实验报告
课程名称：病原生物学与免疫学实验 指导老师：陈玮__ _____成绩：______________ 实验名称：沉淀反应和补体参与的免疫反应 实验类型：___________同组学生姓名：钟一鸣
1.沉淀反应——双向琼脂扩散试验
【实验原理】
双向扩散是将可溶性抗原和抗体分别加到琼脂板相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如果抗体和抗原相对应，则在两者比例适当处形成白色沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统，因其扩散速度不同，可在琼脂中出现多条沉淀线。观察沉淀线的位置、形状等可对抗原或抗体作出定性分析。本试验常用于检测抗原抗体的纯度，滴定抗体的效价以及用已知抗体（抗原）检测和分析未知抗体（抗原）。临床上用此法检测患者血清中的甲胎球蛋白AFP ，作为原发性肝癌的重要诊断指标。双向扩散实验所需时间较长（24h ），灵敏度不高。
【实验现象】
沉淀线
Ag 对照
Ag 对照
Ag 待测
Ag 待测
Ag 对照
Ab
Ab
1）.六边形排列孔中，六条沉淀线在抗体孔周围衔接成一个完整的圆形
2）.三角形排列孔中，出现两条沉淀线，且二者相交顶端相连
【实验结果】
待测样本AFP阳性，与阳性对照含有浓度基本相同的AFP
【讨论】
1）.六边形排列孔中出现完整的圆形，说明阳性对照抗原和待测样本抗原浓度基本接近，使得六个孔中各沉淀线离中央孔的距离接近，围成完整的圆形
2）.三角形和六边形排列孔的沉淀线均较接近中央孔，说明待测抗原和阳性对照抗原的浓度略大于抗体浓度。
3）.制琼脂板时，不能太薄，且因要打六边形孔，尽量保证边上的孔不能太浅
4）.沉淀线不明显可能和抗原抗体浓度以及放置时间有关，放置时间过短则沉淀线不明显，过长则会使已经形成的沉淀线解离或散开而出现假阴性
2.免疫电泳试验——对流免疫电泳试验
【实验原理】
带电的胶体颗粒可在电场中移动，移动的方向与胶体颗粒所带的电荷有关，蛋白质抗原在PH8.6的缓冲液中带负电荷，故由阴极向阳极移动，抗体球蛋白的等电点为PH6-7，故在PH8.6的缓冲液中带负电荷少，且分子较大，移动缓慢，同时因电渗作用，反向阴极移动，于是形成抗原与抗体相对移动的情况，在二者相遇的最适比例处产生白色沉淀。此种在双向免疫扩散的基础上加电泳的方法称为对流免疫电泳。由于抗原、抗体在电场中做定向移动，限制了琼脂双向扩散时抗原、抗体朝各方向自由扩散，因而提高了实验的敏感度，同时缩短试验时间，故可作快速诊断。
【实验现象】
Ag
Ab Ab Ag
注：左侧为阳性对照，右侧为待测组
可见AFP阳性血清孔和抗体孔之间的白色沉淀线，同时待测血清孔和抗体孔之间也有沉淀线出现
【实验结果】
待测血清为AFP阳性，其内含有甲胎球蛋白。
【实验讨论】
1）抗体球蛋白的电渗力大于其电泳力，使之向负极移动，抗原电泳力大于电渗力，使之向正极移动，二者相向移动，相遇后形成沉淀线
2）阳性对照及待测组所得的沉淀线均不明显，可能是由于试验前配制的各血清及抗体溶液的浓度不完全合适所致，过浓或过稀均不易出现沉淀线
3）沉淀线不明显也可能是我们组加样时有部分孔溢出，部分孔不够，第二次再补加，使得抗体抗原量有些许差异
4）沉淀线不明显还可能与琼脂的质量有关
3.补体参与的免疫反应——溶血反应
【实验原理】
将红细胞多次注射于动物可使之产生相应的抗体（溶血素），这种抗体与红细胞结合，在有电解质存在时可发生凝集现象，若同时有补体存在，因补体的作用没有特异性，能与任何一组抗原抗体复合物结合，故补体被激活，红细胞被溶解破坏，这种现象称为溶血反应。溶血反应通常用来作为补体结合反应中的指示系统。
【实验现象】
注：上两图由左至右见下表
1 2 3 4 5 6 7 2%红细胞 0.5
0.5
0.5
第2管沉淀物
第3管沉淀物 第2管上清液 第3管上清液 溶血素2U 0.5 0.5 — —
—
0.5
0.5
补体2U 0.5 — 0.5 0.5 — 0.5 — 生理盐水
0.5
1.0
1.0
2.5
2.5
—
—
1）.1号、4号和7号试管溶液为红色，澄清透明 2）. 2、3、6、7号试管溶液为红色，浑浊 【实验结论】
1号、4号和7号试管出现溶血反应，其余均无明显反应 【实验讨论】
1）.2、 5号管中有红细胞以及相应抗原，可出现凝集反应，但实验中不明显，应该是因为红细胞及抗体没有达到适当的浓度，凝集反应不明显
2）.1号管中有红细胞、抗体及补体，三者可形成复合物导致溶血；4号管中有2号管沉淀物中的红细胞及抗体复合物，外加补体，可致溶血；7号管中有3号管上清液的补体和额外加的红细胞和抗体，也可形成复合物溶血
3）.3号管中缺乏抗体，6号管缺乏抗体，均无法形成复合物溶血
4）.7号管溶液特别少是因为放置过程中不小心倒出了一部分，日后的实验中应当对此加以注意
1 2
3
4 5 6
7
5）.倒出2、3号管的上清时，尽量速度快，防止下部沉积的红细胞打散溢出
化学发光免疫分析技术原理简介 20 世纪60 年代即有人利用化学发光法测定水样中细菌含量和菌尿症患者尿液检查。1977 年Halman 等将化学发光系统与抗原抗体反应系统相结合，创建了化学发光免疫分析法，保留了化学发光的高度灵敏性，又克服了它特异性不足的缺陷。近年来对技术与仪器的不断改进，使此技术已成为一种特异，灵敏，准确的自动化的免疫学检测方法。1996 年推出的电化学发光免疫技术，在反应原理上又具有一些新的特点。这两种技术目前已在国内一些大型医院实验室用于常规免疫学检验。 一、化学发光免疫分析法 化学发光免疫分析法( chemiluminescence immunoassay , CLlA) 是把免疫反应与发光反应结合起来的一种定量分析技术，既具有发光检测的高度灵敏性，又具有免疫分析法的高度特异性。在CLIA中，主要有两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反应系统与放射免疫测定中的抗原抗体反应系统相同化学发光系统则是利用某些化合物如鲁米诺( luminol) 、异鲁米诺(isolu-minol) 、金刚烷( AMPPD) 及吖啶酯( AE) 等经氧化剂氧化或催化剂催化后成为激发态产物，当其回到基态时就会将剩余能量转变为光子，随后利用发光信号测量仪器测量光量子的产额。将发光物质直接标记于抗原(称为化学发光免疫分析)或抗体上(称为免疫化学发光分析) ，经氧化剂或催化剂的激发后，即可快速稳定的发光，其产生的光量子的强度与所测抗原的浓度可成比例。亦可将氧化剂(如碱性磷酸酶等)或催化剂标记于抗原或 抗体上，当抗原抗体反应结束后分离多余的标记物，再与发光底物反应，其产生的光量子的强度也与待测抗原的浓度成比例。发光免疫分析的灵敏度高于包括RIA 在内的传统检测方法，检测范围宽，测试时间短，仅需30 - 60min 即可。试
生物医学技术论文 免疫学检验分析技术 姓名：陶晨宇 系部：16级医疗器械工程工程完成日期2017年5月14日
免疫学分析方法(immlmological assay，IA)是以抗原与抗体的特异可逆结合反应为基础的分析技术。它集高灵敏性和强特异性于一体，20世纪90年代开始应用于抗生素残留的检测中。IA主要包括酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbentasssy，ELISA)、放射免疫分析法(radio immunological assay，RIA)和荧光免疫分析法(fluorescence immunnological assay，FIA)等。目前，应用于抗生素残留分析的主要是ELISA。IA具有特异性强，灵敏度高，操作简便、快速，能同时筛选大量的样品，检测费用低，不需要昂贵的仪器设备，适合推广应用等优点。但同时也存在假阳性和假阴性偏多，提取液中杂质成分对检测结果干扰大，通常一次实验仅能检测一种抗生素残留等不足。 目前，IA已用于β-内酰胺类、氨基糖苷类、氯霉素类、四环素类和磺胺类抗生素残留的检 测中。用氨苄青霉素作为半抗原通过戊二醛法合成免疫抗原，免疫兔子后获得多克隆抗体，可用于检测牛奶中青霉素类药物残留。应用商品化的cHARMⅡ放射免疫系统可检测动物血清、尿液和组织中青霉素类抗生素残留。应用EuSA检测牛奶和肾脏样品中新霉素、庆大霉素和链霉素残留，其回收率大于80％。以牛血 清白蛋白为载体蛋白合成磺胺甲基嘧啶人工抗原，免疫兔子获得多克隆抗体后，以ELISA可检测乳中磺胺甲基嘧啶残留，检测限为24ng／mL。 今后，抗生素残留免疫学检测技术的发展方向，至少包括以下几个方面：①需要进一步规范抗生素残留免疫检测方法的操作步骤以及实现试剂的标准化。②将免疫检测方法与其他常规方法相结合，发挥各自的优势。例如，先用免疫分析法对大量样品进行粗筛，再用HPLC等方法确证，或首先采用免疫亲和色谱柱对样品进行提取与净化，然后再进行仪器分析，这样可以大大减少分析的时间。③利用抗体蛋白质芯片技术或通用抗体技术实现抗生素多残留的同时分析。④采用基因工程技术制备人工抗体。 现代免疫学检验技术源于标记技术在免疫学中的应用。科技的进步推动免疫检验技术的迅速发展，正从单一的免疫诊断技术向单细胞、多基因、微量化等方面发展。而哮喘、器官和骨髓自身免疫性疾病、变态反应、淋巴细胞和浆细胞的恶性肿移植、瘤以及继发性和原发性免疫缺陷的临床诊断都客观要求免疫学检验技术更加精确，并且能够定量评价临床治疗的有效性。 酶联免疫斑点技术酶联免疫斑点技术是一种用于测定B细胞分泌免疫球蛋白、T细胞分泌细胞因子功能的分析技术，是定量酶联免疫吸附试验技术的发展和延伸。 酶联免疫斑点技术的原理是在微孔培养板底部植入抗CK或Ig的特异性单克隆抗体。待检测样本进入微孔板内培养时，在有丝分裂原或者特异性抗原的作用下，活化记忆型T细胞或B细胞，产生CK或Ig。细胞下方的固相单克隆抗体就会捕获CK或Ig物质。细胞被清洗后，加入生物素化的第二抗体，抗体和CK或 Ig物质结合后，再加以酶做标记的生物素或亲和素反应，以酶 荧光素标记抗体技术是建立在免疫荧光、免疫微球和流式细胞分析等实验技术基础上的一种新的血清学实验方法。利用荧光对抗体进行染色可电以获得所需信息的原理而研制的流式细胞仪，具有激光技术、子计算机技术和单克隆抗体技术特点，主要用于细胞表型、细胞内及核膜成分、DNA含量等领域的分析。它具有在同一试管中同步检测多种靶物质的潜在特征，受到许多临床检验学者的关注。迄今尚未进入临床应用。 四聚体分析技术该技术利用T细胞表面的TCR可与构建的四聚体的表位肽相
第五章凝集反应 本章考点 1.概述 2.直接凝集反应 3.间接凝集反应 第一节概述 细菌、红细胞等颗粒抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象，称凝集反应。 凝集反应分为两个阶段：①抗原抗体的特异性结合；②出现可见的颗粒凝聚。 凝集反应的特点：凝集试验是一个定性的检测方法，即根据凝集现象的出现与否判定结果阴性或阳性；也可以进行半定量检测，即将抗体作一系列稀释，与抗原结合产生凝集的最高稀释倍数作为其效价或滴度。由于凝集反应灵敏度高、方法简便，因而在临床检验中被广泛应用。 第二节直接凝集反应 直接凝集反应：其原理是细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当的电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称直接凝集反应。参加凝集反应的抗原称凝集原，抗体则称为凝集素。从方法上来讲，有玻片法和试管法两类。 玻片法凝集主要用于抗原的定性分析，短时间便能观察结果，一般用来鉴定菌种或分型；也用于人类AB0血型的测定。 试管凝集反应是用定量抗原悬液与一系列递度倍比稀释的待检血清混合，保温静置后，根据每管内颗粒凝集的程度，以判断待检血清中有无相应抗体及其效价，可以用来协助临床诊断或流行病原调查研究。例如Widal反应、Well-Felix反应、输血时也常用于受体和供体两者间的交叉配血试验。 第三节间接凝集反应 间接凝集反应是将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒载体表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在的条件下，出现特异性凝集现象，称间接凝集反应。 根据致敏载体用的是抗原或抗体以及凝集反应的方式，间接凝集反应分为4类：①正向间接凝集反应； ②反向间接凝集反应；③间接凝集抑制反应；④协同凝集反应。
南开大学现代远程教育学院考试卷 2019年度春季学期期末(2020.2) 《医学免疫学》 主讲教师：王悦 一、请同学们在下列（10）题目中任选一题，写成期末论文。 1、免疫系统的防御、致病双重功能及临床意义分析 2、HLA与临床医学之关系回顾 3、B细胞表面的重要分子及其作用 4、T细胞、B细胞和NK细胞在免疫耐受中的角色分析 5、巨噬细胞在免疫应答阶段的生物学作用 6、树突状细胞在肿瘤治疗上的应用进展 7、抑制性T细胞的类型、功能及临床意义分析 8、免疫耐受在临床医学中的应用前景 9、抗体应用于免疫治疗中之进展分析 10、对Th1、Th2、Th17细胞的效应及功能分工的认识进展 二、论文写作要求 论文题目应为授课教师指定题目，论文要层次清晰、论点清楚、论据准确； 论文写作要理论联系实际，同学们应结合课堂讲授内容，广泛收集与论文有关资料，含有一定案例，参考一定文献资料。 三、论文写作格式要求： 论文题目要求为宋体三号字，加粗居中； 正文部分要求为宋体小四号字，标题加粗，行间距为1.5倍行距； 论文字数要控制在2000－2500字； 论文标题书写顺序依次为一、（一）、1. 。 四、论文提交注意事项： 1、论文一律以此文件为封面，写明学习中心、专业、姓名、学号等信息。论文保存为word文件，以“课程名+学号+姓名”命名。 2、论文一律采用线上提交方式，在学院规定时间内上传到教学教务平台，逾期平台关闭，将不接受补交。 3、不接受纸质论文。 4、如有抄袭雷同现象，将按学院规定严肃处理。
免疫系统的防御、致病双重功能及临床意义分析 一、免疫系统的含义 人体内有一个免疫系统，它是人体抵御病原菌侵犯最重要的保卫系统。这个系统由免疫器官（骨髓、胸腺、脾脏、淋巴结、扁桃体、小肠集合淋巴结、阑尾等）、免疫细胞（淋巴细胞、单核吞噬细胞、中性粒细胞、嗜碱粒细胞、嗜酸粒细胞、肥大细胞、血小板等），以及免疫分子（补体、免疫球蛋白、干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子等细胞因子等）所组成。免疫系统是机体防卫病原体入侵最有效的武器，但其功能的亢进会对自身器官或组织产生伤害。免疫系统分为固有免疫和适应免疫，其中适应免疫又分为体液免疫和细胞免疫。 二、免疫系统的运行机制 正常人体的血液、组织液、分泌液等体液中含有多种具有杀伤或抑制病原体的物质。主要有补体、溶菌酶、防御素、乙型溶素、吞噬细胞杀菌素、组蛋白、正常调理素等。这些物质的直接杀伤病原体的作用不如吞噬细胞强大，往往只是配合其它抗菌因素发挥作用。例如补体对霍乱弧菌只有弱的抑菌效应，但在霍乱弧菌与其特异抗体结合的复合物中若再加入补体，则很快发生溶解霍乱弧菌的溶菌反应。 当病菌、病毒等致病微生物进入到人体后，免疫系统中的巨噬细胞首先发起进攻，将它们吞噬到“肚子“里，然后通过酶的作用，把他们分解成一个个片断，并将这些微生物的片断显现在巨噬细胞的表面，成为抗原，表示自己已经吞噬过入侵的病菌，并让免疫系统中的T细胞知道。 T细胞与巨噬细胞表面的微生物片断，或者说微生物的抗原，连着相遇后如同原配的锁和钥匙一样，马上发生反应。这时，巨噬细胞便会产生出一种淋巴因子的物质，他最大的作用就是激活T细胞。T细胞一旦“醒来”便立即向整个免疫系统发出“警报”，报告有“敌人”入侵的消息。这时，免疫系统会出动一种杀伤性T淋巴细胞，并由它发出专门的B淋巴细胞，最后通过B淋巴细胞产生专一的抗体。 杀伤性T淋巴细胞能够找到那些已经被感染的人体细胞，一旦找到之后便像杀手那样将这些受感染的细胞摧毁掉，防止致病微生物的进一步繁殖。在摧毁受感染的细胞的同时B淋巴细胞产生的抗体，与细胞内的致病微生物结合使之失
实验报告 课程名称：病原生物学与免疫学实验 指导老师：陈玮__ _____成绩：______________ 实验名称：沉淀反应和补体参与的免疫反应 实验类型：___________同组学生姓名：钟一鸣 1.沉淀反应——双向琼脂扩散试验 【实验原理】 双向扩散是将可溶性抗原和抗体分别加到琼脂板相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如果抗体和抗原相对应，则在两者比例适当处形成白色沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统，因其扩散速度不同，可在琼脂中出现多条沉淀线。观察沉淀线的位置、形状等可对抗原或抗体作出定性分析。本试验常用于检测抗原抗体的纯度，滴定抗体的效价以及用已知抗体（抗原）检测和分析未知抗体（抗原）。临床上用此法检测患者血清中的甲胎球蛋白AFP ，作为原发性肝癌的重要诊断指标。双向扩散实验所需时间较长（24h ），灵敏度不高。 【实验现象】 沉淀线 Ag 对照 Ag 对照 Ag 待测 Ag 待测 Ag 对照 Ab Ab
1）.六边形排列孔中，六条沉淀线在抗体孔周围衔接成一个完整的圆形 2）.三角形排列孔中，出现两条沉淀线，且二者相交顶端相连 【实验结果】 待测样本AFP阳性，与阳性对照含有浓度基本相同的AFP 【讨论】 1）.六边形排列孔中出现完整的圆形，说明阳性对照抗原和待测样本抗原浓度基本接近，使得六个孔中各沉淀线离中央孔的距离接近，围成完整的圆形 2）.三角形和六边形排列孔的沉淀线均较接近中央孔，说明待测抗原和阳性对照抗原的浓度略大于抗体浓度。 3）.制琼脂板时，不能太薄，且因要打六边形孔，尽量保证边上的孔不能太浅 4）.沉淀线不明显可能和抗原抗体浓度以及放置时间有关，放置时间过短则沉淀线不明显，过长则会使已经形成的沉淀线解离或散开而出现假阴性 2.免疫电泳试验——对流免疫电泳试验 【实验原理】 带电的胶体颗粒可在电场中移动，移动的方向与胶体颗粒所带的电荷有关，蛋白质抗原在PH8.6的缓冲液中带负电荷，故由阴极向阳极移动，抗体球蛋白的等电点为PH6-7，故在PH8.6的缓冲液中带负电荷少，且分子较大，移动缓慢，同时因电渗作用，反向阴极移动，于是形成抗原与抗体相对移动的情况，在二者相遇的最适比例处产生白色沉淀。此种在双向免疫扩散的基础上加电泳的方法称为对流免疫电泳。由于抗原、抗体在电场中做定向移动，限制了琼脂双向扩散时抗原、抗体朝各方向自由扩散，因而提高了实验的敏感度，同时缩短试验时间，故可作快速诊断。 【实验现象】 Ag Ab Ab Ag
《医学免疫学》基本知识汇总及案例分析 一、基本概念 1、免疫:免除疾病，对某种疾病具有抵抗力，能识别清除 抗原性物质，维持机体内环境稳态。 2、免疫系统:机体执行免疫应答与免疫功能的一个重要系 统。 3、Cytokine (CK):细胞因子。是由免疫细胞及组织细胞分 泌的在细胞间发挥相互调控作用的一类小分子可溶性多肽 蛋白，通过结合相应受体调节细胞生长分化和效应，调控免 疫应答。 4、免疫球蛋白 (Ig):是血清中一类主要的蛋白，由α1，α2，β和r球蛋白等组成。将具有抗体活性或化学结构与抗 体相似的球蛋白统一命名为免疫球蛋白。 5、黏附分子 (CAM):是介导细胞间或细胞与细胞外基质间相 互结合的分子。 6、抗体:是免疫系统在抗原刺激下，由b淋巴细胞或记忆b 细胞增值分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异 性结合的免疫球蛋白，主要分布在血清中，也分布于组织液、外分泌液及某些细胞膜表面。 7、抗原:指所有能激活和诱导免疫应答的物质，通常指能被 t，b淋巴细胞表面特异性抗原受体（tcr或bcr）识别及结合，激活t，b细胞增殖分化，产生免疫应答效应产物（特
异性淋巴细胞或抗体），并与效应产物结合，进而发挥适应 性免疫应答效应的物质。 8、Incomplete antigen:不完全抗原，某些小分子物质，其 单独不能诱导免疫应答，即不具备免疫原性，但当其与大分 子蛋白质或非抗原性的多聚赖氨酸等载体交联或结合后可 获得免疫原性，诱导免疫应答。这些小分子物质可与应答效 应产物结合，具备抗原性，称半抗原又称不完全抗原。 9、抗原决定基 (抗原表位):是存在于抗原分子中决定抗原 特异性的特殊化学基团。 10、内源性抗原:指在抗原提呈细胞内新合成的抗原。（如病毒感染细胞合成的病毒蛋白、肿瘤细胞内合成的肿瘤抗原 等，）在胞质内被加工处理为抗原肽，与mhci类分子结合成复合物，提呈于apc表面，被cd8＋t细胞的tcr所识别。 11、外源性抗原:指细菌蛋白等外来抗原，其通过胞吞胞饮 和受体介导内吞等作用进入apc，在体内溶酶体中被降解为抗原肽并与mhc二类分子结合为复合物，提呈于apc表面，被cd4＋t细胞的tcr所识别。 12、Complement:即补体。是存在于人和脊椎动物血清、组 织液的一组经活化后具有酶活性的蛋白质。 13、异嗜性抗原:指存在于人、动物及微生物等不同种属之 间的共同抗原。 14、调理作用:抗体和补体等调理素能够覆盖于细菌等颗粒
医学免疫学实验指导 实验五凝集反应 由长沙达尔锋生物科技有限公司整理
【文章介绍】 实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。 BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。 【实验目的】 1.了解凝集反应的原理、基本类型及其用途。 2.熟悉玻片凝集试验、试管凝集试验、间接凝集试验的实验方法和结果分析。 【实验用品】 1. 材料试剂：伤寒杆菌、大肠杆菌18～24小时琼脂斜面培养物、伤寒杆菌H血清、伤寒杆菌H菌液、待测孕妇尿液、HCG阳性孕妇尿液、1:10稀释伤寒杆菌诊断血清、ABO血型标准血清、类风湿免疫诊断试验（用变性IgG致敏的乳胶颗粒）、HCG致敏乳胶试剂、兔抗HCG诊断血清、待测血清、生理盐水。 2.器材：洁净载玻片、巴氏吸管、乳胶皮头、接种环、酒精灯、特种铅笔（或记号笔）、小试管、牙签、采血针、75%酒精棉球、无菌干棉球、试管架；1ml、5ml刻度吸管、37℃恒温箱（或37℃/56℃水浴箱）、显微镜。 【内容和方法】 一、玻片凝集试验(slide agglutination) 1.原理 玻片凝集试验(slide agglutination)是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质(如细菌、立克次体、钩端螺旋体等)混合，在有适当电解质存在的条件下，如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性；如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性。此法属定性试验，主要用于检测抗原，如ABO血型鉴定、细菌鉴定和分型等。 2.方法 （1）取载玻片一张（平置实验台上），用特种铅笔或记号笔划分为3格，并标明1、2、3。 （2）取巴氏吸管一支，套上乳胶皮头后，吸取1:10 稀释的伤寒杆菌诊断血清1～2 滴于第1、2 格内，另取巴氏吸管一支，吸取生理盐水1～2 滴于第3格内。 （3）将接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌，冷却后取少许伤寒杆菌菌培养物与第1、3格内的诊断血清、生理盐水混合并涂抹成均匀悬液。然后用同样方法取少许大肠杆菌培养物与第2格内的的诊断血清混合并涂抹成均匀悬液。静置数分钟后观察结果。 3.结果观察与判定
第六章沉淀反应 一、A1 1、免疫比浊实验属于 A、中和反应 B、凝集反应 C、沉淀反应 D、补体结合反应 E、溶血反应 2、对流免疫电泳的原理是 A、单向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术 B、双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术 C、单向免疫扩散与两相反向的规律改变的电流相结合的免疫扩散技术 D、双向免疫扩散与两相反向的规律改变的电流相结合的免疫扩散技术 E、抗原抗体反应与电泳相结合的定向免疫扩散技术的统称 3、免疫固定电泳的英文缩写是 A、ECL B、RIE C、RIA D、IFE E、IEP 4、能够定量测定待检标本的免疫学试验是 A、间接凝集试验 B、协同凝集试验 C、单向扩散试验 D、双向扩散试验 E、对流免疫电泳 5、免疫比浊法对抗体的要求不正确的是 A、特异性强 B、效价高 C、亲和力强 D、使用H型抗体 E、使用R型抗体 6、免疫比浊法的基本原则是 A、反应体系中保持抗原过量 B、反应体系中保持抗体过量 C、反应体系中保持抗原抗体为最适比例 D、抗体特异性强 E、抗体亲和力强
7、直接影响絮状沉淀实验的因素是 A、抗原分子量 B、抗体分子量 C、抗原抗体比例 D、反应体系的PH E、反应体系的例子强度 8、免疫沉淀法目前应用最广、定量比较准确的主要是下列哪种方法 A、免疫比浊法 B、絮状沉淀试验 C、单向扩散试验 D、双向扩散试验 E、棋盘滴定法 9、下列关于免疫浊度测定错误的是 A、免疫浊度测定本质上属于液体内沉淀反应 B、是将现代光学测量仪器与自动化检测系统相结合应用于沉淀反应，可进行液体中微量抗原、抗体及小分子半抗原定量检测 C、当抗原过量时，形成的IC分子小，而且会发生再解离，使浊度反而下降，光散射亦减少，这就是高剂量钩状效应 D、当反应液中抗体过量时，IC的形成随着抗原递增而增加，至抗原、抗体最适比例处达最高峰，这就是经典的海德堡曲线理论 E、免疫比浊法的基本原理就是在反应体系中保持抗原过量，如形成抗体过量则造成测定的准确性降低 10、免疫浊度测定，形成浊度的关键是 A、反应温度 B、PH C、抗原和抗体的比例 D、离子强度 E、抗体的亲和力 11、单向琼脂扩散法是将相应的（）。 A、抗体均匀地混入琼脂糖凝胶内制板 B、抗原均匀地混入琼脂糖凝胶内制板 C、补体均匀地混入琼脂糖凝胶内制板 D、抗原抗体复合物均匀地混人琼脂糖凝胶内制板 E、抗原抗体同时均匀地混入琼脂糖凝胶内制板 12、免疫电泳技术的实质是 A、在直流电场作用下的凝胶扩散试验 B、在交流电场作用下的凝胶扩散试验 C、在直流电场作用下的双扩散试验 D、在交流电场作用下的双扩散试验 E、在交流电场作用下的沉淀试验
免疫学和免疫学检验：沉淀反应 沉淀反应（precipetaiton）是可溶性抗原与相应抗体特异性结合所出现的反。早在1897年Kraus就发现，细菌培养液与相应抗血清混合时可发生 沉淀反应（precipetaiton）是可溶性抗原与相应抗体特异性结合所出现的反。早在1897年Kraus就发现，细菌培养液与相应抗血清混合时可发生沉淀反应。1905年Bechhold把抗体放在明胶中，将抗原加于其中，发现沉淀反应可在凝胶中进行。Oudin（1946）报告了试管免疫扩散技术，Mancini（1965）提出单向免疫扩散技术，使定性免疫试验向定量化发展。另一方面，免疫浊度法的出现，使沉淀反应达到快速、微量、自动化的新阶段。沉淀反应分两个阶段，第一阶段发生抗原抗体特异性结合，第二阶段形成可见的免疫复合物（参见第九章）。经典的沉淀反应在第二阶段观察或测量沉淀线或沉淀环等来判定结果，称为终点法；而快速免疫浊度法则在第一阶段测定免疫复合物形成的速率，称为速率法。现代免疫技术（如各种标记免疫技术）多是在沉淀反应的基础上建立起来的，因此沉淀反应是免疫学方法的核心技术。第一节液体内沉淀试验一、絮状沉淀试 验絮状沉淀试验为历史较久，又较有用的方法。该法要点是：将抗原与抗体溶液混合在一起，在电解质存在下，抗原与抗体结合，形成絮状沉淀物。这种沉淀试验受到抗原和抗体比例的直接影响，因而产生了两种最适比例的基本测定方法。（一）抗原稀释法抗原稀释法（Dean-Webb法）是将可溶性抗原作一系列稀释，与恒定浓度的抗血清等量混合，置室温或37℃反应后，产生的沉淀物随抗原的变化而不同。表12-1系以牛血清白蛋白为例的实验结果。表12-1Dean-Webb定量沉淀试验 管号抗原抗体总沉淀量反应过剩物抗原沉淀量抗体沉淀量沉淀中Ab/Ag 1 0.003 0.68 0.093 Ab 0.003 0.090 30.0 2 0.005 0.68 0.145 Ab 0.005 0.140 28.0 3 0.011 0.68 0.249 Ab 0.011 0.238 21.7 4 0.021 0.68 0.422 Ab 0.021 0.401 19.1 5 0.032 0.68 0.571 Ab 0.032 0.539 16.8 6 0.043 0.68 0.734 － 0.043 0.691 16.1 7 0.064 0.68 0.720 Ab －－－ 8 0.085 0.68 0.601 Ag －－－ 9 0.171 0.68 0.464 Ag －－－ 10 0.341 0.68 0.368 Ag －－－单位：mmol/L 从表12-1可以看出，1～5管为抗体过剩管，7～10管为抗原过剩管，唯第6管沉淀物最多，两者之比为16:1，即最适比。（二）抗体稀释法（Ramon）法本法采用恒定的抗原量与不同程度稀释的抗体反应，计算结果同上法，得出的是抗体结合价和最适比。现今，为了取得抗原与抗体的最佳比例，已将以上两法相结合，即抗原和抗体同时稀释，称为棋盘格法（亦称方阵法），找出最佳配比。举例见表12-2。表12-2方阵最适比测定 抗体稀释度抗原稀释度 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/12 对照 1/5 ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋± －－
医学检验免疫学检验归纳 总结 -标准化文件发布号：（9556-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII
三大免疫结合反应 直接凝集反应玻片凝集反应 试管凝集反应 间接凝集反应间接血凝试验 胶乳凝集试验 凝集反应 P47 明胶凝集试验 自身细胞凝集试验 抗球蛋白试验直接coombs试验（RBC膜上的不完全抗原） 间接coombs试验（血清中的游离抗原） 液体内沉淀试验絮状沉淀试验抗原稀释法 抗体稀释法 方针滴定法 免疫浊度测定 沉淀反应凝胶内沉淀试验单向扩散试验 双向扩散试验 免疫电泳技术对流免疫电泳 CIEP 火箭免疫电泳RIE 免疫电泳IEP 免疫固定电泳 交叉免疫电泳 三大标记技术 一、放射免疫：放射免疫：
免疫放射： 二、荧光免疫技术P81 荧时间分辨荧光免疫测定（方法）双抗体夹心法 光 免固相抗体竞争法 疫 分固相抗原竞争法 析 类 型 荧光偏振免疫测定测定 荧光酶免疫测定（方法）双抗体夹心法 双抗原夹心法 固相抗原竞争法 三、酶免疫技术 P95 酶免疫技术分类均相酶免疫测定 EMIT 克隆酶测定分析 异相酶免疫测定异相液相酶免疫测定 固相酶免疫测定 酶联免疫吸附试验ELISA （方法）Ab 双抗体夹心法 双位点一步法 竞争法 Ag 间接法 双抗体夹心法 竞争法 捕获法 其他标记技术 化学发光免疫分析技术 CLIA 直接化学发光免疫分析CLIA P109 类型化学发光酶免疫分析CLEIA 电化学发光免疫分析ECLIA 生物素，亲和素放大技术 固相膜免疫测定试验IFA
免疫层析试验 ICA 膜免疫测定的种类斑点酶免疫吸附试验 DOT-ELISE 酶联免疫斑点试验 ELISPOT 免疫印迹法 IBT/EITB 放射免疫浊度试验 RIPA 免疫细胞 1、分离方法外周血单个核细胞分离 PBMC P161 淋巴细胞分离贴壁粘附法 吸附柱滤过法 磁铁吸引法 Percoll分离液法 T细胞和B 细胞的分离 E花环沉降法 尼龙毛柱分离法 T细胞亚群分离亲和板结合分离法 磁性微球分离法 荧光激法细胞分离仪分离法 2、免疫细胞表面标志的检测方法抗体致敏细胞花环法 P174 免疫细胞化学法 免疫荧光法 FCM 3、功能检测 T 细胞增殖试验方法形态学 P178 3H-TdR掺入法 淋巴细胞 T细胞 MTT比色法 CFSE（活细胞染料） T细胞分泌功能检测 T细胞介导的细胞毒性试验 体内试验 B细胞：B细胞增殖试验、溶血空斑实验、ELISPOT、体内试验 NK细胞：.......... 吞噬细胞...............
第六章沉淀反应 沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在特定条件下发生特异性结合时出现的沉淀现象。 第一节沉淀反应的特点 沉淀反应中的抗原多为蛋白质、多糖、血清、毒素等可溶性物质。 沉淀反应分两个阶段， 第一阶段为抗原抗体发生特异性结合，几秒到几十秒即可完成，出现可溶性小的复合物，肉眼不可见； 第二阶段为形成可见的免疫复合物，约需几十分钟到数小时才能完成，如沉淀线、沉淀环。 第二节液体内沉淀试验 一、絮状沉淀试验 抗原抗体溶液在电解质的存在下结合，形成絮状沉淀物，这种絮状沉淀受抗原和抗体比例的直接影响，因此常用来作为测定抗原抗体反应最适比例的方法，常见类型有： （一）抗原稀释法抗原进行一系列稀释与恒定浓度抗血清反应。 （二）抗体稀释法抗体进行一系列稀释与恒定浓度抗原反应。 （三）方阵滴定法方阵滴定法即棋盘滴定法。 二、免疫浊度测定 属于液体内沉淀反应，其特点是将现代光学测量仪器与自动化检测系统相结合应用于沉淀反应，可进行液体中微量抗原、抗体及小分子半抗原定量检测。 （一）免疫比浊测定的影响因素 1.抗原抗体的比例是浊度形成的关键因素。 当抗原过量时，形成的IC分子小，而且会发生再解离，使浊度反而下降，光散射亦减少，这就是高剂量钩状效应。当抗体过量时，IC的形成随着抗原递增而增加，至抗原、抗体最适比例处达最高峰，这就是经典的海德堡曲线理论。 在反应体系中保持抗体适当过量，如形成抗原过量则造成测定的准确性降低。 2.抗体的质量对免疫比浊测定法的抗体要求 （1）特异性强 （2）效价高 （3）亲和力强：则抗体的活性高，不仅可以加快抗原抗体反应的速度，而且形成的IC较牢固，不易发生解离。在速率比浊法中尤为重要。 （4）R型和H型抗体：根据抗血清来源的动物种类不同，分为R型抗体和H型抗体。 R型抗体是指以家兔为代表的小型动物被注射抗原免疫后制备的抗血清。这类抗血清的特点是亲和力较强，抗原抗体结合后不易发生解离。 H型抗体是指以马为代表的大型动物注射抗原后制备的抗血清，这类抗血清的亲和力弱，抗原抗体结合后极易解离。 3.抗原抗体反应的溶液 反应液最适pH为6.5～8.5，否则不易形成IC，甚至可引起IC解离。 在一定范围内，离子强度大，IC形成越快；离子的种类也可影响IC的形成。一般常使用磷酸盐缓冲液作为免疫比浊法的反应液。 4.增浊剂
一、名词解释 第1章概论 1.免疫学： 2.免疫分子： 3.补体： 4.临床免疫学： 第2章抗原抗体反应 5.抗原抗体反应： 6.抗原抗体反应特异性 7.可逆性 8.比例性 9.抗原抗体反应的等价带（zoneofequivalence） 10.最适比（optimalratio） 11.带现象（zonephenomenon） 第3章免疫原和抗血清的制备 12.免疫原(immunogen) 13.半抗原 14.免疫佐剂 15.多克隆抗体(polyclonal antibody, pcAb) 第5章凝集反应 16.凝集反应
17.直接凝集反应 18.间接凝集反应 19.明胶凝集试验 第6章沉淀反应 20.沉淀反应 21.絮状沉淀试验 22.免疫浊度测定 23.凝胶内沉淀试验 24.单项扩散试验 25.双向扩散试验 26.免疫电泳技术 27.对流免疫电泳 28.火箭免疫电泳 29.免疫电泳 30.免疫固定电泳 第19章补体检测及应用 31.补体 32.免疫溶血法 33.补体结合试验
第22章感染性疾病与感染免疫检测34.感染 第23章超敏反应性疾病及其免疫检测 35.超敏反应 36.Ⅰ型超敏反应 37.Ⅱ型超敏反应 38.Ⅲ型超敏反应 39.Ⅳ型超敏反应 第24章自身免疫性疾病及其免疫检测 40.自身耐受 41.自身免疫 42.自身免疫病 43.自身抗体 44.抗核抗体 第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测 45.免疫增殖性疾病 46.免疫球蛋白增殖病 47.本周蛋白
48.血清区带电泳 49.免疫电泳 50.免疫固定电泳 第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验 51.免疫缺陷病 52.获得性免疫缺陷综合征 第27章肿瘤免疫与免疫学检验 53.肿瘤免疫学 54.肿瘤抗原 55.肿瘤标志物 第28章移植免疫及其免疫检测 56.移植 57.主要组织相容性复合体 58.移植排斥反应 59.移植物抗宿主反应(GVHR) 60.血清学分型法 二、填空题。
文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑. 实验报告 课程名称：病原生物学与免疫学实验指导老师：陈玮__ _____成绩： 实验名称：凝集反应和吞噬作用______实验类型：_____________同组学生姓名：钟一鸣____ 1.直接凝集反应——ABO血型鉴定 【实验原理】 细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。常用的包括玻片法和试管法两种。 玻片凝集试验为定性实验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒性抗原如菌液或红细胞，各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便、快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。 在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含有A、B抗原而分为A（含A抗原）、B（含B抗原）、AB（含A、B抗原）、O（均不含A、B抗原）型。将受试者的红细胞加入抗B抗体试剂和抗A抗体试剂中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞上有无A、B抗原。 表1 ABO血型鉴定表 血型抗A分型试剂抗B分型试剂 A+- B- + AB++ O- - 【实验现象】 1）.在抗A抗体中，可见红细胞均匀分散，虽有时会见红细胞在圆孔中间沉积，但再加以摇晃便可发现红细胞分散。整体液体较为浑浊 2）.在抗B抗体中，可见红细胞在圆孔中央凝集成块，加以摇晃也不分散，周围液体较为澄清。 【实验结论】 该受试者血液红细胞含B抗原，为B型血 【实验讨论】
文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 1）实验时应当注意抗体和抗原的比例。即滴加的血液含量以及抗体含量应适当，而不要一个特别多一个特别少，会影响实验结果 2）当看到有红细胞类似在圆孔中间凝集时，可多加晃动，看其是否会分散——有可能是因为圆圈状离心晃动使红细胞向中间沉积，而不是因凝集产生的现象。若分散则为干扰现象，并不是凝集反应。 2.间接凝集反应——血清类风湿因子测定 【实验原理】 以红细胞为载体，将人丙种球蛋白（可溶性抗原）吸附在载体表面而成为致敏红细胞，然后用此致敏红细胞检测类风湿性关节炎患者血清中的类风湿因子（抗变性IgG抗体），当患者血清中含有类风湿因子时红细胞发生凝集。此方法常用于检测血清中的抗体，辅助诊断疾病。 【实验现象】 理论上第九孔阴性对照中，孔中的红细胞应紧密集中与孔中央，成为一暗红点，孔周围整齐光滑。第十孔阳性对照红细胞均凝集并均匀地铺于孔的四周，孔中央无红细胞沉积的暗红点。第1-8孔，若有类风湿因子，则应随着稀释度增加，红细胞由完全凝集于孔四周看不到中央红点，逐渐转变为可看见中央有疏松的红点，若最终稀释过多可致如阴性对照的结果。 本次实验，所有孔中，包括阴性对照，红细胞均凝集并均匀地铺于孔的四周，孔中央无红细胞沉积的暗红点。 【实验结论】 十个孔均为“++++”，无法判断凝集效价以及结果是否阳性 【实验讨论】 1）.本次实验阴性对照仍出现完全凝集并均匀铺于孔四周的现象。经分析可能是由于稀释液遭到污染，使得所有孔中红细胞均发生完全凝集。 2）.实验时从恒温槽中取出96孔板时要注意轻拿，防止铺于孔四周已经凝集的红细胞因震动向孔心滑动，出现类似阴性的现象。 3）.加致敏红细胞悬液时应从第9孔阴性对照开始一次从低浓度向高浓度进行。 3.协同凝集实验 【实验原理】 金黄色葡萄球菌细胞壁含有一种蛋白质，称为金黄色葡萄球菌A蛋白SPA。SPA具有
实验一凝集试验 颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。参与凝集反应的抗原称为凝集原（Agglutinogen），抗体称为凝集素（Agglutinin）。 细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的静电排斥力，此时已有凝集的趋向，在电解质（如生理盐水）参与下，由于离子的作用，中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒，出现了肉眼可见的凝集反应。根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。 凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类，本实验主要介绍直接凝集反应。 [目的要求] 1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。 2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。 3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。 [材料与试剂] 1. 玻板，载玻片，试管（1cm x 8cm），试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），牙签或火柴棒，记号笔。 2. 灭菌的生理盐水，灭菌的0.5%石炭酸生理盐水。 3. 布氏杆菌病试管凝集抗原，布氏杆菌病平板凝集抗原，布氏杆菌病虎红平板凝集抗原，布氏杆菌病阳性血清，布氏杆菌病阴性血清，被检血清（牛、羊或猪）。 4. 鸡白痢平板凝集抗原，鸡白痢阳性血清，鸡白痢阴性血清，被检鸡血清。[实验内容及操作方法] （一）试管凝集试验 以牛布氏杆菌病试管凝集试验为例。 1. 试管准备：每份血清用试管4支，另取3支试管作为对照，作好标记，置试
第二十二章免疫学检测技术的基本原理 一、单项选择 1. 琼脂双向扩散的原理是基于： A. 抗原抗体各自在琼脂中扩散 B. 抗原抗体复合物在合适条件下形成沉淀 C. 抗原抗体形成复合物 D. 抗原、抗体发生特异性结合 E. 以上都对 2. 以下哪项不是影响抗原抗体反应的因素： A、电解质 B、温度 C、湿度 D、酸碱度 E、以上都不是 3. 酶联免疫吸附试验的英文缩写是： A、ELISA B、ELISPOT C、IMB D、FACS E、以上都不是 4. 下列哪项技术属于沉淀反应： A、直接凝集反应 B、间接凝集反应 C、免疫荧光 D、双向免疫扩散 E、以上都不是 5. 有关免疫组化技术下述不正确的是： A、需应用特异性抗体 B、可对相应抗原进行定位、定性和定量检测 C、常用的技术有免疫电镜技术、酶免疫组化和免疫金组化等 D、不能在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质 E、不能检测可溶性抗原 6. 下列哪种方法不能检测抗体： A．补体依赖细胞毒作用Ｂ．沉淀反应C．ELISA D．凝集反应E．ELISPOT 7. 不能用于检测B 细胞的是： A．ELISPOT B．单向琼脂扩散法C．溶血空斑试验 D．速率比浊法E．迟发性超敏反应（DTH）检测 8. 分离纯化T 淋巴细胞的常用方法是： A.密度梯度离心B．亲和层析C．电泳分离D．流式细胞术E．沉降法 9. 检测可溶性抗原可采用： A．ELISA B．直接凝集反应C．补体依赖细胞毒试验 D．免疫组化技术E．溶血空斑试验 10. 测定CTL 功能可采用： A. 凝集反应 B. 乳酸脱氢酶（LDH）释放法 C. 沉淀反应 D. 免疫酶技术 E. 荧光抗体技术 11. 检测抗原和抗体的体外试验不包括： A、凝集反应 B、溶血空斑试验 C、蛋白芯片技术 D、沉淀反应 E、免疫组化 12. 常用的ELISA 方法不包括： A、FACS B、间接ELISA C、双抗体夹心ELISA D、BAS-ELISA E、直接ELISA 13. ELISA 中通常使用的酶是： A. 酸性磷酸酶 B.乳酸脱氢酶 C. 过氧化物酶 D.辣根过氧化酶 E. 核酸末端转移酶 14. ELISPOT 的方法是用于： A.抗体的检测 B.单细胞水平分泌细胞因子的检测 C.整体水平分泌细胞因子的检测 D. DNA 检测 E. 微量抗原的检测 15. 鉴定T 细胞亚群的方法是： A. ELISA B. ELISPOT C. 间接凝集试验 D. 免疫荧光法 E. 沉淀反应 16. 有关免疫印迹技术错误的是： A、抗原需先进行SDS-PAGE 分离 B、需应用特异性抗体 C、又称Western blotting
第五章（2）凝集反应 Chapter 15 Agglutination Test 第一部分教学内容和要求 一、目的要求 ·掌握：凝集反应的原理、类型及临床应用；熟悉：凝集反应的技术要点、实验影响因素、方法评价、间接凝集常用的载体；了解：凝集反应各阶段的特征。 二、教学内容 1。凝集反应的特点与类型。 2。直接凝集反应：玻片凝集试验，试管凝集试验。 3。间接凝集反应：间接凝集反应的类型，间接血凝试验，胶乳凝集试验，间接凝集试验的临床应用。 4．自身红细胞凝集试验。 5．抗球蛋白试验。 第二部分测试题 一、选择题 （一）单项选择题（A型题） 1．直接抗球蛋白实验用于检测 A．血清中结合的抗体B．血清中游离的不完全抗体C．红细胞表面结合的不完全抗体D．红细胞表面结合的完全抗体E．血清中游离的完全抗体 2．玻片凝集实验 A．只能检测抗原，不能检测抗体B．既能检测抗原，又能检测抗体 C．只能检测抗体，不能检测抗原D．为半定量实验 E．不能用于ABO血型鉴定 3。下列哪一项不属于玻片凝集试验 A。菌种鉴定 B。血清学分型 C。人类ABO血型鉴定 D．定量检测前筛选试验 E。血清抗体效价测定 4.试管凝集试验的效价判断标准是依据出现肉眼可见的如下凝集现象 A．“+”B．“+或++”C．“++”D．“+++”E．“++++” 5．间接抗球蛋白实验用于检测 A．血清中结合的抗体B．血清中游离的不完全抗体C．红细胞表面结合的不完全抗体D．红细胞表面结合的完全抗体E．血清中游离的完全抗体 6．协同凝集试验所用的载体是 A．新鲜红细胞B．洗涤红细胞C．醛化红细胞D．聚苯乙烯颗粒E．金黄色葡萄球菌7．自身红细胞凝集试验红细胞是 A．标准新鲜红细胞B．标准洗涤红细胞C．标准醛化红细胞 D．受检者未致敏红细胞E．受检者致敏红细胞 （二）多项选择题（X型题） 1．实验中,促进凝集现象的措施有 A．低温离心 B．增加电解质或蛋白质 C．加入右旋糖酐或葡聚糖 D．用胰酶处理 E．加入抗原 2。利用试管凝集试验可辅助临床诊断的疾病 A.痢疾 B.伤寒和副伤寒 C.恙虫病 D.布鲁菌病 E.霍乱弧菌 3. 间接凝集试验常用的载体 A.人O型红细胞 B.聚苯乙烯胶乳 C.皂土 D.明胶颗粒 E.活性炭 4．符合正向间接凝集试验的是 A．抗原致敏载体 B．用于检测标本中的抗体 C．出现凝集为阴性 D．敏感性很高 E．特异性不强 5．符合反向间接凝集试验的是 A．抗体致敏载体 B．用于检测标本中的抗原 C．出现凝集为阴性 D．敏感性很高 E．特异性强 6．符合正向间接凝集抑制试验的是 A．检测标本中的抗原B．抗原致敏载体C．抗体为诊断试剂 D．出现凝集为阳性E．不出现凝集为阳性
第五章凝集反应 细菌、红细胞等颗粒抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。 第一节凝集反应的特点 凝集试验是一个定性的检测方法，即根据凝集现象的出现与否判定结果阴性或阳性； 也可进行半定量检测，即将抗体作一系列稀释，与抗原结合产生凝集的最高稀释倍数作为其效价或滴度。 凝集反应分为两个阶段：①抗原抗体的特异性结合；②出现可见的颗粒凝聚。 第二节直接凝集反应 一、原理 细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当的电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集。参加凝集反应的抗原称凝集原，抗体则称为凝集素。 二、方法 有玻片法和试管法两类。 （一）玻片凝集试验主要用于抗原的定性分析，短时间便能观察结果。 一般用来鉴定菌种或分型；也用于人类ABO血型的测定。 （二）试管凝集试验是用定量抗原悬液与一系列梯度倍比稀释的待检血清混合，保温静置后，根据每管内颗粒凝集的程度，以判断待检血清中有无相应抗体及其效价。 可以用来协助临床诊断或流行病原调查研究。例如肥达试验、外斐试验、输血时也常用于受体和供体两者间的交叉配血试验。 第三节间接凝集反应 一、原理 间接凝集反应是将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在的条件下，出现特异性凝集现象。 二、间接凝集反应的类型 （一）正向间接凝集反应可溶性抗原致敏载体，用以检测标本中待测抗体的凝集反应，称为正向间接凝集反应。 （二）反向间接凝集反应特异性抗体致敏载体，用以检测标本中待测抗原的凝集反应，称为反向间接凝集反应。 （三）间接凝集抑制反应先将可溶性抗原（或抗体）与相应的抗体（或抗原）混合，然后再加入抗原（或抗体）致敏的载体颗粒，则能抑制原先的凝集现象，称为正向（或反向）间接凝集抑制试验。间接凝集抑制试验可用于检测抗体、自身抗体、变态反应性抗体，也可测定抗原。 （四）协同凝集反应协同凝集反应与间接凝集反应的原理相类似，但所用载体为金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）。SPA具有与IgG的Fc段结合的特性，因此当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体致敏的颗粒载体。如与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。协同凝集反应也适用于细菌的直接检测。