牛乳中微生物的检测与分析
张月月刘敏王荣峰王君孙鹏郭海萌张帅
（山东农业大学生命科学学院，泰安271000）
摘要：【目的】了解牛乳的消毒和细菌学检查的重要性，及其卫生质量的判断标准。学习牛乳的巴斯德消毒法和细菌学检查的方法。【方法】采用显微镜计数法、美蓝还原酶实验法、标准平板计数法进行测定，确定不同来源的生牛乳的等级、巴氏消毒牛乳的卫生标准。【结果】微生物显微镜直接计数法随机性大，对茵体数量不能做出较为宏观，全面的反应．优点是计数快速；美蓝还原酶实验法是用于测定牛乳质量的一种定性检测法，操作简便，不需特别设备。它不能做为定量检查；平板茵落计数法速度慢，需要平板上长出茵落一段时后才能计数。【结论】由于平板茵落计数法通常做梯度稀释，所以计数的线性范围大．由于是茵悬液涂布，所以比较均匀，能较好的反应茵落的疏密程度。重复性，平行性很好。是经典的计数方法。
关键词：牛乳;微生物;检测;分析
Detection and analysis of microorganisms in milk
Yueyue Zhang，Min Liu，Rongfeng Wang，Jun Wang，Peng Sun，Haimeng Guo，Shuai Zhang (College of Life Sciences, Shandong Agricutual University, Tai’an, 271000, China)
Abstract:【Purpose】to understand the milk sterilization and bacteriological examination of importance, and its hygienic quality judgment standard. Learning milk Pasteur disinfection method and bacteriological examination method. 【MEFHOD】Uses the microscope count the methylene blue reductase method，the standard plating count method to carry on the determination of the number of bacteria，determined different origin the fresh COWS milk rank，pasteurized milk hygienic standard．【RESULTS】Microorgaism microscope direct countmethod 。It has big ran domness cannot make comparatively macroscopic ，overall comprehensive for milk quantity ．But the advantages are coninung and fast for counting of bacteria ；The methyrlene blue reductases method is used in determining the COW'S milk quality．It is simple．No special equipments needed．But it cannot use for the quantitative examination ；The plating colony count methods is relatively slow，needs the growth of bacteria on the plate and colonies can be counted．【CONCLUSION】Because the plating count method usually makes the gradient to dilution，therefore the counting linear scope is broad ．Because bacterium suspended solution is poured out on the culture of bacterium uniformly ．The bacterial colony density degree can obtain ．The retentiveness，parallelism is very good．It is the classical method of counting bacteria ．
Key words: milk ；microbial ；detection；analysis；
前言
牛乳是一种营养全面的液态天然饮料,含有人体所需的碳水化合物、蛋白质、脂肪、各种矿物质和维生素[1] 。其中的细菌会很快繁殖，因此，采用不同细菌学检查方法对牛乳中细菌进行卫生检查，比较得出最佳检测方法，确定不同来源的生牛乳的等级、巴氏消毒牛乳的卫生标准。现今常用显微镜计数法、美蓝还原酶实验法、标准平板计数法进行测定，切入点不同的方法各有优缺。随着人们生活水平的提高,对乳制品的需求亦不断上升。目前
国内对乳制品的研究主要集中在发酵酸奶上,但由于国人习惯消费短期内的乳制品,故巴氏
杀菌乳在整个消费中仍占主导地位。
牛乳的细菌学检查一般有显微镜直接计数法、检测大肠菌群、美蓝还原酶试验和标准平
板计数法[2]，现通过试验来了解掌握牛乳的巴斯德消毒方法以及微生物细菌学检测方法,
试验通过美蓝还原酶试验和标准平板计数法分别定性、定量检测牛乳样品的细菌数含量，同
时通过对照试验，确定在牛乳消毒中被广泛应用的巴斯德消毒法的卫生标准是否达标。
1材料与方法
1.1实验器材
1.1.1培养基和牛乳样品
亚奥特巴氏消毒牛奶样品
亚奥特巴氏消毒变质牛奶样品
牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g 蛋白胨10g 氯化钠5g 琼脂15～20g 水1000ml PH 7.0～7.2 121℃灭菌20nin
1.1.2溶液和试剂
美兰溶液（1：250 000）
无菌水
1.1.3主要仪器和其他用品
超净工作台，水浴锅，高压灭菌锅，酒精灯，恒温培养箱，9 cm无菌培养皿，无菌
18×180mm试管，试管架。无菌250ml三角瓶，无菌棉塞，移液枪与相应规格的无菌
枪头
1.2试验方法
1.2.1材料预算，培养基配制，无菌水分装，高压灭菌。
1.2.2美兰还原酶试验法
1)标记3个无菌试管1、2、3
2)分别向3个试管中加入10ml不同品牌的生鲜牛乳样品（1号变质亚奥特牛奶，2亚
奥特纯牛奶，3号亚奥特纯牛奶）
3)分别向试管中各加入1ml美兰，盖紧管塞
4)轻轻倒转试管约4次，置于37℃水浴中，并记录培养时间
5)测试管在水域中稳定5min中后，取出，轻轻倒转一次后再放回水浴中
6)每隔30min观察记录试管中美兰颜色的变化，直至3～6h
1.2.3巴斯德法消毒牛乳
1)将水浴锅的温度调至80℃
2)将牛乳样品用力摇匀，使微生物能均匀分布
3)用灭菌的10ml吸管吸取5ml生牛乳样品放入灭菌试管内，然后将试管放入调好温度
的水浴锅中，水面要超过牛乳表面
4)保持15min，并不时摇动
5)一到15min立刻取出试管，用流水冲试管外壁，使其中的牛乳迅速冷却。
1.2.4标准平板计数法
1)将巴氏消毒的牛乳样品充分摇匀，系列稀释至10-2、10-3和10 -4。
2)用1ml无菌吸管从三个梯度分别取1ml注入空白平板内
3)各平板倾注约15ml已经融化并冷却至45 ℃左右的牛肉膏蛋白胨培
4)凝固后，倒置于37 ℃培养箱内，培养24h。
5)选择长有30~300个菌落的平板计数，并计算出1ml牛乳中的细菌总数。
6)普通生牛乳样品中的检查同上法，但稀释度为10﹣3、10 -4和10-5。
2实验结果与分析
2.1 实验结果
2.1.1美蓝还原酶试验法结果见表1。
2.1.2 标准平板计数法结果见表2。
“﹨”表示无该梯度浓度，“——”表示没有菌落。
2.2结果分析
2.2.1美蓝还原试验法
1号试管为变质亚奥特牛奶还原时间为90min，所以牛乳质量为“四级奶”；2号试管为亚奥特纯牛奶还原时间为330min，故牛乳质量为“二级奶”。3号试管为亚奥特纯牛奶未加美蓝溶液，作为观察颜色变化的对照实验组。
2.2.2标准平板计数法
从实验结果来看，对于巴氏消毒后牛乳的标准平板计数，平行实验平板间菌落个数不相近，存在误差；梯度浓度间菌落个数差别较为明显。未经巴氏消毒牛乳梯度浓度间菌落数目差别不明显。
3讨论
3.1结果分析
美蓝还原酶试验中三支试管中美蓝的还原时间与牛乳的质量较匹配，实验结果可度较高。而标准平板计数法中由于各种原因导致实验数据较真实情况有较大差异，实验结果不准确，可信度不高。
3.2标准平板计数法试验失败原因分析
1)未做空白平板的对照，导致培养皿菌落数无法对照
2)无菌操作不到位，尤其是在接种和倒平板时，操作未在无菌圈内进行，导致培养皿污
染，使实验结果不准确
3)在培养时，未倒置培养
4)由于没搞清楚牛乳中细菌的生长条件，在培养时用报纸包裹培养皿培养，导致实验结
果与实际差异较大
3.3 讨论
美蓝还原酶实验法是用于测定牛乳质量的一种定性检测法，操作简便，不需特别设备。它不能作为定量检查；平板菌落计数法速度慢,需要平板上长出菌落一段时后才能计数。由于平板菌落计数法通常做梯度稀释,所以计数的线性范围大。由于是菌悬液涂布,所以比较均匀,能较好的反应菌落的疏密程度。重复性,平行性很好,是经典的计数方法。
巴氏消毒后1ml牛奶中含菌数不超过30000符合我国消毒牛乳的卫生标准。
未经消毒的牛奶在培养基没长出菌落理论上是不应该的，首先因试验中每支试管中无菌水装了4.5ml，系列稀释时移液枪不够长很难吸取前一稀释度的溶液到后一试管，接下来也很难吸1ml稀释的溶液到培养皿进行培养，无法做3个平行，每个稀释度只做了一个平板，而且没做对照，无法确定培养基及操作方面的原因。无菌水少也导致溶液混合不均匀，可能使加入培养皿的溶液含菌数少甚至不含菌。其次，倒此组试验平板的培养基放置时间久，温度降低导致最后在三角瓶的培养基凝成块状，制出的培养基不均匀，不适宜细菌生长。导致平板不长菌落还可能是系列稀释操作时枪头靠近酒精灯温度高把溶液中的细菌杀死了。
4. 结论
牛乳的细菌学检查方法常用的有显微镜直接记数法、美蓝还原酶实验法、标准平板记数法。显微镜记数法适用于含有大量细菌的牛乳, 生鲜牛乳可用此法检查。如果显微镜检查,每个视野只有1～3 个细菌左右,此牛乳为一级牛乳; 如果牛乳中有很多长链球菌和白细胞,通常来自乳房炎的母牛;若一个视野中有很多不同的细菌,则往往是使用了脏器具保存的牛乳。我国生鲜牛乳的微生物指标规定, 特级牛乳细菌数≤500000个/ml；一级牛乳≤1000000 个/ml；二级牛乳≤2000000 个/ml[3～4]。由于该法不够精确,一般不作为消毒牛乳的卫生检查。
美蓝还原酶实验法是用于测定牛乳质量的一种定性检测法。美蓝是一种氧化还原作用指示剂，在厌氧环境中，它将被还原为无色。如果牛乳中有细菌生长繁殖，必将造成其中溶解氧的减少，牛乳样品中的氧化还原电势降低，通过加入其中的美蓝颜色变化的速度，可鉴定该牛乳的质量。其标准规定为：
（1）在30min 内美蓝被还原为无色的样品为很差；
（2）在30min 到2h之间被还原者，为差质量；
（3）在2 到6h 之间被还原者，为尚好或中等；
（4）在6 到8h 之间被还原者，为优质牛乳。
标准平板记数法是广泛用于微生物计数的常规方法，此法较敏感，牛乳中有少量细菌时，能得出较正确的结果。我国灭菌牛乳的卫生标准是用标准平板记数法检查，细菌总数小于30000 个/ml[8]。灭菌牛乳和生牛乳均适用标准平板记数法检测，尤其适用灭菌牛乳的卫生达标检测。
牛乳的营养价值非常高, 蛋白质和钙的含量都很高，可以满足人体所需要的各种氨基酸。牛乳中可能含有致病微生物,如牛结核杆菌、布氏杆菌、沙门氏菌等,因此在出售或饮用前一定要确保牛乳的品质, 对生鲜牛乳进行检查消毒和加工。目前常用的消毒方法除采用巴斯德消毒法外( 将牛奶于62～63℃时处理30min，80℃时加热15min) 还有高温消毒（将
奶加热到
60～90℃左右后在迅速降温）和超高温瞬时消毒（将新鲜牛奶在120～140℃高温下加热2～4s）. 现在法国又研制出牛奶长期保鲜新法，据介绍，这种新方法是先对新鲜牛奶进行脱脂，让脱脂奶经过孔径为0.5μm 的特殊薄膜，过滤掉其中的微生物，最后再将脱脂后的奶在96℃保持6s。加热的目的不是杀菌消毒，而是为了使奶中的酶失去活性，避免在储存时变质。采用新工艺加工的牛奶可以在常温下保鲜4～6 个月，而且欧洲一些国家消费者品尝后认为其味道仍然鲜香。现代工业生产的酸牛奶是先将牛乳进行巴斯德消毒，以消灭其中的有害菌，而后接种乳链球菌与乳杆菌的纯种发酵制成。牛乳经乳酸菌发酵其营养价值大大提高，并对人体确有保健作用。它主要通过发酵菌和代谢产物中有益物质的作用起到调整促进消化吸收、促进肝机能、抑制有害菌，以及预防心血学、高血压病、糖尿病、癌症等作用。
参考文献
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一、填空题（共35个空，共计70分） 1、菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 2、平板计数琼脂培养基的成分有胰蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、琼脂、蒸馏水。 3、菌落总数小于100 CFU 时,按“四舍五入”原则修约，以整数报告。 4、大肠菌群：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 5、GB 4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》中第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数；第二法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。 6、MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。 7、GB 29921-2013《食品安全国家标准食品中致病菌限量》n为同一批次产品应采集的样品件数；c为最大可允许超出m值的样品数；m为致病菌指标可接受水平的限量值；M为致病菌指标的最高安全限量值。 8、无菌生理盐水的制法：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。 9、霉菌和酵母平板计数法的培养过程：琼脂凝固后，正置平板，置28±1℃培养箱中培养，观察并记录培养至第5天的结果。 10、菌落总数的培养过程：待琼脂凝固后，将平板翻转，36±1℃培养48±2h。 11、霉菌和酵母平板计数法：若空白对照平板上有菌落出现，则此次检测结果无效。 12、大肠菌群平板计数法：在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色，带有或不带有沉淀环的菌落。 二、简答题（共1题，共计30分） GB 2749-2015《食品安全国家标准蛋与蛋制品》中液蛋制品的菌落总数和大肠菌群的微生 菌落总数：25g（ml）样品+225ml稀释液，均质→10倍系列稀释→选择2～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1ml分别加入无菌培养皿中→每皿中加入15～20ml平板计数琼脂培养基，混匀→培养→计数各平板菌落数→计数菌落总数→报告 大肠菌群（平板计数法）：25g（ml）样品+225ml稀释液，均质→10倍系列稀释→选择2～3个适宜稀释度的样品匀液，倾入VRBA平板(36±1℃培养18～24h)→计数典型和可疑菌落→BGLB肉汤(36±1℃培养24～48h)→报告结果 1/ 1
食品微生物快速检测方法的研究进展 【摘要】本文从食品安全与卫生的角度出发，介绍了分子生物学方法中的核酸探针检测法、基因芯片检测法、PCR技术检测法的检测原理及优缺点、在食品微生物检测中的应用。 【关键词】食品微生物、快速、检测、分子生物学 随着世界食品开发、生产、销售的迅速发展与人们生活水平的不断提高，研究和建立食品微生物快速检测方法以加强对食品卫生安全的监测越来越受到各国科学家的重视，其关键是及时、准确地检测出食品中的微生物。传统的检测方法准确性、灵敏性均较高，但有涉及的实验较多、操作繁琐、效率低等缺点。近年来，微生物的快速检测和自动化研究进展声速，主要包括微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等方面及其它们的结合应用。本文主要介绍分子生物学方法中的核酸探针检测法、基因芯片检测法和PCR技术检测法 分子生物学方法 随着微生物学、生物化学和分子生物化学的飞速发展，对微生物的鉴定已不再局限于对它的外部形态结构及生理特性等一般检验上，而是从分子生物学水平上研究生物大分子，特别是核酸结构及其组成部分。在此基础上建立的众多检测技术中，核酸探针和聚合酶链反应，以其敏感、特异、简便、快速的特点成为世人瞩目的生物技术革命的新产物，已逐步应用于信源性病原菌的检测。 1 核酸探针法 细胞核酸DNA 和RNA 是唯一一类可以传递遗传信息的大分子，而每一种病原体都有独特的核酸片段，核酸探针是带有将已知核苷酸DNA或RNA片段用同位素或其它方法标记的基因特异片段，它主要利用碱基配对原理，使互补的2条核酸单链形成双链。 根据核酸探针中核苷酸成分的不同，可将其分为DNA探针或RNA探针；根据选用基因的不同又可分为两种，一种探针能同微生物中全部DNA分子中的一部分发生反应，它对某些菌属、菌种、菌株有特异性，另一种探针只能限制性同微生物中某一基因组DNA发生杂交反应，它对某种微生物中的一种菌株或仅对微生物中某一菌属有特异性。 美国GENE-TRAK公司研制出了脱氧核糖核酸杂交筛选比色法，主要利用特异的基因探针对沙门菌、李斯特菌和大肠杆菌的rRNA进行检测。检测步骤如下：先设计出与细菌rRNA互补的基因探针，待检样经过增菌培养后，溶解细菌并加入带有标记的探针进行液相杂交：如果待检样中存在靶细菌rRNA、荧光素标记的检测探针和多聚脱氧腺嘌呤核苷酸末端捕获将与目标rRNA序列杂交；此后，把包被多聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸的固相载体测杆插入杂交溶液中，利用多聚脱氧腺嘌呤核苷酸与多聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸间的碱基配对将杂交核酸捕获于固体载体中，并将固相载体真培养于过氧化酶-抗荧光素接合剂中，使探针上的荧光素与结合剂结合；最后，将固相载体置于酶底物-色原溶液中，使过氧化酶与底物反应，在450nm处测量吸光度值，以确定样品中是否存在靶细菌。 总的来说，核酸探针技术是一种理想的快速检测技术，它最大优势是特异性和敏感性，而且兼备组织化学染色的可见性和定位性，主要用于食品致病性病原微生物的检测。但是也存在一定问题，如每检测一种菌就需要制备一种探针，而且目前尚未建立所有菌种的探针；要达到检测量还要对样品进行一定时间的培养；对毒素污染的食品有时因样品中不含产毒菌而无法检测出，所以该技术还有待进一步发展。 2基因芯片技术 基因芯片的基本原理是将各种寡核苷酸点样于芯片表面，微生物样品DNA经PCR扩增制备荧光标记探针，然后再与芯片上寡核苷酸点杂交，最后通过扫描仪定量和分析荧光分布模式来确定检测样品是否存在某些特定微生物。
临床微生物学与检验测试题及答案——细菌感染的实验室检查与诊断及细菌生理 一、名词解释 1.血清学诊断 2.培养基 3.基础培养基 4.选择培养基 5.鉴别培养基 6.菌落 二、填空题 1.实验室细菌学检查结果的准确与否和标本的选 择、、有直接关系。 2.辅助诊断风湿热的抗“O”实验属于。 3.血清学试验一般需作两次，其血清分别取自疾病 的和.第二次抗体效价比第一 次时方有诊断意义。 4.对流行性脑炎患者进行细菌学检查，可采集的标本 有、和。 5.进行病原菌的分离培养时，从有正常菌群部位采取的标本应接种 于培养基或培养基。 6.细菌感染实验室检查中，常用的血清学方法 有、和三大类。 7.属于直接凝集反应的血清学试验有和。 三、单项选择题 1.目前在传染病的预防接种中，使用减毒活疫苗比使用灭活疫苗普遍，关于其原因下述不正确的是 A.减毒活疫苗的免疫效果优于灭活疫苗 B.减毒活疫苗刺激机体产生的特异性免疫的持续时间比灭活疫苗长 C.减毒活疫苗能在机体内增殖或干扰野毒株的增殖及致病作用，灭活疫苗则不能 D.减毒活疫苗可诱导机体产生分泌型IgA，故适用于免疫缺陷或低下的患者 E.减毒活疫苗一般只需接种一次即能达到免疫效果，而灭活疫苗需接种多次 2.白百破三联疫苗的组成是
A.百日咳类毒素，白喉类毒素，破伤风类毒素 B.百日咳死疫苗，白喉类毒素，破伤风类毒素 C.百日咳死疫苗，白喉死疫苗，破伤风类毒素 D.百日咳活疫苗，白喉活疫苗，破伤风死疫苗 E.百日咳活疫苗，白喉死疫苗，破伤风死疫苗 3.使用时要注意防止Ⅰ型超敏反应的免疫制剂是 A.丙种球蛋白 B.胎盘球蛋白 C.抗毒素 D.白细胞介素 E.干扰素 4.关于胎盘球蛋白的叙述，错误的是 A.由健康产妇的胎盘和婴儿脐带中提取制备 B.一般含IgM C.一般不会引起超敏反应 D.主要用于麻疹，甲型肝炎和脊髓灰质炎等病毒性疾病的紧急预防 E.免疫效果不如高效价的特异性免疫球蛋白 5.伤寒病人发病第一周内，分离病原菌应采取的标本是 A.血液 B.尿液 C.粪便 D.呕吐物 E.脑脊液 6.咽喉假膜标本涂片染色后，镜检出有异染颗粒的棒状杆菌，其临床意义在于诊断 A.结核病 B.军团病 C.白喉
一. 名词解释 1.芽孢： 2.糖被： 3.静息孢子： 4．菌落： 5．基内菌丝： 6. 孢囊: 7.质粒: 8.微生物： 9.鞭毛： 10.菌落： 11枯草芽孢杆菌 12鞭毛Flagella 13 Actinomyces 14荚膜： 二. 填空 1 芽孢的结构一般可分为、、和、四部分. 2 细菌的繁殖方式主要是，少数种类进行。 3 放线菌产生的孢子有、两种。 4 细菌的核糖体的沉降系数是 5 细菌的鞭毛有三个基本部分，，， 6 微生物修复受损DNA的作用有__ _和__ __. 7 基因工程中取得目的基因的途径有_条。 8 在低渗溶液中，G+ 菌的肽聚糖被破坏，细胞将 9原核细胞通过其附属物称为从一个细胞向另一个细胞转移DNA. 10支原体细胞膜中含有，与动物相似. 11.脂多糖是革兰氏阴性菌细胞壁特有成分,它由三部分组成,即、、 12.革兰氏阴性菌的细胞壁有层,内层称为,约厚，以_ 为主要成分,外层称为_,约_ 厚,不含_. 13.革兰氏阳性菌的细胞壁有_层,其厚度为_ 是革兰氏阳性细菌特有的化学成分 14.在周质空间中,存在着多种蛋白质,包括: _ , _, _ 和. 15.芽孢是某些细菌在生活史的一定阶段形成的没有_ 的休眠体,对_, 和_具有抗性. 16.芽孢具有_, _, _, _, _和_等多层结构 17.大肠杆菌鞭毛基体由四个盘状物构成,他们分别称为、_ 、、
18.荚膜的主要成分有_等,常采用_进行荚膜染色. 19.有些细菌细胞质内含有聚β－羟基丁酸，这是_贮藏物质，而异染色颗粒主要成分是_的聚合物，它是一种无机磷酸的贮藏物质 20.蓝细菌的异形胞仅含少量藻胆素,缺乏异形胞,他们不在产生氧气或固定CO2.这样,它们从结构和代谢上提供一个_ 环境,使_保持活性. 21细菌基本形态有_，_ 和_三种。 22细菌的大小是以_作为计量单位，而病毒的大小是以_ 作为计量单位。 23细菌细胞壁的主要成分是_,它主要由_、_二部分组成。 24测定微生物细胞大小的单位为_ 、_。 25微生物学的奠基人是_、_ 。 26根据放线菌菌丝形态和功能，其菌丝可分为 _、 _和 _三种。 27革兰氏染色操作的关键步骤是 _ 28 Bacillus thuringiensis是苏云金杆菌的学名， _是种名。（注:第十章） 29每种微生物都有自己的最适宜的pH值和一定的pH适宜范围。大多数细菌的最适pH 为_，放线菌的最适pH为_. 30、在人为条件下，用溶菌酶除尽革兰氏阳性菌原有细胞壁后所得到的仅有一层细胞膜包裹着的圆球状渗透敏感细胞称为_。 31细菌荚膜的作用是_ _ _，__ 32原核微生物的细胞壁特有的组分是_，它是由_、__四肽尾或四肽侧链__和__肽桥或肽间桥___组成的亚单位聚合而成。 33微生物的特点是 _， _ _， _， _ 34 Staphylococcus aureusBacillus 是金黄色葡萄球菌的学名，其中 _是属名， _是种名。（注:第十章） 35鞭毛主要化学成分为 _，鞭毛主要功能为 _。 36脂多糖(LPS)是革兰氏_菌细胞壁_层的主要成分，它由_，_，_三部分构成。 37细菌的糖被是指_。包括三种类型，其中包裹在细胞群上的称_。 38细菌的明胶柱穿刺培养特征常用来鉴别菌株 _性能 39在菌体形态观察中，需要进行制片后才能在显微镜下观察，观察细菌时采取的制片方法是_，观察放线菌时采取的制片方法是_，观察真菌采取的制片方法是_ 40原核细胞的细胞膜内陷所形成的囊状或管状结构称_。 41是芽孢所特有的化学物质。一般它随着芽孢的形成而形成，随芽孢的萌发而消失。 42 是一类介于
土壤微生物监测常规测定指标的分析方法和适用范围
其他方法： 一、土壤DNA提取和纯化： 方案1，参考(1, 2) 1.称取样品土样5g, 加入灭菌的石英砂，液氮研磨；
不要液氮研磨，这样子对DNA伤害很大，几乎全部片段化了。可以加上PBS洗涤下土壤，一是能够去除些杂质，二是能够使得土壤处于悬浮状态，然后可以在涡旋仪上剧烈涡旋2－3min，使得土壤颗粒破碎。然后12000rpm离心5min，弃上清。 2.加入1 3.5mL的DNA提取Buffer，100微升20mg/mL蛋白酶K，37℃225rpm摇30min-2h 3.加入700微升20%SDS，65℃水浴2h,间隔15min颠倒摇匀数次； 4.6000rpm室温离心15min,收集中间液相层；向沉淀中加入3mLDNA提取液，300微升20%SDS，65℃水浴30min，同上离心，收集中间液相层，合并；重复一次；可考虑再 增加抽提一次。或者用5mL而不是3mL。最后实在装不下了可以分在两个50mL离心管里面离心。 5.向收集的液相层中加入等体积氯仿：异戊醇（24：1）抽提一次，8000rpm离心10min，收集上部液相层； 6.第5步收集液相层中加入0.1倍体积的乙酸钠，0.6倍体积的异丙醇，4℃过夜沉淀； 这个千万不要4度过夜啊，四度过夜你会发现很多的絮状悬浮物，我之前犯过类似错误，这个是SDS和高浓度的盐在低温条件下析出来了。室温放置1－2h就好。 7.过夜沉淀物12000rpm离心15min，弃上清；向沉淀中加入10mL冷乙醇洗涤，12000rpm离心5min，弃上清；12000rpm离心30sec，移液枪析出残留液体； 8.室温自然干燥沉淀，干燥后向沉淀中加入400微升TE溶解。 方案2： 购买DNA提取试剂盒，如SoilMaster DNA Extraction Kit (Epicenter) 或UltraClean Soil DNA Isolation Kit (MO BIO) 二、DNA定量和质量检测： 提取后的DNA使用紫外分光光度法进行浓度和纯度检测。DNA纯度以OD260/ OD280比值来反映。当OD60 /OD80比值<1.8时，说明样品存在蛋白质或酚等杂质，可采用平衡酚/氯仿/异戊醇再抽提除去蛋白质或用乙醚抽提去除残留酚，再用无水乙醇沉淀，TE悬浮后再测定。当OD60/OD280比值>2.0，说明样品存在RNA污染，可以用RNA酶处理样品去处RNA 。和定量，应用1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA大小及完整度。 三、土壤宏基因组测序 将质检合格的土壤DNA随机打断，加接头序列构建测序文库，利用Roche 454或Illumina Hiseq系统进行测序反应。 四、生物信息分析： 1.原始数据整理、过滤及质量评估： 应用中科院青能所自主开发的质量控制软件QC-Chain进行原始测序数据的质量控制，去除低质量碱基和read，并进行污染序列的监控(3)。
牛乳中微生物的检测与分析 张月月刘敏王荣峰王君孙鹏郭海萌张帅 （山东农业大学生命科学学院，泰安271000） 摘要：【目的】了解牛乳的消毒和细菌学检查的重要性，及其卫生质量的判断标准。学习牛乳的巴斯德消毒法和细菌学检查的方法。【方法】采用显微镜计数法、美蓝还原酶实验法、标准平板计数法进行测定，确定不同来源的生牛乳的等级、巴氏消毒牛乳的卫生标准。【结果】微生物显微镜直接计数法随机性大，对茵体数量不能做出较为宏观，全面的反应．优点是计数快速；美蓝还原酶实验法是用于测定牛乳质量的一种定性检测法，操作简便，不需特别设备。它不能做为定量检查；平板茵落计数法速度慢，需要平板上长出茵落一段时后才能计数。【结论】由于平板茵落计数法通常做梯度稀释，所以计数的线性范围大．由于是茵悬液涂布，所以比较均匀，能较好的反应茵落的疏密程度。重复性，平行性很好。是经典的计数方法。 关键词：牛乳;微生物;检测;分析 Detection and analysis of microorganisms in milk Yueyue Zhang，Min Liu，Rongfeng Wang，Jun Wang，Peng Sun，Haimeng Guo，Shuai Zhang (College of Life Sciences, Shandong Agricutual University, Tai’an, 271000, China) Abstract:【Purpose】to understand the milk sterilization and bacteriological examination of importance, and its hygienic quality judgment standard. Learning milk Pasteur disinfection method and bacteriological examination method. 【MEFHOD】Uses the microscope count the methylene blue reductase method，the standard plating count method to carry on the determination of the number of bacteria，determined different origin the fresh COWS milk rank，pasteurized milk hygienic standard．【RESULTS】Microorgaism microscope direct countmethod 。It has big ran domness cannot make comparatively macroscopic ，overall comprehensive for milk quantity ．But the advantages are coninung and fast for counting of bacteria ；The methyrlene blue reductases method is used in determining the COW'S milk quality．It is simple．No special equipments needed．But it cannot use for the quantitative examination ；The plating colony count methods is relatively slow，needs the growth of bacteria on the plate and colonies can be counted．【CONCLUSION】Because the plating count method usually makes the gradient to dilution，therefore the counting linear scope is broad ．Because bacterium suspended solution is poured out on the culture of bacterium uniformly ．The bacterial colony density degree can obtain ．The retentiveness，parallelism is very good．It is the classical method of counting bacteria ． Key words: milk ；microbial ；detection；analysis； 前言 牛乳是一种营养全面的液态天然饮料,含有人体所需的碳水化合物、蛋白质、脂肪、各种矿物质和维生素[1] 。其中的细菌会很快繁殖，因此，采用不同细菌学检查方法对牛乳中细菌进行卫生检查，比较得出最佳检测方法，确定不同来源的生牛乳的等级、巴氏消毒牛乳的卫生标准。现今常用显微镜计数法、美蓝还原酶实验法、标准平板计数法进行测定，切入点不同的方法各有优缺。随着人们生活水平的提高,对乳制品的需求亦不断上升。目前
临床检验试题—微生物检验考试试题及答案(1)——肝炎病毒 一、概念 1.HBsAg 2.HBcAg 3.HBeAg 二、填空题 1．肝炎病毒有、、、和五种类型。 2．肝炎病毒中，由粪-口途径传播的有、；由血液和垂直途径传播的有、、；属于DNA病毒的有；属于缺损病毒的是；已有疫苗可主动免疫的是和；可进行细胞培养的是。 3．HBV的外衣壳由、和蛋白组成，构成HBV的；内衣壳由组成；核心由和组成。 4.甲型肝炎的传染源主要为和，猩猩和猿猴作为传染源的意义不大。 5.甲型肝炎的血清抗体中，表示现症感染的抗体是，而表示既往感染的抗体是。 6.乙型肝炎表面抗原（HbsAg）阳性者血清标本，在电子显微镜下可观察到3种不同 形态结构的颗粒，其传染性也不同，即小球形颗粒和以及。 7.乙型肝炎基因组为双股环壮DNA，内含4个开放读框（ORF），分别称为S 区，C区，和。 8.乙型肝炎病毒感染主要经4种传播途径，即血液传播，日常生活密切接触传播，和。 三、单选题 1.乙型肝炎病毒的核酸类型是 A.单股RNA B.双股RNA C.双股线状DNA
D.双股环状DNA E.单股DNA 2.可致慢性肝炎或肝硬化的病毒为 A. HAV，HBV和HCV B. HBV，HCV和HDV C. HCV，HDV和HEV D. HDV，HEV和HAV E. HEV，HAV和HBV 3.可传播乙型肝炎病毒的途径有 A.分娩和哺乳 B.共用牙刷，剃须刀等 C.输血，血浆及血液制品 D.性接触 E.以上均可 4.不符合血清HBsAg（+）， HbeAg（+）和抗HBc（+）的解释是 A.急性乙型肝炎； B.慢性乙型肝炎； C.乙型肝炎恢复期； D.无症状抗原携带者； E.血清有强传染性。 5.关于HAV，错误的是 A.是单股正链RNA病毒； B.能在体外细胞中培养； C.特异性预防可接种疫苗；
山东大学实验报告2017年11月27日 _________________________________________________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定， 需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每格长0.01mm（即 10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格 和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直径约为0.8μm， 枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。 二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接计数法是将少 量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法，此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操作简单。但此法的缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和。目前已有一些方法可以克服这一缺点，如结合活菌染色微室培养（短时间）以及加细胞分裂抑制剂等方法来达到只计数活菌体的目的。本实验以血球计数板为例进行显微镜直接计数。 2.用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是一块特制的载 玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上
第三章食品检验样品的采集和处理 一、样品的采集与处理 食品检验样品采集的原则： 1、所采样品应具有代表性 每批食品应随机抽取一定数量的样品，再生产过程中，再不同时间内各取少量样品予以混合。固体或半固体的食品应从表层、中层和底层、中间和四周等不同部位取样。 2、采样必须符合无菌操作的要求，防止一切外来污染 一件用具只能用于一个样品，防止交叉污染。 3、再保存和运送过程中应保证样品中微生物的状态不发生变化 采集的非冷冻食品一般在0—5度冷藏，不能冷藏的食品立即检验。一般在36h内进行检验。 4、采样标签应完整、清楚 每件样品的标签须标记清楚，尽可能提供详尽的资料。 在食品的检验中，所采集的样品必须具有代表性，即所取样品能够代表食物的所有部分。如果采集的样品没有代表性，即使一系列检验工作非常精密、准确，其结果也毫无价值，甚至会出现错误的结论。食品因加工的批号、原料情况（来源、种类、地区、季节等）加工方法、保藏条件、运输、销售中的各环节及销售人员的责任心和卫生认识水平等无不影响着食品的卫生质量，因此要根据一小份样品的检验结果去说明一大批食品的质量或一起食物中毒的性质，就必须周密考虑，设计出一种科学的取样和样品制备方法。而采用什么样的取样方案主要取决于检验的目的，目的不同，取样的方案也不同。检验的目的可以是判定一批食品合格与否，也可以是查找食物中毒病原微生物，还可以是鉴定畜禽产品是否有人畜共患的病原体。目前国内外使用的取样方案多种多样，如一批产品按百分比抽样，才若干个样后混合在一起检验；按食品的危害程度不同抽样等。不管采取何种方案，对抽样代表性的要求是一致的。最好对整批产品的单位包装进行编号，实行随机抽样。 （一）样品的种类 样品可分为大样、中样、小样三种。大样指一整批；中样是从样品各部分取的混合样，一般为200g；小样又称为检样，一般以25g为准，用于检验分析。 （二）样品的采集 采样必须在无菌操作下进行。 采样的工具，如探子、铲子、匙、采样器、试管、广口瓶、剪子和开罐器等，必须是无
微生物学练习题 0绪论 五,问答题 1.微生物根据大小,结构,化学组成分为哪三大类微生物各大类微生物有何特点包括哪些种类的微生物 1细菌的形态与结构 一,填空题 1.测量细菌大小用以表示的单位是___________. 2.细菌按其外形分为_________,___________,___________三种类型. 3.细菌的基本结构有___________,____________,____________三种. 4.某些细菌具有的特殊结构是_______,_______,________,________四种. 5.细菌细胞壁最基本的化学组成是____________. 6.革兰阳性菌细胞壁的化学组成除了有肽聚糖外,还有____________. 7.革兰阴性菌细胞壁的化学组成主要有___________和___________. 8.菌毛分为____________和___________两种. 9.在消毒灭菌时应以杀死___________作为判断灭菌效果的指标. 10.细菌的形态鉴别染色法最常用的是___________,其次是_________. 三,选择题 【A型题】 1.保护菌体,维持细菌的固有形态的结构是 A.细胞壁 B.细胞膜 C.细胞质 D.细胞浆 E.包膜 2.革兰阳性菌细胞壁中的磷壁酸的作用是 A.抗吞噬作用 B.溶血作用 C.毒素作用 D.侵袭酶作用 E.粘附作用 3.细菌核糖体的分子沉降系数为 A.30S B.40S C.60S D.70S E.80S 4.普通光学显微镜用油镜不能观察到的结构为 A.菌毛 B.荚膜 C.鞭毛 D.芽胞 E.包涵体 5.下列哪类微生物属于非细胞型微生物 A.霉菌 B.腮腺炎病毒 C.放线菌 D.支原体 E.立克次体 6.下列中不是细菌的基本结构的是 A.细胞壁 B.细胞膜 C.细胞质 D.核质 E.荚膜 7.革兰阴性菌细胞壁中与致病性密切相关的重要成分是 A.特异性多糖 B.脂蛋白 C.肽聚糖 D.脂多糖 E. 微孔蛋白 8.普通菌毛主要与细菌的 A.运动有关 B.致病性有关
乳与乳制品微生物检验食品中大肠菌群的检测 YLNB 3.2 1、引用依据：GB/T4789.3-2003 2、术语和定义 大肠菌群：指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。 食品中大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数（MPN）表示。 3、仪器及器材 3.1 恒温培养箱：36±1℃； 3.2 冰箱：0-4℃； 3.3 恒温水浴锅：46±1℃； 3.4 天平； 3.5 显微镜； 3.6 均质器或乳钵； 3.7 灭菌平皿：直径90mm； 3.8 灭菌试管：18×180和20×200； 3.9 灭菌吸管：1 ml和10 ml； 3.10 灭菌广口瓶或三角烧瓶：容量为500ml； 3.11 灭菌玻璃珠：直径约5mm；
3.12 载玻片； 3.13 酒精灯； 3.14 试管架； 3.15 灭菌刀、剪子、灭菌镊子等。 4、培养基和试剂 4.1 乳糖胆盐发酵管； 4.2 伊红美兰琼脂平板； 4.3 乳糖发酵管； 4.4 生理盐水； 4.5 革兰氏染色液。 5、检验程序 大肠菌群检验程序: 产气 大肠菌群阴性 革兰氏阳性 革兰氏阴性无芽孢杆菌 大肠菌群阳性 不产气 大肠菌群阴性 革兰氏染色 报告 乳糖发酵管 36±1℃，24±2h 伊红美兰琼脂平板 36±1℃，18~24h 大肠菌群阴性 不产气 产气 稀释 检样 乳糖胆盐发酵管 36±1℃，24±2h
6、方法 6.1 检样稀释 6.1.1 以无菌操作将检样25ml（或g）放于装有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量
《微生物学与检验》题库及答案 一.名词解释 1.医院感染 2.肥达反应 3.内基小体 4. 噬菌体： 5.血浆凝固酶 6.败血症 7.灭菌 8.药物敏感试验 9.外 - 斐氏试验 10.L 型细菌 11.菌群失调：12.微生物 13.细菌 14.最小抑菌浓度 15.菌落 16.汹涌发酵 17.无菌操作18.流感杆菌“卫星现象” 19.培养基 20.包涵体 21.正常菌群 22. 内毒素 23. 干扰现象： 24.菌血症 25菌丝： 二.填空题 1 L 型细菌是指（）。 2 杀灭物体上所有微生物的方法称为（）。 3 细菌 H-O 变异是指（）。 4 药敏试验所用标准培养基是，所用菌液相当于（）个细菌／ ml ，细菌接种采用（）划线接种法。 5 细菌致病因素包括（）、（）和（）。 6 细菌引起的全身感染包括（）、（）、（）和（）四种类型。 7 不染色标本检查主要用于观察细菌的（）。 8 影响革兰染色结果的关键步骤是（）。 9 有动力细菌在半固体培养基中的生长现象是穿刺接种线（），无动力细菌穿刺接种线（）。 10 糖发酵试验用于观察细菌分解糖是否产（）和（）。 11 靛基质试验的原理为，细菌产生的色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨酸而生成（），此代谢产物与加入的试剂反应，生成（）。 12 链球菌根据溶血现象分为（）、（）和（）三种类型。 13 葡萄球菌触酶试验结果为（）性，链球菌触酶试验结果为（）性。 14 呈现脐窝状菌落的球菌是（）。 15 抗 O 试验是测定病人血清中（）抗体效价的试验，用于风湿热等疾病的辅助诊断。 16 血平板上呈现草绿色溶血环的病原性球菌是（）和（）。 17 IMViC 试验包括（）、（）、（）和（）四项试验。 18 分解乳糖的细菌在肠道选择平板上呈现（）菌落，不分解乳糖则为（）菌落。 19 KIA 斜面红色表明，底层黄色、有气泡表明（）、（），有黑色沉淀表明（）试验阳性 20 霍乱弧菌生物型包括（）和（）。 21 AIDS 的传染源是（）和（），传播途径主要有（），（）和（）。 22 真菌菌落有（）、（）和（）三种。 23 病毒培养方法有（）、（）和（）。 24 病毒的基本结构由（）和（）组成，有些病毒还具有（）。 25 流感病毒根据抗原结构不同分（）、（）、（）三型，其中容易引起流感大流行的是其中的（）型。 26 防止微生物进入机体和物品的操作方法称为（）。 27 含菌量较多的标本（如粪便）的接种通常采用（）接种法。
化妆品微生物检测结果分析 [中图分类号]R168[文献标识码]A[文章编号]1005-2720(2009)14-0666-01 [关键词]化妆品；微生物；检测中国保健> 2009年第14期 化妆品是指以涂抹、喷洒或者其他类似方法，散布于人体表面任何部位(皮肤、毛发、指甲、口唇、口腔黏膜等)，以达到清洁、消除不良气味、护肤、美容和修饰目的的产品。化妆品成分中含丰富的蛋白质、脂肪、维生素和水分等，极利于微生物的生长和繁殖，容易导致化妆品腐败变质，直接造成人体皮肤感染或者微生物通过使用者的手直接或间接进入消化道，引起肠道传染病。为了解市场销售的化妆品的微生物污染状况，对各化妆品销售商抽检和送检的392份化妆品进行微生物检测，结果如下： 1材料和方法 1.1一般资料：对市场化妆品生产企业和销售商随机抽检和部分送检样品共392份。其中清洁类：清洁霜、面膜、洗发水、护发素、沐浴露、洗面奶、洗手液，共147份(37.5 0％)；护肤类：各种润肤膏、霜、蜜、香脂及添加氨基酸、维生素、微量元素、生物括性体等各种营养霜，共150份(38.27％)；美容修饰类：胭脂、香粉、唇膏、眼部用化妆品、指甲油、香水、化妆水、煽油、摩丝、喷发胶，共62份(15.82％)；特殊用途类：育发、染发、烫发、脱毛、除臭、祛斑、防晒，共33份(8.42％)。 1.2检测项目：菌落总数，粪大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、霉菌和酵母菌总数。 1.3检测方法及评价标准：按《化妆品卫生规范》卫法监发(2007)进行。6项指标中的任何1项超出卫生标准即为不合格产品。 2结果 本次共检测392份化妆品，合格产品379份，总合格率为96.68％。各类化妆品合格率分别为：清洁类95.92％，护肤类96.67％，美容修饰类98.39％，特殊用途类96.97％。在被检测的392份样品中，检出菌落总数超标8份，超标率为2.04％，超标样品主要分布在清洁类和特殊用途类。霉菌和酵母菌超标10份，超标率为2.55％，超标样品分布基本与菌落总数超标样品一致。铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌未检出。 3讨论 不同种类化妆品检测结果显示：清洁类和特殊用途类育发类合格率最低，菌落超标与原材料消毒不彻底有关。原因是此类化妆品水分含量高，易于细菌生长繁殖；该类化妆品配料中添加了各种营养成分，如蛋白质、氨基酸、微量元素、中草药和各种维生素等，为细菌的生长繁殖创造了条件；另外这类化妆品大多数为中性、弱碱性或弱酸性，为微生物生长提供了良好的环境。而其他类化妆品不适于微生物生长，有的甚至有抑菌作用，故不易检出。
临床微生物学检验技术试题及答案A1题型 1、人类ABO血型抗原包括 A、A抗原 B、B抗原 C、O抗原 D、AB抗原 E、A抗原和B抗原 答案：E 2、ABO血型物质在人体中可引起哪几种Ab产生 A、抗B抗体 B、抗AB抗体 C、抗A抗体 D、抗O抗体 E、抗A和抗B抗体 答案：E 3、免疫耐受就是 A、非特异性无反应性 B、特异性无反应性 C、机体无反应性 D、免疫抑制性 E、对任何抗原都不反应 答案：B 4、迟发型皮肤过敏反应与下列哪种物质有关 A、IgE B、IgA C、活化B细胞 D、活化T细胞 E、活化NK细胞
答案：D 5、佐剂作用是 A、将Ag送入机体各部位 B、将Ag固定在局部 C、增强Ag免疫原性 D、赋予Ag免疫原性 E、增强机体对Ag的免疫应答 答案：E 6、下列哪种物质既有非特异性免疫也参与特异性免疫反应 A、IgG B、干扰素 C、IgA D、前列腺素 E、补体 答案：E 7、TDH 细胞是 A、产生Ab细胞 B、天然杀伤细胞 C、细胞毒细胞 D、迟发变态反应T细胞 E、依Ab杀伤T细胞 答案：D 8、关于霍乱弧菌是否侵入上皮细胞，下列说法正确的是 A、不侵入 B、侵入 C、在特定条件下侵入 D、具有侵袭基因的霍乱弧菌侵入 E、侵入后局限于上皮细胞内 答案：A 9、葡萄球菌能产生多种溶血素，其中最主要的是
A、α、β溶血素 B、α、γ溶血素 C、β、γ溶血素 D、δ、ε溶血素 E、α、γ溶血素 答案：A 10、与其他肺部感染病原菌相比较，铜绿假单胞菌的毒力特点是 A、产生外毒素 B、具有内毒素 C、产生溶血素 D、产生绿脓素 E、具有菌毛 答案：D 11、有荚膜的流感嗜血杆菌含有荚膜多糖抗原称作： A、V抗原 B、M抗原 C、A抗原 D、X抗原 E、S抗原 答案：B 12、下列关于铜绿假单胞菌叙述中，正确的是 A、革兰氏阳性球菌 B、革兰氏阳性杆菌 C、无芽孢 D、具有荚膜 E、无鞭毛 答案：C 13、下列何种微生物具有荚膜结构 A、军团菌 B、支原体
第一章 习题 绪论 一、填空题 1、微生物与人类关系的重要性，你怎么强调都不过分，微生物是一把十分锋利 的双刃剑，它们在给人类带来2、1347年的一场由 2500万人）死于这场灾难。 的同时也来来。 引起的瘟疫几乎摧毁了整个欧洲，有1/3的人（约 3、2003 年 SARS 在我国一些地区迅速蔓延，正常的生活和工作节奏严重地被打乱，这是因为SARS有很强的传染性，它是由一种新型的所引起。 4、微生物包括： 病毒、朊病毒）；具细胞结构不能独立生活的病毒、亚病毒（类病毒、拟细胞结构的真细菌、古生菌；具细胞结 构的真菌（酵母、霉菌、蕈菌等）、单细胞藻类、原生动物等。 5、世界上第一个看见并描述微生物的人是__ ___商人__ ___。 6、微生物学发展的奠基者是___ 的 ____，他对微生物学的建立和发展作出卓越的贡献，主要集中体现_____、____和__ ___。 7、公元6世纪（北魏时期），我国贾思勰的巨著“ 曲、酿酒、制酱和酿醋等工艺。 ”详细地记载了制 8、被称为细菌学奠基者是__ __国的_____ ____，他也对微生物学建立和发展作出卓越贡献，主要集中体现_______和__ ____。 9、20世纪中后期，由于微生物学的、等技术的渗透和应用的拓宽及发展，动、植物细胞也可以像微生物一样在平板或三角瓶中分离、培养和在发酵罐中进行生产。 10、目前已经完成基因组测序的 3 大类微生物主要是、及。 二、选择题 1、当今，一种新的瘟疫正在全球蔓延，它是由病毒引起的（）。 （1）鼠疫（2）天花（3）艾滋病（AIDS）（4）霍乱 2、微生物在整个生物界的分类地位，无论是五界系统，还是三域（domain）系
第十章临床微生物检测仪器 一、名词解释 1.自动血培养检测和分析系统：主要由培养系统和检测系统组成。培养系统包括培养基、恒温装置和震荡培养装置。检测系统由计算机控制，对血培养实施连续、无损伤瓶外监测。通过自动监测培养基中的混浊度、pH 值、代谢终产物CO2 的浓度、荧光标记底物或代谢产物等的变化，定性地检测微生物的存在。 2.检测导电性和电压的血培养系统：血培养基中因含有不同电解质而具有一定导电性。微生物在生长代谢的过程中可产生质子、电子和各种带电荷的原子团 （例如在液体培养基内CO2 转变成CO3－ ） ，通过电极检测培养基的导电性或电压 可判断有无微生物生长。 3.应用测压原理的血培养系统：许多细菌生长过程中，常伴有吸收或产生气体现象，如很多需氧菌在胰酶消化大豆肉汤中生长时，由于消耗培养瓶中的氧气而首先表现为吸收气体。而厌氧菌生长时最初均无吸收气体现象，仅表现为产生气体（主要为 CO2），因此可利用培养瓶内压力的改变检测微生物的生长情况。 4.采用光电检测原理的血培养系统：微生物在代谢过程中必然会产生终代谢产 物C O2，引起培养基p H 值及氧化还原电位改变。利用光电比色检测血培养瓶中某 些代谢产物量的改变，可判断有无微生物生长。 5.BacT/Alert自动血培养系统：系统在每个培养瓶底部装置一带含水指示剂的CO2 感受器，当培养瓶内有微生物生长时，其释放出的CO2 可渗透至感受器， 并与感受器指示剂上饱和水发生化学反应，产生游离氢离子使pH 值降低，感 受器上的指示剂由绿变黄。感受器上方的光发射二极管每 10min 发一次光投 射到感受器上，再由一光电探测器测量其产生的反射光。反射光强度传送至 微机后，会自动连续记忆并绘成生长曲线图，由微机分析判断阴性或阳性， 以此确定是否有微生物生长。 6.Bactec9000自动血培养系统：系统利用荧光法作为检测手段，其C O2 感受器上含有荧光物质。当培养瓶中有微生物存在时，产生的C O 可与感受器中的水发生反应 产生H + ，使pH 值降低，酸性环境促使感受器释放出荧光物质。从光发射二极管发射 的光激发荧光感受器而产生荧光。光电比色检测仪每10min 直接对荧光强度进行检测，此荧光强度随C O2 的产生量增多而增强。数据传输到计算机后，生长监测系 统根据荧光的线性增加或荧光产量的增加等特有标准，分析细菌的生长情况，最终判断阳性或阴性。 7.Vital血培养系统：系统采用同源荧光技术来监测微生物的生长。与培养基结合
一、误差的表示方法 (一)准确度与误差 1．准确度：指测量结果与真值的接近程度 2．误差 （1）绝对误差：测量值与真实值之差 （2）相对误差：绝对误差占真实值的百分比 注：μ未知，δ已知，可用χ代替μ （二）精密度与偏差 1．精密度：平行测量的各测量值间的相互接近程度 2．偏差： （1）绝对偏差 ：单次测量值与平均值之差 （2）相对偏差：绝对偏差占平均值的百分比 （3）平均偏差：各测量值绝对偏差的算术平均值 （4）相对平均偏差：平均偏差占平均值的百分比 （5）标准偏差： （6）相对标准偏差（变异系数） （三）准确度与精密度的关系 1. 准确度高，要求精密度一定高，但精密度好，准确度不一定高 2. 准确度反映了测量结果的正确性 精密度反映了测量结果的重现性 练习 例：用丁二酮肟重量法测定钢铁中Ni 的百分含量，结果为 10.48%,10.37%,10.47%,10.43%,10.40%;计算单次分析结果的平均偏差，相对平均偏差，标准偏差和相对标准偏差。 解： x δμ=-%100%100%x RE δμμ μ -=?=?%100% R E x δ = ?i d x x =-100%100% i x x d x x -?= ?n x x d i ∑-=1)(1 2 --= ∑=n x x S n i i x 100%100% xi x d x n x -?= ??∑ 100% x S RSD x = ?0.18%0.036%5i d d n ===∑10.43%x =0.036% 100%100%0.35% 10.43%d x ?=?=
相对标准偏差= 二、可疑数据的取舍 在一组测定值中有时会出现过高或过低的数据，称可疑数据。如测得4个数据：21.30、19.25、19.30和19.32，显然21.30可疑。使人怀疑可能是实验中出现了什么差错，但在计算平均值和标准偏差时不能随意把它舍弃。因舍弃一个测定值要有根据，不能合意者取之，不合意者舍之。 对于舍弃可疑值的问题，曾提出过许多标准，目前用得最多的统计学方法是G-检验法。 G-检验法也称格鲁布斯法（Grubbs ），此法的优点是在判断可疑值的过程中，引入了正态分布的两个最重要的样本参数平均数和标准差（S ），该方法的准确性较好。 G-检验法的检验步骤如下： 计算包括可疑值在内的平均值；计算可疑值与平均值之差；计算包括可疑值在内的标准偏差；用标准偏差除可疑值与平均值之差，得G 值；||X X G S -=；查G 检验临界值表，若计算的G 值大于表中查到的临界值，则把可疑值舍弃。 例 标定一个标准溶液得到4个数据：0.1014、0.1012、0.1019和0.1016mol/L 。用Grubbs 法判断数据0.1019是否应该舍弃。 解 算G 值：|| |0.10190.1015| 1.330.0003 X X G S --= = =可疑 查G 检验临界值表（表1），得到n=4时，0.05G =1.48，因为1.33<1.48，所以0.1019应保留 。 表1 Grubbs 检验部分临界值G (95%的置信度，α=0.05) 三、有限量实验数据的统计检验 在定量分析中，常需要对两组有限的实验数据分析分别得出的结果，或两种分析方法的分析结果的平均值与精密度是否存在着显著性差别作出判断，这些问题都属于统计检验的内容，称显著性检验或差别检验或假设检验。统计检验的方法很多，在定量分析中最常用的是t 检验与F 检验，分别主要用于检验两组或多组分析结果是否存在显著的系统误差与偶然误差等。 4 4.610 0.046% s -== =?=0.046%100%100%0.44% 10.43 s x ?= ?=