实验八 四体、放线菌、真菌（小培养） 一、绘图：青霉、曲霉
【青霉绘图】
1.形态特征：菌丝体由多数具有横
隔的菌丝所组成，通常以产生分生
孢子进行繁殖，产生孢子时，菌丝
体顶端产生多细胞的分生孢子梗，
梗的顶端分枝2—3次，每枝的末端
细胞分裂成串的分生孢子，形成扫
帚状。
2.繁殖：分生孢子
3.应用：抗生素
【曲霉绘图】
1.形态特征：菌丝有膈，具足细胞、分生
孢子梗及膨大顶囊
2.繁殖：分生孢子
3.应用：酿造酒、酱，有机酸及多种酶
制剂的生产
二、真菌小培养方法
【原理】
采用真菌培养板或载玻片进行小室培养，主要用来观察丝状真菌的孢子，孢子丝及其子实体的结构（如分生孢子头），常用于真菌的鉴定。【具体步骤】
1.滴加培养基：将已灭菌的沙保培养基斜面用酒精灯溶化后，冷却至50度左右（比较烫手而还可以把持），用吸管在无菌玻片（放到灭菌平板内）上滴加2-3滴培养基。
2.加盖盖玻片：取无菌盖玻片在火焰上加热后迅速放到琼脂块上，轻压一下盖玻片使其铺平。
3.接种真菌：用接种针沾取少量青霉或曲霉的孢子，从琼脂块边缘刺入琼脂块中。
4.观察结果：加浸水的无菌的滤纸放到平板中，盖上皿盖，25-28度培养3天后，将载玻片放到显微镜下，用低倍镜（10倍）和高倍镜（40倍）观察青霉和曲霉的分生孢子头结构。（具体图片见前文）
三、镀银染色方法和绘图
1.材料
(1)标本：牙扼。
(2)试剂：键银染色液,生理盐水。
(3)器材:灭菌牙签，载玻片。
2.方法
(1)涂片：在载玻片中央加1滴生理盐水，用牙签挑取少量牙垢与盐水混匀涂片。
(2)固定：不要火焰固定，待涂片自然干燥后，加数滴固定液覆盖涂片1-2分钟，水洗。
(3)媒染:滴加数滴媒染液覆盖涂膜，火焰上微微加热至微冒蒸汽(切勿烧干)，30秒后水洗。
(4)染色：加硝酸银染液，微微加热(切勿烧干)，约30秒后水洗，印干后油镜观察。
3.结果 奋森螺旋体是口腔正常微生物群中的成员之一，牙坂经镀银染色后，在油镜下可见染成棕揭色的奋森螺旋体，体态较细而柔软，有数个不规则弯曲。
【绘图】 1.革兰染色阴性
2.染成红色
四、印片法
(1)材料：链霉菌高氏一号琼脂平板培养物，亚甲蓝染液，盖玻片，载玻片，小摄子。
(2)方法：用小摄子夹一片洁净盖玻片过火焰使之微热，然后放在平板链霉菌菌落表面，轻轻按压，盖玻片上即可印上放线菌的抱子和抱子丝。取一块洁净载玻片，在中央滴加1滴亚甲蓝染液，将盖玻片印有抱子的一面朝下，平置于亚甲蓝染液上，盖玻片上的孢子及孢子丝即可染成蓝色。
【绘图】
链霉菌显微镜下绘图
实验二酵母菌的死活染色及放线菌的形态观察 赵奕玲 121180169 一．实验目的 1.观察酵母菌的形态及出芽生殖。 2掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法。 3.掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征。 二．实验原理 1.酵母菌形态及出芽方式观察的基本原理：酵母菌的死活染色通过用美蓝染色制成水浸片，来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。 2.酵母菌子囊孢子观察的基本原理：子囊类酵母菌是以接合产生形成子囊和子囊孢子的方式进行有性繁殖的。它们一般通过邻近的两个形态相同而性别不同的细胞各自伸出一根管状的原生质突起相互接触、局部融合并形成一条通道，再通过质、核配和减数分裂形成4或8个子核，然后它们各自与周围的原生质结合在一起，再在其表面形成一层孢子壁，这些一个个子囊孢子就成熟了，而原有的营养细胞则成了子囊。能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需一定条件，其中麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。 孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。 3.放线菌形态观察的基本原理：放线菌在固体培养基上呈辐射状生长而得名。放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基表面的气生菌丝。有些气生菌丝分化成各种孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆形或杆形。气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类的重要依据。
真菌学实验报告 一.实验目的： 1.1了解真菌形态的基本特征。 1.2掌握丝状真菌制片方法。 1.3掌握内生真菌的分离方法 1.4掌握真菌的鉴定方法。 二.前言： 真菌广泛分布于地球表面,从高山、湖泊到田野、森林，从海洋、高空到赤道、两极，到处都有真菌。真菌虽然不在空气中生长繁殖，但它的孢子却成群的漂浮在天空，只要稍微注意你会发现人类原来生活在真菌的汪洋大海中。 当今世界，生物技术已迈入世界经济的支柱产业，真菌学在生物技术的大潮中得到了长足的发展。真菌是原始的真核生物，具有广泛的多样性，真菌生长我繁殖迅速，在很短的时间内就可以得到比动物和植物多得多的后代，能够直接、快速地进行遗传性状分离的
分析。因此，真菌可以作为研究基础生物学过程中的一个重要工具，真菌基因的多样性以及真菌分子生物学的发展，为生物技术产业提供了一个广阔的天地。 植物的生长环境直接影响内生真菌的生物多样性，植物物种的年代越久远，其生物内生真菌的多样性越丰富：抗病原性能越强的植物，其所含的内生真菌具有抗菌活性的可能行就越大；其所含的内生真菌有可能产生与植物相同或相似的抗菌无知或产生抗菌活性物质可能参与了药用植物的抗菌过程，本实验通过植物病原真菌和G+、G-细菌的抑制实验发现茎，根，花，种子或果实内生真菌的代谢产物具有不同程度的抑菌能力，并且对G+、G-有普片遍的抑菌作用。研究和开发内生真菌的寻找新的抗菌活性物质具有广泛的应用前景。 三.材料与方法： 3.1.1材料： 在校园内采集银杏、喜树、桂花树样品包括叶、茎、根、花、种子或果实。 3.1.2.药品与试剂： 葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O，马铃薯、琼脂。孟加拉红，青霉素，链霉素，甲基蓝，蛋白胨，酵母膏，蔗糖，磷酸盐，葡萄糖，琼脂条，无菌水等。消毒剂：75%的乙醇，0.1%升汞（HgCl2），次氯酸钠溶液（含活性氯10%），30%双氧水。双
实验五-放线菌与真菌形态结构观察
实验报告 课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验 实验项目名称：放线菌与真菌形态结构观察 学生姓名：专业：环境工程学号： 同组学生姓名： 指导老师： 实验地点：实验日期：2018 年10月16日 一、实验目的和要求 1.学习并掌握放线菌(链霉菌)，真菌(酵母、霉菌)形 态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。 2.熟练掌握显微镜的使用。 二、实验内容和原理 1.放线菌 放线菌，是一类主要呈菌丝 状生长和以孢子繁殖的陆生 性较强大的原核生物。因在
固体培养基上呈辐射状生长而得名。大多数有发达的分枝菌丝。菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约 0.5～1微米。可分为：营养菌丝，又称基内菌丝， 主要功能是吸收营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据；气生菌丝，叠生于营养菌丝上，又称二级菌丝。 2.真菌 [1]酵母菌：为单细胞真核生物。呈圆形、卵形、 椭圆形或柠檬型。各体直径比细菌大几倍到几 十倍。菌落大而厚，湿润光华，颜色多为乳白 色、灰白色、似细菌落。繁殖方式包含无性繁 殖(芽殖或裂殖)与有性繁殖(形成子囊与子囊 孢子)。 [2]酵母菌的出芽生殖：在细胞的一端初生小突 起，如芽状，逐渐增大。细胞核一分为二，其 中一个进入小突起，经细胞壁缢缩。芽体与母 细胞脱离，形成新个体。若芽体不脱离母体而 有继续生出新芽，而芽细胞聚集形成芽簇，芽 簇细胞伸长呈丝状或藕节状，称做假菌丝。 [3]美兰染色法：美兰是一种无毒性染料，氧化型 呈蓝色，还原型呈无色。活细胞具有较强还原 能力，使美兰由蓝色变成无色。染色后，酵母
。 一．细菌培养基：肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的培养基,肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。 肉膏蛋白胨培养基 1. ～7.6 2. 、 6管，10% 3. （1 速。 （2）加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。 （3）调pH：检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用lmol/LHCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 （4）过滤：液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察。但是供一般使用的培养基，这步可省略。 （5）分装：按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的l/5，灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以 （6 （7 （8 （9 （10）无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。 二.放线菌培养基:高氏合成一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基,培养基中的可溶性淀粉作为碳源和能源，KNO3作为氮源，K2HP04、MgSO4和FeS04作为无机盐等
高氏合成一号培养基 1.药品比例： 可溶性淀粉20g NaCI 0．5g KNO31g K2HPO4 MgSO4 FeSO4 琼脂 水 pH 2. 3. 成分，并依次溶化，对微量成分FeSO4．7H2O可先配成高浓度的贮备 液，按比例换算后再加入。待所有试剂完全溶解后，补充水分到所需的总体积。 配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。 （2）、调pH
2018年自学考试《病原生物学及检验》试题及答案 1、有关结核菌素试验,下述错误的是? A、属于皮肤迟发型超敏反应 B、可检测机体对结核杆菌的免疫状况 C、皮肤反应程度以局部红肿,硬结的直径为标准 D、可检测机体细胞免疫功能 E、12—18小时观察结果 正确答案：，，E 2、关于结核分枝杆菌抵抗力，错误的是? A、尘埃中保持传染性8~10天 B、干燥痰中可活2~8个月 C、直射日光下数小时死亡 D、耐热，63℃15分钟不死亡 E、对4%NaOH和6%H2S04有一定抵抗力 正确答案：，，D 3、结核杆菌侵入机体的途径,不可能的是? A、呼吸道 B、消化道 C、破损的皮肤 D、泌尿道 E、节肢动物的叮咬 正确答案：，，E
4、下列细菌中繁殖最慢的是? A、大肠埃希菌 B、丙型链球菌 C、脑膜炎奈瑟菌 D、结核分枝杆菌 E、肺炎链球菌 正确答案：，，D 5、与结核杆菌抗酸性有关的成分是? A、索状因子 B、磷脂 C、分枝菌酸 D、蜡脂D E、硫酸脑苷脂 正确答案：，，C 6、结核菌素试验为阳性反应,下述情况可能错误的是? A、表明机体已感染过结核杆菌 B、表明机体接种卡介苗成功 C、表明机体对结核杆菌有一定的特异性免疫 D、表明机体对结核杆菌有迟发型超敏反应 E、表明机体对结核杆菌无免疫力 正确答案：，，E 7、卡介苗是?
A、经甲醛处理后的人型结核杆菌 B、加热处理后的人型结核杆菌 C、发生了抗原变异的牛型结核杆菌 D、保持免疫原性,减毒的活的牛型结核杆菌 E、保持免疫原性,减毒的活的人型结核杆菌正确答案：，，D 8、细胞壁含脂类最多的细菌是? A、结核杆菌 B、白喉棒状杆菌 C、衣氏放线菌 D、霍乱弧菌 E、幽门螺杆菌 正确答案：，，A 9、百日咳杆菌的分离培养应采用? A、鲍金(B-G)培养基 B、巧克力培养基 C、伊红-美蓝培养基 D、罗氏培养基 E、亚碲酸钾培养基 正确答案：，，A 10、目前预防百日咳主要采用注射? A、类毒素
真菌的常规检验法 实验室检查： ?标本采集分离培养 ?直接镜检生化反应 ?染色镜检免疫学试验 一、临床标本的采集 ?1．皮肤的角质性物质：毛发、指(趾)甲、头屑、皮屑等。 2．各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。 ?3．血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。 4．脓汁及渗出物。 二、检验方法 （一）标本直接检查法
不染色标本检查 染色标本检查 （二）培养检查 （三）鉴定 ①KOH溶液：本液适于检查致密的难以透明的材料（如毛发、指甲、鳞屑等）。 ②墨汁：主要用于检查有荚膜的真菌（如新型隐球菌等） ③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力较强，只限于不透明的标本。 ④生理盐水：为观察真菌的出芽现象可用生理盐水代替氢氧化钾溶液。 微生物学检查步骤： 取患部标本
（毛发、皮屑等）__置载玻片__加10%NaOH（或10%KOH）→微加温消化 →镜检（观察菌丝和孢子） 直接镜检的意义 ①有诊断意义，如浅部真菌病等； ②通过真菌的形态，可确定某些致病性真菌的属或种, 如假丝酵母菌的厚膜孢子等； ③判断某些真菌种的致病性等,如皮肤癣菌、曲霉等。 直接镜检的局限性： ①阴性结果不能排除真菌感染； ②有假阳性结果。 因此，对直接镜检可疑结果应作复查或用其他检验方法鉴定。 2. 染色标本检查 ?（1）革兰染色：各种真菌均染成革兰阳性。 ?（2）乳酸酚棉蓝染色
?（3）糖原染色： ?又称过碘Schiff（简称PAS或PASH）。真菌细胞壁由纤维素和几丁质组成，含有多糖。过碘酸使糖氧化成醛，再与品红－亚硫酸结合，成为红色，故菌体均染成红色。为真菌染色最常用的方法之一。 ?（4）嗜银染色（GMS）：染成黑色 ?（5）粘蛋白卡红染色法（MCS）：主要用于新生隐球菌荚膜的染色。隐球菌荚膜和细胞壁呈红色，细胞核呈黑色。 ?（6）荧光染色：主要使用吖啶橙和氢氧化钾来染直接涂片、培养涂片及组织切片。 （二）培养检查法 ?本法可确定菌种，辅助直接检查的不足。 ①菌落性质：酵母菌还是霉菌； ②菌落大小：致病性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大； ③菌落颜色：病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深；
《人类对细菌和真菌的利用》教学反思 本节课是《生物学》人教版第五单元第五章第二节的第一课时内容，教学目标是举例并尝试发酵技术在食品制作中的应用；通过发酵实验和尝试制作甜酒、酸奶等食品，提高动手实践和理论联系实际的能力。内容涉及的是细菌和真菌对人类有益的方面，与实际生活的联系极为密切。学生不仅对本节课内容感到新颖、好奇，而且对制作发酵食品还有一种跃跃欲试的冲动。本节虽然知识结构并不复杂，但从科学技术与生活实际的角度看，内容和形式不容忽视，因为它为提高同学的实践能力、体验知识与技术在实际生活中的应用提供了非常好的机会和素材。高效课堂的学习特别强调学生的经历，强调学生的学习体验，增加学生在高效课堂中的参与度。 授课过程中，在老师的引导下，通过小组合作、动手实验、表达交流等活动环节，看到了学生的反应积极踊跃，兴趣浓厚，并且能够联系生活经验利用发酵技术制作食品。由此不仅提高了学生语言表达、逻辑推理等多方面的能力，而且培养了学生的相互协作的精神，更重要的是使学生真正体验到知识与技术在实际生活中的应用。 在教学实施过程中，有下面几个方面处理的较好： 1、在教学中，我把“发酵现象”演示实验改成了学生分组实验，并进行了改进和拓展，教学效果很明显。分组实验进一步培养了学生的实践动手能力，增加了学生的感性认识和小组成员合作探究的意识。并且我对书上实验进行了适当的改进，把装好材料的瓶子放在保温桶中水浴保温，温度保持在40 ℃左右，让学生更快看到实验现象，提高了课堂的实验效率。而且拓展了实验，把气球收集的气体通向澄清的石灰水检验产生的气体成分，并请同学闻一闻产物的气味。通过上述处理，学生对“酵母菌发酵”所需要的原料、条件及产生的物质都有了较直观的认识和感受，比较容易理解课本上阐述的“酵母菌可以把葡萄糖转化为酒精和二氧化碳”等相关内容，留下了深刻的印象。 2、甜酒的制作这一环节，充分利用了教学资源。课前把这一制作过程录成了教学短片，而不是利用网上下载的视频资源，这样更贴近学生生活，让学生在课堂上对甜酒的制作过程加以解说、品尝甜酒，大大激发了学生学习兴趣，增加感性认识，让学生充分体验知识与技术在生产生活中的作用。并且鼓励学生课下亲手制作酸奶，在课外活动中进一步发展自己的实践能力。 3、新旧知识的联系。本节知识性内容不多，但与前后知识联系很密切。在教学过程中，
“细菌和真菌的分布”探究实验设计 一、教材分析与设计思路 1、教材分析 本节的知识背景是，细菌分布极广，地球上人迹所到之处都有细菌。甚至在5m多深的土壤中，1000m以下的深海中，盐分很高的盐湖中，也都有细菌。空气中，各种物体的表面，包括人的外表，以及动物的消化道内，也都有细菌。深海中热泉口附近的水温可达300℃以上，竟也有细菌存在，它们和外周的其他生物组成一个特殊的没有日光的生态系统。关注学生的学习和生活经验。 本节的探究实验是在学生已有一定的探究性实验技能的基础上进行的。如学生会“提出问题，作为假设”。 2、设计思路 本节课着重体现从生物圈的角度认识细菌和真菌的思路。让学生按照从宏观到微观的顺序进行观察。即通过“探究实验”由学生亲自体验细菌和真菌的广泛分布入手，认识细菌的生活环境和生活特点。激发学生的学习兴趣，于无声处走进教学内容，乐于探索生命的奥秘，逐步养成良好的生活与卫生习惯，确立、健康的生活态度。在学法指导中，改变以往讲述细菌的知识内容的做法，侧重引导学生自己设计和探究，符合从感性到理性的规律。同时，让学生在探究实验过程中，学习接种和培养细菌和真菌的操作，为学生学习生物技术打下了一定基础。 3、教学中应注意的的问题 （1）培养基和培养皿要严格高压灭菌，这是探究实验成功的关键。 （2）鼓励学生大胆设计多种实验方案，珍惜实验机会。 （3）提示学生为什么要选取两套培养皿，目的是设置实验组和对照组。 （4）强调此探究实验是属于单因素。除采样地点是变量外，进行微生物培养的条件，如温度等要保持一致。 （5）做好标记，设计好实验方案之后，方可打开培养皿。 二、教学目标 1、知识目标 说出细菌和真菌的分布特点；尝试采用细菌和真菌培养的一般方法，探究细菌和真菌的分布；探讨细菌和真菌的分布条件。 2、能力目标
实验六、放线菌的形态观察 一、实验目的 1.学习并初步掌握放线菌形态观察的基本方法； 2.初步了解放线菌的形态特征。 二、实验原理 1.放线菌 放线菌是指能形成分枝丝状体 或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。 常见放线菌大多能形成菌丝体，菌 丝体由基内菌丝、气生菌丝和孢子 菌丝组成。紧贴培养基表面或深入 培养基内生长的叫基内菌丝（简称 “基丝”），基丝生长到一定阶段还能 向空气中生长出气生菌丝（简称“气丝”），并进一步分化产生孢子丝及孢子。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。有的放线菌只产生基丝而无气丝。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。 2.高氏一号培养基 高氏一号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机
盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将两种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。 3.插片法观察放线菌 为避免破环细胞及菌丝体形态，通常采用插片法和玻璃纸法并结合菌丝体简单染色进行观察。在插片法中，将灭菌盖玻片插入接种有放线菌的平板，使放线菌沿盖玻片和培养基交界处生长而附着在盖玻片上，观察时，轻轻取出盖玻片，可直接在显微镜下观察自然生长状态下的形态特征，而且有利于对不同生长期的放线菌形态进行观察。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。 三、实验材料 1.菌种 青色链霉菌（Streptomyces glaucus）；弗式链霉菌(Streptomyces fradiae)。 2.培养基 灭菌的高氏Ⅰ号琼脂。 3.仪器和用具 显微镜；酒精灯；载玻片；盖玻片；接种环；镊子；培养皿等 四、实验操作 1.配置高氏一号培养基（200ml） 按配方称取高氏培养基各组分，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，
实验报告 课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验 实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察 学生姓名：专业：环境工程学号： 同组学生姓名： 指导老师： 实验地点：实验日期：2018 年 10月16日 一、实验目的和要求 1.掌握微生物接种培养技术 2.掌握微生物分离纯化技术 3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。 二、实验内容和原理 土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。 1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离 与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分 离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的 混入。 2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且 采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微 生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可 以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数 3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表 面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落 的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。用途一般多用于筛选菌株。一般用 于平板培养基的回收率计数。优点是可以计数，可以观察菌落特征。缺点是吸收量较少，较麻烦，平板不于燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度天的话，长不出单菌落。 4.稀释倒平板法：稀释倒平板法是将细菌与液态的培养基混合后倒入培养皿再冷却凝固，使样品中 的微生物细胞充分分散开，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，单个细胞及聚在一起 的细胞可以生长繁殖，形成一个肉眼可见的菌落，统计菌落数目，即可用以评价样品中的微生物 的数量。所以细菌在培养基的内部和表面都有,适合厌氧型微生物。 5.菌种保藏：菌种保藏是将微生物的菌种经长时间的保存，不污染其它杂菌，及可保持其形态特征 和生理性状，减少变异，防止衰老，以便于将来使用。保藏菌种一-般是选用它的休眠休，如孢 子;芽孢等等，并且要创造一一个低温;干燥; 缺氧;避光和缺少营养的环境条件，以利于休眠体 能长期地处于休眠状态。对于不产孢子的微生物，应使其新陈代谢处于最低状态，又不会死亡，
2019 第二十五章病原性放线菌及检验 一、 A1 1、衣氏放线菌在患者病灶、脓汁标本中具有的特征是 A、肉眼可见黑色颗粒 B、肉眼可见白色颗粒 C、肉眼可见褐色颗粒 D、肉眼可见黄色颗粒 E、肉眼可见蓝色颗粒 2、对于衣氏放线菌形态与染色正确的叙述是 A、革兰染色阳性 B、革兰染色阴性 C、荚膜阳性 D、鞭毛阳性 E、芽胞阳性 3、衣氏放线菌引起的感染类型属于 A、急性感染 B、隐性感染 C、外源性感染 D、内源性感染 E、接触感染 4、诺卡菌属引起的感染多为 A、内源性感染 B、蚊虫叮咬感染 C、动物的咬伤 D、接触感染 E、外源性感染 5、放线菌的感染特点是 A、为非化脓性感染 B、脓汁黏稠 C、常为局部感染，不扩散 D、外源性感染 E、病灶常有瘘管形成，排出硫磺样颗粒 6、关于放线菌错误的是 A、有细长菌丝 B、革兰染色阴性 C、大多数不致病 D、属厌氧菌或微需氧菌 E、属原核细胞型微生物 第 1 页共 4 页
7、对放线菌的错误叙述是 A、革兰阳性、非抗酸阳性菌 B、为条件致病菌，引起内源性感染 C、临床特点为形成慢性肉芽肿并伴瘘管形成 D、诊断可取分泌物查找硫黄样颗粒压片镜检 E、病后可产生特异性抗体，获得免疫力 8、放线菌引起外伤性创伤感染，标本检查应首选 A、抗原检测 B、核酸检测 C、直接显微镜检查 D、分离培养 E、生化试验 9、放线菌引起的化脓性感染，其脓液特征是 A、黏稠，呈金黄色 B、稀薄，呈血水样 C、稀薄，呈蓝绿色 D、稀薄，呈暗黑色 E、可见到硫黄样颗粒 10、放线菌生长时，对气体的要求是 A、专性需氧 B、专性厌氧 C、需加 30%CO2 D、微需氧或厌氧 E、兼性厌氧 11、压片镜检可见到呈菊花状菌丝的是 A、放线菌 B、真菌 C、奴卡菌 D、链丝菌 E、链霉菌 答案部分 一、 A1 1、 【正确答案】 D 【答案解析】在患者病灶和脓汁中可找到肉眼可见的黄色小颗粒，称为“硫磺颗粒”，是放线菌在病灶组织中形成的菌落。 【该题针对“放线菌属”知识点进行考核】 【答疑编号100917569, 点击提问】 2、 【正确答案】 A 第 2 页共 4 页
主要的放线菌类型 放线菌是具有菌丝、以孢子进行繁殖、革兰氏染色阳性的一类原核微生物。因其具有分枝状菌丝、菌落形态与霉菌相似，过去曾认为放线菌是"介于细菌与真菌之间的微生物"。然而，用近代生物学技术所进行的研究结果表明，放线菌实际上是属于细菌范畴内的原核微生物，只不过其细胞形态为分枝状菌丝。从系统发育上看，放线菌（除高温放线菌外）与全部G+细菌一起同属于这一大分支中的高G+C/mol％（60-72）群。 多腔孢囊放线菌 这类放线菌包括嗜皮菌属、地嗜皮菌属和弗兰克氏菌属，其共同特征是：菌丝进行纵向和横向分裂，直接产生孢子，菌丝形成细胞群或孢子簇，细胞壁含有内消旋二氨基庚二酸(meso―Diaminopimelicacid,m―DAP)。嗜皮菌属（Dermatophilum）：菌丝在不同的平面上形成横隔，构成砖格状细胞堆，产生直角侧向分枝。寄生在哺乳动物体上，侵害未角质化的表皮，引起渗出性皮炎。弗兰克氏菌属（Frankia）：该属放线菌最显着的特征是能与非豆科木本植物共生固氮。在木麻黄和杨梅上可形成具有向上生长小根的根瘤；而在桤木、鼠李科和蔷薇科植物上形成的根瘤成簇，每簇由许多裂片状的小根瘤组成。在有隔、分枝的菌丝体顶端的泡囊柄上，形成泡囊，泡囊具有固氮功能。弗兰克氏菌属可利用的最适碳源是短链脂肪酸和有机酸，能利用吐温是该属独特的特征。 孢囊放线菌 这类放线菌以孢囊孢子进行繁殖为突出特征。孢子的分裂和排列方式用于区分不同的属。 （1）游动放线菌属（Actinoplanes） 孢囊球状、棒状或不规则状，产生圆形或近圆形具丛生鞭毛的游动孢子。多分布在腐烂植物和土壤中。 （2）指孢囊菌属（Dactylosporangium） 孢囊指状或棒状，其内可产生规则的球形孢子，排列成单一行列。16SrRNA寡核苷酸编目表明该属在系统发育上与游动放线菌菌属、小单孢菌属的关系密切。 （3）游动单孢菌属（Planomonospora） 产生梭形、具周生鞭毛的游动孢子是该属的特征。多分布在温带和热带的土壤中。 链霉菌 链霉菌具有发达的基内菌丝和气生菌丝，孢子丝和孢子所具有的典型特征是区分各种链霉菌明显的表观特征，产多种抗生素是这类放线菌最突出的生理特性。链霉菌属(Streptomyces)：包括几百个种的链霉菌属是放线菌中种类最多的一属。该属的孢子丝可呈直形、波曲和螺旋形，螺旋形有开环螺旋形钩状、松螺旋、紧螺旋之分。孢子丝在排列方式上又有簇生、单轮生、二级
肺放线菌病24例临床及影像学分析并文献复习 发表时间：2013-02-22T11:22:52.793Z 来源：《医药前沿》2012年第34期供稿作者：高万本[导读] 肺放线菌病是一种少见的慢性化脓性肉芽肿性疾病，属肺霉菌感染的一种。 高万本（绵阳市第三人民医院医学影像科四川绵阳 621000） 肺放线菌病是一种少见的慢性化脓性肉芽肿性疾病，属肺霉菌感染的一种。近年来由于抗生素、激素、细胞毒性药物和免疫抑制剂的大量应用，肺放线菌病的发病率有所增加。为探讨肺放线菌病的临床及影像学表现特点及诊断方法，结合我院近年诊治的1例肺放线菌病，以及国内近18年(1989～2006年)文献报道的肺放线菌病23例[1-18]进行综合分析并进行文献复习。 1 临床资料 24例肺放线菌病均径病理证实。其中男15例，女9例，年龄11~87岁，平均年龄49岁。临床表现：24例均有咳嗽、咳痰等呼吸道症状；其中伴胸痛者10例，伴发热者8例，咳痰带血者3例，痰中带黄色颗粒者2例，盗汗者1例。发病部位：病变位于左肺上叶8例，左肺下叶3例，位于右肺上叶6例，右肺中叶3例，右肺下叶2例，双肺均有病变2例。病程1个月～5年不等。影像学表现：12例表现为肺部实质性肿块或球形病灶，边缘有分叶，周围无卫星病灶；1例病变向上经胸廓入口侵犯至颈根部；5例表现为肺部片状阴影伴胸腔积液；3例表现为支气管扩张改变；2例肺部有空洞改变；1例表现为气管及纵隔向患侧移位。临床诊断及治疗：15例术前误诊为肺癌，2例误诊为结核球，4例误诊为肺化脓症，2例镜检确诊为本病，1例术中冰冻切片为恶性，术中行扩大切除，术后病检为放线菌病，术后半年复发，再次行手术扩大切除。20经例手术治疗，4例保守治疗，术后均作病理检查，确诊后给予大剂量青霉素静脉滴注。术中见患肺与胸壁粘连，尤以肿物处明显，肿物大小各不相同，形态各异，无包膜，质地坚硬，并与健肺粘连，浸润生长。标本大体所见：肿物部位成灰白色或灰黄色，实性，挤压有少量脓液溢出。光镜下见病变肺组织类似化脓性肉芽肿样改变，有大量中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞浸润，其间可见大小不等的坏死区，坏死区边缘可见成团粉染的无结构团块，其中大部分成蓝紫色，周围部分排裂成放射状，末端呈球形膨大，PAS染色团块无结构物阳性反应，病变周围的肺组织类似大叶性肺炎肉质性变及纤维化。其中7例光镜观察到硫磺颗粒，2例观察到放线菌丝，3例痰培养见霉菌生长。 2 讨论 肺放线菌病是由以色列放线菌感染所致，致病菌一般寄生于健康人龋齿及扁桃体小窝内，常因吸入口腔分泌物而得病。放线菌从支气管蔓延到肺，先引起支气管肺炎，后形成肉芽肿，并侵入胸膜或胸壁软组织，常形成脓胸或胸壁窦道，如并发其他细菌感染，病变常迁延不愈。肺放线菌病发病部位多变，病程复杂[18]。临床表现以肺部慢性炎性表现多见，偶有咳黄色颗粒者，症状不典型。影像学改变与肺炎、肺脓肿、肺结核、肺癌、支气管扩张相似，易误诊。本组病例除2例诊断正确，其余22例均误诊。据统计[10]，从1971~1988年日本征集到的43例肺放线菌病例中，有30例(占70%)是通过肺病理组织切片检查确诊的。本组有15例(占63%)初始疑为肺癌、肺结核或支气管扩张，治疗后症状和影像学表现均无改善，最后经纤支镜检查、手术肺叶切除、肺病理组织切片检查确诊。说明本病早期确诊困难，误诊率高。误诊原因有[17]：(1)多数临床医生和影像学医生认为放线菌感染较罕见，对其致病性重视不够，对病原菌缺乏认识。(2)在工作中，分离临床标本中的放线菌比较困难，因为正常菌群的拮抗作用，营养竞争，这需要有标准的培养技术，控制合适的生长条件和针对某些菌采用特殊的培养基。(3)使用不适当的检验方法导致检出率下降。由于放线菌培养需要厌氧环境，而目前大多数医院开展的痰培养均是需氧培养，加上培养前用药影响，故痰培养均未能分离出放线菌。(4)临床实验室仍未广泛应用检验放线菌较可靠的现代分类学方法[11]。放线菌并非真菌，而类似细菌，菌种的鉴定不能仅靠形态学，必须结合生化反应。如果标本在使用抗生素治疗前采集，临床上又有高度怀疑放线菌病时，可适当延长厌氧培养时间，以提高阳性培养结果。肺放线菌病可靠的诊断方法是作纤支镜活组织检查，检出放线菌或对咯出物及窦道流出物的涂片检查，找到硫磺颗粒，后者是一种简单易行的方法，但阳性率不高，本组阳性率为27%[17]。胸水中培养出放线菌也可确诊。 参考文献 [1]沙宝康，戴法召.肺放线菌病1例报告[J].内蒙古医学杂志.1989,9 (2):63. [2]张澜,崔忠厚.左下肺放线菌病误诊1例[J].中华胸心血管外科杂志,1995,11(3):118. [3]刁晓源,冯端兴,乐万祥,等.肺放线菌病2例[J].中华结核和呼吸杂志,1995,18(4):238. [4]左万里.肺放线菌病误诊为支气管扩张症1例[J].中国实用内科杂志,1997,17(10):595. [5]王军,王占东,吕建军.肺放线菌病1例[J].河北医科大学学报,1998,19(6):334. [6]全亚群.肺放线菌病误诊为肺肿瘤1例[J].山西医药杂志,1998,27 (6):502. [7]牟小芳,张进川.肺癌合并下呼吸道放线菌病1例[J].中华结核和呼吸杂志,1998,21(7):391. [8]王礼斌,熊健,汤服民.肺放线菌病误诊1例[J].实用医药杂志,1999,12(1):14. [9]张文,田新平,曾小峰,等.肺放线菌病1例[J].中华传染病杂志,1999,17(2):144. [10]王红霞,李敬孚.术后并发脓胸的肺放线菌病的治疗[J].国外医学.呼吸系统分册,1995,15(2):11. [11]阮继生,刘志恒,梁丽糯,等.放线菌研究及应用[M].北京:科学出版社,1990,393. [12]刘国媚,刘平，崔皖芳,等.原发生肺放线菌病临床分析[J].安徽医药,2001,5(1):41-42. [13]卑贵光,刘智明,马洁韬,等.肺放线菌病的CT诊断[J].中华综合医学,2002,3(5):447-448. [14]张光然.肺放线菌病2例误诊分析[J].临床经验荟萃,2002,P(5):25. [15]崔书安,徐宝亮,仲伟英.肺放线菌病1例[J].医学影像学杂志,2002,12(4):257. [16]线胤生,弓显凤.肺放线菌病例[J].中国抗感染化疗杂志,2004,4 (5):308—309. [17]李少文,马琼凤,李庆安.肺放线菌病11例临床分析并文献复习.Journal of postgraduates of Medicine(Medicine Edition),2004;27:32. [18]陈刚,张林,叶宏飞.肺放线菌病的诊断与治疗11例报告[J].中国医科大学学报,2005,34(2):187.
一、学习目标 1、举例说出发酵技术在食品制作的应用 2、说出食品腐败的原因，运用食品保存的一般方 和真菌与人类防治疾病的关系 、说明细菌在环境保护的作用。 5 、关注因技术在医药生产上的应用。 二、学习重难点 1、说出食品腐败的原因，运用食品保存的一般方法保存食品。 、举例说出细菌和真菌与人类防治疾病的关系 三、预习检查 、有的真菌体内含有大量的酶，可以把分解为，如曲霉；有的真菌可以把葡萄糖转化为并产生，如酵母菌。有的细菌含有的酶把转化为，如乳酸菌，还能使牛奶变成，使蔬菜变成酸味的泡菜。 2、食品的腐败主要是由于和引起的，它们可以从食品中获取，并在食品中和，导致食品腐烂，因此，食物保鲜中的一个重要问题就是，所依据的主要原理是。 3、科学家利用现代技术手段，把其他生物的某种转入一些细菌内部，使这些细菌能够生产药品，这种技术手段叫。 四、学习过程 学习任务一：认识细菌、真菌在食品的制作上的应用 1、展示“发酵实验”过程、现象及结论。讨论并表述出发酵的原理。 2、观察掰开的面包、馒头中的小孔就是二氧化碳形成的，思考课本P75练习第一题。 3、通过观察、讨论，列举日常生活中的发酵食品。总结发酵食品的制作原理。 4、制作：根据教材P72制作甜酒 学习任务二：认识细菌、真菌与食品保存的关系 1、观察教材第73页“观察与思考”，讨论并交流各种食品的保存方法。 2、补充归纳出保存食品的主要方法和原理，以及注意事项。 拓展反思：列举本地人们保存食品的一些方法，如腌制品、咸菜等，思考：怎样保存更有利于健康？ 学习任务三：列举细菌、真菌与疾病防治的关系 1、阅读课本76页“抗生素今昔”，然后讨论完成课本75页练习第2题。 2、结合教材P74，表述科学家是如何通过转基因技术进行胰岛素生产的。 学习任务四：认识细菌与环境保护 1、认真阅读教材，举例说明细菌是如何净化污水的。 2、各小组交流调查的本市有关生活污水和工业废水排放情况及垃圾处理情况。利用所学知识为家乡的建设和发展出谋划策。 五、系统总结： 1.细菌、真菌与食品的制作 有的真菌（如曲霉）含有的酶可以把淀粉分解成_________ 有的真菌（如酵母菌）可以把葡萄糖转化为酒精并产生________ 有的细菌（如乳酸菌）含有的酶可以把葡萄糖转化为_________ ___________可用于做馒头、面包；
山东大学实验报告2017年11月13日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：放线菌的形态观察姓名：丁志康 一、目的要求 ? 1.学习并初步掌握观察放线菌形态的基本方法。 ? 2.初步了解放线菌的形态特征。 二、基本原理 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的基内菌丝（简称“基丝”），基丝生长到一定阶段还能像空气中生长出气生菌丝（简称“气丝”），并进一步分化产生孢子丝及孢子。 有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。 在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。 为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持住放线菌自然生长状态下的形态特征。本试验介绍其中几种常用方法。 1.插片法：将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。 2.玻璃纸法：玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。这种方法既能保持放线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态特征。 3.印片法：将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先印在载玻片上，经染色后观察。这种方法主要用于观察孢子丝的形态、孢子的排列及其形状等。方法简便、但形态特征可能有所改变。 （*本次试验采用插片法） 三、器材 1、菌种：青色链霉菌，弗氏链霉菌。 2、培养基：高氏I号培养基。 3、仪器及其他用具：经灭菌的平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片，接种环，接种铲， 石碳酸复红染液，显微镜等。
第二十五章病原性放线菌及检验 本章内容 一、放线菌属 二、诺卡菌属 放线菌 一群呈分枝状生长的G+杆菌。按对氧的需要可分为需氧性放线菌、兼性厌氧放线菌和厌氧性放线菌。 对人致病的放线菌可按是否含有分枝菌酸分为两大类，一类不含分枝菌酸，如放线菌属；另一类含有分枝菌酸，如诺卡菌属。 放线菌属——生物学特性 形态与结构 形态：分枝状无隔菌丝，但不形成空中菌丝。 有时断裂成短杆状或球状。 染色：G+；抗酸染色阴性。 特殊结构：无芽胞、荚膜和鞭毛。 培养特性 营养要求：培养困难。 气体环境：厌氧或微需氧。 菌落特点：初次分离加5%CO2可促进生长。 培养基（牛心脑浸液琼脂）：3～4d才能形成肉眼可见的，灰白色或瓷白色、表面粗糙而不规则的菌落。
液体培养基：37℃3～6d后，在下层或底部白色或灰白色生长。 放线菌属——微生物检验及鉴定 标本采集：主要采集脓液和痰液或活检组织。 形态学检查： 在患者病灶和脓汁中可找到肉眼可见的黄色小颗粒，称为“硫磺颗粒”，是放线菌在病灶组织中形成的菌落。镜检可见颗粒呈菊花状，中央为革兰阳性的丝状体，周围为粗大的革兰阴性棒状菌鞘，呈放射状排列。 分离培养 生化试验（鉴定） 放线菌属——致病性及临床意义 多为动物体表面，特别是口腔正常菌群的成员，少数可引起内源性感染。 衣氏放线菌是人类放线菌病最常见的菌种，牛放线菌主要引起牛放线菌病。
衣氏放线菌在机体抵抗力减弱或受伤时引起的内源性感染，导致软组织的化脓性炎症。若无续发感染则大多呈慢性无痛性过程，常出现多发瘘管，排出的脓性物质中含有硫磺颗粒，此即为放线菌病。 诺卡菌属——生物学特性 形态与结构 形态：与放线菌相似，但菌丝末端不膨大。 培养早期裂解为较多的球状或杆状，分枝状菌丝较少。 在病人脓、痰、脑脊液中本菌为纤细的分支状菌丝。 染色：G+；抗酸染色弱抗酸性。 培养特性 营养要求：不高。 气体环境：专性需氧。 菌落特点： 普通培养基或沙保培养基、脑心浸液琼脂：25～37℃培养均可生长，5～7d可见菌落表面干燥、有皱褶或呈颗粒状，不同种类可产生不同色素（黄、橙或红色等）。 诺卡菌属——微生物检验及鉴定 标本采集：采集痰液、支气管冲洗液、组织渗出液、脓液和脑脊液标本。
【实验题目】 放线菌的形态观察 【实验目的】 1、掌握放线菌观察方法—插片法 2、了解放线菌的基本形态 【实验器材】 1、菌种： 青色链霉菌、弗氏链霉菌 2、培养基： 灭菌的高氏Ⅰ号琼脂培养基 3、仪器和用具： 显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种环、镊子、培养皿等 【实验原理】 1．高氏I号培养基 高氏I号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如高氏I号培养基中，需要加入FeSO4。 2．放线菌 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基内菌丝而无气生菌丝。在显微镜下直接观察时，气生菌丝在上层、基内菌丝在下层，且气生菌丝较暗，基内菌丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。
图1：链霉菌一般形态和构造（模式图） 1-直形，交叉分枝 2-丛生，波曲 3-顶端形成大螺旋 4-松螺旋 5,6-紧螺旋 7-短而直，轮生 图2：链霉菌属孢子丝的主要类型 3．插片法 将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。 1-盖玻片 2-琼脂层 图3 【实验内容及步骤】 1、高氏I号培养基的制备（100ml） 1)根据配方按照一定比例称取可溶性溶粉、及其他成分溶解。 2)待将所有药品溶解后，补充水分到所需的总体积，进行pH调节到7.2～7.4 3)材料灭菌：将所配溶液装在三角烧瓶中并加棉塞，棉塞外包一层牛皮纸，并用麻绳捆好，
题目：真菌的培养及形态观察 动物科学1204班聂孝明 20121546 指导教师：邹玲 摘要：了解酵母菌和霉菌的菌落特征及在培养基中的生长表现，还有真菌的分离培养方法和载片培养，学习真菌水浸片的制备及形态观察。本实验通过真菌的固体培养，酵母菌水浸片旳制备观察及划线分离培养的方法进行形态观察。在固体培养基上，观察到A菌落成绿色比较光滑、有分生孢子、菌丝有横隔为青霉。D菌落有大量直立菌丝并且顶部发黑、有孢子囊、菌丝无横隔为根霉。B菌落大而光滑、显微镜下菌体较大、有假菌丝并且出芽生殖的为酵母菌。 关键词：酵母菌霉菌形态观察分离培养 引言：真菌在自然界中分布广、数量大、种类多。酵母菌是单细胞微生物，细胞核和细胞质有明显的分化，个体直径比细菌大10倍左右，多为圆形或卵圆形，无性繁殖为出芽生殖，可以形成假菌丝，有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。用美蓝染色液制成水浸片可以观察期外形和区分细菌的死活。霉菌的营养体是分支的丝状体，较大，分为基内菌丝和气生菌丝，不同的霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子，细胞易收缩变形，孢子容易分散。利用培养在玻璃纸上的霉菌作为观察材料，可以得到清晰，完整，保持自然状态的霉菌形态。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1菌种：酵母菌，青霉，根霉的斜面培养菌种 1.1.2试剂：沙堡培养基、美蓝染色液、70%酒精、无菌水等 1.1.3其他：解剖针、玻片、盖玻片、接种环、显微镜等 1.2方法 1.2..1真菌的划线分离培养 培养基：将沙堡琼脂培养基融化后，冷却至45摄氏度，注入无菌平皿中，每皿15~20ml，做成平板备用。 接种：取待分离的材料少许，投入无菌水试管中，振荡，使分离菌悬浮于水中，将接种环火焰灭菌后冷却，取上述悬液，进行平板划线分离。 培养与观察：划线完毕后，置于28摄氏度温箱培养2~5天，待形成子实器官后，取单个菌落部分，制片镜检。若只有一种菌，既得纯培养物。如有杂菌可取培养物少许制成悬液，用作划线分离，有时反复多次可获得纯种。也可在放大镜下观察，用无菌镊子夹取一段分离的真菌菌丝，在平板上分离培养，即可得到真菌的纯培养物。 1.2.2真菌在固体培养基上的生长表现： 酵母菌在固体培养基上菌落呈油脂状或蜡质状，表面光滑、湿润、粘稠，有的表面呈现粉粒状，粗糙或褶皱，菌落边缘整齐、缺损或带丝状。菌落颜色有乳白色、黄色、红色等。将不同的霉菌在固体培养基上培养2~5d，可见霉菌有绒毛状、絮状、绳索状等。大小依霉菌种类而异，很多霉菌的孢子和菌丝能产生色素，致使菌落表面、背面甚至培养基呈现不同的颜色，如黄色、绿色、黑色、橙色等。 1.2.3真菌的形态观察 1.2.3.1酵母菌水浸片的制备：将美蓝染色液或蒸馏水滴于干净的载玻片中央，用接种环以无菌及操作取培养48h的酵母菌少许，均匀涂于液滴中，染色2~3min后加盖玻片。注意切勿产生气泡，然后低倍镜和高倍镜观察其细胞形态、芽殖方式，注意酵母菌的形态、大小和芽体，同时可以根据是否染上颜色来区别死活细胞。 1.2.3.2挑取真菌孢子接入盛有灭菌水的试管中，震荡试管制成孢子悬液，用灭菌滴管吸取