一、藻种的两种培养类型
一般藻种的培养有两种方式：一种是长期保存所需要的培养方法，一种是以实验为目的，短期内保藏藻种的培养方法。
长期培养最主要的问题是选择一种合适的培养基，可以在3个月到一年的时间内连续培养藻种。最适合长期培养藻种的培养基是agar（固体琼脂培养基），但是使用agar有一个弊端，即培养物保持无菌的问题；我们可以加一层蒸馏水（咸水的藻类可以加灭菌过人工的海水）在agar上，这种做法可以保证在长期保种的过程中减少agar水分和营养的流失。长期保种使用的培养基，不要选择营养过于丰富的，因为多数的藻，尤其是丝状藻，在营养丰富的环境生长，会发生形态结构上的变化，如果要做生理生态方面研究，实验材料的形态结构是不能异常的。
适合长期保种的贫营养的培养基有这些：Bold’s基础培养基，以及该培养基加上蛋白胨或者琼脂制成的agar，适合长期培养绿藻；Allen及其改良后的配方可以长期培养一般常见的蓝藻和绿藻；土水培养基和它的一个改良的系列也实用培养多数藻种。对于我库提供的藻种，由于藻种长期习惯的原因，建议使用我们提供的原配方来培养，在长期培养的时候，可以适当稀释原培养基，在藻种培养过程中，生长速率会变慢，可以保持其形态结构不变。
另外，长期培养的时候，除了选择适当的培养基，还可以降低温度5～8C（降温的过程最好能循序渐进，突然改变环境温度，可能会导致藻种不适应而死亡）。光照强度可以减小为原先的一半。在实验之前3到4周，将长期培养的藻种接种到我们提供的培养基中（培养基必须灭菌），按照我们给予的培养条件培养，在实验前6天左右，再次接种。
短期培养则可以直接按照我们提供的培养基和培养条件培养。由于试验的需要，常常要求在短期时间内获得大量的培养物，我们可以采用通气培养和摇床培养。通气培养可以通CO2或洁净的空气，视培养物的多少来决定通气泵的大小，在通气的硅胶管中设置一个缓冲瓶，塞上灭菌后的脱脂棉，帮助净化空气，如果对通气有更高的要求，可以在通气管中加上一层滤膜。使用摇床培养，需要注意藻种的生理周期。
二、培养基的选择和配制
1、培养基的选择
①BG11是我库培养蓝藻使用最广泛的培养基。除了极少部分蓝藻，大部分都使用BG11。按照我们给的配方配制好后
高压灭菌，BG11经常会产生絮状沉淀。这是因为其中有Ca+和CO32???-,我们可以在灭菌后再超净台上用灭菌过的注射器来加两者之中的另外一种。通常我们建议将氯化钙的母液单独灭菌后在无菌室保存，在配置好BG11的工作液并灭菌之后，在超净台上用注射器将氯华钙加入。
②SE是我库用来培养常见的绿藻所使用的培养基。一般来说，如果配制了母液，用母液来配培养基，灭菌后是不会产生
沉淀的。配置的时候注意先将所需要的蒸馏水准备好，将需要的药品逐个加入，等到一种药品充分溶解之后再加入第二种。
另外，土水在蒸馏过滤后，是不需要灭菌的，因为高压灭菌的过程会让其中的一些营养成分损失。
③水是培养基成分中很重要的一个方面。配培养基，可以取蒸馏水、自来水、去离子水，也可以取藻种采集地的水。使
用经过处理的水，如双蒸水、去离子水，有时候并不合适培养，因为仪器在处理过程中会带入微量的有毒物质。采集藻种采集地的水来培养是最理想的，但是需要经过一些处理，处理的手段和过程要尽可能保持其营养成分不变。如果是咸水或者海水的藻类采集地采集的水，应将其置于5C的黑暗中，保持6个月。如果是泉水或者湖水等淡水的水源，水样置于20C的室温，立即通过活性炭方法处理：每升水加2g活性炭，搅拌一小时后，过滤，并重复此过程3～4次。
④咸水和微咸水的藻类需要的人工咸水的合成效果关键在于如何蒸馏；还有一些水华蓝藻难以培养，主要原因是因为在
野外生长时，通常底泥提供的营养元素可以溶在水中，但是在实验室培养，经过高压灭菌，很多营养都损失了。所以我们建议不用高压灭菌法，使用巴斯德（pasteur）灭菌方法：加热到73～78C，保持15～20分钟，间隔24小时灭菌一次，一共三次。
2、培养基的配制
主要介绍一下培养基的配制方法和灭菌方法：
1. 配制贮液。
培养基一般由三个方面组成：微量元素、大量元素、维生素。
准备100ml～200ml的试剂瓶若干，洗净，灭菌。
按照我们提供的培养基配方中贮液的浓度，配制大量元素和微量元素的贮液放在以上准备的试剂瓶（遇光易反应的药品，请放在棕色试剂瓶），置于4C左右的冰箱保存。将需要使用的维生素（最好是针剂），也置于4C左右的冰箱保存。
2. 配制培养基。
一般可以配制1000ml左右的培养基留待使用。先准备1000ml大烧杯，洗净。按照我们培养基配方中的working soluti on，先加入需要的蒸馏水，然后用移液管向其中加配制好的贮液（注意，不可先加贮液，最后加蒸馏水）。一边加，一边搅拌，依次加入所有组分，最后留下维生素不加。摇匀。
三、灭菌
①、对培养器材的灭菌：
灭菌在藻种的培养中，是十分重要的一个环节。藻种培养、转接、培养基制备等等，任何一个环节都必须使用灭菌的器械，否则藻种都会染菌，甚至染上其它的藻类。
所有的培养藻种所需要的三角瓶、试管，烧杯，接种环，吸管，注射器，针头等培养，转接藻种所需要的器材都必须经过高压灭菌，配制培养基所需要的移液管、用来装培养基所需要的瓶也必须经过灭菌，转接藻种需要的滴管、接种环、涂布所需要的玻璃棒、培养皿等都必须灭菌。
培养所需要的三角瓶、试管、培养皿，灭菌前洗净，三角瓶可以用牛皮纸内衬粗滤纸来包住瓶口，用棉线缠紧；或者自做棉塞，外部再加上牛皮纸包住；试管必须和棉塞或者试管塞一起用牛皮纸包好灭菌。培养皿可以5～10个一起用牛皮
纸包好灭菌。移液管、滴管、接种环都可以分别用牛皮纸包好灭菌。所有玻璃器皿都采用高压灭菌：在1.5大气压下保持30分钟。使用之前不能在敞开的环境打开，只能在超净台打开。
灭菌结束后，放在烤箱烘干。
所有灭菌后的器皿、培养基只能在超净台打开使用。
使用巴斯德灭菌法灭菌的原水，也不能在超净台之外的地方打开使用。
长期没有使用了但曾经灭菌过的器材或培养基，如果需要使用，必须重新灭菌一次。
②、培养基灭菌注意事项：
配制培养基的时候一些经过高压灭菌成分会发生改变的微量元素，应在灭菌后在超净台上用灭菌的注射器添加。如维生素，但是维生素的灭菌也必须很严格，往往藻种污染到细菌都是因为维生素引起的，可以使用0.22μm或0.45μm的滤膜来过滤维生素溶液。
土水（土壤侵出液）在蒸馏过后只能使用过滤的方法灭菌，不能经过高温高压灭菌。
洗净若干带橡皮塞的盐水瓶（800ml或500ml），将培养基注入，塞上橡皮塞。然后剪一小块纱布，包在橡皮塞外面，用棉线将塞子和瓶子缠紧，这样保证在灭菌的过程中，培养基不会把橡皮塞冲开。最后在橡皮塞头上插一个小针头，这个做法可以在灭菌的时候放气，也是为了保证培养基不会在灭菌的时候把橡皮塞冲开。然后开始灭菌。
灭菌结束后，立即降针头拔出。将培养基放置在洁净的地方，免受污染。
四、藻种培养条件
1、光照
培养一个藻种最初，先将少量的藻种转接到新鲜的培养基中，放在冷白荧光灯管（200－400footcandle）保持7～10天，观察最初的生长状况。生长较好以后，移到低光照区域（50－100footcandle），保持低速率的生长。
实验需要的藻种的培养中，我们推荐使用冷白荧光管来作为光照来源。因为如果使用白炽灯泡和直射的日光作为光源的话，光照会产热，改变培养的温度。在阳光照射下培养温度通常可以上升10C，如果一定需要日光作为光源，应将培养物放置在窗前，窗上用纸挡住。
培养的时候，光照与培养物的细胞密度也有关，一般密度比较小的时候，不适合使用较强烈的光照。我库提供的藻种，在细胞密度在105数量级左右时，我们推荐在2000lux的光照下培养。接种后，细胞密度很低的情况下，需要放置在弱光照下培养，随着细胞密度增大，逐渐加强光照。
培养藻类，每天要定期给一段时间的置于黑暗中培养。大多数藻种的光暗比都是12h：12h，也有16h：8h。
2、温度
大多数淡水藻都可以在20～25C左右生长，高于30C有些蓝藻不能坚持到24小时就会死亡。一般所有的绿藻生长的温度相对比较广一些。在10C左右会几乎停止生长，但是不会死亡。非水华类的蓝藻更加可以耐低温的环境，低于10C还可以生存。但是水华类的蓝藻对温度要求更加精确一些，过高或者过低的温度都会死亡，即使留下待萌发的孢子，但是在实验室不具有底泥萌发的条件，藻种是不会再萌发出来的。
我库的大部分藻种，没有特别说明，其培养温度都是20～25C。
3、特殊藻种培养要求
衣藻如果在营养丰富的培养基中生长，都会有变成类似四集藻型的趋势。所以建议培养的时候稀释一下SE培养基，或者用土水培养基来保持它的形态结构。
团藻属的藻类需要勤接种，使用营养太丰富的培养基，它可能会由群体散开成为单个游动的细胞。
培养含有叶绿素的鞭毛藻，可以用土水培养基加上一粒豌豆；无色的鞭毛藻，可用土水培养基加上一两粒谷粒或者小麦。
硅藻可以使用很多种培养基来培养，但是培养基中必须含有硅，建议硅藻的培养基中Na2SiO3 . 9H2O达到10－30m g/l。
你用的是哪种计数框呀？我们是实验室用的10*10（100）格子的计数框，我们在藻种的扩培阶段都是根据藻液的颜色或者透明度来判断稀释倍数，一般是先取正在培养的原藻液0.1ml，稀释10倍，再去稀释液0.1ml(基本上就是两滴)滴在计数板的计数框内，再用盖玻片均匀铺盖，并保证藻液可以铺满整个计数框，之后40*镜检计数，一般计数50个视野，50个视野尽量覆盖整个计数框的每个角落。之后再根据你计数的结果算平均值，换算密度等等。
吉林化工学院 环境科学与工程专业 环境生物学设计性实验 院系:资源与环境工程学院 班级：环境科学与工程1301 姓名：牛浩 指导老师：邹继颖 学号：1310338102
天然藻类培养和应用 （吉林，吉林，吉林化工学院，牛浩，132022） 摘要：藻类植物是自然界中非常重要的一大类生物类群，它们不仅是用于科学研究的良好材料，在医药、食品、精细化工、环境保护、水产养殖等方面都有着广泛的应用，研究观察藻类不但有一定的理论意义，也具有重要的应用价值[1]。藻类应用技术在国内外一直是研究的热门，藻类大量培养技术是一切的基础。本实验重点探讨藻类培养的一般步骤和前景。 关键词：藻类；材料；应用价值；培养；前景 Natural algae cultivation and application (Jilin, Jilin, Jilin institute of chemical industry, NiuHao, 131022) Abstract:the algae is a very important categories of organisms in nature, they are not only used in scientific research of good material, in food, fine chemical, pharmaceutical, environmental protection, has been widely used in such aspects as aquaculture, algae research to observe not only has certain theoretical significance, also has important application value. Algae application technology at home and abroad has been a research hot, plenty of algae cultivation technology is the foundation of all things.This study focuses on the general steps of algae cultivation and prospect. Keywords:algae, materials, application value, cultivation,prospects 前言：多数的单细胞藻具有生长繁殖快、环境适应力强、培养周期短等特点。可实现在人工控制条件下大量培养获得高产的目[1]的而藻类中含有丰富的蛋白质、油脂、糖类、色素等可供人类利用，加之藻类本身适应环境的能力极强，繁殖速度快，占地面积小等优势使得藻类在解决资源枯竭、人口压力、环境污染等方面具有独特的优势。产油藻作为生物燃料的原料，成为可以满足不断增长的能源需求的一条解决途径；藻类提供的营养物质可以有效的缓解人口和土地方面的压力；在水环境方面，藻类可以用来净化水质，治理水体污染。 1.材料与方法 1.1实验用具 显微镜、显微图像采集系统、采集瓶、培养瓶、吸管、镊子、刀、标签、记
培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2.掌握培养基的配置原则和方法。 3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1.药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。 （二）液体及固体培养基的配制过程1．液体培养基配制 （1）称量（假定配制1000ml培养基） 按培养基配方比例依次准确地称取3.0g牛肉膏、10.0 g蛋白胨、5.0gNaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。 （2）溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上
单细胞藻类之--微绿球藻 微绿球藻（Nannochloropsis oculata），或叫眼状微绿球藻。本属还有其它几种培养作为水产动物的活饵料的。在分类上属于绿藻门，绿藻属，四胞藻目，胶球藻科。 一、形态特 征：细胞为 球形，直径 为2—4微 米，单独或 集合，色素 体一个，淡 绿色，侧生， 仅占着周 围的一部 分，眼点圆 形，淡橘红 色。在活泼 生长的情 况下，色素 体颜色很 深，不容易 观察到眼点，在氮缺乏的培养中，色素体变淡，眼点明显。没有蛋白核。有淀粉粒1—3个，明显，侧生。细胞壁极薄，幼年细胞看不到，在分裂之前才变得明显。分裂进行时，细胞壁扩大，与细胞之间形成空隙。 二、繁殖方式：微绿球藻进行二分裂繁殖，细胞分裂成为2个子细胞，细胞分裂后，子细胞由母细胞的细胞壁裂开处脱出，子细胞附着在细胞壁上，互相连结成为一个松散的树枝状群体。 三、生态条件： 1、盐度：微绿球藻对盐度的适应范围很广，在盐度为4—36的范围内均能正常生长繁殖，并可保养在2—54的盐度范围内。江西省宜春高新技术专利产品开发中心提供光合细菌培养基配方技术。 2、温度：微绿球藻在10--36℃的温度范围内都能比较迅速的繁殖，最适温度为25--30℃。 3、光照：在适温条件下，最适光照强度为10000勒克斯。 4、酸碱度：适宜的酸碱度范围为：PH7.5—8.5。 微绿球藻在有机质多，特别是氮肥多，氨盐丰富的水体中，生长特别繁茂。 单细胞藻类之--塔胞藻 塔胞藻（Pyramimonas sp.）分类上属于绿藻门，绿藻纲，团藻目，衣藻科，塔胞藻属。可以用于海湾扇贝幼体的饵料。 一、形态特征：单细胞，不具细胞壁，多数呈梨形、侧卵形，少数呈半球形。细胞长12—16
藻类的分离和培养 微型藻类的分离和培养方法基本上与菌类的方法相似，但还需加上光照条件，并以液体培养为主。在大量培养时，可不必考虑无菌条件。 一、目的 学习藻类的分离和培养方法 二、药品、材料和用具 水生生物培养槽，玻璃片（面积稍大于培养槽），橡皮管，显微镜，三角烧瓶，试管，筛绢，棉塞，微吸管，凹玻片，灭菌锅，载玻片，吸管，培养皿，人工光源，木盆（或小型实验池），充二氧化碳气钢瓶，抽气泵，离心机。 土壤抽出液，青霉素，链霉素，琼脂，硝酸钙，磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，过磷酸钙，硫酸镁，氯化钾，碳酸钠，三氯化铁，硅酸钠，葡萄糖，蛋白胨，硫酸铵，硝酸铵，氯化钙，碳酸氢钠，钼酸，氯化钠，柠檬酸铁，硫酸锰，人尿，海泥抽出液，食盐。 三、操作 生长在静水或水流缓慢河流中的藻类，培养比较容易。取到实验室后，要立刻从材料瓶中移到宽大的水生生物培养槽内。为了培养大的丝状藻，要利用宽的、不高的容器。这些容器要用玻片盖住，以防止培养物受灰尘沾污。倒入容器的水要达到容器高度的一半，或稍多些，使水面上还有充分空气。在容器边缘，要用一小块纵切橡皮管垫住，可使玻片不致紧贴容器，空气才能进入容器中。细微的藻类如团藻目、硅藻门能很好地生活于培养皿中。很多藻类如颤藻属、水绵属的若干种、轮藻属等可在实验室中保存很多年。 在迅速流动水中生长的藻如丝藻属、毛枝藻属等比较难于培养，因为它们要求经常输入氧气。在水层较高水中，在高容器中，这些藻类迅速地死亡。为了把这些藻类保存到实验时，应当把它们分成一些小部分，放在水层较薄的、宽的容器内，并须常常换水，把空气吹入水中。还可以用橡皮管把水生生物培养槽和水龙头连结起来，建立有流水的水生生物培养槽。 在水生生物培养槽中培养藻类时，应尽可能创造和保持藻类天然生存条件。把藻类培养在从采集藻类那一水域取来的水中，或其他天然水（尤其不能用自来水，因其中含很多氯气，必要的话，也须置较长时间，或加以煮开），或在水中加入混合养料，这些养料是由制造有机物质所必需的矿质盐构成。
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) IPTG (24 mg/ml) X-Gal (20 mg/ml) LB培养基■组份浓度 100 mg/ml Ampicillin ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 24 mg/ml IPTG ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 20 mg/ml X-Gal ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后， 定容至50 ml。 3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。 ■组份浓度 1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract， 1%（W/V）NaCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。
一、藻种的两种培养类型 一般藻种的培养有两种方式：一种是长期保存所需要的培养方法，一种是以实验为目的，短期内保藏藻种的培养方法。 长期培养最主要的问题是选择一种合适的培养基，可以在3个月到一年的时间内连续培养藻种。最适合长期培养藻种的培养基是agar（固体琼脂培养基），但是使用agar有一个弊端，即培养物保持无菌的问题；我们可以加一层蒸馏水（咸水的藻类可以加灭菌过人工的海水）在agar上，这种做法可以保证在长期保种的过程中减少agar水分和营养的流失。长期保种使用的培养基，不要选择营养过于丰富的，因为多数的藻，尤其是丝状藻，在营养丰富的环境生长，会发生形态结构上的变化，如果要做生理生态方面研究，实验材料的形态结构是不能异常的。 适合长期保种的贫营养的培养基有这些：Bold’s基础培养基，以及该培养基加上蛋白胨或者琼脂制成的agar，适合长期培养绿藻；Allen及其改良后的配方可以长期培养一般常见的蓝藻和绿藻；土水培养基和它的一个改良的系列也实用培养多数藻种。对于我库提供的藻种，由于藻种长期习惯的原因，建议使用我们提供的原配方来培养，在长期培养的时候，可以适当稀释原培养基，在藻种培养过程中，生长速率会变慢，可以保持其形态结构不变。 另外，长期培养的时候，除了选择适当的培养基，还可以降低温度5～8C（降温的过程最好能循序渐进，突然改变环境温度，可能会导致藻种不适应而死亡）。光照强度可以减小为原先的一半。在实验之前3到4周，将长期培养的藻种接种到我们提供的培养基中（培养基必须灭菌），按照我们给予的培养条件培养，在实验前6天左右，再次接种。 短期培养则可以直接按照我们提供的培养基和培养条件培养。由于试验的需要，常常要求在短期时间内获得大量的培养物，我们可以采用通气培养和摇床培养。通气培养可以通CO2或洁净的空气，视培养物的多少来决定通气泵的大小，在通气的硅胶管中设置一个缓冲瓶，塞上灭菌后的脱脂棉，帮助净化空气，如果对通气有更高的要求，可以在通气管中加上一层滤膜。使用摇床培养，需要注意藻种的生理周期。 二、培养基的选择和配制 1、培养基的选择 ①BG11是我库培养蓝藻使用最广泛的培养基。除了极少部分蓝藻，大部分都使用BG11。按照我们给的配方配制好后 高压灭菌，BG11经常会产生絮状沉淀。这是因为其中有Ca+和CO32???-,我们可以在灭菌后再超净台上用灭菌过的注射器来加两者之中的另外一种。通常我们建议将氯化钙的母液单独灭菌后在无菌室保存，在配置好BG11的工作液并灭菌之后，在超净台上用注射器将氯华钙加入。 ②SE是我库用来培养常见的绿藻所使用的培养基。一般来说，如果配制了母液，用母液来配培养基，灭菌后是不会产生 沉淀的。配置的时候注意先将所需要的蒸馏水准备好，将需要的药品逐个加入，等到一种药品充分溶解之后再加入第二种。 另外，土水在蒸馏过滤后，是不需要灭菌的，因为高压灭菌的过程会让其中的一些营养成分损失。 ③水是培养基成分中很重要的一个方面。配培养基，可以取蒸馏水、自来水、去离子水，也可以取藻种采集地的水。使
绿藻栅藻培养 藻类，特别是单细胞藻类的营养丰富，含有动物和人生长发育所必需的营养物质。自上世纪四十年代以来,各国学者都试图用藻类这一资源解决人类食物和动物饵料的缺乏问题。另一方面，藻类可直接或间接的作为鱼类及其他水生动物的饵料。 1 藻类的培养方式 藻类的培养方式，以藻类培养的目的要求而各种各样。但可分为密闭式培养和开放式培养两大类。 1.1密闭式培养 密闭式培养的目的是不使外界杂藻、菌类及其他有机体混入培养物中。将培养液密封在与外界完全隔离的透明容器中，由此通气，搅拌，输送培养液及调节水温和取样等设备，也都要与外界隔离。培养容器多为管状，也有池状，用有机玻璃或透明的聚乙烯所料做成水平管道，直立或斜立在地上，暴露阳光或人工光照下。这种培养方式，成本高，好控制，产量亦稳定。 1.2开放式培养 将藻类培养于敞开的容器(如水泥池、管道、木盆等)中。方法设备较简便，可进行小量或大面积的培养。该法培养物中易发生敌害生物污染，但成本低，使用较普遍，也是今后藻类培养所应采取的方式。开放式可分如下几种类型： (1) 开放循环培养：其特点式培养液借助循环水泵而不断循环流动。培养物能循环，就可省却搅拌工作。 (2) 开放非循环培养：其特点是培养液不循环流动，而定时由小管通入CO2和空气到培养液中；同时也起搅拌作用。此法在大面积培养中使用较普遍。优点是设备简单，无需动力，水泵及大量的CO2及通气设备。 (3) 半开放循环培养：半开放培养是指培养容器或池，槽等场所虽仍敞开，但有些部分密闭，或用塑料布覆盖。这种培养方式，利用管道，依靠动力，使培
养液流动和通入含二氧化碳的空气。该方式设备复杂，但效果较好。 2 藻种的分离 为了要进行某种藻类的科学研究活大量培养，有必要把某种藻类与其他生物分离。分离培养藻种，可分为两大类，一为单种培养，即藻类虽只有一种，但还混杂细菌。另一为纯培养，即不仅藻类只有一种，亦无其它任何生物。纯培养比较困难，一般的分离培养往往只能做到单种培养。 主要根据培养的目的要求，及某一种类的生物学特征。藻类的分离主要有以下几种常用方法。 2.1 离心法 将混合液用离心机离心，水中不同藻体及细菌就以不同的速度下沉，因此得以分开。这样将不同时间下从导管底的藻体取出，经镜检选定某种藻类最多的沉积物，再加清水，继续离心，如此反复就可得到比较单纯的藻体，在接种相应培养液中培养。该法可消除细菌，并增加纯粹分离的可能性，至少可作为藻种平板培养的准备工作。另外，在水液中藻体含量较少时，可用此法集中藻体。但此法不能做到使不同藻类完全分离。 2.2 稀释法 该方法用已消毒试管5只，在第一管盛蒸馏水10mL，第2～5管都装5mL，用高压蒸汽消毒，待冷却后，第1管用滴管滴入混合藻液1～2滴，充分振荡，使均匀稀释。每次用消毒吸管，从第1管中吸取5mL滴入第二管中如前振荡，使均匀稀释。以后依次同样滴入第3～5 管，并都充分均匀稀释。然后把五个已盛又消毒的琼胶培养基培养皿，加热使之溶解，待冷却而尚未凝固时，分别滴入五个试管的藻液各一滴，用力振荡，使藻液充分混乳培养基中。待冷凝后，把五个培养皿放在受着漫射光窗口，一直到出现藻群时为止，在20℃左右时，约10天即出现藻群。用消过毒的白金丝取些藻群，进行琼胶固体培养基的不通气培养。此过程反复多次，直至得到完全分离的纯藻种群为止。此法稀释要使用较多容器分组培养，比较麻烦，但较易成功。
微藻的实验室培养 学生：林晓生学号：2120180414导师：杨缜教授 一、藻类的概述 藻类是原生生物界一类真核生物(有些也为原核生物，如蓝藻门的藻类）。主要水生，无维管束，能进行光合作用。藻类植物共约为2100属,27000种。根据所含色素、细胞构造、生殖方法和生殖器官构造的不同，分为绿藻门、裸藻门、轮藻门、金藻门、黄藻门、硅藻门、甲藻门、蓝藻门、褐藻门和红藻门。色素的颜色划分，藻可分为3类：绿藻、褐藻和红藻。 由于单胞藻具有利用太阳光能效率高、营养丰富、生长繁殖迅速、对环境的适应性强和容易培养等重要特性，因而受到重视。微藻是一类在陆地、海洋分布广泛，营养丰富、光合利用度高的自养植物，细胞代谢产生的多糖、蛋白质、色素等，使其在食品、医药、基因工程、液体燃料等领域具有很好的开发前景。 二、微藻的营养模式和生长模式 （二）、微藻的生长模式 藻类在培养过程中，生长繁殖的速度，出现一定的起伏，这种生长模式可划分为五个时期（延缓期、指数生长期、相对生长下降期、静止期、死亡期）。
三、培养按培养的场所分室内培养和室外培养 1）按培养基的形态分固体培养和液体培养 2）按培养的纯度分纯种培养和单种培养3）按藻液的流动情况分静止培养和循环流动水培养 4）按气体交换情况分充气培养和不充气培养 5）按藻液与外界接触程度分封闭式培养和开放式培养6）按培养规模和目的分小型培养、中继培养和大量培养方式 简单介绍其中的四种方式： （1）纯培养和单种培养 纯培养（axenic culture）：是无菌培养，指排除了包括细菌在内的一切生物的条件下进行的培养。纯培养操作要求十分严格，要求有无菌室、超净台等设备，容器、工具、培养液等均须彻底灭菌。培养成功率很高，是进行科学研究不可缺少的技术。 单种培养（single-species culture）：指区别于纯培养的不排除细菌存在的培养（可以是生产性的，也可以是非生产性的） （2）封闭式培养和开放式培养 封闭式培养（closed culture）：指把培养液密封在透明的容器中，与外界空气隔离，暴露在阳光中，CO2完全采用人工供给的方法。各种反应器等 开放式培养：指把藻类培养在开敞容器中，如广口玻璃瓶、水族箱、玻璃钢水槽、水泥池等。 （3）小型培养、中继培养和大量培养封闭式塑料薄膜袋培养，方法简单，成本低、培养的藻细胞密度大，不易污染且生产周期短，效果很好。
藻种培养 一般来说藻种的培养有两种方式：一种是长期保存所需要的培养方法，一种是以实验为目的，短期内保藏藻种的培养方法。 长期培养最主要的问题是选择一种合适的培养基，可以在3个月到一年的时间内连续培养藻种。最适合长期培养藻种的培养基是agar（固体琼脂培养基），但是使用agar有一个弊端，即培养物保持无菌的问题；我们可以加一层蒸馏水（咸水的藻类可以加灭菌过人工的海水）在agar上，这种做法可以保证在长期保种的过程中减少agar水分和营养的流失。长期保种使用的培养基，不要选择营养过于丰富的，因为多数的藻，尤其是丝状藻，在营养丰富的环境生长，会发生形态结构上的变化，如果要做生理生态方面研究，实验材料的形态结构是不能异常的。 适合长期保种的贫营养的培养基有这些：Bold’s基础培养基，以及该培养基加上蛋白胨或者琼脂制成的a gar，适合长期培养绿藻；Allen及其改良后的配方可以长期培养一般常见的蓝藻和绿藻；土水培养基和它的一个改良的系列也实用培养多数藻种。对于我库提供的藻种，由于藻种长期习惯的原因，建议使用我们提供的原配方来培养，在长期培养的时候，可以适当稀释原培养基，在藻种培养过程中，生长速率会变慢，可以保持其形态结构不变。 另外，长期培养的时候，除了选择适当的培养基，还可以降低温度5～8 C（降温的过程最好能循序渐进，突然改变环境温度，可能会导致藻种不适应而死亡）。光照强度可以减小为原先的一半。在实验之前3到4周，将长期培养的藻种接种到我们提供的培养基中（培养基必须灭菌），按照我们给予的培养条件培养，在实验前6天左右，再次接种。 短期培养则可以直接按照我们提供的培养基和培养条件培养。由于试验的需要，常常要求在短期时间内获得大量的培养物，我们可以采用通气培养和摇床培养。通气培养可以通CO2或洁净的空气，视培养物的多少来决定通气泵的大小，在通气的硅胶管中设置一个缓冲瓶，塞上灭菌后的脱脂棉，帮助净化空气，如果对通气有更高的要求，可以在通气管中加上一层滤膜。使用摇床培养，需要注意藻种的生理周期。 二、培养基的选择和配制 1、培养基的选择 ① BG11是我库培养蓝藻使用最广泛的培养基。除了极少部分蓝藻，大部分都使用BG11。按照我们给的配方配制好后高压灭菌，BG11经常会产生絮状沉淀。这是因为其中有Ca+和CO32???-,我们可以在灭菌后再超净台上用灭菌过的注射器来加两者之中的另外一种。通常我们建议将氯化钙的母液单独灭菌后在无菌室保存，在配置好BG11的工作液并灭菌之后，在超净台上用注射器将氯华钙加入。 ② SE是我库用来培养常见的绿藻所使用的培养基。一般来说，如果配制了母液，用母液来配培养基，灭菌后是不会产生沉淀的。配置的时候注意先将所需要的蒸馏水准备好，将需要的药品逐个加入，等到一种药品充分溶解之后再加入第二种。另外，土水在蒸馏过滤后，是不需要灭菌的，因为高压灭菌的过程会让其中的一些营养成分损失。 ③水是培养基成分中很重要的一个方面。配培养基，可以取蒸馏水、自来水、去离子水，也可以取藻种采集地的水。使用经过处理的水，如双蒸水、去离子水，有时候并不合适培养，因为仪器在处理过程中会带入微量的有毒物质。采集藻种采集地的水来培养是最理想的，但是需要经过一些处理，处理的手段和过程要尽可能保持其营养成分不变。如果是咸水或者海水的藻类采集地采集的水，应将其置于5 C的黑暗中，保持6个月。如果是泉水或者湖水等淡水的水源，水样置于20 C的室温，立即通过活性炭方法处理：每升水加2g活性炭，搅拌一小时后，过滤，并重复此过程3～4次。 ④咸水和微咸水的藻类需要的人工咸水的合成效果关键在于如何蒸馏；还有一些水华蓝藻难以培养，主要原因是因为在野外生长时，通常底泥提供的营养元素可以溶在水中，但是在实验室培养，经过高压灭菌，很多营养都损失了。所以我们建议不用高压灭菌法，使用巴斯德（pasteur）灭菌方法：加热到73～78 C，保持15～20分钟，间隔24小时灭菌一次，一共三次。 2、培养基的配制
五、实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml) 组份浓度100 mg/ml Ampicillin 配制量50 ml 配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0.22 μm过滤膜过滤除菌。 4.小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml) 组份浓度24 mg/mL IPTG 配制量50 mL 配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0 22 μm过滤膜过滤除菌。 4小份分装(1 ml，份)后，-20℃保存。 X-Gal (20 mg/ml) 组份浓度20 mg/ml X-Gal 配制量50 ml 配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光保存。 LB培养基 组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，1%(W/V)NaCl 配制量 1 L 配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。 4.加去离子水将培养基定容至1 L。 5高温高压灭菌后，4。C保存。 LB/Amp培养基 组份浓度 1%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract 1%(W/V) NaCl 0.1 mg/ml Ampicillin
第六章单细胞藻类的培养 一、名词解释 1，生物饵料2，纯培养3，单种培养4，混合培养5，开放式培养 6，封闭式培养7，饱和光照强度8，补偿光照强度 9，一次性培养10，半连续培养11，连续培养 12，一级培养13，二级培养14，三级培养 15，倍增时间 二，选择题 1，下列哪种藻的最佳培养条件为高温、强光和强碱性？ A．钝顶螺旋藻B．湛江等鞭金藻C．中肋骨条藻D．小球藻 2，下列哪种藻是目前单细胞藻类中产业化程度最高的一个微藻？ A．微绿球藻B．等鞭金藻C．三角褐指藻D．钝顶螺旋藻 3，下列哪些金属元素为藻类生长繁殖必须的常量元素？ A．K，Mg，Zn B．K，Mg，Fe C．Mg，Fe，Cu D．K，Cu，Zn 4，实验室小型培养单胞藻，海水的消毒通常采用下列哪种方法？（C） A．烘箱干燥消毒B．有效氯消毒C．煮沸消毒D．高锰酸钾消毒 5，下列哪种藻类具有厚的细胞壁，一般不直接作为饵料投喂？ A．小球藻B．湛江等鞭金藻C．角毛藻D．微绿球藻 6，下列哪种藻类的形态随培养条件的改变会发生明显的变化？ A．小球藻B．三角褐指藻C．中肋骨条藻D．巴夫藻 7，下列哪种藻类的最佳培养生态和应用途径与三角褐指藻相似？ A．亚心形扁藻B．等鞭金藻C．小新月菱形藻D．巴夫藻 8，下列哪种藻类主要用作鲍鱼育苗中匍匐幼虫和稚鲍的饵料？ A．亚心形扁藻B．等鞭金藻C．小新月菱形藻D．舟形藻 9，藻类培养过程中，一般选择在什么时间接种？ A．清晨5~8点B．上午8~10点C．下午4~6点D．晚上 10，按接种后藻液中藻细胞浓度算，金藻和硅藻的接种密度最好应控制在什么浓度？ A．在500万细胞/毫升以上B．在10万细胞/毫升以上 C．在100万细胞/毫升以上D．在50万细胞/毫升以上 11，标准的血球计数板盖上盖玻片后，一个中央大格所在区域的体积是 A．1mm3B．10mm3C．0.1mm3D．0.1mL 12，单细胞藻类培养池的设计上要求： A．面积相对小，池子浅，光照充足，最好内壁贴白色瓷砖 B．面积相对大，池子深，光照充足，最好内壁贴白色瓷砖 C．面积相对小，池子深，光照充足，最好内壁贴白色瓷砖 D．面积相对大，池子浅，光照充足，最好内壁贴白色瓷砖 13，下列哪种藻类在南方甲壳动物育苗中广泛应用？ A．亚心形扁藻B．中肋骨条藻C．小新月菱形藻D．三角褐指藻 14，在藻类培养中，充气可促进藻类生长。但为了预防敌害生物通过空气污染藻液，空气在注入藻液之前最好经过洗气装置，下列哪种溶液最适宜作为洗液？ A．氢氧化钠溶液B．次氯酸钠溶液C．硫酸铜溶液D．盐酸溶液 15，不同的光波长，对同一种藻类的生长效能的影响不同。三角褐指藻在哪种色光下生长最
第五章微生物的营养和培养基 一、选择题 1. 大多数微生物的营养类型属于：（） A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 2. 蓝细菌的营养类型属于：（） A．光能自养 B. 光能异养C．化能自养 D. 化能异养 3. 碳素营养物质的主要功能是：（） A. 构成细胞物质 B. 提供能量 C. A，B 两者 4. 占微生物细胞总重量70%-90% 以上的细胞组分是：（） A. 碳素物质 B. 氮素物质 C. 水 5. 能用分子氮作氮源的微生物有：（） A. 酵母菌 B. 蓝细菌 C. 苏云金杆菌 6. 大肠杆菌属于（）型的微生物。 A. 光能无机自养 B. 光能有机异养 C. 化能无机自养 D. 化能有机异养 7. 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是：（） A. 所需能源物质不同 B. 所需碳源不同 C. 所需氮源不同 8. 基团转位和主动运输的主要差别是：（） A. 运输中需要各种载体参与 B. 需要消耗能量 C. 改变了被运输物质的化学结构 9. 单纯扩散和促进扩散的主要区别是：（） A. 物质运输的浓度梯度不同 B. 前者不需能量，后者需要能量 C. 前者不需要载体，后者需要载体 10. 微生物生长所需要的生长因子（生长因素）是：（） A. 微量元素 B. 氨基酸和碱基 C. 维生素 D. B，C二者 11. 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供：（） A. 生长因素 B. C 源 C. N 源 12. 细菌中存在的一种主要运输方式为：（） A. 单纯扩散 B. 促进扩散 C. 主动运输 D. 基团转位 13. 微生物细胞中的C素含量大约占细胞干重的：（） A. 10% B. 30% C. 50% D.70%
实用技术—生物饵料责任编辑 李振龙 单细胞藻中含有大量的多聚不饱和脂肪酸（PUFAs）、EPA和DHA，而且多数的单细胞藻具有生长繁殖快、环境适应力强、培养周期短等特点。可实现在人工控制条件下大量培养获得高产的目的，是鱼、虾、贝类等海产品的理想鲜活饵料，藻类培养质量的好坏将直接影响海产品育苗的成败，因此单细胞藻类的培养技术是育苗成功的基础和关键技术。随着人工育苗技术的成熟，单细胞藻类在贝类、虾蟹类、鱼类人工育苗中得到了广泛应用。以下简述一下藻类培养的注意问题： 一、培养方式 根据藻种培养的目的和要求的不同，单细胞藻的培养方式也有多种。根据藻的纯度一般分为纯种培养和单种培养。培养方法主要分为保种室培养和生产性培养。目前水产养殖过程中最为基础的培养是直接在自然水域中培养单细胞藻。经过滤的海水或淡水里有硅藻、绿藻等各种单细胞藻；有轮虫、桡足类、枝角类等各种浮游动物；有多种小型底栖动物等，利用繁殖自然水体里本身就有的单细胞藻，促进浮游动物、底栖动物等基础饵料生物的生长繁殖。而随着土池育苗的发展以及藻类在毒理学科研的需要，也可使用封闭或半封闭方式定向培养纯种单细胞藻。 二、扩种 目前的生产性培养主要分为一级、二级和三级培养。一级是藻种活化培养，一般在单细胞藻的保种室里进行，多采用250mL～5000mL的三角烧瓶，逐渐扩大培养；二级是藻种扩大培养，采用40L或50L的塑料桶、塑料袋充气培养单细胞藻；三级是在土池里投喂饵料的培养。 刚买回来的藻种一般进行一级扩种，扩种过程要求严格的无菌环境，最好每天早上7∶30左右，时间不易过早，待藻种上浮后扩种，取上层活跃藻体转接。不宜在晚上接种，因为晚上不少藻类沉在底部，而白天藻类进行光合作用，趋光上浮，便于观察其运动能力，还可起到选种的作用；刚买回的藻种第一次转接时不易全部转接，转接其三分之一至二分之一即可，并放在温度较低、光线较弱的地方培养，待藻适应光照条件后再调至其生长所需正常温度、光照条件进行培养，20天左右转接一次。 陈爱华等对等鞭金藻培养密度和接种时间比较试验结果表明，接种密度越低，生长速度越快，生长倍率越高。接种比率也是在藻种培养中需要注意的问题：以一级培养为种源的二级培养接种比例为1∶10，以二级培养为种源的扩种比例为1∶5。扩种一般选在上午8∶00到10∶00进行。 当二级培养的藻种经5天～6天培养后，临近对数生长期时，可进行生产性扩种。扩种比例为1∶40左右，扩种时间一般在上午9∶00到10∶00。 三、管理 藻类培养过程中光照、温度、湿度等条件的控制对藻类生长都起到十分关键的作用，因此接种后加强培养池的管理是提高产量的重要环节。生产性培养要用网捞出池面的污物，保持池水的洁净；为使藻处于悬浮的状态，不沉入池底，使其进行光合、呼吸作用且营养分布均匀，每天搅拌池水6次～8次；一级培养也要每天人工摇动3次～4次，以使藻类生长均匀，防止藻类出现沉淀与附壁现象。 1.对藻类生长状况的日常检查 每天早晚各做一次全面检查，观察藻类的颜色、透明度、附壁、沉淀和充气状况，必要时可配合显微镜检查。扩种后的藻种颜色很明显的由浅变深，若颜色变化不明显或出现其他颜色转变，就要及时查找原因；藻类对生长环境变化敏感，当出现环境不适应时就会出现沉淀和附壁现象；藻种一旦出现浑浊现象一般就要考虑是否存在敌害生物的污染，基于以上每天对藻种做日常检查是十分必要的。 2.镜检 显微镜检查是藻类培养中不可缺少的一步，一般7天～10天需进行一次全面的镜检，主要目的是检查有无敌害生物的污染，鉴定敌害生物的种类，从而及早采取相应措施。当培养出现异常现象时应及时镜检。 3.培养条件控制 不同的单细胞藻类品种有不同的生长最适温度，培养温度的高低直接影响其繁殖速度。过大的温差对单胞藻培养是十分不利的，尤其是在冬季，在向培养池补充水分或接种时，应尽量将水温调至所培养藻种的适温范围之内。当培养水温达到29℃以上时，对藻类生长不利，藻体老化快、易污染。在夏季控温的最好办法是将门窗打开，通风降温。 光照是影响单胞藻生长的主要因素之一。夏季，不要把藻类培养物放在直射太阳光下，而要放在凉爽的场所。在秋、冬季节，如希望藻类保持积极的生活活动状态，就要把培养物移到有人工光照处。而生产性培养、规模化培养需要较强的光照，可以人工补充光源强度。 单细胞藻类培养技术 ◇田程 崔建升 刘杰 河北科技大学环境科学与工程学院 050018 42《中国水产》2011年第5期
表皮葡萄球菌 产气肠杆菌 鼠伤寒沙门氏菌 单核增生李斯特氏菌 大肠埃希氏菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.doczj.com/doc/3e8450401.html, 金黄色葡萄球菌 酿酒酵母菌 脑心浸出液肉汤(BHI) 品红亚硫酸钠液体培养基 MFC肉汤 CFU培养基基础 4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基蛋白胨 胰蛋白胨 胰酪蛋白胨 酵母浸粉 大豆蛋白胨 酸水解酪蛋白 明胶蛋白胨 马铃薯浸粉 琼脂粉 琼脂粉 动物组织胃蛋白酶消化物 肉胃酶消化物 牛肉浸粉 牛肝浸粉 牛肝浸粉 牛心浸粉 多价蛋白胨(多聚蛋白胨) 月示蛋白胨 玉米浸出粉 一次性培养皿 表面接触碟 一次性培养皿（密理博浮游菌采样）表面接触碟/表面接触皿 https://www.doczj.com/doc/3e8450401.html, 金属玻璃培养皿（可重复使用） 金属玻璃表面接触碟
嗜热脂肪肝菌芽孢菌片（ATCC7953 枯草杆菌黑色变种芽孢菌片（ATCC9372）121度高压灭菌化学指示卡 132℃压力蒸汽灭菌指示卡 葡萄糖 氯化钠 L-半胱氨酸盐酸盐 氧化酶试剂 三磷酸腺苷二钠盐（ATP） 费尔休林（无吡啶） SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 SDS-PAGE电泳液 SDS-PAGE上样缓冲液5倍 考马斯亮蓝R-250染色套装 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 产气肠杆菌 乙型副伤寒沙门氏菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.doczj.com/doc/3e8450401.html, 黑曲霉 生孢梭菌 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 无菌大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉? 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白消化液培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 无菌大豆酪蛋白琼脂培养基 卵磷脂-吐温80营养琼脂培养基基础 胰化大豆坚固绿琼脂(TSFA) 营养肉汤(NB) 营养琼脂(NA) 0.5%葡萄糖肉汤培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 三糖铁琼脂培养基(TSI) 三糖铁琼脂培养基 R2A琼脂
藻类的实验室培养方法优化
第1章绪论 1.1 研究背景及目的 由于水体富营养化加重，河流、湖泊（水库）中火量藻类繁殖，直接影响了人们的饮用水安全。为了有效控制藻类的生长，对藻类的研究是非常必要的。众所周知，富足的氮、憐等营养物质，缓慢的水流速度，适宜的气候条件包括水湿、光照等是特定优势藻生长繁衍所必需的环境条件。目前人们对于富营养化水体中藻类的研究主要集中在温度、光照、营养盐水平下的藻类生长，并且找出了藻类生长与温度、光照、营养盐等之间的对应关系。但是水体中浮游生物的种群交替和生物量的变化，不仅与水体的温度、光照周期、营养物质及生物自身的生理状态相关，还受到水体流动的影响。 本实验分别以实验室培养铜绿微囊藻为实验对象，参照藻类生长的最适宜环境条件，在温度、光照、pH值及营养盐条件一定的条件下，研究影响藻类生长的规律，为生态调水、生态河道设计流速的确定提供理论依据，控制或减少水体富营养化现象的发生。 1.2 藻种的分类 藻类植物并不是一个单一的种群，它的分布范围极广，对环境条件要求不严，适应性较强。有些种类的水藻在极低的营养浓度、极微弱的光照强度和相当低的温度下也能生活。不同研究系统对藻类的分类方法各不相同，常用的分类系统，如，根据藻类的结构特征和藻细胞的生理生化特点，将藻类分为蓝藻门、硅藻门、黄藻门、绿藻门等共十一门，引起水体富营养化的藻类植物主要为蓝藻门和绿藻门；根据藻类在水中生长的位置，将藻类分为浮游藻类、飘浮藻类和底栖藻类。硅藻门、甲藻门和绿藻门的单细胞种类以及蓝藻门的一些丝状的种类浮游生长在海洋、江河、湖泊，称为浮游藻类。一下简要说明蓝藻和绿藻的种类、分布、形态和繁殖特征。引起水体富营养化的藻类植物主要为蓝藻门和绿藻门。 1.2.1 蓝藻 在中国，蓝藻是有毒有害性最强、分布范围最为广泛的一类淡水藻。有毒的蓝藻藻种有：铜绿微囊藻，泡沫节球藻，水华鱼腥藻，阿氏颤藻，水华束丝藻等。蓝藻是广适性藻类，分布十分广泛。蓝藻的主要生存环境为淡水和海洋，它们能在 咸水、咸淡水、淡水、冰冷和沸腾的泉水中生存，但大多数生活在淡水，少数生活在海洋。蓝藻的抗逆性很强，能在其它藻类无法生存的环境中繁衍。例如，有些蓝藻能在60-85℃的温泉中生长繁殖；有的在54℃条件下还能生长、固氮；有的可-35℃的低温（如地木耳）；有一些在过饱和盐水中也可生长。蓝藻还具有
蓝藻的分离和培养 1.概述： 蓝细菌曾被称为蓝藻或蓝绿藻（blue-green algae），原核细胞，没有有丝分裂，主要以二分裂或多分裂方式进行繁殖，少数蓝细菌可形成孢子，孢子壁厚，能抵抗不良环境。由成串细胞连成丝状的蓝细菌，在细胞链断裂时形成的片段，称之为链丝段，具有繁殖功能。 蓝细菌有广泛的分布，从水生到陆生生态系统，从热带到南北极都有分布。它们已经被证实：可以通过氮气的固定来提高稻田和其他土壤的肥力。蓝细菌是海洋生态系统和海洋初级生产力的重要组成部分。 形态特征： 1.具有原核生物的典型细胞结构，没有核膜，与细菌一样没有任何细胞器。 核物质只是一个环状双链DNA分子。细胞壁构造相似于革兰氏阴性菌， 分为内外两层，外层为脂多糖，内层为肽聚糖。 2.形态差异极大，有球状、杆状和丝状等形态。有单细胞体、群体类型。 群体由一条或多条单细胞排列成串的或丝状体构成，其中有的为单条不 分枝，有的具假分枝，有的具多分枝，还有的许多菌丝共同包埋在胶质 包被中，形成胶群体。 3.蓝细菌的细胞壁含有纤维素，细胞内进行光合作用的部位称类囊体，类 囊体膜上含有叶绿素a、β-胡萝卜素以及与光合电子传递链有关的组 分。藻胆蛋白为类囊体所特有，其功能是吸收光能，并把它转移到光系 统Ⅱ中，光合色素为叶绿素a，存在于丰富的内膜系统上，在光系统Ⅰ 中发挥作用。与光合细菌的光合色素不同。蓝细菌体内没有叶绿体。 4.许多水生种类细胞质中有气泡，使菌体漂浮，保持在光线最充足的地方， 以利光合作用。 5.无鞭毛，但能在固体表面滑行，趋光性。 6.分泌粘液层、荚膜或形成鞘衣，因此具有强的抗干旱能力。 7.细胞中常有各种贮存物：糖原，聚磷酸盐，PHB，氮源（藻青素）。 8.细胞的几种特化形式。
实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌 一、实验目的 1学会常用器皿包扎方法 2学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 3学会实验室灭菌锅的使用方法 二、常用器具和仪器 试管(testtube)，德汉氏小管(Durhamtube)，玻璃吸管 (glasspipette)，吸器，微量加样器(micropipette)，吸嘴(tip)，培养皿(petri dish)，三角瓶(erlenmeyer flask)，接种铲(inoculatingshovel),玻璃涂布器(glassspreade)，接种环(inoculatingloop)，接种钩(inoculating hook)，接种针(inoculating needle)，小塑料离心管(Eppendorf tube)，滴瓶(dropper bottle )，双层瓶(double bottle)，酒精灯⑻ cohol burner)，煤气喷头(coal gas sprinklerhead，试剂瓶，量筒，烧杯，温度计，石棉网，漏斗，烘箱，卧式灭菌锅，手提式灭菌锅，无菌操作台/ 室，过滤除菌设备，厌氧操作设备，小型发酵罐，离心机，培养箱/摇床，冷冻干燥机，蒸馏水器，超声波清洗仪，磁力搅拌器。 三、玻璃器皿的包装 1、培养皿的包装方法一：用旧报纸密密包紧，一般以5-8 套培养皿作一包。包好后用干热或湿热灭菌(见无菌操作技术)。 方法二：将培养皿放入金属(不锈钢)筒内，干热灭菌。金属筒配有盖子，内部还有一个可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内提出，以便装取培养皿。 包好的培养皿 金属筒和内部的框架 塑料培养皿架 2、吸管的包装