小鼠早期胚胎发育和胚胎移植
https://www.doczj.com/doc/055482621.html,/4544.htm、
小鼠的早期胚胎，是研究哺乳动物以及人类自身早期发生机理常用的实验材料。胚胎移植，就是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内取出，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使其继续发育为胎儿。胚胎移植技术在畜牧业已开始应用于生产。
小鼠的早期胚胎，是研究哺乳动物以及人类自身早期发生机理常用的实验材料。胚胎移植，就是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内取出，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使其继续发育为胎儿。胚胎移植技术在畜牧业已开始应用于生产。一些发达国家已有经营奶牛和肉牛胚胎移植的企业公司，向国外销售胚胎。在我国，这一技术的研究起步较晚，1974年在绵羊上获得成功，1978年在奶牛上获得成功，80年代后期90年代初，奶牛、安哥拉山羊和绵羊的胚胎移植开始在生产上应用。胚胎移植术也是显微操作中最基本的实验技术，是从事其它显微操作如嵌合体动物、胚胎干细胞、转基因动物和细胞核移植等实验必不可少的步骤。下面以小鼠为例，介
绍哺乳动物的早期胚胎发育及胚胎移植的操作过程。
实验技术
一、人工催情和超数排卵
1. 小鼠的性别鉴定：
成年小鼠的性别较易鉴别。雌鼠可见有明显的阴道开口和明显的五对乳头，雄鼠可见明显的阴囊，仔鼠或幼鼠则主要以它们的外生殖器与肛门的距离来区别，距离近的为雌鼠，距离远的为雄鼠。
2. 人工催情：
成年小鼠在非妊娠和非哺乳期间，任何时间都可发情，性周期为4-5天。超数排卵一般选用体重在20-30g的雌鼠，注射孕马血清（PMSG）促使超排。每头雌鼠注射PMSG 5-10IU，注射时间可在第一天下午4时左右，注射部位为腹腔。在第三天的下午4时左右腹腔再注射绒毛膜促性腺激素（hCG）5IU，并和雄鼠合笼饲养让其自然交配。第四天上午8时左右检查雌鼠，如有阴道栓形成者，即可供采卵。阴道栓是雌鼠交配后精液与阴道分泌物及阴道上皮等凝结而成的，位于阴道口附近，一般在交配后数分钟即可出现
（图16.3）。最初阴栓湿润而软，随后逐渐变硬转为黄色，最后阴栓缩入阴道液化而消失，此过程需10余小时，有的在24-48小时后仍可见。在合笼后每天上午8-9 时，下午5-6时检查阴栓，出现阴栓即可认为是妊娠的第一天，即胚龄的第一天。
二、受精卵及囊胚的获得
1. 受精卵的获得：
将检查有阴栓的小鼠用脊椎脱臼法处死，70%酒精消毒腹部。在腹部中央横剪一小口（0.5cm 宽），将两边皮肤肌肉沿切口部剪开，暴露腹部器官；用剪刀和镊子除去卵巢、输卵管和子宫周围的脂肪组织，把输卵管取出（图16.4，16.5），置于盛有培养液的表面皿中。在解剖镜下找到输卵管膨胀的壶腹部，用镊子撕开一小口，卵子即自然流出（图16.6）。如受精卵已迁移到输卵管的狭窄部，则可用冲洗法收集受精卵。方法是：在解剖镜下找到输卵管喇叭口，可以用小玻璃探针帮助，将吸有冲卵液的注射器针头对准喇叭口，右手用小镊子轻轻将喇叭口套在针头上，套进约1mm即可，并用镊子把管
口轻轻夹住；左手轻推注射器，压出0.5ml冲卵液即可将输卵管中的卵冲出。一般在一侧输卵管中可冲出4-10个卵。收集到的受精卵带有卵丘细胞，必须在含有透明质酸酶（Hyaluronidase,1mg/ml）的培养液中溶去卵丘细胞，再将受精卵换到新鲜的培养液内洗涤3-4次才可用于移植。冲卵液要保持37℃。
2. 囊胚的获得：
取妊娠第四天的供胚鼠，同法取出子宫，放在消毒滤纸上，吸净子宫周围的血液。用装有冲卵液的注射器针头从上端（即靠近卵巢一端）插入子宫，将胚胎冲入培养皿中。用移卵吸管吸取胚胎放入新的培养液中清洗一下，用于移植。
三、假孕鼠的制作
1. 不育雄鼠：
选性成熟且健壮的雄鼠，结扎输精管，恢复2-3周后，与性成熟的雌鼠交配，检查雌鼠有阴道栓但不怀孕产仔。证明结扎手术成功，可作为不育雄鼠或称阉割鼠。
2. 供胚鼠：
选择性成熟且处于发情期的雌鼠，在下午4时左右与雄鼠合笼，第二天早晨挑出有阴道栓者为供胚鼠或称孕鼠。
3. 假孕鼠：
假孕鼠是胚胎移植时的受体。其生殖系统生理状态与移入卵的发育阶段同步，从而为移植的胚胎提供着床和继续发育的条件。一般选择生过一胎，母性较好的雌鼠和阉割鼠合笼，次日上午挑选有阴道栓者为假孕鼠。
四、胚胎移植
从受精卵到囊胚（受精0.5-3.5天），都可以转移至假孕鼠的生殖管道以完成发育。胚胎移植有输卵管移植和子宫移植两种。单细胞到桑椹期的卵可转移至受孕0.5天的假孕鼠的输卵管。输卵管移植仅适用于被透明带包裹的卵；3.5天的囊胚转移至假孕鼠的子宫。用于子宫移植的胚胎不需有透明带。
1. 输卵管移植（图16.7）：
（1）将假孕鼠麻醉后在背部偏下方表皮，70%酒精消毒。
（2）在背腰中央纵向剪开皮肤，开口约为0.7cm。用镊子沿切口剥开皮肤、肌肉，透过肌层可见白色脂肪垫位于脊柱两侧约1cm处。
（3）在脂肪垫的位置剪开肌肉层，切开0.5cm的小口，用小镊子夹住脂肪组织，把一侧的卵巢、输卵管与子宫一起拉出，固定好，置于显微镜下。
（4）用移胚管吸取卵子。可先吸入部分石蜡油，再吸卵以便于控制。吸卵前先吸1个气泡，然后再吸一段培养液，接着吸卵，再吸一个气泡，最后吸进一些培养液。
（5）用镊子夹住输卵管喇叭口周围接合部，随即将移胚管插入喇叭口中，轻轻向输卵管内吹气，直至第二、第三个气泡进入输卵管内。移胚管略停一下再行拔出，以防气泡与卵子逸出。
（6）将脂肪垫、卵巢、输卵管及子宫等复位，缝合伤口。小鼠苏醒后单笼饲养，18天左右分娩。
2. 子宫移植（图16.8）：
（1）小鼠的麻醉和解剖同输卵管移植。
（2）解剖镜下用小镊子夹住子宫上端，在子宫上端血管分布少处，用4号针头刺破子宫壁。拔出针头。
（3）用移胚管吸取囊胚，方法同输卵管移植，将移胚管沿原针刺孔隙插入子宫，轻轻将胚胎吹入子宫内。
（4）将子宫、输卵管及卵巢等复位。缝合伤口，消毒后等待小鼠苏醒。18天左右分娩。
实验观察
小鼠着床前的胚胎，直径约为90-100微米（包括透明带）。在解剖镜（25×）下，只能看到它的存在，对细胞形态无法辨认。在进行活体观察时，最好用150×或300×的相差显微镜，在视野内可以清楚地看到受精卵和周围的透明带，透明带内有1-2个极体，位于受精卵的一侧。哺乳动物的卵裂是不同步的，2细胞期分裂球近圆形，大小不完全相等，在两分裂球之间有一极体，透明带清晰可见。4细胞期与其他脊椎动物的分裂情况不同，可以看到四个分裂球交错排列。8细胞期，仍可看到极体和透明带。分裂球排列分成上下两层。分裂球均呈圆形。16细胞期为桑椹胚。32细胞期，在分裂球之间出现缝隙，系囊胚腔的开始。72小时后出现完整的囊胚腔，腔的一侧，集中有一群细胞，此即内细胞团。围绕囊胚腔四周的单层扁平细胞，称为滋胚层。此时的囊胚也称胚泡。晚期胚泡的透明带逐渐膨胀分解，在着床前去除透明带的胚泡呈椭圆形
为了观察不同发育时期的胚胎，可以根据小鼠胚胎发育时间表（见附表），定时从孕鼠的输卵管或子宫内将胚胎取出进行观察（图16.9）。
小鼠胚胎发育阶段及所处部位
实验材料
1.实验材料：
性成熟雌、雄昆明小白鼠
2.实验仪器：
解剖镜、显微镜、相差显微镜、注射器（1ml）、4号针头（磨平、末端磨细）、玻璃探针、微吸管（内径0.2mm）、表面皿、培养皿、双孔凹面玻片、外科手术器械。
3.实验药品：
孕马血清促性腺激素（PMSG）
绒毛膜促性腺激素（hCG）
冲卵液（杜氏磷酸缓冲液，pH7.2-7.4）：
NaCl 8.00g
KCl 0.20g
NaHPO4 1.15g
CaCl2 0.132g
KH2PO4 0.2g
MgCl2 0.1g
将上述药品称好后，放入试剂瓶内，再加重蒸水至1000ml，摇匀，用NaOH和HCl（0.1ml/1L）调pH到7.2-7.4即可使用，也可放入4℃冰箱中保存备用。
Whitten氏培养液：
NaCl 5.14g
KCl 0.356g
KH2PO4 0.162g
MgSO4.7H2O 0.294g
NaHCO3 1.9g
葡萄糖1.0g
乳酸钠（60%） 3.7ml
乳酸钙0.527g
丙酮酸钠0.025g
青霉素0.075g
链霉素0.050g
1%酚红1ml
小牛血清白蛋白3.0g
双蒸水1000ml
麻醉剂（乙醚）、石蜡油、外科消毒药品、沙布、药棉等。
小鼠早期胚胎发育和胚胎移植 https://www.doczj.com/doc/055482621.html,/4544.htm、 小鼠的早期胚胎，是研究哺乳动物以及人类自身早期发生机理常用的实验材料。胚胎移植，就是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内取出，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使其继续发育为胎儿。胚胎移植技术在畜牧业已开始应用于生产。 小鼠的早期胚胎，是研究哺乳动物以及人类自身早期发生机理常用的实验材料。胚胎移植，就是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内取出，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使其继续发育为胎儿。胚胎移植技术在畜牧业已开始应用于生产。一些发达国家已有经营奶牛和肉牛胚胎移植的企业公司，向国外销售胚胎。在我国，这一技术的研究起步较晚，1974年在绵羊上获得成功，1978年在奶牛上获得成功，80年代后期90年代初，奶牛、安哥拉山羊和绵羊的胚胎移植开始在生产上应用。胚胎移植术也是显微操作中最基本的实验技术，是从事其它显微操作如嵌合体动物、胚胎干细胞、转基因动物和细胞核移植等实验必不可少的步骤。下面以小鼠为例，介 绍哺乳动物的早期胚胎发育及胚胎移植的操作过程。 实验技术 一、人工催情和超数排卵 1. 小鼠的性别鉴定： 成年小鼠的性别较易鉴别。雌鼠可见有明显的阴道开口和明显的五对乳头，雄鼠可见明显的阴囊，仔鼠或幼鼠则主要以它们的外生殖器与肛门的距离来区别，距离近的为雌鼠，距离远的为雄鼠。 2. 人工催情： 成年小鼠在非妊娠和非哺乳期间，任何时间都可发情，性周期为4-5天。超数排卵一般选用体重在20-30g的雌鼠，注射孕马血清（PMSG）促使超排。每头雌鼠注射PMSG 5-10IU，注射时间可在第一天下午4时左右，注射部位为腹腔。在第三天的下午4时左右腹腔再注射绒毛膜促性腺激素（hCG）5IU，并和雄鼠合笼饲养让其自然交配。第四天上午8时左右检查雌鼠，如有阴道栓形成者，即可供采卵。阴道栓是雌鼠交配后精液与阴道分泌物及阴道上皮等凝结而成的，位于阴道口附近，一般在交配后数分钟即可出现 （图16.3）。最初阴栓湿润而软，随后逐渐变硬转为黄色，最后阴栓缩入阴道液化而消失，此过程需10余小时，有的在24-48小时后仍可见。在合笼后每天上午8-9 时，下午5-6时检查阴栓，出现阴栓即可认为是妊娠的第一天，即胚龄的第一天。 二、受精卵及囊胚的获得 1. 受精卵的获得： 将检查有阴栓的小鼠用脊椎脱臼法处死，70%酒精消毒腹部。在腹部中央横剪一小口（0.5cm 宽），将两边皮肤肌肉沿切口部剪开，暴露腹部器官；用剪刀和镊子除去卵巢、输卵管和子宫周围的脂肪组织，把输卵管取出（图16.4，16.5），置于盛有培养液的表面皿中。在解剖镜下找到输卵管膨胀的壶腹部，用镊子撕开一小口，卵子即自然流出（图16.6）。如受精卵已迁移到输卵管的狭窄部，则可用冲洗法收集受精卵。方法是：在解剖镜下找到输卵管喇叭口，可以用小玻璃探针帮助，将吸有冲卵液的注射器针头对准喇叭口，右手用小镊子轻轻将喇叭口套在针头上，套进约1mm即可，并用镊子把管
小鼠品系影响胚胎移植成功率的比较研究 张庆玲;贺莉;杨玉芳;李祖国;丁彦青 【期刊名称】《第四军医大学学报》 【年(卷),期】2006(027)014 【摘要】目的:探讨不同受体鼠和供体鼠品系对胚胎移植成功率的影响以及不同品系胚胎混合移植的可行性. 方法:以Balb/c雄鼠和C57BL/6雌鼠杂交F1代(B6CF1)小鼠24只和昆明鼠(KM鼠)14只作为供体鼠,共取状态良好的受精卵362颗,分别或混合回种于8只B6CF1和16只KM受体鼠输卵管内,比较两种品系鼠的产仔率. 结果:除同品系回种可产仔外,KM鼠和B6CF1杂交鼠受精卵交叉回种B6CF1或KM受体鼠以及两品系受精卵混合回种均可产仔. 其中B6CF1受体鼠产仔率(29.0%)明显高于KM受体鼠(7.0%),B6CF1供体鼠产仔率(16.0%)也略高于KM供体鼠(11.0%);杂交B6CF1受精卵同品系回种产仔率最高(32.0%),KM鼠受精卵同品系回种产仔率仅4.0%,而B6CF1和KM鼠作为受体鼠混合回种两品系受精卵的产仔率分别为25.0%和15.0%. 结论:不同品系小鼠胚胎可交叉或混合回种,小鼠胚胎移植技术不受品系限制,但同品系胚胎移植成功率更高;B6CF1作为胚胎移植实验动物明显优于KM鼠. 【总页数】4页(1249-1252) 【关键词】胚胎移植;动物,基因修饰;小鼠品系 【作者】张庆玲;贺莉;杨玉芳;李祖国;丁彦青 【作者单位】南方医科大学基础医学院病理学教研室,广东,广州,510515;南方医科大学基础医学院病理学教研室,广东,广州,510515;广州军区空军医院眼科,广东,广州,510515;南方医科大学基础医学院病理学教研室,广东,广州,510515;南
人的胚胎发育过程 1个月 受精卵一旦形成，随即启动卵裂机制。在第3、4天时受精卵已分裂为约图1 人卵细胞受精到受精卵卵裂植入的过程100个细胞的内细胞团。经输卵管蠕动细胞团被送入子宫腔，通过表面粘性物，贴附与子宫内膜，靠近子宫内膜的细胞分泌一种酶，将子宫内膜细胞裂解，形成一个小洞，从受精后的5、6天开始至第11、12天，整个胚泡埋入内膜，该过程称为“着床”或“植入”。胚泡植入后，子宫内膜重新长好，胚泡表面的滋养层细胞不断分裂，长出绒毛状突起，形成许多绒毛，伸入子宫内膜，吸收母体营养（图1）。 2个月 胚胎呈扁平的盘状，称胚盘，直径约2cm，漂浮在羊膜腔中，此时胚胎的三个胚层已经形成，并开始分化。除形成胎盘处的绒毛不脱落外，其余胚泡四周的绒毛均脱落，表面变得光滑（图a）。胚胎由存留的胚泡绒毛和子宫内膜共同形成，待胚胎第12周胎盘才完全形成。第6周出现两条管道合并的心脏原基，虽然不具备心脏形态，但已经开始跳动。 之后，胚胎渐渐出现一条封闭的循环血管，胚胎开始制造自己的血液(包括其中的各种血细胞)。第7周神经管出现，后端部分形成脊髓，前端部分稍膨大，为脑的原基（图2）。第8周胚胎约长20 mm，心脏在腹侧呈一小突起，并轻轻跳动，此时还没有四肢，只有小尾巴在后面凸出。
(图2) 3个月 胚胎先长出胳膊，然后长出双腿，头和尾屈成一团，头部有耳、鼻孔和下巴，头约占身长的1/3。第11周出现椭圆的手和脚，有五条深纹会形成指（趾）。头部两侧长出两眼，出现嘴唇和齿龈、尾巴消失。胚胎发育早期，胎儿发育很快，第2、3个月时所有器官原基基本上已经形成。其后只是内部细胞增殖使其体积增大。 4个月 胎儿性器官出现，两眼转入脸的正面，前额突出，鼻孔张开，耳朵裂缝可见，四肢变长，手指可辨并有指（趾）甲。头颈能转动，会张嘴吞咽羊水。 5个月 胎儿身长约25 cm，体重250g，头占身长的1/4，皮肤上出现胎毛和头发，皮脂腺和汗腺出现；肠道内有胎粪积聚，主要为胆囊排出的胆汁。肾已经能排尿，尿液排入羊水中，胎儿的四肢能活动。 6个月
小鼠早期胚胎发育的研究（实验方案）基础生物学课程设计 所在学院生物科学与工程学院专业班级生物科学 学生姓名 学生学号 指导教师 XXXX年XX月XX日 小鼠早期胚胎发育的研究 一、引言 胚胎发育一词通常是指从受精卵起到胚胎出离卵膜的一段过程。而无脊椎动物胚胎学家则常把其概念扩展到胎后发育直到性成熟，甚至整个生活史。 动物胚胎的发育过程 虽然动物的种类繁多，但是胚胎的发育依然拥有相似的过程，能够分成受精、卵裂、桑葚胚、囊胚、原肠胚与器官形成等阶段。此外脊椎动物的胚胎发育过程中，各种动物共同拥有的特征会首先出现(如皮肤)，之后才逐渐发展出特化的构造(如鱼鳞)，而且较复杂的物种与较原始的物种之间一开始相当类似，之后才随着发育的时间而慢慢增加变异。 受精:卵子和精子融合为一个合子的过程。它是有性生殖的基本特征，普遍存在于动植物界， 卵裂:精子与卵子结合之后会形成受精卵，由于卵黄的分布具有不对称的特性，因此受精卵可以分为动物极(会发展成外胚层)和植物极(会发展成中胚层与内胚层)。在卵裂时期，卵子会先分裂成两个细胞，之后细胞通常会逐次倍增，但是
对哺乳类而言，有时候会有不同时分裂并造成只有奇数个细胞的现象。在这个阶段，胚胎的总体积大致不变。 不同的物种具有不同的卵裂方式，可以分为完全卵裂(holoblastic cleavege)和不完全卵裂(meroblastic cleavage)，分别又可以细分成许多不同方式。如无脊椎动物的辐射卵裂与螺旋卵裂、哺乳动物的旋转式分裂等。 原肠胚:当细胞分裂成为囊胚之后，会经过一段称为原肠形成的型态发生过程，之后形成原肠胚。原肠形成过程有许多不同方式，能够大致分成5种:内陷式(Invagination)、衰退式(Involution)、进入式(Ingression)、脱层式(Delamination)、包覆式(Epiboly)，动物的胚胎利用这5种方式形成了外胚层、中胚层与内胚层的组合，而这三种胚层在之后会形成各种细胞。例如由内胚层发展而来，具有具有多潜能性的的间叶细胞，可以分化成纤维母细胞、软骨母细胞、硬骨母细胞、脂肪细胞、平滑肌细胞、横纹肌母细胞、造血母细胞等等。 器官形成:外胚层、中胚层与内胚层形成各种组织和器官的过程，称为器官形成，也称做器官发生。以青蛙的胚胎为例，在器官形成的早期，外胚层会在突起之后向内凹陷，形成神经脊与神经管;中胚层则会形成中胚叶节(somite)与脊椎，中胚叶节包围的空间称为体腔。 小鼠应用于生命科学研究中已有上百年的历史，成为研究人类遗传疾病的最佳动物模型。它是最小的哺乳动物之一，体形小，易于饲养管理;繁殖和发育速度都特别快;性情温顺，胆小怕惊;对外来刺激极为敏感;便于提供同胎和不同品系动物;成雌鼠在动情周期不同级段，阴道粘膜可发生典型变化，根据阴道涂片的细胞学改变，可以推断卵巢功能的周期性变化，且市场价格较低，。虽然小鼠和人类在体型大小和形态上相差很大，但在生物进化上非常接近。所以以小鼠作为研究人类遗传疾病的材料最为合适。
药品器材清单 PMSG 孕马血清促性腺激素 hCG 人绒毛膜促性腺激素 DPBS 杜氏磷酸缓冲液 M16 体外培养液 EG 乙二醇 蔗糖 塑料细管 1ml注射器 35mm培养皿若干 二氧化碳培养箱 小鼠胚胎的获取 控光（14h光照，10h黑暗）饲养1-2周后的4-6周龄小白雌鼠，腹腔注射10 IU/只PMSG，48h后腹腔注射10 IU/只hCG。注射hCG后（计时为0h）当晚与雄鼠（≥8周龄）合笼（雌：雄=2:1或1:1）。次日早晨检查阴道栓，见栓雌鼠于72-82h颈椎脱臼处死，采集桑椹胚。在DPBS中洗净后移入M16培养基，置于5 %CO2,95 %空气,相对湿度100 %的二氧化碳培养箱中待用。 小鼠胚胎的玻璃化冷冻 平衡液EG10，见附录溶液的配制。 玻璃化溶液EFS40 ，见附表2。或者EG40，亦见附录溶液的配制。 解冻稀释液用DPBS稀释而成的0. 5mol/L蔗糖溶液。 将室温调至25℃,经1～2小时将溶液及用具充分平衡后，用0. 25ml的塑料细管(Flance) 按顺序吸入解冻稀释液5cm———空气1㎝——1.5cm玻璃化溶液。 用吸管将胚胎移入平衡液平衡5分钟,而后导入细管内的玻璃化溶液中平衡30秒。这30秒接着吸入空气1cm——吸满解冻稀释液，封口后直接投入液氮中保存。 小鼠冷冻胚胎的解冻 将冻好保存于液氮中的细管,取出后直接投入25℃水中快速解冻。当解冻稀释液部分由乳白变为透明时取出,用吸水纸将细管水珠拭净,剪断细管两端的栓塞后,用含有解冻稀释液(0. 8ml)的注射器(带16号针头),将细管内容物冲洗于表面皿中，轻轻摇匀,置于实体显微镜下回收胚胎。回收的胚胎于解冻稀释液中平衡5分钟,以便脱出细胞内部乙二醇,再用PBS洗净后,移入M16溶液中于5 %CO2,95 %空气,相对湿度100 %的二氧化碳培养箱中培养。 小鼠胚胎的发育能力判定 体外培养回收的胚胎在M16中培养48小时以内恢复到囊胚或继续发育的胚胎视为有发育能力胚胎。 胚胎移植解冻后的胚胎,约经3小时培养,选择外形良好的胚胎移植于与结扎输精管的公鼠交配后即假妊娠第3天受体鼠的子宫中,一侧5～7枚,每只受体10～14枚胚胎为宜。妊娠19～22天观察产仔情况。
实验小鼠和大鼠各胚胎发育时期的变化 时期 胎龄（日） 胚胎发育小鼠大鼠 1 1 1 单核细胞（输卵管内） 2 2 2细胞期（输卵管内） 3 2 3.25 4细胞期（输卵管内） 4 2. 5 3.5 8-12细胞期（输卵管内） 5 3 3. 桑椹期（输卵管—子宫上部） 6 3.5 4 囊胚初期（子宫内） 7 4 5 囊胚期 8 4.5 6 植入开始 9 5 6.75 内外胚层分化 10 5.5 7.25 植入末期，卵黄腔形成，分化成内外胚层， 11 6.5 7.75 植入完毕，出现羊膜。 12 7 8.5 出现中胚层和原条。 13 7.5 9 出现神经板，头部突起，出现尿膜褶。 14 7.75 9.5 体节1-4（头部）完成外层胎盘。 15 8～8.5 10 腔，胚外体腔内和羊膜腔发育。体节5-12（颈椎部） 形成神经沟，胚回转开始。 16 8.5～9 10.5 体节13-20（胸椎前部）胚回转结束。 17 9.5 11 体节21-25（胸椎后部），神经沟闭锁。 18 10 11.5 体节26-28（腰椎前部），前肢出现。 19 10.25 11.75 体节29-31（腰椎后部），后肢出现。 20 体节32-33（荐椎后部）。 21 12 体节34、35（荐椎后部）。 22 10.5 体节36（第一层尾椎）鼻窝形成 23 体节37、38（尾椎）。 24 体节39、40（尾椎）。 25 11 12.5 体节41、42，前肢变大。
26 体节43-45（尾椎）手指分化。 27 12 13 体节46-48（尾椎）脐疝明显。 28 12.5 13.5 体节49-51（尾椎），鼻上颌闭锁。 29 14 体节52-55（尾椎）。 30 13 14.5 体节56-60（尾椎），耳孔开，耳壳形成 31 13.5～14 15 体节61-63（尾椎），口盖板闭锁 32 14.5 15.5 体节64（尾椎）、体表出现毛囊。 33 15 16 体节65（最终尾椎） 34 16-16.5 17-18 脐疝消失，眼脸、耳壳闭锁。 35 17-19 19-22 胎盘发育显着。临产。
榆林市苏州中学 年级 高二 学科生物 学期二 编写人：张瑞 审核人： 审批人： 授课教师： 班级： 小组： 姓名： 日期4.23 课时编号17 体内受精和早期胚胎发育 (二) 【学习目标】 ．1.简述哺乳动物的受精过程。 2．简述哺乳动物的胚胎发育过程及其主要特点。 【学习重点】 1.受精过程。 2.早期胚胎发育过程及主要特点 【学习难点】 早期胚胎发育过程及主要特点 受精作用 1．场所： 。 2．过程： （1）准备阶段： ①准备阶段1 精子 ； 精子必须在 发生相应生理反应后，才获得受精能力。 ②准备阶段2 卵子的准备 在（ ）内达到 期时，卵子才具备与精子受精的能力。 （2）受精阶段 ①精子穿越 和 首先发生 反应，是顶体内的 释放出来，直接溶解卵丘细胞间的物质，穿越放射冠。 穿过放射冠的精子立即与 接触， 随后将透明带溶出一条孔道，精子借自身 穿越透明带。 精子触及卵黄膜的瞬间，会产生阻止后来的精子进入透明带的生理反应，这个反应叫 做 反应，它是防止多精入卵受精的第一道屏障。 ②精子进入 卵黄膜表面有大量的 ，能抱合精子，随后，精子外膜与卵黄膜融合，精子入卵。精子入卵后，卵黄膜会立即产生一种生理反应，拒绝其他精子再进入卵内，这种生理反应称 作 作用，这是防止多精入卵受精的第二道屏障。 ③ 形成 a ．雄原核的形成：精子 脱离，并且原有的 破裂，随后，精子形成一个比 原来精子还 的核，叫做雄原核。 b ．雌原核的形成：精子入卵后，卵子被激活，完成 分裂，排出 后， 形成雌原核，雌原核一般略 于雄原核。 ④配子结合 胚胎发育 一、 探究问题 1. 发生受精的部位在哪？描述受精的各个阶段的特征？ 2,受精卵发育的部位在哪里？受精卵形成早期胚胎经历哪些阶段，每一阶段有什么特点？ 二、 课堂检测
小鼠胚胎培养方法的研究 摘要 目的：探讨小鼠早期胚胎在不同的体外培养液中生长发育的状况，从而寻找胚胎培养的最佳培养体系，为人类胚胎培养方法的改善提供理论依据，以提高临床体外受精一胚胎移植（ＩＶＦ．ＥＴ）的成功率。 方法：配制不同的培养液，对１００例小鼠超排卵共取卵子１６７８枚，分别在不同的培养液中进行体外授精，并将２一细胞鼠胚放入各组培养液中进行培养，其中，血清组的培养液为Ｅａｒｌｅ培养液加１０％人血清：卵泡液组的培养液为Ｅａｒｌｅ培养液加ｌＯ％人卵泡液；蜕膜细胞条件培养液组的培养液为Ｅａｒｌｅ培养液加ｌＯ％条件培养液：血清加卵泡液组的培养液为Ｅａｒｌｅ培养液加１０％人血清和５％人卵泡液：血清加条件培养液组为Ｅａｒｌｅ培养液加１０％人血清和５％条件培养液。每日在显微镜下观察小鼠胚胎的发育情况，分析受精率、卵
山西医科大掌 裂率、卵裂速度及桑椹胚与囊胚形成率，采用ｘ２分割检验进行统计分析。 结果： 一、１、小鼠胚胎在蜕膜细胞条件培养液中有７２．９％发育到８．细胞期，６６．０％发育到桑椹胚，６１．６％形成囊胚，３２．１％胚胎孵化。而对照组有４３．６％发育到８．细胞期，３０．９％发育到桑椹胚，１９．１％到初级囊胚，５５％孵化的胚胎。两组比较有显著性差异。２、卵泡液的胚胎有７１．３％到８．细胞期，５８８％发育到桑椹胚，５０．Ｏ％形成囊胚，２５７％孵化。与对照组比较有差显著性异。３、血清组有５３，４％发育到８．细胞期，４０．５％到桑椹胚，２９．３％形成囊胚，仅有７．８％孵化。与对照组无显著性差异。 二、鼠卵在不同培养液中受精率无显著性差别，而对于卵裂率和优质胚胎的形成率，鼠卯在蜕膜细胞条件培养液组和卵泡液组中均与对照组有显著性差异，而血清组与对照组比较无差异。鼠胚在蜕膜细胞条件培养液和卵泡液中培养发育速度快，碎片率明显低于对照者。 三、小鼠早期胚胎在卵泡液组、蜕膜细胞条件培养液组
受精到胚胎发育全过程 作者：佚名2005-2-8 受精和胚胎发育是生命的开始，每个人都要经历，但大多数人都一头雾水。心里有好多疑惑，可又不好意思问出口。那就看看这里吧！ 受精 精子 精子是男性的生殖细胞，由睾丸产生，平时就储存在睾丸和附睾里。正常男子每次射出精液2～6毫升，每毫升约有0.6～1.5亿个精子。射出的精子依靠鞭毛的摆动奋力向前游去，与等候在输卵管的卵子结合。 成熟卵泡（箭头所指处） 卵子是女性的生殖细胞，由卵巢产生并排出。女性进入生育期以后，卵巢每月会排出一个卵子，有时 可以排两个。卵子从卵巢排出后进入输卵管内，停留在输卵管的峡部与壶腹部的交界处等待受精。
性交过程 男性通过性交将精液射入女性的阴道内，精子离开精液经宫颈管进入宫腔，当精子与卵子相遇，精子通过酶的作用得以穿过卵子的外围到达卵子的表面，一当精子与卵子表面接触便开始了受精过程。到达卵子表面的精子会借助尾部的摆动而进入卵子的内部。 受精卵（箭头所指分别为精原核和卵原核） 精子和卵子各带23条染色体，受精即精子和卵子的染色体结合，这样就有了46条染色体，受精卵由单细胞分裂成两个相同的细胞，并慢慢向宫腔移动，边移动边分裂，到子宫时已成为约有48个细胞的中空团块，叫胚泡或囊胚，进行下一步的植入。 受精卵的发育与着床
卵子受精后即开始有丝分裂，并在一边分裂的同时一边向子宫腔方向移动。受精卵在输卵管内36小时后分裂为2个细胞，72小时后分裂成16个细胞，叫桑椹胚。受精后第4日，细胞团进入子宫腔，并在子宫腔内继续发育，这时，细胞已分裂成48个细胞，成为胚泡准备植入。胚泡可以分泌一种激素，帮助胚泡自己埋入子宫内膜。受精后第6-7日，胚泡开始着床。着床位置多在子宫上1/3处，植入完成意味胚胎已安置，并开始形成胎盘，孕育胎儿了。 1、受精卵 2、精原核和卵原核开始互相融合 3、受精卵开始有丝分裂 4、几近完成的有丝分裂
小鼠胚胎体外培养研究 【摘要】本文所选用的实验材料为小鼠原核胚，主要研究几种不同溶液、溶液所含不同生长因素、不同培养气象等所对小鼠原核胚发展产生的影响，主要目的是最终找到一种适于小鼠胚胎成长的培养环境以及溶液成分，进而不断优化小鼠胚胎体外培养的体系结构。并且为其它哺乳类动物的胚胎体外培养提供一些参考。 【关键词】小鼠；胚胎；体外培养 0.前言 在迈入新世纪以后，我国的科学技术发展十分迅猛，尤其是我国的生物科技得到了广泛的推广与使用，从而加快了人类社会的发展。胚胎工程是指主要针对胚胎哺乳类动物的胚胎所进行的工程技术操作，之后再将胚胎继续发育，从而使人们获得所需的成体动物的一种全新技术。当前，胚胎工程在蓄牧种繁殖预遗传资源保护、利用方面得到了广泛推广和使用，并且在人类疾病真毒、药物研发等研究方面蕴含巨大应用价值，因此，受到人们高度的关注。 1.材料预方法 1.1实验所需的材料 实验所需的动物：清洁过的雌性预雄性小鼠，所选用的雌性小鼠年龄约在28—35日的日龄范围内，共约250只，而选用的雄性小鼠日龄在56天以上，共有32只。选用的实际预药品主要有，丙酮酸钠、青霉素钠、链霉素、探索氢钠、氯化镁、牛磺酸等。而所选用的仪器主要有倒置显微镜与实体显微镜，离心机、PH仪、显微图像管理系统等。小鼠胚胎培养液主要有三种，即HTF、CZB、KSOM 溶液。在配制每一种溶液时都要进行过滤，以便除菌，并且还要放在4摄氏度的环境下进行保存。 1.2小鼠超数排卵 从中选用体重超过25g雌性小鼠，要在小鼠腹腔中注射PMSG20IU，待48小时之后再在腹腔中注射Hcg10IU。雄性小鼠要选用体重超过30g的，严格按照雌性鼠预雄性鼠比例为2：1的比例放在同一个笼中混合养殖，在第二天早晨要检查小鼠的阴道栓，将具有阴道栓的雌性小鼠在20—23小时范围内提取卵母细胞预卵丘细胞的复合体。 1.3采集小鼠的原核胚 在注射hCG后的22小时后，采用颈椎脱臼方法将小鼠处死，在用酒精消毒之后，剪开腹腔，在沿着小鼠卵巢端剪取输卵管，将输卵管放在生理盐水的35mm 培养器皿中，然后将培养器皿放进实验室，将小鼠的输卵管放入到洗卵液培养器皿中浸泡一段时间。与此同时，要求实验人员在体视显微镜下准确找到输卵管膨大位置，再使用专门的注射器将其划破，然后轻轻挤压小鼠输卵管端部，从而大量溢出小鼠卵母细胞复合体。 1.4培养小鼠原核胚 首先，要制作一胚胎培养碟，然后将小鼠原核胚放入其中，并且在上部覆盖一层石蜡油，将其放置在碳培养箱中，调节至37度环境下预热四个小时。把细胞复合体取出放在500uLHTF溶液中，利用移液枪吹打几次，并将脱光卵丘细胞原核胚抽取出。多次反复进行此操作，待卵细胞全部脱落后，再将其移动到胚胎培养碟中培养。在移入时标记为0小时，在24小时以后，便开始观察小鼠卵细
江丙农业学报2010，22(12)：144～146 A c t a A g r i c uhu r ae J i an gxi 小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究 林峰，陈玉霞+，孙克宁，杨婷，田晓军 (河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002) 摘要：为探讨冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响，分别采用子宫切碎法与子宫冲胚法对超排小鼠进行了冲胚。结果表明：子宫冲胚法的平均采卵数和平均获胚数极显著高于子宫切碎法(P<0．01)，而平均可用胚数显著高于子宫切碎法(P< O．05)，两种方法的平均未受精卵数则差异不显著(P>0．05)，说明冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响显著，且子宫冲胚法明显优于子宫切碎法。小鼠早期胚胎发育观察结果表明：超排处理后，在公母鼠合笼后76～79．5h采胚，胚胎大多处于桑椹胚期，而在公母鼠合笼后88～91．5h采胚，胚胎大多处于致密桑椹胚期与囊胚期；采用TC M l99+15％胎牛血清培养液对小鼠胚胎进行体外培养是可行的。 关键词：小鼠；超数排卵；早期胚胎；体外培养；冲胚方法 中图分类号：Q132．8文献标识码：A文章编号：1001—8581(2010)12—0144—03 St udy on E f f ect of Super ovul a t i on and i n vi t r o C ul t ur e of Ear l y Em br yo i n M ous e LI N Fe n g，C H E N Y u—xi a‘，SU N K e—ni ng，Y A N G Ti ng．T I A N X i ao—j u“ (C ol l ege of A n i m a l H us ba ndr y a nd V et er i nar y M e di ci ne，H enan A矛c ul t ur al U ni ver si t y．Z he ngzhou450002，C hi na) A bs t r act：I n t hi s paper．t he e ffe c t of dif f erent m e t h ods of c o l l ec t i n g e m br yos on t he s uper ovul at i on of m i c e w a s s t udi ed，and t he e m br yos i n t he suoer ovul at ed m i Ce w er e coll ected by usi ng t he ut erus—m i nc i ng m e t ho d a nd ut er us—col l ect i ng m e t hod re s pec t i ve l y．ne r es ult s show e d t ha t t he aver age num ber of eggs and em bryos obt ai ned by t he ut er us—co l l ect i ng m e t ho d w er e,ext r em el y s ignif i ca ntl y hi gher(P<0．01)t han t hos e obt ai ned by t he ut e r us—m i nci ng m e t hod，an d t he aver age nu m ber of us abl e em bryos obt ai ned by t he u t e r r us—coll ect i ng m e t he d w强si gni f i cant l y hi gher(P<0．05)t han t ha t di d by t he ut erus—m i nc i ng m et hod．ne aver age num be r of an-fe r t i l i zed eggs obt ai ned by t hes e t w o m e t h ods w a s no t s ignif i cant ly di f f er e nt(P>O．05)．So t he s uper ovu l at i on e ffe c t of m i c e W a S s i g-nif i e ant lv i nnue nee d by t he m e t ho d of coll ect ing em bryos．T he obs er vat i on r es ult s of ear l y e m br yos de vel opm ent i ndi cat ed t hat m ost of t he em bryos coll ected76—79．5hour s aft er com bi ni ng cages w e r e at m or ul a s t age．w hi l e m os t of t}l e em bryos coll ected88～91．5 hour s a ft e r com bi ni ng cages w e r e a t com pa ct e d m or u l a s t a ge and bla s t o e yst s t ag e．I t W a S f eas i ble t ha t t he em bryos of m i c e w er e cul t i—vat ed i n vi t ro by usi n g t he m i xed s o l ut i o n of T C M l99and15％F C S． K e y w or ds：M ouse；Sup er ov ul at i on；E ar l y em br yo；I n vi t ro cul t ur e；M e t hod of coll ect ing em bryos 雌性哺乳动物一生所产的卵子总数早在其胚胎发育形成卵巢的过程中已被确定，成熟卵子在成年后的发情周期中分别排出，但是单纯依靠动物的自然排卵，一方面所得到的卵母细胞数或胚胎数较少，另一方面又消耗大量的时间和浪费较多的动物．因此为了获取大最的胚胎，多采用超数排卵的方法，即利用外源性促性腺激素诱发多个卵泡同时发育并排出具有正常受精能力的卵子¨。1。该技术大幅度地开发利用了卵巢上的卵母细胞资源，为胚胎工程和转基因动物等相关领域的研究提供了大量的研究素材。小鼠具有个体小、生长快、繁殖力强等特点，是畜牧兽医科学研究领域应用最为广泛的实验动物，研究小鼠超数排卵对动物胚胎工程等研究具有重要意义。 近年来，随着遗传工程小鼠的大量开发，人们对小鼠卵母细胞和胚胎的需求量日趋增多，因而完善的超数排卵技术是遗传工程小鼠研究获得成功的重要前提条件。到目前为止，能够获得大量胚胎来源的技术仍为超数排卵。超数排卵反应是一个极其复杂的生理过程。研究资料表明，小鼠超排效果受激素的种类、剂鼍以及动物的生理状态等多种因素影响，这些因素错综复杂，使超数排卵效果很不稳定H—o。为了进一步研究冲胚方法对超数排卵的影响及小鼠冲胚的有效方法，本试验在控制以上因素一致的条件下，采用两种不同的冲胚方法来进行对比，以期为今后的小鼠超数排卵研究提供一定的参考依据，为胚胎生物技术研究提供借鉴。 l材料与方法 1．1试验地点和时间本试验于2009年l O月16日至2010年5月27日在河南农业大学牧医工程学院胚胎生物技术研究室进行。 1．2试验动物 1．2．1试验动物的条件试验用昆明小白鼠购于河南省实验动物中心。雌性小鼠(未经产)为17周龄、体重30 收稿日期：2010一 基金项目：河南省重点科技攻关计划项目(82102130005)；河南省蕈大科技攻关计划项目(0422011200)。 作者简介：林峰(1972一)。男．山东栖霞人．副教授，博士，主要从事动物胚胎生物技术研究。通讯作者：陈玉霞。
第18卷 第1期2001年3月实验动物科学与管理 LABORATORY ANIMAL SCIENCE AND ADMINSTRATION Vol .18 No .1Mar .2001 小鼠胚胎移植技术方法比较 管 彤,王凤山,王 静,王晓军,于国德,杨梦礼 (天津市劳动卫生职业病研究所,天津 300204) 摘要:以近交系小鼠C 57BL 6J 、BDF 1小鼠作为供体胚小鼠,封闭群昆明种小鼠作为代母,对实验小鼠胚胎移植的三种方法,即:对小鼠受精卵(或2个细胞期胚)经由代母输卵管口移植、经由代母输卵管壁移植及对小鼠进行子宫移植(8细胞期胚)的方法了进行实验研究,并对各方法适于使用的动物对象、实验要求、产仔率、优势与不足等做了进一步的探讨,为今后的实验动物与动物实验提供参考依据。关键词:近交系小鼠;输卵管口(壁);移植;子宫移植 中图分类号:S865.13 文献标识码:A 文章编号:1006-6179(2001)01-0029-03 收稿日期:2000-07-07 第一作者简介:管彤(1968-),女,助理研究员,主要从事野生小鼠资源开发及实验小鼠胚胎毒理学研究。 自五十年代以来人类建立了受精卵和早期胚胎的采集技术之后,很快就完成了早期胚向代母体内 输卵管及子宫移植的胚胎移植技术的开发和研究[1] 。小鼠的胚胎移植技术对于实验动物学研究及生命科学研究具有重要价值。人类由小鼠进行发育生物学研究,包括胚胎的发生、发育、突变基因的研究、转基因动物的研究、基因打靶技术及小鼠胚胎冷冻种子库技术等涉及胚胎体外操作的各种研究,均需要进行胚胎移植入代母体内来完成。按照胚胎发 生的阶段不同,移植部位也不同[2] 。1～2个细胞期胚胎进行输卵管口移植,8细胞期至桑椹期胚进行 子宫移植。1992年,日本学者Nakagata [3] 又报道了经由输卵管壁进行输卵管移植的技术,以解决移植中一些代母品系输卵管口较小、较短的问题。 本文主要是将此三种移植方法引入,使之在本实验室成为常规后,将其应用于实验小鼠并进行了方法上的比较,重点比较了方法上的难易程度、产仔率、方法选择的前提因素。 1 材料与方法 1.1 实验动物 实验动物作为参比对照的成年近交系C 57BL 6J 小鼠、B DF 1小鼠(♀C 57BL 6J ×♂DBA 2)和作为代母的昆明种封闭群小鼠。 1.2 试剂 PMSG (pregnant mare serum gonadotropin )、HC G (human chorionic gonadotropin )、胚胎移植用Injection Medium 培养液、M 2培养基等。1.3 假孕代母的准备 1.3.1 昆明种雄性小鼠的结扎 为输卵管移植及子宫移植用代母(昆明种封闭群小鼠)交配用的雄性昆明种小鼠进行输精管结扎手术,以便制备假孕代母。进行输精管结扎手术的雄性昆明种小鼠应提前三周施行手术,术后备用。1.3.2 制备假孕代母 胚胎移植前一日(子宫移植,前三日)将已施行输精管结扎手术术后三周的昆明种雄性小鼠以1∶2与其雌性小鼠进行同笼交配,次日检查阴道栓有无,以阴道栓形成者作为移植用代母。1.4 卵的采集 1.4.1 超排卵 [4] 取出生后8～10周的C 57BL 6J 及B DF 1雌性小鼠进行PMSG 处理(腹腔注射,5IU 只),48h 后进行HC G 超排卵处理,方法、剂量相同,HC G 处理14～17h 后可进行受精卵的采集(子宫移植,为HC G 处理后第三日)。 1.4.2 交配 取已注射PMS 、HCG 后的C 57BL 6J 、B DF 1雌性小鼠与其相应的C 57B L 6J 、BDF 1雌性小鼠进行同笼
受精到胚胎发育全过程加上减数分裂从无性人体实在来不及同时进化出男女世蔚摘要自网页 作者：佚名2005-2-8 受精和胚胎发育是生命的开始，每个人都要经历，但大多数人都一头雾水。心里有好多疑惑，可又不好意思问出口。那就看看这里吧！ 受精 精子 精子是男性的生殖细胞，由睾丸产生，平时就储存在睾丸和附睾里。正常男子每次射出精液2～6毫升，每毫升约有0.6～1.5亿个精子。射出的精子依靠鞭毛的摆动奋力向前游去，与等候在输卵管的卵子结合。 成熟卵泡（箭头所指处） 卵子是女性的生殖细胞，由卵巢产生并排出。女性进入生育期以后，卵巢每月会排出一个卵子，有时 可以排两个。卵子从卵巢排出后进入输卵管内，停留在输卵管的峡部与壶腹部的交界处等待受精。
性交过程 男性通过性交将精液射入女性的阴道内，精子离开精液经宫颈管进入宫腔，当精子与卵子相遇，精子通过酶的作用得以穿过卵子的外围到达卵子的表面，一当精子与卵子表面接触便开始了受精过程。到达卵子表面的精子会借助尾部的摆动而进入卵子的内部。 受精卵（箭头所指分别为精原核和卵原核） 精子和卵子各带23条染色体，受精即精子和卵子的染色体结合，这样就有了46条染色体，受精卵由单细胞分裂成两个相同的细胞，并慢慢向宫腔移动，边移动边分裂，到子宫时已成为约有48个细胞的中空团块，叫胚泡或囊胚，进行下一步的植入。 受精卵的发育与着床
卵子受精后即开始有丝分裂，并在一边分裂的同时一边向子宫腔方向移动。受精卵在输卵管内36小时后分裂为2个细胞，72小时后分裂成16个细胞，叫桑椹胚。受精后第4日，细胞团进入子宫腔，并在子宫腔内继续发育，这时，细胞已分裂成48个细胞，成为胚泡准备植入。胚泡可以分泌一种激素，帮助胚泡自己埋入子宫内膜。受精后第6-7日，胚泡开始着床。着床位置多在子宫上1/3处，植入完成意味胚胎已安置，并开始形成胎盘，孕育胎儿了。 1、受精卵 2、精原核和卵原核开始互相融合 3、受精卵开始有丝分裂 4、几近完成的有丝分裂
实验四小鼠胚胎培养 实验目的：训练学生实验动物小鼠超数排卵、胚胎收集、胚胎培养技术。观察早期胚胎发育过程。 实验器材：CO2培养箱，CZB培养液，石蜡油，35 m 培养皿，小东物手术器械。小鼠笼及其附件。、 实验动物：25 克雌性小鼠30只。成年雄鼠10只。 实验药品：PMSG、HCG、生理盐水，CZB培养液，TCM199培养液 实验步骤：一、液滴的制作：用加样枪把100微升的CZB或TCM199，做成两个液滴，上面覆盖石蜡油。用前在CO2培养箱 平衡一昼夜。 二、0天雌鼠注射PMSG 12IU, 48小时后腹腔注射HCG。 当晚 三、按1：3的公母比例放入公鼠笼中，第二天晨、第三天 晨检察有阴道拴的母鼠检出。 四、小鼠颈椎断处死。剖开腹腔将输卵管两端剪开，取出 输卵管，放入盛有37℃生理盐水的表皿内在40倍体视 镜下捡出胚胎。 五、将检出的胚胎，放入培养液滴中，每个液滴放入5枚 胚胎。将培养皿放入37℃，95%湿度的CO2培养箱中。 六、每隔两天观察培发育情况并记录下来发育数目。并画 出桑椹胚、囊胚、和脱出囊胚图。
注意事项：雌、雄小鼠合笼后，不一定交配。有阴道拴的母鼠不一定有胚胎。取出胚胎不一定都是受精卵。受精卵不一 定都能正常发育下来。 移送胚胎时注意小心，免得丢失。 每个小组设一名联系人。及时与老师保持联系。 实施步骤：因实验条件限制，每组10人，共分10组 实验步骤安排： 1、注射PMSG 、hCG 2、雌雄交配 3、观察阴道拴 4、制作培养液滴 5、制作吸胚针 6、观察胚胎 实验分组： 第一组：学号81060901至81060914；组长李万宏 第二组：学号81060915至81060924；组长李继富 第三组：学号81060925至81060935；组长范圣涛 第四组：学号81060936至81061006；组长刘颖 第五组：学号81061007至81061019；组长高鹤
种蛋孵化21天胚胎发育过程描述及每日胚胎变化图 早期(孵化1-4天)，内部器官发育阶段； 第1天，中胚层进入暗区，在胚盘的边缘出现许多红点，称“血岛”。照蛋时蛋黄表面出现一颗稍透亮的圆点，俗称“鱼眼珠”。 第2天，各种胎膜相继形成，胚胎头部开始从胚盘分离出来，照蛋时，可见卵黄囊的血管区形状很像樱桃，俗称“樱桃珠”。 第 3天，鼻、腿、翅开始形成，胚胎开始转为左侧下卧，循环系统迅速增长。照蛋时可见胚胎及伸展的卵黄囊血管，形状似一只蚊子，俗称“蚊虫珠”。 第4天，舌开始形成，机体的器官都已出现，卵黄囊血管包围蛋黄达1/3，胚胎和蛋黄分离，胚胎头部明显增大。胚胎与卵黄囊的血管形似蜘蛛，俗称“小蜘蛛”。 中期(孵化5-15天)，外部器官发育阶段： 第5天，生殖器官开始分化，出现了两性的区别，心脏完全形成，眼的色素大量沉积，照蛋时可明显看到黑色的眼点，俗称“单珠”。 第6天，尿囊达到蛋壳膜内表面，卵黄囊分布在蛋黄表面的1/2以上，蛋黄的水分达到最大的重量，照蛋时可见头部及增大的躯干部呈两个小圆团，俗称“双珠”。 第7天，胚胎出现鸟类特征，肉眼可分辨机体的各个器官，照蛋时不易看清羊水中的胚胎，俗称“沉”。 第8天，羽毛开始发生，上下喙可以明显分出，右侧卵巢开始退化，四肢完全形成，腹腔愈合照蛋时，正面可见胚胎在羊水中浮动，俗称“浮”。 第9天，喙伸长并弯曲，鼻孔明显，眼睑已达虹膜，翼和后肢已具有鸟类特征。胚胎全身被覆羽乳头，内部器官已发育良好，肾脏上方的性腺已可明显区分出雌雄。照蛋时，背面尿囊血管伸展越出卵黄囊，俗称“窜筋”。 第10天，腿部鳞片和趾开始形成，尿囊在蛋的锐端合拢。照蛋时，整个胚蛋除气室外都布满了血管，俗称“合拢”。 第11天，背部出现绒毛，冠出现锯齿状，尿囊液达最大量。 第12天，身体覆盖绒羽，肾脏、肠开始有功能，开始用喙吞食蛋白，蛋白大部分已被吸收到羊膜腔中，从原来占蛋重的60%减少至19%左右。 第13天，身体和头部大部分覆盖绒毛，胫出现鳞片，照蛋时，蛋小头发亮部分随胚龄增加而少。 第14天，胚胎发生转动而同蛋的长轴平行，其头部通常朝向蛋的大头。 第15天，翅已形成，体内的大部分器官大体上都已形成。 后期(孵化16-19天)，胚胎的生长阶段： 第16天，冠和肉髯明显，蛋白几乎全被吸收到羊膜腔中。 第17天，肺血管形成，但尚无血液循环，亦未开始肺呼吸。羊水和尿囊也开始减少，蛋白全部进入羊膜腔。照蛋时，小头看不到透明的部分，俗称“封门”。 第18天，羊水、尿囊液明显减少，头弯曲在右翼下，眼开始睁开，胚胎转身，喙朝向气室，照蛋时可以看到气室向一侧倾斜，俗称“斜口”。 第19天，卵黄囊收缩，连同蛋黄一起缩入腹腔内，喙进入气室，开始肺呼吸。照蛋时，可见气室中翅与喙的黑影闪动，俗称“闪毛”。 第20天，卵黄囊已完全吸收到体腔，脐部开始封闭，尿囊血管退化。雏鸡开始大批啄壳，天大量出雏。颈部破壳肌在孵出后8天萎缩，破壳齿也自行脱落。 第21天，出壳。
人体胚胎发育全过程（图） 受孕 看看在受孕过程中，你的身体内部在经历哪些神奇的过程。 受精 怀孕1个月 你的宝宝现在还是个胚胎，由两层细胞群组成。宝宝的所有器官和身体部分搜将从这两层细胞群发育而成。 怀孕第04周 怀孕04周标志着胚胎期的开始。从现在到怀孕第10周，胎儿所有的器官将开始发育并运行。因此，这时候的胎儿最为脆弱，特别容易受到任何影响他发育的因素的干扰。 现在你的宝宝还是一个由两层组织构成的胚胎，他的所有器官和身体部位都将由这些组织发育形成。最初的胎盘细胞着床在子宫内膜上，为胎儿的血液输送制造空间。到了本周末，胎盘开始逐渐发育，便可以提供给宝宝成长所需要的营养和氧气了。这个时期还会出现包裹胎儿的羊膜囊，其中的羊水会在宝宝生长发育时起到保护作用，而卵黄囊会在胎盘发挥功用之前，为胎儿制造红血球和输送营养物质。
怀孕第05周 怀孕05周胚芽正在你的子宫深处迅速生长。这时候，你的宝宝已经有芝麻粒般大小了，但是看起来还不像人，更像一只小蝌蚪。它现在由三个胚层——外胚层、中胚层和内胚层组成，这三个胚层将来会形成宝宝的器官及组织。细胞正在分化形成胎儿的主要器官（如肾脏、肝脏），神经管也开始发育。神经管是由胚胎的上层即外胚层分化而来，将来会发育成宝宝的大脑、脊髓、神经和脊椎等。外胚层还将形成宝宝的皮肤、头发、指甲、乳腺、汗腺及牙珐琅质等。胎儿的心脏及循环系统开始由中胚层分化形成。（事实上，在这一周，宝宝的小心脏已经开始分成心室，开始跳动，并能泵血了。）中胚层还将分化形成宝宝的肌肉、软骨、骨骼和皮下组织等。而第三层即内胚层将形成宝宝的肺、肠道、早期泌尿系统，以及甲状腺、肝脏和胰腺等。与此同时，为胎儿输送营养和氧气的最初形态的胎盘和脐带已经开始工作了。 怀孕第06周