红细胞血型抗体筛选、鉴定操作规程(SOP)
目的:规范红细胞血型抗体筛选、鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。
职责: 输血科技术人员负责红细胞血型抗体筛选、鉴定。
适用范围: 适用于输血科抗体筛选血标本、疑难血型标本及疑难配血标本。
所需材料和设备:抗球蛋白试剂、筛选细胞、谱细胞、患者血标本、生理盐水、小试管、滴管、普通离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱、显微镜。
抗体筛选操作步骤
1.取试管三支，分别标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ；各加入患者血清2滴，再分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞2滴。
2.混匀，37oC孵育1h。
离心15s。
4.轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。若肉眼不见凝集，以显微镜检查。
5.对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤3次。
6.最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。
7.按试剂说明书加最适稀释度抗球蛋白试剂1滴，充分混合。
离心15s。轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。
抗体鉴定操作步骤
1.抗体筛选阳性，应作抗体鉴定试验已确定其特异性。
2依据谱细胞数量的多少(一般由8—16个单人份的已知血型表型的0型红细胞组成)取相应数目的试管，分别标记序号，各加入患者血清2滴，再分别加入谱细胞2滴。
3.混匀，37oC孵育1h。
离心15s。
5.轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。若肉眼不见凝集，以显微镜检查。
6.对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤3次。
7.最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。
8.按试剂说明书加最适稀释度球蛋白试剂1滴，充分混合。
离心15s。轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。
抗体筛选新方法 肿瘤、炎症、自身免疫性疾病(如:红斑狼疮、类风关、克隆氏病、多发性硬化)、神经退行性疾病、传染疾病等多种疾病中,患者体内都会产生与累积大量的自身抗体,有些自身抗体在特定疾病的早期,甚至就是疾病的可视化症状出现之前就已经出现(图1),这为疾病的早期诊断提供了可靠地生物标志物;而有些自身抗体则就是机体抵抗疾病侵袭的自身保护性抗体,这则为疾病的治疗提供了新的思路,正如全球知名的制药巨头提供的数据显示,大型制药公司利润的60%已经来自属于抗体的药物(图2)。 图1、自身抗体往往出现在疾病的可视化症状之前 图2、大型制药公司60%的利润已经来自抗体类药物 那么,如何发现这些潜在的自身抗体呢？。目前,最适合筛选自身抗体的方法为蛋白质芯片法,一张蛋白芯片往往有成千上万种蛋白质点,可以一次性筛选一个样本中可以与这些蛋白质相互作用的自身抗体,再通过标有荧光标志物的抗Human IgG的二抗进行孵育以及荧光检测,就可以发现这些自身抗体(图3)。
图3、蛋白芯片筛选自身抗体过程示意图 原理很简单,但就是却很难做好,为什么呢？这就不得不说一下抗体与抗原的结合过程了。简而言之就就是对应抗体识别抗原上特异的抗原表位,然后结合上去。而抗原表位分为两种,线性表位(Linear epitope)以及非连续性表位(discontinuous epitope)。线性表位由一段连续的氨基酸序列组成,识别线性表位的抗体识别这段氨基酸序列并产生抗原抗体的结合反应;而非连续性抗原表位则由不连续的氨基酸组成,通过抗原蛋白质的正确折叠之后,靠近在一起,被相应抗体识别,产生抗原抗体结合反应(图4)。 图4、线性表位与非连续性表位被对应抗体识别并结合示意图 在生物体内,大多数的自身抗体就是识别抗原的非连续性表位的,正确识别筛选出这些自身抗体,就需要蛋白质芯片上的蛋白质就是全长、正确折叠并且有生物功能的。可就是,传统的蛋白质芯片只能保证芯片上合成的蛋白质就是全长的(有些还不能保证),无法保证蛋白质正确折叠,更无法保证相应蛋白质具有正常的生物功能。其她影响传统蛋白质芯片筛选自身抗体的问题还包括CV值(coefficient of variation)高(>30%),可重复性不好;分辨率低,背景信号高,无法分辨出表达含量较低的自身抗体等。用这样的蛋白质芯片筛选自身抗体,就好比用一
Q/HBY 抗体检验标准操作规程 杭州博茵生物技术有限公司发布
前 言 本规范由杭州博茵生物技术有限公司提出。 本规范起草单位:杭州博茵生物技术有限公司。 本规范主要起草人：李因来、徐东鑫、陈浙、潘剑用。本规范于2016年7月27日首次发布
编制人陈浙日期2016.07.26部门抗体研发部审核人徐东鑫日期2016.07.27部门质量部 批准人潘剑用日期2016.07.27部门抗体研发部发放编号Q/HBY QF0001‐2016生效日期2016.07.27 抗体检验标准操作规程 1.目的 对单克隆抗体成品的检验操作做出规定，以保证成品质检结果的准确性。 2.范围 适用于下述第6条“合格标准”表格中所列抗体成品的效价测定。 3.职责 操作人员依据本规程进行抗体检验。 4.材料与设备、试剂与溶液 见下述相关文件。 5.检验方法 5.1外观 包装完好，无漏液现象，标签准确。 5.2物理性能 自然光下目测，观察产品溶液是否澄清、是否有沉淀或悬浮物。 5.3浓度 按QC-0004《抗体浓度测定（A280）标准操作规程》测定样品的浓度。 5.4纯度 将样品稀释到1mg/ml，按QC-0003《蛋白SDS-PAGE检测标准操作规程》进行检测并作记录。其中，样品缓冲液含DTT或β-巯基乙醇，样品应加热处理，浓缩胶浓度为3%，分离 胶浓度为12%，染色方法为考染。 5.5效价 按QC-0002《效价检测标准操作规程》进行。
6.合格标准 项目 产品 M010101M010102 外观包装完好，无漏液现 象，标签准确 包装完好，无漏液现 象，标签准确 物理性能无色澄清液体、无沉 淀、无悬浮物 无色澄清液体、无沉 淀、无悬浮物 浓度≥3mg/ml，且偏差± 5% ≥3mg/ml，且偏差± 5% 纯度≥95%≥95% 效价 1.28ng/ml 1.28ng/ml 7.相关文件 QC-0002《抗体效价检测标准操作规程》 QC-0003《蛋白SDS-PAGE检测标准操作规程》 QC-0004《抗体浓度测定（A280）标准操作规程》 8.相关记录 QF-0001-RE-01《抗体检验报告》 QF-0002-RE-01《抗体效价检测记录》 QC-0003-RE-01《蛋白SDS-PAGE检测记录》 QC-0004-RE-01《抗体浓度测定（A280）记录》
Excel高级筛选条件区域设置 learning Excel中的“自动筛选”功能大家也许并不陌生，对于条件简单的筛选操作，它基本可以应付。但是，最后符合条件的结果只能显示的在原有的数据表格中，不符合条件的将自动隐藏。若要筛选含有指定关键字的记录，并且将结果显示在两个表中进行数据比对或其他情况，“自动筛选”就有些捉襟见肘了。“傻瓜相机”毕竟功能有限，那么就让我们来试试“高级相机”吧！熟练运用“高级筛选”，无论条件多么复杂，都能一网筛尽。人力资源部的小李最近在做员工表格统计时，就尝到了甜头。 一、特定字符一步筛 现在在这份表格中，小李要查找姓“陈”的所有员工记录，他想了想，很快获得了结果。 如图1所示，在数据区域外的任一单元格（如B17）中输入被筛选的字段名称“姓名”，在紧靠其下方的B18单元格中输入筛选条件“陈*”。然后依次单击“数据→筛选→高级筛选”命令，在弹出的“高级筛选”对话框，选择筛选方式中的“将筛选结果复制到其他位置”单选按钮。将“列表区域”设置为“$A$1:$F$15”，“条件区域”设置为“$B$17:$B$18”，“复制到”设置为“$A$20:$F$20”，单击“确定”按钮，系统便自动将符合条件的记录筛选出来，并复制到指定的从A20开始的单元格区域中（如图2所示）。
小提示：如果在图1的B18单元格中输入筛选条件“*陈”，可筛选名字中含有“陈”字的员工记录（即“陈”字不一定是名字中的第一个字，该字可在名字中的任意位置）。 二、空白数据巧妙筛 接下来小李还需要查找没有职称员工的记录，如何进行呢？ 如图3所示，他先在数据区域外的任一单元格（如E17）中输入被筛选的字段名称“职称”，然后在紧靠其下方的E18单元格中输入筛选条件“<>*”。 下一步，打开“高级筛选→将筛选结果复制到其他位置”，设置好“列表区域”、“条件区域”和
纳米抗体库富集步骤： 1）抗原包被、宿主菌接种：取30μg抗原，溶解到1ml包被缓冲液（pH=9.6）中，加入到Maxisorp免疫试管（Thermo Nunc）中，4℃静置12h； 从平板上挑取一个TG1单菌落至10ml 2×TY培养基中，37℃摇床摇过夜，次日重新1：100接种用于筛库； 2）封闭：免疫试管PBST、PBS分别清洗5次，3% BSA 3ml加入到免疫试管中，于混合器上缓慢滚动封闭2h； 3）准备宿主菌：过夜菌以1:100的比例提前2.5h（相对于第六步侵染）重新接种于新鲜的2×TY中，于37℃摇床扩增培养，保证在第6步侵染时OD600达到0.4~0.6（大肠杆菌OD600=1.0，大肠杆菌浓度为109/ml左右）； 4）加抗体库：免疫试管PBST、PBS分别清洗10次（每次洗液需静置几秒钟），加入500μl原抗体库+500μl3% BSA，微量振荡器上室温剧烈滚动1h，然后室温静置1h； 4）酸洗脱：免疫试管PBST、PBS分别清洗10次（每次洗液需静置几秒钟），尽量倒干管内液体，以免残留液影响到下一步洗脱液的pH值，而影响洗脱效果； 洗脱液10mM的HCl（pH=2.0）800ul（应少于抗原包被量）加入到免疫试管中，室温剧烈震荡30min后，将洗脱液转移到到无菌的50ml离心管中，用260μl Tris-HCl（pH=8.0）中和至pH值7.0左右），大约可以洗脱106~8个纳米抗体噬菌体； 5）侵染TG1：向上所得洗脱液中加入5ml新鲜的TG1（OD600=0.4~0.6），混匀后，37℃静置40分钟，然后将侵染液稀释1000倍（取侵染液1μl加入到1ml的2×TY液体培养基中），然后分别取10μl、50μl稀释液分别涂布于Amp平板上（同时进行阳性和阴性对照），平板倒置于37℃孵箱内孵育过夜，根据平板上的细菌数目计算从免疫试管上洗脱下来的噬菌体的数目； 6）M13K07侵染：剩下的侵染液加入5ml新鲜的2×TY于37℃摇30分钟，然后加入5μl 的M13K07（约1011个噬菌体），37℃放置1h，4500rpm室温离心10分钟，弃上清，沉淀重悬于50ml新鲜的2×TY培养基中，加Amp至100ug/ml，Kan至50ug/ml，葡萄糖加至1%，30℃，200rpm摇16-20h； 7）纯化富集抗体库：将过夜菌转移到无菌50ml离心管内，4800rpm，4℃离心20分钟，上清液转移到新管中，按照1/5的体积比例加入40%PEG 4000＆2.5 M NaCl 液，强烈震动后冰浴30分钟。4800rpm，4℃离心20分钟，弃上清，沉淀重悬于1ml无菌PBS缓冲液中，然后再于12000rpm，室温离心5分钟，取上清，即为筛选第一轮的抗体库； 8）滴度测定：OD268进行滴度测定，当OD268=1.0时，噬菌体的浓度为5×1012个/ml； 9）第2、3、4、5轮次，可以按照以上步骤重复。 Nunc孔筛选与免疫试管筛选操作上的不同： （1）包被：先于37℃包被1h，然后于4℃包被过夜（250ul/孔）； （2）封闭：分两步封闭，先是乙醇胺活性位点封闭，然后再BSA等非活性位点封闭； （3）清洗：在BSA封闭之前都只能用PBS清洗孔，BSA封闭完后再用PBST，
Excel中表格进行高级筛选多列多条件的操作方法 一、筛选出美国且订购额大于2000的记录。 步骤1：选定数据源区域A2:E22 步骤2：数据/排序和筛选/高级，出现对话框 步骤3：对话框中“列表区域”的值，就是前面选定的范围;在“条件区域”的值中，点一下，再选定条件区域(本例是G3:H4)。 步骤4：在对话框中“方式”选项下，勾选“将结果复制到其他位置”;然后在“复制到”后面输入要存放结果的第一个单元格。(本例选择M1：Q1) 步骤5：点击“确定”即可完成，结果如图。 二、筛选出刘远订购额大于1000，或者张自中订购额小于800的记录 步骤1：选定数据源区域A2:E22(图同上)。 步骤2：数据/排序和筛选/高级，出现对话框 步骤3：对话框中“列表区域”的值，就是前面选定的范围;在“条件区域”的值中，点一下，再选定条件区域(本例是G6:H8)。 步骤4：在对话框中“方式”选项下，勾选“将结果复制到其他位置”;然后在“复制到”后面输入要存放结果的第一个单元格。(本例选择M5:Q5) 步骤5：点击“确定”即可完成，结果如图。 三、筛选赵小且订购额小于1000，或美国张自中订购额大于1000，或定单号为10255的记录 步骤1：选定数据源区域A2:E22(数据源同上图) 步骤2：数据/排序和筛选/高级，出现对话框
步骤3：对话框中“列表区域”的值，就是前面选定的范围;在“条件区域”的值中，点一下，再选定条件区域(本例是G11:J14)。 步骤4：在对话框中“方式”选项下，勾选“将结果复制到其他 位置”;然后在“复制到”后面输入要存放结果的第一个单元格。 (本例选择M10:Q10) 步骤5：点击“确定”即可完成，结果如图。
综述doi:10．3969／j．issn．1009－0002．2010．04．031 噬菌体抗体库技术及其应用研究进展 潘博1，2，童贻刚1 1．军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071； 2．东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨150030 ［摘要］噬菌体呈现抗体库是近年发展的一项分子生物学新技术，它的建立是抗体技术领域中的一次革命性进展。它以其独特的构建和筛选系统，彻底改变了抗体制备的传统途径，使抗体工程技术进入了一个新的发展阶段，并对生物学领域中许多技术的发展起到了巨大的推动作用。该技术是迄今发展最成熟、应用最广泛的制备抗体技术。我们简要综述此项技术的研究应用进展。 ［关键词］噬菌体抗体库；抗体人源化；抗体工程技术 ［中图分类号］R392．1［文献标识码］A［文章编号］1009－0002(2010)04－0581－05 Phage Antibody Library Technology and its Application PAN Bo1,2,TONG Yi－Gang1 1．State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity,Beijing Institute of Microbiology and Epidemiology,Beijing 100071;2．College of Veterinary Medicine,Northeast Agricultural University,Haerbin150030;China ［Abstract］Phage－displayed antibody library is a new thchnique which has been developed very rapidly and leads to revolution in the area of antibody engineering in recent years．This technology employes an unique system of antibody construction and screening,and changes the classical method of antibody preparation completely．It pro-motes antibody engineering,into a new developing stage and improves many other technologies in biological fields．So far phage antibody library is the most developed and widely applied technique in the field of antibody prepara-tion．In this review,we focused on the progress of this technique． ［Key words］phage antibody library;antibody humanization;antibody engineers and technicians 抗体是机体防御系统的重要分子，用于识别和清除外来入侵物。自19世纪末发现抗血清能中和细菌毒素以来，制备抗体技术的研究经历了3个发展阶段。第一阶段为抗血清多克隆抗体，即第一代抗体。第二阶段始自1975年德国学者Kohler和英国学者Milstein应用杂交瘤技术制备了鼠单克隆抗体[1]，即第二代抗体。这类抗体具有纯度高、特异性好、能无限传代等优点。然而，当把第二代单克隆抗体应用于人类疾病治疗时，由于单抗的异源性特点，常会引起人抗鼠抗体（human anti－mouse anti-body，HAMA）反应，导致治疗不能持续有效地进行。虽然人们一直希望用这种技术制备出人单克隆抗体，但却因人的染色体易丢失、杂交瘤不稳定、产量低及亲和力差等因素，用人杂交瘤技术[2－3]制备人源单抗进展缓慢。因此，围绕着如何生产人源化单克隆抗体，对现有鼠源性单克隆抗体进行人源化改造等问题，第三代抗体—— —基因工程抗体应运而生，它包括嵌合抗体、改形抗体和用抗体库技术制备的抗体。目前，抗体工程领域中最突出的研究进展就是噬菌体抗体库技术。该技术的出现开创了一条简便、快捷的基因工程抗体生产路线[4]，并在许多领域得到了广泛应用，已显示出强大的生命力。 1噬菌体抗体库技术的基本原理 噬菌体抗体库技术的产生主要依赖于3项技术的进展：一是PCR技术的出现，使人们可以用一套引物，通过RT－PCR，直接从总RNA中克隆出全套免疫球蛋白可变区基因[5]；二是大肠杆菌分泌有结合功能的免疫球蛋白分子片段获得成功[6]；三是建立了噬菌体表面展示技术[7]。在此3项技术的基础上，噬菌体抗体库技术的操作路线变得十分便捷。其 ［收稿日期］2010－01－13 ［作者简介］潘博（1984－），男，硕士研究生， （E－mail）panbo198401＠yahoo．com．cn
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程 (一)检验目的 检测孕妇产前与其丈夫ABO及Rh血型相容性、孕妇IgG 抗体效价、产后新生儿体内不相容抗体存在情况、新生儿与产妇之间血型相容性，为新生儿溶血病的预防、诊断及治疗提供可靠的实验室依据。 (二)检验原理 新生儿溶血病是由母婴血型不合，母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内，破坏新生儿或胎儿红细胞而引起，可发生在胎儿期和新生儿早期，溶血严重者可出现死胎而流产，存活者则有不同程度的新生儿黄疸。新生儿溶血病产前诊断方法主要包括检测胎儿父母的ABO及Rh血型、孕妇不规则抗体筛查、外周血抗A ／抗B或Rh抗体效价来判断新生儿溶血病发生的可能性及严重程度；新生儿溶血病产后诊断主要包括母子ABO及RhD 血型鉴定试验、新生儿标本三项试验，为临床诊断及进一步采取治疗手段提供可靠的依据。 (三)适用范围 适用于新生儿溶血病产前、产后血型血清学试验。 (四)设备性能参数 参见血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Ortho BioVue离心机及各全自动血型／配血系
统使用说明书。 (五)器材与试剂 1.器材血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Or-tho BioVue离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液枪、一次性移液枪头。 2.试剂DiaMed ABO／RhD血型卡、OrthoBioVueABO ／RhD血型卡、抗A、抗B血清、Rh分，型血清、生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆)、抗体筛查试剂红细胞、抗体鉴定试剂红细胞、致敏的阳性对照细胞(自制)。 (六)标本要求 1.夫妇标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。 2.患儿标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无明显乳糜。 (七)校准步骤 参照血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、OrthoBioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书中的校准要求执行。 ’ (八)操作程序
孕妇血清IgG抗体效价检测操作规程 [样本要求]：血样标本最好采用EDTA抗凝（也可以用枸橼酸钠等抗凝），用血清代替血浆进行检测时，用前离心，2000g×10min，防止纤维蛋白干扰反应结果。 [样品准备]： 试剂配制：用985ulPH7.4的PBS(或者生理盐水)溶解15ul二巯基乙醇（2-Me）,即为0.2M(2-Me)应用液,密封，避光，置2---6℃保存. 红细胞标本的制备：用生理盐水配置红细胞悬液，红细胞最终浓度为1%左右. 血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中,10分钟后离心取上清;或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中,4℃放置12小时,或37℃ 放置2小时后离心,2000Rpm,10分钟,取上清.该上清不得有 絮状物或沉淀； [配套试剂]：孕妇IgG抗体 效价卡，标准A、B、O红细 胞（取决于父亲血型）， 0.2M(2-Me)应用液 [实验步骤] 1、试剂卡室温平衡， 离心一次，标记编 号； 2、配制中和血浆：先取待检者血浆200微升与生理盐水600微升做4倍稀释，然后取稀释后的标本和 0.2M巯基乙醇(2-Me)应用液各200ul，混匀，37℃孵育30---60分钟，（充分破坏标本中IgM类抗体） 既得到孕妇的中和血浆。 3 4、在所有孔中加入50ul健康人O型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体)或所有孔 中加入50ul健康人A型或B型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统IgG血型抗体)，然后加入上述表格中稀释的中和血浆各50ul 5、把加有血浆和红细胞的微柱卡置37 ℃专用孵育器孵育15分钟； 6、用专用离心机离心5分钟（900r/min2分钟1500r/min3分钟）。判定结果。 [结果判定]效价值：产生3+凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。 [参考值] 1、RH系统抗体效价16有临床意义 2、ABO系统抗体效价64有临床意义 [注意事项] 1.据文献报道微柱凝胶法检测出的母体效价值比常规聚凝胺和抗人球蛋白试管法高出1-2个滴度 （根据P.L.Mollison所著教材《临床医学中的输血（Blood Transfusion in Clinical Medicine）》） 2. 红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。如不 得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。
噬菌体展示肽库的筛选方法及其应用 1985年,SmithGP利用基因工程手段将一段外源肽序列展示在丝状噬菌体的表面[1]。1988年[2]他们又将合成的随机序列的寡核苷酸片段克隆到丝状噬菌体,表达后每个噬菌体粒子的表面展示一种肽段,所有这些展示不同肽段的噬菌体构成了噬菌体展示肽库。1990年,他们通过亲合筛选,得到了与特定蛋白结合的结合肽,并由于噬菌体表达的肽与编码基因直接相关,扩增和分离目的克隆后,很容易得到其DNA序列[3]。这样就建立了噬菌体表面展示的随机肽库技术,这项技术一经产生就显示其无与伦比的生命力,被广泛用于生命科学的各个领域,并带来广泛而深远的影响。传统的药物筛选大多数是从自然界的动、植物及微生物中分离天然的具有特定药理作用的化学物质,然后直接应用或再以此作为药物化学的先导化合物,再进一步设计、加工、合成,筛选有效的功能药物。此方法具有一定的盲目性,筛选周期长。而采用分子进化工程技术则会大大加速这一过程。根据所需要的药物特性,选用适当的方法构建含有大量异质性分子的组合库,用靶分子进行筛选,先筛选药物先导化合物,然后进一步优化设计,最终确定候选的药物结构。近年来,引入组合策略和模拟进化思想,建立了一种从噬菌体随机肽库中筛选药物先导化合物的新方法[4],即用库容量极大的随机肽库去快速筛选具有较高特异性和亲和力的理想目的肽。通过此种方法可以快速筛选生物活性肽、蛋白质、受体及其他化合物等新型药物或先导化合物。这一方法具有传统的药物筛选无法比拟的优越性,将药物开发带入了一个崭新的时代。1噬菌体展示系统的建立早在1986年Geysen就认为含有关键残基的短肽能够模拟蛋白质上的决定族。在多数情况下,几个关键残基与它的结合分子所形成的非共价键构成了全部结合的主要部分,即蛋白质之间的相互作用或识别是通过局部残基肽段间的相互作用来实现的。1982年,Dulbecco提出将病原体的免疫原与λ噬菌体和其他病毒的衣壳蛋白融合,便可产生能够用作疫苗的表面展示外来多肽的病毒颗粒。1985年,Smith描述了外源肽段在丝状噬菌体fd表面的展示结果。1988年,他们建立了新的表达载体——可选择抗体的丝状噬菌体fd载体,能将外源短肽表达并伸展到噬菌体表面,用亲和筛选可选到表达特异肽的噬菌体,通过测定噬菌体序列,就可以知道所表达肽段的氨基酸序列。这为噬菌体展示肽库的建立提供了技术保障。2噬菌体展示系统的类别噬菌体展示系统因载体和宿主细胞不同分别有:丝状噬菌体展示系统(包括p 、p 和噬菌体粒展示系统)、λ噬菌体展示系统及T4噬菌体展示系统。2.1丝状噬菌体展示系统:丝状噬菌体展示系统是外源基因与g3p或g8p基因融合,并将它以外壳蛋白表面多肽的形式展示出来。它是最早被用来展示外源肽或蛋白质的系统,也是目前应用最广、发展最完善的噬菌体展示系统。丝状噬菌体是单链DNA病毒,其通过与细菌纤毛的相互作用感染宿主细胞,然后将病毒DNA注入细菌的胞质,利用细菌胞质内的酶转变成复制的双链DNA,并通过滚动复制产生子一代DNA分子。噬菌体展示技术正是利用丝状噬菌体DNA的结构和复制特点,把丝状噬菌体M13或fd 作为良好的基因工程的载体。因它的DNA复制与装配不受DNA分子的限制,因此可以将外源DNA插入到其一些非必须区,仅导致噬菌体颗粒的加长,而不影响其感染宿主及装配,这样即可得到一些插入外源DNA的基因重组体。噬菌体还可把插入的DNA片段以融合蛋白的形式表达在衣壳蛋白上。2.2λ噬菌体展示系统:是将外源肽或蛋白质与λ噬菌体的主要尾部蛋白PV或λ噬菌体头部组装的必需蛋白——D蛋白融合而被展示。2.3T4噬菌体展示系统:T4噬菌体展示系统是将外源肽和蛋白质与T4噬菌体的小衣壳蛋白SOC的C端融合而被展示,也有将外源蛋白与T4噬菌体的次要纤维蛋白(Fibritin)的C末端融合而被展示。由于T4噬菌体是在寄主细胞内组装而不必通过分泌途径,因此它可展示的肽/蛋白质范围较广,尤其适合于展示那些不能被E.coli分泌的复杂蛋白质[6]。3噬菌体展示肽库的筛选方法3.1生物淘金法:是目前常用的、最早由Smith等设计的一种筛选方法。将靶分子包被在固相介质上,加入噬菌体肽库与之吸附,洗去非亲和性或低亲和性的噬菌体,回收等亲和性的噬菌体,经过几轮“淘选”,可富集到特异性的噬菌体多肽。用于噬菌体肽库筛选的目标蛋白可以直
Excel 表格高级筛选教程 I T 2010-07-04 07:48:33 阅读3978 评论10 字号：大中小订阅 Excel 中的“自动筛选”功能大家也许并不陌生，对于条件简单的筛选操作，它基本可以应付。但是，最 后符合条件的结果只能显示的在原有的数据表格中，不符合条件的将自动隐藏。若要筛选含有指定关键字的记录，并且将结果显示在两个表中进行数据比对或其他情况，“自动筛选”就有些捉襟见肘了。“傻瓜相机”毕竟功能有限，那么就让我们来试试“高级相机”吧！熟练运用“高级筛选”，无论条件多么复杂，都能一网筛尽。人力资源部的小李最近在做员工表格统计时，就尝到了甜头。 一、特定字符一步筛 现在在这份表格中，小李要查找姓“陈”的所有员工记录，他想了想，很快获得了结果。 如图1 所示，在数据区域外的任一单元格（如B17）中输入被筛选的字段名称“姓名”，在紧靠其下方 的B18 单元格中输入筛选条件“陈*”。然后依次单击“数据→筛选→高级筛选”命令，在弹出的“高级筛选”对 话框，选择筛选方式中的“将筛选结果复制到其他位置”单选按钮。将“列表区域”设置为“$A$1:$F$15”，“条 件区域”设置为“$B$17:$B$18”，“复制到”设置为“$A$20:$F$20”，单击“确定”按钮，系统便自动将符合条件 的记录筛选出来，并复制到指定的从A20 开始的单元格区域中（如图2 所示）。
小提示：如果在图1 的B18 单元格中输入筛选条件“*陈”，可筛选名字中含有“陈”字的员工记录（即“陈”字不一定是名字中的第一个字，该字可在名字中的任意位置）。 二、空白数据巧妙筛 接下来小李还需要查找没有职称员工的记录，如何进行呢？ 如图3 所示，他先在数据区域外的任一单元格（如E17）中输入被筛选的字段名称“职称”，然后在紧靠其下方的E18 单元格中输入筛选条件“<>*”。 下一步，打开“高级筛选→将筛选结果复制到其他位置”，设置好“列表区域”、“条件区域”和“复制到”的位置，单击“确定”按钮，系统就自动将符合条件的记录筛选出来并复制到指定的单元格区域中（如图4所示）。
湖南农业大学课程论文 学院：生物科学技术学院班级：08C生工 姓名：李栋学号：200842145118 课程论文题目：应用噬菌体抗体库技术制备抗体 课程名称： 评阅成绩： 评阅意见： 成绩评定教师签名： 日期：年月日
应用噬菌体抗体库技术制备抗体 李栋 生物科学技术学院08C生工200842145118 摘要：噬茵体抗体库技术是利用PCR扩增出抗体的全套可变区基因，将抗体分子DNA片断如Fab或单链抗体(scFv)与噬茼体外壳蛋白基因PⅢ或PVI]I连接，使融合蛋白表达于噬茵体颗粒的表面，经过“吸附一洗脱一扩增”过程富集筛选特异性抗体.。这一技术将抗体基因型和表型联系在一起，使识剐抗原的能力和噬茵体的可扩增性统一起来，较好的模拟了体内的抗体产生的过程，成为一种高效的筛选体系。噬菌体抗体库是近年发展起来的一项分子生物学新技术。构建容量大、特异性高和敏感性强的人源性抗体是此项技术的核心，也是其远大前景的基础.本文就噬茵体抗体库技术的原理、构建、筛选做一综述。 关键词：噬茵体抗体库技术；抗体库；噬茵体 噬菌体抗体库技术(phage display antibody li—brary techniques)是指用聚合酶链反应(polymerasechain reaction，PCR)扩增抗体的全套可变区基因，通过噬菌体表面展示技术，把Fab段或单链抗体(ScFv)表达在噬菌体的表面，经过“吸附一洗脱一扩增”过程筛选并富集特异性抗体。20世纪80年代中期，Smith 在前人对丝状噬菌体分子生物学研究的基础上首先提出了噬菌体展示技术。由于该技术具有生产人抗体的潜力，因此，吸引了许多学者投入这一研究中，使得噬菌体抗体库技术得以迅速发展，并由此开创了一条简便、快速的基因工程抗体生产路线. 1 噬菌体抗体库技术的基本原理 噬菌体抗体库技术的原理是将抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因与噬菌体的外壳蛋白Ill(PIl1)或外壳蛋白Ⅷ(PⅧ)基因随机重组，继而感染大肠杆菌，经增殖并在噬菌体表面以抗体片段Fab或ScFv一外壳蛋白融合蛋白的形式表达。这种噬菌体颗粒可以特异识别抗原，又能感染宿主菌进行再扩增，经过“吸附一洗脱一扩增”过程就能筛选并富集特异性抗体。所构建的抗体库称为全套抗体库，从中筛选到的抗体称为噬菌体抗体。它的最大特点是实现了直接将基因型
输血相容性检测作业指导书范本 目录 第一章规章制度 第一节临床输血管理委员会一、临床输血管理委员会组成 二、临床输血管理委员会工作职责三、临床输血管理委员会工作计划第二节临床用血申请与审批管理一、临床用血计划的拟定 二、临床用血申请和审批制度 三、临床退血管理 第三节临床输血操作步骤及岗位职责 一、临床输血操作步骤 二、各岗位职责流程图 第四节输血科管理制度 一、科室工作守则 二、临床用血有控制感染的方案及管理制度三、输血反应及输血感染疾病的登记报告与调查处理制度 四、消毒隔离及污物处理制度 五、工作人员健康体检制度 六、考勤制度 七、请假制度 八、人事考核制度 九、奖惩制度 十、计算机使用管理制度 十一、仪器设备管理制度
十二、值班工作制度 十三、临床用血计划申报登记制度十四、配输血查对制度 1 十五、血型鉴定与交叉配血的复查与核对制度十六、血液储存、发放、临床输血和血液报废制度 十七、血液质量监测制度 十八、仪器设备认购、验收、使用管理、保养、维修及报废制度 十九、试剂的认购与入库、领用制度二十、计量管理制度 二十一、差错事故登记、报告制度二十二、方便病人配合临床制度二十三、科学合理用血制度 二十四、紧急用血制度 二十五、输血治疗知情同意制度二十六、各种登记记录管理和保存制度二十七、库房管理制度 二十八、档案保管制度 二十九、输血不良反应处理和回报制度三十、交接班制度 三十一、血液标本的留取接收保存制度三十二、实验室管理制度 第五节、岗位职责 一、输血科主任岗位职责 二、主任、副主任技师岗位职责三、主管技师职责 四、输血科技师岗位职责 五、输血科技士岗位职责 六、临床医师在用血时的职责 七、临床护士在用血时的职责 第二章仪器、设备使用操作规程
Excel数据筛选的技巧 对于Office一族来说，最常用也是最困扰他们的工作有两个：一个是在浩如烟海的众多数据中，如何快速找到和检索出所需的信息；另一个则是如何轻松得到分类汇总的结果和统计报表数据。下面，我们将向大家介绍用Excel对数据信息进行筛选、检索的一些操作技巧和经验。 日前，在北京召开了第29届奥林匹克运动盛会，来北京参赛旅游的中外宾客络绎不绝，为了更好的了解北京的特色小吃和各式美食，所以在网络中非常流行一个“吃在北京”的文档。该文档是用Excel制作的，文档的标题行中从“店名”到“菜系”，从“地址”到“电话”，从“招牌菜”到“人均消费”可谓一应俱全。为了查询方便，该数据表还设置了“自动筛选”功能，可通过标题右侧的下拉列表来对“餐厅”、“菜系”或“消费价格”等按照条件进行筛选查看，如图1所示 这种通过下拉列表设置条件的筛选在Excel中被称作“自动筛选”，这种筛选可以将列表中的数据直接当作条件，也可以通过“自定义”条件的设置进行某个字段“与”、“或”查询，由于自动筛选的应用较为简单，在此，不再做赘述和讲解。 现在，我们要探讨的是自动筛选的兄弟——高级筛选。虽然自动筛选或高级筛选，在Excel中都可以起到根据条件查询数据的作用，是数据分析必不可少的工具和手段，但是高级筛选才是最好的数据查询方式。因为它不仅包含了所有自动筛选的操作，而且还有很多自动筛选望尘莫及的功能，如：多字段复杂条件的“与”、“或”关系查询；将查询结果复制到其他表；实现条件的“模糊查询”；与“宏”和“窗体控件”结合等等。 多字段复杂条件的“与”、“或”关系查询并将结果复制到其他数据表 用Excel的“自动筛选”功能来对数据表进行筛选查询，若对多字段设置了筛
Excel的筛选可分为普通筛选与高级筛选。筛选很好理解，就是根据条件将一个表中的数据过滤一遍，留下符合条件的行。例如，有下面一张表： 现在要筛选出部门是“事业部”而且“基本工资”大于等于5000的行出来。操作如下： （1）先选择要筛选的范围（Excel的很多操作在执行前都得选择操作的对象），如下图： （2）点击“数据”-“筛选”（普通筛选的操作），如下图： 完成后，数据的标题行就变成如下图了： （3）然后点击“基本工资”列的向下小箭头，在弹出的菜单中选择“数字筛选”-“大于或等于” （4）弹出如下图对话框，在第一个文本框中输入5000，点击确定， （5）然后点击“部门”，在对话框中只留下“事业部”的选框选中，点击“确定”； 完成普通筛选，结果如下： 要取消筛选，点击“数据”-“筛选”。
好吧，这个真是小case，下来看看高级筛选了，高级筛选的操作与普通筛选基本没有什么相同的地方。 什么情况下要用到高级筛选呢？ 当筛选的条件是两列（包含两列）以上且这些列之间筛选的要求是一种“或者”的关系时，这时就只能用高级筛选了，普通筛选是完成不了的。有点拗口，以例子说明吧。 例如：要筛选出人员的部门是事业部或者职称是高工的。这里，有两列的条件：部门、职称，两列之间的筛选条件还是“或者”的关系。这种情况就只能使用高级筛选了。 怎么操作？ （1）构造筛选条件： 将“部门”“职称”两个标题复制一份到旁边空白地方，放在同一行中，再将数据“事业部”与“高工”复制一份到对复制出的对应标题下面，“事业部”与“高工”两个单元数据交叉（不能放同一行）；注意：数据采用复制比较安全，如果不使用复制自己输入可能会因为格式不一样导致条件判断出错，查询不出数据；“事业部”与“高工”两个数据要交叉开，不能放在同一行，交叉开表示两个条件是“或者”的关系，如果是放同一行，则表示两个条件是“而且”的关系。（2）单击“数据”-“高级”，如下图： 打开如下对话框：
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选 单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。第一次筛选的原理与方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。普遍采用的HAT 选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。第二次筛选的原理和方法：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细
没有发现哪里可以找到粘贴附件的地方,只好把写的内容站到回复里面了: excel的高级筛选功能如果条件是以下两种情况,一般不会出错: 列表区域条件区域保存区域 工作表1 工作表1 工作 表1 工作表1 工作表2 工作 表1 就按照通常的顺序,先把鼠标放置到列表区域,然后再依次选择条件区域,保存区域. 但是如下情况时,会出现提示: "excel 只能复制筛选过的数据到活动工作表", 操作失败. 列表区域条件区域保存区域 A 工作表1 工作表2 工作 表2 B 工作表1 工作表2 工作 表3 C 工作表1 另一个文件另一个 文件 A解决办法如下: 先找到工作表2,选中条件区域,再启动高级筛选,这时看条件区域的状况,会出现告 警提示:无法确定哪一行包含列标签,即excel的高级筛选的设置过程通常都是先确定列表 区域,再确定条件区域,再确定保存区域. 点击确定,会弹出高级筛选的对话框,这时会发 现我们起初选择的条件区域的应用位置表达式被excel的默认的放置到了列表区域, 将其 拷贝粘贴到条件区域,然后再依次设置工作表1中的列表区域,及工作表2的保存区域. 确定,即可. 分析: 这个解决过程验证了excel先前的出错提示中的"活动工作表"的说 法. 当选择列表区域,并启动高级筛选功能时,就明确了当前的工作表即工作表2是活 动工作表.也就使得最后筛选后的数据能能够保存到该工作表中. 再考虑B的解决办法: (经过测试,A的解决过程在B情况下行不通) 基于以上A的解决过程及分析,为了让高级筛选功能启动的时候的工作表就是保存 区域所在的工作表,其实,很简单: 只需先找到保存区域所在的工作表,并启动高级筛选,似乎因为该区域通常都是空的,所以也没有A中出现的提示, 然后勾选"将筛选结果复制到其他位置",并指定保存区域的引用位置,然后再去设置工作表1中的列表区域和工作表2中的引用区域,确定,即可.
抗体效价测定操作规程 操作步骤： 一.IgG 类 I.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200］加等体积2—Me溶液混合，封口，置37C水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清 600L 生理盐水备用，排列6 支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是 1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。 2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；） 3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1 液3d,混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点, 终点血清稀释度的倒数为效价（Titer ）,或称滴度。 二.IgM 1?血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐
水备用，排列6 支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L,第一管和第二管中各加入稀释血清200L,第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是 1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。 2. 加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L,混匀。（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）三．此类为IgM 类盐水抗体可立即离心后观察。 四． 五．（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）
Excel中高级筛选使用及实例 一、用前说明及单条件查询。 1、使用前的说明： 首先在数据表格最上面一行插入几行空白行作为条件设置区域，条件行和数据行尽量不要交叉，以免影响查看效果。 2、录入筛选条件： 例如：查找出所有图号“AJ207”记录，则在先前插入的空白行的第一行（暂定为H1）录入“图号”，在H2中录入“AJ207”，这里的双引号不用录入（下同）。 3、显示筛选结果： 点击菜单数据>筛选>高级筛选，点击列表区域，将要进行参与筛选的所有数据都进行选择，在条件区域将H1和H2进行选择，最后点击确定就能显示出所有图号为“AJ207”的记录了。（如下图） 二、区间查询 例如：查找出发货日期在“2006-8-5”到“2006-8-16”所有记录。同上面设置条件时一样在H1和I1中录入“发货日期”在H2和I2中分别录入“>=2006-8-5”“<=2006-8-16”，然后再和上面使用高级筛选一样设置列表区域和条件区域，这里条件区域要将H1、H2、I1和I2都选上。然后再看看结果，是不是你想要的数据呢。（如下图）
三、多条件查询（与关系，即满足所有条件的记录） 例如：查找名称为“箱体”、图号为“AE983LGB”并且发货日期在“2006-8-4”的记录，这次我们在H1：J2中分别录入以下数据，H1为“名称”、H2为“箱体”、I1为“图号”、I2为“AE983LGB”、J1为“发货日期”和J2为“2006-8-4”。然后再进行列表区域和条件区域选择，最后会显示出我们所要的结果来。（如下图） 四、多条件查询（或关系，即满足几个条件中的任一条件的记录） 例如：查找发货日期为“2006-8-1”或实收数量“>250”或图号为“AJ207”的记录。在H1中录入“图号”、H2中录入“AJ207”，相应地I1为“发货日期”、I3为“2006-8-1”、J1为“应收数量”J4为“>250”。然后再进行列表区域和条件区域选择，最后会显示出我