青蛙骨骼标本制作过程
一、固定
选取成体的青蛙（注意青蛙的骨骼要完整）用乙醚麻醉致死后用95%的乙醇固定1-2天（固定的好处之一是可以使青蛙的肌肉更加紧凑，便于后期的剥制）。
二、去除皮肤，内脏
用小剪刀沿青蛙腹中线小心的将其皮肤去除，并且挖去内脏，注意不要将骨骼损坏。
三、剔除肌肉
用手术刀、剪刀，小镊子等工具剔除骨骼上的肌肉。
1.小心的分离前肢与身体，注意保留肩胛骨处的软骨。
2.在去除横突上肌肉时，要特别小心，不要将横突扯断。
3.在用小镊子去除前后肢指骨和趾骨上肌肉时要注意保留关节处的软骨，否则在后期制作过程中可能会使骨骼散开。
4.在头骨肌肉剔完后，要用解剖针将青蛙的脑浆去除干净。
四、漂白
将肌肉剔除干净的骨骼放入30%的过氧化氢中密封漂白3-4个小时（具体的漂白时间要根据当时的温度做适当的调节，漂白时间不宜过长，否则骨骼会散开，时间太短会使漂白效果不明显，导致后期的染色效果不好。）
五、预透明处理
配置0.5%的KOH（易挥发，要现配先用，且要密封处理），并将骨骼放入透明20-30分钟，透明过后骨骼呈现晶莹状，透明可以使骨骼更容易着色。
六、染色
配置骨骼染液
1、药品及用具：95%酒精、冰醋酸、阿利辛蓝、茜素红、量筒、烧
杯、容量瓶。
2、按比例：0.3%阿利辛蓝酒精溶液（70%）：0.1%茜素红酒精溶液
（70%）：冰醋酸：70%酒精=1:1:1:17，配置好染液。
3、将骨骼放入染液中染色1-2天（具体的时间要根据骨骼的大小及
室温的高低做适当调整，骨骼太小或室温过高，染色时间要缩短。将骨
骼放入大的容器中染色，同时要使染液没过骨骼。）配好的染液在用之
前要摇晃均匀，并且在染色的过程中要每隔5-6个小时对染液摇晃几
下，防止发生沉淀，导致染色不均匀。骨骼染好之后的颜色为：硬骨呈
现玫瑰红色，软骨呈现蓝色。
七、分色
将染色好的骨骼用蒸馏水冲洗干净后（以水中没有颜色为准）用1%的KOH溶液密封浸泡2-3个小时，再将骨骼依次放入比例为1：4、2：3、3：2、4：1的纯甘油和0.5%的KOH混合溶液中进行分色处理，每个比例的时间必须要以骨骼下沉或有下沉趋势为止（每个阶段大约需要半个小时以上）。这一步可以使染色的效果更加明显。
八、保存
最后将处理好的青蛙骨骼固定在玻璃缸内，加入甘油进行密封保存。
九创新处
1.考虑到青蛙的肌肉已经去除干净，所以在漂白之后没有进行脱脂处理。
2.由于当时标本的制作是在暑假，温度比较高，所以在染色的时间上进行了适当的缩短。
牛蛙骨骼标本制作 制作牛蛙骨骼标本是一项相对简单但需要耐心和精确操作的任务。以下是一篇关于如何制作牛蛙骨骼标本的详细指南。 一、准备阶段 1.工具和材料 制作牛蛙骨骼标本需要以下工具和材料： •解剖刀、解剖剪、镊子 •放大镜或显微镜 •骨头清洗剂，如酒精或柠檬酸 •清水 •大的容器，如广口瓶或烧杯 •标签和写字笔 •泡沫板或海绵 •纸巾或干净的布 •大的纸箱或泡沫盒 •干燥剂，如硅胶或生石灰 2.安全注意事项 在开始制作骨骼标本之前，必须了解并遵守以下几点安全规定： •在成人监督下进行操作。未成年人必须在成人监督下使用解剖刀和其他锋利的工具。 •使用刀具时要小心，避免切割或刺伤自己或他人。 •在处理骨骼时，要戴上手套以避免划伤手部。 •在处理完骨骼后，要彻底洗手以避免细菌传播。 二、制作步骤 1.获取牛蛙
首先，你需要一只已经死亡的牛蛙。可以向水族馆或宠物店购买已经死亡的牛蛙，或者在公园或其他水域捕捉。牛蛙骨骼的制作并不需要牛蛙身体的其他部分，只需要骨骼。因此，只需要头部、四肢和脊椎骨。 2.清洗骨骼 将牛蛙的皮剥掉，然后清洗骨骼。使用解剖刀和镊子将骨骼从皮和肉中分离。尽可能小心地不要损坏骨骼。清洗完毕后，将骨骼放入装有酒精或柠檬酸的广口瓶中，以消除残留的肉和脂肪。这一过程可能需要数天或数周，取决于具体情况。 3.浸泡骨骼 将骨骼从清洗剂中取出，用清水冲洗干净，然后浸泡在清水中数天，直到完全浸泡柔软。每天更换一次水以保持清洁。 4.整理骨骼 当骨骼完全浸泡柔软后，就可以开始整理。使用解剖刀和镊子将骨骼从浸泡的水中取出，然后逐一整理。整理时要确保骨骼的完整性和正确的位置。这一步骤需要耐心和精确的操作技巧。整理完毕后，将骨骼放入广口瓶中，并加入足够的清水以完全淹没骨骼。 5.干燥骨骼 将装有骨骼的广口瓶放入一个大纸箱或泡沫盒中，然后加入适量的干燥剂（如硅胶或生石灰）。将纸箱或泡沫盒密封，并放置在一个干燥的地方。干燥过程可能需要数天到数周，具体取决于天气和环境条件。在此期间，要定期检查干燥情况，并适时更换干燥剂。当骨骼完全干燥后，就可以从纸箱或泡沫盒中取出。这时，你就可以得到一个完整的牛蛙骨骼标本了。 三、总结 制作牛蛙骨骼标本虽然需要一些耐心和精确的操作技巧，但一旦完成，将会获得一种深入了解动物身体结构的机会，并且可以作为教育、学习和研究的工具。此外，这也是一种有趣的爱好，可以锻炼精细动作和手眼协调能力。在制作过程中，要确保使用正确的工具和材料，遵守安全规定，并注意环境卫生。
生理科学实验报告 实验1：蟾蜍骨骼肌兴奋收缩实验 实验组成员：刘谨、杨莹莹、张敏霞 浙江大学医学院临床医学（七年制）1008班 【摘要】实验目的：学习使用RM6240多道生理信号采集处理系统和换能器的使用。掌握制备具有正常兴奋收缩功能的蛙类坐骨神经-腓肠肌标本基本操作技术。观察不同刺激强度、频率对肌肉收缩的影响。观察神经-肌肉接头兴奋传递和骨骼肌兴奋的电变化与收缩之间的时间关系及其各自特点。 【关键词】神经-肌肉、刺激强度、频率、电位变化、张力变化 【实验原理】蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处，而且其离体组织的生活条件比较简单，易于控制和掌握。因此，蛙或蟾蜍的坐骨神经-腓肠肌标本常被用来观察神经-肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律及肌肉收缩特点等实验。肌肉组织的兴奋主要表现为收缩活动，一个刺激是否能使组织发生兴奋，不仅与刺激形式有关还与刺激时间、强度、强度-时间变化三要素有关，若用方形电脉冲刺激则组织兴奋只与刺激强度、时间有关，终板电位可引起肌肉产生兴奋在宏观上表现为肌肉收缩。肌肉的收缩形式不仅与刺激本身有关而且还与刺激频率有关。若刺激频率较小，则表现为单收缩，逐渐增大刺激频率则变现为不完全强直收缩，继续增强则表现为完全强直收缩。 【实验步骤】 1.实验材料 1.1 实验动物：蟾蜍 1.2 实验试剂：任氏液，甘油高渗任氏液 1.3 实验器材：一维微调器，BB-3G屏蔽盒，针形引导电极，张力换能器，RM6240多 道生理信号采集处理系统 2. 实验方法 2.1 蟾蜍坐骨神经神经-肌肉标本的制作 取蟾蜍一只常规方法毁脑脊髓，剪断脊柱并且剪除蟾蜍躯干上部以及内脏，避开神经剥除蟾蜍的皮肤，于任试液中清洗，剪除骶骨分离坐骨神经于坐骨神经根部结扎，将标本固定于木板上，分离大腿部坐骨神经，直至分离至腘窝胫神经分叉处。然后剪断股二头肌腱、半腱肌和半膜肌肌腱，并绕至前方剪断股四头肌腱。用剪刀刮除股骨上的肌
青蛙骨骼标本制作过程 一、固定 选取成体的青蛙（注意青蛙的骨骼要完整）用乙醚麻醉致死后用95%的乙醇固定1-2天（固定的好处之一是可以使青蛙的肌肉更加紧凑，便于后期的剥制）。 二、去除皮肤，内脏 用小剪刀沿青蛙腹中线小心的将其皮肤去除，并且挖去内脏，注意不要将骨骼损坏。 三、剔除肌肉 用手术刀、剪刀，小镊子等工具剔除骨骼上的肌肉。 1.小心的分离前肢与身体，注意保留肩胛骨处的软骨。 2.在去除横突上肌肉时，要特别小心，不要将横突扯断。 3.在用小镊子去除前后肢指骨和趾骨上肌肉时要注意保留关节处的软骨，否则在后期制作过程中可能会使骨骼散开。 4.在头骨肌肉剔完后，要用解剖针将青蛙的脑浆去除干净。 四、漂白 将肌肉剔除干净的骨骼放入30%的过氧化氢中密封漂白3-4个小时（具体的漂白时间要根据当时的温度做适当的调节，漂白时间不宜过长，否则骨骼会散开，时间太短会使漂白效果不明显，导致后期的染色效果不好。） 五、预透明处理 配置0.5%的KOH（易挥发，要现配先用，且要密封处理），并将骨骼放入透明20-30分钟，透明过后骨骼呈现晶莹状，透明可以使骨骼更容易着色。 六、染色 配置骨骼染液 1、药品及用具：95%酒精、冰醋酸、阿利辛蓝、茜素红、量筒、烧 杯、容量瓶。 2、按比例：0.3%阿利辛蓝酒精溶液（70%）：0.1%茜素红酒精溶液 （70%）：冰醋酸：70%酒精=1:1:1:17，配置好染液。 3、将骨骼放入染液中染色1-2天（具体的时间要根据骨骼的大小及 室温的高低做适当调整，骨骼太小或室温过高，染色时间要缩短。将骨
骼放入大的容器中染色，同时要使染液没过骨骼。）配好的染液在用之 前要摇晃均匀，并且在染色的过程中要每隔5-6个小时对染液摇晃几 下，防止发生沉淀，导致染色不均匀。骨骼染好之后的颜色为：硬骨呈 现玫瑰红色，软骨呈现蓝色。 七、分色 将染色好的骨骼用蒸馏水冲洗干净后（以水中没有颜色为准）用1%的KOH溶液密封浸泡2-3个小时，再将骨骼依次放入比例为1：4、2：3、3：2、4：1的纯甘油和0.5%的KOH混合溶液中进行分色处理，每个比例的时间必须要以骨骼下沉或有下沉趋势为止（每个阶段大约需要半个小时以上）。这一步可以使染色的效果更加明显。 八、保存 最后将处理好的青蛙骨骼固定在玻璃缸内，加入甘油进行密封保存。 九创新处 1.考虑到青蛙的肌肉已经去除干净，所以在漂白之后没有进行脱脂处理。 2.由于当时标本的制作是在暑假，温度比较高，所以在染色的时间上进行了适当的缩短。
实验一坐骨神经腓肠肌标本制备 目的学习坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。 原理两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。因此在生理实验中常用蟾蜍的神经肌肉标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激的规律以及骨骼肌收缩的特点等。 实验对象蟾蜍 实验用品蛙类手术器械、烧杯、培养皿、棉球、纱布、细丝线、任氏液、粗剪刀、蛙板等。 实验步骤 1.破坏脑和脊髓左手持蛙，用食指压其头部前端，使头前俯。右手持探针由头端沿正中线向后划，触到凹陷即为枕骨大孔，将探针由此垂直刺入。再将探针折向前方，插入颅腔内并左右搅动捣毁脑组织。再将探针退回至进针处，针尖转向后方，刺入椎管捣毁脊髓。此时蟾蜍四肢瘫软，表明脑脊髓已完全破坏。 2.剪除躯干上部及内脏用粗剪刀在骶髂关节水平以上1cm处剪断脊柱。左手握住后肢，右手持剪刀沿脊柱的断口向下剪开两侧的皮肤及肌肉，再剪除已下垂的躯干上部及内脏。 3.剥皮剪掉肛门周围的皮肤，左手捏脊柱断端（勿触碰神经），右手捏住断端边缘的皮肤，向下剥掉两后肢皮肤。将标本背位放于表面有少许任氏液的蛙板上，洗净双手及用过的器械。 4.游离坐骨神经沿脊柱两侧用玻璃分针分离坐骨神经，用线在坐骨神经靠近脊柱处结扎并剪断。左手捏住脊柱，右手持剪刀从背面剪去向上突出的尾骨。然后从腹面沿中线将脊柱剪成两半。捏住两侧下肢带骨用力向两侧掰，使耻骨联合处脱臼，再从耻骨联合中央剪开两后肢，一后肢放入盛有任氏液的平皿中备用，一后肢用玻璃分针划开梨状肌及其附近的结缔组织，循坐骨神经沟（股二头肌与半膜肌之间的裂隙处）找出坐骨神经的大腿部分，用玻璃分针将腹部的坐骨神经小心勾出来，手执结扎神经的线，剪断坐骨神经的所有分支，一直游离至膝关节。 5.完成坐骨神经腓肠肌标本的制备将分离干净的坐骨神经搭于腓肠肌上，在膝关节周围剪掉全部大腿肌肉，并用普通剪刀将股骨刮干净，在股骨中部剪去`上段股骨。再在跟腱处以线结扎，剪断并游
实验1 坐骨神经腓肠肌标本制备 【实验目的】掌握蛙类的捉拿和破坏脑脊髓的方法，掌握坐骨神经腓肠肌标本的制备技术、获得兴奋性良好的标本。 【实验原理】蟾蜍及蛙类的一些基本生命活动与哺乳动物相似，又因其离体组织在短时间内所需的生活条件简单，易于控制和掌握，因此在实验中常用蟾蜍或蛙的坐骨神经腓肠肌标本来观察兴奋和兴奋性、刺激与反应及肌肉收缩等基本生理现象。因而制备坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验中必须掌握的一项基本技能。 【实验对象】蟾蜍或青蛙。 【实验用品】蛙类手术器械一套，（普通剪刀、手术剪刀、眼科剪、组织镊子、眼科镊子、探针、锌铜弓、玻璃分针、蛙板、玻璃板、蛙钉）任氏液、方瓷盘、培养皿、棉线、纱布、滴管等。 【实验步骤】 1.破坏脑和脊髓取蟾蜍一只，用左手握 住蟾蜍，食指按压头部前端，拇指按压背部， 使头部前俯；右手持金属探针由头端沿中线向 尾方划触、触及凹陷处即枕骨大孔的所在。将 探针由凹陷处垂直刺入2~3mm，刺破皮肤即入 枕骨大孔，这时将探针尖端水平转向头方，向 前探入颅腔内，然后向各方搅动探针，以捣毁 脑组织。脑组织捣毁后，将探针退出；再由枕骨大孔刺入，并水平转向尾方，与脊髓平行刺入椎管，来回抽动探针以彻底破坏脊髓。当动物四肢肌肉的紧张性完全消失时，提示脑和脊髓完全破坏（见图2-1）。 2.剪除躯干上部及内脏 在骶髂关节水平以上1～1.5cm 处剪断脊柱。左手握止蟾蜍后 肢、用拇指压止骶骨，使蟾蜍 头与内脏自然下垂，右手持普 通剪刀（严禁用手术剪剪骨 骼），沿脊柱两侧剪除一切内 脏及头胸部，留下后肢、骶骨、 脊柱以及紧贴于脊柱两侧的坐骨神经。剪除过程中注意勿损伤坐骨神经。 3.剥皮左手握紧脊柱断端（注意不要握住或压迫神经），右手捏住其上的皮肤边缘、用力向下剥掉全部后肢的皮肤（图2-2 ）
青蛙骨骼標本製作步驟 1. 先將死亡的青蛙去皮及大塊肌肉，尤其是腿部肌肉。 2. 將去皮肉的青蛙放入盛有熱水的鍋子中，繼續煮，直骨頭上殘留的肉塊變軟，並且很容易剝離去除。 3. 將已經熟爛的青蛙撈出來，小心的剔除肉屑，不必保留關節韌帶。將剔乾淨的骨骼放入肥皂水中，去除油脂。如果青蛙很大，例如牛蛙，建議將身體、右手右腳、左手左腳分別註明浸泡在不同的杯子內，以免浸泡後化開，左右拼錯。 4. 每天換肥皂水一次，並剔除殘肉，約浸泡1~3天，視青蛙大小及情況而定，直到乾淨沒有殘留的肉屑即可。換水時小心不要倒掉小骨頭，尤其是趾骨，軟骨不要泡太久，可能會溶化掉。 5. 將蛙骨骼泡在3％的雙氧水，漂白用，所以不要泡太久，約12~20分鐘。尤其是軟骨部分，稍微泡一下即可，否則會溶掉。 6. 將乾淨潔白的蛙骨，根據圖片姿勢及相對位置，仔細用膠水黏起來。若用快乾膠，小心「一失足成千古恨」，想清楚看清楚，再黏上去。通常脊椎骨的背面和腹面經常會弄錯，背面有供肌肉附著的神經脊突出，腹片則是平的。脊椎通常會散開，在拼回去時，小心各個脊椎的相對位置，不要將第一個寰椎和最後一個薦椎弄混了。胸骨的烏喙骨及鎖骨位置也經常會被弄錯，請小心比對圖片。拼骨骼的時候，請藉此機會認識各個骨骼的名稱、位置、功能及形狀，這樣比較不會弄錯。 7. 將成坐姿的蛙骨的各個部位拉線加以標示，這時可以發揮你的創意，但以清楚易懂為佳。不建議將牠們拼成怪模怪樣，畢竟牠們的犧牲是為了科學理由，不是娛樂。 8. 不建議將蛙骨上色，以保持原貌。可以塗透明漆或透明指甲油，增加光澤。 9. 將完成的蛙骨標本放入盒子類，善加保存，不過骨骼通常會隨著時間變黃。 製作骨骼標本可分為三種方法： 1. 乾製骨骼(一般的之脊椎動物骨骼) 2. 浸製骨骼(如鯊魚和鱘魚的軟骨) 3. 透明骨骼(幼小的動物和胚胎) 主要分為四個步驟： 去皮去肉去內臟 修除骨骼上附著的結締組織襪(如腱及肌膜等) 脫脂及漂白 裝置及整形 1. 先把青蛙殺死(不要傷害骨骼)，然後把青蛙放進熱水中煮數分鐘，使肉軟化。接著取出青蛙，小心地用剪刀和鉗子把外皮、肌肉及內臟除去，但不要把胸剖肋骨上的軟骨弄斷。建議先把青蛙分成五部分(頭、右手、左手、右腳、左腳)，分幾人去肉，使實驗時間可以縮短。
【材料】 小型脊椎动物如鱼、蛙、小白鼠；解剖器，标本瓶，玻璃片，注射器，绳；95％乙醇，氢氧化钾溶液，茜素红，甲醛，过氧化氢溶液，纯甘油，水合氯醛，冰乙酸，阿利新蓝-8GX，胰蛋白酶，硼砂溶液，麝香草酚，清水，重铬酸钾溶液，染色液，褪色液，稀过氧化氢溶液，染色原液，软骨染色液，硬骨染色液，胰蛋白酶混合液。 【步骤】 1.取材新鲜的小型脊椎动物，如鱼、蛙等，长度在10～20厘米，以活体为好。 2.固定 材料洗干净。如果是鱼，应该先去鳞，再洗净。然后，放入95％乙醇中固定1～2天。如果材料已经用5～10％甲醛液保存过，则要用清水漂洗后再浸在95％乙醇中，使它充分固定。 3.去皮用解剖器剥去小动物的外皮。 4.脱脂 把去皮后的标本用绳缚在玻璃片上，整理好姿势，浸在3%重铬酸钾溶液中几天，除去材料表面的脏物和脂肪粒块。当溶液变混浊时，更换新液，直到溶液不混浊为止。取出标本，用清水洗干净，再浸入95%乙醇中脱脂一周左右。 5.透明标本转入20%氢氧化钾溶液中。一周左右，见肌肉呈半透明状态，里面骨骼隐约可见，即终止透明。 6.染色把透明后的标本浸入0.01%茜素红染液中2～3天，到骨骼染上红色为止。 7.褪色先把标本放入2％氢氧化钾溶液中浸1天，然后转入褪色液中10天左右，到肌肉上的颜色褪至淡粉红为止。 8.漂白用稀过氧化氢溶液，浸至肌肉完全透明，骨骼呈紫红色为止。 9.保存先用注射器抽去标本内的气泡，再放入纯甘油中保存。 最简单的办法就是去市场上买一种叫黄粉虫的虫子，把你的鱼放在一个干的容器里，再把黄粉虫放到容器里，虫子的量和鱼的体重相等就可以，不要多了，少点没关系的。第2天早上你就可以看到一副好的鱼骨架子了。
蛙腓肠肌标本的制作和刺激与反应的关系 （一、蛙反射实验及反射弧的分析） 一、实验目的 了解反射弧的组成部分，明确反射弧的完整性与反射活动的关系二、实验原理 反射弧：完成反射活动所需的结构基础（感受器、传入神经、神经中枢、传出神经、效应器） 三、实验步骤及结果分析 将蟾蜍悬挂在铁支架上 1、分别将左右后肢趾浸入剩有浓度为1%的硫酸的玻璃皿内 结果：产生屈腿反射分析：因反射弧完整 2、去感受器：在左肢趾关节上做个环形皮肤切口，将切口以下的皮肤全部剥除， 用浓度为1%的硫酸浸泡趾尖 结果：没有屈腿反射活动出现。 分析：破坏了脚掌和脚趾皮肤中的感受器，反射弧不完整，不能引起屈腿反射。 3、剪断传入和传出神经：剪断右侧坐骨神经，用连续阈上刺激右后肢趾的皮肤 结果：无屈腿反射 分析：反射弧的传入神经破坏，造成反射弧不完整 4、损毁中枢：以探针捣毁蟾蜍的脊髓 结果：刺激躯体任何部位都无反射活动出现。 分析：神经中枢破坏，反射弧不完整。 四、注意事项 用硫酸刺激后，要立即用清水冲洗，并用纱布擦干，以免硫酸被稀释。 剥离神经时，要用玻璃分针，不要用金属器械刺激神经 （二、腓肠肌的制备） 一、实验目的 ?掌握蛙类坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。 ?应用电刺激方法测出肌肉阈刺激、阈上刺激与最适刺激的强度值 ?了解刺激与肌肉收缩的关系 二、实验原理 蛙类坐骨神经－腓肠肌标本是研究神经冲动和肌肉收缩机能等生理试验最常用的试验
材料，常用于研究兴奋性、兴奋过程、刺激的一些规律和特性。 三、实验用品器材 ?实验动物：蟾蜍 ?试剂与器材：计算机、BL-420F生物信号处理系统、手术剪、手术镊、玻璃分针、?蛙板、连接导线、烧杯、任氏液 ?棉球、棉线等 四、实验操作步骤 ㈠坐骨神经-腓肠肌标本的制备 1、破坏脑和脊髓 2、去除躯干上部、皮肤及内脏 3、剥离皮肤 将标本放在盛有任氏液的玻璃器皿中。将手及使用过的全部器械冲洗干净。 4、分离双下肢 将标本提起，剪去向上突起的骶骨，然后沿正中线将脊柱剪为两半，并从耻骨联合处剪开两侧下肢，浸入盛有任氏液的培养皿中使用。 5、辨认蛙后肢主要肌肉，找出腓肠肌。 6、游离坐骨神经和腓肠肌 取一侧下肢固定于蛙板上，固定时，坐骨神经、腓肠肌向上，先用玻璃分针沿脊柱游离坐骨神经腹腔段，分离坐骨神经直至腘窝（不要伤及神经）；再用玻璃分针分离腓肠肌，并在肌腱上穿线结扎。 7、剪去其他不用的组织 在坐骨神经两端各留一块骨头和肌肉，以便于固定。 注意：剥离时一定要保持标本完整性；尽可能用玻璃分针，少用镊子，避免刺激神经。 9、将坐骨神经-腓肠肌标本固定于蛙板上，把跟腱端的接线与张力换能器相连，调节高度与张弛度。 实验项目 刺激强度与反应关系 刺激腓肠肌：改变刺激强度（从弱到强），观察对肌肉收缩的影响；找出阈强度、最适刺激强度； 刺激神经：改变刺激强度（从弱到强），观察对肌肉收缩的影响；找出阈强度、最适刺激强度； 刺激频率与反应的关系 五、注意事项 制备标本及实验中，随时用任氏液润湿神经和肌肉，防止干燥。 刺激参数确认后，再进行刺激，防止神经肌肉损伤。 每改变一次刺激频率后，应休息0.5-1 min, 每次刺激不要超过3-4 秒，以免标本疲劳。 六、实验结果及分析
青蛙骨骼标本制作的基本步骤，分析在制作过程中应注意哪些问题（1）基本步骤：①处死：选择体形大而完整的青蛙（或蟾蜍），放入标本缸中用乙醚或三氯甲烷深度麻醉至死。②剥皮、去内脏：用剪刀剪开腹部皮肤，注意不要剪坏剑胸软骨。然后向两侧剪开，分别向前后四肢各方向拉下皮肤，要小心不要拉断指、趾骨。剪开体壁，取出全部内脏。③剔除肌肉：将体壁及附着在骨骼上的肌肉按顺序逐步剔除。④腐蚀及脱脂：把骨骼浸泡在0.5%~0.8%氢氧化钠溶液中1~3天，去除一些难以除去的肌肉，脱去骨骼中的油脂。在浸泡过程中应经常检查，以防骨骼脱散。后取出在清水中漂洗干净。⑤漂白：用0.5%~1%的过氧化氢漂白30min，或用1%~3%的漂白粉水溶液浸泡1~3天。浸泡时间应灵活掌握，主要看骨骼是否已变白，变白后马上捞出，否则，骨面会被腐蚀而变得粗糙，失去骨骼的光泽。捞出的骨骼用清水冲洗干净并晾干。⑥整形和装架：取一块泡沫塑料板，将骨骼放在上面。整形时，把躯体和四肢的姿态整理好并按骨骼相应的位置用大头针固定，以免在干燥过程中变形。离散的骨骼可用乳胶将其粘联起来。两块上肩胛骨应附着在第二、三椎骨横突的两侧，头部略抬起呈倾斜状，前肢的腕骨和后肢的趾骨可用乳胶粘在泡沫板上。骨骼标本制成后，最好装入标本盒中保存。（2）注意问题：①剥皮、去内脏时要小心不要拉断指、趾骨。②剔除肌肉时要注意：●不要将各关节间相连的韧带破坏掉。●两侧前肢带骨与脊柱间无韧带相连，可把左、右上肩胛骨的肌肉从第2、3脊椎骨横突上剥离，左右前肢与肩
带之间不要分开，仍借助韧带保持相连。●应保留四肢指趾骨关节的完整性。●剔除荐椎椎骨横突与髂骨相关节处肌肉时应保留些肌肉和韧带，避免中轴骨与腰带的脱离。③漂白时要注意控制浸泡时间，骨骼变白后马上捞出，否则，骨面会被腐蚀而变得粗糙，失去骨骼的光泽工具与材料:青蛙（或牛蛙）、解剖盘、解剖器、锅、炉、铅丝、老虎钳、台板、锯条、注射器、针头、牙刷、氢氧化钠、双氧水、四氯化碳、50％－70％酒精、乙醚。制作原理所谓骨骼标本的制作，就是通过一系列的处理，除去动物的皮肤、肌肉与内脏，保留骨骼，并经脱脂、漂白，使骨骼洁白美观，然后把骨骼支架成它原站立的姿势，供教学、研究或展览之用。制作步骤1．杀死和去皮肉等。①用乙醚将青蛙麻醉致死。②剥去青蛙的全身皮肤。③剖开腹壁，除去内脏。此时宜小心不要损坏胸骨和肋骨。④去肌肉：先把脊椎背面及腹部的肌肉粗略除去后，用水浸泡两天，可放置锅内煮熟或成半熟，但不可煮得过度。2．把附有残肉的骨骼放在6％－10％的氢氧化钠溶液中浸2－6小时（视肌肉变透明，用牙刷能除去为止），使肌肉腐败，并能溶去脂肪及措出。一但是对于附有韧带的骨骼，浸渍不宜过度，否则会导致韧带腐败。所以在浸渍时，应时观察。浸渍后用水清洗，洗去氢氧化钠，最后清除脑及脊髓。3．固定。经过浸渍的标本，放在50％－70％的酒精中固定（1一7天），使韧带固定硬化。4．脱脂。将韧带已固定硬化的标本浸入四氯化碳中，6－8小时，取出来再用热水（正沸的开水更好）冲洗（骨骼全部浸入开水中），骨骼里的脂肪即可除去。5．漂白。将标本浸入10％－15％双
实验1 蛙坐骨神经–腓肠肌标本制备、 刺激频率对肌肉收缩的影响 【目的要求】 1.学习坐骨神经–腓肠肌标本的制备方法。 2.分析探讨刺激频率对肌肉收缩的影响。 【原理】 刺激坐骨神经能引起腓肠肌产生收缩。在其他条件不变情况下，不断增大刺激频率可引起肌肉收缩形式发生改变。若刺激频率较小，两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩和舒张所持续的时间（即单收缩）时，肌肉收缩表现为一连串的单收缩；若增大刺激频率，使两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩的收缩期时间，而小于单收缩时，肌肉呈现不完全强直收缩；若继续增加刺激频率，使两次刺激间隔时间小于一次肌肉收缩的收缩期时间，肌肉则表现出完全强直收缩。 【器材】 蟾蜍或蛙；任氏液；二道生理记录仪、双脉冲刺激器、肌槽、常规手术器械、玻璃分针、毁髓针、锌铜弓、解剖盘、烧杯、滴灌、任氏液等。 【步骤】 1、双毁髓：左手握蟾蜍，背部向上。用食指按压其头部前端，拇指压住躯干的背部，使头向前俯；右手持毁髓针，由两眼之间中线向后方划触，触及两耳后腺之间的凹陷处即是枕骨大孔的位置。将毁髓针由凹陷处垂直刺入枕骨大孔，然后针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，以毁脑组织。再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。脊髓彻底捣毁时，可看到蟾蜍后肢突然蹬直，然后瘫软，此时的动物为双毁髓动物。 2、剥制后肢标本：左手持手术镊提起两前肢之间背部的皮肤，右手持手术剪横向剪断皮肤，然后往后肢方向撕剥皮肤。剪开腹壁肌肉，用手术镊提起内脏，翻向头部，在看清支配后肢的脊神经发出部位后，于其前方剪断脊柱。 3、分离两后肢：将去皮的后肢腹面向上置于解剖盘上，右手持金冠剪纵向剪开脊柱，再剪开耻骨联合，使两后肢完全分离。 4、分离坐骨神经：将一侧后肢的脊柱端腹面向上，用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经，股部沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的裂缝，找出坐
青蛙和雏鸡透明骨骼标本的制作 透明骨骼标本因其清晰美观，立体感非常强，骨骼的原位观察效果非常好，可显现一般解剖方法难以观察清楚的结构，可广泛用于生物教学中。本实验采用茜素红对小型脊椎动物青蛙、雏鸡硬骨染色［1］，在经甘油透明，使青蛙和雏鸡全部骨骼在不受任何损伤的情况下清楚的展示出来，并通过对透明骨骼标本制作工艺的改进，使制作时间缩短，标本质量得到改善。现将有关情况报告如下： 1. 材料和方法 1.1 实验材料 透明骨骼标本材料要求为活体或刚死不久的动物［2］，体型要完整而小，这样其体壁就相对薄，染色透明效果就好。另外，动物的体色要较纯白的，减少体色对透明的影响［3］。为达到 这些要求本实验选用青蛙以及刚孵化不久的雏鸡为实验材料。 1.2 制作方法 1.2.1 材料前处理 1.2.1.1 剥皮：雏鸡去毛和皮，青蛙去皮。目的就是提高药物对材料的透性效果。注意不要伤及骨骼和肌肉，以免影响观察效果。 1.2.1.2 去内脏：在雏鸡和青蛙的肛门口向上开一小口，用镊子取出内脏，要取干净，增强透明度［4］。同时要注意体形 的完整，最后分别放用清水慢慢冲洗干净。
1.2.2 固定 用95%的乙醇固定，使材料硬化以及起到脱脂的作用。具体过程如下：把处理好的标本绑在厚约0.5 cm 的玻璃板上，整理好姿势浸在95%乙醇中。时间要根据动物的体形大小，一般4〜6 天，其中可更换1〜2次新液。固定后的材料用清水缓慢冲洗一天或浸在水中一天，去除残留的乙醇。 1.2.3 透明 用1%K0透明，此步骤的目的是使动物肌肉呈半透明状，另外KOH还起到脱脂的作用，从而可隐约看到里面的骨骼。具体过程是：将固定好的标本浸入1%K0溶液中，在透明过程中要注意观察，浸制的时间不要太长，否则会因为肌肉腐蚀过度导致骨骼离散，所以只要隐约看见软组织下的骨骼就停止。一般透明时间是2〜4 天，但要注意随时观察。特别是在夏天，温度高，透明时间要特别注意。 1.2.4 茜素乙醇染色液染色把标本再放入茜素红乙醇染色液中进行骨骼染色。茜素红乙醇染色液配方是：先将茜素红染料溶于95% 的乙醇中制成饱和溶液，然后用一份配好的此饱和溶液和九份70%的乙醇混合配制 成适于骨骼染色的染色剂。标本浸制在染色液中的时间是12〜36 小时，但还得按实验效果为标准即骨骼染上橙黄色为止。 1.2.5 褪色 用梯度脱色液进行褪色，梯度酒精为（25%，50%，100%），
青蛙骨骼标本的制作实验论文 小组成员：2009301060059邵明2009301060060夏显 2009301060061陈探2009310160063任意 单位：生命科学学院生物学基地2班 摘要：通过一系列的处理，除去动物的皮肤肌肉与内脏，保留骨骼，并经脱脂、漂白，使骨骼洁白美观，然后把骨骼支架成它原站立的姿势，通过对骨骼的观察可以了解骨骼的结构其对环境的适应性及不适应性。 关键词：牛蛙；骨骼；煮。 前言：生物教学中为了加深对蛙类骨骼的认识，及其对环境的适应性，不少高校都选择了“青蛙骨骼标本制作”试验，并普遍采用青蛙（或牛蛙）作为实验材料。因此，该实验成为两栖类学习中的一个十分重要的试验。但是，由于青蛙骨骼较小易丢失，且易碎，就不容易得到完整的骨骼标本，所以需要在试验过程小心谨慎。 在本次试验中，通过对骨骼的制作了解学习了青蛙骨骼的结构及其对环境的适应性，但是由于粗心大意丢失了少数细小骨骼，但骨骼大体保持了其完整性。 材料与方法: 材料：青蛙一只（或牛蛙）、解剖盘两个、解剖器具一套、锅炉一套、铜丝（14号与16号）若干、老虎钳、牙刷、洗衣粉、乙醚、502胶水 方法：1.1用乙醚将青蛙麻醉致死 1.2剥去青蛙的全身皮肤 1.3剖开腹壁，除去内脏。此时宜小心不要损坏胸骨和肋骨 1.4去肌肉：先把脊椎背面及腹部的肌肉粗略除去，再去掉大腿上的大块肌肉 1.5将洗衣粉放入煮开的水中，将牛蛙放入锅中，煮至肉可以轻易刷下为止 1.6把漂白好的骨块用502粘好，放正姿势然。后用适当大小的铜丝把 骨骼连接，支架起来，使现出原来的姿势，并固定在台板上，或放置在标本盒中。结果与讨论：
青蛙骨髓细胞染色体标本的制备及染色体的核型分析 陈钧瑜 （中山大学生命科学学院08级生物技术广州510275） 摘要：染色体组型具有物种的特异性，它们在遗传过程中是相对稳定的，因此可以作为物种分类的基本依据之一。本实验以青蛙的骨髓为材料，制备了青蛙骨髓细胞染色体标本，选择形态完好的中期分裂相进行拍照放大，用常规统计方法测量染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数等。结果表明青蛙骨髓细胞二倍染色体数目为26，可配成13对同源染色体，其中有5对大型染色体（相对长度>9%）和8对小型染色体（相对长度<7%）；8对为中部着丝粒染色体，其余5对为亚中部着丝粒染色体。青蛙骨髓细胞染色体核型公式为K(2n)=26 =13n=16m+10sm。 关键词：青蛙；骨髓细胞；染色体；核型 1、引言 核型一词首先由前苏联学者TA 列维茨基等在上世纪20 年代提出,它是指每种生物染色体的数目、大小和形态等特征的总和。染色体核型或组型分析(Chromosome karyotype analysis) 是染色体研究中的一个基本方法。染色体组型是细胞分类学的重要数据，也是从细胞遗传学角度了解物种间亲缘关系的有效途径，对染色体核型分析,不仅有助于了解生物的遗传组成、遗传变异规律和发育机制,而且对预测鉴定种间杂交和多倍体育种的结果、了解性别遗传机理以及基因组数、物种起源、进化和种族关系的鉴定都具有重要的参考价值[1]。 骨髓细胞具有丰富的细胞质和高度分裂能力，因此不必经体外培养，也不需要植物血球凝集素（PHA）的刺激，可直接观察到分裂的细胞。经秋水仙素处理后，分裂的骨髓细胞被阻断在有丝分裂中期，再经离心、低渗、固定、滴片等步骤，便可制作出理想的染色体标本，是研究动物细胞遗传学的好材料。用Giemsa染色法制备骨髓细胞染色体标本，所得标本清晰无缺失与重叠[2]，用显微拍摄技术采集染色体的电子图片信息，后期用Adobe公司的Photoshop软件优化处理照片[3]]，获得完整、清晰的染色体核型，并采用Levan[4]的方法进行核型分析。 2 材料与方法 2.1 材料 青蛙 2.2 方法 2.2.1 实验方法[2] （1）秋水仙素处理：实验前3～4小时，按动物每克体重2～4μg的剂量，腹腔注射秋水仙素。 （2）取股骨：处死动物后，立即取出股骨，用刀片剔掉肌肉。 （3）收集骨髓细胞：用刀片剪开股骨的两端，用盛有生理盐水的注射器插入股骨的上端，冲出骨髓细胞至离心管中，。将收集的骨髓细胞平衡后放入离心机，以1000r/min 离心10min。 （4）低渗处理：弃上清液，加入6ml蒸馏水，用吸管轻轻吹打成细胞悬浮液，置37℃温箱中低渗20min。 （5）预固定：加入5滴新配的固定液，立即打匀，并以1000r/min 离心10min后，弃上清液。 （6）固定：沿管壁慢慢加入6ml固定液，立即用吸管吹打成细胞悬液，室温下固定20min。1000r/min 离心10min后弃上清液。 （7）重复步骤6的操作。 （8）沉淀物中加入0.3~0.5ml固定液，用吸管吹打成细胞悬液。 （9）滴片：用镊子去预先冰冻的干净载玻片，迅速滴上2~3滴细胞悬浮液，立即用嘴向同一方
实验二蛙和蟾蜍神经肌肉标本制备 一、实验目的 熟悉并掌握蛙和蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。属于急性实验中的离体实验。 原理：两栖类动物的离体组织器官可在室温下，于一定时间内保持其机能，故常用作生理学实验的材料。蛙或蟾蜍坐骨神经腓肌肠标本，常用来研究兴奋性、兴奋过程、刺激的规律以及肌肉的收缩特点等。制备坐骨神经腓肌肠标本是生理实验的一项基本操作技术。 可兴奋细胞包括：神经细胞、肌肉细胞 兴奋的传递：神经细胞之间突触传递；神经细胞与肌肉细胞之间采用接头传递。 二、实验仪器及材料 牛蛙（Rana catesbeiana），手术剪1把，虹膜剪刀1把，大、小镊子各1把，刺蛙针1根，玻璃分针2根，小玻璃板和蛙板各1块，培养皿1个，烧杯1个，滴管1支，棉线、纱布、任氏液、锌铜弓。 三、实验方法与步骤 1、破坏脑和脊髓取一只牛蛙，洗净蛙体，用左手握蛙，并用食指按压其头部前端，拇指按压背部，使头前俯；右手持刺蛙针由头前端沿中线向尾方划触，触及凹陷处即枕骨大孔处。将刺蛙针转向头方，向前探入颅腔，然后向各方搅动刺蛙针，以捣毁脑组织。脑组织捣毁后，将刺蛙针退出；再由枕骨大孔刺入，并转向尾方，与脊柱平行刺入脊管，以破坏脊髓。脑和脊髓完全破坏后，动物四肢肌肉的紧张性完全消失。拔出刺蛙针后，用一小干棉球堵住针孔止血。2.剪除躯干上部、皮肤及内脏用左手捏住蟾蜍的脊柱，右手持粗剪刀在前肢腋窝处连同皮肤、腹肌、脊柱一并剪断，然后左手握住蟾蜍的后肢，紧靠脊柱两侧将腹壁及内脏剪去(注意避开坐骨神经)，并剪去肛门周围的皮肤，留下脊柱和后肢。 3.剥皮一只手捏住脊柱的断端（注意不要捏住脊柱两侧的神经），另一只手捏住其皮肤的边缘,向下剥去全部后肢的皮肤（图2）。将标本放在干净的任氏液中。将手及使用过的探针、剪刀全部冲洗干净。 4.分离两腿用鑷子取出标本，左手捏住脊柱断端,使标本背面朝上，右手用粗剪刀剪去突出的骶骨（也可不进行此步）。然后将脊柱腹侧向上，左手的两个手指捏住脊柱断端的横突，另一手指将两后肢担起，形成一个平面。此时用粗剪刀沿正中线将脊柱盆骨分为两半(注意，勿伤坐
生理学实验一、蛙（蟾蜍）坐骨神经腓肠肌标本制备 【实验目的】 1. 掌握蛙类坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。 2. 观察组织的兴奋性、刺激与反应律以及骨骼肌收缩的特点。 【实验原理】 蛙和蟾蜍是两栖类动物，其生存环境较简单，离体组织或器官所要求的条件也较简单。坐骨神经和腓肠肌属于可兴奋组织，把它们置于人工配制的林格液中，其兴奋性在几个小时内保持不变。若给坐骨神经一个适宜的刺激，可在神经和肌肉上产生一个可传导的动作电位，肉眼可以看到一次肌肉的收缩和舒张，表明神经和肌肉兴奋了一次。 【实验材料】 实验对象：蟾蜍或蛙。 实验器材：蛙板、玻璃分针、粗剪刀、眼科剪刀、尖镊子、培养皿、锌铜弓。 实验试剂：任氏液 【实验方法】 坐骨神经腓肠肌标本的制备可采用离体或在体的方法。 1 、离体坐骨神经腓肠肌标本制备 （ 1 ）破坏脑脊髓：取蟾蜍 1 只，以左手示指压其头部前端使其尽量前俯，中指与示指夹住其前肢，拇指抵住其骶部，使整个躯干做最大屈曲，后肢悬空。探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，随即将探针改变方向刺入颅腔，向左右两侧不断搅动，彻底捣毁脑组织。将探针退出至枕骨大孔处，转向后刺入椎管，捻动探针使其逐渐刺入整个椎管内，完全捣毁脊髓。脑脊髓完全破坏的标志是：下颌呼吸运动消失，反射消失，四肢松软。 （ 2 ）去除头部和内脏：左手握住蟾蜍后肢，此时躯干上部及内脏即全部下垂。右手持粗剪刀在骶髂关节前 1cm 处剪断脊柱，剪除全部躯干及内脏组织，注意勿损伤神经。 （ 3 ）去皮：用圆头镊子夹住脊柱，注意不要碰到神经，捏住皮肤边缘，逐步向下牵拉剥离皮肤。全部皮肤剥除后，把标本置于盛有林格液的培养皿中。 （ 4 ）双手和用过的全部手术器械。 （ 5 ）分离两后肢：避开坐骨神经，用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿中线将脊柱剪成左右两半，再从耻骨联合中央剪开两腿，将已分离的下肢标本浸入盛有任氏液的培养皿中保存。
2012级应心班《人体解剖生理学》实验容 一、人体基本组织的观察 （一）实验目的 观察并掌握人体四大基本组织的结构特点及功能。 （二）实验材料 四大基本组织的永久装片；显微镜 （三）实验要求 正确使用显微镜，观察各种组织的基本特征。 注：实验前请复习四大基本组织的结构特点和功能。 二、人神经系统的形态观察 （一）实验目的 1.观察脊髓的形态结，了解脊神经的组成。 2.观察脑干的的形态结构和脑神经进出脑干的部位，了解脑干中的主要神经核团和纤维束的位置。 3.观察间脑、小脑和大脑的形态结构，辨认大脑半球的主要沟、回和分叶。 （二）实验材料 脊髓模型；脑干模型；人脑模型；脊髓横切片；显微镜 （三）实验要求 观察各模型加深对神经系统的认识；正确使用显微镜，观察脊髓横切片。 注：实验前请复习神经系统的结构组成和功能。 三、反射弧的分析和脊髓反射的观察 （一）实验目的 1.通过用脊蛙（去除脑保留脊髓的蛙，成为脊蛙）分析屈肌反射的反射弧的组成部分，探讨反射弧的完整性与反射活动的关系。 2.观察脊髓的反射活动并研究脊髓反射中枢活动的若干特征。 （二）实验原理 （三）材料与方法 1 材料 1.1 实验动物青蛙 1.2 器材蛙类手术器械1套，铁支架，电刺激器，刺激电极，秒表，棉球，纱布，培养皿2个，烧杯 1.3 药品 0.5%硫酸，1%硫酸 2 试验方法与步骤 2.1 制备脊髓动物：取青蛙一只，用剪刀横向插入口腔，从鼓膜后缘处剪去颅脑部，保留下颌部分。以棉球压迫创口止血，然后用止血钳夹住下颌，悬挂在铁支架上。 2.2 正常脊髓反射的观察 2.3 搔扒反射：将浸以0.5%硫酸的小滤纸片一块，贴在青蛙腹部下段的皮肤上，可见四肢向此处搔扒，直到去掉滤纸片为止，之后用清水冲洗皮肤。 2.4 反射时的测定：用培养皿分别盛0.5%和1%硫酸溶液，将青蛙左后肢的脚趾尖浸于硫酸溶液中，同时用秒表记录从浸入时起到发生屈腿发射所需的时间，即反射时。观察后立即将该足趾浸入清水中浸洗几次，然后用纱布拭干。按上法重复三次，求其平均值，此值即为反射时。 2.5 将两对电极连接到刺激器 2.6 反射弧的分析 2.6.1 剥去左肢皮肤：在左侧后肢趾关节上方，将皮肤作一环状切口，将足部皮肤剥掉。 2.6.2 1%硫酸刺激左趾尖，观察腿部活动情况。 2.6.3 1%硫酸刺激右趾尖，观察腿部活动情况。 2.6.4 1%硫酸滤纸片贴在左小腿切口上面的皮肤上，观察活动情况。 2.6.5 分离右侧大腿背侧坐骨神经干，两侧结扎，中间剪断，1%硫酸刺激右趾尖，观察