肠道病毒71型分子生物学研究
【摘要】就有关EV71病毒生物学特征、病毒的复制、诊断技术、EV型别鉴定及分子流行病学等方面作一综述。
【关键词】肠道病毒71型基因型分子流行病学
Molecular Biological Research on 7I Intestinal Virus
Lin Xin, Han Guangen
Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou(310053)
Abstract: It makes review on EV 71 intestinal virus about its biological characteristic, replication, diagnosis technology, EV type identification and molecular epidemic science.
Key words: intestinal virus; EV 71; gene type; molecular epidemic science 近年，肠道病毒71型(EV71)感染在世界各地不断出现爆发流行的报道。EV7I感染主要引起手足口病，但所致的神经系统并发症可导致死亡或永久性肌麻痹。本文从有关EV71病毒生物学特征、病毒的复制、诊断技术、EV型别鉴定及分子流行病学等方面作一综述。
1 病毒的一般特征
1.1 病毒颗粒结构及理化性质肠道病毒71型(EV71)属于小RNA病毒科(Picornaradae)肠道病毒属(Enterovirus)的成员［1］。EV71的病毒颗粒为二十面体立体对称的球形结构，无包膜和突起，直径大约在24～30nrn，核酸为单股正链RNA。病毒粒子的衣壳组成非常复杂，首先由VPI、VPZ、VP3和VP4四种外壳蛋白构成原聚体(Protomer)，再由5个原聚体拼装成具有五聚体样结构的亚单位(Pentamer)。四种结构蛋白中，除VP4包埋在病毒粒子外壳的内侧与病毒核心紧密连接以外，其他三种结构蛋白均暴露在病毒颗粒的表面，因而抗原决定簇基本上位于VPI.VP3上（见图1）。由于病毒颗粒没有类脂性的包膜，所以对去污剂、乙醚、脱氧胆酸盐以及弱酸有抵抗力，此外，该病毒还能抵抗70%乙醇和5%甲酚皂溶液等常见的消毒剂，这些都决定了该病毒较强的野外生存能力。EV71病毒对高温(50℃以上)及紫外线的抵抗能力较差。
图1 肠道病毒粒子及外壳蛋白的结构（略）
1.2 基因组结构［2］EV71基因组为7408个核苷酸的单股正链RNA，腺嗓吟核苷酸和尿嘧啶核苷酸丰富(A+U=5
2.8)，病毒的的单链具有侵染性。基因组中仅有一个开放阅读框(ORF)，编码含2193个氨基酸的多聚蛋白(Polyrotein)，在其两侧分别为746个核苷酸的5’-非编码区(UTRs)和83个核苷酸的3’-非编码区。在3’-非编码区的末端含有一个长度可变的多聚腺苷酸尾巴(poly A)，而其5’末端共价结合有一个小分子量的蛋白(VPg)。该多聚蛋白可进一步被水解成P1、P2、P3三个前体蛋白，Pl前体蛋白编码IA(多肽VP4)、IB(多肽VP2)、IC(多肽VP3)、ID(多肽VP4)四个病毒外壳蛋白;P2前体蛋白编码ZA(特异性蛋白酶)、2B、2C;P3前体蛋白编码3A、VPg(5’末端结合蛋白)、3C(特异性蛋白酶)、3D(RNA 多聚酶组份)。病毒的单链RNA具有感染性。病毒RNA正链和负链的5’末端和3’末端非编
码区中分别含有多肽翻译的起始信号以及RNA合成起始信号。VPg蛋白通过其酪氨酸残基的轻基基团与RNAS’末端的pUPU形成磷酸二酷键与基因组RNA结合。5’ UTR通常折叠成多个特异性的空间结构，这些结构通过与宿主细胞蛋白因子的结合在起始病毒基因组RNA的合成以及病毒蛋白的翻译的过程中发挥重要作用。此外，5’UTR结构还涉及病毒的宿主X围和病毒的毒力等多个方面的功能。EV71病毒基因组3‘UTR区和多聚腺苷酸尾的功能目前尚不清楚。
2 病毒的复制EV71基因组的复制类似于其它正链RNA的病毒。当病毒基因组编码的RNA聚合酶3C完成翻译和加工后，病毒基因组便开始进行复制。病毒基因组RNA 首先作为mRNA合成病毒蛋白，然后再作为模板在病毒RNA聚合酶的作用下合成负链RNA。后者又作为模板在细胞内质网进一步合成大量的正链RNA。体外实验证实:病毒基因组的复制至少需要病毒RNA聚合酶3C、末端结合蛋白VPg以及一种以上的宿主细胞蛋白。随着大量病毒正链RNA在细胞浆内的堆积，病毒开始进入子代毒粒的组装阶段。由于蛋白酶3C或3CD的增多以及活性的增强，加速了Pl前体蛋白的切割。其产物构成的原聚体组成五聚体，并进一步包装病毒VPg一阴A形成病毒子粒［2］。一般情况下，肠道病毒的原病毒毒粒无感染性，经过蛋白酶的再加工(水解切割P1，产生钾1一4多肽)才产生有感染性的病毒粒子［3］。
3 EV的诊断技术
3.1 核酸杂交技术由于EV各型间存在序列高度保守区,利用针对此保守区的通用互补脱氧核糖核酸(cDNA)核酸探针可进行大X围的EV诊断［4］。杂交技术已能成功地检测出可疑病例临床标本中的EV RNA［5］,而且原位杂交技术可以提供病毒感染的组织细胞分布及其与炎症和坏死之间的关系的信息［6］。但是核酸杂交技术过程较复杂,且敏感性不太高,特别当用于检测脑脊液中RNA时。
3.2 逆转录(RT)PCR技术根据EV属特异性的高度保守序列设计其通用引物,为提高其检测敏感性,进行套式PCR能够检出包括无法进行细胞培养和定型的大部分EV分离物,还可直接从临床标本中检测EV核酸,整个过程一般在5h左右完成［7］。周世力［8］利用逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)方法扩增得到肠道病毒71型(EV71SHZH03)外壳蛋白VP1基因,经序列测定证实后,构建重组表达质粒VP1/pPIC9K,转化Pichiapastoris酵母宿主菌GS115,以Myc Tag多克隆抗体作为一抗,利用双层滤膜法筛选酵母转化子,甲醇诱导表达。SDS PAGE分析显示:表达产物的分子量约为30 000,与天然VP1大小一致;表明,表达上清液可与EV71患者急性感染期血清呈阳性反应,表明重组蛋白VP1具有免疫原性。
4 EV型别鉴定诊断后其型别鉴定的方法主要有:将PCR结合细胞培养进行型别鉴定或者对PCR产物进行限制性酶切片段长度多态性分析或进行单链构象多态性分析(PCR SSCP)或进行基因序列测定与遗传性分析等来定型分类。而在结构蛋白编码区,据Oberste等研究,VP1区核酸序列与决定血清型的抗原决定因子密切相关,根据VP1区序列进行分型结果与中和试验鉴定结果一致性较好,与血清型相关性较其它结构蛋白编码区高［9］。但也有研究表明VP4的分型结果与血清也较一致,且因其核酸序列较短(VP4207nt,而
VP1834～951nt),应用更为便利［10］。Oberste等根据对EV遗传性分析的结果,提出根据VP1基因全长或部分序列同源性大小进行型别判定的标准。将被检序列与含所有EV血清型参考株序列的数据库(如Genbank)进行比对,如果被检株序列与某一型参考株同源性最高且>75%,同时与同源性位居其次的另一型参考株同源性<70%,则可判定被检株与最高同源
性参考株为同一血清型;如果最高同源性<75%或者第二同源性>70%,则型别判定有待于进
一步研究确定;如果最高同源性<70%,则为一新血清型［11］。周世力［12］将扩增得到的肠道病毒71型外壳蛋白VP1基因克隆到测序载体pGEM T,测序验证该序列为目的片段后,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX5x1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物经SDS PAGE分析和Western blot验证。结果表明,在经IPTG诱导的BL21中检测到分子量与预期大小相符的大约60kDa的融合蛋白。利用表达产物作为抗原,对EV71感染病人阳性血清的检测初步证实,重组蛋白VP1可以作为检测EV71感染的检测用抗原。见图2～4。唐启慧［13］在成功克隆肠道病毒71型XX株EVGZ06全长VP1蛋白基因并测序的基础上,将部分VP1蛋白基因克隆到表达载体pET28a(+)上,构建了重组表达质粒
pET28a(+)/(502～891)VPI,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS PAGE显示其相对分子质量为19 000,与预计大小一致。ELISA 和Western blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。
图2 重组表达载体pGEX5x1/VP1结构（略）
图3 SOS PAGE电泳分析表达（略）
图4 Western Blot鉴定原核表达的EV71 VP1蛋白（略）
5 分子流行病学目前EV71分子流行病学主要研究内容是VPI基因、VP4基因和5’价R区的变异。其中，VPl基因最具研究价值，这是因为:(1)VPI蛋白是主要的病毒中和决定因子，它直接决定病毒的抗原性(Oberste等，1999);(2)VPI基因具有与病毒血清型完全对应遗传多样性;它不仅可作为肠道病毒属内不同血清型分类的依据，而且可作为小RNA病毒科内不同属的分类参考。周世力［14］对SHZH03株、SHZH98株、亚洲流行株(XX98年、日本99年、及新加坡2000和2001年流行株等)以及一部分欧洲流行株等的结构蛋白基因进行遗传进化分析。方法在对肠道病毒71型中国(XX)分离株SHZH03进行全基因组序列测定的基础上,利用DNA STAR软件对结构蛋白基因进行遗传进化分析。结果SHZH03和SHZH98与亚洲流行株中的XX98流行株、日本99流行株的遗传距离较近,而与新加坡2000和2001年流行株的遗传距离较远;SHZH03株与一些欧洲流行株有较大的差异。结论我国XX地区流行的肠道病毒71型有可能来源于XX1998年EV71大规模流行时的毒株。X爱利［15］2002～2003年从XX市和XX市手足口病患儿的疱液标本中分离到10株病毒,其中XX9株,XX1株。利用两对分别针对EV71和Cox.A16病毒VP1区的特异性引物,用RT PCR方法对病毒进行初步鉴别。根据PCR所用引物及PCR扩增出的产物片段大小不同,可初步判定出EV71和Cox.A16病毒的血清型别。提示,XX分离到的9株病毒中,有2株为EV71,其余7株病毒为Cox.A16;XX分离到的1株病毒为EV71。10株病毒的RT PCR产物经序列测定和分析证实,PCR定型结果正确,说明PCR法具有很高的特异
性,可作为EV71初步鉴定的首选方法。对所分离的3株EV71病毒进行VP1区编码基因全序列的测定和遗传学分析,通过同源性比较和构建系统发生树发现,此3株EV71病毒和中国大陆已发表的7株EV71病毒(SHZH03、SHZH98、SH F1、SH F2、SH H25、SH H26和CHN87)全部属于C基因型,与该型代表株比较,同源性为89.3%～94.6%;与A、B基因型代表株比较,同源性为81.3%～84.0%,差异较大。在C基因型中,此3株EV71病毒和中国大陆先前分离的6株病毒(SHZH03、SHZH98、SH F1、SH F2、SH H25、SH H26)的同源性较高,在94.5%～100%X围内。在系统发生树上,这9株病毒形成一个较独立的分支。与CHN87株的同源性在92.1%～93.6%之间。与已知的C1、C2、C3亚型代表株比较,同源性在89.3%～92.9%,差异≥7%,因此认为可将这9株病毒划分为C4亚型。XX、XX 和XX的EV71病毒有较高的同源性,提示该病毒EV71C4亚型在中国大陆1998～2003年间有较广泛的传播。杨帆［16］对肠道病毒71型中国(XX)分离株SHzH98基因组建立了覆盖全基因组的5个首尾重叠的克隆，并在此基础上进行了全基因组(未包括多聚腺普酸尾)7408个碱基的核普酸序列测定。数据分析表明，SHZH98株与其他EV71毒株相比，
5‘UTR和3’UTR的长度和序列有一定的差异。同源性分析发现，与免疫源性密切相关的PI 结构蛋白基因与XX流行株的同源性最高，与欧美流行株的同源性较低，PZ，P3区非结构蛋白基因的同源性与CoxsakiEVirusA16及MS，BrCr株较高，而与XX流行株相比则较低。遗传进化分析发现，SHZH98株结构蛋白基因与XX流行株亲缘关系较近，而非结构蛋白基因与CoxsakiEVirusA16及MS，BrCr株的亲缘关系较近。见图5。图5 EV71 SHZH98株基因结构示意图（略）
综上所述，目前EV71感染仍然是全球威胁性较大的病毒性疾病之一，尤其在东南亚其危险性更大，但到目前为止，病毒的变异较大，其不同型别或同一型别在不同时间、不同地区乃至不同个体引起了不同的临床表现，EV71众多的病毒型别是怎么形成的，其基因组测序的结构的差别和病毒功能的关系是什么尚不清楚。目前不同型别病毒全基因测序在增多，病毒基因结构和功能的关系应是当前的热点。
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中国生物制品学杂志2013年9月第26卷第9期Chin J Biologicals September 2013，Vol.26No.9 手足口病（hand -foot -mouth disease ，HFMD ）是由肠道病毒引起的传染病，多发生于婴幼儿，可引起手、足、口腔等部位的疱疹，个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜炎等并发症。可引起HFMD 的肠道病毒有20多种（型），其中以柯萨奇病毒A16型（Coxsackie A16virus ，CoxA16）和肠道病毒71型 （enterovirus 71,EV71 ）最为常见，而发病死亡的患儿主要是因为感染了EV71［1-3］。目前，尚无公认的可用于人的有效疫苗可供使用［4］。因此，该疫苗的研制十分紧迫。 本实验对EV71疫苗制备过程中病毒收获液的蛋白成分进行初步分析，以期为该类疫苗的研发及质控提供参考。 肠道病毒７１型收获液蛋白成分的分析 高嵩，李爱灵，黄浩，赵玉秀，苏桂民，王辉 北京天坛生物制品股份有限公司，北京100024 摘要：目的分析肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71）收获液中的蛋白成分，为该类疫苗的研发及质控提供参考。方法将EV71安徽阜阳株接种于Vero 细胞，病毒培养72h 后，收获病毒液，经蔗糖密度梯度超滤离心、甲醛灭活、DEAE Sephorase FF 介质离子交换层析纯化，获得纯化样品。应用透射电镜分析样品中病毒颗粒的形态；对非还原型SDS -PAGE 检测疑似病毒衣壳抗原蛋白VP1和VP3条带进行N -末端氨基酸序列分析；液相色谱（liquid chromatogra －phy ，LC ）与电喷雾电离质谱（electrospray ionization ，ESI -MS ）结合的方法分析样品中所含的蛋白成分。结果 纯化的 EV71样品在透射电镜下可观察到20～30nm 的球形EV71颗粒，呈典型的肠道病毒形态；经SDS -PAGE 分析，第2和第3条带所在位置与文献报道的EV71衣壳蛋白VP1和VP3大小相符，N -末端氨基酸序列与GenBank 报道的安徽阜阳株序列（ACD63039.1）一致；LC ／ESI -MS 质谱分析显示，纯化EV71样品中病毒蛋白成分占绝对优势，包括EV71的蛋白多聚体、VP1、VP2、VP3、VP4蛋白。结论对EV71疫苗制备过程中病毒收获液的蛋白成分进行了初步分析，为该类疫苗的研发及质控提供了参考。关键词：肠道病毒71型；纯化；蛋白成分 中图分类号：R373.2+3R392-33文献标识码：A 文章编号：1004-5503（2013）09-1201-05 Analysis of protein component of harvested liquid of enterovirus 71 GAO Song,LI Ai -ling,HUANG Hao,ZHAO Yu -xiu,SU Gui -min,WANG Hui Beijing Tiantan Biological Products Co.Ltd,Beijing 100024,China Corresponding author:WANG Hui,E -mail:wh6247@https://www.doczj.com/doc/5515589088.html, Abstract ：Objective To analyze the protein component in harvested liquid of enterovirus 71（EV71）and provide a ref －erence for development and quality control of EV71vaccine.Methods EV71Anhui Fuyang strain was inoculated to Vero cells and cultured for 72h,and the harvested liquid was concentrated by sucrose density gradient centrifugation combined with ultrafiltration,inactivated with formaldehyde and purified by DEAE Sepharose FF ion exchange chromatog －raphy.The morphology of virus particles in test samples was analyzed by transmission electron microscopy,while the amino acids at N -terminus of suspected virus capsid protein VP1and VP3bands determined by non -reduced SDS -PAGE were sequenced ，and the protein component by liquid chromatography （LC ）and electrospray ionization （ESI -MS ）.Re －sults Spheroidal particles at sizes of 20~30nm were observed in purified EV71samples under transmission electron microscope,which showed typical morphology of enterovirus.SDS -PAGE showed that the locations of the 2nd and 3rd bands were consistent with those of VP1and VP3of EV71reported respectively.The amino acid sequences at N -terminus of the two bands were consistent with that of EV71Anhui Fuyang strain reported in GenBank （ACD63039.1）.LC ／ESI -MS showed that viral protein components were prominent in purified EV71,including polymer,VP1,VP2,VP3and VP4.Conclusion The protein component of virus liquid during preparation of EV71vaccine were preliminarily analyzed,which provided a reference for development and quality control of the vaccine. Key words ：Enterovirus 71（EV71）；Purification ；Protein component ·疫苗研究· 通讯作者：王辉，E -mail ：wh6247@https://www.doczj.com/doc/5515589088.html, 1201·· DOI:10.13200/https://www.doczj.com/doc/5515589088.html,ki.cjb.000140
第二节肠道病毒71型（EV71） 作者：李兰娟出版社：浙江科学技术出版社 肠道病毒71型（EV71）属于小RNA病毒科（Picornaradae）肠道病毒属（Enterovirus）的成员，归属于人类肠道病毒A。1974年Schmidt等人首次报道从美国加利福尼亚暴发的表现为神经系统症状疾病（1969～1973年）的患者中分离到EV71，随后，世界上许多国家相继报道了EV71病毒在不同地区的流行情况，EV71病毒已在世界范围内引起多次暴发与流行，人们逐渐认识到EV71病毒是手足口病的主要病原。目前已知EV71的感染可以导致手足口病、疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎（asepic meningitis）、脑炎（encephalitis）和脊髓灰质炎样的麻痹性疾病（poliomyelitis-like paralysis）等多种与神经系统相关的疾病。EV71可导致大范围的暴发流行，可伴有严重的CNS并发症或致死性肺水肿。近年来，EV71病毒的流行在亚太地区呈上升趋势，1975年保加利亚大流行,共有705名患儿感染，死亡44例；1997年马来西亚大流行感染2628人，死亡30多人；1998年，台湾地区暴发EV71的大流行，约有12万以上的人被感染，死亡78人。因此，有关EV71的病毒生物学特性、致病机理、诊断和预防等的研究日益受到人们的重视。 一、病毒的一般特征 （一）病毒颗粒结构 该病毒的颗粒为二十面体立体对称的球形结构，无包膜和突出，直径约24～30nm，核酸为单股正链RNA。如同其他肠道病毒属成员一样，EV71型病毒基因组编码的分子量分别为34KD、30 KD、26 KD和7KD的多肽VP1(α)、VP2（β）、VP3（γ）、VP4（δ），构成原聚体，后者再拼装成具有五聚体样结构的亚单位（pentameric unit），60个亚单位通过各自的结构域相互连接，最终形成病毒的外壳。VP1 、VP2和VP3三个多肽暴露在病毒外壳的表面，而VP4包埋在病毒外壳的内侧与病毒核心紧密连接，因而抗原决定簇基本上位于VP1-VP3上。EV71病毒由于没有类脂膜，所以它对乙醚、脱氧胆酸盐、去污剂以及弱酸有抵抗性。此外，该病毒还能抵抗70％乙醇和5％甲酚皂溶液等常见的消毒剂，但是高温（56℃，30min）处理和紫外线照射可以很快将病毒灭活，它对各种氧化剂如高锰酸钾、双氧水、漂白粉等也很敏感。 （二）基因组结构 EV71病毒的基因组为含有大约7411个核苷酸（7423/MS/87株）的单股正链RNA，腺嘌呤核苷酸和尿嘧啶核苷酸丰富（A+U=52.8）。RNA中仅有一个开放阅读框（ORF），编码含2194个氨基酸的多聚蛋白，在其两侧为5′和3′非编码区（UTRs），它与其他肠道RNA病毒一样，在3′末端有多聚腺苷酸（poly A）尾，而其5′末端共价结合有一个小分子量的蛋白（VPg）。病毒的单链RNA具有感染性（病毒裸露RNA的感染性仅为病毒颗粒的百万分之一），如果去除3′末端的多聚腺苷酸尾或基因组出现断裂，感染性便消失。相对而言，其5′末端连接的蛋白质对病毒的感染性没有明显的影响。 EV71基因结构图 (中国疾病预防控制中心提供)
肠道病毒71型（EV71）感染重症病例临床救治专家共识（2011年版） 手足口病是由肠道病毒引起的急性传染病。重症病例多由肠道病毒71型（EV71）感染引起，病情凶险，病死率高。2010年4月，卫生部印发了《手足口病诊疗指南（2010年版）》，指导医疗机构开展手足口病医疗救治工作。现卫生部手足口病临床专家组制定了《肠道病毒71型（EV71）感染重症病例临床救治专家共识（2011年版）》，作为《手足口病诊疗指南（2010版）》的补充，供医疗机构和医务人员参考使用。 一、临床分期 根据发病机制和临床表现，将EV71感染分为5期。 第1期（手足口出疹期）：主要表现为发热，手、足、口、臀等部位出疹（斑丘疹、丘疹、小疱疹），可伴有咳嗽、流涕、食欲不振等症状。部分病例仅表现为皮疹或疱疹性咽峡炎，个别病例可无皮疹。此期病例属于手足口病普通病例，绝大多数病例在此期痊愈。 第2期（神经系统受累期）：少数EV71感染病例可出现中枢神经系统损害，多发生在病程1-5天内，表现为精神差、嗜睡、易惊、头痛、呕吐、烦躁、肢体抖动、急性肢体无力、颈项强直等脑膜炎、脑炎、脊髓灰质炎样综合征、脑脊髓炎症状体征。脑
脊液检查为无菌性脑膜炎改变。脑脊髓CT扫描可无阳性发现，MRI检查可见异常。此期病例属于手足口病重症病例重型，大多数病例可痊愈。 第3期（心肺功能衰竭前期）：多发生在病程5天内。目前认为可能与脑干炎症后植物神经功能失调或交感神经功能亢进有关，亦有认为EV71感染后免疫性损伤是发病机制之一。本期病例表现为心率、呼吸增快，出冷汗、皮肤花纹、四肢发凉，血压升高，血糖升高，外周血白细胞（WBC）升高，心脏射血分数可异常。此期病例属于手足口病重症病例危重型。及时发现上述表现并正确治疗，是降低病死率的关键。 第4期（心肺功能衰竭期）：病情继续发展，会出现心肺功能衰竭，可能与脑干脑炎所致神经源性肺水肿、循环功能衰竭有关。多发生在病程5天内，年龄以0-3岁为主。临床表现为心动过速（个别患儿心动过缓）,呼吸急促，口唇紫绀，咳粉红色泡沫痰或血性液体，持续血压降低或休克。 亦有病例以严重脑功能衰竭为主要表现，肺水肿不明显，出现频繁抽搐、严重意识障碍及中枢性呼吸循环衰竭等。 此期病例属于手足口病重症病例危重型，病死率较高。 第5期（恢复期）：体温逐渐恢复正常，对血管活性药物的依赖逐渐减少，神经系统受累症状和心肺功能逐渐恢复，少数可遗留神经系统后遗症状。 二、重症病例早期识别
肠道病毒EV71感染性疾病 肠道病毒EV71是人肠道病毒的一种，简称为EV71，常引起儿童手足口病、病毒性咽峡炎，重症患儿可出现为肺水肿、脑炎等，统称为肠道病毒EV71感染疾病。 哪些人容易患这种疾病？ 三岁以下婴幼儿多发，成人也可感染。环境卫生、食品卫生差，不良个人卫生习惯易发病。大部分病例病情较轻，可治愈。少数患者可出现脑炎及脑脊髓炎、肺水肿、循环衰竭等，严重时可危及生命。 发病特点：年龄段普遍偏小，最大的患者11岁，最小的才1岁左右，其中2―3岁的居多；其次，发病地区分散，且主要在农村地区。 这种病什么季节最容易发生？ 该病一年四季都可发生，常见于4～9月份。 该病通过什么途径传播？ 1．人群密切接触是重要的传播方式，儿童通过接触被病毒污染的手、毛巾、手绢、牙杯、玩具、食具、奶具以及床上用品、内衣等引起感染。 2．患者咽喉分泌物及唾液中的病毒可通过空气（飞沫）传播，故与生病的患儿近距离接触可造成感染。 3．饮用或食入被病毒污染的水、食物，也可发生感染。 这种病开始有哪些表现？ 患儿感染肠道病毒EV71后，多以发热起病，一般为38℃左右。部分病人早期有咳嗽流涕和流口水等类似上呼吸道感染的症状，有的孩子可能有恶心、呕吐等反应。
发热1～2天后开始出现皮疹，通常在手足、臀部出现，或出现口腔粘膜疱疹。 有的患儿不发热，只表现为手、足、臀部皮疹或疱疹性咽峡炎，病情较轻。大多数患儿在一周以内体温下降、皮疹消退，病情恢复。 如果孩子出现发热、有皮疹等症状，家长该怎么办？ 发现孩子发烧、有皮疹等症状，尽快到正规医院就诊。孩子患病后应暂停去幼儿园和学校，避免传染给他人，防止再感染其他疾病。根据医生建议，决定是否留院观察或住院治疗。 患儿的家庭应使用肥皂、消毒液对日常用品、玩具、尿布进行消毒，对奶具、餐具煮沸消毒。患儿粪便及其他排泄物可用消毒剂或漂白粉消毒；将衣被阳光曝晒，室内保持通风换气。 家庭如何预防这种病？ 春夏是肠道病毒感染容易发生的季节，要讲究环境、食品卫生和个人卫生。不喝生水、不吃生冷食物，饭前便后洗手，保持室内空气流通。尽量不要带婴幼儿去人群密集场所。哺乳的母亲要勤洗澡、勤换衣服，喂奶前要清洗奶头。 幼儿园、托儿所如何预防这种病？ 托幼机构等儿童集体生活、学习的场所，要做好晨间体检，发现有发热、皮疹的孩子，要立即要求家长带小孩去医院就诊，同时报告相关部门。患儿应在家中休息，不宜继续上学。发现有发热、皮疹的孩子后，要立即对玩具、被褥、桌椅等进行消毒；同时做好食堂、卫生间、教室等的消毒处理。保持教室和寝室等活动场所通风换气。 发现保育员、教师和其他工作人员有发热伴皮疹的，应立即暂停工作。 小学如何预防这种病？ 答：小学要做好每日晨间体检。发现有发热、皮疹的孩子，要立即要求家长带去医院就诊，同时报告相关部门。患病学生不应继续上学，要在家中休息。
肠道病毒７１型（ＥＶ７１）感染重症病例临床救治专家共识 卫生部手足口病临床专家组 手足口病是由肠道病毒引起的急性传染病。重症病例 多由肠道病毒７１型（ ＥＶ７１）感染引起，病情凶险，病死率 高［１－３７］。２０１０年４月，卫生部印发了《手足口病诊疗指南（２０１０年版）》，指导医疗机构开展手足口病医疗救治工作。 现卫生部手足口病临床专家组制定了《肠道病毒７１型（ ＥＶ７１）感染重症病例临床救治专家共识（２０１１年版）》，作 为《手足口病诊疗指南（２０１０版）》的补充，供医疗机构和医 务人员参考使用。 １０． ３７６０／ｃｍａ． ｊ． ｉｓｓｎ． ０５７８－１３１０． ２０１１． ０９．００７ 万方数据
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＠＠［１］陆国平，李兴旺，吕勇，等．危重症手足口病（ＥＶ７１感染）诊治 体会．中国小儿急救医学，２００８， １５：２１７－２２０． ＠＠［２ ］ Ｃｈａｎｇ ＬＹ． Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ７１ ｉｎ Ｔａｉｗａｎ． Ｐｅｄｉａｔｒ Ｎｅｏｎａｔｏｌ，２００８，４９ ： １０３－１１２． ＠＠［３］吴亦栋，尚世强，陈志敏，等．手足口病病原体流行特征分析及 临床意义．中华儿科杂志，２０１０，４８：５３５－５３９． ＠＠［４］ Ｃｈｏ ＨＫ， Ｌｅｅ ＮＹ， Ｌｅｅ Ｈ． Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ７１－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｈａｎｄ， ｆｏｏｔ ａｎｄ ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃ ｓｙｍｐｔｏｍｓ， ａ ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ｉｎ Ｋｏｒｅａ， ２００９． Ｋｏｒｅａｎ Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ，２０１０，５３：６３９－６４３． ＠＠［５］曾健生，钱素云．重症手足口病的特点与诊治．中国急救医学， ２００８，２８：７５２－７５３． ＠＠ ［６］ Ｋｏｒｏｌｅｖａ ＧＡ， Ｌｕｋａｓｈｅｖ ＡＮ， Ｋｈｕｄｉａｋｏｖａ ＬＶ． Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ７１ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ． Ｖｏｐｒ Ｖｉｒｕｓｏ１，２０１０，５５ ： ４－１０． ＠＠ ［７］ Ｃｈａｎｇ ＬＹ， Ｌｅｅ ＣＹ， Ｋａｏ ＣＬ． Ｈａｎｄ， ｆｏｏｔ ａｎｄ ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ Ｔａｉｗａｎ ｉｎ １９８０－１９８１ ． Ｊ Ｆｏｒｍｏｓ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ，２００７，１０６：１７３－１７６． ＠＠ ［ ８ ］ Ｗｉｎｔｅｒｇｅｒｓｔ ＫＡ， Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍ Ｂ， Ｇａｎｄｒｕｄ Ｌ， ｅｔ ａｌ． Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉａ， ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ， ａｎｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ ｗｉｔｈ ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ ｄｅａｔｈ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ ｃａｒｅ ｕｎｉｔ． Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ， ２００６， １ １８ ： １７３－１７９． ＠＠ ［９］ Ｐｒｅｉｓｓｉｇ ＣＭ， Ｒｉｇｂｙ ＭＲ． Ｈｙｐｅｒｇｌｙｅａｅｍｉａ ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ ｂｅｔａ－ｃｅｌｌ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ ｉｌｌ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ａｎｄ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｆａｉｌｕｒｅ： ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ ｓｔｕｄｙ． Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ，２００９， １３ ： Ｒ２７． ＠＠［１０］ Ｏｏｉ ＭＨ， Ｗｏｎｇ ＳＣ， Ｌｅｗｔｈｗａｉｔｅ Ｐ， ｅｔ ａｌ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ， ｄｉａｇｎｏｓｉｓ， ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ７１ ． Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏ１， ２０１０，９ ： １０９７－１１１５． ＠＠［１１］张育才，李兴旺，朱晓东，等．儿童危重肠道病毒７１型脑炎及 神经源性肺水肿的救治．中华急诊医学杂志，２００８，１７：１２５０－ １２５４． ＠＠［１２］ Ｗｅｎｇ ＫＦ， Ｃｈｅｎ ＬＬ， Ｈｕａｎｇ ＰＮ， ｅｔ ａｌ． Ｎｅｕｒａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ７１ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ． Ｍｉｃｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，２０１０， １２：５０５－ ５１０． ＠＠［ １３ ］ Ｈｕａｎｇ ＣＣ， Ｌｉｕ ＣＣ， Ｃｈａｎｇ ＹＣ， ｅｔ ａｌ． Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ７１ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ， １９９９， ３４１：９３６－９４２． ＠＠［ １４］ Ｙａｎ ＪＪ， Ｗａｎｇ ＪＲ， Ｌｉｎ ＣＣ， ｅｔ ａｌ． Ａｎ ｏｕｔｂｒｅａｋ ｏｆ ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ７１ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｔａｉｗａｎ １９９８ ： ａ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ， Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃ， ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ａ ｃａｓｅ ｏｆ ｆｕｌｍｉｎａｎｔ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｖｉｒｏｌ， ２０００，１７：１３－２２． ＠＠［１５］ Ｗａｎｇ ＳＭ， Ｌｉｕ ＣＣ， Ｔｓｅｎｇ ＨＷ， ｅｔ ａｌ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ７１ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｉｎ ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｔａｉｗａｎ， ｗｉｔｈ ａｎ ｅｍｐｈａｓｉｓ ｏｎ ｔｈｅ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ． Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ， １９９９，２９：１８４－１９０． ＠＠［１６］ Ｔｈｅｏｄｏｒｅ Ｊ， Ｒｏｂｉｎ ＥＤ． Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｄｅｍａ． Ｌａｎｃｅｔ， １９７５，２：７４９－７５１． ＠＠［１７］ Ｗｕ ＪＭ， Ｗａｎｇ ＪＮ， Ｔｓａｉ ＹＣ， ｅｔ ａｌ． Ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｆｕｌｍｉｎａｎｔ ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ７１ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ． Ｐａｄｉａｔｒｉｃａ， ２００２，１０９ ： Ｅ２６． ＠＠［ １８ ］ Ｌｉｎ ＴＹ， Ｃｈａｎｇ ＬＹ， Ｈｓｉａ ＳＨ． Ｔｈｅ １９９８ ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ７１ ｏｕｔｂｒｅａｋ ｉｎ Ｔａｉｗａｎ： ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ． Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ， ２００２， ３４ ：ｓ５２－ｓ５７． 万方数据
肠道病毒71型感染防治知识 1、肠道病毒71型（EV71）感染的认识 肠道病毒感染顾名思义是由肠道病毒引起的一大类感染性疾病，肠道病毒包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒及新型肠道病毒的71个血清型等，肠道病毒71型为新型肠道病毒的一个血清型，是引起小儿手足口病等的常见病原体。 该病多发生于学龄前儿童，尤其是3岁以下婴幼儿多发，少数病情较重，甚至会引起死亡。该病四季均可发病，以夏秋季多见。 2、肠道病毒71型感染后的症状 肠道病毒71型感染后没有明显的前驱症状或仅有轻度不适，多数患儿突然起病，约半数患儿于发病前1～2天或发病同时出现发热症状，多在38℃左右。在患儿手、足、口腔粘膜以及臀部出现皮疹，皮疹通常不痛、不痒、不结痂、不结疤；由于口腔溃疡会伴有疼痛，患儿往往会流涎、拒食，皮疹通常会在一周内自行消退，同时体温也会下降。 肠道病毒71型感染往往会伴有较为严重的合并症，如肺水肿、无菌性脑膜炎、暴发性心肌炎等，这类患儿大多持续高热，病情发展迅速，以2岁以内患儿多见，多在发病后3－5天内出现中枢神经系统、呼吸系统、循环系统严重并发症，并可引起死亡。 3、肠道病毒71型（EV71）感染的传播 肠道病毒71型感染主要是通过人群间的密切接触进行传播的。患儿咽喉分泌物及唾液中的病毒可通过空气飞沫传播；被患儿唾液、疱疹液、粪便污染的手、毛巾、手绢、牙杯、玩具、食具、奶具以及床上用品、内衣等可通过日常接触传播，接触被病毒污染的食品或水源，可经口感染；门诊交叉感染和口腔器械消毒不严也可造成感染。 4、小儿肠道病毒71型感染的预防 目前该病尚无特殊的预防方法，但做到以下几点可以有效降低被肠道病毒感染的可能。 ①教育孩子养成良好的个人卫生习惯和饮食习惯，如饭前便后洗手、勤洗澡等，要饮开水，不喝生水，不吃生冷食物，剩饭剩菜要完全加热后再食用。 ②家长要经常对孩子居住的房间进行通风换气，尽量少带孩子去拥挤的公共场所，特别是尽量避免与其他有发热、出疹性疾病的儿童接触，减少被感染的机会。 ③注意孩子营养的合理搭配，还要让孩子休息好，适当晒晒太阳，增强自身的免疫力。 ④家长要注意家庭室内外的清洁卫生，家庭成员的衣服、被褥要在阳光下曝晒。家禽、家畜要圈养，避免人、畜混住一处，尤其要减少儿童与家禽、家畜的直接接触。 5、一旦出现发热、皮疹等症状采取的措施 平时要多注意观察孩子身体状况的变化，一旦发现有发热、出疹等表现，应尽早到医院就诊，并积极配合医生的治疗。如孩子是幼儿园小朋友或学校学生，还应及早告诉班级老师。孩子未彻底治好前，不要着急让孩子去幼儿园、学校上学，防止传染给别的儿童 肠道病毒71型感染防治知识 1、肠道病毒71型（EV71）感染的认识 肠道病毒感染顾名思义是由肠道病毒引起的一大类感染性疾病，肠道病毒包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒及新型肠道病毒的71个血清型等，肠道病毒71型为新型肠道病毒的一个血清型，是引起小儿手足口病等的常见病原体。 该病多发生于学龄前儿童，尤其是3岁以下婴幼儿多发，少数病情较重，甚至会引起死亡。该病四季均可发病，以夏秋季多见。 2、肠道病毒71型感染后的症状 肠道病毒71型感染后没有明显的前驱症状或仅有轻度不适，多数患儿突然起病，约半数患儿于发病前1～2天或发病同时出现发热症状，多在38℃左右。在患儿手、足、口腔粘膜以及臀部出现皮疹，皮疹通常不痛、不痒、不结痂、不结疤；由于口腔溃疡会伴有疼痛，患儿往往会流涎、拒食，皮疹通常会在一周内自行消退，同时体温也会下降。 肠道病毒71型感染往往会伴有较为严重的合并症，如肺水肿、无菌性脑膜炎、暴发性心肌炎等，这类患儿大多持续高热，病情发展迅速，以2岁以内患儿多见，多在发病后3－5天内出现中枢神经系统、呼吸系统、循环系统严重并发症，并可引起死亡。 3、肠道病毒71型（EV71）感染的传播 肠道病毒71型感染主要是通过人群间的密切接触进行传播的。患儿咽喉分泌物及唾液中的病毒可通过空气飞沫传播；被患儿唾液、疱疹液、粪便污染的手、毛巾、手绢、牙杯、玩具、食具、奶具以及床上用品、内衣等可通过日常接触传播，接触被病毒污染的食品或水源，可经口感染；门诊交叉感染和口腔器械消毒不严也可造成感染。 4、小儿肠道病毒71型感染的预防 目前该病尚无特殊的预防方法，但做到以下几点可以有效降低被肠道病毒感染的可能。 ①教育孩子养成良好的个人卫生习惯和饮食习惯，如饭前便后洗手、勤洗澡等，要饮开水，不喝生水，不吃生冷食物，剩饭剩菜要完全加热后再食用。 ②家长要经常对孩子居住的房间进行通风换气，尽量少带孩子去拥挤的公共场所，特别是尽量避免与其他有发热、出疹性疾病的儿童接触，减少被感染的机会。 ③注意孩子营养的合理搭配，还要让孩子休息好，适当晒晒太阳，增强自身的免疫力。 ④家长要注意家庭室内外的清洁卫生，家庭成员的衣服、被褥要在阳光下曝晒。家禽、家畜要圈养，避免人、畜混住一处，尤其要减少儿童与家禽、家畜的直接接触。 5、一旦出现发热、皮疹等症状采取的措施
综 述 肠道病毒71型引起手足口病的发病机制 尤俊斌，苏郑明综述，陈讳莹审校 ［摘要］ 手足口病（hand ，foot and mouth disease ，HFMD ）是由肠道病毒引起的传染病。其中肠道病毒71型 （enterovirus 71，EV71）属于人类肠道病毒。近30年来EV71感染在亚太地区每2~3年暴发1次。EV71是手足口病的主要病原体，其详尽发病机制目前尚不清楚。文中综述EV71感染累及中Q 神经系统，引起心肌炎和肺水肿的发病机制研究现状。 ［关键词］ 手足口病；肠道病毒71型；发病机制 ［中图分类号］ Q935 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1008?8199（2012）08?0876?03 基金项目：广东省大学生创新实验项目（20105709）；R 头大学医学院 杰出大学生科研基金 （20105709）作者单位：515041R 头，R 头大学医学院生物化学与分子生物学教研 室（尤俊斌、苏郑明、陈纬莹） 通讯作者：陈纬莹， E -mail ：wychen@https://www.doczj.com/doc/5515589088.html, Pathogenesis of hand ，foot and mouth disease caused by Enterovirus 71 YOU Jun?bin ，SU Zheng?ming reviewing ，CHEN Wei?ying checking （Department of Medical College of Shantou University ，Shantou 515041，Guangdong ，China ） ［Abstract ］ Hand ，foot and mouth disease （HFMD ）is an infectious disease caused by intestinal virus.Enterovirus 71（EV71）is one of the most common strains of human enterovirus.In recent 30years ，EV71infection outbreaks every 2to 3years in the Asia?Pacific Regions ，and EV71is the main pathogen causing HFMD.The pathogenesis is still less understood.The studies on pathogenesis of EV71infection that involves in central nervous system ，leads to myocarditis or pulmonary edema are reviewed. ［Key words ］ Hand ，Foot and Mouth Disease ；Enterovirus 71；Pathogenesis 0 引 言 HFMD 是由肠道病毒引起的传染病，多发生于 5岁以下儿童。其主要特征是发热和手、足、口腔等 部位的皮疹或疤疹，重症可引起无茵性脑膜炎、脑 炎、急性弛缓性麻痹（acute flaccid paralysis ， AFP ）［1］、急性肺水肿和心肌炎等［2］。引发手足口 病的肠道病毒有20余种（型）。柯萨奇病毒A 组的4、5、9、10、16型，B 组的2、5型以及EV71均为手足 口病较常见的病原体。其中以柯萨奇病毒A16型 （Cox A16）和EV71最为常见［3-4 〗。人类感染EV71后，在小肠远端形成原发感染灶，病毒侵入肠壁固有 层集合淋巴结（Peyer′spatch ）后大量复制，约第3天即有少量病毒逸入血流，播散，即“小病毒血症”，遍 及网状内皮系统和其他靶组织。大多数感染者由于机体的兔疫防御机制可控制病毒感染而使病毒在体内播散停止，成为无症状感染。少数感染者由于病毒在网状内皮组织继续复制，约在第5天出现持续 性重度病毒血症，大量病毒播散至脑膜、脑、脊髓、心 脏、皮肤、釉膜等靶组织并继续复制，引发炎症性病变，成为“大病毒血症”患者。其中多数患者亦可在 自身兔疫防御机制的作用下迅速中止 “大病毒血症”，使病毒在靶器官的复制停止，临床表现为轻症 HFMD 。仅有极少数患者病毒在靶器官广泛复制， 成为重症感染患者［5］ 。个别重症患者病情进展快 可致死亡。值得重视的是， 50%成人感染病毒后并无症状，但可传染家人尤其是学龄前儿童而致发 病［6］ 。EV71与神经性并发症密切相关，在最近东甫亚和东亚地区的由EV71引起的大型HFMD 流行 中尤为明显［7-8 〗。 1 EV71导致中枢神经系统、心肌、肺损害的机制1.1 中枢神经系统损害 感染EV71的住院儿童 中约有10%~30%伴有中枢神经系统并发症［9］ 。EV71是一种高度嗜神经病毒，EV71的衣壳蛋白VP1与人类脑组织内表达的3种蛋白有亲和力，即鸟氨酸脱竣酶、基因捕捉锚蛋白重复序列和KIAA0697。在EV71感染时VP1大量合成，作用于 上述蛋白而引起神经系统后遗症，如AFP 和脑炎［10］。脑干是最易被EV71感染的部位［11］ 。实验研究发现，给动物灌喂接种EV71后早期可引起 万方数据
肠道病毒71型分子生物学研究 【摘要】就有关EV71病毒生物学特征、病毒的复制、诊断技术、EV型别鉴定及分子流行病学等方面作一综述。 【关键词】肠道病毒71型基因型分子流行病学 Molecular Biological Research on 7I Intestinal Virus Lin Xin, Han Guangen Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou(310053) Abstract: It makes review on EV 71 intestinal virus about its biological characteristic, replication, diagnosis technology, EV type identification and molecular epidemic science. Key words: intestinal virus; EV 71; gene type; molecular epidemic science 近年，肠道病毒71型(EV71)感染在世界各地不断出现爆发流行的报道。EV7I感染主要引起手足口病，但所致的神经系统并发症可导致死亡或永久性肌麻痹。本文从有关EV71病毒生物学特征、病毒的复制、诊断技术、EV型别鉴定及分子流行病学等方面作一综述。 1 病毒的一般特征 1.1 病毒颗粒结构及理化性质肠道病毒71型(EV71)属于小RNA病毒科(Picornaradae)肠道病毒属(Enterovirus)的成员［1］。EV71的病毒颗粒为二十面体立体对称的球形结构，无包膜和突起，直径大约在24～30nrn，核酸为单股正链RNA。病毒粒子的衣壳组成非常复杂，首先由VPI、VPZ、VP3和VP4四种外壳蛋白构成原聚体(Protomer)，再由5个原聚体拼装成具有五聚体样结构的亚单位(Pentamer)。四种结构蛋白中，除VP4包埋在病毒粒子外壳的内侧与病毒核心紧密连接以外，其他三种结构蛋白均暴露在病毒颗粒的表面，因而抗原决定簇基本上位于VPI.VP3上（见图1）。由于病毒颗粒没有类脂性的包膜，所以对去污剂、乙醚、脱氧胆酸盐以及弱酸有抵抗力，此外，该病毒还能抵抗70%乙醇和5%甲酚皂溶液等常见的消毒剂，这些都决定了该病毒较强的野外生存能力。EV71病毒对高温(50℃以上)及紫外线的抵抗能力较差。 图1 肠道病毒粒子及外壳蛋白的结构（略） 1.2 基因组结构［2］EV71基因组为7408个核苷酸的单股正链RNA，腺嗓吟核苷酸和尿嘧啶核苷酸丰富(A+U=5 2.8)，病毒的的单链具有侵染性。基因组中仅有一个开放阅读框(ORF)，编码含2193个氨基酸的多聚蛋白(Polyrotein)，在其两侧分别为746个核苷酸的5’-非编码区(UTRs)和83个核苷酸的3’-非编码区。在3’-非编码区的末端含有一个长度可变的多聚腺苷酸尾巴(poly A)，而其5’末端共价结合有一个小分子量的蛋白(VPg)。该多聚蛋白可进一步被水解成P1、P2、P3三个前体蛋白，Pl前体蛋白编码IA(多肽VP4)、IB(多肽VP2)、IC(多肽VP3)、ID(多肽VP4)四个病毒外壳蛋白;P2前体蛋白编码ZA(特异性蛋白酶)、2B、2C;P3前体蛋白编码3A、VPg(5’末端结合蛋白)、3C(特异性蛋白酶)、3D(RNA 多聚酶组份)。病毒的单链RNA具有感染性。病毒RNA正链和负链的5’末端和3’末端非编
综述 肠道病毒EV71最新研究进展 2007级生物技术黄琼 肠道病毒71（Enterovirus 71, EV71）是1969年Schmidt等首次从加利福尼亚患有中枢神经系统疾病的婴儿粪便标本中分离出来的[1]。EV71感染主要引起手足口病（Hand-food-mouth disease, HFMD），在临床上与柯萨奇病毒A16（Coxsakie A16, CA16）感染所引起的手足口病难以区别。EV71感染严重者还能引起无菌性脑炎、脑膜脑炎、脑干脑炎、脊髓灰质炎样麻痹、心肌炎和肺水肿等多种与神经系统相关的疾病[2]。自1974年首次报道[3]以来，EV71在世界范围内已引起十多次暴发流行，特别是近几年在亚太地区，EV71的流行呈上升趋势，已引起人们的广泛关注。本文对EV71的结构特征、致病机制、检测技术、型别鉴定、流行病学、研究方向等作一综述。 1 EV71的结构特征 肠道病毒71型(EV71)属于小RNA病毒科(Picornaradae)肠道病毒属(Enterovirus)的成员。EV71的病毒颗粒为二十面体立体对称的球形结构，无包膜和突起，直径大约在24～30nrn，核酸为单股正链RNA。病毒粒子的衣壳组成非常复杂，首先由VP1、VP2、VP3和VP4四种外壳蛋白构成原聚体(Protomer)，再由5个原聚体拼装成具有五聚体样结构的亚单位(Pentamer)。4种结构蛋白中，除VP4包埋在病毒粒子外壳的内侧与病毒核心紧密连接以外，其他3种结构蛋白均暴露在病毒颗粒的表面，因而抗原决定簇基本上位于VP1～VP3上[4]。由于病毒颗粒没有类脂性的包膜，所以对去污剂、乙醚、脱氧胆酸盐以及弱酸有抵抗力，此外，该病毒还能抵抗70%乙醇和5%甲酚皂溶液等常见的消毒剂，这些都决定了该病毒较强的野外生存能力。EV71病毒对高温(50℃以上)及紫外线的抵抗能力较差。
肠道病毒71型（EV71）感染重症病例 临床救治专家共识（2011年版） 手足口病是由肠道病毒引起的急性传染病。重症病例多由肠道病毒71型（EV71）感染引起，病情凶险，病死率高。2010年4月，卫生部印发了《手足口病诊疗指南（2010年版）》，指导医疗机构开展手足口病医疗救治工作。现卫生部手足口病临床专家组制定了《肠道病毒71型（EV71）感染重症病例临床救治专 家共识（2011年版）》，作为《手足口病诊疗指南（2010版）》的补充，供医疗机构和医务人员参考使用。 一、临床分期 根据发病机制和临床表现，将EV71感染分为5期。 第1期（手足口出疹期）：主要表现为发热，手、足、口、 臀等部位出疹（斑丘疹、丘疹、小疱疹），可伴有咳嗽、流涕、食欲不振等症状。部分病例仅表现为皮疹或疱疹性咽峡炎，个别 病例可无皮疹。此期病例属于手足口病普通病例，绝大多数病例 在此期痊愈。 第2期（神经系统受累期）：少数EV71感染病例可出现中枢神经系统损害，多发生在病程1-5天内，表现为精神差、嗜睡、易惊、头痛、呕吐、烦躁、肢体抖动、急性肢体无力、颈项强直 等脑膜炎、脑炎、脊髓灰质炎样综合征、脑脊髓炎症状体征。脑
脊液检查为无菌性脑膜炎改变。脑脊髓CT扫描可无阳性发现，MRI检查可见异常。此期病例属于手足口病重症病例重型，大多 数病例可痊愈。 第3期（心肺功能衰竭前期）：多发生在病程5天内。目前认为可能与脑干炎症后植物神经功能失调或交感神经功能亢进 有关，亦有认为EV71感染后免疫性损伤是发病机制之一。本期 病例表现为心率、呼吸增快，出冷汗、皮肤花纹、四肢发凉，血 压升高，血糖升高，外周血白细胞（WBC）升高，心脏射血分数可异常。此期病例属于手足口病重症病例危重型。及时发现上述 表现并正确治疗，是降低病死率的关键。 第4期（心肺功能衰竭期）：病情继续发展，会出现心肺功能衰竭，可能与脑干脑炎所致神经源性肺水肿、循环功能衰竭有 关。多发生在病程5天内，年龄以0-3岁为主。临床表现为心动过速（个别患儿心动过缓）,呼吸急促，口唇紫绀，咳粉红色泡 沫痰或血性液体，持续血压降低或休克。 亦有病例以严重脑功能衰竭为主要表现，肺水肿不明显，出 现频繁抽搐、严重意识障碍及中枢性呼吸循环衰竭等。 此期病例属于手足口病重症病例危重型，病死率较高。 第5期（恢复期）：体温逐渐恢复正常，对血管活性药物的 依赖逐渐减少，神经系统受累症状和心肺功能逐渐恢复，少数可 遗留神经系统后遗症状。 二、重症病例早期识别