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骨密度检测仪操作流程
Eppendorf 蛋白质核酸分析仪操作说明与注意事项 操作说明： 准备：开始测定前只需开启仪器背后的电源开关即可开始测定。 1、打开电源预热30分钟； 2、根据样品的类型调取相应的程序，如：待检测样品微双链DNA,可按控制板上的dsDNA键， 显示屏显示进入测定双链DNA程序； 3、根据要求向一只比色皿中加入DNA标准样液或不含DNA的空白液做对照，将该比色皿放 值或0.000 A 入比色皿槽，按下Standard键或Blank键；待屏幕上显示标准样的A 260字样时，取出对照比色皿； 4、放入加有样品的比色皿，按下Sample键，显示屏将会显示测定结果； 5、记录测定结果或打印结果。 6、取出已测样品比色皿，放入含下一个待测样品的比色皿，按Sample键，读取结果； 7、通过该仪器可测定核酸或蛋白的纯度，浓度等等，只需根据样品类型及检测目的调取相 应程序即可。 一、核酸浓度测定（包括dsDNA、ssDNA、RNA、Oligo） 1. 例如待测定样品为dsDNA（eg：PCR产物），按下键“7 / dsDNA” （若待测样品为ssDNA，eg：反转录合成的第一链cDNA产物，则相应按下键“8 / ssDN A 若待测样品为RNA，则按下键“9 / RNA”； 若待测样品为Oligo（寡聚核苷酸），eg：PCR引物，则相应按下键“6 / Oligo”。） 2. 若测定样品需要稀释后测定，则需先设定样品的稀释度： （1）按下键“Dilution”； （2）输入样品体积和稀释液体积，按Enter键确认。 将空白对照置入样品孔。注意：空白对照是空白液，并非所有情况都是水。（例如用Tris 溶液溶解DNA制品，则要用Tri s液做空白对照。） 3. 按下键“Blank”； 4. 仪器记录空白对照，设置为0.000A；(先不取出对照，按下Sample，看是否调零成功，若成功则可开始测样品) 5. 将第一个样品置入样品孔； 6. 按下“Sample”； 7. 仪器显示第一个样品的相关参数（记下样品浓度，OD260，OD280，OD260/OD280） 8. 直接放入第二个样品； 9. 按下“Sample”； 10. 仪器显示第二个样品的吸光度值和浓度值，以及其他相关参考比值； 11. 依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果的方法如下：（1）按下键“./ Function” （2）选择“DISPLAY-RESULT”,按Enter键，查看每个样品的测定值记录（本机可存储100个样品的测定值）。 二、OD600 细菌生长密度测定 1. 按下键“5 /OD 600”； 2. 将空白对照置入样品孔； 3. 按下键“Blank”；
双能X线骨密度检查仪简介 一、美国Hologic双能X线骨密度测量仪 肇庆市第二人民医院新引进的美国HOLOGIC双能X线骨密度检查仪是目前世界上最新型的骨密度检测仪，具有扫描速度快（2-5分钟）、精确度与准确性高、放射性剂量低等优点，已广泛应用于临床，是骨密度检测公认的“金标准”。它可测定脊椎、股骨以及全身骨量，能准确评价人体全身骨骼的健康状况，是骨质疏松早期诊断、疾病监测和药物疗效评价的常用方法。其中全身体质成份分析可针对全身每个部位进行骨量、肌肉及脂肪含量测定和分析，便于指导受检者进行针对性的预防和锻炼。 二、骨密度测定临床应用 骨密度测定主要有三大优势： 1.早期诊断骨质疏松和骨折危险度的预测； 2.对内分泌及代谢性骨病的骨量测量，从而制定安全、最佳的治疗方案，防止骨折发生； 3.病情随访及疗效评价。 骨质疏松症通常以腰椎L1～L4的测定结果及近端股骨的股骨颈大转子股骨体及三角区的测定结果作为诊断依据。全身扫描图像则可以得到几组骨骼的骨密度数据，如颅骨、脊椎、左右上肢、左右肋骨、左右下肢、胸腰椎、骨盆等。骨密度仪会根据病人资料自动算出T值数据。T值是将你检查所得到骨密度与健康30～35岁年轻人的骨峰值作比较，以得出高出（+）或低于(-)年轻人的标准差（SD）数。T值是诊断骨质疏松症最有意义的数值，它能反映骨质疏松的严重程度。T值范围：正常值：T>-1.0 骨量减少：-2.5≤T≤-1.0 骨质疏松：T<-2.5 三、骨密度检查适用范围 1、在常规X 光片上发现骨量减少，骨密度测量可以证实这种主观判断。 2、绝经前后妇女、中老年人。 3、超重及肥胖人士的精确诊断、健康指导和减肥疗效评价。 4、关心自我骨骼健康，需要了解自身骨骼健康状况者。 5、关注肌肉、脂肪分配比例的爱美人士等。 6、有慢性疾病史（如糖尿病、肾功能不全、风湿性关节炎等）或服用抗癫痫药、抗凝 药、糖皮质激素史者等容易引起骨质疏松的患者。 7、有营养不良、发育障碍史或不明原因腰腿痛者。 8、骨质疏松药物疗效的观察和指导。 9、开始激素替代疗法（HRT）前的必要检查。 10、长期缺乏运动或卧床不起的患者。 11、提前绝经或停经的患者，如厌食症，易饥饿症等。 12、甲状腺亢进或接受甲状腺激素治疗的患者。 13、器官移植后的患者。 14、骨质疏松家族史或骨折病史者。 15、肝脏疾病患者。 16、消化吸收不良综合症的患者。17、身高下降4 厘米以上。 18、体重减少5 公斤以上。
Tecan 蛋白印迹仪简易操作规程 一、主要程序操作方法 TECAN Run: XX + – exit yes WASTE BOTTLE OK? exit yes INSERT TRAY ! press any key StPos Strip: XX exit yes No of Strips XX exit yes Last Aspiration no yes Proc.: 01 Yyyy - + exit yes Main < > FW Run Run Program < > Main yes Step: xx YYYY exit Test done ! Please wait you should clean press any key 待机模式 提示确保排空废液瓶。 使用 - / + 键选择要运行的程序。 按 yes （确认）选定程序。 把托盘插到托盘架内，关上前盖。 选择实验开始的样品条位置，默认为 StPos 1 选择要处理的样品条数 (1 至 48)，默认值为 48 程序内最后一个步骤是 ASP 吗？按 yes （是）或 no （否）。 选择开始程序步骤。 设备将显示正在执行步骤的有关信息。 实验程序执行完毕。 提示清洗（例如使用蒸馏水）管路。 Last Aspiration Cont.
二、回流 该选项用于把注液系统内的试剂送回试剂瓶。 Liquid Prep. < > yes Pump Back < > exit yes 选定 Pump Back （回流）选项。 All Pumps ? no yes Channel: X – + exit yes Channel: X – + exit yes 如果要把所有通道内的试剂送回，则选择 yes （是）。 如果只把指定通道内的试剂送回，则选择 no （否）。 对所选通道执行回流操作。 选择下一个要清洗的通道或退出。 Run Program < > Main yes 已对所有通道执行完回流操作 Channel: X 选择要回流的通道。
医用耐压测试仪操作规程 一、熟悉仪器的各项性能及操作要求，应由固定岗位人员操作、非本岗位人员严禁操作。 二、操作步骤： 操作者坐椅和脚下必须垫好橡胶绝缘垫，只有在测试灯熄灭状态下，无高压输出方可进行被测机型连接或拆卸操作，操作时需戴绝缘手套。 ①打开仪器开关前，确保电压表指示值为“0”，测试灯灭，处于复位状态。 ②将高压测试线夹在被测机型电源输入端（用导线将插头L，N短接），并合 上被测机型的开关。 ③将仪器接地端（测试回路低端）夹在被测机型的已接地的可触及金属部分。 ④按下预置开关，选择报警电流范围为2mA，预置报警电流值为0.9mA。 ⑤将定时开关打开，调节定时为60s。 ⑥按启动按钮，将测试电源旋至1500V。 ⑦定时时间结束，测试电源被切断，无发生闪络或拉弧现象，被测物合格； 定时时间结束，仪器超漏灯亮或发生闪络现象，被测物不合格。 拆卸测试线应确保仪器处于复位状态，测试灯灭，电压表指示为“0” ①~②步骤同上 ③将测试线接地端（测试回路低端）夹在应用部分【心电导联输入端（用导线 将各输入端短路）】 ④按下预置开关，选择报警电流范围为2mA，预置报警电流值为0.69mA。 ⑤将定时开关打开，调节定时为60s。 ⑥按启动按钮，将测试电源旋至4000V。 ⑦定时时间结束，测试电源被切断，无发生闪络或拉弧现象，被测物合格； 定时时间结束，仪器超漏灯亮或发生闪络现象，被测物不合格。 示波器与检验仪的连法与设置 1.用BNC-BNC连接线将耐压测试仪x轴与示波器x轴连接。 2.用BNC-BNC连接线将耐压测试仪y轴与示波器y轴连接。 3.将示波器的x轴和y轴分别设置为0.2V/格。 4.接通耐压测试仪和示波器电源，调节示波器使显示出一个平滑的椭圆环。 5.根据上述方法测试，在测试期间不得发生闪络或拉弧现象。 三、使用注意事项： 1.接通该仪器的电源必须有良好的接地，否则，当仪器输出短路时，使仪器 外壳带有高压，人接触外壳会发生意外事故。
Western Blot(免疫印迹法)实验方法步骤 发布日期:2008-8-25 热门指数:4360 Western Blot(免疫印迹法) 主要包括以下4个基本步骤： n 样品制备 n 电泳分离 n 蛋白的膜转移 n 免疫杂交与显色――蛋白检测 溶液和试剂 n 1X 磷酸盐缓冲液(PBS) n Modified RIPA buffer Tris-HCl: 50 mM, pH 7.4 ; NP-40: 1% ;Na-deoxycholate: 0.25% ;NaCl: 150 mM ;EDTA: 1 mM ;P MSF: 1 mM ;Aprotinin, leupeptin, pepstatin: 1 microgram/ml each ;Na3VO4: 1 mM ;NaF: 1 mM n 1X SDS 样品缓冲液 62.5 mM Tris-HCl (pH 6.8 于25°C), 2% w/v SDS, 10%甘油,50 mM DTT, 0.01% w/v溴酚蓝 n 转移缓冲液 25 mM Tris base, 0.2 M 甘氨酸, 20%甲醇(pH 8.3) n 10X Tris缓冲盐(TBS) 准备1L 10X TBS: 24.2 g Tris base, 80 g NaCl;用1N HCl调pH为7.6 n 脱脂奶粉或BSA n 甲醇 n TBS/T缓冲液 1X TBS, 0.1% Tween-20 n 封闭缓冲液（TBS/T）
1X TBS, 0.1% Tween-20加5% w/v脱脂奶粉或BSA n 一抗的稀释 1X TBS, 0.1% Tween-20 加5% BSA (多抗)或5%脱脂奶粉(单抗) Note:一般来说, BSA被推荐用于多克隆抗体，脱脂奶粉用于单克隆抗体，这样可得到较高的信噪比。抗体的稀释度参考抗体说明书或根据实验确定。 n 预染的蛋白质Marker，可用于监测转膜的效率 样品制备 原始样品可为细胞、组织、培养上清、免疫沉淀或亲和纯化的蛋白，以下为定性检测目的蛋白时细胞样品的处理方法，其余的样品制备方法参阅相关文献。 1．培养细胞或药物处理。 2．弃培养基，用1X PBS漂洗细胞2次，去尽残留培养基。 3．加入1X SDS样品缓冲液(6-well plate, 100 μl /w或75 cm2plate, 500-1000 μl/瓶)，刮落细胞，转移到Ep管。注意：冰上操作。 4．超声10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。 5．煮沸样品5 minutes。 6．离心12000g, 5 min，取上清。 7．电泳分离：上样15μl~20 μl 至SDS-PAGE 胶(10 cm x 10 cm)电泳。 如要定量检测某蛋白的表达水平，应用RIPA裂解液(1 ml per 107cells/100 mm dish/150 cm2flask)裂解细胞，收集裂解液至离心管中，在振荡器上混匀4～15min，14000g离心15min（4℃），弃沉淀，用B radford法或其它蛋白质测定方法测定上清中蛋白浓度以调整上样体积和上样量，进行Western杂交时还需设置内或外参照，通常用beta-actin。 注意：一般上样20~30 μg已足够，如待检蛋白为低丰度蛋白，可加大上样量至100μg，但电泳条带易拖尾，可制备亚细胞组份或采用更敏感的检测方法。 电泳分离（参照SDS-PAGE电泳方法） 转膜 杂交膜的选择是决定Western blot成败的重要环节。应根据杂交方案、被转移蛋白的特性以及分子大小等因素，选择合适材质、孔径和规格的杂交膜。用于Western blot的膜主要有两种：硝酸纤维素膜(NC) 和PVDF膜。NC膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物，在低离子转移缓冲液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起，但在非离子型的去污剂作用下，结合的蛋白还可以被
编号：XN/WI019-ZG-2009 第 1 页共 4 页 生效日期：2009.08 版本/修改:A/0 绝缘耐压测试仪操作规程 1．目的 将一规定交流或直流高压施加在电器带电部分和非带电部分（一般为外壳）之间以检查电器的绝缘材料所能承受耐压能力的试验。 2．范围 新能研发中心实验室 3．责任 实验室设备负责人，负责设备的使用及日常维护与点检并填写设备使用记录。 4、操作流程 4.1将接地端接地。 4.2将黑色测试线接到测试仪的RETURN端并固定紧，把红色测试线插入高压输出端。 4.3确定仪器开关处于OFF状态，接通电源， OK灯全亮表示电源接法正确。 4.4打开仪器开关使处于ON状态，预热15分钟。 4.5设置参数：如果测试的为具有电容性的负载，务必设置电压上升时间，并根据容性负载的大小设置电压上升时间，最大不超过500V/s。 4.6连接待测体：确认无高压输出。先把黑色测试线接到被测体上，然后再把红色高压测试线接到被测体上。 4.7测试：按START键开始测试，测试灯闪烁，液晶屏显示TEST；液晶屏左下角显示测试电压，右下角显示测试电流，右上角为计时器做计时。 4.8合格判定：若测试过程中仪器不报警，测试时间到液晶显示器显示PASS，仪器判定此被测物为良品。 4.9不合格判定：测试过程中，如果测试电流或电阻超出设定范围，测试仪给出报警FALL灯亮并自动切断输出电压。 不良状态表
编号：XN/WI019-ZG-2009 第 2 页共 4 页 4.10测试完确认：测试完不要立即触摸被测试体。确认测试灯不闪烁，显示器测试电压不跳动，没有高压输出。将黑色和红色测试线从绝缘耐压测试仪上取下并短路5分钟，释放被测体上面积累的电荷。 4.11从被测体上取下测试线。 4.12关机：关掉仪器开关使处于OFF状态，拔掉电源线。 5．注意事项 5.1工作台位置要选在一般人员非必经的场所，使非工作人员远离工作台。高压测试时必须标明“危险！正在高压测试，非工作人员请勿靠近”。 5.2耐压测试仪必须有良好的接地，应将后面板上的接地端与大地接触良好。 5.3本耐压测试仪必须有单独的开关，把此开关置于明显位置并标明其功用。一旦有紧急事故发生，可以立即切断电源，以便处理故障。 5.4测试工作区及其周围的空气中不能含有可燃气体，不能在易燃物的旁边使用耐压测试仪，以免引起爆炸和火灾。 5.5测试时，本机必须放在绝缘的工作台上，操作人员的位置不得有跨越待测物去操作耐压测试仪的现象。 5.6操作人员必须带上绝缘手套方可操作，脚下必须垫绝缘垫。 5.7操作人员不可穿有金属装饰的衣服或佩带金属饰物，如手表、手机等。 5.8将黑色测试线接于RETURN端，使用本测试仪时，要检查黑色测试线是否松动或者脱落，确保其固定好。连接被测物时先将黑色测试线接上待测物。 5.9接好RENTURN端测试线后，按下STOP键，确认测试灯没有亮，再将高压输出线插入高压输出端。 5.10测试仪处于测试状态时，测试线、被测物、测试探头和输出端都带有高压，严禁触摸。不要用手触摸测试线上的鳄鱼夹，测试时测试线上带有高压，鳄鱼夹的绝
检测仪使用说明书 一．概述 核酸蛋白检测仪、紫外检测仪是液湘色谱仪中的一种紫外检测装置，核酸蛋白检测仪、紫外检测仪是根据生命科学的发展对于现代色谱仪器的要求而改进设计的一种新型紫外检测仪。该仪器在创新方面的主要特点为： 1.该仪器除配有输出10ｍV记录仪信号外，还配有输出适合计算机积分仪的输口，这 样很方便构成色谱工作站系统。（可同时进行计算机和记录仪信号输出，亦可省去记录仪） 2.该仪器的数字显示设计为固定光吸收，A显示计算机用和可变量程光吸收Ａ显示记 录仪用两种可选模式，这样可方便于规范化读数（特别是可应用于药品生产的GMP 工艺规范化管理），同时亦可根据科研需要进行可变量程的高灵敏度读数，这样可方便于对低浓度样品检测。 3.该仪器采用新型进口IP28光电倍增管和改进型电路结构，使仪器工作更为稳定可 靠。 该仪器配有上层析柱、恒流泵、部分收集器等等，即组成一套完整的液色湘色谱分离分析系统。它可应用于现代生物学研究，药物测定、农业科研、化工、食品及医疗单位对具有紫外吸收的样品作定量分析。本仪器主要元器件均采用进口，仪器全部采用LED数字显示，使用方便。 二．主要技术性能 （１）核酸蛋白检测仪提供波长：254nm、280nm。 （２）紫外检测仪提供波长：220nm、254nm、280nm、340nm。 （３）量程范围：0～100％Ｔ、0～2Ａ、0～1Ａ、0～0.5Ａ、0～0.2Ａ、0～0.1Ａ、0～0.05Ａ。 （４）流式样品池：容积100微升、光程３毫米。 微量样品池：容积30微升、光程10毫米。 （５）记录仪输出：10ｍV （６）积分仪输出：0.1Ａ/ｍV （７）数显模式：固定Ａ量程读数（0～2.0Ａ）；可变Ａ量程读数（0～2.0Ａ、0～1.0Ａ、0～0.5Ａ、0～0.2Ａ、0～0.1Ａ、0～0.05Ａ）。 （８）量程在0.05Ａ档时：噪音≦0.002Ａ。 （９）工作环境温度：0℃～35℃。 （10）仪器可连续工作。 （11）电源：220ＶＡＣ±10％５０ＨＺ。 （12）单体外形尺寸：280×180×158（mm）。 （13）主机重量：5㎏。 三．工作原理 从光源发出的光经狭缝，滤色器聚焦到样品池上，此单色光通过样品池射到光电倍增管的光阴极面上，使光束由于样品浓度不同所引起透光强度的变化转换成光电流变化，此光电流经放大器放大，并输入到对数转换器、使透光率Ｔ转换成光吸收Ａ输出即Ａ=lgＴ/1=ε·ＣＬ式中ε为待测样品的摩尔消光系数，Ｃ为样品浓度，采用摩尔/升单位，Ｌ为光程，用厘米作单位。根据上式只要测出了Ａ、Ｌ和ε就可求出样品浓度Ｃ。若从放大器直接输入到记录仪，则在记录仪上绘出的是样品透光率Ｔ变化的图谱，若从对数转换器输入到记录仪上，在记录仪上绘出的是样品光吸收变化的图谱。 四．仪器结构 核酸蛋白检测仪、紫外检测仪是单光路结构，由紫外检测器、和记录仪部分组成现将其构造分别说明如下： １．紫外检测仪： 它由光源、干涉滤色片、样品池、光电倍增管、放大和对数板、低压板和高压板等组成。面板上有四氟塑料管的进样口和出样口，Ａ调零以及调节“光量”大小旋（光
1.每天开机后需要检测校准；把测试模块两面涂好耦合剂后，放入骨密度仪测试位置，模块突出部放入仪器圆弧槽，有字的面朝上后，准备进行检测校准。 2.检测仪开机后，进入测试界面，然后点击“设置”，再点击右边“开始测试”；“系统检查成功结束”后，再点击“开始测试”，此过程需要重复做3次。 3.“开始测试”3次测完后，点击“主画面”，然后点击“测定”进入界面后，姓名输入：mk和成人的出生年月；然后点击右上角的“开始测试”，界面显示正在测试,当测试成功后取出模块，点击右上角“下一个”查看校准结果，校准值要接近模块的SOS标记值，例如,SOS:1665。 4. 当显示结果SOS值接近标记值，OI值上方显示有黑点，然后点击“主画面”，然后在患者信息里，输入姓名和出生年月、性别以及测试脚的信息后，点击右上角的“开始测试”，根据脚的大小在界面显示区域时选择对应脚垫后，点击右上角的“开始测试”，界面显示正在测试,测试成功后取出脚，点击右上角“下一个”查看测试结果。 5.点击右上角的“打印”显示打印结果，（当连接好的打印机开机时）然后再点击显示界面左上角的“打印机图标”，就会打印出图示的结果。 测试过程中注意事项： 1.耦合剂涂到皮囊测试脚的位置，要均匀适量多；脚慢慢滑入到测试位置，小心不要踩坏或者划破皮囊。 2.脚的大小根据界面图示，垫对应的脚垫。 3.请将第二足趾定位于脚踏板的正中线。 4.将第二足趾与鼻尖、身体中线和膝盖定位于一条直线。 5.将双手轻轻的放到测量足的膝盖上，轻微的倾斜身体，坐稳后开始测试。 6.在测量过程中不要动腿、动脚。 7.请仔细阅读说明书。 请遵循上述详细信息，如不遵守，可能影响结果。
蛋白印迹——Western blot 实验流程及注意事项 各种凝胶电泳方法可以直接了解蛋白的某些性质如迁移率、电荷、大小、丰度以至蛋白的亲疏水性等。此外，特异染色方法可用于识别不同种类的蛋白质。Western blot技术大大扩展了凝胶电泳后识别和鉴定蛋白的可能性。这一技术首先将电泳分离后的蛋白质条带或斑点从凝胶介质转移到固相支持膜上，然后用特异性配体进行检测。特异性抗体和凝集素等已被广泛应用检测印迹膜上的蛋白。印迹技术还常常作为电泳分离后用化学方法（如蛋白氨基端序列分析等）鉴定蛋白的一个重要步骤。 一、聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE或SDS-PAGE） 聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。
PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HCL。分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HCL。电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。 实验步骤 1.配制分离胶5ml（配方见图1）； 2.将液体用1ml移液器加入玻璃板（从玻璃板的边缘加入，速度适中，尽量不 要产生气泡）； 3.用去离子水压胶（利用重力作用把胶压平，否则如果有气泡，胶就不平了， 影响电泳效果。注意上面盖一保鲜膜，防止液体挥发）； 4.大约1第二天一早配制堆积胶）， 5.倒掉玻璃板上面的水并用滤纸吸干，加入堆积胶，并插入梳子； 6.约1小时后堆积胶凝固，把玻璃板转移到电泳装置并加紧（防止漏液）； 7.将电泳装置内加入电泳缓冲液并观察是否漏液； 8.拔掉梳子，用微量注射器冲洗上样孔，加入和上样缓冲buffer混合变性的蛋 白；①蛋白上样量：20-50μg；②上样缓冲液：加入5×SDS 上样缓冲液至终浓度为1×；③上样最大体积：根据梳子孔径和玻璃板的距离而定，一般我们用的上样最大体积在30ul左右；④蛋白变性：上样前要将样品于沸水中煮5-10min 使蛋白变性。可以使用PCR仪进行变性，99℃5分钟，加快速度，这样就不用将水煮沸了，同时在水中煮蛋白样品有下面弊端：a. EP 管容易炸开，样品丢失；b. 容易进水，使样品体积增加，超过电泳最大上样量； 9.在电泳槽中加入电泳缓冲液； 10.恒压80V 30分钟，100V 2小时左右，溴酚蓝跑到底即可（电泳时间可以根 据自己目的蛋白的具体条件设置，一般4～5 h，电压为40V 较好，也可用60V。）；
耐压点检器操作规程(总2 页) 本页仅作为文档页封面，使用时可以删除 This document is for reference only-rar21year.March
中山市惠尔普斯电器有限公司 点检器操作规程 点检仪名称耐压测试仪点检器型号规格输入电压：1500VAC 泄漏电流：5.0mA 环境要求：点检器适用于环境温度为5～35℃和45～95%RH。 使用仪器及工具：耐压测试仪 试验材料：耐压测试仪点检器 图一图二 操作步骤 1、开启耐压测试仪，调节输入电压为AC 1500V，切断电流为5.0mA，测试时间为1～2秒(或设 置“不定时”)。设置好相关数据后按下复位按钮。(建议开机时间超过1分钟后，测试仪处于稳定状态再操作) 2、取出耐压点检器，将其与耐压测试仪连接，耐压测试仪回路端与点检器回路端(GND)连接；耐 压测试仪高压输出端与点检器通过(OK)连接(如图二)。 3、按下耐压测试仪启动按钮后，输入电压显示值为1500V(±5%)，而漏电流显示值应小于切断 电流 5.0mA，这时耐压测试仪显示值小于规定值及绿指示灯亮起或无“嘀嘀”报警声音，此状态为合格。 4、点检测试时间到后自动复位，或手动按下复位按钮进行复位。(操作时间不可超过5秒) 5、耐压测试仪回路端与点检器回路端(GND)连接；耐压测试仪高压输出端与点检器报警(NG)连接 (如图二)。 6、按下耐压测试仪启动按钮后，这时耐压显示值大于规定值且耐压测试仪红指示灯亮起或发出 “嘀嘀”报警声音，此状态为合格。 7、依以上点检时出现的两种状态进行判定此耐压测试仪是否能正常作业。 8、点检出结果并记录于日常点检记录表中。 9、点检测试完毕后，关闭测试仪电源卸下点检器按要求放置于指点地方，并清理测试台面做好 相关6S工作。
实用标准文案 细胞总蛋白的提取 （1）离心后，弃去上清液，将收集的细胞用手指轻弹重悬于剩余的少量上清液中，转移至1.5ml 离心管内，用1×PBS溶液洗涤2次，每次加入1mL PBS溶液，1000r/min，4℃离心5min，弃上层液体。洗涤两次后，将上清液完全去除，用手指轻弹细胞团，使其分散重悬（若不分散，则无法与裂解液充分混匀）。 （2）每管加入细胞团等体积的含蛋白酶抑制剂cocktail的RIPA细胞裂解液；如需检测磷酸化蛋白，则需另加入磷酸酶抑制剂。使细胞裂解液与细胞充分混匀，冰上裂解30min。如暂不提取蛋白，也可在洗涤细胞2次后加入含蛋白酶抑制剂cocktail和磷酸酶抑制剂的1×PBS约100μL，1000r/min，4℃离心5min后，完全弃上层液体，置于-80℃冰箱保存备用。 （3）冰上超声处理细胞，每次超声2s，间隔3s，约10-20次。 （4）13000r/min，4℃离心15min，收集上清溶液至另一干净并预冷的1.5mL离心管中，于-80℃冰箱保存备用。 2. BCA法测定蛋白质浓度 （1）配制工作液 根据标准品及待测样品的个数，按BCA试剂A和试剂B体积比为50:1配制足量BCA工作液，充分混匀，置于常温备用。 （2）配制标准品 取原标准品BSA（2mg/mL）约100μL，取出50μL，用ddH2O按对数法稀释成如下浓度：1mg/mL、0.5mg/mL、0.25 mg/mL、0.125 mg/mL、0.0625 mg/mL；设置96孔板第
一横排第一孔为空白孔，第二横排第一、二孔加入20μL 1×PBS，从第三横排起，精彩文档．实用标准文案 按浓度梯度由低到高依次取20μL标准品至96孔板中，每一浓度做2个平行孔。 （3）稀释待测样品 取5μl待测蛋白样品，用ddH2O稀释到50μL，分别取20μL至96孔板中，每一浓度做2个平行孔； （4）分别加入200μL BCA工作液到蛋白标准品及待测样品中，轻轻混匀，并去掉每孔中的气泡，置于温箱37℃孵育30min。 （5）将96孔板取出后用酶标仪测定OD570nm值。 （6）根据标准品的OD570nm值绘制标准曲线，并根据标准曲线计算得到待测样品的蛋白质浓度。 蛋白质变性 （1）根据预计将要上样的蛋白质样品质量（25μg-50μgμg，是蛋白质而定），取适量体积的蛋白质样品于预冷的EP管中，加入5×SDS上样缓冲液（体积约为蛋白质样品体积的25%），通过调节上样缓冲液的体积将各样品混合液的终体积调节至相仿。用封口膜将离心管封口，7000r/min离心点离样品混合液3s，使其混合均匀。 （2）将放置样品混合液的架子置于盛有适量dd H2O的磁盘中，用电磁炉加温至100℃，煮沸5min。点离样品，使其混合均匀。
文件名称耐压测试仪设备安全操作规程版本第A版文件编号RD-17042601 修订次数第1次编制Candy 审核Paris 批准Jacking 日期2017-05-08 日期2017-05-08 日期2017-05-08 一、目的：避免违章操作，保证安全作业，增加设备使用寿命。 二、范围：实验室测定用耐压测试仪。（0-20KV） 三、权责：技术研发部、品质部。 四、内容： 外形图： 1、操作步骤： 1.1 将被测件放在绝缘垫上。 1.2 用高压测试线与低压测试线将被测件连好。（输出端为高压，回路端为低压） 1.3 将电源开关置于“开”位置，电压电流正常显示。 1.4 设置漏电流值（一般为0.5A），具体操作方式为：按住设置/测试转换开关，调节电流设置旋钮，使电流显示到设定的漏电流值，然后松开开关设置/测试转换开关。 1.5 AC/DC开关设置电压种类，AC为交流测试，DC为直流测试。 1.6 设置时控开关。 1.7 调节所需时间（一般为20S）。 1.8 将电压调节旋钮逆时针方向调节到零位。 1.9 将开关启动，测试指示灯亮。 1.10 将电压调节旋钮慢慢逆时针调节，直至报警灯亮，记录实测电压值。
1.11 在高压测试状态若被测件的漏电流超过设定的电流值时，仪器自动切断高压，并发出报警信号。 1.12 按一下复原开关，在任何升压过程中和测试过程中的高压被切断。 1.13 不工作时请关闭电源。 补充：客户特定要求的测试方法 1 取样150mm长的套管 2 找出同等内径的芯棒 3 剪一小节锡纸对折后，再包扎套管穿入芯棒内，用夹子夹住芯棒前端 4 打开电源开关，漏电值设置在0.5MA，时间60秒，电压设置在客户特定的范围内（具体按照生产单为标准，如生产单要求2.5kv，则耐压仪的电压必须要设置≥2. 5 kv），此时察看耐压仪有无发出击穿的声音，如无击穿则为耐压OK。 2、流程图 3、注意事项： 3.1 仪器接地必须可靠，接地线线径要粗一些，并且经常检查不使脱落。 3.2 操作者必须踏在适当的绝缘垫上和戴适当的绝缘手套。 3.3 经常清洁仪器各部份并保持环境整洁。 3.4 仪器周围尽量减少导电体及易被击穿的物件。 3.5 严格执行操作规程，集中注意力，不得嬉闹和闲谈。 3.6 仪器的各部份应放在绝缘垫上。 3.7 有任何意外情况及时切断电源。 3.8 建议操作人员不少于二人。 3.9 熟悉仪器的使用方法后再正式进入正常工作，在熟悉过程中调节电压设置在较低的值。
蛋白质印迹分析实验原理与操作步骤 蛋白质印迹法又称为免疫印迹法,这就是一种可以检测固定在固相载体上蛋白质得免疫化学技术方法。待测蛋白既可以就是粗提物也可以经过一定得分离与纯化,另外这项技术得应用需要利用待测蛋白得单克隆或 多克隆抗体进行识别。 关键词:印迹蛋白质步骤蛋白质印迹分析蛋白质印迹Westernｂlottinｇimmunoblotｔiｎg免疫印迹法蛋白质 印迹法 【实验原理】 蛋白质印迹法又称为免疫印迹法,这就是一种可以检测固定在固相载体上蛋白质得免疫化学技术方法。待测蛋白既可以就是粗提物也可以经过一定得分离与纯化,另外这项技术得应用需要利用待测蛋白得单克隆或多克隆抗体进行识别。
如图所示,可溶性抗原,也就就是待测蛋白首先要根据其性质,如分子量,分子大小,电荷以及其等电点等采用不同得电泳方法进行分离;通过电流将凝胶中得蛋白质转移到聚偏二氟乙烯膜上;利用抗体(一抗)与抗原发生特异性结合得原理,以抗体作为探针钓取目得蛋白。值得注意得就是在加入一抗前应首先加入非特异性蛋白,如牛血清白蛋白对膜进行“封阻”而防止抗体与膜得非特异性结合。 经电泳分离后得蛋白往往需再利用电泳方法将蛋白质转移到固相载体上,我们把这个过程称为电泳印迹。常用得两种电转移方法分别为: １。半干法: 凝胶与固相载体被夹在用缓冲溶液浸湿得滤纸之间,通电时间为1０分钟~３０分钟。 2.湿法:凝胶与固相载体夹心浸放在转移缓冲溶液中,转移时间可从45分钟延长到过夜进行、由于湿法得使用弹性更大并且没有明显浪费更多得时间与原料,因此我们在这里只描述湿法得基本操作过程。 对于目得蛋白得识别需要采用能够识别一抗得第二抗体。该抗体往往就是购买得成品,已经被结合或标记了特定得试剂,如辣根过氧化物酶。这种标记就是利用辣根过氧化物酶所催化得一个比色反应,该反应得产物有特定得颜色且固定在固相载体上,容易鉴别。因此可通过对二抗得识别而识别一抗,进而判断出目标蛋白所在得位置。其她得识别系统包括碱性磷酸酶系统与125I标记系统、 1。实验器材 ＳDＳ／PAGE实验相关材料;电转移装置;供电设备;PＶDＦ膜(Millipore Imｍoｂion－Ｐ# IPVH0０010);Ｗhａtmａn 3MM 纸;其她工具:镊子、海绵垫、剪子、手套、小塑料或玻璃容器、浅盘。
交流耐压测试仪操作规程 1.目的： 规范交流耐压测试仪的操作 2.范围 适用于交流耐压测试仪操作人员 3.规程 1..功能介绍： 1.1 预置功能 测试仪具有预置功能——可预置交流耐压或绝缘电阻输出电压、测试电流上限/下限、绝缘电阻上限/下限、测试时间、输出电压频率等参数，并记忆预置参数。 1.2测试时间控制功能 测试仪具有测试时间控制功能，可根据测试要求，选择定时测试或连续测试方式。 1.3报警功能 测试仪具有超限报警功能——可在测试超出报警预置值时自动停止输出，并发出声光报警信号。 1.4自动保护功能 测试仪具有自动保护功能——可在仪器非正常工作状态（输出过载和短路等）时自动停止输出，并发出声光报警信号。 1.5量程切换功能 测试仪具有量程切换功能——可全自动进行合适的测试量程切换。 1.6电压缓升功能 测试仪具有量程切换功能——可设置电压缓升时间。 1.7测线漏电流归零功能
测试仪具有测线漏电流归零功能——可手动补偿因测试线路引起的漏电流零点漂移。 1.8遥控功能 遥控接口为标准DB-9型接口：提供启动、停止信号输入；测试通过、测试失败、测试中输出。 1.9通信功能 测试仪能够将测试结果通过RS-232或RS-485通信接口上传到上位机。 2.前面板说明 2.1电源开关（电源）：仪器上电开关。 2.2艾诺公司Ainuo标识。 2.3停止键（停止）：在测试状态下按此键，将暂停测试。除测试态外的其他状态时按此键， 将完全停止一次测试，返回待机状态。 2.4启动键（启动）：在待机状态下按此键启动一次测试。 图3.3.1 AN9602X前面板示意图 2.5VFD显示屏。 2.6测试中指示灯：橙色。灯亮，表示测试过程中。 2.7合格指示灯：绿色，灯亮，表示测试结果合格。 2.8报警指示灯：红色，灯亮，表示测试结果不合格。
耐压测试仪操作规程 IMB standardization office【IMB 5AB- IMBK 08- IMB 2C】
耐压测试仪操作规程 1 目的 为了保证测试仪器的正常使用和使用者的安全，以及被测试产品是否符合规定的要求，特制订本操作规范。 2 范围 本公司使用的耐压测试仪. 3 使用方法： 1．插好220V，50Hz电源，将高压输出线和输出低端线分别与仪器的高、低两输出端接好，并将两输出线端头悬空放好； 2．根据实验要求设置击穿电流：按下“电源开关”→按下“报警电流设定”按钮，旋转电流调节旋钮，使电流显示值为试验所需报警值，设定完毕，释放“报警电流设定”按钮； 3．根据试验要求设定试验时间：按下“定时/连续”开关到“定时”档，拨动拨码上的数字，调节试验所需时间值；设置完毕，释放“定时/连续”开关到“连续”档； 4．根据试验要求设置试验电压：先将调压器旋钮逆时针旋到零位，按下“启动”按钮，“高压”指示灯亮，顺时针旋转调压器旋钮，直至高压显示仪表指示到所需电压； 5．按下“复位”按钮，切断试验电源，然后将高压输出试验夹高端接于试品的带电部分，输出低端试验夹接于试品的绝缘部分。 6．按下“定时/连续”开关到“定时”档→按下“启动”按钮，此时高压加到试品上，电流表显示击穿电流值，待计时完成后，如果试品合格，则自动复位；如果试品不
合格，则高压自动切断，并声光报警；按下“复位”按钮，声光报警消除，恢复待试验状态。 7．试验完毕后，切断电源，整理仪器。 4 注意事项： 1. 本岗位作业人员须熟悉该设备各项性能及操作要求，非本岗位人员严禁操作，操作者脚下垫绝缘橡皮垫，戴绝缘手套，以防高压电击造成生命危险。 2. 仪器必须可靠接地，在连接被测机器时，必须保证高压输出“0”及在“复位”状态 3. 测试时，仪器接地端与被测体要可靠相接，严禁开路； 4. 切勿将输出地线与交流电源线短路，以免外壳带有高压，造成危险； 5. 尽可能避免高压输出端与地线短路，以防发生意外； 6. 测试灯、超漏灯、一旦损坏，必须立即更换，以防造成误判； 7. 仪器避免阳光直射，不要在高温潮湿多尘的环境中使用或存放.
Eppendorf 蛋白质核酸自动分析仪操作说明与注意事项 操作说明： 准备：开始测定前只需开启仪器背后的电源开关即可开始测定。 一、核酸浓度测定（包括dsDNA、ssDNA、RNA、Oligo） 1. 例如待测定样品为dsDNA（eg：PCR产物），按下键“7 / dsDNA” （若待测样品为ssDNA，eg：反转录合成的第一链cDNA产物，则相应按下键“8 / ssDN A 若待测样品为RNA，则按下键“9 / RNA”； 若待测样品为Oligo（寡聚核苷酸），eg：PCR引物，则相应按下键“6 / Oligo”。） 2. 若测定样品需要稀释后测定，则需先设定样品的稀释度： （1）按下键“Dilution”； （2）输入样品体积和稀释液体积，按Enter键确认。 将空白对照置入样品孔。注意：空白对照是空白液，并非所有情况都是水。（例如用Tris 溶液溶解DNA制品，则要用Tris液做空白对照。） 3. 按下键“Blank”； 4. 仪器记录空白对照，设置为0.000A；(先不取出对照，按下Sample，看是否调零成功，若成功则可开始测样品) 5. 将第一个样品置入样品孔； 6. 按下“Sample”； 7. 仪器显示第一个样品的相关参数（记下样品浓度，OD260，OD280，OD260/OD280） 8. 直接放入第二个样品； 9. 按下“Sample”； 10. 仪器显示第二个样品的吸光度值和浓度值，以及其他相关参考比值； 11. 依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果的方法如下：（1）按下键“./ Function” （2）选择“DISPLAY-RESULT”,按Enter键，查看每个样品的测定值记录（本机可存储100个样品的测定值）。 二、OD600 细菌生长密度测定 1. 按下键“5 /OD 600”； 2. 将空白对照置入样品孔； 3. 按下键“Blank”； 4. 仪器记录空白对照，设置为0.000A； 5. 将第一个样品置入样品孔； 6. 按下“Sample”； 7. 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值； 8. 依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果。 三、蛋白质浓度的直接测定（280nm测定） 1. 按下键“4 / Protein”； 2. 将空白对照置入样品孔； 3. 按下键“Blank”；
SmartSpec? Plus 核酸蛋白测定仪 中文操作指南 （本指南仅供参考，以英文说明书为准）
第一章仪器介绍 SmartSpec Plus 核酸蛋白测定仪比其它许多台式分光光度仪拥有更完善的特点和功能，其性能优越，运行稳定，功能强大。 特别适用于生命科学研究 SmartSpec Plus工作波长在200-800nm，是核酸和蛋白样品常规定量的完美工具。 SmartSpec Plus可用于 ●DNA，RNA 和寡核苷酸的定量 ●用Bradford，Lowry和BCA检测法定量蛋白 ●监控细胞的生长状况 ●简易的动力学分析 ●波长扫描和峰检测 更简单的样品分析 SmartSpec Plus 的设计充分考虑了用户的需求。简易的菜单式界面简化了测试过程，只需触摸一下按键就可以提供常用样品的计算结果。转换因子可以储存和修改。SmartSpec Plus能提供以下计算结果，如： ●显示核酸纯度的A260/A280比率 ●定量分析（考虑稀释因子） ●μg/ml样品浓度（寡核苷酸pmol/μl） ●寡核苷酸的摩尔消光系数和分子量 在测试结束时，打印显示使用者，日期和结果的报告 核酸定量 SmartSpec Plus能满足定量PCR产物、核酸制备或细胞转染样品的定量检测要求。选择定量dsDNA、ssDNA或RNA，并从预设的转换因子中选择或输入一个最适合代测样品的数值。SmartSpec Plus能提供吸收值、浓度和纯度值，确保下游工作的顺利进展。 SmartSpec Plus简化了DNA、RNA寡核苷酸的定量过程。当你输入序列、长度或组成时，SmartSpec Plus会以μg/ml或pmol/μl为单位显示出样品浓度，并计算摩尔消光系数和分子量。 蛋白定量 SmartSpec Plus安装了Bradford，Lowry和BCA蛋白定量检测方法的预编程序，每个检测方法都具有其独特的特性，方便数据收集及对测试
蛋白质印迹（Western blot）实验方案 溶液和试剂 裂解缓冲液 这些缓冲液可在 4 ℃下保存数周，或者以分装形式在 -20 ℃下保存长达 1 年。Nonidet-P40 (NP40) 缓冲液 150 mM NaCl 1.0% NP40（可用 0.1% Triton X-100 替代） 50 mM Tris-HCl pH 8.0 蛋白酶抑制剂 RIPA 缓冲液（放射免疫沉淀试验缓冲液） 150 mM NaCl 1.0% NP-40 或0.1% Triton X-100 0.5% 脱氧胆酸钠 0.1% SDS（十二烷基硫酸钠） 50 mM Tris-HCl pH 8.0 蛋白酶抑制剂 Tris-HCl 缓冲液 20 mM Tris-HCl pH 7.5 蛋白酶抑制剂 电泳、转膜、封闭缓冲液 Laemmli 2×缓冲液/上样缓冲液 4% SDS 10% 2-巯基乙醇 20% 甘油 0.004% 溴酚蓝 0.125 M Tris-HCl 测定 pH 并调节至 pH 6.8。 电泳缓冲液（Tris-甘氨酸/SDS） 25 mM Tris 碱 190 mM 甘氨酸 0.1% SDS 测定 pH，pH 应为约8.3。必要时进行调节。 转膜缓冲液（湿转） 25 mM Tris 碱 190 mM 甘氨酸 20% 甲醇 测定 pH，pH 应为约8.3。必要时进行调节。 对于大于 80 kDa 的蛋白质，我们推荐加入最终浓度为 0.1% 的 SDS。 转膜缓冲液（半干转）
48 mM Tris 39 mM 甘氨酸 20% 甲醇 0.04% SDS 封闭缓冲液 5% 奶粉或 BSA（牛血清白蛋白） 加入 TBST 缓冲液中。混匀并过滤。过滤失败可能导致出现“斑点”，其中微小的黑色颗粒会在显色过程中污染印迹。 实验步骤 样品裂解 1. 制备细胞培养物裂解物 .将细胞培养皿置于冰上，用冰冷的 PBS 洗涤细胞。 .吸出 PBS，然后加入冰冷的裂解缓冲液（每 107 细胞/100 mm 培养皿/150 cm2培养瓶加入 1 ml；每 5×106细胞/60 mm 培养皿/75 cm2培养瓶加入 0.5 ml）。 .用预冷的塑料细胞刮棒刮下贴壁细胞，然后轻轻地将细胞悬浮液转移至预冷的微量离心管中。 .在4 ℃下持续搅拌 30 分钟。 .在4 ℃预冷的离心机中以16,000 × g 的转速离心20 分钟。 .轻轻地从离心机中取出离心管，置于冰上。将上清液转移至放置在冰上的新离心管中，弃去沉淀。 2. 制备组织裂解物 .用干净的工具切取目标组织，此操作最好在冰上进行，并且应尽快完成，以防止样品被蛋白酶降解。 .将组织置于圆底微量离心管或Eppendorf 管中，并浸入液氮中进行“速冻”。将样品保存在-80 ℃下以备后续使用，或放置在冰上直接进行匀浆。对于约5 mg 的 组织，向离心管中快速加入约300 μL 裂解缓冲液，然后用电动匀浆器进行匀浆， 用另外300 μL 裂解缓冲液冲洗刀片两次，然后在4 ℃下持续搅拌（例如，在回 旋振荡器上）2 小时。 . 4 ℃下在微型离心机中以16,000 × g 离心20 分钟。轻轻地从离心机中取出离心管，置于冰上。将上清液转移至放置在冰上的新离心管中。弃去沉淀。 样品制备 .取出小部分(50 μL) 裂解物，用于蛋白分析。确定每种细胞裂解物的蛋白浓度。.向剩余体积的细胞裂解物中加入等体积的2× Laemmli 样品缓冲液。我们推荐采用以下方法来还原样品和使样品变性，除非在线抗体数据表指明应使用非还原和非变性条件。