食药用菌液体菌球生产标准
编写刘随记
二零一四年六月二十六日
目录
一、封面---------------------------------------------------------------1
二、目录---------------------------------------------------------------2
三、标准范围---------------------------------------------------------3
四、本标准所引用的规范性文件和文献------------------------3
五、关键专业术语和定义------------------------------------------3
六、液体菌球生产技术要求---------------------------------------6
七、基本生产设施和设备------------------------------------------7
八、液体菌球生产工艺流程图------------------------------------8
九、液体菌球生产技术工艺要求---------------------------------8
食药用菌液体菌球生产标准
一、范围
本标准规定了食药用菌菌球生产厂房、各种设施、设备、品种、工艺流程、技术要求、保藏运输。本标准适用于食药用菌液体菌球的生产。
二、本标准所引用的规范性文件和文献
2.1 GB/T4789.28-2003 食品卫生微生物学检验—染色法、培养基和试剂
2.2 GB5749-2006 生活饮用水卫生标准
2.3 GB/T 5009.98-2003 食品容器及包装材料用不饱和聚酯树脂及其玻璃钢制品卫生标准分析方法
2.4GB50073-2001 洁净厂房设计规范
2.5 GB/T 29859-2013 生物信息专业术语
2.6 GB150-1998 钢制压力容器
2.7NY/T 883-2004 家用微生物菌剂生产技术规程
2.8DB21/T 1693—2008 食用菌液体菌种生产技术规程
三、关键专业术语和定义
下列专业术语和定义适用于本标准。
3.1移动式液体培养器mobile cultivation apparatus for edible fungus liquid
spawn
指在液体菌球养器上安装了可移动的装置，培养器工作时能整体移动，而移动中又不影响培养器的性能。
3.2液体菌球接种器材edible fungus-liquid interface trap inoculator
指能将菌种从培养器中按无菌操作要求转接到液体菌球液体上的设备。
3.3 接种量inoculation amount
指接入培养器中的菌种的数量，以菌种体积与培养基体积的百分比标示。3.4 液体菌种菌龄period of liquid spawn running
指菌种接入培养基开始计算的液体菌球生长发育时间。
3.5 培养器空消empty fermenter cultivation apparatus
指对用外源蒸汽灭菌，尚未加水投料的空培养器进行高压蒸汽灭菌。
3.6 培养器实消full fermenter cultivation apparatus
指对投料后的培养器进行高压蒸汽灭菌。
3.7 投料feeding
指将配置好的培养液投放到培养器中。
3.8 定容constant volume
指培养器中加入培养液后，加水至所要求体积。
3.9摇瓶液体菌种liquid spawn in shake pot
指装在玻璃三角瓶内在摇床上恒温振荡培养的液体菌种。
3.10 起始pH initial pH value
指液体培养基配置后尚未接种时的pH值。
3.11 镜检microscopic examination
指通过显微镜观察食药菌液体菌球生长发育和有无杂菌污染的过程。
3.12 外源蒸汽灭菌exogenous steam sterilization
指用锅炉蒸汽给培养器灭菌的方法。
3.13 固体专用菌种瓶solid special strain combination
指将检验合格的固体专用种按无菌操作要求，转移至装有无菌水的大三角瓶
中，充分搅拌呈均匀的液态菌种的过程。
3.14 死角dead angle
指培养器蒸汽灭菌时未能达到彻底灭菌的地方。
3.16 恒温培养摇床thermostatic culture cradle
指具有不锈钢万用夹具、数显控温、无级调速和良好的热循环功能，是一种多用途的生化器，适用于菌种各种液态菌球振荡培养。
3.17 回旋式振荡器cyclotron oscillator
指具有外形大方，容量大，噪音低，重量轻，体积小等特点，速度可调，并带有定时装置。
3.18生物接种箱biological inoculation box
指有各种形状和规格，只要操作方便，能达到无菌状态的机器设备。
3.19超净工作台clean bench
指一种智能化控制操作区高洁净度工作环境的空气净化设备。
3.20高压杀菌器autoclave
指用比常压高的压力，把水的沸点升至100℃以上的高温，而进行液体或器具灭菌的一种高压容器。
3.21试管test tube
指用作于少量试剂的反应容器，在常温或加热时使用。
3.22显微镜microscope
指主要用于放大微小物体成为人的肉眼所能看到的仪器。
3.23恒温培养箱constant incubator
指作细菌培养、育种、发酵及其他恒温试验用的机器设备。
3.24生物培养箱biology incubator
指具有制冷和加热双向调温系统温度可控的功能的机器设备。
3.25菌种culture
指用于发酵过程作为活细胞催化剂的微生物。
四、液体菌球生产技术要求
4. 技术人员
4.1 食药用液体菌球生产应有与液体菌球生产所需的专业技术人员。
4.2工作人员卫生要求
4.2.1 生产操作人员应该保持良好的个人卫生，勤洗澡、勤换衣、勤理发、不保留长指甲。
4.2.2 进入生产车间必须穿戴经灭菌的工作服、口罩、鞋、帽。
4.2.3严禁在生产车间内吸烟，随地吐痰和乱扔杂物。
4.3 食药用菌液体菌球生产车间设计达到NY/T528-2002标准要求。
4.3.1食药用菌液体菌车间必须建在交通、水源和电源方便，无有害气体、烟雾，远离垃圾场和畜禽场舍的地方。
4.3.2 生产车间地面应具备防水、防腐蚀、防渗漏、防滑、易清洗，有适当的排水坡度（1.0%~1.5%）和良好的排水设施。
4.3.3生产车间墙壁和顶部应能防潮、防霉、防水、易清洗。
4.3.4 生产车间门窗应设置有防各种蚊虫的纱网。
4.3.5生产车间入口处应设置洗手、消毒和干手设施。
4.3.6 生产车间要安装排风设备。
4.3.7生产车间必须设置缓冲间。
4.3.8 生产车间应设置与职工人数相适应的更衣室、浴室、厕所。
4.3.9 生产车间应设置封闭式废弃物专用桶。
五、基本生产设施和设备
5.1培养摇床、回旋振荡器、生物接种箱、生物培养箱、电子天平、、酸度仪、空气压缩机、液体菌种接种器材、高压蒸汽灭菌锅、蒸汽锅炉、净化工作台、恒温摇床、恒温培养箱、冰箱、显微镜、磅秤、天平、自备电源（发电机）。培养器、高压灭菌锅和蒸汽锅炉应使用政府有关部门检验合格，符合国家压力容器标准的产品。
5.2 生产用具
玻璃三角瓶、接种器材、试管、量杯量瓶、玻璃漏斗、菌浆瓶、药棉、定量定性滤纸、精度pH试纸等。
5.3 基本操作车间设施
配料间、杀菌间、冷却间、接种间、培养间、化验室、菌种保藏室的基础设施要配套，布局合理，要有最基本温控设施。
5.4 培养原料
符合WS／T232-2002商业性微生物培养基质量检验规程。
5.5 化学试剂类
符合NY/Y528-2002食药用菌菌种生产技术规程要求。
5.6 生物制剂和天然材料类
符合NY/Y528-2002食药用菌菌种生产技术规程要求。
5.7 生产品种
符合NY/Y528-2002食药用菌菌种生产技术规程要求和GB/T12728-2006食用
菌术语相关规定。应使用经省和国家级以上农作物品种审定委员会登记的食药用菌品种。
六、液体菌球生产工艺流程图
七、液体菌球生产技术工艺要求
(一)、菌浆菌种的培养
7.1.1 菌浆菌种专用瓶
使用玻璃植被瓶和棉塞，植被瓶250 ml，棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。
7.1.2菌浆菌种培养基
一般使用马铃薯葡萄糖琼脂通用培养基。
7.1.3 分装
菌种培养基的分装量为50 ml。
7.1.4灭菌
菌浆菌种培养基分装后应立即灭菌。0.11Mpa~0.14 Mpa，30min。灭菌完毕后，应自然降压，不应强制降压。灭菌时应防止棉塞被冷凝水打湿。
7.1.5 灭菌效果的检查
灭菌后的培养基置于28℃恒温培养48h后检查，并经显微镜镜检确定无微生物长出为灭菌合格。
7.1.6 接种
在无菌条件下用接种器材将菌种移植在菌浆菌种培养基上。
7.1.7 超净工作台消毒处理方法
先用75%酒精或新洁尔灭溶液进行菌种培养基外部表面擦拭消毒，然后开紫外灯灭菌30min。
7.1.8 无菌接种操作
超净工作台上要严格按无菌操作要求接种。将引进或购买的食药用菌菌种接种到培养基上，然后再把培养基和菌种用专用的工具搅拌成0.3㎝颗粒状。接种完毕后及时贴好标签。
7.1.9 超净工作台接种后的处理
每次使用后，要及时清理清洁，排出废气，清除废物，台面要用75%酒精或新洁尔灭溶液擦拭消毒，然后开紫外灯灭菌30min。
7.1.10 培养室消毒处理
在使用培养室的前两天，要使用二氧化氯烟雾剂熏蒸消毒处理。
7.1.11 培养室条件要求
培养温度（18℃~28℃），培养时间25—40d,保持空气相对湿度在65%~75%，注意避光。
7.1.12 培养期间的检查
培养期间应定期检查，及时挑出不合格菌种。
7.1.13入库
完成培养的菌浆菌种及时登记入库。
7.1.14 记录
生产各环节应详细记录。
7.1.15 留样
留样的数量应以每个品种3支~5支，于4℃下贮存。
（二）液体菌球菌种培养
7.2 液体菌球培养基配方
7.2.1.1配方1：马铃薯、葡萄糖、麦麸、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1聚氧丙稀甘油、pH值自然；
7.2.1.2配方2：马铃薯、葡萄糖、麦麸、苹果汁、维生素B1、pH值自然；7.2.1.3配方3：甘薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、pH值自然；
7.2.1.3配方4：大米浸出液、葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、pH值自然
7.2.2 原材料符合NY/T528-2002标准要求。
具体配方根据生产品种的营养需求，用水符合GB5749-2006，生活饮用水卫生标准。
7.2.3起始pH值
培养基调节起始pH6.5~6.8。
7.2.4 投料与定容
将熬制好的液体培养液分别装入1000ml的三角瓶内，装入量为300ml,塞上特制的棉塞，用牛皮纸把棉塞包住以免受潮。
7.2.5 培养基灭菌
灭菌器内蒸汽压力达到0.105 Mpa ~0.125Mpa，培养基温度达到温度121℃~124℃，保持时间40min，防止灭菌死角。
7.2.6 冷却降温
灭菌结束使培养基自然降温至常温。
7.2.7接种
把灭菌后的液体培养基、菌桨菌种、所有的接种用具放入超净工作台内用臭氧和紫外线分别消毒30分钟，然后迅速将菌种移入到液体培养基中并塞紧棉塞，接种完毕，液体菌种进入培养阶段。
7.2.8 培养温度
接种后的液体菌球菌种要放在旋转式振荡器上进行培养，培养温度18~25℃。
7.2.9 培养时间
液体菌球菌种的培养时间要以品种而定，担子菌5—7天，子囊菌35－45天。
7.3 留样与检测
7.3.1 留样
将培养的液体菌球菌种2%取出放在4℃生化培养箱，进行留样保存。
7.3.2无菌检测
对留存的液体菌球菌种样品应在无菌PDA平板上划线培养，在25~28℃恒温培
养2d~5d，若划痕上没有细菌、霉菌、酵母菌菌落生长，则表明该样品无杂菌。对留样样品应在取样后及时镜检，确定菌球生长发育状态和有无杂菌污染。7.3.3 pH值
采用酸度计测定，应在规定范围之内。
7.3.4 菌液湿重
采用Φ15cm的定量滤纸，将100ml液体菌液，过滤至无水水滴滴下，称重后减去滤纸湿重。
7.3.5 镜检
采用显微镜，低倍、高倍、油镜，观擦菌丝生长状况和有无杂菌污染。
7.3.6 测试液体菌种感官指标
表1 液体菌种感官指标
7.3.7 液体菌种理化检测指标
表2 理化指标
7.3.8记录与存档
液体菌球菌种生产的每个环节都要有详细的生产记录，并由主管领导审核，签字后归档保存。
7.4贮存运输
在２℃~４℃的冰箱中可保存3０d。
（三）液体菌球的培养
8造粒液体菌球培养液配方
8.1.1配方1：马铃薯、玉米粉、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1、聚氧丙稀甘油、pH值自然；
8.1.2配方2：麦麸、葡萄糖、麦麸、苹果汁、维生素B1、pH值自然；
8.1.3配方3：鲜苹果、葡萄糖、磷酸二氢钾、酵母膏、pH值自然；
8.1.4配方4：大米、玉米粉、葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、pH值自然。
8.2 原材料符合NY/T528-2002标准要求。
具体配方根据生产品种的营养需求，用水符合GB5749-2006，生活饮用水卫生标准。
8.2.1 起始pH值
培养基调节起始pH5.5~7.5。
8.2.2 投料与定容
将熬制好的液体培养液分别装入1000ml的三角瓶内，装入量为６00ml,塞上特制的棉塞，用牛皮纸把棉塞包住以免受潮。
8.2.3培养基灭菌
灭菌器内蒸汽压力达到0.105 Mpa ~0.125Mpa，培养液温度达到温度121℃~124℃，保持时间３0min，防止灭菌死角。
8.2.4 冷却降温
灭菌结束后使培养液自然降温至常温。
8.2.5接种
把灭菌后的培养液及所有的接种用具放入超净工作台内用臭氧和紫外线分别消毒30分钟，然后迅速将菌球菌种移入到液体培养液中并塞紧棉塞，接种完毕后，菌球液体进入培养阶段。
8.2.6接种量
一级造粒每瓶接入量为１５ｍｌ，二级造粒每瓶接入量５ｍｌ，菌球培养接入量２５ｍｌ。
8.2.7培养温度
接种后的菌球菌液要放在摇床上进行培养，培养温度18~25℃。
8.2.8培养时间
液体菌球的培养时间为，一级造粒７天，二级造粒５天，菌球培养８－１０天。
8.3留样与检测
8.3.1留样
将培养的液体菌球2%取出放在２℃生化培养箱，进行留样保存。
8.3.2无菌检测
对留存的液体菌球样品应在无菌PDA平板上划线培养，在１８~２３℃恒温培养2d~5d，若划痕上没有细菌、霉菌、酵母菌菌落生长，则表明该样品无杂菌。对留样样品应在取样后及时镜检，确定菌丝生长发育状态和有无杂菌污染。
8.3.3 pH值
采用酸度计测定，应在3.9―6.5之内。
8.3.4 菌液湿重
采用Φ15cm的定量滤纸，将100ml液体菌球，过滤至无水水滴滴下，称重后减去滤纸湿重。
8.3.5 镜检
采用显微镜，低倍、高倍、油镜，观察菌球生长状况和有无杂菌污染。
8.3.6 测试液体菌球感官指标
表1 液体菌球感官指标
8.3.7 液体菌球理化检测指标
表2 理化指标
8.4记录与存档
液体菌球生产的每个环节都要有详细的生产记录，并由主管领导审核，签字后归档保存。
8.5贮存运输
在２℃~４℃的冰箱中可保存９０d。
本文来源：菇讯网https://www.doczj.com/doc/348338811.html,/
官方论坛：菇讯论坛https://www.doczj.com/doc/348338811.html,/