实验一天然产物化学成分系统预试验
天然产物中所含的化学成分种类很多，在深入研究之前应首先了解其中含有哪些类型的化学成分，如生物碱、皂苷、黄酮类等等。这就需要进行各类化学成分的系统定性预试验。或根据研究的需要进
行单项预试法来初步判断。
一、实验目的与要求
掌握未知成分的天然产物是怎样初步提取分离的，熟悉各主要成分的试管试验、沉淀反应和纸层析、薄层层析的方法并根据试验结果判断含有什么类型的化学成分。
二、基本原理
利用各类成分的颜色反应和沉淀反应，对天然产物的提取液进行检查可以初步判断其中的化学成分。由于提取液大多数颜色较深，影响对颜色变化的观察，可以使用薄层层析（TLC）或纸层析（PC）等方法对天然产物的提取液进行初步分离，再进一步检查。
三、实验内容：
利用不同成分在各种溶剂中的溶解度的不同，一般可采用以下3种溶剂分别提取，试验。
1．水浸液：取中草药粗粉5 g加水60 ml，在50~60℃的水浴上加热1小时，过滤，滤液进行下列试验。
检查项目试剂名称
糖*1、酚醛缩合反应*2、菲林试剂
酚类△1% FeCl8试剂
鞣质△1%FeCl8试剂
苷类或多糖*1、酚醛缩合反应
*2、加6NHCl酸化，加热煮沸数分钟，冷后仔细观察有无絮状沉淀
*3、菲林试剂，观察水解前后Cu2O沉淀量有无增加。
皂苷* 泡沫试验
生物碱*1、碘化铋钾试剂*2、硅钨酸试剂
*在试管进行，△在滤纸或硅胶CMC-Na薄层板上进行，下同。 糖鉴定
（1）α-萘酚-硫酸试剂（Molish反应）检查还原糖。
溶液I：10％α-萘酚乙醇溶液。溶液II：硫酸。
取1ml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I 2滴～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液II，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。
（2）斐林试剂检查还原糖。
溶液I：6．93g结晶硫酸铜溶于100ml水中。溶液II：34．6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于100ml 水中。
取1ml样品热水提取液，加入4滴～5滴用时配制的溶液I、II等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。
如检查多糖和苷，取1ml样品水提液，加入1m110% 盐酸溶液，在沸水浴上加热10min，过滤，再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。
酚类鉴定
（1）三氯化铁试剂检查酚类化合物、鞣质1％～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。取1ml样品的乙醇溶液，加入试剂1滴～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。作色谱显色剂用，喷洒后，显绿或兰色斑点为阳性。
2．乙醇提取液
取中草药粗粉5 g，加5~12倍量95%乙醇，在水浴上加热回流提取1小时，过滤，滤液留2 ml作（1）项试验，其余回收乙醇至无醇味，并浓缩成浸膏状，浸膏分为二部分，一部分加少量2% HCL振摇溶过滤。分出酸液，作（2）项式验，附于滤纸上的一部分再以少量乙醇溶解，溶液作（3）项试验；另一部分浸膏以少量乙酸乙酯溶解，溶液置分液漏斗中加适量5% NaOH振摇，使酚性物质及有机酸等转入下层氢氧化钠水溶液中，剩下的乙酸乙酯为中性部分，用蒸馏水洗去碱性即可备用，将乙酸乙酯液2~3 ml，在水浴上蒸干，以1~2 ml乙醇溶解作（4）项试验。
（1）项试验
检查项目酚类鞣质
试剂名称△1% FeCl3△1% FeCl3
结果
（2）项试验
检查项目生物碱
试剂名称*1、碘化铋钾试剂*2、硅钨酸试剂*3、苦味酸试剂
结果
（3）项试验
检查项目黄酮蒽醌
试剂名称△1、1% AlCl3试剂
* 2、盐酸镁粉反应
△1、10% KOH液
△2、0.5% Mg(Ac)2试剂
结果（4）项试验
检查项目香豆素与萜类内酯
试剂名称*1、氨基安替比林—铁氰化钾呈色反应
结果
3、石油醚提取液
取中草药粗粉1 g，加10 ml石油醚（沸程60~90℃），放置2~3小时，过滤，滤液置表面皿上任其挥发，残留物进行下列试验：
检查项目甾体或三萜类挥发油和油酯
试剂名称*1、醋酐－浓硫酸试验石油醚提取液滴于滤纸片上，观察有无油斑并在加热后能否发挥
结果
◆黄酮类鉴定
（1）盐酸-镁粉试剂检查黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）类化合物
取1ml样品的乙醇溶液，加入数毫克镁粉，滴加数滴盐酸，必要时水浴上微热，显红-紫色为阳性反应。（2）三氯化铝试剂检查有邻二酚羟基或3-羟基、4-酮基或5-羟基、4-酮基的黄酮类化合物
1％三氯化铝乙醇溶液或5％三氯化铝乙醇溶液。
喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察，呈黄色或黄绿色荧光为阳性反应，也可在滤纸上或试管中进行。
（3）醋酸镁试剂检查黄酮类，二氢黄酮类化合物，及羟基蒽醌类衍生物
1％醋酸镁甲醇溶液。
在滤纸或薄层板上，点1滴样品醇溶液，挥去醇后，点1滴试剂于样品斑点边缘，加热干燥，于紫外灯下观察，黄酮类显黄色荧光，二氢黄酮类呈天蓝色荧光。显橙红色为大黄素型蒽醌，显紫色为茜草型蒽醌。
◆生物碱鉴定试剂
（1）改良碘化铋钾试剂（生物碱通用显色剂）
溶液I：0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸，加水40ml。溶液II：8g碘化钾溶于20ml水中。溶液I和II等量混合，于棕色瓶中可以保存较长时间。目前市场上有碘化铋钾试剂可供直接配制：7.3g碘化铋钾、冰醋酸10ml加水60ml。
取1m1样品的稀酸溶液加1滴～2滴试剂，产生桔红色浑浊或沉淀为阳性反应。如作薄层色谱显色剂，取混合液1m1、醋酸2ml、水10ml混合即得。喷洒后呈桔红色斑点为阳性反应
（2）苦味酸试剂（生物碱通用沉淀试剂）
苦味酸1g溶于100ml水中。
取1ml样品中性溶液，加入试剂1滴～2滴，产生黄色晶形沉淀。
（3）硅钨酸试剂（生物碱通用沉淀试剂）
1g硅钨酸溶于20ml水中，加10％盐酸使成pH2左右。
取1ml样品的稀酸溶液，加入1滴～2滴试剂，产生白色至褐色沉淀为阳性反应。
四、药品试剂：
中药饮片每组每种8克
◆生物碱试剂
（1）碘化铋钾(Dragendorff)试剂：出现桔红色或黄色沉淀。
（2）苦味酸(Hager)试剂，样品液需调至中性后加试剂，出现黄色晶形沉淀。
（3）硅钨酸(Bertrand)试剂：出现淡黄色或灰白色沉淀，在薄层板上应时，加热后出现黑色斑点。
◆酚类、鞣质试剂
1%FeCl3水或乙醇试剂：墨绿色沉淀
◆氨基酸、蛋白质试剂
茚三酮(Ninnydrin)试剂
◆糖、多糖和苷试剂
（1）Molish试剂（液面交界处紫红色环）：α-萘酚试剂
（2）菲林反应(Fehling试剂)（砖红色沉淀）
溶液Ⅰ：69.3克结晶硫酸铜溶于1000毫升水中。
溶液Ⅱ：349克洒石酸钾钠及氢氧化钠100克，溶于1000毫升水中。
皂苷试剂
浓硫酸试剂
黄酮类试剂
盐酸—镁粉试剂
醋酸镁反应
1%三氯化铝乙醇液
香豆素试剂
1%三氯化铁水溶液
Gibb氏反应：4-氨基安替比林-铁氰化钾(Emerson)
4、玻璃仪器：（每2人或3人一组，每组一套）
(1) 试管10个，滴管2个，玻棒1支
（2）100ml圆底烧瓶一个，250ml圆底烧瓶一个，25cm球型或蛇型冷凝管一个，有机溶剂蒸馏回收装置1套，50ml烧杯3个，25ml具塞锥形瓶
（3）有孔白瓷板1个
（4）滤纸，乳胶管、药勺
仪器：（1）普通天平（2）分析天平（3）电水浴锅
五、思考题
实验二 芦丁的提取、分离及鉴定
一、目的要求
1．以芦丁为实例学习黄酮类成分的提取分离方法。 2．掌握用黄酮苷水解制取黄酮苷元的方法。 3．了解黄酮类化合物的一般性质。
二、基本原理
槐米系豆科属植物槐树SopHora japonica.L.的花蕾，历来作为止血药，治疗痔疮、子宫出血、吐血、鼻出血，并有清肝泻火，治疗肝热目赤，头痛眩晕的功能。其主要化学成分为芸香苷（芦丁），含量高达12％～20％，芸香苷广泛存在于植物中，现已发现含有芸香苷的植物高达70种以上，尤以槐米和乔麦中含量最高。药理实验证明芸香苷有调节毛细血管渗透作用，临床上用作毛细血管性止血药，常作为高血压症的辅助用药。
槐米中主要成分的物理性质 1．芸香苷（芦丁，rutin ）：O H O H C 21630273?，淡黄色针状结晶，mpl74℃～178℃，无水物为188℃～190℃。溶解度：冷水中1：8000，热水中l ：200，冷乙醇中1：300，热乙醇中1：30，冷吡啶中1：12，微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、氯仿、石油醚等溶剂。易溶于碱液，呈黄色，酸化后又析出，可溶于硫酸和盐酸，呈棕黄色，加水稀释又析出。UV nm EtOH max λ：259，299sh ，359。
2．槲皮素（quercetin ）：O H O H C 2710152?，黄色结晶，mp313℃～314℃，无水物为316℃。溶解度：冷乙醇中1：290，沸乙醇中1：23，可溶于甲醇、乙酸乙酯、吡啶、丙酮等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。 UV nm EtOH max λ：255，269sh ，301sh ，370。
芸香苷（芦丁，rutin ）
1．芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，在碱水中成盐增大溶解能力，用碱水为溶剂煮沸提取，提取液加酸酸化后又成为游离的芸香苷而析出。利用芸香苷对冷水和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。
2．黄酮苷可通过酸水解得到苷元和糖，并可通过薄层色谱法和纸色谱法进行检识。 3．利用黄酮类对紫外光有特定吸收的特征进行结构测定；也可制备乙酰化物进行结构鉴定。
三、实验内容
1自槐花米中提取芦丁： (1)．提取方法：
称取槐花米粗粉20g （压碎），加沸水300m1，加热煮沸30min ，四层纱布趁热过滤，残渣同法再操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用蒸馏水洗涤芸香苷结晶，抽干，得粗制芸香苷，置空气中干燥后，称重。
HO
OH O
O
OH
OH
葡萄糖-鼠李糖
(2)．重结晶方法：
取粗芦丁2 g，加去离子水或蒸馏水400 ml，加热煮沸，趁热抽滤，放置过夜析晶（或放冷析晶），抽滤，得精制芦丁。
记录：粗芦丁得率多少？精制芦丁得率多少？熔点？
2. 芦丁的水解：
取芦丁1 g，加2% H2SO4 80 ml，小火加热微沸回流30分钟至1小时。开始加热10分钟为澄清溶液，逐渐析出黄色小针状结晶，即槲皮素，抽滤取结晶（保留滤液20毫升，以检查其中所含单糖），沉淀物为芸香苷苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分，晾干，称量。得粗制槲皮素，再用乙醇重结晶得精制槲皮素。
加50%乙醇（按1克90 ml量）加热回流使槲皮素粗晶溶解，趁热抽滤，放置析晶，抽滤得精制品，在减压下110℃干燥可得槲皮素无水物。测熔点，进行薄层层析鉴定。
取芸香苷水解后的滤液20m1，加饱和氢氧化钡溶液中和至中性（搅拌下进行），滤去白色的硫酸钡沉淀，滤液浓缩至2ml～3ml或蒸干后，加2ml～3 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。
3. 鉴定
呈色反应
取芸香苷及槲皮素精品约10mg，各用5 ml乙醇溶解，制成样品溶液，按下列方法进行试验，比较苷元（槲皮素）和苷（芦丁）的反应情况。
（1）Molish反应
取样品溶液1ml，加100% α一萘酚溶液1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5 ml硫酸，静置，观察并记录液面交界处颜色变化。
芦丁（黄酮苷）：上层浅黄色，交界处紫红色环 +芦丁含葡萄糖和鼠李糖
槲皮素（黄酮苷元）：上层浅黄色，下层无色 -槲皮素没有糖结构
（2）盐酸一镁粉反应
样品溶液分别置于两试管中，加入金属镁粉少许，盐酸2滴～3滴，观察并记录颜色变化。均变红色 +为黄酮类
（3）醋酸镁纸片反应
取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、槲皮素的乙醇溶液，然后各加1％醋酸镁甲醇溶液两滴，于紫外光灯下观察荧光变化，记录现象。
均有黄色荧光：黄铜类
（4）利三氯化铝纸片反应
在两张滤纸条上分别滴加芸香苷、槲皮素醇溶液后，各加1％三氯化铝乙醇溶液两滴，于紫外光灯下观察荧光变化，记录现象。
均为鲜黄色：黄酮类
（5）锆一柠檬酸反应
取样品溶液2 ml，加2%二氯氧锆甲醇溶液3滴～4滴，观察颜色，然后加入2％柠檬酸甲醇溶液3滴～4滴，观察并记录颜色变化。
芦丁加入ZrOCl2后颜色加深，加入柠檬酸后颜色变浅。
槲皮素加入ZrOCl2后颜色变深，加入柠檬酸后没变化。
都有3-OH/5-OH，所以遇ZrOCl2颜色变深；芦丁只含5-OH，所以加柠檬酸后褪色；槲皮素含3-OH和5-OH，所以加柠檬酸不褪色。
色谱鉴定
（1）芸香苷和槲皮素的薄层色谱
样品：自制芦丁、槲皮素
对照品：芦丁、槲此素
展开剂：（1）正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5上层或4∶1∶1）；（2）25%醋酸水溶液；（3）85%醋酸水溶液
显色：（1）可见光下观察，再在紫外光下观察（2）氨气熏后观察（3）喷三氯化铝试剂后观察点样：提取的槲皮素及芸香苷的乙醇溶液和对照品的乙醇溶液。
展开剂：正丁醇一醋酸一水（4：l：5）上层溶液。
展开方式：预饱和后，上行展开。
显色：喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外光灯（365nm）下检视色斑的变化。
观察记录：记录图谱及斑点颜色。
（2）芸香苷与槲皮素的聚酰胺色谱
层析材料：聚酰胺薄膜。
点样：提取的芸香苷与槲皮素的乙醇溶液和对照品的乙醇溶液。
展开剂：乙醇-水（7∶3），水饱和的正丁醇一醋酸（10：0.2）。
展开方式：上行展开。
显色：喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外灯光（365nm）下检视色斑的变化。
观察记录：记录图谱及斑色颜色。
用极性展开剂展开，苷在前；用弱极性展开剂展开，苷元在前
（3）糖的色谱鉴定
层析材料：新华层析滤纸NO.2。
点样：（三）中糖的供试液及葡萄糖、鼠李糖对照品溶液。
展开剂：正丁醇一醋酸一水（4：l：5）上层溶液。
展开方式：上行展开。
显色：氨性硝酸银试液，喷洒后先用电吹风冷吹至于，再吹热风至出现斑点为止。
观察记录：记录图谱及斑点颜色。
四、药品试剂
药品：每组槐花米20克
主要仪器及试剂
仪器:
（1）烧杯(100ml ,500ml)；（2）圆底烧瓶(100ml , 150ml)；（3）冷凝管；（4）抽滤瓶；（5）循环水泵；（6）紫外灯
试剂:
(1) 0.4%硼砂水（2）石灰乳（3）乙醇、甲醇等（4）2%硫酸，盐酸（5）1％三氯化铝乙醇液（6）正丁醇:醋酸:水(4:1:5 或4:1:1)（7）25%醋酸, 85% 醋酸（8）乙醇:水(7:3)（9）标准品:芦丁、槲皮素、葡萄糖、鼠李糖（10）PH广泛试纸（11）聚酰胺薄膜
五、思考题：
1、芦丁水解不完全时将产生什么结果？
2、芦丁和槲皮素用不同展开剂系统展开将出现什么结果？为什么？
3、芦丁和槲皮素聚酰胺薄层出现什么结果？为什么？
记录：主要产物得率？熔点？层析示意图
实验三天然有效成分的薄层色谱鉴别
一、目的要求
掌握薄层色谱法对天然有效成分定性检识的原理、方法与实验技术。
二、基本原理
中草药化学成分的预试，除上述颜色反应及沉淀反应外，如能配合层析方法，不仅可以减少成分间的相互干扰，而且可以根据其极性及溶解性能（通过所用展开剂及R f值判断）较为正确地判断中草药中所含的化学成分。
运用天然药物化学的理论知识和技术手段，依据中药制剂中的主要成分或特征成分的性质特点，选用适当的溶剂和方法如液固提取、液液萃取、分步提取、单一溶剂萃取、色谱等方法对试样进行预处理，消除干扰物质，达到提高待测的有效成分或特征成分的相对浓度，以利在进行薄层色谱鉴别时提高色谱的清晰度和成分的检出，实现应用薄层色谱检测技术鉴别和控制中药制剂质量的实用价值。
各类成分的层析预试条件大致如下，尚可根据具体对象适当调整展开剂的比例。
化合物类别色谱种类展开条件检出试剂
酚类化合物硅胶-TLC 氯仿-丙酮（8∶2）1%三氯化铁乙醇液
有机酸硅胶-TLC 氯仿-丙酮-甲醇-乙酸
（7∶2∶1.5∶0.5）
溴甲酚蓝
氨基酸PC
正丁醇-乙酸-水
（4∶1∶5，上层）
酚以水饱和
茚三酮
生物碱硅胶-TLC 氯仿-甲醇（9∶1）氨熏改良碘化铋钾
强心苷
PC滑石粉-TLC
（甲酰胺为固定相）
氯仿-丙酮-甲醇-甲酰胺
（8∶2∶0.5∶0.5）
占吨氢醇
甾体三萜硅胶-TLC 氯仿-丙酮（8∶2）硫酸-醋酐；5%硫酸乙醇蒽醌硅胶-TLC 环己烷-乙酸乙酯（7∶3）氨薰
挥发油硅胶-TLC
石油醚
石油醚-乙酸乙酯（85∶15）
香草醛-浓硫酸
香豆素硅胶-TLC 正丁醇-乙酸-水（4∶1∶1）用5%KOH甲醇液喷后紫外分析灯下看荧光现象
黄酮苷及苷元PC
乙酸-水（15∶85）
正丁醇-乙酸-水（4∶1∶1）
三氯化铝
糖PC
正丁醇-乙酸-水（4∶1∶1）
乙酸乙酯-吡啶-水（2∶1∶2）
苯胺-邻苯二甲酸试剂
三、实验内容
牛黄解毒片
本品为包衣片。处方为：牛黄50g，雄黄50g，石膏200g，大黄20Og，黄芩150g，桔梗100g，冰
片25g，甘草50g。以上八味，雄黄水飞或粉碎成极细粉；大黄粉碎成细粉；牛黄，冰片研细；其余黄芩等四味加水煎煮2次，每次2h，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加入大黄，雄黄粉末，制成颗粒，干燥，再加入牛黄，冰片粉末，混匀，压制成1000片，或包衣，即得。
◆大黄的鉴别
1．预处理
（1）供试液制备本品6片，刮去糖衣，研碎，加10ml甲醇回流15min，冷后自然过滤，滤液使成5ml，作为供试液。
（2）对照液制备①取大黄药材1g，同供试液制备法制成对照药材溶液；②分别取大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品适量，加乙醇溶解成1m1含1mg的对照品溶液；③取缺大黄的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备成阴性对照液。
2．薄层色谱鉴别
薄层板：硅胶H - 0.5％CMC-Na板10cm×l5cm（105℃，30min）。
点样：供试液及各对照液，点样量5μl。
展开剂：石油醚（60℃～90℃）一甲酸乙酯一甲酸（15：5：1）上层溶液。
展开方式：上行展开12cm。
显色：显色前后置日光及紫外光灯（365nm）下观察，再喷0．5％醋酸镁乙醇溶液显色。
观察记录：观察斑点颜色及位置，记录图谱。
◆黄芩的鉴别
1．预处理
（1）供试液的制备同大黄供试液制备。
（2）对照液的设备
①黄芩药材1g，同供试液制备法处理，得对照药材溶液；②取黄芩苷对照品适量，加乙醇溶解成1ml 含1mg的对照品溶液；③取缺黄芩的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备法制得阴性对照液。2．薄层色谱鉴别
薄层板：硅胶H - 0．5％CMC-Na板5cm×l5cm （105℃，30min〕。
点样：供试液5μl、对照品溶液2μl、对照药材液及阴性对照液各5μl。
展开剂：乙酸乙酯一丁酮一甲酸一水（5：3：1：1）。
展开方式：上行展开12cm。
显色：喷1％三氯化铁乙醇溶液。
观察记录：观察斑点颜色及位置，记录图谱。
◆甘草的鉴别
1．预处理
（1）供试液制备本品6片，刮去包衣，研细。加乙醚20ml，回流lh，过滤，残渣挥于乙醚，加入甲醇20ml加热回流lh，冷却。过滤，滤液浓缩至2ml为供试液。
（2）对照液制备①取甘草药材1g，剪细，同供试液制备法处理，得对照药材溶液；②取缺甘草的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备法处理，得阴性对照液。
2．薄层色谱鉴别
方法一
薄层板：硅胶H - 0．5％CMC-Na板5cm×l5cm （105℃，30min〕。
点样：供试液、阴性对照品溶液各5μl、对照药材液2μl。
展开剂：先用苯—氯仿—甲醇（10：10：1）作第一次展开，取出晾干，再以苯—氯仿—甲醇（5：5：1）作第二次展开。
展开方式：上行展开12cm。
显色：在紫外灯（365nm）下检视
观察记录：观察斑点颜色及位置，记录图谱。
方法二
薄层板：硅胶G加1％氢氧化钠溶液铺板，晾干。
点样：供试液5μl、对照品溶液2μl、对照药材液及阴性对照液各5μl。
展开剂：乙酸乙酯一甲酸一冰醋酸—水（30：2：2：4）。
展开方式：上行展开12cm。
显色：喷10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至显兰色斑点。
观察记录：观察斑点颜色及位置，记录图谱。
复方丹参片
本品为糖衣片。处方为：丹参浸膏215g，三七141g，冰片8g。丹参浸膏系取丹参提取3次，第1次加乙醇回流1.5h，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1．30(55℃～60℃)；第2次加50％乙醇回流1.5h，滤过；第3次加水回流2h，滤过，合并第2、3次滤液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.40（55℃～60℃），与第1次的浓缩液合并，混匀，制成相对密度为1.35～1.39（55℃～60℃）的浸膏，即得。将三七粉碎成细粉，与丹参浸膏拌匀，干燥，制成颗粒，将冰片研细，与上述颗粒混匀，压制成1000片，包糖衣，即得。
◆三七的鉴别
1．预处理
（1）供试液制备取本品5片，刮去糖衣研碎，加乙醚10ml，超声处理5min或浸渍40min，时加振摇，滤过，滤渣加10ml甲醇回流15min，放冷，滤过，其滤液浓缩至2ml为供试液。
（2）对照液制备①取三七0.7g，同供试液制备法处理，得对照药材溶液；②取三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每ml含1mg的对照品溶液；③取缺三七的模拟复方丹参片（相当于5片），同供试液制备法制成阴性对照液。
2．薄层色谱鉴别
薄层板：硅胶G-CMC-Na板6cm×l2cm （105℃，30min）。
点样：供试液和各对照溶液各5μl。
展开剂：正丁醇-乙酸乙酯-水（4：1：5）上层溶液。
展开方式：上行展开10cm。
显色：喷10％硫酸-甲醇溶液105℃烘至显色，显色前后置日光及紫外光灯（365nm）下检视。
观察记录：记录图谱及斑点颜色。
◆冰片的鉴别
1．预处理
（1）供试液制备取本品5片，刮去糖衣，研碎，加乙醚10ml，超声处理5min或冷浸40min，滤过，滤液自然挥干，残渣加乙酸乙酯2ml溶解，作为供试液。
（2）对照液制备①取合成冰片适量，加乙酸乙酯溶解制成每ml含0．5mg的对照品溶液：②取缺冰片的模拟复方丹参片（相当于5片），同供试液制备法处理，得阴性对
照液。
2．薄层色谱鉴别
薄层板：硅肢G-CMC-Na板6cm×l5cm（105℃，30min）。
点样：供试液、冰片对照品溶液及阴性对照液各5μl。
展开剂：石油醚-乙酸乙酯-苯（18：2：4）。
展开方式：上行展开12cm。
显色：喷1％香草醛硫酸试剂后110℃烘至显色。
观察记录：观察显色前后斑点的位置和颜色，记录图谱。
丹参的鉴别
1．预处理
（1）供试液制备同冰片供试液制备。
（2）对照液制备
①取丹参1g，用95％乙醇回流30min，第2次用50％乙醇回流30min，第3次用水回流40min，分别过滤，合并滤液，滤液浓缩，残渣同供试液制备法处理得对照药材溶液；②取丹参酮ⅡA适量，加乙酸乙酯溶解制成每ml含0.5mg的溶液；③取缺丹参的模拟复方丹参片（相当于5片），同供试液制备法处理，得阴性对照液。
2．薄层色谱鉴别
薄层板：硅胶G-CMC-Na板6cm×l5cm （105℃，30min）。
点样：供试液和各对照液各5μl。
展开剂：苯-乙酸乙酯（19：1）。
展开方式：上行展开10cm。
显色：喷1％香草醛硫酸试剂后110℃烘至显色。
观察记录：观察显色前后各斑点的颜色和位置，记录图谱。
四、思考题
1．制备冰片、牡丹皮供试液为什么要在低温或室温下操作，对色谱鉴别有什么影响？
2．在生脉饮口服液制剂中，样品加硫酸的乙醇溶液加热回流的作用是什么？用正丁醇和氯仿分别提取何种成分？供鉴定何种成分？
3．在复方丹参片制剂中，在鉴别冰片时，薄层板展开后其展开溶剂为什么要自然挥尽，若用加热的方法除去展开剂会产生什么后果？
《天然药物化学》教案 一、总学时数、理论学时数、实验学时数、学分数： （一）总学时数：108学时 （二）理论学时数：54学时 （三）讨论学时数：6学时 （四）实验学时数：48学时 （五）学分数：6学分 二、承担课程教学的院、系、教研室名称 华中科技大学同济医学院 药学院中药系天然药物化学教研室 三、课程的性质和任务 天然药物化学是运用现代科学理论和方法研究天然药物中化学成分的一门学科。 天然药物化学是药学专业的必修专业课，学生在具备有机化学、分析化学、光谱解析、药用植物学基础知识后，通过本课程的教学，使学生系统掌握天然药物化学成分（主要是生物活性成分或药效成分）的结构特征、理化性质、提取分离方法以及主要类型化学成分的生源途径、结构鉴定的基本理论和基本技能，培养学生具有从事天然药物的化学研究、新药开发和生产的能力，为继承、整理祖国传统医药学宝库和全面弘扬、提高祖国药学事业水平奠定基础。 四、所用教材和参考书 （一）所用教材：国家级规划教材，吴立军主编，天然药物化学(第四版)，人民卫生出版社。 （二）参考书： 1、吴寿金、赵泰、秦永琪主编《现代中草药成分化学》中国医药科技出版社。 2、徐任生主编《天然产物化学》科学出版社。 3、Nakanishi K. Natural Products Chemistry, Academic Press, New York。 第一章绪论 一、学时数：6学时 二、目的和要求 1、掌握天然药物化学的含义、研究对象、性质与任务； 2、掌握天然药物有效成分提取分离的一般原理及常用方法； 3、掌握层析分离法的分类及其原理、各种层析分离要素、相关因素及应用技术；
竭诚为您提供优质文档/双击可除 天然药化实验报告 篇一：天然药化实验 实验一黄柏中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定（10学时）【目的要求】 1.掌握黄柏中提取盐酸小檗碱的原理和方法。 2.熟悉盐酸小檗碱的化学性质和鉴定方法。 3.掌握渗漉法、盐析法、结晶法的基本操作方法。【实验原理】 黄柏为芸香科(Rutaceae)植物黄皮树（phellodendronchinenseschneid）及黄柏树(phellodendronamurenseRupr.)的干燥树皮。树皮中含有小檗碱(berberine)、木兰花碱(magnoflorine)、黄柏碱(phellodendrine)等多种生物碱及内酯、甾醇等，其中以小檗碱为主要药效成分(中华人民共和国药典，2000)，含量为1.4%-5%(川黄柏含量较高)。其性寒、味苦，具有清热燥湿、泻火解表、退虚热之功效。 1.小檗碱(berberine)异名黄连素，分子式 [c20h18no4]+，分子量336.37，黄色针状结晶。作为临床上
一种常用的广谱抗菌药，小檗碱主要用于菌痢、胃肠炎、痈肿等细菌性感染。现代研究证明小檗碱有抗肿瘤、抗心率失常、降压、降血糖等作用，在临床上有越来越广泛的应用，需求量日益增加。 o + omeome 2.溶解性：能缓缓溶于冷水中（1:20），微溶于冷乙醇（1:100），易溶于热水和热乙醇，微溶或不溶于苯、氯仿和丙酮，硝酸盐极难溶于水，盐酸盐微溶于冷水（1:500）但 较易溶于沸水，硫酸盐和枸橼酸盐在水中溶解度较大（1:30），盐酸小檗碱为黄色结晶，含2分子结晶水，220℃时分解并 转变为棕红色小檗红碱，285℃时完全熔融。 3.小檗碱为季铵碱，其游离型在水中溶解度较大，其盐酸盐在水中溶解度较小。利用小檗碱的溶解性及黄柏中含黏液质的特点，先将药材用石灰水润湿，使药材吸水膨胀，小檗碱游离，同时可使黄柏中含有的粘液质沉淀。用水渗漉法提取小檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出，结合盐析法得到盐酸小檗碱。【实验步骤】 1.提取称取黄柏粗粉100g置大蒸发皿中，加入适量石 灰乳搅拌均匀，放置溶胀20min，加入6倍量的饱和石灰水（或1%ca(oh)2溶液）浸泡30min后装入渗漉筒内，以5～
天然药物化学实验指导 （供药学药剂专业用） 河北医科大学药学院天然药物化学教研室 2006年3月 前言 天然药物化学是运用现代科学理论与技术研究天然药物中化学成分的一门学科，是药学、药剂、药分、中药学等专业及相关专业本科学生必修的专业课，是国家职业药师(中药学)资格考试必考课程。本课程在有机化学、分析化学、有机化合物波谱学、中药学、生药学等课程的基础上，重点讲授天然药物中化学成分的化学结构、理化性质、提取分离方法、结构鉴定、生理活性、天然药物新药开发等方面的基本原理和实验技能，培养学生具有从事天然药物方面的研究、开发和生产的能力，为我国药学事业的发展输送人才。 天然药物化学实验是天然药物化学课的重要的、必不可少的组成部分。学习的主要目的是通过实验检验在课堂上所学的理论知识，使学生对理论知识的理解更加深入，掌握得更加牢固；通过实验训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练；使学生养成严谨的科学态度和良好的科学作风。
实验教学的重点是加强学生基本操作技能的训练，要求学生掌握以下技能：（一）提取分离方面 1.要求掌握常用的经典方法的原理及操作。其中包括液-固提取法（浸渍、渗漉、回流提取等）、液-液萃取法（简单萃取法、梯度萃取法、逆流分布法）、重结晶法等。 2.掌握纸色谱、薄层色谱、柱色谱的原理和基本操作。 （二）结构鉴定方面 1.化学方法 ①掌握各类化学成分的一般定性反应在鉴定中的应用； ②掌握重要衍生物的制备方法及其在结构鉴定中的应用； ③了解重要降解反应的原理及应用。 2.光谱方法 了解UV、IR、NMR、MS在天然药物化学成分结构测定中的应用。 目录 实验须知1 实验技能操作规范2 实验一大黄中蒽醌苷元的提取、分离和检识8 实验二芦丁的提取、水解；黄酮类化合物与糖类的鉴别10 实验三苦参生物碱的提取、分离、鉴别和生物碱的检识15 实验四利用纸色谱先导设计法从洋金花中提取分离生物碱19 实验五一叶萩碱的分离和鉴定23
天然药物化学实验指导 目录 实验室注意事项 (1) 实验一芦丁的提取分离与鉴定 (2) 实验二艾叶及丁香中挥发油的提取鉴定 (5) 实验三从红辣椒中分离红色素 (7) 实验四咖啡因的提取与分离 (8) 自选实验薯蓣皂苷元的提取与分离 (10) 自选实验甘草皂苷元的提取与分离 (10) 自主设计实验 (15)
实验室注意事项 天然药物化学实验课具有实验周期长、使用有机溶剂品种多，用量较大等特点，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、实验操作经常在加温，减压下进行，需要使用各种热源和电器，再加上实验室较为拥挤，若操作不慎，易引起着火、触电、中毒、爆炸等事故，为确保实验安全顺利进行，特作如下要求。 一、实验前必须预习实验内容，了解实验原理和操作程序，检查仪器是否完整，装置是否正确，检查合格后方可开始实验。 二、实验室内要保持严肃、安静，不得大声说话打闹；室内严禁吸烟，实验进行时不得擅自离开，必要时委托专人看管。 三、未经教师允许不得擅自使用明火，需使用明火时，实验台周围不得放置易燃有机溶剂，如发生火情,应保持镇静，立即报告指导教师，同时切断火源，移走易燃品！用湿布闷盖或用灭火器进行灭火，切勿轻易用水，以免扩大火势。 四、实验时要做到整齐、清洁、用过的仪器要及时清洗并收人仪器柜内，保持水槽、仪器、桌面、地面四洁。 五、回流、蒸馏有机溶剂时，注意检查冷凝水是否通畅，装置不得密闭，接收有机溶剂时不得使用广口仪器，溶剂瓶不得敞口存放。在进行减压操作时，必须使用安全瓶，弄清操作程序，以免造成回水等事故。 六、使用挥发性试剂或喷显色剂时，应在窗口或通风橱内操作，不慎溅在桌面上的化学药品必须立即清除。身体直接接触化学物品后应及时用肥皂及大量水冲洗，如碱性试剂可用l％HAc溶液冲洗，酸性试剂可用3％NaHCO3溶液冲洗。不要用酒精、丙酮等洗涤皮肤上的有机物，以免增加皮肤对有毒物质的吸收，眼睛里溅入化学试剂后，应立即用大量水冲洗，及时到校医室就诊。 七、使用电器设备（如水浴锅、紫外灯、旋转蒸发仪、循环水泵等）一定要按操作规程进行，不得在烘箱内干燥带有易燃性有机溶剂的仪器或物品，仪器发生故障时及时报告指导教师，不得擅自拆卸。 八、每次实验结果后的产品，应妥善包装好，贴好标签，写明级别、产率等，放入干燥器内保存，不得随意丢失。 九、实验结束后，值日生应做好实验室清洁卫生工作，整理好公共仪器、药品，检查水、电、门窗，经教师检查后方可离去。
天然药物化学实验模块化教学设计摘要：模块化教学是依据教学目的将教学内容划分成不同层次模块，每个教学模块中都包含了特定的教学内容和教学目标，各模块之间相互关联、层层递进，构成一个完整的教学系统。该文探索了天然药物化学实验课程模块化教学设计思路，力求提高教学效果，达到提升学生创新研究能力的目的。 关键词：生药学/教育；教学；天然药物化学；实验教学；模块化设计 “天然药物化学”是药学专业主干课程，具有很强的实践性，因此天然药物化学实验课是教学的重要环节。因此，我校于2017年将天然药物化学实验课设置为一门独立的课程，教学时数与理论课学时数相同，均为72学时，旨在通过实验教学使学生掌握天然药物中所含有效成分的结构类型、理化性质、提取分离、检识和结构鉴定的基本理论、基本知识和基本技能，训练和培养学生操作能力，提高学生动手能力和分析问题解决问题的能力；更重要的是培养学生具备天然药物新药研发的素质，使学生具备科学研究的思维、素质及严谨的科学作风。 1天然药物化学实验课程存在的问题 根据课程特点，我校天然药物化学实验安排了9次实验，每次实验8学时，学生每两周进行一次实验，由于间隔时间太长导致实验缺乏连贯性，学生对实验缺乏整体认识；其次，为强化规范化操作练习，教师提供给学生“菜谱式”操作流程，学生只需照单操作，这种教学模
式导致学生思维僵化，不会解决实际问题，更难以适应企业生产、科学研究等工作的实际需要［1］。教学组对学生发放实验课满意度调查问卷，并通过分析发现：大部分学生对天然药物化学实验课很感兴趣，但认为创新型和设计型实验项目不够，有的学生提出增加一些与毕业设计或就业相关的实验，如天然化妆品、保健品的制备等，可见学生并不满足于被动操作和机械重复，对实验教学提出更高的要求［2］。 2天然药物化学实验模块化教学设计思路 “教学有法，教无定法”。为了使学生成为学习的主体，锻炼和培养学生的综合素质和创新能力，发挥学生的主观能动性，教学组依据天然药物化学实验教学大纲，将教学内容或组合或分解成相应的模块（表1），根据培养目标确定技能目标，明确学生在各个模块中需要掌握的教学内容，并最终实现培养目标。模块一的设计思路：本模块的实验项目多为经典验证性内容，旨在强化学生基本操作技能，如药材的前处理、回流、煎煮、过滤、结晶与重结晶、萃取、薄层色谱与柱色谱等，其目标是培养学生掌握天然药物提取分离有效成分的基本操作技能，并加以熟练运用，提高学生操作技能。模块二的设计思路：由于传统菜单式、验证性实验内容不能很好调动学生的积极性和求知欲，以应用和成果导向为目的的实验项目尤其能够激发学生的主观能动性［3］。例如我校天然药物化学学科多年来围绕新疆特色植物资源，结合课程的研究性和实践性特点，利用充足的研究经费和科研创新，开展了一系列研究，经过多年的积淀和发展，获得了丰硕的科研成果，并挑选成熟的科研成果引入实验教学，如我们对肉苁蓉的研究取得系
实验一甘草中总皂苷的提取、分离与含量测定 一、实验目的 1．熟练进行甘草中总皂苷的提取和精制方法。 2．能够用化学法和色谱法检识甘草中的皂苷类物质。 二、实验原理 甘草酸和甘草次酸均为含有羧基的酸性三萜皂苷，甘草酸酸性较强，在植物中与钾成盐而溶于水，易溶于热水。而甘草酸在冷水中的溶解度较小，所以我们可用水提取甘草酸的钾盐，再加稀酸，放冷，使甘草酸游离沉淀析出。也可以用乙醇提取后，乙酸乙酯萃取除去甘草中的黄酮类化合物，然后利用大孔吸附树脂的吸附作用，对甘草总皂苷进行富集，再利用硅胶进行柱层析分离。 三、主要仪器及耗材 仪器：水浴锅、旋转蒸发仪、循环水真空泵、三用紫外仪。 原料与试剂：甘草粗粉、乙醇、乙酸乙酯、D101大孔吸附树脂（或AB-8大孔树脂）、色谱用硅胶、氯仿、丙酮、硅胶薄层板。 四、实验内容与步骤 1．甘草总皂苷的提取 （1）水提法：取甘草粗粉20克，加水煎煮提取2～3次，滤过得水提液，静置，取上清液，浓缩得甘草浸膏（含甘草酸>20%）。浸膏加3倍量水溶解，加硫酸酸化，放置，滤过得甘草酸粗品。 （2）醇提法：取甘草粗粉20g，150mL60%乙醇溶液于70℃下回流提取1.5h，抽滤制得甘草提取液，放置待用。 2．甘草总皂苷的富集 甘草提取液减压浓缩至50mL左右，等体积的乙酸乙酯萃取2次，除去黄酮类化合物。萃取后的水相减压浓缩除去残留的乙酸乙酯后上大孔吸附树脂。 以下两种大孔吸附树脂任选一种即可。 D101型大孔吸附树脂：称取20~25克D101型大孔吸附树脂（或者30gAB-8型大孔吸附树脂），预处理后装柱，甘草总皂苷的粗提液过D101型大孔吸附树
脂，待吸附完全后，先用蒸馏水冲洗树脂至流出液无颜色，再用50%乙醇溶液2~3个柱体积冲洗树脂，并收集该部分的洗脱液。 AB-8型大孔吸附树脂：取30克AB-8型大孔吸附树脂，预处理后装柱，甘草总皂苷的粗提液过AB-8型大孔吸附树脂，待吸附完全后，先用蒸馏水冲洗树脂至流出液无颜色，再用2~3个柱体积的70%乙醇溶液冲洗树脂，并收集该部分的洗脱液。洗脱液留存少量点硅胶板，其余部分上硅胶柱。 3. 甘草酸的纯化 取15g硅胶干粉，用氯仿：甲醇=4:1湿法装柱，用装柱液反复冲洗硅胶柱，带柱面不再下降后，再冲洗3~5次，计算柱体积后，放置待用。 将洗脱液与0.5g拌样硅胶放置于圆底烧瓶中，于旋转蒸发仪上浓缩至干，（如果圆底烧瓶的瓶颈有少量水汽，则放于烘箱中于60℃烘干），将硅胶研细后，干法上样。洗脱时，先用1个柱体积氯仿:甲醇=4:1的洗脱液洗脱，再用氯仿:甲醇:水=4:2:1（洗脱液于分液漏斗中取下层液体）的洗脱液洗脱2个柱体积，每0.5个柱体积收集一次，对洗脱液进行检识。 4. 颜色反应（选做） （1）醋酐–浓硫酸反应：将样品溶于醋酐中，加浓硫酸：醋酐（1∶20），可产生黄→红→紫→褪色。 （2）三氯甲烷–浓硫酸反应：样品溶于三氯甲烷，加入浓硫酸后，在三氯甲烷层呈现红色或蓝色，硫酸层有绿色荧光出现。 （3）五氯化锑反应：将样品三氯甲烷或醇溶液点于滤纸上，喷以20%五氯化锑的三氯甲烷溶液（不应含乙醇和水），干燥后60℃～70℃加热，显蓝色、灰蓝色、灰紫色斑点。 5. 薄层色谱检识： 薄层板：硅胶G-CMC-Na板； 试样：70%乙醇洗脱液、氯仿:甲醇=4:1洗脱液和氯仿:甲醇:水=4:2:1洗脱液； 展开剂：氯仿:甲醇:冰醋酸（4∶1∶1）； 显色剂：喷20%硫酸乙醇溶液，105℃加热显色。 五、实验注意事项 1. 大孔吸附树脂在使用前应用蒸馏水浸泡，除去上层悬浮物后装柱，用无
中国药科大学 天然药物化学学习指南 一、说明--天然药物化学简介及知识模块构成 《天然药物化学》涉及中药及天然产物化学成分的提取、分离、结构鉴定、结构修饰、活性研究。本课程以有机化学、分析化学、波谱解析等学科为基础，是中药学、药学、中药资源与开发专业本科生的核心专业基础课程（4学分，理论68学时、实验68学时）。根据学校的培养目标结合上述专业培养要求，本课程定位于在学生完成基础课学习的前提下，遵循传统中药理论和现代有机化学、分析化学的技术和方法紧密结合的教学理念，从分子水平向学生传授中药及天然药物生物活性的物质基础，用现代科学的观点和方法揭示传统中药的作用机制。 《天然药物化学》课程由四大知识模块构成： 第一部分，天然药物化学成分提取、分离和纯化的方法和技术（4学时）； 第二部分，天然药物化学成分的结构鉴定方法和技术概述（2学时）。该部分的主要内容由本教研室承担的大二下学期《波谱解析》课程（共34学时）进行传授； 第三部分，是本课程的重点内容，即各类成分的提取、分离和结构鉴定（60学时）； 第四部分，天然药物化学研究的新技术、新方法和新进展（2学时）。 课程计划136学时，其中理论教学和实验教学各半，均为68学时。 二、课程的基本要求 依据药学类本、专科的培训目标，本课程要求学生掌握天然药物化学的相关理论、天然有机化合物的物理化学性质，以及生物活性成分的提取、分离、纯化和结构鉴定的基本方法和实验技能，初步具有从事与天然药物的生产和研究相关工作的能力。在工作实践中，能够运用现代科学理论与研究的方法，为继承和发扬祖国的传统药学事业，使我国独特的中药实现现代化打下坚实的理论和实践基础。 根据本课程的四大知识模块，重点讲授主要天然化学成分的结构类型、理化性质、提取、分离、纯化以及检识方法，介绍各主要类型天然化合物的生物活性，主要类型天然化学成分结构测定的物理方法，重点讲授波谱方法在黄酮类化合物结构测定中的应用。同时适当介绍天然药物的构效关系、天然药物化学在中药制剂和分析中应用实例以及主要类型天然化合物研究的最新发展。
如何学习《天然药物化学》之一对《天然药物化学》的了解是通过自学开始的，没有系统的将该课程融会贯通。通过2年的教学，尤其是大家通过各种途径和手段对我教学工作的批评和肯定，让我有意识的对如何学好该课程进行了思考 总结如下： 1、该课程的定位 首先大家要清楚的认识到，《天然药物化学》是以试验为基础，以应用为目的的一门理论融合试验的学科，为此，大家要想学习该课程，就要有意识的熟练和掌握每一个实验，并通过每一个实验去总结和引申的融会没有进行实验的章节，及时做好试验的讨论和分析。 2、该课程学习的三个梯次 （1）化合物结构和类型是该课程的前提，相当于产品开发或者试验前的文献综述。 这一部分的学习要紧紧结合生物合成。生物合成的学习相当于中药汤剂中的药引子，不需要你去死记硬背，但需要你熟悉和掌握每一类化合物的源头和先导化合物，这样，即使你遇到了新结构，也能依据生源途径进行归类，并有助于学习理解课本中的全部结构，除了特别的化合物需要死记硬背外，其他的典型药效化合物只需要能识别就足够。意识到这个问题，我在教学中已经按照这样的思路进行了教学，也许还不是很成熟，希望大家能依据自身的特点找到适合自己的熟悉化合物结构的方法和方式。 （2）提取、分离和精致是该课程的重点内容，是本课程的考试重点，重点内容主要是特殊类型化合物的典型提取方法，如醌 类、生物碱和黄酮。
而该部分的另一个学习的意义在于，它是今后药学研究的核心工作，无论是工厂还是研究，都会以这部分作为基本技能，所以，掌握好这部分至关重要，但如何学好提取、分离和精致？ 一是可以通过与本课程配套的实验，大家认真预习、设计和操作每一个实验；二就是要尽可能的多参与学院一些老师的课题中去，这部分理论重要，而具体的实验经验积累更重要。 提取、分离和精致的学习没有什么窍门，就是经验的积累！ （3）化合物结构的鉴定是天然药物化学的灵魂，是研究的瓶颈。（1）和（2）即使你掌握的很好了，如果无法对纯化合物进行结构的确认和解析，所有的工作都是枉然。目前，我们的教学中，由于教学思路和目的的模糊，包括课程设计中存在的问题，忽视了该部分的学习，尤其是我在课程中一再强调的手性和空间构向问题。 三、建议和思考 发现学生的知识领域面不宽，对于一个本科生，不能要求知识面的深度，但对广泛学科的涉猎是今后大家如何发展的基础，很多人往往最后是依据兴趣爱好确定了自己的职业。 课程学习有误区，大家都普遍反应课程比较难，尤其是期末考试的压力比较大。我一贯主张教学要严格，考试要宽松，我会在我的能力范围内实施自己的观点，并请大家能理解和配合，尽量的领会我的意思，并能消化在自己的肚子里边。 学习的三个梯次我已经在教学中注意了贯彻，因为课程设置上的局限和期末考试的侧重点，我还是弱化了结构的鉴定。
天然药物化学实验指导 药化教研室 天然药物化学实验指导 一．说明 天然药物化学是一门实验学科，实验教学占重要地位，通过实验要达到以下目的。 1．能检验学生在课堂上所学的理论知识。使学生对理论知识的理解更加深入，掌握的更加牢固。 2．训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作和实际工作的基本训练。 3．使学生养成严谨的科学态度和良好的科学作风。 实验中，重点是加强对学生基本技能的训练。 二．实验须知 1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生。若发生事故应立即采取措施并报告指导老师。 2．实验前做好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法。安排的实验计划，争取准时结束，实验过程中应养成及时记录的习惯，凡是观察到的现象和结果及有关数据，应随时如实地记录。实验完毕，要认真总结，写好实验报告，实验所得的提纯物要包好，贴上标签，交给老师。 3．实验室内应保持安静，不得大声喧嚷，不许抽烟。进入实验室必须穿工作服，实验过程中，不许随便离开。 4．实验台前应保持整洁，与实验无关的物品不得放在台前。实验中废弃的固体物，要丢入废物桶内。 5．爱护仪器，节约药品，仪器损坏后应填写报损单，注明原因，由指导教师按规定处理。 6．实验过程中要节约用水、用电。 7．每次实验结束后，值日生应将实验室打扫干净，倾倒废物桶，关好水、电、门窗，方可离去。 实验一虎杖蒽醌类成分及白黎芦醇苷的提制和鉴定 虎杖系蓼科蓼属植物polyganum cuspidetum siebet zucc.（即Reynoutrin japonica Houobluyn）的根茎。又名阴阳莲。民间用于消炎、杀菌、利尿、通经和镇痛。近年来用于烫伤、止血、消结石和降血脂均有疗效。虎杖根茎中含有大量的蒽醌类成分和二苯乙烯类成分。后者具有降血脂的作用。 一、部分已知成分的物理性质 1．大黄酚（chrysophanol） O HO OH CH3 O
药用植物学实验指导 适用专业：（本科）药学、药物制剂 （专科）药物制剂技术 郑州华信学院医学院药学系 药学教研室
目录 实验一显微镜的构造、使用和保护以及植物细胞的构造 (2) 实验二植物细胞后含物——淀粉粒、草酸钙结晶体 (5) 实验三保护组织和分泌组织 (7) 实验四机械组织和输导组织 (9) 实验五根的显微构造 (11) 实验六单子叶植物地上茎和地下茎观察 (13) 实验七双子叶植物茎的初生构造和次生构造 (14) 实验八大黄、甘草、人参的鉴定 (16)
实验一显微镜的构造、使用和保护以及植物细胞的构造 一、实验目的： 1.了解显微镜的基本构造并掌握显微镜的正确使用方法和保养。 2.掌握撕取表皮的制片方法。 3.掌握植物细胞的基本构造。 二、实验仪器与材料 1.仪器：生物显微镜。 2.用具：镊子、刀片、解剖针、载玻片、盖玻片、玻璃皿、吸水纸、擦镜纸、棉布块。 3.材料：洋葱鳞茎的磷叶或大葱磷叶。 4.试液：蒸馏水、稀碘液、10%硝酸钾溶液。 三、实验内容： （一）显微镜的构造 1.机械部分次部分是显微镜的骨架，是安装光学部分的基座。 包括：镜座、镜柱、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调焦装臵等。 （1）基座是显微镜的底座，支持整个镜体，使显微镜放臵平稳。 （2）基柱镜座上面直立的短柱，支持镜体上部的各部分。 （3）镜臂弯曲如臂，下连镜柱，上连镜筒，为取放镜体时手握的部分。直筒显微镜的镜臂下端与镜柱连接处有一活动关节，可使镜体在一定范围内后倾，便于观察。 （4）镜筒上端臵目镜，下端与物镜转化器相连。 （5）物镜转换器连接于镜筒下端的圆盘，可自由转动，盘子有3－4个安装物镜的螺旋孔。当旋转转换器时，物镜即可固定在使用的位臵上，保证物镜与目镜的光线合轴。 （6）载物台放臵玻片标本的平台，中央有一通光孔，两侧有压片夹或机械移动器，既可固定玻片标本，也可以前后左右各方向移动。 （7）调焦装臵调节物镜和标本之间的距离，得到清晰的物像。在镜臂两侧有粗细调焦螺旋各1对，旋转时可使镜筒上升或下降，大的一对为粗调焦螺旋，旋转一圈可使镜筒移动2mm左右。小的一对为细调焦螺旋，旋转一圈可使镜筒移动0.1mm。 （8）聚光器调节螺旋镜柱一侧，旋转它时可使聚光器上下移动，借以调节光线德鄂强弱。 2.光学部分包括：物镜、目镜、反光镜、聚光器 （1）物镜安装在镜筒前端物镜转化器上的透镜。利用光线使被检标本第一次
天然药物化学 实验指导 循环使用 请勿带走 目录 实验一槐花M中芦丁的提取
实验二芦丁水解液的纸色谱鉴定 实验三大黄中大黄素的提取 实验四大黄中大黄素的柱色谱提纯 实验五苦参生物碱的薄层鉴定 实验六茶叶中咖啡因的提取 实验一槐花M中芦丁的提取 芦丁 芦丁是由槲皮素 第一章绪论 一、学时数：6学时 二、目的和要求 1、掌握天然药物化学的含义、研究对象、性质与任务； 2、掌握天然药物有效成分提取分离的一般原理及常用方法； 3、掌握层析分离法的分类及其原理、各种层析分离要素、相关因素及应用技术； 4、掌握天然化合物结构研究的一般步骤和常用方法； 5、熟悉不同的生物合成途径与各类二次代谢产物生成的相关性 6、了解天然药物化学的发展历史、近代研究成就及发展趋势； 7、了解天然药物化学与药学相关学科的关系； 8、了解天然药物化学在国民经济和药学专业中的作用和地位。 三、重点和难点 1、重点：性质、任务、提取分离、结构鉴定。 2、难点：提取分离原理。 四、讲授的基本内容和要点 （一）绪论 1、天然药物化学的内涵 2、天然药化的研究对象及其任务 3、天然药物化学的发展历史 4、天然药物化学的发展趋势 （二）生物合成 1、生物合成假说的提出 2、植物代谢及其代谢产物 3、“植物亲缘相关性学说”与“植物化学分类学” 4、生物合成途径 5、了解生物合成的意义 （三）提取分离方法 1、概述：天然药物化学成分的构成特点、提取分离前的文献调研 2、天然药物有效成分的提取：常用提取方法、溶剂提取法 3、天然药物有效成分的分离与精制：根据物质溶解度差异、物质分配系数差异、物质吸附能力差异、物质分子大小差异、物质解离程度差异分离 4、提取与分离天然药物有效成分的注意事项：光照、酸碱、温度、溶剂、层析的影响 （四）天然化合物结构研究方法 1、化学结构研究的目的与意义 2、结构研究步骤与方法：查阅文献、纯度测定、物理常数测定、分子量测定（经典法、MS法）、分子式测定（EA法、HR-MS法、NMR法） 3、不饱度计算 4、分子结构骨架测定：专属反应、植物亲缘相关性、光谱特征、部分合成、化学降解 5、功能团推断：化学法、光谱法 6、光谱分析:UV、IR、NMR、MS （五）天然化合物结构研究实例 五、英语词汇 1、概念词汇： Chemistry of Constituents of Chinese Traditional and Herbal Drugs、Phytochemistry、Chemistry of Natural Products、Chemistry of Natural Organic Compounds 2、专业及术语词汇： Active Constituents、Active Compounds、Active Extracts、Active Fraction、Inactive Constituents、Biosynthesis、primary metabolites、secondary metabolites、acetate-malonate pathway、mevalonic acid pathway、cinnamic acid – shikimic acid pathway、amino acid pathway、extraction、extracts、isolation、chromatography、CCD、counter current distribution、DCCC、GC、LC、TLC、normal phase、reverse phase、adsorption、adsorbent、partition、fraction、gel filtration、exclusion、Sephadex G、Sephadex LH、mobile-phase、structural identification、structural elucidation、spectral analysis 六、复习思考题 1、天然药物化学的定义、研究对象、任务及其在药学专业中的作用？ 2、何谓有效成分、有效部位和无效成分？他们与中药新药研究开发的关系如何？ 3、天然化合物生物合成的主要途径有哪些？与主要成分间相关性如何？ 4、分离天然化合物的主要依据有哪些？ 5、不同的层析法分离天然化合物的要素是什么？吸附薄层层析最佳条件的选择与哪些因素有关？如何调 天然药物化学实验与指导编者：杨长水于红艳 扬州大学医学院药学系 目录 实验室安全守则 (1) 实验一掌叶大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 (3) 实验二槐花米中芦丁的提取、分离和鉴定 (8) 实验三人参皂苷的提取、分离与结构鉴定 (11) 实验四粉防己生物碱的提取、分离与结构鉴定 (14) 附录 (18) 1. 常用有机溶剂及有关数据表 (18) 2. 常用层析材料及有关数据表 (21) 实验室安全守则 天然药物化学实验是天然药物化学课程的重要组成部分，是更好掌握天然药物有效成分提取、分离和检验的基本操作技能，是提高学生分析和解决问题能力，使同学进一步理论联系实际，养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节，为此，提出如下实验须知： 1. 遵守实验制度、维护实验室安全。不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏电等事故的发生。若发生事故应立即报告指导教师。 2. 实验前做好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天的计划，争取准时结束，实验时应养成及时记录的习惯，凡是观察到的现象以及有关的重量、体积、温度或其他数据，应立即如实记录。实验完毕后认真总结，写好报告，提取纯化所得单体产物包好，贴上标签（写下日期、样品名称、纯度、m.p.、b.p.、TLC、重量）交给老师。 3. 实验室中保持安静，不许大声喧哗，不许抽烟，不迟到，不随便离开。实验台面应保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净后，存放在指定位置。废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。 4. 公用仪器及药品用完后立即归还原处，破损仪器应填写破损报告单、注明原因。将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电（是否关闭水龙头，拔下电插头）。关闭门窗。 2 实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定 实验编号:1 日期: 学时数:6学时 地点: 任课教师: 实验目的:掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法 实验原理:大黄中有多种游离蒽醌及其苷类,总含量约2-5%。主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。从大黄中提取分离游离蒽醌时,先用20%硫酸加热使苷类水解，保留滤饼，滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元（游离蒽醌），提取液作TLC鉴识。实验对象:大黄 主要仪器、试剂:电热套、烧杯、20%硫酸、薄层硅胶G、0.5%CMC-Na。实验操作步骤:酸水解：取大黄10g,粉碎，加20%硫酸水溶液100ml，水浴上加热3-4小时,抽滤,滤饼水洗后自然干燥。 铺薄层硅胶G板:薄层硅胶G:0.5%CMC-Na(1:3) 实验注意事项:①加热温度不要太高。②溶液保持微沸，防止药渣炭化。 ③不断搅拌。 后记: 实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定 实验编号:2 日期: 学时数:6学时 地点: 任课教师: 实验目的:1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。 2.掌握蒽醌类的色谱鉴别方法。 实验原理:大黄中有多种游离蒽醌及其苷类,总含量约2-5%。主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。从大黄中提取分离游离蒽醌时,先用20%硫酸加热使苷类水解，保留滤饼，滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元（游离蒽醌），提取液作TLC鉴识。实验对象:大黄滤饼 主要仪器、试剂:电热套、圆底烧瓶、冷凝管、乙醚、硅胶薄层板、石油醚、乙酸乙酯 实验操作步骤:总羟基蒽醌苷元的提取：取干燥滤饼，放入100ml圆底烧瓶中，加入乙醚50ml,回流提取3－4小时，得乙醚提取液。 乙醚提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。薄层板为硅胶G-CMC-Na,展开剂为石油醚（60-90℃）－乙酸乙酯（７：３），直立展开。 实验注意事项:①加热回流时电热套电压小于50v。 ②取石油醚（60-90℃）7ml,乙酸乙酯3ml,混合均匀。。③控制点样量，注意点样斑点位置。④仔细观察斑点、溶剂前沿移动距离。 后记:结论：在可见光下可看到4个斑点，Rf最大的黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚的混合物，其余3个斑点依Rf由大到小分别为大黄素（橙色 药学综合实验教学指导书 Separation Technology and exploitation of Natural Medical 课程编号：学时/学分：一周/ 3.0 一、指导书说明 本指导书根据长沙理工大学2006年版生物工程专业培养计划制定. 先修课程：有机化学、分析化学、天然药物提取分离与开发利用、药剂学二、教学对象 生物工程专业学生 三、课程性质与总体要求 1、课程性质：必修课 2、教学目的与要求： 通过本课程实验的学习，检验在课堂上所学的理论知识，使学生对理性知识的理解更加深入，掌握得更加牢固，通过实验训练学习的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物及药剂学科研工作的基本训练。通过实验，要求学生掌握天然药物经典提取与分离纯化方法及其制剂研制的基本原理及其应用，熟悉运用化学方法、色谱方法来鉴定化合物以及原料药与制剂的分析测定方法等内容。 四、教学方式、重点 1、教学方式：实验课 2、重点内容：天然药物提取分离基本理论与技术，提取分离及分析方法; 五、考核方式 考查: 实验报告和出勤情况。 一、前言 药学综合实验是生物工程综合实验的重要组成部分。其主要目的是：通过试验，检验在课堂上所学的理论知识。使学生对理性知识的理解更加深入，掌握得更加牢固。通过试验，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物科研工作的基本训练。 在实验中，重点是要加强对学生基本操作技能的训练,要求学生掌握以下技能： 要求掌握常用的经典方法的原理及操作:其中包括液-固提取法:超临界提取、超声提取、回流提取等）、掌握柱色谱--吸附柱等的原理和基本操作和掌握常用的经典分析方法的原理及操作。 二、实验须知 在天然药物化学实验中，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、甚至爆炸性药品，试验操作又常在加温加压等情况下进行，需要各种热源、电器或其他仪器，操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。但只要加强爱护国家财产和保障人民生民安全的责任心，提高警惕，消除隐患，注意实验规则，事故是可以避免的。 一)实验规则 1.试验前必须先预习实验内容，了解原理和操作规程。试验前应清点并检查仪器是否完整，装置是否正确，合格后方可进行试验。 2.试验时不准做与本实验无关的事情，严禁吸烟，不得擅自离开，并应随时注意反应情况，仪器有否漏气，破裂等。随时记录试验应记的项目，以作正式报告。 天然药物化学实验指导 何祥久，刘一品编写 武汉大学药学院 2009年6月 《天然药物化学》实验规则 1. 实验前必须预习实验内容，了解实验原理和操作规程。随时记录实验项目及其现象，以撰写正式实验报告。 2. 实验前应清点并检查仪器是否完整，装置是否正确，合格后方可进行实验。实验时不准做与实验无关的事情，严禁吸烟，不得擅自离开实验室，并应随时注意反应情况，仪器是否漏气、破裂等。 3. 药品仪器都须节约爱护使用；公用物品，用后立即放归原处，以便他人使用。不可调错瓶塞，以免污染。器皿用后要洗刷干净。 4. 操作易燃性有机溶剂，回流、蒸馏、减压蒸馏时，不能明火直接加热，要放沸石或一端封死的毛细管。若在加热时发现未放沸石则应冷却后再加，防止爆沸冲出。减压系统应装有安全瓶。加液时应停火或远离火源，勿漏气开口，冷凝水要通畅。启封易挥发溶剂瓶盖时，脸面要避开瓶口慢慢开口，以防气体冲脸上，危机尊容。 5. 有毒、腐蚀性药品应妥善保管，操作后要立即洗手。勿沾及五官、创口及身体暴露部位，以免中毒、损伤皮肤。 6. 实验中，应在通风橱中使用毒气或腐蚀性气体，必要时，可戴防护用具进行工作。 7. 若将玻璃管插入塞中时，可在塞孔中涂些水或甘油等润滑剂，用布包住玻璃管使其旋转而入，防止折断割伤。 8. 实验台上勿放置与实验无关物品，随时保持水槽、仪器、桌面、地面整洁。 9. 实验结束时，应将门、窗、水、电、煤气关好，室内打扫干净，并清点仪器后方可离开实验室。 10．实验室常见的事故如下，应予以特别注意： (1) 蒸馏或回流时，发现未放沸石，未等溶液冷却就补加沸石，结果溶液冲出瓶外， 容易引起火灾。 (2) 蒸馏易燃物时，未通冷却水，大量蒸气逸出易引起火灾。 (3) 蒸馏易燃物时塞子漏气引起火灾。 (4) 用三角烧瓶做减压装置的受器，结果炸裂。 (5) 减压操作结束后，放气太快，使压力计冲破。 (6) 使用真空干燥器时，未关闭真空泵就直接开干燥器的放气阀，结果使泵内的机油 被吸到干燥器中，使样品被污染等。 西南科技大学本科实践教学大纲 《天然药物化学实验》教学大纲 【课程编号】：17344271 【英文译名】：Experiment of Natural Medicinal Chemistry 【适用专业】：制药工程 【学分数】：1 【总学时】：16 【实践学时】：16 一、本实验课程的教学目的和要求 通过实验设计、操作和完成实验报告等环节的学习，进一步巩固学生在天然药物化学方面的理论知识，培养学生从事天然药物方面研究、开发和生产等方面的能力，提高学生的实验技能，培养学生团结协作和科研创新的精神，使学生具备解决和分析实际问题的能力。 学生应掌握天然药物化学成分提取分离和鉴定的原理及实验操作技能，能够设计合理的实验方案，并有效地解决实验中出现的问题，能够正确地分析实验结果并撰写实验报告。 二、本实验课程与其它课程的关系 本课程为《天然药物化学》课程的实验课，应在修完《天然药物化学》课程或已学习相关内容的基础上进行。同时，该课程还为《药物分析》和《药物化学》等课程的学习打下坚实的基础。 三、实验课程理论教学内容安排 本实验课程不安排理论教学内容。 四、实验内容安排 实验一、TLC分析法及其应用 【目的要求】 生命科学与工程学院 掌握TLC硅胶板的制备方法，能应用TLC分析方法，进行简单的天然药物分离和分析。 【内容】 制备TLC硅胶板；TLC分析方法及其应用。 【方法】 1、制备TLC硅胶板：取适量薄层层析用硅胶，以0.5％－1％的羧甲基纤维素钠水溶液搅拌均匀，铺在载波片上，将该载波片平置，自然风干后120℃烘干30－40分钟，放置于干燥器中备用。 2、TLC分析方法及其应用：选取谷甾醇、胡萝卜甙等常见的天然产物作为实验样品，让学生在不同溶剂系统下进行TLC操作，并确定最佳分离条件。 【参考资料】 《中草药化学》（肖崇厚主编，上海科学技术出版社）。 实验二、植物化学成分预试实验 【目的要求】 掌握植物化学成分预试实验的常用方法并检测所含化学成分的类型。灵活运用植物化学成分预试实验的常用方法，通过检测所含化学成分的类型设计提取分离方案。【内容】 对不同类型的化学成分进行检测；设计提取分离方案 【方法】 按照常规植物成分预示实验方法进行。 【参考资料】 《植物成分分析》（谭仁祥主编，科学出版社）。 实验三、陈皮挥发油的提取 【目的要求】 了解挥发油提取的原理方法，掌握水蒸汽蒸馏法从陈皮中提取挥发油的原理和操作，能独立进行实验操作，并对实验结果进行分析。 【内容】 从陈皮中提取挥发油并测定其含量。 【方法】 采取水蒸汽蒸馏法进行。 【参考资料】 《天然药物化学》（宋晓凯主编，化工出版社）。 实验四、芦丁的提取和鉴定 【目的要求】 通过芦丁的提取与精制，掌握提取黄酮类化合物的原理及操作；掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的鉴定方法。能设计芦丁提取与鉴定的实验方案，经老师同意后进行实验操作，并对实验结果进行分析。 【内容】 预试；提取分离芦丁并对其进行精制；对所得芦丁进行鉴定，并研究其性质。【方法】 可采用酸碱法、水提法和溶剂法等进行提取分离，具体方案由学生设计，在教师指导下进行。采用纸层析法鉴定，紫外灯下检测荧光，层析条件由学生实验确定。【参考资料】 《中草药化学》（肖崇厚主编，上海科学技术出版社）。(完整版)天然药物化学教案
天然药物化学试验与指导第三版
(医疗药品)天然药物化学实验教案欢迎访问内蒙古医学院
药学综合实验指导书范文
天然药化实验print
《天然药物化学实验》教学大纲
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