丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用
竞争性抑制作用是指，当抑制剂在结构上与底物类似，能与底物竞争酶分子活性中心的结合基团，从而阻碍酶与底物结合。它是可逆的，抑制作用的强弱取决于抑制剂与底物的相对浓度。丙二酸对琥珀酸脱氢酶有竞争性抑制作用。丙二酸的结构和琥珀酸非常相似，可竞争性地与酶的活性中心结合，使其不能与琥珀酸结合。因此可通过研究不同浓度比例的丙二酸和琥珀酸，观察其对琥珀酸脱氢酶活性的影响。
1实验材料
1.1酶提取液实验室提供
1.2仪器滴管；玻璃棒；试管6支
1.3试剂0.2mol/L琥珀酸；0.02mol/L琥珀酸；0.2mol/L丙二酸；0.02mol/L丙
二酸；0.02％甲烯蓝；液体石蜡；蒸馏水
2实验方法
2.1实验原理
琥珀酸经琥珀酸脱氢酶催化，脱氢生成延胡索酸。在体外隔绝空气条件下，从琥珀酸上脱下的一对氢可由人工受氢体甲烯蓝（蓝色）接受后，被还原成甲烯白。抑制剂丙二酸竞争琥珀酸脱氢酶的活性中心，阻碍底物与该酶的结合和催化反应，使甲烯蓝褪色的速度变慢。丙二酸对该酶的抑制程度取决于其与琥珀酸的相对浓度比例。
2.2实验设计
2.2.1竞争性抑制作用鉴定
取6支试管，按下表操作：
试剂\管号 1 2 3 4 5 6
酶提取液20 20 20 20 20 - 0.2mol/L琥珀酸10 10 10 - - 10 0.02mol/L琥珀酸- - - 10 10 - 0.2mol/L丙二酸- 10 - 10 - - 0.02mol/L丙二酸- - 10 - 10 -
蒸馏水10 - - - - 25 0.02％甲烯蓝 4 4 4 4 4 4
各管混匀
液体石蜡15 15 15 15 15 15
放置室温
不断观察各管甲烯蓝褪色置甲烯白（即呈肝匀浆色）的时间，比较各管顺序。
3实验结果
记录各管褪色顺序，得下表：
管号 1 2 3 4 5 6
顺序 1 3 2 5 4 6 1号管中无抑制剂（丙二酸），所以琥珀酸在酶的催化下脱氢，使甲烯蓝褪色速度最快。3号管中底物与抑制剂比例为10:1，所以褪色速度次之。2号管和
5号管中比例为1:1，速度排第3与第4。4号管浓度比为1:10，速度排第5。6号管为对照管。底物与抑制剂相对浓度比例决定了竞争性抑制的程度，也决定了甲烯蓝褪色的速度。
4讨论
通过本实验，可以证实，丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制性作用，取决于底物（琥珀酸）与抑制剂（丙二酸）的相对浓度比例。底物浓度增加，抑制作用减弱。抑制剂浓度增加，抑制作用加强。
在实验过程中要注意实验的同步性。正确计算反应时，得出正确的褪色顺序，是定性实验的关键点。
实验一酶的底物专一性 一、实验目的 了解酶的专一性，掌握检查酶的专一性的原理和方法，学会排除干扰因素，设计酶学实验 二、实验原理 （1）酶的专一性。 酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化作用。如淀粉酶只能催化淀粉水解，对蔗糖的水解无催化作用。按照酶的专一性程度分为： 键专一性（只要求作用于一定类型的键，对键两端的基团无严格的要求，如脂酶，核酶）。 基团专一性(又叫族专一性，只对键两端的其中一个基团要求严格，如α-、β-葡萄糖苷酶，转移酶)。 绝对专一性（只作用于一种底物，如某些核酸工具酶）。 立体异构专一性（旋光异构专一性和几何异构专一性）。 （2）淀粉和蔗糖的结构 淀粉有2种：直链淀粉和支链淀粉。直链淀粉是由200～300个α-葡萄糖以α-1,4糖苷键相连成一直链，支链淀粉不仅有α-1,4糖苷键，还有α-1,6糖苷键，从而在直链淀粉的基础上形成分支。 蔗糖是双糖，由α-葡萄糖和β-果糖以α-1,2糖苷键相连而成。 （3）Benedict反应 Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成氧化亚铜（Cu2O）砖红色沉淀。淀粉和蔗糖都不能反应，而它们的水解产物葡萄糖能够发生Benedict反应，所以，以颜色反应来观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的水解作用。本实验分别以唾液淀粉酶（内含淀粉酶及少量麦芽糖酶）、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的催化作用，观察淀粉酶、蔗糖酶的底物专一性 三、试剂 （1）干酵母、可溶性淀粉或食用淀粉、蔗糖、NaCL、柠檬酸钠、无水碳酸钠、硫酸铜。 （2）新鲜淀粉酶溶液：唾液1ml 倒入10ml量筒中（不包括泡沫），用蒸馏水稀释到70ml，静置10分钟后，去掉上层泡沫和下层的沉淀。 （3）蔗糖酶溶液：干酵母2.5g置研钵中，加半勺石英沙及蒸馏水少许（约4ml），用力研磨10分钟，转移到50ml离心管中，另用25ml蒸馏水洗涤研钵，并将洗涤液一起转移到离心管中，摇匀，静置5分钟，4000r/min离心5分钟，小心取出上清液（含
酸性磷酸酯酶的固定化研究 指导老师：罗少华 化学与生命科学学院 1 课题来源 化学与生命科学学院安排生物工程专业综合与创新实验课题。 2 研究的目的和意义 3 阅读的主要文献、资料 [1] 韩文静. 固定化酶的新型制备方法及其在食品工业中的应用[J]. 食品工业科 技,2009,30(02):345-347. [2] 张茜,刘涛,侯红萍. 提高固定化酶活力方法的研究进展[J]. 酿酒,2008,35(1):15-17. [3] 周桓,张秋禹. 新型固定化酶载体的合成及其功能[J]. 化工进展,2009,28(3):462. [4] [5] [6]蒋中华，张津辉. 生物分子固定化技术及应用[M]. 北京:化学工业出版社，1998.178. [7]丁明,孙虹,康玲. 壳聚糖微球的制备研究[J] . 合肥联合大学学报,1998 ,2 :7211. [8] A.怀斯曼.酶生物技术手册，科学技术出版社，1989. [9] [10] 肖海军，赫筱蓉.固定化酶及其应用研究进展，生物学通报，2001，36(7)：9-10. [11] 卓仁禧，罗毅，陶国良.固定化酶技术及其进展，离子交换与吸附，1994，(5)：447-452 [12] 罗九甫. 酶和酶工程，上海交通大学出版社，1996年. [13] 熊振平，等. 酶工程，化学工业出版社，1989年. [14] [15] 王长生，田玉国. 酶的固定化技术[J]. 中国调味品，1994，12：7-9. [16] 沈斌. 木瓜蛋白酶的柔性固定化研究[J]. 南京工业大学硕士学位论文，2005 [17] 魏荣卿，沈斌，等. 壳聚糖载体柔性固定化木瓜蛋白酶[J], 过程工程学报, 2005,5(2):183-187.
《探究酶的专一性》的说课稿 江西省玉山县樟村中学童长春 各位评委老师、各位同仁大家早上好，今天我说课的实验题目是《探究酶的专一性》，下面我将从教材分析、学情分析、实验教学方法、实验教学过程、实验教学反思及自我评价这六个方面进行我的说课。 一、说教材分析 （一）、课程的地位和作用：“酶的专一性”是人教版《（必修1）》分子与细胞第五单元第一节的内容。本节内容是在“酶的作用和本质”的基础上，进一步理解酶的特性，理解实验探究方案设计原则及变量的控制，。同时参阅江西省生物教学课程标准和考纲要求，设定本课的重点是建构酶的特性知识体系，进一步探究酶的专一性；难点是如何进行酶的专一性的实验创新设计与实施。 （二）、实验教学目标。依据新课标要求,本着体现提高学生的科学素养、提倡合作探究的理念，培养学生实验探索的能力,提高学生发现问题、分析问题、解决问题的能力，确定以下目标： 1、知识与能力 概述酶的特性的知识体系。通过学生主动参与科学探究的实验活动，掌握科学探究的程序和方法，理解探究性实验设计的基本原则，培养学生创造性思维的能力和动手实践的能力。 2、过程与方法目标 本课设计的基本模式就是：教师引导——合作交流——创新方案——实验探究——精讲点拨——拓展延伸。 3、情感态度和价值观目标 通过对酶的专一性的探究性实验，培养学生崇尚科学的态度和实事求是的精神。培养学生敢于质疑，科学严谨的意志品质和勇于创新的精神。 二、学情分析 高一学生已具备了以下与本节学习相关的知识和技能：①在初中阶段学习了多种消化酶在食物消化中的作用，并且做了“观察唾液淀粉酶对淀粉有消化作用”的实验。②通过上节课对“酶的高效性”的学习，初步掌握了对照实验的设计与操作方法、自变量和无关变量的分析与控制方法。然而，学生对于课本实验进行进一步改进的实验方案设计以及具体实验操作细节上，还有较大的不足。
第三章酶 一、填空题 1、根据酶对底物选择的严格程度不同，可将酶的专一性分为、、和三大类。 2、影响酶促反应速度的因素有、、、、 和。 3、米氏常数（Km）为反应速度达到一半时的，其单位为。 4、某些调节酶（寡聚酶）ひ对[S]作图时形成型曲线，这是底物与酶分子上专一性结合部位结合后产生的一种效应而引起的。 5、维生素B5构成的两种辅酶为和，这两种辅酶的作用是。 6、酶的动力学曲线为型；但变构酶的动力学曲线呈型。 7、酶的调节分为与调节。 8、缺乏维生素A和维生素D引起的疾病分别是、。 9、硫胺素在体内形成的辅酶和功能分别是_____________和____________ 。缺乏维生素C 引起的疾病是_____________。 二、选择题 1、酶作为一种生物催化剂，能加快化学反应速度的原因是酶能够（） A、升高反应的活化能 B、降低活化能 C、降低反应物的能量水平 D、降低反应的自由能 2、根据中间产物学说推导了能够表示整合酶促反应中底物浓度和反应速度关系公式的两位科学家是（） A、Michaelis和Menten B、Meselson和Stahl C、Hatch和Slack D、Miescher和Hoppe 3、酶活性中心是（） A、在一级结构水平上形成 B、在二级结构水平上形成 C、在三级结构水平上形成 D、在核酸指导下形成 4、酶促反应中决定酶专一性的部分是（） A、酶蛋白 B、底物 C、辅酶或辅基 D、催化基团 5、某酶今有4种底物(S)，其Km值如下，该酶的最适底物为（） A、S1：Km＝5×10-5M B、S2：Km＝1×10-5M C、S3：Km＝10×10-5M D、S4：Km＝0.1×10-5M 6、酶的非竞争性抑制剂对酶促反应的影响是（） A、Vmax不变，Km增大 B、Vmax不变，Km减小 C、Vmax增大，Km不变 D、Vmax减小，Km不变 7、有机磷农药是酶的（）
丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 竞争性抑制作用是指，当抑制剂在结构上与底物类似，能与底物竞争酶分子活性中心的结合基团，从而阻碍酶与底物结合。它是可逆的，抑制作用的强弱取决于抑制剂与底物的相对浓度。丙二酸对琥珀酸脱氢酶有竞争性抑制作用。丙二酸的结构和琥珀酸非常相似，可竞争性地与酶的活性中心结合，使其不能与琥珀酸结合。因此可通过研究不同浓度比例的丙二酸和琥珀酸，观察其对琥珀酸脱氢酶活性的影响。 1实验材料 1.1酶提取液实验室提供 1.2仪器滴管；玻璃棒；试管6支 1.3试剂0.2mol/L琥珀酸；0.02mol/L琥珀酸；0.2mol/L丙二酸；0.02mol/L丙 二酸；0.02％甲烯蓝；液体石蜡；蒸馏水 2实验方法 2.1实验原理 琥珀酸经琥珀酸脱氢酶催化，脱氢生成延胡索酸。在体外隔绝空气条件下，从琥珀酸上脱下的一对氢可由人工受氢体甲烯蓝（蓝色）接受后，被还原成甲烯白。抑制剂丙二酸竞争琥珀酸脱氢酶的活性中心，阻碍底物与该酶的结合和催化反应，使甲烯蓝褪色的速度变慢。丙二酸对该酶的抑制程度取决于其与琥珀酸的相对浓度比例。 2.2实验设计 2.2.1竞争性抑制作用鉴定 取6支试管，按下表操作： 试剂\管号 1 2 3 4 5 6 酶提取液20 20 20 20 20 - 0.2mol/L琥珀酸10 10 10 - - 10 0.02mol/L琥珀酸- - - 10 10 - 0.2mol/L丙二酸- 10 - 10 - - 0.02mol/L丙二酸- - 10 - 10 - 蒸馏水10 - - - - 25 0.02％甲烯蓝 4 4 4 4 4 4 各管混匀 液体石蜡15 15 15 15 15 15 放置室温 不断观察各管甲烯蓝褪色置甲烯白（即呈肝匀浆色）的时间，比较各管顺序。 3实验结果 记录各管褪色顺序，得下表： 管号 1 2 3 4 5 6 顺序 1 3 2 5 4 6 1号管中无抑制剂（丙二酸），所以琥珀酸在酶的催化下脱氢，使甲烯蓝褪色速度最快。3号管中底物与抑制剂比例为10:1，所以褪色速度次之。2号管和
酶固定化技术研究进展 选题说明 酶作为一种生物催化剂，具有高催化效率，高选择性，催化反应条件温和，清洁无污染等特点，其卓越的催化效能，令普通无机催化剂难以望其项背，因此酶的工业化使用一直是广受社会关注的课题，但天然酶稳定性差、易失活、不能重复使用，并且反应后混入产品，纯化困难，使其难以在工业中更为广泛的应用。此外，分离和提纯酶以及其一次性使用也大大增加了其作为催化剂的成本，严重限制了酶的工业推广。在此条件下，固定化酶的概念和技术得以提出和发展，并成为近些年酶工程研究的重点。酶的固定化，是用固体材料将酶束缚或限制于一定区域内，仍能进行其特有的催化反应，并可回收及重复使用的一类技术。通过固定化，可以解决天然酶的局限性，实现酶的广泛运用。 基于对于酶的工业化使用和固定化酶的兴趣，我通过互联网和数据库信息检索的方式对酶的固定化技术发展状况进行了初步探索，并对目前的研究成果进行了简要的概括。希望能使大家对这一领域有所认识。 检索过程说明 1，检索工具和数据库 1.1，百度搜索引擎 1.2，Google搜索引擎 1.3，中国期刊全文数据库 1.4，万方数据系统 1.5，重庆维普中文科技期刊数据库 2，检索过程简述
首先，我选择了使用百度和Google搜索引擎进行关键词检索，都得到了浩繁的搜索结果，所的信息主要是百科简介和企业广告信息，介绍较为浅显陈旧，可利用性较差，但可以用于简单的信息了解，在搜素过程中，尝试使用了布尔检索规则如“固定化酶and应用”、高级检索和结果中检索的检索方式，以减小数据量。也尝试了Google学术搜索，得到了很多有用信息。运用维普中文科技期刊数据库搜素“题名或关键词”为“固定化酶”的相关资料得到655条，搜素“题名或关键词”为“固定化酶应用”的相关资料得到72条，检索关键词搜素“题名或关键词”为“固定化酶研究”的相关资料得到4条. 万方数据系统搜索主题词"固定化酶",得到相关资料1024条，搜索“固定化酶技术应用”得到相关资料23条.。中国期刊全文数据库中检索“固定化酶技术”得到相关资料2604条，搜索“固定化酶技术应用”得到相关资料742条 关键词 酶固定化载体制备研究应用 酶固定化技术研究进展 提要： 固定化酶有许多优点，尤其是稳定性和可重复使用性使其在许多领域得到广泛应用。固定化酶技术是一门交叉学科技术。目前已得到长足的发展。本文重点介绍了固定化酶制备的传统方法和近些年出现的一些新方法，同时对酶在一些性能优良的栽体上的固定进行了综述。 正文： 一，传统的酶固定化方法
－－第三章酶测试题－－ 一、单项选择题（在备选答案中只有一个是正确的） 1．关于酶的叙述哪项是正确的？ A．所有的酶都含有辅基或辅酶B．只能在体内起催化作用C．大多数酶的化学本质是蛋白质 D．能改变化学反应的平衡点加速反应的进行E．都具有立体异构专一性（特异性） 2．酶原所以没有活性是因为： A．酶蛋白肽链合成不完全B．活性中心未形成或未暴露C．酶原是普通的蛋白质 D．缺乏辅酶或辅基E．是已经变性的蛋白质 3．磺胺类药物的类似物是： A．四氢叶酸B．二氢叶酸C．对氨基苯甲酸D．叶酸E．嘧啶 4．关于酶活性中心的叙述，哪项不正确？ A．酶与底物接触只限于酶分子上与酶活性密切有关的较小区域B．必需基团可位于活性中心之内，也可位于活性中心之外C．一般来说，总是多肽链的一级结构上相邻的几个氨基酸的残基相对集中，形成酶的活性中心D．酶原激活实际上就是完整的活性中心形成的过程E．当底物分子与酶分子相接触时，可引起酶活性中心的构象改变 5．辅酶NADP+分子中含有哪种B族维生素？ A．磷酸吡哆醛B．核黄素C．叶酸D．尼克酰胺E．硫胺素
6．下列关于酶蛋白和辅助因子的叙述，哪一点不正确？ A．酶蛋白或辅助因子单独存在时均无催化作用B．一种酶蛋白只与一种辅助因子结合成一种全酶C．一种辅助因子只能与一种酶蛋白结合成一种全酶D．酶蛋白决定结合酶蛋白反应的专一性E．辅助因子直接参加反应 7．如果有一酶促反应其〔8〕=1/2Km，则v值应等于多少Vmax？ A．0．25 B．0．33 C．0．50 D．0．67 E．0．75 8．有机磷杀虫剂对胆碱酯酶的抑制作用属于： A．可逆性抑制作用B．竞争性抑制作用C．非竞争性抑制作用D．反竞争性抑制作用E．不可逆性抑制作用 9．关于pH对酶活性的影响，以下哪项不对？ A．影响必需基团解离状态B．也能影响底物的解离状态C．酶在一定的pH范围内发挥最高活性D．破坏酶蛋白的一级结构E．pH改变能影响酶的Km值10．丙二酸对于琥珀酸脱氢酶的影响属于： A．反馈抑制B．底物抑制C．竞争性抑制D．非竞争性抑制E．变构调节二、多项选择题（在备选答案中有二个或二个以上是正确的，错选或未选全的均不给分） 1．关于酶的竞争性抑制作用的说法哪些是正确的？ A．抑制剂结构一般与底物结构相似B．Vm不变C．增加底物浓度可减弱抑制剂的影响D．使Km值增大 2．关于酶的非竞争性抑制作用的说法哪些是正确的？ A．增加底物浓度能减少抑制剂的影响B．Vm降低C．抑制剂结构与底物无相似之处D．Km值不变
实验四酶的竞争性抑制作用 一、目的要求： 通过实验加深对酶的竞争性抑制作用的了解 二、实验原理： 与底物化学结构类似的抑制剂，能与底物竞争和酶活性中心的结合、抑制酶的活性，这种类型的抑制为竞争性抑制。竞争性抑制的程度由抑制剂与底物相对浓度决定。如果底物浓度不变，酶活性被抑制的程度随抑制剂的浓度增加而增强。反之，如果抑制剂浓度不变，则酶活性随底物浓度的增加而逐渐恢复。 本实验观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的影响。琥珀酸脱氢酶的活性，在隔绝空气的条件下，可从加入的甲烯蓝褪色情况来观察。 COOH COOH ︳︳ CH2 琥珀脱氢酶CH ︳+ 甲烯蓝——————→‖+ 甲烯白 CH2 CH ︳︳ COOH COOH 三、实验材料 1、试剂： （1）0.2 mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸23.618g，用蒸馏水配成约600ml ,用5mol/L NaOH 调pH至7.4，再加水至1000ml （2）0.02mol/L琥珀酸：用0.2 mol/L 琥珀酸稀释10倍 （3）0.2 mol/L 丙二酸：称取丙二酸22.92g ，用蒸馏水配成约600ml ，5mol/L NaOH调pH 至7.4，再加水至1 000ml （4）0.02mol/L丙二酸：用0.2 mol/L丙二酸稀释10倍 （5）0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4）：取0.2 mol/L Na2HPO4 19ml ，加蒸馏水至200ml (6) 0.02%甲烯蓝 （7）液体石蜡 2、器材 （1）小试管及试管架（2）吸量管（10ml *1）及滴管（8支）（3）研钵 四、实验方法 1、心肌匀浆的制备：取动物（鼠、猪等）心肌1g，置研钵中，剪碎，研磨成匀浆，再加入0.1mol/L 磷酸盐缓冲液10ml ，磨匀，备用 2、取小试管5支并编号，按下表操作：
固定化酶的研究进展 固定化酶是20世纪60年代发展起来的一项新技术。最初主要是将水溶性酶与不溶性体结合起来，成为不溶于水的酶衍生物，所以曾叫过“水不溶酶”和“固相酶”。但是，后来发现，也可以将酶包埋在凝胶内或置于超滤装置中，高分子底物与酶在超滤膜一边，而反应产物可以透过膜逸出。在这种情况下，酶本身仍是可溶的，只不过被固定在一个有限的空间内不能再自由流动。因此，用水不溶酶或固相酶的名称就不再恰当。在1971年第一届国际酶工程会议上，正式建议采用“固定化酶”的名称[1]。 一固定化酶的发展历程[1] 酶参与体内各种代谢反应，而且反应后其数量和性质不发生变换。作为一种生物催化剂，酶可以在常温常压等温和条件下高效地催化反应，一些难以进行的化学反应在酶的催化作用下也可顺利地进行反应，而且反应底物专一性强、副反应少等优点大大促进了人们对酶的应用和酶技术的研究。近年来，酶被人们广泛应用于食品生产与检测、生物传感器、医药工程、环保技术、生物技术等领域。 1916年美国科学家NELSON和GRIFFIN最先发现了酶的固定化现象；直到20世纪50年代，酶固定化技术的研究才真正有效地开展；1953年，德国科学家GRUB-HOFER 和SCHLEITH首先将聚氨基苯乙烯树脂重氮化，然后将淀粉酶、胃蛋白酶、羧肽酶和核糖核酸酶等与上述载体结合制备固定化酶；到20世纪60年代，固定化技术迅速发展；1969年日本千畑一郎利用固定化氨基酰胺酶从DL-氨基酸生产L-氨基酸，是世界上固定化酶大规模应用的首例；在1971年的第一届国际酶工程会议上，正式建议使用固定化酶(mimobilizedenzyme)这个名称。我国的固定化酶研究开始于1970年，首先是中国科学院微生物所和上海生化所的酶学工作者同时开始了固定化酶的研究工作 二固定化酶的特点[2] [3] 固定化酶具有许多优点：极易将固定化酶与底物、产物分开；可以在较长时间内进行分批反应和装柱连续反应；在大多数情况下，可以提高酶的稳定性；酶反应过程能够加以严格控制；产物溶液中没有酶的残留，简化了提取工艺；较水溶性酶更适合于多酶反应；可以增加产物的收率,提高产物的质量；酶的使用效率提高，成本降低。但是，固定化酶也有其不足之处，如固定化时，酶活力有损失；增加了固定化的成本，工厂开始投资大；只能用于水溶性底物，而且较适用于小分子。 三固定化酶固定化方法[3] [4] 由于所固定的酶或细胞的不同，或者固定的目的及固定用的载体的不同，使固定化方法大相径庭。根据固定的一般机理，可将之分为如下几种方法。酶的固定化方法有：
酶 一、选择题 （一） A 型题 ? 酶的活性中心是指 A ．结合抑制剂使酶活性降低或丧失的部位 B ．结合底物并催化其转变成产物的部位 C ．结合别构剂并调节酶活性的部位 D ．结合激活剂使酶活性增高的部位 E ．酶的活性中心由催化基团和辅酶组成 ? 酶促反应中，决定反应特异性的是 A ．酶蛋白 B ．辅酶 C ．别构剂 D ．金属离子 E ．辅基 ? 关于酶的叙述正确的是 A ．酶是生物催化剂，它的化学本质是蛋白质和核酸 B ．体内的生物催化剂都是蛋白质 C ．酶是活细胞合成的具有催化作用的蛋白质 D ．酶改变反应的平衡点，所以能加速反应的进程 E ．酶的底物都是有机化合物 ? 酶蛋白变性后活性丧失原因是 A ．酶蛋白被完全降解为氨基酸 B ．酶蛋白的一级结构受到破坏 C ．酶蛋白的空间结构受到破坏 D ．酶蛋白不再溶于水 E ．失去了激活剂 ? 含有维生素 B 1 的辅酶是 A ． NAD + B ． FAD C ． TPP D ． CoA E ． FMN ? 解释酶的专一性较合理的学说是 A ．锁 - 钥学说 B ．化学渗透学说 C ．诱导契合学说 D ．化学偶联学说 E ．中间产物学说 ? 酶的竞争性抑制剂的特点是 A ．当底物浓度增加时，抑制剂作用不减 B ．抑制剂和酶活性中心的结合部位相结合 C ．抑制剂的结构与底物不相似 D ．当抑制剂的浓度增加时，酶变性失活 E ．抑制剂与酶的结合是不可逆的 8 ．磺胺类药物能抑菌，是因为细菌利用对氨基苯甲酸合成二氢叶酸时，磺胺是二氢叶酸合成酶的 A ．竞争性抑制剂 B ．不可逆抑制剂 C ．非竞争性抑制剂 D ．反竞争性抑制剂 E ．别构抑制剂 9 ．关于酶的共价修饰，正确的是 A ．活性中心的催化基团经修饰后，改变酶的催化活性 B ．通过打断某些肽键，使酶的活性中心形成而改变酶的活性 C ．只涉及酶的一级结构的改变而不涉及高级结构的改变 D ．有级联放大效应 E ．只包括磷酸化修饰和甲基化修饰
固定化技术研究进展 摘要：固定化酶技术作为一门交叉学科技术，在生命科学、生物医学、食品科学、化学化工及环境科学领域得到了广泛应用。新型载体材料的合成是今后固定化酶发展的一个非常重要的研究领域。本文主要介绍了固定化酶的载体，固定化技术以及在不同行业的应用，主要介绍了在污水处理和医疗行业的应用和发展趋势。 关键词：固定化载体污水医疗应用 酶是重要的生物催化剂，具有专一性强、催化效率高、无污染、反应条件温和等特点，在制药、食品、环保、酿造、能源等领域都得到了广泛的应用。但在实际应用中，酶也存在许多不足，如大多数的酶在高温、强酸、强碱和重金属离子等外界因素影响下，都容易变性失活，不够稳定；与底物和产物混在一起，反应结束后，即使酶仍有很高的活力，也难于回收利用，这种一次性使用酶的方式，不仅使生产成本提高，而且难于连续化生产；并且分离纯化困难，也会导致生产成本的提高等。固定化酶技术(Immobilized enzyme technology)克服了酶的上述不足。酶的固定化是指采用有机或无机固体材料作为载体，将酶包埋起来或束缚、限制于载体的表面和微孔中，使其仍具有催化活性，并可回收及重复使用的酶化学方法与技术。 1.传统酶固定化技术 传统酶的固定化方法可分为吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等4 种。吸附法是指通过载体表面和酶表面间的次级键相互作用而达到酶固定化的方法，根据吸附剂的特点又可分为物理吸附和离子交换吸附。该法具有操作简便、条件温和及吸附剂可反复使用等优点，但也存在吸附力弱，易在不适pH、高盐浓度、高底物浓度及高温条件下解吸脱落的缺点。共价偶联法是将酶的活性非必须侧链基团与载体的功能基通过共价键结合，故表现出良好的稳定性，有利于酶的连续使用，是目前应用和研究最为活跃的一类酶固定化方法，但共价偶联反应容易使酶变性而失活。交联法是利用双功能或多功能基团试剂在酶分子之间交联架桥固定化酶的方法，其更易使酶失活。包埋法包括网格包埋、微囊型包埋和脂质体包埋等，包埋法中因酶本身不参与化学结合反应，故可获得较高的酶活力回收，其
高三生物—— 活动：探究酶的专一性 实验解读 1．实验原理 淀粉(非还原糖)――→水解 麦芽糖(还原糖)； 蔗糖(非还原糖)――→水解葡萄糖(还原糖)＋果糖(还原糖)； 还原糖＋本尼迪特试剂―――→沸水浴 加热红黄色沉淀。 2．实验步骤 试管 1 2 3 4 5 6 1%淀粉溶液 3 mL － 3 mL － 3 mL － 2%蔗糖溶液 － 3 mL － 3 mL － 3 mL 新鲜唾液 － － 1 mL 1 mL － － 蔗糖酶溶液 － － － － 1 mL 1 mL 温度处理 37 ℃恒温水浴保温15 min 本尼迪特试剂 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 水浴加热 沸水浴2～3 min 实验结果 不出现 红黄色沉淀 不出现红黄色沉淀 出现红黄色沉淀 不出现红黄色沉淀 不出现红黄色沉淀 出现红黄色沉淀 3.结论：酶具有专一性。 1．酶的专一性的实验探究方法——对比法 (1)设计思路：常见的方案有两种，即底物相同但酶不同或底物不同但酶相同，最后通过观察酶促反应能否进行得出结论。 (2)设计方案 项目 方案一 方案二 实验组 对照组 实验组 对照组 材料 同一种底物(等量) 与酶相对应的底物 另外一种底物 试剂 与底物相对应的酶 另外一种酶 同一种酶(等量)
现象发生反应不发生反应发生反应不发生反应 结论酶具有专一性酶具有专一性 2.变量分析 (1)自变量：不同底物或不同酶液。 (2)因变量：底物是否被分解或有无产物生成。 (3)无关变量：试剂量、反应温度、pH等。 命题点一实验原理、步骤和现象 1．(2019·浙江稽阳联考)下表为“探究酶的专一性”的实验数据，下列相关叙述正确的是() 试管123456 本尼迪特试剂/mL222222 1%淀粉溶液/mL3\3\3\ 2%蔗糖溶液/mL\3\3\3 新鲜唾液/mL\\11\\ 蔗糖酶溶液/mL\\\\11 实验结果 A.1%淀粉溶液中含有一定量的氯化钠 B．按表格将各种溶液分别加入6只试管后，再共同保温一段时间 C．试管3有红黄色沉淀产生，说明有葡萄糖生成 D．若5号试管出现轻度阳性反应，不可能是淀粉溶液中有杂质 答案A 解析氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，所以1%淀粉溶液中含有一定量的氯化钠，A正确；本尼迪特试剂需要在酶促反应完成后加入，过早加入可能会对酶活性造成影响，从而影响实验结果，B错误；利用本尼迪特试剂能检测出试管3有还原糖生成，但不能确定就是葡萄糖，C错误；5号试管出现红黄色沉淀的原因，可能是淀粉溶液中有还原糖类杂质，D错误。2．现有3支试管甲、乙、丙，先向各试管内加入2 mL可溶性淀粉溶液，再按图中所示步骤操作，然后分别用本尼迪特试剂检验。下列说法中不正确的是()
酵母蔗糖酶的提取及性质测定 引论及原理 酶的分离制备在酶学以及生物大分子的结构功能研究中有重要意义。本实验属综合性实验，接近研究性实验，包括八个连续的实验内容，通过对蔗糖酶的提纯和性质测定，了解酶的基本研究过程；同时掌握各种生化技术的实验原理、基本操作方法。本实验技术多样化，并且多个知识点互相联系，实验内容逐步加深，构成了一个综合性整体，为学生提供一个较全面的实践机会，学习如何提取纯化、分析鉴定一种酶，并对这种酶的性质，尤其是动力学性质作初步的研究。 蔗糖酶（invertase ）（β—D —呋喃果糖苷果糖水解酶）（fructofuranoside fructohydrolase ）（EC.3.2.1.26）特异地催化非还原糖中的α—呋喃果糖苷键水解，具有相对专一性。不仅能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，也能催化棉子糖水解，生成密二糖和果糖。每水解1mol 蔗糖，就生成2mol 还原糖。还原糖的测定有多种方法，本实验采用Nelson 比色法测定还原糖量，由此可得知蔗糖水解的速度。 在研究酶的性质、作用、反应动力学等问题时都需要使用高度纯化的酶制剂以避免干扰。酶的提纯工作往往要求多种分离方法交替应用，才能得到较为满足的效果。常用的提纯方法有盐析、有机溶剂沉淀、选择性变性、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等。酶蛋白在分离提纯过程中易变性失活，为能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终注意保持酶的活性如在低温下操作等，这样才能收到较好的分离效果。啤酒酵母中，蔗糖酶含量丰富。本实验用新鲜啤酒酵母为原料，通过破碎细胞，热处理，乙醇沉淀，柱层析等步骤提取蔗糖酶，并对其性质进行测定。 一、蔗糖酶的提取与部分纯化 （一）实验目的 学习酶的提取和纯化方法，掌握各步骤的实验原理，并为后续实验提供一定量的蔗糖酶。 （二）实验原理（略） （三）实验仪器、材料及试剂 仪器 1. 高速冷冻离心机、恒温水浴箱、－20℃冰箱 2. 电子天平、研钵（＞200ml ）、制冰机、50ml 烧杯 3. 离心管（2ml ，10ml ，30ml 或50ml ）、移液器（1000ul ）或滴管、量筒 材料及试剂 1. 市售鲜啤酒酵母（低温保存） ＋ H 2O 蔗糖酶 O H H O
实验八 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 【目的】 验证丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。 【原理】 琥珀酸在琥珀酸脱氢酶催化下脱氢生成延胡索酸，脱下的氢被受氢体接受。本实验用亚甲蓝（MB ）作为受氢体，亚甲蓝接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色的甲烯白（MBH 2）。丙二酸与琥珀酸分子结构相似，能竞争性抑制琥珀酸脱氢酶。通过观察亚甲蓝颜色消退的程度，可以判断丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制程度。 COOH CH CH + MB COOH CH 2CH 2+ MBH 2 琥珀酸 亚甲蓝（蓝色） 延胡索酸 还原性亚甲蓝（无色） 琥珀酸脱氢酶 【器材】 试管及试管架、滴管、剪刀、研钵或20ml 匀浆器、电热恒温水浴箱。 【试剂】 1. 0.1mol/L 磷酸缓冲液（PH7.4） 取0.1mol/L Na 2HPO 4溶液19ml 和0.1mol/L NaH 2PO 4溶液81ml 混合即可。 2. 1.5% 琥珀酸钠溶液 3. 1% 丙二酸钠溶液 4. 0.02% 亚甲蓝溶液 5.液状石蜡 【操作】 1. 取新鲜动物肌肉或肝5g 左右，放入研钵，用剪刀将组织剪碎，然后加入10ml 在冰箱中保存的PH7.4的磷酸缓冲液充分研磨均匀（或在匀浆器内进行匀浆，制备成20%匀浆液）。 2. 取4支试管，编号，按下表操作：
表3-11 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 加入物（滴） 1 2 3 4 匀浆10 10 －10 1.5%琥珀酸钠溶 10 10 10 20 液 1%丙二酸钠溶液－10 10 10 蒸馏水20 10 20 － 0.02%亚甲蓝溶液10 10 10 10 3. 各管混匀后，各加少量液状石蜡覆盖在液体上，置37℃水浴中保温，随时观察各管颜色变化，并记录各管亚甲蓝褪色时间。 【结果及分析】 比较各管亚甲蓝褪色情况，并对实验结果进行分析。 【思考题】 1. 什么是竞争性抑制作用，与非竞争性抑制作用有何不同。 2. 为什么要用石蜡油隔绝空气来进行实验？
探究酶的专一性 一、教学目标 比较唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用。 二、实验原理 含有自由醛基或酮基的单糖和双糖叫还原性糖。在碱性溶液中，还原糖能将金属离子（铜、铋、汞、银等）还原，糖本身被氧化成酸性化合物。此性质常用于检验糖的还原性，并且常称为测定还原糖含量的各种方法的依据。还原糖与碱性硫酸铜可生成砖红色沉淀物。 本尼迪特试剂内含有硫酸铜，因此淀粉水解生成的麦芽糖和蔗糖水解生成的葡萄糖、果糖等还原糖在煮沸的条件下，与本尼迪特试剂会有砖红色沉淀物产生，淀粉和蔗糖（非还原糖）无此反应。本尼迪特试剂可以用来鉴定淀粉和蔗糖溶液中是否有麦芽糖、葡萄糖及果糖，进而推测淀粉和蔗糖是否被水解。 三、教学重难点 1、教学重点：建构酶的特性知识体系，探究酶的专一性。 2、教学难点：实验设计与实施。 四、实验材料与用具 （一）实验材料 稀释200倍的新鲜唾液，质量分数为2%的蔗糖溶液，溶于质量分数为0.3%氯化钠溶液中的淀粉溶液（其中淀粉含量为1%），蔗糖酶溶液，本尼迪特试剂 （二）实验用具 试管，试管架 五、教学过程 【提问】我们已经学习过酶的相关知识，那么它具有哪些特性呢？ 【学生活动】……… 【讲述】酶具有专一性，但是我们还需要实验来验证它。今天的实验就是探究酶的专一性。下面我们来看具体操作步骤。 【PPT展示】 1．取2个试管，分别编为1号、2号。 2．向1号试管中加入本尼迪特试剂2mL，再加入1%的淀粉溶液3mL；2号试管中加入本尼迪特试剂2mL，再加入2%蔗糖溶液3mL。 3．将两个试管内的溶液充分混匀后，放在沸水浴中煮2～3min。观察并记录实验结果（淀粉、蔗糖不产生砖红色沉淀）。 4．再取4支试管，分别编为3号、4号、5号、6号。 5．3号、4号试管中各加入稀释200倍的新鲜唾液1mL；然后在3号试管中加入质量分数为1%的淀粉溶液3mL，在4号试管中加入质量分数为2%的蔗糖溶液3mL。充分混匀后，放在37℃恒温水浴中保温，15min后取出。两管各加本尼迪特试剂2mL，摇匀，放在沸水浴中煮2～3min。观察并记录实验结果。 6．5号、6号试管各加入蔗糖酶溶液1mL，然后在5号试管中加入质量分数为1%的淀粉溶液3mL，在6号试管中加入质量分数为2%的蔗糖溶液3mL。充分混匀后，放在37℃
一.单项选择题 1. 竞争性抑制剂对酶促反应的影响是： A. Km增大，Vm减小 B. Km不变，Vm增大 C. Km减小，Vm减小 D. Km增大，Vm不变 2. 泛酸是下列哪种辅酶的组成成分 A. CoA-SH B. TPP C. FAD D. FMN 3. Km值与底物亲和力大小的关系是 A. Km值越小，亲和力越大 B. Km值越大，亲和力越大 C. Km值的大小与亲和力无关 D. Km值越小，亲和力越小 4. 磺胺类药物的类似物是： A. 四氢叶酸 B. 二氢叶酸 C. 对氨基苯甲酸 D. 叶酸 5. 酶能加速化学反应的进行是由于 A. 向反应体系提供能量 B. 降低反应的活化能 C. 降低反应底物的能量水平 D. 提高反应底物的能量水平 6. NADPH分子中含有哪种维生素 A. 磷酸吡哆醛 B. 核黄素 C. 叶酸 D. 尼克酰胺 7.维生素B2是下列哪种辅酶的组成 成分？ A. FH4 B. NADP+ C. TPP D. FAD 8. 当酶促反应[S]=0.5Km，则V值是 A. 0.25Vm B. 0.33Vm C. 0.50Vm D. 0.65Vm 9. 有机磷杀虫剂对胆碱酯酶的抑制作用是： A. 可逆性抑制作用 B. 竞争性抑制作用 C. 非竞争性抑制作用 D. 不可逆性抑制作用 10. 关于pH值对酶活性的影响，下列哪项不对？ A. 影响必需基团的解离状态 B. 影响底物的解离状态
C. 破坏酶蛋白的一级结构 D. 影响酶与底物结合 11. 维生素D3的主要活性形式是： A. 25-(OH)-D3 B. 1-(OH)-D3 C. 1,25-(OH)2-D3 D. 1,24-(OH)2-D3 12. 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的影响属 于： A. 变构调节 B. 底物抑制 C. 竞争性抑制 D. 非竞争性抑制 13. 乳酸脱氢酶有几种同工酶 A. 2 B. 3 C. 4 D. 5 14. 有关同工酶的概念正确的是： A. 催化相同的化学反应，酶蛋白的分子结构、理化性质不同，电泳行为不 同 B. 催化不同的化学反应 C. 催化不同的化学反应，酶蛋白的分子结构、理化性质相同，电泳行为相 同 D. 催化相似的化学反应 15. 关于Km值的叙述正确的是： A. 与酶和底物的浓度有关 B. 是达到Vm 时的底物浓度 C. 与酶和底物的亲和力无关 D. 是V达到1/2Vm 时的底物浓度 16. 酶在催化反应中决定酶专一性的 部分是： A. 辅酶 B. 辅基 C. 金属离子 D. 酶蛋白 17. 非竞争性抑制剂对酶促反应的影 响是： A. Km减小，Vm增大 B. Km不变，Vm减小 C. Km增大，Vm减小 D. Km增大，Vm不变 18. 反竞争性抑制剂对酶促反应的影响符合下列哪项特征？ A. Km减小，Vm减小 B. Km不变，Vm增大 C. Km增大，Vm减小 D. Km增大，Vm不变
第五章酶学 一、选择题 （D）1、酶促反应的初速度不受哪一因素的影响？ A [S]； B [E]； C [PH]； D 时间； E 温度。 （D）3、关于米氏常数Km的说法，哪个是正确的？ A 饱和底物浓度时的速度； B 在一定酶浓度下最大速度的一半； C 饱和底物浓度的一半； D 速度达到最大反应速度一半时的底物浓度； E 降低一半速度时的抑制剂浓度。 （B）4、如果要求酶促反应μ=Vmax×90%，则[S]应为Km的倍数是 A 4.5； B 9； C 8； D 5； E 90。 （B）5、作为催化剂的酶分子，具有下列哪一种能量效应？ A 增高反应的活化能； B 降低活化能； C 增高产物能量水平； D 降低产物能量水平； E 降低反应自由能。 （A）8、下列关于酶的描述，哪一项是错误的？ A 所有的蛋白质都是酶； B 酶是生物催化剂； C 酶是在细胞内合成的，但也可以在细胞外发挥催化功能； D 酶具有专一性； E 酶在酸性或碱性条件下均会失活。 （E）11、下列哪一项不是辅酶的功能？ A 转移基团； B 传递氢； C 传递电子； D 某些物质代谢时的载体； E 决定酶的专一性。 （D）13、下列关于酶活性部位的描述，哪一项是错误的？ A 活性部位是酶分子中直接与底物结合并发挥催化功能的部位； B 活性部位的基团按功能可分为两类，一类是结合基团，一类是催化基团； C 活性部位的基团可以是同一条肽链但在一级结构上相距很远的基团； D 不同肽链上的有关基团不能构成该酶的活性部位； E 酶的活性部位决定酶的专一性。 （A）14、下列哪一项不是酶具有高催化效率的因素？ A 加热； B 酸碱催化； C 张力和变形； D 共价催化； E 邻近定位效应。（D）15、当[S]=4Km时，μ=？
固定化技术研究进展 摘要:固定化酶技术作为一门交叉学科技术,在生命科学、生物医学、食品科学、化学化工及环境科学领域得到了广泛应用。新型载体材料的合成是今后固定化酶发展的一个非常重要的研究领域。本文主要介绍了固定化酶的载体,固定化技术以及在不同行业的应用,主要介绍了在污水处理和医疗行业的应用和发展趋势。 关键词:固定化载体污水医疗应用 酶是重要的生物催化剂，具有专一性强、催化效率高、无污染、反应条件温和等特点，在制药、食品、环保、酿造、能源等领域都得到了广泛的应用。但在实际应用中,酶也存在许多不足，如大多数的酶在高温、强酸、强碱和重金属离子等外界因素影响下,都容易变性失活,不够稳定；与底物和产物混在一起,反应结束后,即使酶仍有很高的活力,也难于回收利用，这种一次性使用酶的方式，不仅使生产成本提高，而且难于连续化生产；并且分离纯化困难，也会导致生产成本的提高等。固定化酶技术(Immobiｌｉzed eｎzｙme techｎolｏgy)克服了酶的上述不足。酶的固定化是指采用有机或无机固体材料作为载体,将酶包埋起来或束缚、限制于载体的表面和微孔中,使其仍具有催化活性，并可回收及重复使用的酶化学方法与技术。 １.传统酶固定化技术 传统酶的固定化方法可分为吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等4 种。吸附法是指通过载体表面和酶表面间的次级键相互作用而达到酶固定化的方法，根据吸附剂的特点又可分为物理吸附和离子交换吸附。该法具有操作简便、条件温和及吸附剂可反复使用等优点，但也存在吸附力弱，易在不适pH、高盐浓度、高底物浓度及高温条件下解吸脱落的缺点。共价偶联法是将酶的活性非必须侧链基团与载体的功能基通过共价键结合，故表现出良好的稳定性,有利于酶的连续使用,是目前应用和研究最为活跃的一类酶固定化方法，但共价偶联反应容易使酶变性而失活。交联法是利用双功能或多功能基团试剂在酶分子之间交联架桥固定化酶的方法，其更易使酶失活。包埋法包括网格包埋、微囊型包埋和脂质体包埋等，包埋法中因酶本身不参与化学结合反应,故可获得较高的酶活力回收，其
实验十琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 一、实验目的 1、掌握竞争性抑制概念及作用机理。 2、了解在无氧情况下观察脱氢酶作用的简单方法。 二、实验原理存在于心肌、骨骼肌、肝脏等组织中琥珀酸脱氨酸，能使琥珀酸脱氢而成延胡索酸，脱下氢可使甲烯蓝退色，还原为甲稀白。反应如下：草酸、丙二酸等在结构上与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争与琥珀酸脱氢酸的活性中心结合。若酶已与丙二酸等结合，则不能再与琥珀酸结合而使之脱氢，产生抑制作用，且抑制程度取决于琥珀酸与抑制剂在反应体系中浓度的相对比例，所以这种抑制是竞争性抑制。本实验通过观察在由不同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体系中使等量甲稀蓝退色反应时间，从而验证丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制作用。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。 三、实验仪器、材料和试剂 1、仪器：恒温水浴锅，研钵或组织匀浆机 2、材料和试剂（1）新鲜兔肝（2） 0、10mol/L磷酸盐缓冲液（pH7、4）：0、1mol/L NaH2PO419 ml 加0、1mol/L Na2HPO481ml。 （3）0、093 mol/L琥珀酸钠溶液：取琥珀酸钠1、5g溶于100 ml蒸馏水中。
（4）0、10 mol/L丙二酸钠溶液：取丙二酸钠1、5g溶于100 ml蒸馏水中。 （5）0、02%甲稀蓝溶液。 （6）液体石蜡。 四、实验操作新鲜兔肝立即剪碎，放于组织匀浆机中研碎，加入pH7、4的0、10 mol/L磷酸盐缓冲液，制备成200 g/L的肝匀浆液备用。取五支试管分别编号，按下表配制反应体系：试剂管号0、093 mol/l琥珀酸钠0、10 mol/l丙二酸钠0、 10mol/l(pH7、4)磷酸缓冲液肝匀浆液0、02%甲烯蓝11ml2ml1ml3滴 21、5ml0、5ml1ml1ml3滴31ml1ml2ml3滴42ml1ml1ml3滴51ml1ml1ml1ml3滴将各管溶液混匀后加一薄层液体石蜡后静置（此时不可摇动!），观察各管中的颜色变化，并记录各管颜色完全变化的时间。思考题: 1、抑制的分类及其特点？ 2、本实验中液体石蜡起什么作用? 本实验需在无氧条件下进行,可加一层液体石蜡以隔绝空气。 3、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动? 4、制备肝浆时用磷酸缓冲液，可否换用蒸馏水，为什么？
琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 [原理] 肌肉组织中含有琥珀酸脱氢酶，能催化琥珀酸脱氢转变成延胡索酸。反应中生成的FADH2可使蓝色的甲烯蓝还原为无色的甲烯白(还原型甲烯蓝)。丙二酸与琥珀酸的分子结构相似，是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂，故能与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶的活性中心。丙二酸与琥珀酸脱氢酶结合后，酶活性受到抑制，则不能再催化琥珀酸的脱氢反应。抑制程度的大小，随抑制剂与底物两者浓度的比例而定。 本实验以甲烯蓝为受氢体，在隔绝空气的条件下，通过甲烯蓝的褪色程度来判断琥珀酸脱氢酶的活性，并籍此观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶活性的抑制作用。 CH2COOH CH2 COOH FAD MB?2H（甲烯白） 琥珀酸 琥珀酸脱氢酶 CHCOOH HOOCCH FADH2MB（甲烯蓝） 延胡索酸 [试剂] 1．0.2mol/L琥珀酸: 取琥珀酸钠(MW:270.14)27克加水至500ml。 2．0.02mol/L琥珀酸: 取1液稀释10倍。 3．0.2mol/L丙二酸: 取丙二酸钠(MW:166.05)16.7克加水至500ml。 4．0.02mol/L丙二酸: 取3液稀释10倍。 5．1/15mol/L pH7.4磷酸盐缓冲: 1/15mol/LNa2HPO4溶液80.8ml与1/15mol/LKH2PO419.2ml 混合即成。 （1）1/15mol/LNa2HPO4溶液: 取Na2HPO4.12H2O （MW：358.14）23.876 克, 加水至1000ml。 （2）1/15mol/LKH2PO4溶液:取KH2PO4（MW：136.09）1.814克,加水至200ml. 6．0.02％甲烯蓝溶液 7．液体石蜡 [主要器材] 1．新鲜猪心 2．玻璃研钵 3．漏斗