FHZHJDQ0028 环境空气 甲醛的测定 酚试剂分光光度法
F-HZ-HJ-DQ-0028
环境空气—甲醛的测定—酚试剂分光光度法
1 范围
5mL 吸收液中含有0.2μg 甲醛应有0.079±0.012吸光度，检出限为0.05μg/5mL 。当采样10L 时，最低检出浓度为0.01 mg/m 3。
若用5mL 样品溶液，其测定范围为0.1～2μg 甲醛。当采样体积为10L 时，则可测浓度范围为0.02～0.4mg/m 3。
20μg 酚、2μg 乙醛以及二氧化氮在一般情况下，对本法无干扰；但乙醛（＞2μg ）和丙醛与MBTH 反应也产生蓝色染料。此时所测得样品溶液中醛的含量，是以甲醛表示的总醛量。二氧化硫的干扰，可将气样先通过硫酸锰滤纸过滤，予以排除（硫酸锰滤纸的制法见9.2）。 2 原理
空气中甲醛被酚试剂溶液吸收，反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物，分光光度法定量。
3 试剂
3.1 吸收原液：称量0.1g 酚试剂 ［盐酸-3-甲基-2苯并噻唑酮腙，C 6H 4SN
（CH 3）C ：NNH 2·HCl ，简称MBTH ］加水溶解，倾于100mL 具塞量筒中，加水至刻度。放冰箱保存。可稳定三天。
3.2 吸收液：吸量5mL 吸收原液，加95mL 水。混匀，即为吸收液。采样时，临用现配。
3.3 0.1mol/L 盐酸溶液：量取8.2mL 盐酸加水稀释至1L 。
3.4 10g/L 硫酸铁铵溶液：称量1.0 g 硫酸铁铵［NH 4Fe （SO 4）2·12H 2O 优级纯］
，用0.1mol/L 盐酸溶液溶解，并稀释至100mL 。
3.5 碘溶液[c （1/2I 2）＝0.1 mol/L]：称量12.7g 升华碘和30g 碘化钾，加水溶解，稀释至1L 。
3.6 碘酸钾标准溶液[c(1/6KIO 3)＝0.1000mol/L]：准确称量3.5668g ，经105℃烘干2h 的碘酸钾（优级纯），溶解于水，移入1L 容量瓶中，再用水稀释刻度。
3.7 5g/L 淀粉溶液：称量0.5g 可溶性淀粉，用少量水调成糊状后，再加刚煮沸的水至100mL ，冷却后，加入0.1g 水杨酸保存。
3.8 硫代硫酸钠标准溶液［c （Na 2S 2O 3）
＝0.1000 mol/L ］：称量26g 硫代硫酸钠（Na 2S 2O 3·5H 2O ）,溶于新煮沸冷却的水中，加入0.2g 无水碳酸钠，再用水稀释至1L 。贮于棕色瓶中，如混浊应过滤。放置一周后，标定其准确浓度。
标定方法：准确量取25.00mL 0.1000mol/L 碘酸钾标准溶液，于250mL 碘量瓶中，加入
75mL 新煮沸冷却的水，加3g 碘化钾及10mL 冰乙酸溶液，摇匀后，暗处放置3min ，用待标定的0.1moI/L 硫代硫酸钠标准溶液滴定析出的碘，至淡黄色。加入1mL 5g/L 淀粉溶液，呈蓝色。再继续滴定至蓝色刚刚褪去，即为终点。记录所用硫代硫酸钠溶液体积（V , mL ）。重复滴定两次，两次所用硫代硫酸钠溶液体积误差不超过0.05mL 。其准确浓度用下式计算：
V
L mol 00.251000.0)/×=硫代硫酸钠溶液浓度（ 3.9 甲醛标准溶液
3.9.1 贮备溶液：量取2.8mL 含量为36%～38%甲醛溶液，放入1L 容量瓶中，加水稀释至
刻度。此溶液1mL 约含1mg 甲醛。其准确浓度用下述碘量法标定。此液可稳定三个月。 标定方法：准确量取20.00mL 待标定的甲醛储备溶液，于250mL 碘量瓶中，加入20.00mL 碘标准溶液，15mL 1mol/L 氢氧化钠溶液，放置15min 。加入20mL 0.5mol/L 硫酸溶液，再放置15min ，用0.1000mol/L 硫代硫酸钠标准溶液滴定，直至溶液呈现淡黄色时，加入1mL 5%
淀粉溶液，继续滴定至恰使蓝色褪尽为止。记录所用硫代硫酸钠标准溶液体积（V 2，mL ）
。同时，用水作试剂空白滴定，记录空白滴定所用硫代硫酸钠标准溶液体积（V 1，mL ）。样品
滴定和空白滴定各重复两次，两次滴定所用硫代硫酸钠体积误差不超过0.05mL 。甲醛溶液的浓度用下式计算：
20
15)()/21××?=M V V mL mg 甲醛溶液浓度（ 式中： M —— 硫代硫酸钠溶液的浓度，mol/L ；
15 —— 甲醛的摩尔质量的1/2；
20 —— 标定时所取甲醛标准贮备溶液体积的毫升数。
3.9.2 工作溶液：临用时，将甲醛标准贮备溶液用水稀释成1.00mL 含10μg 甲醛。立即再取此溶液10.00mL ，加入100mL 容量瓶中，加入5mL 吸收原液，用水稀释至刻度。此溶液1.0mL 含1μg 甲醛。放置30min 后，用于配制标准色列管。此标准溶液可稳定24h 。
4 仪器
4.1 气泡吸收管：普通型，有10mL 刻度线。
4.2 空气采样器：流量范围0.1～1L/min ，流量稳定。使用时，用皂膜流量计校准采样系列在采样前和采样后的流量，流量误差应小于5%。
4.3 具塞比色管：10mL 。
4.4 分光光度计，用10mm 比色皿，在波长630nm 下，测定吸光度。
5 采样
用一个内装10mL 吸收液的气泡吸收管，以0.5L/min 流量，采气10L 。并记录采样时的温度和大气压力。采样后应在24h 内分析。
6 操作步骤
6.1 标准曲线的绘制
按下表制备标准色列管。
0 1 2 3 4 5 标准溶液V/mL
0 0.10 0.50 1.00 1.50 2.00 吸收液V/mL
5.0 4.9 4.5 4.0 3.5 3.0 甲醛含量m/μg 0 0.1 0.5 1.0 1.5 2.0
于标准色列各管中，加入0.4mL 1%硫酸铁铵溶液，混匀，放置15min ，用10mm 比色皿，以水作参比，在波长630nm 下，测定各管溶液的吸光度。以甲醛含量（μg ）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归线的斜率。以斜率的倒数作为样品测定的计算因子
B s （μg ）
。 6.2 样品测定
采样后，用水补充到采样前吸收液的体积。准确取5mL 样品溶液于比色管中。然后，按绘制标准曲线的操作步骤，测定吸光度。
在每批样品测定的同时，用5mL 未采样的吸收液，按相同操作步骤作试剂空白的测定上。 7 结果计算
0)(2V B A A c s ×?= 式中： c ––––空气中甲醛浓度，mg/m 3；
A ––––样品溶液的吸光度；
A 0 ––––试剂空白溶液的吸光度；
B s ––––用标准溶液绘制标准曲线得到的计算因子，μg ；
V 0 ––––换算成标准状况下的采样体积，L 。
7 精密度和准确度
当甲醛含量为0.1～1.5μg/5mL时，重复测定的相对标准差为3%～5%。
当甲醛含量为0.4～1.0μg/5mL时，样品加标回收率为93%～101%。
9 说明
9.1 室温低于15℃时，显色不完全。应在25℃水浴中保温操作。
9.2 硫酸锰滤纸的制法：取10mL浓度为100g/L的硫酸锰（MnSO4）水溶液，滴加到250cm2玻璃纤维滤纸上，风干后切成2×5mm碎片，装入15×150mm的U形玻璃管中，采样时，将此管接在甲醛吸收管之前。此法制成的硫酸锰滤纸，吸收二氧化硫的效能受大气湿度影响很大。当相对湿度大于88%，采气速度1L/min，二氧化硫浓度为1mg/m3时，能消除95%以上的二氧化硫，此滤纸可维持50h有效。当相对湿度为15%～30%时，吸收二氧化硫的效能逐渐降低。所以相对湿度很低时，应换用新制备的硫酸锰滤纸。
9.3 本法显色反应是甲醛与酚试剂缩合生成吖嗪，适宜pH值范围3～7，而以pH＝4～5最好，见图1。
9.4 甲醛标定的原理：甲醛在碱性介质中被碘氧化成甲酸，剩余的碘在酸性条件下用Na2S2O3滴定，从而计算甲醛的量。
9.5 甲醛标准液及样品溶液的稳定性。甲醛如直接吸收在纯水中，则很不稳定。放置3～4h 降低约10%；放置24h将降低约68%。当在50mg/L酚试剂作吸收液中，则放置24h都是稳定的，见表1故甲醛标准稀溶液宜用含50mg/L酚试剂的吸收液配制。
图1 酚试剂比色法的pH范围
表1 甲醛在水及酚试剂中稳定性比较
吸光度
甲醛溶液介质
立即显色放置3～4h后显色24h后显色
在水中0.68 0.61 0.22 在0.005%酚试剂溶液中0.71 0.70 0.70
9.6 酚试剂用量与显色关系见表2，以加入0.2～0.4mg为宜（即5mL吸收液中酚试剂质量）。
表2 酚试剂用量与显色关系
酚试剂量m/mg 0.05 0.1 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 1 2 吸光度值0.570 0.653 0.685 0.687 0.684 0.683 0.655 0.653 0.644
9.7 本法氧化剂选用硫酸铁铵，但硫酸铁铵水溶液易水解而形成Fe(OH)3乳浊现象，影响比色，故改用酸性溶剂配制。但酸度也不宜过大，否则原色太深。经试验选用0.1mol/L HCl作溶剂为宜。用1%三氯化铁与1.6%氨基磺酸的混合液作氧化剂，并可防止氮氧化物的干扰。但因试剂原色太深影响比色。本反应加入硫酸铁铵的量不宜过多，否则空白管吸光度度值高，
影响比色，以加1%硫酸铁铵0.4mL为好。
9.8 标准曲线。根据本法所规定的条件，在分光度计上，用1cm比色皿，波长630nm下，甲醛浓度与吸光度的关系见图2。
9.9 显色温度低于15℃时反应慢，显色不完全。20～35℃时15min显色达最完全，放置时间4h稳定不变。
图2 酚试剂比色法标准曲线
9.10 采样效率。在现场用双管采样，浓度范围在0.38～1.35mg/m3，采样效率为92.3%~97.7%
10 参考文献
10.1崔九思，王钦源，王汉平主编，大气污染监测方法（第二版），pp. 532~539，化学工业出版社，北京，1997
10.2 中国预防医学科学院环境卫生监测所，环境空气质量监测检验方法，pp. 101~114,中国科学技术出版社,北京，1991
10.3 张启生，王汉平等，居住区大气中甲醛卫生检验标准方法——酚试剂分光光度法（国家标准报批稿），1991
附录甲醛基本性质
甲醛（HCHO又名蚁醛）为无色液体，分子量30.03，有刺激性气味。对空气比重为1.04。易溶于水、醇和醚。其35%~40%的水溶液称福尔马林，此溶液在室温下极易挥发，加热更甚。甲醛易聚合成多聚甲醛，这是甲醛水溶液混浊的原因。甲醛的聚合物受热易发生解聚作用，在室温下能放出微量气态甲醛。
甲醛污染主要来源于工业上制造树脂（酚醛树脂，脲醛树脂等）、塑料、皮革、造纸、人造纤维、胶合板等。另外用消毒、防腐和熏蒸剂等时，由于直接使用污染空气。
接触甲醛后对皮肤和有强烈刺激作用。长期接触低浓度甲醛蒸气，可有头痛、软弱无力等。在甲醛浓度达到20～70mg/m3车间内工作，工人有丧失食欲、体重减轻、持久性头痛、心悸和失眠等现象。甲醛的的嗅觉阈在0.06～1.2mg/m3，眼刺激阈低至0.01～1.9mg/m3，并个体间的差异也很大。
家具用的颗粒板、聚合板、碎料板等多以脲甲醛树脂做粘合剂，当遇热、潮解时释放甲醛，此外地毯、烟草、除臭剂、消毒剂等也释放甲醛，因此甲醛是室内最广泛的空气污染物之一，已引起严重的环境卫生问题。甲醛对人体危害除引起刺激性慢性疾病外，还能与空气
中的离子性氧化物反应生成致癌物––––二氯甲基醚，已引起人们的关注。
甲醛的测定方法有酚试剂比色法、乙酰丙酮比色法、变色酸比色法、盐酸副玫瑰苯胺比色法、4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂（简称AHMT）比色法等化学方法。仪器法有微分脉冲极谱法、高效液相色谱法和气相色谱法。乙酰丙酮比色法对共存的酚和乙醛等无干扰，操作简易、重现性好。变色酸比色法显色稳定，但需使用浓硫酸，操作不便，且共存的酚有干扰测定。两方法的灵敏度相同，均需在沸水浴中加热显色，变色酸加热时间较长些。酚试剂比色法在常温下显色，且灵敏度比上述两个方法都好，已被推荐为公共场所空气中甲醛卫生检验标准方法（国家标准报批稿），AHMT法在室温下就能显色，且SO32-、NO2-共存时不干扰测定，灵敏度比上述比色法均好，已被推荐为室内空气中甲醛卫生检验标准方法（报批稿）。气相色谱法选择性好，干扰因素小，也被推荐为公共场所中空气中甲醛卫生检验标准方法（报批稿）。扩散法被动式个体监测器由于不用采样泵，体积小重量轻等优点对室内空气中甲醛和个体接触量监测是很有用的。
酚试剂分光光度法检测室内空气中甲醛浓度的注意事项 摘要：酚试剂分光光度法(GB /T 18204.2-2014)和《民用建筑工程室内环境污染控制规范》GB 50325-2010 (2013版)在某些方面未做出明确说明或规定模糊，给实际检测工作带来诸多困惑。在查阅国内一些文献的基础上，结合工作实践提出适当的解决方法和建议。 关键词：酚试剂 GB50325 分光光度法注意事项 1、前言 甲醛（formaldehyde）是无色、具有强烈刺激性气味的气体,易溶于水、醇和醚,是室内环境的主要污染物之一。对人体的健康有很大危害，如：接触甲醛后对皮肤有强烈刺激作用；长期 接触低浓度甲醛蒸气，可引起鼻腔、口腔、鼻咽、咽喉、皮肤和消化道的癌症。甲醛已被世 界卫生组织列为可疑致癌和致畸形物质。甲醛的环境污染已引起人们的高度重视。随着国家 标准《民用建筑工程室内环境污染控制规范》GB 50325-2010的制订和实施,规定了室内有害 气体氡、甲醛、氨、苯和总挥发性有机化合物的浓度及相应的测定方法。其中,酚试剂分光光 度法(GB /T 18204.2-2014) 在常温下显色快速,检测灵敏度高,检测结果准确,是室内环境甲醛控 制检测的仲裁方法。 但是，酚试剂分光光度法未对部分试剂使用有效期、显色温度等做出明确说明,而《民用建筑工程室内环境污染控制规范》GB 50325-2010 (2013版)在某些方面规定模糊，给实际检测工作带来诸多困惑。在查阅国内一些文献的基础上，结合工作实践提出适当的解决方法和建议。 2、检测简要流程 （1）根据委托信息中的工程概况，按照GB 50325-2010 (2013版)6.0.12～6.0.15要求布点。（2）按照GB/T 18204.2-2014要求配制吸收液。 （3）对采用集中空调的民用建筑工程，采样在空调正常运转时进行；对采用自然通风的民 用建筑工程，采样在对外门窗关闭1小时后进行。装饰装修工程中完成的固定式家具，应保 持正常使用状态。 （4）采样时，检测点应距内墙面不小于0.5m，距地面高度0.8～1.5m。检测点应均匀分布，尽量避开通风道和通风口。记录采样点位置、温度、湿度、大气压力、恒流采样器编号及现 场状况。同时在室外上风向采大气作为空白。 （5）按照GB/T 18204.2-2014要求，对样品进行分析并做标准曲线（该工作可以在此之前完成）。计算结果，判定是否合格，出具检测报告。 3.注意事项 下面将从仪器、试剂、配制试剂、校正恒流采样器、显色温度、显色时间、空白检验、样品 保存时间、选择采样时间这些GB/T 18204.2-2014 和GB 50325-2010 (2013版) 未做出明确说明 或规定模糊的方面进行依次阐述。 3.1仪器、试剂 酚试剂分光光度法的灵敏度、配制溶液的准确性直接影响标准曲线的不确定度,是样品浓度测定相对标准不确定度的主要贡献因素[1]。工欲善其事,必先利其器。酚试剂分光光度法主要仪器为分光光度计和恒流采样器，应由具有CMC资质的厂家出产。而万分之一天平最好使用进口的，因为它们比国内的稳定可靠，如德国赛多利斯（BTC603）天平。所有仪器（包括玻璃 仪器）要有产品合格证和在计量部门检定的合格证书，并在计量检定有效期内使用。
酚试剂分光光度法比较装修后不同时间室内甲醛含量 【摘要】酚试剂可以与空气中的甲醛反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化生成蓝绿色化合物二缩合甲醛-3-甲基-2-苯并噻唑酮腙。可以用分光光度计测得标准液与样品液的吸光程度，得出样品液中甲醛含量。 【关键词】甲醛酚试剂分光光度法 【前言】甲醛是一种无色、具有强烈刺激性气味的挥发性气体，是一种具有较高毒性的化合物，在我国有毒化学品优先控制名单上位居第二，已经被世界卫生组织确定为致癌和致畸性物质[1]。随着人们生活水平的提高，大量可挥发处有害物质甲醛的各种建筑材料、装饰材料等民用化工产品进入室内，使人们接触甲醛的机会大大增多[2]。人们应该在房屋装修多长时间后入住，才能保证健康，免受甲醛污染呢？本实验将用酚试剂分光光度法[3]测定甲醛含量，比较装修后不同时间室内甲醛含量，为房主寻找最佳入住时间。 【实验部分】 1.实验目的：研究装修后不同时间室内甲醛含量差异 2.实验材料与方法 2.1实验材料 2.1.1实验药品 3-甲基-2-苯并噻唑酮腙（分析纯）、硫酸铁铵溶液（pH=1.5）、重蒸馏水、甲醛标准品（国家二级以上） 2.1.2实验仪器 电子天平（可称至0.01g，读至0.001g）、称量纸、100ml烧杯、10ml量筒（分度值0.1ml，读至0.01ml）、玻璃棒、10ml具塞比色管、100ml容量瓶、胶头滴管、比色皿、分光光度计 2.2实验方法 酚试剂可以与空气中的甲醛反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化生成蓝绿色化合物二缩合甲醛-3-甲基-2-苯并噻唑酮腙。 反应式如下：
3.实验构想：利用酚试剂分光光度法，测定空气中甲醛的含量 4.测定对象：小区内三幢刚装修过的房子（提前联系房主，确保房子保持密闭，在实验时间允许操作者进入房内） 5.实验步骤 5.1 检验实验仪器 检验电子天平和分光光度计能否正常使用，检验100ml容量瓶是否漏水。 5.2 配置吸收原液（3-甲基-2-苯并噻唑酮腙溶液） 在电子天平上放一张称量纸并调零。利用电子天平，准确称量0.10g3-甲基-2-苯并噻唑酮腙固体粉末，将称取的3-甲基-2-苯并噻唑酮腙置于100ml烧杯中，加入重蒸馏水溶解。将3-甲基-2-苯并噻唑酮腙溶液用玻璃棒引流至100ml容量瓶中，用重蒸馏水润洗100ml烧杯，将润洗液也引流至100ml容量瓶中。加入重蒸馏水，液面接近标定线处停止，待冷却至室温后，用胶头滴管定容至100ml，盖上容量瓶瓶塞，将配置好的吸收原液摇匀，用时要20倍 稀释。 5.3稀释吸收原液 用清洁干燥的量筒量取5.0ml吸收原液，当吸收原液液面接近量筒5.0ml刻度线时改用胶头
酚试剂法（改良 Lowry 法）测定血清蛋白质含量【目的】 1 ．掌握酚试剂法测定蛋白质含量的含量与操作技术。 2 ．熟悉标准曲线的制作方法和分光光度计的应用。 【原理】 蛋白质分子中所含的肽键在碱性溶液中与 Cu 2+ 络合产生紫红色化合物 ( 双 缩脲反应 ) ，同时使肽链展开，其中带有酚基的酪氨酸残基充分暴露，后者在碱性条件下使酚试剂中磷钨酸 - 磷钼酸还原，生成钼蓝和钨蓝的化合物，其蓝色深浅与蛋白质含量成正比，与已知浓度的标准蛋白质溶液进行比色，即可计算出测定样品中蛋白质的含量。 酚试剂法测定样品中蛋白质的含量，其特点为方法简便，灵敏度高，能够测定 2 ～ 100 μg 的微量蛋白质。其方法比凯氏定氮法操作简便，其灵敏度比双缩脲法高 100 倍左右。因此经常被用于科研与临床检验。 【器材】 1 ．座标纸 2 ． 50ml 容量瓶 3 ． 722 型分光光度计 【试剂】 1 ．碱性铜试剂 甲液称取无水碳酸钠 2 . 0g ，溶于 0 . 1mol ／ L 氢氧化钠溶液 100ml 中。 乙液取硫酸铜(CuSO 4 ·5H 2 O) 0 . 5g 溶于 1 ％酒石酸钾溶液 100ml 中。 临用前取甲液 50ml, 乙液 1ml 混合，即为碱性铜试剂。 2 ．标准蛋白质溶液 ( 0.25g /L) 准确称取结晶人血清清蛋白 25mg ，溶于 0 . 9 ％氯化钠溶液中，以容量瓶定容至 100ml 。 3 ． 0 . 9 ％氯化钠溶液
4 ．酚试剂（有成品出售） 取钨酸钠(Na 2 WO 4 ·2H 2 O) 100g 和钼酸钠(Na 2 MO 4 ·2H 2 O) 25g , 溶于 700ml 蒸馏水中，再加入 85 ％磷酸 50ml 和浓盐酸 100ml 混合，置于1500ml 圆底烧瓶中温和地回流 10h ，回流结束后加入硫酸锂(LiSO 4 ·H 2 O) 150g ，水 50ml ，溴 3 ～ 4 滴，除去回流装置，继续沸腾 15min ，以除去剩余的溴，冷却后稀释至 1000ml ，过滤，溶液应呈黄色或金黄色 ( 如带绿色者不能使用，应继续加溴煮沸 ) 。试剂配置好后置于棕色瓶中保存。使用前，以酚酞为指示剂，用 0 . 1mol ／ LNaOH 溶液滴定，求出酚试剂的摩尔浓度。然后根据此浓度，将酚试剂用蒸馏水稀释至最后浓度为 1mol ／ L ( 滴定时可将酚试剂稀释，以免颜色影响 ) 。试剂放置过久，变成绿色时，可再加溴数滴煮沸 15 分钟，如能恢复原有的金黄色仍可继续使用。 【操作】 1 ．标准曲线的制备 取试管 6 支编号，按下表进行操作 混匀，室温放置 30 min 后，以第 1 管为空白管调零点，在波长 650nm 比色，分别读取各管吸光度值。以蛋白质浓度为横座标，吸光度值为纵座标，绘制标准曲线。 2 ．血清蛋白质测定 取血清 0 . 1ml ，置于 50ml 容量瓶中，用 0 . 9 ％氯化钠溶液稀释至刻度处，混匀，此为待测血清样品。另取 3 支试管，标明测定管，标准管、空白管，按下表进行操作：
实验五：空气中甲醛的测定（酚试剂分光光度法） 实验目的： 掌握甲醛测定方法； 熟练掌握大气采样器和分光光度计的使用； 实验原理： 甲醛的测定方法：分光光度法、气相色谱法、酚试剂分光光度法、乙酰丙酮分光光度法； 空气中的甲醛与3-甲基2-苯并噻唑酮腙酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物，颜色深浅与甲醛含量成正比，物质的最大吸收波长为630nm，通过比色定量。当采样体积为10L时最低检出质量浓度为0.01mg／m3。 实验仪器： 分光光度计（在630nm测定）；大气采样器；具塞比色管（10ml）；分析天平；滴定管；容量瓶；量筒；移液管等 1、吸收液原液:称量0.10g酚试剂[C6H4SN(CH3)C:NNH2·HCl,简称NBTH]，加水溶解，倾于100ml具塞量筒中，加水到刻度。放冰箱中保存，可稳定三天。吸收液：量取吸收原液5ml，加95ml水，即为吸收液。采样时，临用现配。 2、1%硫酸铁铵溶液 3、碘溶液[C（1/2I2）=0.1000mol/L] 4、1mol/L氢氧化钠溶液 5、0.5mol/L硫酸溶液：取28ml浓硫酸缓慢加入水中，冷却后，稀释至1000ml。 6、硫代硫酸钠标准溶液[C（Na2S2O3）=0.1000mol/L] 0.5%淀粉溶液：将0.5g可溶性淀粉，用少量水调成糊状后，再加入100ml沸水，并煎沸2～3min至溶液透明确。 7、甲醛标准贮备溶液：取2.8ml含量为36～38%甲醛溶液，放入1L容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液1ml约相当于1mg甲醛。其准确浓度用下述碘量法标定。 实验步骤： 1、样品采集：用一个内装5ml吸收液的大型气泡吸收管，以0.5L/min流量，采气10L。并记录采样点的温度和大气压力。采样后样品在室温下应在24h内分析。 2、甲醛标准贮备溶液的标定：精确量取20.00ml待标定的甲醛标准贮备溶液，置于250ml 碘量瓶中。加入20.00ml[C（1/2I2）=0.1000mol/L]碘溶液和15ml 1mol/L氢氧化钠溶液，放置15min，加入0.5mol/L硫酸溶液，再放置15min，用[C（Na2S2O3）=0.1000mol/L]硫代硫酸钠溶液滴定，至溶液呈现淡黄色时，加入1ml 5%淀粉溶液继续滴定至恰使兰色褪去为止，记录所用硫代硫酸钠溶液体积（V2），ml。同时用水作试剂空白滴定，记录空白滴定所用硫化硫酸钠标准溶液的体积（V1），ml。甲醛溶液的浓度用公式（1）计算：甲醛溶液浓度（mg/ml）=（V1-V2）×N×15/20 (1) 式中：V1――试剂空白消耗[C（Na2S2O3）=0.1000mol/L]硫代硫酸钠溶液的体积，ml； V2――甲醛标准贮备溶液消耗[C（Na2S2O3）=0.1000mol/L]硫代硫酸钠溶液的体积，ml；N――硫代硫酸钠溶液的准确当量浓度； 15――甲醛的当量； 20――所取甲醛标准贮备溶液的体积，ml。 二次平行滴定，误差应小于0.05ml，否则重新标定。 绘制标准曲线： 用1.00μg/ml甲醛标准溶液，按下表制各标准色列管
实验（四）蛋白质浓度测定——Folin-酚试剂法 [原理] 实验室常规测定蛋白质含量方法中，以Lorry等人发展的Folin-酚试剂法应用最为普遍。该方法的优点是：灵敏度高，较紫外吸收法灵敏10～20倍，双缩脲法灵敏100倍；操作简单快速，不需要复杂的仪器设备。但它的不足之处是反应过程中受干扰因素较多。 Folin-酚试剂由试剂A和试剂B两部分组成。在Folin-酚试剂法中，蛋白质中的肽键首先在碱性条件下与酒石酸钾钠-铜盐溶液（试剂A）起作用生成紫色络合物（类似双缩脲反应）。由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸的存在，该络合物在碱性条件下进而与试剂B（磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成）形成蓝色复合物，其呈色反应颜色深浅与蛋白质含量成正比。 通过比色测定，参照已知含量的标准蛋白质的标准曲线，可确定待测样品的蛋白质含量。本法可测定蛋白质含量的范围在25～250μg/mL。 由于不同蛋白质所含酪氨酸和色氨酸残基的量不同，致使等量的不同蛋白质所显示的颜色深度不尽一致，产生误差。如果所用溶液或样品中含有带“-CO-NH2”、“-CH2-NH2”、“-CS-NH2”基团的化合物，或者溶液或样品中含有氨基酸、Tris、核酸、蔗糖、硫酸铵、巯基及酚类等化合物时，会给本方法的测定带来干扰。 磷钼酸-磷钨酸试剂（Folin-酚试剂B）仅在酸性条件下稳定，而蛋白质的显色反应需在pH10的环境中进行，因此当试剂B加入后应当立即充分混匀，以便在磷钼酸-磷钨酸试剂被破坏之前与蛋白质发生显色反应，这对于结果的重现性非常重要。 [方法与步骤] 1、标准曲线的绘制 取六支试管，标明编号（0～5），放置在试管架上，在试管内分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准酪蛋白溶液，用蒸馏水补足至每管总体积1.0mL。再加入新配制的试剂A 5.0mL，充分混合，在室温下放置10min。各管中加入0.5mL试剂B，立即摇匀，然后在室温下放置30min。以零号管作空白对照，在660nm波长下比色测定。 以标准蛋白毫克数为横坐标，A660值为纵坐标绘制标准曲线。 2、未知蛋白浓度的测定 方法与步骤与上述第5管相同，用1.0mL未知浓度蛋白溶液代替标准蛋白溶液。未知浓度蛋白测定应与标准曲线制作过程同步进行。 根据未知浓度蛋白溶液的A660值，运用标准曲线图，查得所对应的蛋白毫克数，计算蛋白溶液的浓度（μg/mL）。实验（五）考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量[原理] 考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式， 红色和蓝色。考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下 呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结 合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。在一定的蛋 白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为 595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定 595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。 蛋白质和考马斯亮蓝G-250结合，在2min左右 的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物 在室温下1小时内保持稳定。蛋白质-染料复合物具 有很高的消光系数，使得在测定蛋白质浓度时灵敏度很高，可测微克级蛋白质含量。 [方法与步骤] 1、标准曲线绘制
空气中甲醛检测方法-----酚试剂分光光度法 1．原理 空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化成蓝绿色化合物，根据颜色深浅，比色定量。 2．仪器设备 2.1气泡采样管(5)或多孔玻板采样管； 2.2 QC-2A大气采样(2)仪或TMP1500电子控时采样器； 2.3 10mL具塞比色管(10)； 2.4 723型可见分光光度计。 3．药品试剂 本法中所用水均为重蒸馏水或去离子交换水，所用试剂纯度均为分析纯。 3.1吸收原液(C(MBTH)=0.001g/mL)：称量0.050g酚试剂(MBTH)，用水溶解后稀释至50mL(贮于 冰箱中可稳定三天)。 3.2吸收液(C(MBTH)=0.00005g/mL)：量取5 mL吸收原液，用水稀释至100mL(采样时，临用现配)。 3.3 0.1mol/L盐酸：量取浓盐酸(C摩(mol/L)=C质(%)×ρ总(g/mL)×1000/M(g/mol)=12mol/L)8.33mL，用水稀释 至1000mL。 3.4 1%硫酸铁铵溶液：称量1.0g硫酸铁铵，用0.1mol/L盐酸溶解后稀释至100mL。 3.5碘溶液(C(1/2I2)=0.1000mol/L)：以下两种方法二选其一，若有可能，则优先采取3.5.2的方法。 3.5.1准确称量40g碘化钾，溶于25mL水中，加12.7g碘，用水溶解后稀释至1000mL(移入棕色瓶 中，暗处贮存)； 3.5.2外购试剂进行当量换算：精确量取外购碘溶液V取(mL)=100/C摩(mol/L)(BR(1/2I2)浓度C摩(mol/L)见说明书，C摩(mol/L)≥0.1000mol/L)，用水稀释至1000mL(移入棕色瓶中，暗处贮存)。
南方医科大学生物化学实验报告 姓名： 学号： 专业年级： 组别：第七实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称Folin-酚试剂法测定蛋白质含量 实验日期实验地点第七实验室 合作者指导老师 评分教师签名批改日期 格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。需强调的地方请用蓝颜色标出。不得出现多行、多页空白现象。 一、实验目的 1、掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理及其实验操作技术。 2、熟悉分光光度计的用法。 3、掌握制作标准曲线的要领和通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。 二、实验原理 1、双缩脲反应：在碱性溶液中，双缩脲能与Cu2+作用,形成紫红色的络合物,而蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的多个肽键，在与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋白质-Cu2+复合物。 2、Folin-酚试剂在碱性条件下极不稳定，蛋白质-Cu2+复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物。 3、在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。即根据预先绘制的标准曲线求出未知样品中蛋白质的含量。 三、材料与方法：以流程图示意
1、实验材料 （1）样品 健康人血清（300倍稀释）；正常人血清蛋白质含量：60~80 g/L （2）试剂 牛血清白蛋白标准液（200μg/ml）；碱性硫酸铜溶液；Folin-酚试剂 2、仪器与器材 V-1100分光光度计；恒温水浴箱；试管6支、试管架；加样枪、加样枪架 3、实验步骤 （1）图示 图一：Folin-酚试剂法测定蛋白质含量流程图 （2）取6支试管做好标记，再按下表加样：（1为空白对照，2-5作标准，6为待测样品）试剂（ml) 1 2 3 4 5 6 牛血清白蛋白标准液样品液（稀释300倍）蒸馏水 碱性硫酸铜- - 1.0 2.0 0.20 - 0.80 2.0 0.40 - 0.60 2.0 0.60 - 0.40 2.0 0.80 - 0.20 2.0 - 0.50 0.50 2.0 表一：反应体系设置 （3）加样时顺序加样，在1号试管加入碱性硫酸铜溶液2ml后开始计时，等待1分钟
酚试剂分光光度法测甲醛 摘要： 本文研究了室内空气中痕量甲醛的测定方法一一酚试剂分光光度法，考察了该法的测定原理，并选择了最佳实验条件。 甲醛： 甲醛是无色，具有强烈刺激性气味的气体，易溶于水、醇和醚。是室内环境的主要污染物之一。甲醛具有较高毒性，在我国有毒化学品优先控制名单上甲醛高居第二位。甲醛已经被世界卫生组织确定为致癌和致畸形物质，是公认的变态反应源，也是潜在的强致突变物之一。随着国家标准氓用建筑工程室内环境污染控制规莎GB50325—2001(2006腑的制订和实施，规定了室内<公共场所卫生标准检验方法>GB／T18204．26—2000中酚试剂分光光度法的测定结果为准。 国家对不同场所空气中甲醛含量作了相应的规定；公共场所甲醛≤0．12 mg／m3，居室内甲醛≤0．08 mg／m3 酚试剂分光光度法测甲醛 酚试剂分光光度法测定室内空气中的甲醛浓度具有良好的线性关系，操作简便快捷，灵敏度高于其他比色法，其相对标准偏差小，回收率为95％以上。为室内空间环境检测甲醛的主要方法。因此，我们选用此方法测定甲醛含量。 主要检验仪器及试剂 可见光分光光度计； 大型气泡吸收管：有5ml，10ml刻度线 空气采样器：流量范围0一lL／min 10ml比色管 吸收原液(0．1％)：0．10 g酚试剂(C6H．SN(CH3)C：NH2·HCl，简称MBTH)，用水定容至100ml： 吸收液(O．005％)：另取5ml吸收原液，加95ml蒸馏水，采样时现用现配。； 硫酸铁铵溶液(显色剂)(1％)：1．O g硫酸铁铵(NH4Fe(SO4)2·12H2O)，用O.1 moL ／L盐酸溶液定容至100 mL： 甲醛标准贮备液(1 mg／mL)：：取2．8ml甲醛溶液(A．R．含量36％一38％)。放人lL溶量瓶中加蒸馏水稀释至翔度，其准确浓度用碘量法标定。； 甲醛标准工作液(1ug／mL)：：临用时，将甲醛标准贮备溶液用蒸馏水稀释成1．00ml含10ug甲醛，立即再取此溶液10．OOml加入100ml容量瓶中，用水定容至lOOml，加入5ml吸收原液。此溶液1．00ml含1．00ug甲醛。放置30min后，用于绘制标准曲线。；实验所用试剂均为分析纯，实验用水为2次蒸馏水。 测定原理 空气中的甲醛与3一甲基-2-苯并噻唑酮腙(简称酚试剂)反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物。颜色深浅与甲醛含量成正比，通过比色定量。反应中，Fe3+为氧化剂和显色剂，一般采用硫酸铁铵的酸性溶液。
酚试剂分光光度法测定甲醛 1原理 空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化成蓝绿色化合物。根据颜色深浅，比色定量。 2试剂 本法中所用水均为重蒸馏水或去离子交换水：所用的试剂一般为分析纯。 2.1吸收液原液：称量0.10g酚试剂，加水溶解，倾于100ml具塞量筒中，加水至刻度。放 入冰箱中保存，可稳定三天。 2.2 吸收夜：量取吸收原液5ml，加95ml水，即为吸收液。采样时，临用现配。 2.3 1%的硫酸铁铵溶液：称量1.0g硫酸铁铵，用0.1mol/L盐酸溶解，并稀释至100ml。2.4甲醛标准溶液：临用时将甲醛标准溶液（100mg/L）吸取1ml加入预先放入5ml吸收原 液的100ml容量瓶中用水定容至100mL，此液1.00ml含1.00ug甲醛，放置30min后，用于配制标准色列管。此溶液可稳定24h。 3仪器和设备 3.1大型气泡采样管：出气口内径为1nm，出气口至管底距离等于或小于5nm。 3.2恒流采样器：流量范围0-1L./min。流量稳定可调，恒流误差小于2%，采样前和采样后应用皂沫流量计标准采样系列流量，误差小于5%。 3.3具塞比色管：10mL 3.4 分光光度计：在630nm测定吸光度。 4采样 用一个内装5mL吸收液的大型气泡吸收管，以0.5L/min流量采气10L，并记录采样点的温度(t，℃)和气压(p，KPa)。采样后的样品在室温下应24h内分析。 5分析步骤 5.1标准曲线的绘制 取10mL 具塞比色管，用甲醛标准溶液表1制备标准系列。 表1甲醛标准系列 管号0 1 2 3 4 5 6 7 8 0 0.10 0.2 0.4 0.60 0.80 1.00 1.50 2.00 标准溶液， mL 标准吸收 5.0 4.9 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 3.5 3.0 液，mL 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.5 2.0 甲醛含量， ug 各管中，加入0.4mL 1%硫酸铁铵溶液，摇匀。放置15min。用1cm比色皿，在波长630nm 处，以水作为参比，测定各管溶液的吸光度。以甲醛的含量为横
酚试剂分光光度法测定室内甲醛实验报告 班级：130223 学号：13022103 姓名：董子薇
一、 实验目的 1） 测定空气中甲醛浓度，掌握酚试剂分光光度法测甲醛原理； 2） 学会配置硫酸铁铵、酚试剂、标定甲醛等技能； 3） 学会使用分光光度计。 二、 实验原理 酚试剂，化学名称为盐酸-3-甲基-2-苯并噻唑酮腙，分子式为C 6H 4SN （CH 3）CNNH 2?HCI , 简称MBTH 。酚试剂可与甲醛发生缩合反应（酚试剂作为甲醛吸收剂，显色剂） 。（该方法当 采样体积为10L 时，测定浓度下限范围为 0.01mg/m 3?0.015 , mg/m 3） 甲醛在纯水中很不稳定，当在 0.005%酚试剂吸收液中则可稳定 20h ，故甲醛标准稀溶 液选用含0.005%酚试剂的吸收液配制。 空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪（ A ）,嗪与酚试剂的氧化物（ B ）在酸性溶液中被高 铁离子氧化形成蓝绿色化合物，颜色深浅与甲醛含 量成正比，通过比色定量。反应方程式如上： 注意：酚试剂是过量的，其某一部分吸收甲醛形成 A ,剩下的酚试剂在高铁离子的氧化 作用下，形成中间体B , A 与B 发生1:1定量加成反应，形成了蓝绿色的二缩合甲醛 -3-甲基 -2-苯并噻唑酮腙。作为氧化剂的硫酸铁铵在该反应中也是过量的，而且氧化反应和加成反 应都需要一定的时间，这就是为什么酚试剂吸收甲醛，在加入硫酸铁铵后要等待 15min 后 再测定的原因。 三、试验用试剂 说明：本法中所用水均为重蒸馏水或去离子交换水，所用试剂纯度一般为分析纯度。 ⑴吸收液原液：称量 0.05g 酚试剂，加水溶解，倾于 50mL 容量瓶中，加去离子水至刻 度。置于冰箱中保存，可稳定三天； （酚溶液浓度0.001g/ml ） ⑵吸收液：量取吸收原液 5mL ，加95mL 去离子水。采样时临用现配； （酚溶液浓度5 x 10?-5g/mI , i.e.0.005%） (B) (A)嗪 + Fe 3 (A)+(B) ------------- [O] 蓝绿色 L 厂N H 蓝绿色化合物 H ——N 酚试剂 H 3C N S N ■ _ NH 2 [O] CH 3 CH 3 / N NH +CH 3 +H2° N ? —N NH 2 N CH 3
酚试剂分光光度法测定甲醛的含量 1实验原理 空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化成蓝绿色化合物。根据颜色深浅，比色定量。 2试剂 本法中所用水均为重蒸馏水或去离子交换水：所用的试剂一般为分析纯。 2.1称量0.10g酚试剂，加水溶解，倾于100ml具塞量筒中，加水至 刻度。放入冰箱中保存，可稳定三天。 2.2吸收夜：量取吸收原液5ml，加95ml水，即为吸收液。采样时，临用现配。 2.31%的硫酸铁铵溶液：称量1.0g硫酸铁铵，用0.1mol/L盐酸溶解， 并稀释至100ml。 2.4 碘溶液：称量40g碘化钾，溶于20ml水中，加入12.7g碘。待 碘完全溶解后，用水定容至1000ml。移入棕色瓶中，暗处储存。 2.5 1mol/L氢氧化钠溶液：称量40g氢氧化钠溶于水中，并稀释至1000mL。 2.6 0.5mol/L硫酸溶液：量取28ml浓硫酸缓慢加入水中，冷却后， 用水稀释至1000mL。 2.7 硫代硫酸钠标准溶液(C(Na2S2O3)=0.1000mol/L) 2.8 0.5%淀粉溶液：称量0.5g可溶性淀粉，用少量水调成糊状后， 加入100mL沸水，并煮沸2~3min至溶液透明。冷却后，加入 0.1g水杨酸或氯化锌保存。 2.9 甲醛标准贮备溶液：量取2.8mL含量为36%~38%甲醛溶液，放 入1L容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液1ml约相当于1mg 甲醛。其准确浓度用下述碘量法标定。 甲醛标准贮备溶液的标定：精确量取20.00mL待标定的甲醛
标准贮备溶液，置于250mL碘量瓶中。加入20.00mL0.1N碘 溶液(C(1/2I2)=0.1000mol/L)和15mL 1mol/L氢氧化钠溶液， 摇匀后放置15min。加入20mL 0.5mol/L硫酸溶液，再放置 15min。用硫代硫酸钠标准溶液滴定，至溶液呈现浅黄色时， 加入1mL0.5%淀粉溶液继续滴定至恰使蓝色褪去为止，并记 录所用硫代硫酸钠标准溶液体积(V2)，mL。同时用水作试剂 空白滴定，记录空白滴定所用硫代硫酸钠标准溶液体积(V1)， mL。甲醛溶液的浓度用公式计算： 甲醛溶液浓度（mg/mL） =(V1-V2)×C1×15/20 式中：V1—试剂空白消耗硫代硫酸钠溶液的体积，mL， V2—甲醛标准储备溶液消耗硫代硫酸钠溶液的体积，mL， C1—硫代硫酸钠溶液的准确物质的量浓度， 15—甲醛的当量； 20—所取甲醛标准储备溶液的体积，mL。 两次平行滴定，误差应小于0.05mL，否则重新标定。 2.10甲醛标准溶液：临用时将甲醛标准溶液用水稀释至 1.00mL含 10ug甲醛、立即再取此溶液10.00mL，加入100ml容量瓶中， 加5mL吸收原液，用水定容至100mL，此液1.00ml含1.00ug 甲醛，放置30min后，用于配制标准色列管。此溶液可稳定 24h。 4仪器和设备 4.1 大型气泡采样管：出气口内径为1nm，出气口至管底距离等于或小于5nm。 4.2 恒流采样器：流量范围0-1L./min。流量稳定可调，恒流误差小于2%，采样前和采样后应用皂沫流量计标准采样系列流量，误差小于5%。 4.3 具塞比色管：10mL 4.4分光光度计：在波长630nm测定吸光度。
酚试剂分光光度法及其影响因素 采用酚试剂分光光度法，成分一般是这样：需要溶解进蒸馏水的东西是酚试剂，最后加入吸收液静止显色的是硫酸铁铵溶液，原理是这样的：空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化生成蓝绿色化合物，根据颜色深浅比色定量。 其中酚试剂为：盐酸-3-甲基-2-苯并噻唑酮腙（MBTH），蓝绿色化合物为：二缩合甲醛-3-甲基-2-苯并噻唑酮腙。反应原理如下图示： （如显色为黄色系，则采用了乙酰丙酮法，若显色为红色系，则采用了AHMT 法，采用后两种方法的自测盒不多。） 目前我国检测室内环境中甲醛的方法有分光光度法、气相色谱法、电化学检测法、气相色谱法、液相色谱法、传感器法等。下文分析酚试剂分光光度法的影响因素。 空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成稳定的蓝绿色化合物。甲醛含量与颜色成正比，根据颜色深浅，比色定量。 1显色剂的影响 该显色反应原理为空气中的甲醛和酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中，被高铁离子氧化生成蓝绿色化合物，通过分光光度计测定吸光度。反应中，硫酸铁铵承担氧化、显色的作用。硫酸铁铵水溶液易水解而形成Fe(OH)3，乳浊现象，影响比色，故用酸性溶剂配制。但溶液酸度需严格控制，酸度过小，溶液反应速率慢；酸度过高，溶液本色太深，易造成分解结果的误差。 硫酸铁铵的加入量也不宜过多，否则空白管吸光度度值高，影响比色，以加1%硫酸铁铵0.4 mL 为宜。 2显色温度的影响 应注意环境温度对显色反应时的影响。室温＜15 ℃时，显色不完全；室温＞15 ℃或＜20 ℃时，反应速率慢，间接造成不必要的时间消耗；此时应在25℃水浴进行显色反应。20～35 ℃时15 min 显色达最完全，放置时间 4 h 稳定不变。
酚试剂分光光度法测定室内甲醛实验报告 班级：130223 姓名：董子薇 一、 实验目的 1） 测定空气中甲醛浓度，掌握酚试剂分光光度法测甲醛原理； 2） 学会配置硫酸铁铵、酚试剂、标定甲醛等技能； 3） 学会使用分光光度计。 二、 实验原理 酚试剂，化学名称为盐酸-3-甲基-2-苯并噻唑酮腙，分子式为C 6H 4SN （CH 3）CNNH 2?HCI ，简称MBTH 酚试剂可与甲醛发生缩合反应（酚试剂作为甲醛吸收剂，显色剂）。 （该方法当采样体积为 10L 时，测定 浓度下限范围为 m 3?，mg/m 3） 甲醛在纯水中很不稳定， 当在%酚试剂吸收液中则可稳定 20h ，故甲醛标准稀溶液选用含 %酚试剂的 吸收液配制。 空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪（ A ），嗪与酚试剂的氧化物（B ）在酸性溶液中被高铁离子氧化 形成蓝绿色化合物，颜色深浅与甲醛含 量成正比，通过比色定量。反应方程式如上： 注意：酚试剂是过量的，其某一部分吸收甲醛形成 A ，剩下的酚试剂在高铁离子的氧化作用下，形 成中间体B ，A 与B 发生1:1定量加成反应，形成了蓝绿色的二缩合甲醛 -3-甲基-2-苯并噻唑酮腙。作为 氧化剂的硫酸铁铵在该反应中也是过量的，而且氧化反应和加成反应都需要一定的时间，这就是为什么 酚试剂吸收甲 醛，在加入硫酸铁铵后要等待 15min 后再测定的原因。 三、试验用试剂 H 3C CH 3 酚试剂| NH +CH 3 +出。 (A)嗪 H 3C + Fe 3 酚试剂 [O] (A)+(B) CH 3 N N (B ) + Fe 3 [1 —NH 蓝绿色 ---- A CH 3 NH-N 蓝绿色化合物 N ~NH 2 + N N
酚试剂法测甲醛 1实验原理： 酚试剂法是利用空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高价铁离子氧化成蓝绿色化合物，根据颜色深浅，比色定量。 2主要仪器与试剂： 2.1主要仪器： 大气采样器；比色管；WFZ UV-2000型紫外可见分光光度计；数显恒温水浴锅；干燥箱；碘量瓶。 2.2主要试剂： 甲醛溶液（37%-40%）；浓硫酸（95.0%-98%）；Na2S2O3·5H2O；重铬酸钾；可溶性淀粉；碘化钾；碘；NaOH试剂；蒸馏水：酚试剂[C6H4SN(CH3):HNH2·HCL];硫酸铁铵盐，以上试剂均为分析纯。 3准备工作： 3.1甲醛溶液的标定： 3.1.1 Na2S2O3标定： ①取0.15g K2C2O7溶于25mL水中，再称取2g碘化钾加入其中，取20mL20%的H2SO4加入其中，充分混匀且避光保持15min左右，使碘离子完全被氧化以碘的形式析出； ②再加100mL去离子水稀释（一为降低酸度，二为使终点时溶液中的Cr3+离子不致颜色太深，影响终点观察；另外KI浓度不可过大，否则I2与淀粉所显颜色偏红紫，也不利于观察终点）；用Na2S2O3滴定成淡黄色（I2颜色）。 反应为：Na2S2O3+I2==NaI+Na2S2O6 ③再加0.5%淀粉3ml（如过早加入淀粉：开始I2太多，被淀粉吸附得过牢，就不易被完全夺出，并且也难以观察终点，因此必须在滴定至近终点时方可加入淀粉溶液。）；终点由蓝色变成绿色（终点的颜色为Cr3+颜色）。 3.1.1.1 Na2S2O3标定数据处理 表格1硫代硫酸钠标定数据 组号开始体积终点体积消耗体积 第一组V始=0.00ml V终=31.5mlΔV1=31.5ml 第二组V始=0.00ml V终=31.3mlΔV2=31.3ml 第三组V始=0.00ml V终=31.0mlΔV3=31.0ml 平均值ΔV平均=31.27ml
生物化学实验报告 姓名： 学号： 专业年级： 组别： 生物化学与分子生物学实验教学中心
格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。需强调的地方请用蓝颜色标出。不得出现多行、多页空白现象。 一、实验目的 1、掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理及其实验操作技术。 2、掌握制作标准曲线的要领和通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。 二、实验原理 Folin-酚反应是利用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基（酚基）还原酚试剂（磷钨酸-磷钼酸）起蓝色反应。为了提高该反应的敏感度，先于标本中加碱性铜试剂，再与酚试剂反应。 1、双缩脲反应：在碱性溶液中,双缩脲(H2NOC－NH－CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的多个肽键,因此有双缩脲反应。即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋白质- Cu2+复合物。 2、Folin-酚显色反应：蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。 在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。即根据预先绘制的标准曲线求出未知样品中蛋白
质的含量。 三、材料与方法：以流程图示意 1、材料：①样品：健康人的血清（稀释300倍）②试剂：牛血清蛋白标准液（200μg/ml ）、碱性的硫酸铜溶液、蒸馏水、Folin-酚试剂③仪器及器材：V-1100型分光光度计、恒温水浴箱、试管6只、试管架、加样枪、加样枪架、加样枪头 2① 取6支试管编号1~6，按下表依次加入试剂并混匀，室温放置10min 。 表格 1 Folin-酚试剂定量蛋白质实验步骤 ② 往6支试管中分别加入Folin-酚试剂0.20ml ，在2s 内立即混匀。40℃水浴加热10min 后，冷却至室温。 ③ 用V-1100型分光光度计以500nm 波长比色，用1号管做空白，测量各管吸光度值并记录，每管测量3次。 ④ 数据处理，绘制标准曲线，计算实验结果。 四、结果与讨论：①结果：实验数据、现象、图谱；②讨论：以结果为基础的逻辑推论，并得出结论。 1、结果 ① 实验现象： 1) 加入蒸馏水、蛋白样品和碱性硫酸铜溶液后，溶液均呈无色。 2) 加入Folin-酚试剂后，溶液均呈黄色。 试剂（ml ） 1 2 3 4 5 6 牛血清蛋白标准液 - 0.2 0.4 0.6 0.8 - 样品液（稀释300倍） - - - - - 0.5 蒸馏水 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.5 碱性硫酸铜溶液 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 蛋白质的含量（μg/ml ） 40 80 120 160 待测
相关标准和依据 本方法主要依据GB/ 《公共场所空气中甲醛测定方法》。 原理 空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物。根据颜色深浅，比色定量。 测量范围 测定范围为 ~ μg，采样体积为10L时，可测浓度范围 ~ mg/m3。试剂 本法中所用水均为重蒸馏水或去离子交换水；所用的试剂纯度一般为分析纯。 H.2.4.1 吸收液原液：称量0.10g酚试剂[C6H4SN（CH3）C：NNH2·H Cl，简称MBTH]，加水溶解，置于100mL容量瓶中，加水至刻度。放冰箱中保存，可稳定三天。 H.2.4.2 吸收液：量取吸收原液5mL，加95mL水，即为吸收液。采样时，临用现配。 1%硫酸铁铵溶液：称量1.0g硫酸铁铵（NH4Fe(SO4) 2·12H 2O）用L 盐酸溶解，并稀释至100mL。
L碘溶液：称量40g碘化钾，溶于25mL水中，加入12.7g碘。待碘完全溶解后，用水定容至1000mL。移入棕色瓶中，暗处贮存。 1mol/L氢氧化钠溶液：称量40g氢氧化钠，溶于水中，并稀释至1 000mL。 L硫酸溶液：取28mL浓硫酸缓慢加入水中，冷却后，稀释至1000 mL。 H.2.4.7 硫代硫酸钠标准溶液[c（Na2S2O3）=L]：可购买标准试剂配制。 %淀粉溶液：将0.5g可溶性淀粉，用少量水调成糊状后，再加入1 00mL沸水，并煮沸2~3 min至溶液透明。冷却后，加入0.1g水杨酸或0.4g氯化锌保存。 H.2.4.9 甲醛标准贮备溶液：取含量为 36 %~38 %甲醛溶液，放入1L容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液1mL约相当于1mg甲醛。其准确浓度可按方法标定。 H.2.4.10 甲醛标准溶液：临用时，将甲醛标准贮备溶液用水稀释成含10μg甲醛溶液，立即再取此溶液，加入100mL容量瓶中，加入5 mL吸收原液，用水定容至100mL，此液含μg甲醛，放置30min后，用于配制标准色列。此标准溶液可稳定24h。 仪器和设备
室内空气甲醛的测定酚试剂分光光度法 1. 原理 空气中的甲醛与酸试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物。根据颜色深浅，比色定量。 2. 测量范围 测定范围为0.1~1.5μg，采样体积为10L时，可测浓度范围0.01~0.15mg/m3。 3. 试剂 本法中所用水均为重蒸馏水或去离子交换水；所用的试剂纯度一般为分析纯。 3.1 吸收液原液：称量0.10g酚试剂，简称MBTH，加水溶解，置于100ml容量瓶中，加水至刻度。放冰箱中保存，可稳定3d。 3.2 吸收液：量取吸收原液5ml，加95ml水，即为吸收液。采样时，临用现配。 3.3 1%硫酸铁铵溶液：称量l.0g硫酸铁铵（NH4Fe (SO4)2·12H2O)用0.1mol/L盐酸溶解，并稀释至100ml。 3.4 0.1000mol/L碘溶液：称量40g碘化钾，溶于25ml水中，加人12.7g碘。待碘完全溶解后，用水定容至1000ml。移入棕色瓶中，暗处贮存。 3.5 lmol/L氢氧化钠溶液：称量40g氢氧化钠，溶于水中，并稀释至1000ml。3.6 0.5mol/L硫酸溶液：取28ml浓硫酸缓慢加人水中，冷却后，稀释至1000ml。 3.7 硫代硫酸钠标准溶液[c(Na2S2O3)=0.1000mol/L]：可购买标准试剂配制。 3.8 0.5%淀粉溶液：将0.5g可溶性淀粉，用少量水调成糊状后，再加人100ml 沸水，并煮沸2~3min至溶液透明。冷却后，加人0.1g水杨酸或0.4g氯化锌保存。 3.9 甲醒标准贮备溶液：取2.8ml含量为36% ~ 38%甲醛溶液，放人1L容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液lml约相当于lμg甲醛。 3.10 甲醛标准溶液：临用时，将甲醛标准贮备溶液用水稀释成1.00ml含10μg 甲醛溶液，立即再取此溶液10.00ml，加入100ml容量瓶中，加人5ml吸收原液，用水定容至100ml，此液1.00ml 含l.00μg甲醛，放置30min后，用于配制标准色列。此标准溶液可稳定24h。 4. 仪器和设备
空气中甲醛检测方法酚试剂分光光度 法
空气中甲醛检测方法-----酚试剂分光光度法1．原理 空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化成蓝绿色化合物，根据颜色深浅，比色定量。 2．仪器设备2.1气泡采样管(5)或多孔玻板采样管； 2.2QC-2A大气采样(2)仪或TMP1500电子控时采样器； 2.3 10mL具塞比色管(10)； 2.4 723型可见分光光度计。3．药品试剂 本法中所用水均为重蒸馏水或去离子交换水，所用试剂纯度均为分析纯。
3.1吸收原液(C(MBTH)=0.001g/mL)：称量0.050g酚试剂(MBTH)，用水溶解后稀释至50mL(贮于冰箱中可稳定三天)。 3.2吸收液(C(MBTH)=0.00005g/mL)：量取5 mL吸收原液，用水稀释至100mL(采样时，临用现配)。 3.3 0.1mol/L盐酸：量取浓盐酸(C摩(mol/L)=C质(%)×ρ总(g/mL)×1000/M(g/mol)=12mol/L)8.33mL，用水稀释至1000mL。 3.4 1%硫酸铁铵溶液：称量1.0g硫酸铁铵，用0.1mol/L盐酸溶解后稀释至100mL。 3.5碘溶液(C(1/2I2)=0.1000mol/L)：以下两种方法二选其一，若有可能，则优先采取 3.5.2的方法。 3.5.1准确称量40g碘化钾，溶于25mL水中，加12.7g碘，用水溶解后稀释至1000mL(移入棕色瓶中，暗处贮存)； 3.5.2外购试剂进行当量换算：精确量取外购碘溶液V取
(mL)=100/C摩(mol/L)(BR(1/2I2)浓度C摩(mol/L)见说明书，C摩(mol/L)≥0.1000mol/L)，用水稀释至1000mL(移入棕色瓶中，暗处贮存)。 3.6 1mol/L氢氧化钠溶液：称量40g氢氧化钠，用水溶解后稀释至1000mL。 3.7 0.5mol/L硫酸溶液：量取浓硫酸(C摩(mol/L)=C质(%)×ρ总(g/mL)×1000/M(g/mol)=18mol/L)28mL，缓慢加入水中，冷却后用水稀释至1000mL。 3.8硫代硫酸钠标准溶液(C(Na2S2O3)=0.1000mol/L)：外购试剂(BR(Na2S2O3)浓度C摩(mol/L)见说明书)。 3.9 0.005g/mL淀粉溶液：称量0.5g可溶性淀粉，用少量水调成糊状后，加入100mL沸水，并煮沸2~3min至溶液透明(标定时，临用现配)。 3.10甲醛标准贮备溶液(C(HCOH)≈1mg/mL)：量取2.8mL含量为36%~38%甲醛溶液，用水稀释至1000mL(实际浓度C(mg/mL)按5.1.1~5.1.10用碘量法标定)。