scan speed）、資料間隔（Data interval）、迴圈次數（Number of cycles）等。 設置掃描範圍時，開始（Start）值必須大於結束（End）值。不然的話數值將被互換。 縱座標類型從下拉清單中選擇。可選擇的縱座標類型（Ordinate mode）有： A ——Absorbance，吸光度 %T ——Transmittance，透過率
E1 ——樣品光路能量值 E2 ——參考光路能量值 %R ——Reflectance，反射率 狹縫寬度（Slit width）的選擇： 狹縫寬度在紫外／可見範圍內以nm表示， 通常選擇狹縫寬度為所測量的譜帶寬度的五分之一到十分之一之間，設置寬的狹縫可以 增加能量，提高信噪比，但同時會降低解析度和準確度，並且可能引起譜帶增寬；設置一個較小的狹縫可以增加解析度和光度計的準確度，但會降低信噪比。 掃描速度（Scan speed）——掃描速度（nm / min）。從下拉清單中選擇需要的掃描速度，慢掃描速度適用於窄峰，並且可以改善信噪比，使用較快地掃描速度適用於寬峰。如果選擇快速掃描，資料間隔會被自動設定。 資料間隔（Data interval）——採樣的數據間隔（nm） 迴圈次數（Number of cycles）——迴圈（重複）掃描的次數。 最快迴圈（Cycle as fast as possible）——儘快地迴圈，一個迴圈結束就立即開始下一個。 迴圈時間（Cycle time）——自行輸入一個迴圈時間，並選擇時間單位。迴圈 時間必須比最小迴圈時間長。 燈切換（Lamp change）——切換使用氘燈或鎢燈進行測量的波長位置（nm）。 如果您關心的光譜峰正好位於默認的切換波長（326 nm）附近，編輯改變該波長缺
生活需要游戏，但不能游戏人生；生活需要歌舞，但不需醉生梦死；生活需要艺术，但不能投机取巧；生活需要勇气，但不能鲁莽蛮干；生活需要重复，但不能重蹈覆辙。 -----无名 PerkinElmer Fourier-transform Infrared Spectrophotometer Spectrum BXⅡOperational And Performance Qualification Report 傅立叶变换红外光谱仪运行及性能确认报告 (设备编号：DG0202147)
目录 1 Equipment Description 设备描述 (3) 2 History of Prequalification 前确认历史 (3) 3 Spare Parts 仪器备品备件 (3) 4 Safety Inspection 安全检查 (3) 5 Verification of equipment 检验设备的校验 (3) 6 Calibration of instruments 仪表的校验 (4) 7 SOP for OQ OQ中所用标准操作规程 (4) 8 Operating Qualification 运行确认 (4) 8.1 Self-checking仪器自检 (4) 8.2 Resolution仪器的分辨率 (4) 8.3 Accuracy仪器的准确度 (5) 8.4 Repeatability仪器的重复性 (5) 8.5 Baseline（100%）straightness基线（100%）平直度 (6) 8.6 Baseline noise 基线噪声 (7) 9 Performance Qualification性能确认 (7) 10 Deviation and Action 偏离和不符合的纠正行为 (7) 11 Revalidation period 验证周期 (7) 12 Personel Trainning 人员培训 (7) 13 Conclusion验证结论 (7) 14 Report appendix detailed list报告附件清单 (8)
紫外可见光分光光度计工作原理 摘要：紫外分光光度计，就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。 关键字：工作原理结构应用展望 工作原理 物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。 又因为许多物质在紫外-可见光区有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法对这些物质分别进行测定（定量分析和定性分析）。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。 朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时，溶液的吸光度A是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l(吸收光程)的函数。 凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。 结构 可见-紫外分光光度计。其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～850nm 的可见光区。主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。目前, 国际上一般按紫外可见分光光度计的仪器结构将其分为单光束、准双光束、双光束和双波长四类。
主要应用 在水和废水监测中的应用，对于一个水系的监测分析和综合评价，一般包括水相（溶液本身）、固相（悬浮物、底质）、生物相（水生生物）。在水质的常规监测中，紫外可见分光光度法占有较大的比重。由于水和废水的成分复杂多变，待测物的浓度和干扰物的浓度差别很大，在具体分析时必须选择好分析方法。 在农产品和食品分析中可用于检测的组分或成分有蛋白质、赖氨酸、葡萄糖、维生素C、硝酸盐、亚硝酸盐、砷、汞等; 在植物生化分析中可用于检测叶绿素、全氮和酶的活力等； 在饲料分析中可用于检测烟酸、棉酚、磷化氢和甲酯等。 技术展望和应用前景 近十年来，紫外/可见分光技术变化不大，始终没有革命性的突破。然而，随着光学设计、电子技术和软件的进步，使得仪器的复杂性降低，可靠性和分析效能提高，这些都说明传统仪器也在不断发展。高端系统如紫外/可见/近红外仪器采用了多个检测器，可对大体积样品、固体样品进行分析，可快速扫描，配有多个探头和其他附件。现在我们能够清晰看到的是：在紫外/可见范围内的低成本光学检测，这一点将在国土安全、生物技术、医药、航空、环保和工业控制等领域为厂家带来新的商机。
分光光度计的原理与使用 一、目的要求： 1、学会紫外-可见分光光度计的原理和使用方法 2、学会测量溶液的浓度。 二、实验原理： 1、分光光度计原理：分光光度计是目前化验室中使用比较广泛的一种分析仪器，其测定原理是利用物质对光的选择性吸收特性，以较纯的单色光作为入射光，测定物质对光的吸收，从而确定溶液中物质的含量。其特点是灵敏度高；准确度高；测量范围广；在一定条件下，可同时测定水样中两种或两种以上的物质组分含量等。 分光光度计按其波长范围可分为可见分光光度计（工作范围360～800nm）、紫外-可见分光光度计（工作范围200～1000nm）和红外分光光度计（工作范围760～400000nm）等。 2、在日常使用及维护当中应注意以下几点： 第一，在使用仪器前，必须仔细阅读其使用说明书。 第二，若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新调零及满度后，再测量。 第三，指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况，需进行机械调零。 第四，操作人员不应轻易触动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。 第五，放大器灵敏度换挡后，必须重新调零。 第六，比色皿使用时要注意其方向性，并应配套使用，以延长其使用寿命。新的比色皿使用前必须进行配对选择，测定其相对厚度，互相偏差不得超过2%透光度，否则影响测定结果。使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净（测定有色溶液后，应先用相应的溶剂或（1+3）的硝酸进行浸泡，浸泡时间不宜过长，再用蒸馏水冲洗干净），并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。
第七，比色皿架及比色皿在使用中的正确到位问题。首先，应保证比色皿不倾斜。因为稍许倾斜，就会使参比样品与待测样品的吸收光径长度不一致，还有可能使入射光不能全部通过样品池，导致测试准确度不符合要求。其次，应保证每次测试时，比色皿架推拉到位。若不到位，将影响到测试值的重复性或准确度。 第八，干燥剂的使用问题。干燥剂失效将会导致以下问题：①数显不稳，无法调零或满度。②反射镜发霉或沾污，影响光效率，杂散光增加。因此分光光度计应放置在远离水池等湿度大的地方，并且干燥剂应定期更换或烘烤。 第九，分光光度计的放置位置应符合以下条件：避免阳光直射；避免强电场；避免与较大功率的电器设备共电；避开腐蚀性气体等。 3、吸光光度法测定溶液浓度原理 基于物质对不同波长的光波具有选择性吸收的能力而建立起来的分析方法。（1）光线： 光线的波长： 200nm-400nm 紫外线，400-750nm可见光， >750nm 红外线 光具有波粒二相性，波长不同，其能量不同。 （2）物质的吸收光谱及颜色： A．物质的原子吸收光谱和原子发射光谱：原子的最外层电子可以选择性吸收特征波长的电磁波成为激发态而产生的光谱称为原子吸收光谱。激发态原子恢复到基态，则释放出特征波长的光子，形成原子发射光谱。不同的溶液其光谱不同，即不同溶液对不同波长的光其吸收能力不同，对某一特定波长的光存在吸收峰。B．可见光由赤橙黄绿青兰紫等能量不同的光线组成，当可见光穿过某一溶液时，由于特定波长的光被吸收而使溶液呈现相应的颜色。（如CuSO4由于吸收了可见光中的黄光(600nm)而成蓝色）不同颜色的溶液对不同波长的光其吸收能力不同。（3）光吸收的基本定律（Lambert-Beer 定律）： 一束平行单色光（Io）通过有色的透明溶液时，一部分的光可以透过溶液（It），另一部分被溶液吸收（Ia）,还有一部分被器皿表面反射（Ir）,则： Io=It+Ia+Ir 。那么，该溶液透光率为: T = It / Io 。 1． Lambert 定律：设有一束平行单色光,通过液层厚度为b 的均匀透明溶液,则溶液对光的吸收能力: A=Ig(Io/It)=Ig(1/T)=k2b
一、目的： 制订详尽的工作程序，规范操作人员日常仪器设备操作，保证仪器设备稳定可靠。 二、范围： 适用于Nicolet iS5型红外分光光度计的操作、清洁和维护、维修。 三、职责： 1、操作人：严格执行本规程，认真、及时、准确地填写相关记录； 2、化验室负责人：监督检查检验员执行本操作规程。 四、内容： 1.操作方法 1.1打开计算机开关，双击电脑桌面“OMNIC”进入工作站，仪器自动复位至4000cm-1,并自动设计在常用工作参数状态。 1.2 参数设定或默认仪器设定参数。 1.3 数据处理。 1.4 压片法压制样品和参比片。 1.5 自动校准0%及100%（样品室不得放其他物件）；校准后，放入已压好片的样品或涂有液体样品的溴化钾片（里面放参比，外面放样品）。 1.6 开始扫描；扫描至设定区间的下线波数时，仪器自动停止扫描。 1.7 输入想要存的文件名称后回车，按F10回到原始画面。 1.8绘图操作：即刻打印。 1.9打印峰值。 1.10 进行复位。 1.11 如继续测下一样品，重复操作1～10。 1.12 全部测量工作完毕后，退出红外系统。关闭计算机电源。 2、清洁和维护、维修： 2.1 清理仪器表面，用微湿软抹布擦拭仪器表面。 2.2 定期检查设备的干燥程度并活化干燥剂。 2.3 定期对仪器的性能指示进行检测。 2.4 维护保养执行参照以上方法，并填写仪器维护保养记录 HG/REC-QC023。 2.5本仪器的维护保养为每周不少于1次。如检测中发生需进行维护保养的情况，应适时调整增加维护保养的次数。如仪器出现故障不得私自拆卸和校准应联系专业人士查看原因并及时维修。 3.注意事项： 3.1工作电压与仪器要求的一致；环境温度在10-30℃，湿度在65%以下。 3.2 测试结束后，立即取出样品，盖好样品室罩及防尘罩。