下一代测序（NGS）彻底改变了基因组学研究领域，使全基因组测序比以往任何时候都更有效率。然而，典型的NGS工作流程是鲜有革新的，因为它面临许多手动操作步骤和来自成本、通量以及结果变异性的诸多挑战。传统的样品制备和数据分析方法非常耗时，并更易出错。
针对这些挑战，自动化技术为此提供了相应的解决方案，并通过减少样品间变异提高了最终数据的精准度。然而，为您的NGS工作流程选择适合的自动化设备是一个复杂的过程。为了给您的实验室配备最佳的自动化整合系统，首先要对以下的四个因素进行评估，然后再作出决定：
? 自动化将如何影响您的实验流程？
? 您可选的自动化方案有哪些？
? 需要多少培训？
? 您的自动化解决方案是否需要扩展，以满足未来的需求？
Ilumina文库构建杂交选择和靶向捕获簇扩增和测序Ilumina文库构建杂交选择和靶向捕获簇扩增和测序
图3，高通量PCR纯化自动化工作流程
您是否在纯化时使用真空泵和离心过滤？图3描述了一个中高通
进一步加速：靶标富集技术
量的自动化工作流程图。
基于磁珠技术的靶标富集方法，比如SureSelect靶标富集
试剂盒和SureSelect人全外显子试剂盒，能使您仅对感兴
趣的基因片段测序，提高了几个数量级的实验效率。这些操
作很容易实现和高度扩展，凸显出Bravo自动化液体处理
平台的速度和精度的优势。
如果您的实验室需要更高的通量，您可考虑增加一个更全面的自动化系统。安捷伦BenchCel 微孔板工作站是一个灵活的、可扩展的、通量可媲美大型系统的紧凑桌面式平台。由市面上最灵活和调度高效的安捷伦VWorks 软件控制，BenchCel 工作站可用于复杂的和简单的应用流程，比起传统的手动操作方法能提供更长的无人值守时间和更大的通量。
对于超高通量、高生产率的实验室，您可能需要放弃桌面型系统。安捷伦独立的BioCel 自动化系统基于一个易于定位的直驱机械臂(DDR)。这种高度灵活的系统能与安捷伦其它自动化模块，或第三方设备组合形成定制系统，以满足您实验室的需要。
自动化方案的选择
想一想您实验室的整个工作流程。有各种不同的自动化解决方案——从垂直移液工作站到BenchCel 工作站再到BioCel 系统，可以满足不同的通量需求。自动化将提高实验数据的准确性和一致性——您是否需要一个完全无人值守的自动化解决方案？安捷伦拥有一系列的自动化设备可供选择，以适应不同实验室的需要。安捷伦的Bravo 自动液体处理平台具有宽量程的高精度移液性能、兼容不同类型微孔板的灵活性以及独特的开放式设计，易于整合到其他的自动化工作流程中。结合Bravo 自动化液体处理平台可以大大减少样品制备和检查下一代测序文库质量所花费的时间，并通过减少样本间变异提高了数据质量。
图4.
桌面型选择：
A ．Bravo 自动化液体处理平台
B ．BenchCel 微孔板操作工作站独立的高通量系统：C. BioCel
系统
A
B
C
需要多少培训？
像Bravo自动化液体处理平台一样的单个设备操作起来非常简单和直接。但是，如果您有多个自动化设备（如机器人，液体处理器，读板机，洗板机和其他），您需要考虑精通这众多设备所需的时间。软件和设备菜单容易理解吗？所有的自动化设备是否会一起相互配合工作？
图5. 安捷伦VWorks：最强大和灵
活的工业自动化控制软件，执行工
作流程不可或缺的重要组成部分安捷伦VWorks自动化控制软件是整合您的自动化设备的核心。直观的图形用户界面简化了新操作程序的创建、连接和设备设置、程序运行，并进行操作进展的监测。您实验室中有了这样一个可扩展的动态软件意味着当您扩展成复杂的设备网络时可以减少培
训成本并最大化生产效率。
您的自动化解决方案是否需要扩展，以满足未来的需求？
您现在的需要是什么，一年之后又会是什么？安捷伦自动化解决方案的设计具备可扩展性，通过VWorks 自动化控制软件能轻易的运行10台仪器就像是运行一台一样。Bravo 自动化液体处理平台和BenchCel 工作站均是专门针对扩展性而设计的。
A. Bravo 自动化液体处理平台：多功能的设计
开放式设计便于在层流罩中使用
快速更换式移液头
夹钳使自动化更灵活
快速，小巧，安静的操作，Bravo 自动化液体处理平台具有一流的精度和
准确度，并且在台板底部没有电子元件可根据您的工作流程需要进行扩展。 BenchCel 工作站既适用于复杂应用又适用于简单应用，与传统的手动操作相比能提供更长的无人值守时间和更高的通量
扩展成 BioCel 处理更多板（侧顶视图）。新的直驱机械臂给BioCel 系统带来速度和精准度，既价格适中，又易于扩展。采用模块化小室、各种可选罩和环境控制部件，BioCel 系统根据您的工作需要量身定做，并提供比任何整合系统都长的无人值守时间和更高的通量
C. BioCel 系统：最高通量和完全的无人值守
图 6.
满足不同通量的需求：
A. Bravo 自动化液体处理平台
B. BenchCel 微孔板工作站
C. BioCel 系统
B. BenchCel 工作站：高容量的体现
? 减少样品处理时间? 降低样品间差异
? 和手动方法相比增加了产量
? 每个技术员的处理量从12 个样品提高到了96个样品
生命科学中的实例应用：Broad 研究所
Broad 研究所是世界领先的基因组研究机构之一。在评估了三家制造商的液体处理系统后，考虑到其精小尺寸和加载枪头便利的因素，该研究所最后选择了Bravo 自动化液体处理平台。使用一个靶向富集的自动化工作流程（图7），每台测序仪的测序能力从每年大约1000个提高到每年超过10000个，同时还获得了许多其他的益处，包括：
图7. Broad 研究所中富集文库的建立流程示图
用二维条码样品管中记录样品文库标记用Covaris 进行文库剪切
Bravo 上双面SPRI 文库片段大小选择
文库建立和纯化——输出：富集的样本富集文库标记
PCR 富集，管板转移，
qPCR 定量
基于定量PCR 数据的文库标准化
标准化文库标记
Flowcells 的建立
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在安捷伦，我们充分理解上述四个关键因素的重要性，并且我们已经将每一点作为我们自动化解决方案平台设计的核心目标。我们从一开始就以通过ISO 认证的质量标准要求来开发测试我们所有的自动化解决方案流程。
除了经过验证的机器和兼容的耗材和配件，我们还提供您需要的专业知识，以确保您的工作得到最佳结果。安捷伦自动化解决方案都是由知识渊博的科学家作技术支持，他们可以为您的特殊应用提供有针对的支持和服务。
当您准备自动化您的下一代测序，请考虑安捷伦的自动化产品。如果您有任何关于您实验室自动化最佳选择的问题，请与您的安捷伦代表谈谈如何简化并加快您的NGS 工作流程。
应用手册
了解自动化如何应用在下一代测序实验室中。
1. 在安捷伦Bravo 自动化液体处理平台上应用Agencourt AMPure 纯化试剂盒进行下一代测序样品制备的自动化纯化(5990-4942EN)
2. Stratagene Absolutely RNA 96 孔板微量提取试剂盒与Bravo 自动化液体处理平台联合应用(5990-3558CHCN)
3. 在安捷伦Bravo 自动化液体处理平台上实现全自动化的定量聚合酶链反应分析（5990-4522EN ）
4. 在Bravo 自动化液体处理平台上实现CGH/CNV 工作流程自动化(5990-4660EN)
纳米孔测序是极具前景的下一代测序技术 Nanopore Sequencing 2019 - Patent Landscape Analysis 随着各种技术的新产品推出，哪些公司将在知识产权方面引领纳米孔测序？ 纳米孔测序是极具前景的下一代测序技术 据麦姆斯咨询介绍，纳米孔测序是新一代测序（NGS）技术之一，被认为能够彻底革新DNA分析。随着时间地推移，目前已经开发出了不同形式的纳米孔测序技术，包括蛋白质纳米孔、固态纳米孔和复合纳米孔。该技术可以高速生成超长读数，减少样品制备时间以及将读数重组成原始序列所需要的数据处理时间。 这项新技术可以开发一个需要遗传指纹来快速识别癌症类型和病原体的全新客户群。根据DataBridge的数据，全球下一代测序市场将快速增长，市场规模预计将从2017年的48.3亿美元增长到2024年的163.5亿美元，2018~2024年期间的复合年增长率（CAGR）预计为19.2%。 目前，Oxford Nanopore Technologies是唯一一家将基于纳米孔的测序仪推向市场的公司。不过，还有其它几家公司正在开发自己的相关技术，Oxford Nanopore Technologies公司可能很快将不再是纳米孔测序仪的唯一供应商。例如，Two Pore Guys公司宣布将在2019年春季发布其产品套件。 随着新产品在未来的相继推出，了解纳米孔测序市场相关参与者的知识产权（IP）状况和策略，同时发现专利新申请人及其所带来的威胁至关重要。为此，著名市场研究机构Yole 子公司Knowmade深入调研了基于纳米孔的测序技术（蛋白质、固态和复合）及其应用（肿瘤学、植物遗传学等）中涉及的知识产权主要参与者。本报告可以帮助读者发现业务风险和机遇，预测新兴应用，支持战略决策以加强市场地位。 纳米孔测序全球专利申请趋势 对专利申请趋势的分析表明，从2008年到2013年，纳米孔测序相关的专利申请获得了重要增长。这一增长源自于学术研究团队（哈佛大学和加州大学）对纳米孔测序概念的验证。
２０１０年第１０期杨晓玲等：新一代测序技术的发展及应用前景 等交叉学科的迅猛发展。 １．１第二代测序——高通量低成本齐头并进以高通量低成本为主要特征的第二代测序，不再需要大肠杆菌进行体内扩增，而是直接通过聚合酶或者连接酶进行体外合成测序¨】。根据其原理又可分为两类：聚合酶合成测序和连接酶合成测序。１．１．１聚合酶合成测序法Ｒｏｃｈｅ公司推出的４５４技术开辟了高通量测序的先河。该技术通量可达Ｓａｎｇｃｒ测序的几百倍，而成本却只有几十分之一，因此一经推出，便受到了国际上基因组学专家的广泛关注。４５４采用焦磷酸合成测序法ＨＪ，避免了传统测序进行荧光标记以及跑胶等繁琐步骤，同时利用乳胶系统对ＤＮＡ分子进行扩增，实现了大规模并行测序。截止到２０１０年４月，已有７００多篇文献是采用了４５４测序技术（ｈｔｔｐ：／／４５４．ｃｏｍ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ．ａｎｄ—ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ．ａｓｐ），对该技术是一个极大的肯定。 Ｉｌｌｕｍｉｎａ公司推出的Ｓｏｌｅｘａ遗传分析仪是合成技术的进一步发展与延伸。该技术借助高密度的ＤＮＡ单分子阵列，使得测序成本和效率均有了较大改善。同时Ｓｏｌｅｘａ公司提出的可逆终止子”１也是该技术获得认可的原因之一。与４５４相比。Ｓｏｌｅｘａ拥有更高的通量，更低的成本。虽然片段长度较短仍是主要的技术瓶颈，但是对于已有基因组的物种来说，Ｓｏｌｅｘａ理所当然成为第二代测序技术的首选。２００８年以来，利用该技术开展的研究大幅度上升，报道文献达４００多篇（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｌｌｕｍｉｎａ．ｃｏｍ／ｓｙｓｔｅｍｓ／ｇｅｎｏｍｅ—ａｎａｌｙｚｅｒ＿ｉｉｘ．ｉｌｍｎ）ｏ １．１．２连接酶合成测序法２００７年ＡＢＩ公司在Ｃｈｕｒｃｈ小组拍１研究成果的基础上推出了ＳＯＬＩＤ测序仪。该技术的创新之处在于双碱基编码…的应用，即每个碱基被阅读两次，因此大大减少了测序带来的错误率，同时可以方便的区分ＳＮＰ和测序错误。在测序过程中，仪器自动加入４种荧光标记的寡核苷酸探针，探针与引物发生连接反应，通过激发末端的荧光标记识别结合上的碱基类型。目前ＳＯＬＩＤ３．０测序通量可达２０Ｇ，而测序片段仅有３５—５０ｂｐ，这使得该技术与Ｓｏｌｅｘａ相比，应用范围还不够广泛。ＡＢＩ公司正加快研发进度，争取在片段长度方面做出重大突破。 ＤａｎａｈｅｒＭｏｔｉｏｎ公司推出Ｐｏｌｏｎａｔｏｒ¨１测序仪同样也是基于Ｃｈｕｒｃｈ小组的研究成果，但是该设备的成本要低很多，同时用户在使用时可以根据自己的研究目的设置不同的测序条件。而ＣｏｍｐｌｅｔｅＧｅ—ｎｏｍｉｃｓ公司推出的ＤＮＡ纳米阵列与组合探针锚定连接测序法＂１则具有更高的容错能力，试剂的消耗也进一步减少，目前已顺利完成３个个体基因组的测序工作。 １．２第三代测序——单分子长片段有望实现第二代测序技术虽然在各方面都有了较大的突破，但是仍然建立在ＰＣＲ扩增的基础上。为了避免ＰＣＲ扩增带来的偏差，科学家目前正在研制对ＤＮＡ单个分子直接测序的第三代测序仪。最具代表性的包括Ｈｅｌｉｓｃｏｐｅ单分子测序仪，单分子实时合成测序法，纳米孔测序技术等。 Ｈｅｌｉｃｏｓ技术仍然是基于合成测序原理¨…，它采用了一种新的荧光类似物和灵敏的监测系统，能够直接记录到单个碱基的荧光，从而克服了其他方法须同时测数千个相同基因片段以增加信号亮度的缺陷。ＰａｃｉｆｉｃＢｉｏｓｃｉｅｎｅｅｓ公司研发的单分子实时合成测序法充分利用了ＤＮＡ聚合酶的特性，可以形象的描述为通过显微镜实时观测ＤＮＡ聚合酶，并记录ＤＮＡ合成的整个过程。纳米孔测序技术［１１’１２１则是利用不同碱基在通过纳米小孔时引起的静电感应稍有不同，或者不同碱基通过小孔的能力各有差异，来加以区分不同的碱基信号。 ２应用与实践 Ｋａｈｖｅｊｉａｎ在２００８年的一篇综述中提到¨“：“如果你可以随心所欲地测序，你会开展哪些研究？”。人类基因组计划的完成和近年来高通量测序的兴起，使越来越多的科研工作者认识到，我们对于生物界的认识才刚刚起步。基因图谱的绘制并不意味着所有遗传密码的破解，癌症基因组的开展也没有解决所有的医学难题。ＤＮＡ变异的模式和进化机制，基因调控网络的结构和相互作用方式，复杂性状及疾病的分子遗传基础等，仍是困扰生物学家和医学家的难题，而高通量测序的广泛应用，也许可以让我们知道的更多。 ２．１ＤＮＡ水平的应用 ２．１．１全基因组测序新一代测序技术极大地推
新一代测序法简介 新一代测序方法是一种直接测序法，它既可以分析基因和DNA的组成(定性分析)，也可以测定同一类型基因在表达过程中产生的数量（定量分析），以及不同类型基因或DNA 之间的差别所在（交叉对比分析）。自2004年，454测序技术发展以来，已经出现的测序产品超过六种之多。这些产品的技术特点见下表： 产家名称产品技术特点优缺点 化学反应测序方法误读率样品准备高通量程度 Roche (454 Life Science) 焦磷酸标记的链 反应 焦磷酸基 标记 <1% 较复杂，需PCR 中等 Illumina（Solexa）四色可逆终止码合成法1%—3% 较复杂，需PCR 中—高ABI(SOLID) 双色可逆终止码合成法1%—5% 较复杂，需PCR 中—高Helicos Bioscience 单色可逆终止码合成法2%—8% 简单，无需PCR 高—超高Intelligent Biosystm 四色可逆终止码合成法1%—5% 较复杂，需PCR 中—高 Pacific Bioscience 四色焦磷酸基标 记焦磷酸基 标记 3%—8% 简单，无需PCR 高 VisiGen 焦磷酸基标记 FRET 焦磷酸基 标记 3%—8% 简单，无需PCR 高 在这些技术中，从所分析的样本在测序前是否需要扩增，大致可以分为两类，即克隆扩增型和单分子测序型。两种类型在测序技术上区别并不大，但对结果的影响却有不小的差别。主要体现在两个方面：（1）单分子测序更能反应细胞或组织内分子的真实情况，尤其是在需要定量分析的情况下。而克隆扩增型中的PCR反应使得样品中DNA分子的扩增机会并不完全均等，这会对基因表达的定量分析造成影响；（2）单分子测序具有通量更高的优势。克隆扩增使得同一类型的分子数目急剧上升，在提高同类型分在在固相表面出现的几率同时，也降低了不同类型分子出现的机会。 面重点介绍Pacific Biosciences公司推出的Single Molecule Real Time (SMRT?) DNA Sequencing（单分子实时DNA测序）。 首先，在这一测序技术中有主要有两个关键的技术： 一、荧光标记的脱氧核苷酸避免了碱基的空间位阻效应。显微镜现在也无法实现实时看到“单分子”，但是它可以实时记录荧光的强度变化。当荧光标记的脱氧核苷酸被掺入DNA 链的时候，它的荧光就同时能在DNA链上探测到。当它与DNA链形成化学键的时候，它的荧光基团就被DNA聚合酶切除，荧光消失。这种荧光标记的脱氧核苷酸不会影响DNA聚合酶的活性，并且在荧光被切除之后，合成的DNA链和天然的DNA链完全一样； 二、纳米微孔（Zero-mode waveguide (ZMW)）。因为在显微镜实时记录DNA链上的荧光的时候，DNA链周围的众多的荧光标记的脱氧核苷酸形成了非常强大的荧光背景，这种强大的荧光背景使单分子的荧光探测成为不可能。Pacific Biosciences公司发明了一种直径只有10nm的纳米孔，单分子的DNA聚合酶被固定在这个孔内。在这么小的孔内，DNA链周围的荧光标记的脱氧核苷酸有限，而且由于A，T，C，G这四种荧光标记的脱氧核苷酸非常快速地从外面进入到孔内又出去，它们形成了非常稳定的背景荧光信号。而当某一种荧光标记的脱氧核苷酸被掺入到DNA链时，这种特定颜色的荧光会持续一小段时间，直到新的化学
下一代测序技术 摘要：DNA测序技术对生物学的发展有着最根本的意义。Sanger法测序经过了30年的应用和发展，而在过去三年中，以454, solexa, SOLiD为代表的高通量测序平台已经大幅度降低了测序成本，提高了测序速度，成为基因组测序市场的主流。在此基础上，各种下一代测序技术正在快速研发，将使基因组测序和重测序的通量和成本更加平民化，为基因组学、遗传学、生物医学和健康科学等领域的发展创造更加广阔的前景。本文将对所有新的测序技术的原理、优势和应用进行总结和展望。 1977年Maxim、Gilbert发明的化学降解法测序技术和Sanger发明的双脱氧末端终止法测序技术不仅为他们赢得了诺贝尔奖，也使得从DNA序列层面研究分子遗传学成为可能。特别是后者，从最开始的凝胶电泳到越来越高通量的毛细管电泳，从开始的手工操作到越来越多自动测序仪的出现，各种改进的Sanger 测序技术统治了DNA测序领域三十年，至今仍在长片段测序，大片段文库测序方面有广泛的应用。人类基因组计划（HGP）的完成就是靠Sanger测序法。 在耗费了庞大成本的人类基因组计划宣布完成之后，越来越多的物种基因组测序工作对测序成本和通量提出了更高的要求，新一代测序技术（也被称为第二代测序技术）开始登上历史舞台。2005年454 life science公司率先推出了焦磷酸测序技术，使测序成本较Sanger法降低了100倍，速度快了（提高）100倍，人类基因组测序逐步进入了100，000美元时代。如今，454 FLX测序仪（Roche Applied Science）、基于“边合成边测序”的Solexa测序仪(Illumina Inc.)和使用“边连接边测序”的SOLiD测序仪(Applied Biosystems)已经成为基因组测序市场的主流机型。除此之外，2008年一年内又有HeliScope单分子测序仪（Helicos）和Polonator(Dover/Harvard)两种测序机型商品化。 在NHGRI（美国人类基因组研究中心）的支持和推动下，未来几年内测序成本将在目前基础上再下降100倍，最终使个人基因组测序成本降至1000美元，人类将革命性的进入个人基因组时代。高通量和低成本的测序技术将进入到普通实验室，基因组测序的简单化将使分子生物学飞跃发展，个人基因组测序产业化也将对健康医学等领域产生革命性的影响。本文将首先对目前已经商品化的新一代测序技术（454、Solexa、SOLiD、HeliScope）做一介绍和比较，再对正在研发中的各种下一代测序方法（第三代测序技术）的原理和应用做一详细的介绍和展望。 1. Roche 454测序技术 2005年454生命科学公司在《自然》杂志发表论文，介绍了一种区别于传统Sanger法的全新高通量测序方法，将测序成本降低了100倍以上，开创了第二代测序技术的先河，454测序仪也成为最先商品化的第二代测序仪。正是在此基础上，其它如Solexa、SOLiD等第二代测序仪才相继问世。454测序技术的原理在于首先使用乳液PCR（emulsion PCR）技术（图一a）扩增已经连接上接头的基因组文库片段，扩增子结合在28 μm的磁珠表面，将乳液破坏后用变性剂处理磁珠，再将含有扩增子的磁珠富集到芯片表面，用测序引物进行测序。在测序过程中，454使用了一种“焦磷酸测序技术”（Pyrosequencing），即在合成DNA 互补链的过程中，每加入一种单核苷酸（dNTP），如与模板链配对结合，就会释放出一个焦磷酸，与底物腺苷-5’-磷酸硫酸（APS）在A TP硫酸化酶作用下合成A TP，与荧光素（Luciferin）一起在荧光素酶(Luciferase)的作用下，会发出一个光信号，由芯片背后连接的电荷耦合装置（CCD，Charge Coupled Device）捕捉。454测序技术合成DNA链使用的是普通单核苷酸，没有任何标记，合成中也没有切割基团等生化反应，因此读长可以达到300-400bp。但没有阻断（block）和去阻断（de-block）过程也意味着对连续重复单核苷酸的阅读只能根据信号强度来判断，容易对其中插入和缺失碱基阅读错误。454测序技术相比较其他第二代测序技术如Solexa和SOLiD, 在读长上有着巨大的优势，但是目前成本要略高。总体而言，高读长使得454技术比较利于De Novo拼接和测序。
（流程管理）软件测试的流 程
软件测试的流程，包含各阶段会产生什么文档 无论是采用瀑布式仍是其他的产品生命周期模型，软件测试分为如下几个阶段：1、测试需求分析阶段。 测试需求分析阶段主要工作是获得测试项目的测试需求（测试规格）。 输出产物：《可测试性需求说明书》和《测试规格》 2、测试计划阶段。 以测试需求为基础，分析产品的总体测试策略。 输出产物：《产品总体测试策略》 3、测试方案设计阶段。 本阶段主要是以测试规格为基础获得特性测试方案，对于有自动化测试的项目，进行自动化测试的分析，获得测试策略。 输出产物：《产品或者版本总体测试方案》 4、测试用例实现阶段。 本阶段主要是完成各个特性的测试用例的编写和自动化脚本的编写。 输出产物：《产品自动化测试用例》和《手工执行测试用例》 5、测试执行阶段。 本阶段是根据测试策略开展测试执行和回归测试。 输出产品：《产品或版本测试方案》和《缺陷分析方案》 6、评估和关闭阶段。 只对前面的各个阶段的执行情况，完成对测试项目的关闭，同时提供完整的度量数据和项目总结方案。 输出产物：《遗留问题风险分析方案》、《度量分析方案》和《测试关闭方案》软件生命周期的各个阶段如何应用哪些软件测试方法。
画壹个V模型你就明白了：左边为开发过程，对应右边的测试过程，开发自上而下，测试是自下而上 开发过程测试过程 可行性研究验收测试 需求分析系统测试 概要设计集成测试 详细设计单元测试 软件编码阶段 1、需求分析阶段对应生成需求规格说明书，对应测试生成系统测试方案，即为系统测试准备的，该阶段已经完成了单元测试和集成测试，主要是对软件产品的功能和非功能进行测试，几乎不测试代码，所以测试方法以黑盒为主； 2、概要设计阶段对应生成概要设计说明书，对应测试生成集成测试方案，该阶段已完成单元测试，是将各个功能模块组装起来进行的测试，所以也叫组装测试。主要见模块调用是否正常，接口是否可用，数据传输是否正确等，所以用到的测试方法几乎是白盒的方法，如路径覆盖，条件组合覆盖等； 3、详细设计阶段对应生成详细设计说明书，对应测试生成单元测试方案，该阶段是开发人员编码后的第壹个测试阶段，是对开发出来的单独模块进行测试，以确保每壹个功能模块的功能正常，能够构建桩模块和驱动模块来回调用，方法也是以白盒为主。 4、白盒测试的准则是尽可能覆盖程序内部的逻辑结构，黑盒则是尽可能覆盖所有的输入输出接口，包括文档等壹些静态的测试。除常用的测试方法外，仍需补充大范围的随机测试，尽可能达到覆盖率100%。
作者：尹银亮、陈会平、毛良伟译来源：生物谷 原文刊登于《分析化学》综述Analytical Chemistry 原文标题：Landscape of Next-Generation Sequencing Technologies 索引信息：https://www.doczj.com/doc/6416854224.html,/10.1021/ac2010857 | Anal. Chem. 2011, 83, 4327–4341 原文作者：Thomas P. Niedringhaus, Denitsa Milanova, Matthew B. Kerby, Michael P. Snyder,and Annelise E. Barro 译者资料： 尹银亮，香港华大基因研发中心有限公司email：stevenyinbio@https://www.doczj.com/doc/6416854224.html, 陈会平，毛良伟，武汉华大基因科技有限公司 【内容】 第二代测序 第二代测序成本 第三代测序技术 单分子测序法 边连接边测序法 边合成边测序法 纳米孔测序技术 蛋白质纳米孔测序法 固态纳米孔测序法 长距离阅读DNA的扩展方法 总结性评论 DNA测序正处在技术上天翻地覆剧变的阵痛之中，其突出特点是，测序通量（测序数据量）的大幅增长，原始数据中每个碱基的测序成本急剧下跌，并伴随着以巨资购买仪器以引进新技术的需求。以前看似高不可攀的奢侈性研究活动（如个人基因组测序，宏基因组学研究，以及对大量重要物种的测序），在短短几年之间，正以急速的步伐而变得越来越切实可行了。本篇综述将集中讨论在第三，第四代测序方法背后的故事：它们所面临的挑战；各种方法的局限性；以及它们带给我们的充满诱惑的前景。 第一代DNA测序技术用的是1975年由桑格（Sanger）和考尔森（Coulson）开创的链终止法或者是1976-1977年由马克西姆（Maxam）和吉尔伯特（Gilbert）发明的化学法（链降解）. 在1977年，桑格测定了第一个基因组序列，是噬菌 体X174的，全长5375个碱基。其测序方法和历史过程以前已做过详细回顾。 后来的四色荧光桑格测序法（每一种荧光代表四种碱基中的一种）被用在自动毛细管电泳测序系统中，此系统由应用生物系统有限公司（Applied Biosystems Inc.）推上市场，后来该公司被整合入生命技术公司(Life Technologies)和贝克曼.考尔特公司(Beckman Coulter inc.)（见表1）。发表于2001年的第一个人类基因组
软件测试流程规划 一、引言 本文档规范了软件测试过程中的整体流程，明确了软件测试从开始到结束的各个阶段，以及在各阶段中的负责人、具体工作内容和必需的输入输出文档。另外，本文还介绍了各测试阶段需要的测试工具、测试点和测试步骤，并提供了各类测试文档的参考模板。 二、测试流程概述 1、流程介绍 一般来讲，软件测试是伴随着项目的立项而开始的。也就是说，软件项目一旦确立，测试工作也就开始了。在测试的过程中，前后要经过以下主要环节： 需求分析—>制定测试计划—>搭建测试环境—>测试用例设计—>测试执行—>BUG回归测试—>测试总结—>软件发布 对于以上流程环节，一般而言，需求分析属于需求分析人员的工作范畴，环境搭建、用例设计、测试执行以及回归测试等属于测试人员的工作范畴，测试负责人负责制定测试计划以及对各个环节的跟踪、实施、管理等。 2、流程图 功能测试 项目开始 需求阶段 测试计划 测试阶段 性能测试 用户界面测试 兼容性测试 安全性测试 接口测试 测试总结 软件发布
在这个阶段，主要是对于需求的收集、分析以及评估。 1.由需求分析人员统一收集需求，并整理成文档格式转发给项目经理、开发经理和测试经理； 2.项目经理召集开发经理、测试经理和需求分析人员进行会议讨论，了解具体每个需求的实际含义，并且明确各需求的有效性和可用性； 3.小组会议讨论，确定最终实现的需求和功能点，并整理出重点需求； 4.项目经理根据会议讨论结果编写需求说明，并且再次召集小组开会讨论，对需求说明进行修复、完善，并最终确定《需求规格说明书》。 负责人：项目经理 输入文档：需求说明文档 输出文档：《需求规格说明书》 四、测试计划阶段 作为测试的起始步骤和重要环节，测试计划是对测试全过程的组织、资源、原则等进行规定和约束，并制定测试全过程各个阶段的任务以及时间进度安排，并提出对各项任务的评估、风险分析和管理需求。用一句话概括就是：测试计划是从管理角度对整个测试活动进行规划和控制。 测试计划的主要内容可分以下几个方面： 1.测试概述（介绍项目测试的范围、目的以及组织形式） 2.测试进度（测试时间周期的安排） 3.测试策略（包括测试环境、测试工具及测试方法） 4.需求跟踪（确定系统测试项与需求之间的对应关系） 5.测试通过失败标准（指明测试何时通过何时结束） 6.测试挂起恢复标准（指明当测试过程无法进行下去时测试活动挂起以及恢复的标准） 7.资源分配（工作量的统计以及工作任务的安排） 8.应交付测试工作产品（明确测试需要提交的各类工作文档） 9.风险评估（预估测试存在的风险） 测试经理根据项目的总体进度、发布时间以及需求规格说明、开发计划制定相应的测试计划，完成后提交给项目经理。项目经理组织讨论会，连同开发经理、测试经理以及各模块负责人，对测试计划进行评审并确定。 负责人：测试经理 输入文档：《需求规格说明书》、《软件开发计划》 输出文档：《软件测试计划》
下一代测序（NGS）彻底改变了基因组学研究领域，使全基因组测序比以往任何时候都更有效率。然而，典型的NGS工作流程是鲜有革新的，因为它面临许多手动操作步骤和来自成本、通量以及结果变异性的诸多挑战。传统的样品制备和数据分析方法非常耗时，并更易出错。 针对这些挑战，自动化技术为此提供了相应的解决方案，并通过减少样品间变异提高了最终数据的精准度。然而，为您的NGS工作流程选择适合的自动化设备是一个复杂的过程。为了给您的实验室配备最佳的自动化整合系统，首先要对以下的四个因素进行评估，然后再作出决定： ? 自动化将如何影响您的实验流程？ ? 您可选的自动化方案有哪些？ ? 需要多少培训？ ? 您的自动化解决方案是否需要扩展，以满足未来的需求？
Ilumina文库构建杂交选择和靶向捕获簇扩增和测序Ilumina文库构建杂交选择和靶向捕获簇扩增和测序
图3，高通量PCR纯化自动化工作流程 您是否在纯化时使用真空泵和离心过滤？图3描述了一个中高通 进一步加速：靶标富集技术 量的自动化工作流程图。 基于磁珠技术的靶标富集方法，比如SureSelect靶标富集 试剂盒和SureSelect人全外显子试剂盒，能使您仅对感兴 趣的基因片段测序，提高了几个数量级的实验效率。这些操 作很容易实现和高度扩展，凸显出Bravo自动化液体处理 平台的速度和精度的优势。
如果您的实验室需要更高的通量，您可考虑增加一个更全面的自动化系统。安捷伦BenchCel 微孔板工作站是一个灵活的、可扩展的、通量可媲美大型系统的紧凑桌面式平台。由市面上最灵活和调度高效的安捷伦VWorks 软件控制，BenchCel 工作站可用于复杂的和简单的应用流程，比起传统的手动操作方法能提供更长的无人值守时间和更大的通量。 对于超高通量、高生产率的实验室，您可能需要放弃桌面型系统。安捷伦独立的BioCel 自动化系统基于一个易于定位的直驱机械臂(DDR)。这种高度灵活的系统能与安捷伦其它自动化模块，或第三方设备组合形成定制系统，以满足您实验室的需要。 自动化方案的选择 想一想您实验室的整个工作流程。有各种不同的自动化解决方案——从垂直移液工作站到BenchCel 工作站再到BioCel 系统，可以满足不同的通量需求。自动化将提高实验数据的准确性和一致性——您是否需要一个完全无人值守的自动化解决方案？安捷伦拥有一系列的自动化设备可供选择，以适应不同实验室的需要。安捷伦的Bravo 自动液体处理平台具有宽量程的高精度移液性能、兼容不同类型微孔板的灵活性以及独特的开放式设计，易于整合到其他的自动化工作流程中。结合Bravo 自动化液体处理平台可以大大减少样品制备和检查下一代测序文库质量所花费的时间，并通过减少样本间变异提高了数据质量。 图4. 桌面型选择： A ．Bravo 自动化液体处理平台 B ．BenchCel 微孔板操作工作站独立的高通量系统：C. BioCel 系统 A B C
软件开发与测试配合 工作流程 XXX软件股份有限公司质量部 目录 1．简介 本流程文件旨在规定一个简单的可使开发人员和测试人员在软件开发的编码阶段相互配合工作的工作流程，其中包括测试与开发的配合、送测单和BUG单的填写、测试循环的结束等部分。开发阶段与测试循环的关系、测试模块的组合与测试原则、BUG的分类评级原则等也在本流程文件中有相关的描述。 鉴于公司的技术要求，目前质量部的测试人员不仅要完成黑盒测试工作，而且还要进行白盒测试中的“代码走查”工作。其它的白盒测试工作，目前还不在测试人员的工作职责之内。 由于公司已经为质量管理部开发完成“辅助测试系统1.0”，因此本测试流程的制定就建立在辅助测试系统之上，如果辅助测试系统有了新的版本，质量部将根据其变化适当调整测试流程。 2．适用范围 本流程文件适用于公司开发软件并需要测试服务的任何软件开发项目组、软件开发人员，以及任何测试人员。
当项目组在辅助测试系统中注册以后，公司领导可以使用本系统查询了解所有在本系统中注册的项目的测试信息，项目的质量管理员可以使用本系统查询了解项目的当前测试进展情况。程序员和测试员都可以使用本系统查询到自己产生的送测单和BUG单。 3．术语、名词定义 3.1 送测软件 送测软件包括一切软件执行必须的文件、数据、数据库配置等。开发人员必须提供所有的详细的资料以保证测试人员可以像客户一样的运行被测软件。 3.2 开发文档 开发人员提供给测试人员的开发文档至少包括以下几种：用户需求，概要设计，详细设计，用户手册等。开发人员应当在开发每阶段完成后三天内就向测试人员传送本阶段完成的开发文档，以利于测试人员的工作。 3.3 测试文档 测试文档包括测试计划、测试用例说明、BUG报告及分析、测试总结，以及测试工作全部完成后的测试报告等。测试文档由测试人员编写并维护，也属于开发文档的一部分。
深度DNA测序技术在基因组测序中的研究策略和进展 摘要：回顾了经典DNA测序技术原理，重点阐述了深度测序技术在基因组测序中的研究策略，并结合目前比较常见的二代测序仪来分析比较相互之间的特点和优势，最后，对即将到来的三代测序法的研究进展给予了简单的介绍。 关键词：深度DNA测序基因组测序仪 DNA测序技术的发展过程漫长而艰辛，然而，我们现在获取的大部分DNA序列信息还是依靠基于Sanger在1977年建立的“DNA双脱氧链末端终止测序法”的DNA测序技术获得的。另外就是Maxam和Gilbert建立的“化学降解测序法”。在过去的七年当中，DNA测序技术的发展至少受到来自四个方面的影响：首先是人类基因组计划的出现，这项计划的实施过程中，科学家们面临了巨大的经费问题，因为传统的Sanger测序法无论怎么优化，都无法大幅度降低测序的成本，这很大程度促进了人们对在测序过程中如何降低成本的技术方面的研究。第二，人类以及其他主要模式生物参考序列数据库的建立使得短片段阅读（short-read）成为可能,这极大的促进了短片段测序技术的发展。第三，新型分子生物学技术的不断涌现导致了越来越多的诸如RNA表达染色体构象等生物现象的出现，这就需要有高通量DNA测序手段去解释这些问题，这也极大的促进了新型测序技术的发展。第四，其他学科领域的技术的发展，例如计算机技术，数据存储及分析技术，聚合酶工程技术等，极大地支持了DNA测序技术的应用。本文主要是对目前新一代DNA测序（也叫深度测序）技术（Next-generation DNA sequencing technologies）的研究策略及目前国际DNA测序最新进展做一简要的综述。 1.Sanger测序法 先来回顾一下经典的DNA测序法，从上世纪九十年代早期开始，几乎所有的DNA测序都是利用半自动化的毛细管电泳Sanger测序技术完成的（图1-a）。后来出现了高通量测序法，这种方法首先要对DNA预处理，获取大量的待测序模板即质粒或PCR产物。然后在测序一种发生测序生化反应，这个过程会产生大量长短不一（因为终止位点不一样），末端被荧光标记的延伸产物。再用分辨率高的毛细管凝胶电泳分离这些延伸产物，通过对延伸产物末端四种不同荧光颜色的区分，利用计算机软件自动“读
下一代测序技术的内容概览 高通量DNA测序技术（下一代测序技术NGS）在过去的15年里已经有了快速的发展，新的方法也在继续实现商业化。随着技术的发展，对基础和应用科学中的相关应用范围也在增加。这篇综述的目的是提供一个对NGS方法论的概述以及相关的应用。每个简要的讨论之后都跟有制造商和基于网页的可视化。关键词搜索，例如用Google，可能也会提供有帮助的网页链接和信息。 方法的建立 DNA测序方法的建立是Sanger双脱氧合成法以及Maxam-Gilbert的化学裂解法。Maxam-Gilbert化学裂解法是基于DNA的化学修饰然后在邻近修饰过的核苷酸附件的位点进一步裂解DNA骨架。Sanger测序采用了特殊的链终止核苷酸（双脱氧核苷酸），它缺少一个 3‘OH连接位点。因此，不能够在DNA聚合酶的作用下合成磷酸二酯键，结果是正在伸长的DNA链在该位置终止了。双脱氧核苷酸是具有放射性的或者具有荧光标记的，便于分别在测序凝胶或者自动测序仪器上识别。尽管原始的Maxam-Gilbert方法的化学特性已经被进行修饰来帮助消除有毒性的反应物，但是Sanger测序通过合成双脱氧核苷酸的方法已经变成了一种测序的标准。 Sanger测序法在1977年被创建，并且在UNIT7.4中被详尽的描述了。尽管通过当前NGS 标准测序相对较慢，但是在Sanger末端终止法的改进，自动化，以及商业化这些方面已经使它能够在当前的多种应用范围中成为最适当的测序方法。特别的，超薄的凝胶板电泳已经被多通道毛细血管电泳代替了，逐渐还出现了自动填充可循环的毛细血管以及电动样品加样，这对提高Sanger测序过程的速度与便利性有很大的贡献。在Sanger测序中已经出现的最显著的创新点有：（1）荧光染色的发展，（2）采用末端循环测序降低所要求的输入DNA的质量并且用耐热聚合酶高效准确的将终止物染色与正在伸长的DNA链结合起来，（3）解释和分析序列软件的发展。在自动化的Sanger测序项目中的主导者是Applied Biosystem（AB）。当前商业化的AB测序仪全部使用的是荧光染色和毛细管电泳（CE）。用于DNA测序或者片段分析协议的机器的容量在发生改变，4组毛细血管（SeqStudio Genetic Analyzer），8到24组毛细管（3500 Series Genetic Analyzer），以及48到96组（3700 Series Genetic Analyzer）。所以的这些测序仪产生了600-1000个碱基的正确的序列。尽管多年以来，不同种类基于Sanger测序的测序仪器已经被引进，包括来自Licor，Amersham，MilliGen，Perkin Elmer 和Dupont，所以的这些除了AB仪器都已经被停产了。 Sanger测序技术在一些应用中任然非常有用，而这些应用中高通量测序是不被要求的。一些DNA测序的核心设备和以测序来获利的公司提供了Sanger测序服务。对于个体测序反应对公共的用法是在一个特殊的模板上用特殊的DNA引物，例如去检验质粒的构建和PCR 产物。既然来自大量的商家的用于DNA纯化的分子生物试剂盒和试剂以及相对较高质量的合成产物都是可用的，这就使得甚至是相对较大的Sanger测序项目都能够在合理的时间框架和成本范围内完成。 除了检测DNA的序列AB仪器上的毛细管电泳（CE）还被应用到测量酶对基于荧光标记的DNA底物的选择活性，列如，可以分析DNA片段的大小。毛细管电泳同样能够用来同时分析一个单反应中的多个底物，产物或者反应介质，通过不同的荧光标记。CE被用在DNA 聚合酶和DNA连接酶动力学，以及包括冈崎片段和核糖核苷酸的删除修复的偶联酶通路的研究中。AB CE在在糖生物学中也是很有用的，可以用来分析荧光标记的多糖。 第二代测序方法 术语“下一代”隐含着DNA测序技术发展的下一步，同时也表明将会产生一个以下一代命名的新技术。我们更喜欢用下一代，第三代等这些术语，因为我们意识到上述的自动化的
软件测试流程实施方案 软件测试流程实施方案 1.流程的意义 从一个软件企业的长远发展来看，如果要提高产品的质量首先应当从流程抓起，规范软件产品的开发过程。这是一个软件企业从小作坊的生产方式向集成化规范化的大公司迈进的必经之路，也是从根本上解决质量问题，提高工作效率的一个关键手段。 软件产品的开发同其它产品（如汽车）的生产有着共同特性，即需要按一定的过程来进行生产。在工业界，流水线生产方式被证明是一种高效的，且能够比较稳定的保证产品质量的一种方式。通过这种方式，不同的人员被安排在流程的不同位置，最终为着一个目标共同努力，这样可以防止人员工作间的内耗，极大的提供工作效率。并且由于其过程来源于成功的实例，因此其最终的产品质量能够满足过程所设定的范围。软件工程在软件的发展过程中吸取了这个经验并把它应用到了软件开发中，这就形成了软件工程过程，简单的说就是开发流程。 不管我们做哪件事情，都有一个循序渐进的过程，从计划到策略到实现。软件流程就是按照这种思维来定义我们的开发过程，它根据不同的产品特点和以往
的成功经验，定义了从需求到最终产品交付的一整套流程。流程告诉我们该怎么一步一步去实现产品，可能会有那些风险，如何去避免风险等等。由于流程来源于成功的经验，因此，按照流程进行开发可以使得我们少走弯路，并有效的提高产品质量，提高用户的满意度。 目前流行的流程方法有很多种，如瀑布模型、螺旋模型、RUP模型、IPD流程等，不同的过程模型适合于不同类型的项目。 2.测试工作流程图 2.1测试工作总体流程图 说明：集成测试和系统测试的反馈意见可能导致设计文档（需求或数据库）的修改。 2.2需求阶段流程图
新一代测序技术研究内容 新一代测序技术不仅仅是生命科学基础研究的重要工具，它即将发展为一个新型的巨大产业群，彻底改变生命科学相关产业和医学的发展模式，并给人类社会带来不可估量的巨大影响。 该技术主要包括基因组学、转录组学、表观组学三个方面的研究。 （1）基因组学 基因组学，或称基因体学，是研究生物基因组和如何利用基因的一门学问。该学科提供基因组信息以及相关数据系统利用，试图解决生物、医学和工业领域的重大问题。此外，基因组学能为一些疾病提供新的诊断和治疗方法，有助于医生获得更多的治疗信息并进行个性化医疗。同时，基因组学还被用于食品与农业部门。 在新一代测序技术中，基因组学方面主要包括以下八个方面的测序研究： ①全基因组从头测序 从头测序即de novo测序，不需要任何参考序列资料即可对某个物种进行测序，用生物信息学分析方法进行拼接、组装，从而获得该物种的基因组序列图谱。利用全基因组从头测序技术，可以获得动物、植物、细菌、真菌的全基因组序列，从而推进该物种的研究。一个物种基因组序列图谱的完成，意味着这个物种学科和产业的新开端！这也将带动这个物种下游一系列研究的开展。全基因组序列图谱完成后，可以构建该物种的基因组数据库，为该物种的后基因组学研究搭建一个高效的平台；并为后续的基因挖掘、功能验证提供DNA序
列信息。 ②全基因组重测序 随着测序成本降低和已知基因组序列物种增多，全基因组重测序已经成为动植物育种、群体进化、药物研发、疾病研究和临床诊断中最为迅速而有效的方法之一。全基因组重测序是对基因组序列已知物种的个体进行基因组测序，并在个体或群体水平进行差异性分析的测序方法。在全基因组水平上扫描并检测与生物体重要性状相关的突变位点，具有重大的科研价值和产业价值。 ③外显子测序 外显子测序是指利用序列捕获技术将探针能覆盖到的全基因组外显子区域DNA捕捉并富集后再进行高通量测序的基因组分析方法。该方法能够获得指定外显子捕获平台探针设计区域及侧翼200bp序列的遗传信息，极大地提高了人类基因组中外显子区域的研究效率，显著降低了研究成本。目前主要用于识别和研究与疾病、种群进化相关的编码区及UTR区域内的结构变异。 ④目标区域测序 目标区域测序是指利用特制的探针对客户感兴趣的蛋白编码区域DNA或某段特定序列进行捕获，富集后进行高通量测序的基因组分析方法。该方法能够获得指定目标区域的遗传信息，极大地提高了基因组中特定目标区域的研究效率，显著降低了研究成本。通过目标区域测序，可以对候选位点或候选基因进行验证，也可以进一步找到候选区域或候选基因内的易感位点，适用于候选基因关联分析等研究。
新一代高通量测序技术SOLiD简介 目前市场上有四种高通量测序仪，分别是Solexa，454 (GS-FLX)，SOLiD和Polonator。根据测序原理，它们可以被分为两大类：使用合成法测序(Sequencing by Synthesis)的Solexa和454，及使用连接法测序(Sequencing by Ligation)的Polonator和SOLiD。这些高通量测序仪的共同点是不需要大肠杆菌系统进行DNA模板扩增，且测序所得序列较短：其中的454序列最长，为200～300个碱基，其余三种序列都只有几十个碱基。测序原理及序列长度的差异决定了各种高通量测序仪具有不同的应用领域。这就要求我们在熟悉各种高通量测序仪内在技术特点的基础上进行选择。 基因组所引进的SOLiD (Sequencing by Oligonucleotide Ligation and Detection)是ABI（Applied Biosystems）公司生产的高通量测序仪。目前这台SOLiD运行稳定，SOLiD实验及数据分析小组也可以为大家提供专业的技术服务。所以接下来的关键是如何把SOLiD测序仪应用到符合其技术特点的科研项目中。本短文将简单介绍SOLiD测序流程，双碱基编码原理及数据分析原理，以帮助大家了解SOLiD测序仪的技术特点和应用范围。 1.SOLiD关键技术及其原理 SOLiD使用连接法测序获得基于“双碱基编码原理”的SOLiD颜色编码序列，随后的数据分析比较原始颜色序列与转换成颜色编码的reference序列，把SOLiD颜色序列定位到reference上，同时校正测序错误，并可结合原始颜色序列的质量信息发现潜在SNP位点。 1.1. SOLiD文库构建 使用SOLiD测序时，可根据实际需要，制备片段文库(fragment library)或末端配对文库(mate-paired library)。简单地说，制备片段文库就是在短DNA片段（60～110 bp）两端加上SOLiD 接头（P1、P2 adapter）。而制备末端配对文库，先通过DNA环化、Ecop15I酶切等步骤截取长DNA片段（600bp到10kb）两末端各25 bp进行连接，然后在该连接产物两端加上SOLiD接头。两种文库的最终产物都是两端分别带有P1、P2 adapter的DNA双链，插入片段及测序接头总长为120～180 bp。 1.2:油包水PCR 我们知道，文库制备得到大量末端带P1、P2 adapter但内部插入序列不同的DNA双链模板。和普通PCR一样，油包水PCR也是在水溶液进行反应，该水相含PCR所需试剂，DNA模板及可分别与P1、P2 adapter结合的P1、P2 PCR引物。但与普通PCR不同的是，P1引物固定在P1磁珠球形表面(SOLiD将这种表面固定着大量P1引物的磁珠称为P1磁珠)。PCR反应过程中磁珠表面的P1引物可以和变性模板的P1 adapter负链结合，引导模板合成，这样一来，P1引物引导合成的DNA链也就被固定到P1磁珠表面了。 油包水PCR最大的特点是可以形成数目庞大的独立反应空间以进行DNA扩增。其关键技术是“注水到油”，基本过程是在PCR反应前，将包含PCR所有反应成分的水溶液注入到高速旋转的矿物油表面，水溶液瞬间形成无数个被矿物油包裹的小水滴。这些小水滴就构成了独立的PCR 反应空间。理想状态下，每个小水滴只含一个DNA模板和一个P1磁珠，由于水相中的P2引物和磁珠表面的P1引物所介导的PCR反应，这个DNA模板的拷贝数量呈指数级增加，PCR反应结束后，P1磁珠表面就固定有拷贝数目巨大的同来源DNA模板扩增产物。A BI公司提供的SOLiD 实验手册已经把小水滴体积及水相中DNA模板和磁珠的个数比等重要参数进行了技术优化和流程固定，尽可能提高“优质小水滴”(水滴中只含一个DNA模板一个P1磁珠)的数量，为后续SOLiD 测序提供只含有一种DNA模板扩增产物的高质量P1磁珠。
软件测试流程 测试基本阶段划分 ?测试计划阶段 ?测试设计阶段 ?测试执行阶段 ?测试评估阶段 ?测试验收阶段 文档编写人：龙文 编写时间：2010-8-3
目录 1、测试计划阶段 (3) 1.1、测试计划考虑的问题 (3) 1.2、测试策略 (4) 1.3功能列表 (4) 1.3.1、其他非功能测试 (6) 1.3.2、策略附件要求 (6) 2、测试设计阶段 (8) 3、测试执行阶段 (8) 3.1、执行阶段操作 (9) 4、测试评估阶段 (9) 5、测试验收阶段 (10)
1、测试计划阶段 ?做测试需要做好准备工作，把做一件事需要做的准备工作做好，明确做这件事的目的，最终达成目的并验证结果是我们要做的事情。这要求我们有一个完善的“测试计划书”。 ?测试计划的内容： 1、测试范围：描述本次测试中做的测试范围，如：测试软件功能范围、测试种类等 2、简单的描述如何搭建测试平台以及测试的潜在的风险。 3、项目信息：说明要测试的项目的相关资料，如：输入输出文档，产品描述，软件主要功能 4、人力资源的分配 注： 计划和设计分开编写，最好安排充分的时间去明确测试需求 测试需求：笼统说，就是测试中的所有设计和需求文档。作为本次测试的依据 1.1、测试计划考虑的问题 ?1、要充分考虑测试计划的实用性，即测试计划与实际之间的接近程度和可操作性（必须对需求有透彻的理解）。编写测试计划的目的在于充分考虑执行测试时的各种资源，包括测试内容、测试标准、时间资源、人力资源等等，准确地说是要分析执行时所能够调用的一切资源以及受各种条件限制，可能受到的各种影响。说的再明确一点就是要“计划”“如何”去做“测试工作”，而不是“如何编写测试计划”。 （1）测试内容：对一个软件来说测试计划中会明确本次测试做哪些测试？ 如：系统测试：在整个系统测试中会有（界面测试、功能测试、性能测试、兼 容性测试、安装卸载测试、可靠性测试等测试） （2）测试目的：一般多为保证产品质量是否达到预期的指标。这个指标也就是在 测试中定义的结束标准。 （3）测试标准：需要考虑本次测试需要输入那些文档，该项目结束标准定义、测试结束标准的定义？bug级别定义、优先级定义、bug管理流程定义。这个都需要在执行测试事明确。计划中应该包含这些内容。 （4）资源分配：这里分为人力资源、软硬件资源等划分。一般会把人力资源的利用写入一个测试人员任务分配表里，按照不同的阶段，每个阶段提交相应的成果（难度很大）。软硬件资源中主要是在做计划时考虑到需要多少电脑或别的工具，列出清单。 （5）测试风险：大多考虑到的就是项目开发延期、测试人员不足用例无法全面覆盖测试点、时间不足用例无法全部执行、bug无法及时修改导致无法验证、测试人员技能不足导致测试进度拉长。 （6）软件测试策略一般都是分开来做相关测试方案。 ?2、要坚持“5W1H”的原则，明确测试内容与过程。 ◇明确测试的范围和内容（WHA T）； ◇明确测试的目的（WHY）； ◇明确测试的开始和结束日期（WHEN）；