郁金香鳞片离体培养再生小鳞茎研究

广西农业科学２０１０，４１（１１）：１１５８—１１６０　Ｇｕａｎｇｘｉ　Ａ　ｃｌｌｌｔｌｌｒ８ｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　

郁金香鳞片离体培养再生小鳞茎研究　

龚明霞　，何铁光　，方锋学　，董文斌　，方　峰。　

（１广西农业科学院蔬菜研究所，南宁５３０００７；２广西甘蔗研究所，南宁５３０００７；３广西化工研究院，南宁５３０００１）　

摘要：以两个郁金香品种小天使和圣诞节的种球鳞片为外植体，研究不同接种方式、不同部位鳞片、不同基因型　

和激素浓度对郁金香鳞片离体培养再生小鳞茎的影响。结果表明，以鳞片凸面朝上进行培养，其成活率较高，达　

７６．６７％；以内层鳞片进行培养，其成活率达８５．００％；小天使鳞片在添加１．０　ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ、０．５　ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ的Ｍｓ培养基上的　

成活率和分化率均最高，而圣诞节在含２．０　ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ、０．５　ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ的Ｍｓ培养基上的分化率较高；两个品种的小鳞　茎在含３．０　ｍｇ，Ｌ　６一ＢＡ、０．２　ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ的ＭＳ培养基上增殖效果最好。　

关键词：郁金香；鳞片；离体培养；小鳞茎；增殖　

中图分类号：￥６８２．２＋６３　文献标识码：Ａ　文章编号：１００２—８１６１（２ＯＬＯ）１１－１１５８—０３　

／ｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｂｕｌｂｌｅｔｓ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ｂｕｌｂ　

ｓｃａｌｅｓ　ｏｆ　ｔｕｌｉｐ　

ＧＯＮＧ　Ｍｉｎｇ－ｘｉａ　，ＨＥ　Ｔｉｅ－ｇｕａｎｇ　，ＦＡＮＧ　Ｆｅｎｇ－ｘｕｅ　，ＤＯＮＧ　Ｗｅｎ—ｂｉｎ　，ＦＡＮＧ　Ｆｅｎｇ。　

（１　Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００７，Ｃｈｉｎａ；２　Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｕｇａｒｃａｎｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００７，Ｃｈｉｎａ；３　Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔ￣，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００１，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｂｕｌｂ　ｓｃａｌｅｓ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｔｕｌｉｐ　ｃｕｌｔｉｖａｒｓ．ｖ　一Ｌｉｔｔｌｅ　ａｎｇｅｌ　ａｎｄ　Ｃｈｒｉｓｔｍａｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　

ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐａｒｔｓ　ｏｆ　ｂｕｌｂ　ｓｃａｌｅ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔ，ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ　ａｎｄ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｎ／ｎ　ｖｉｔｒｏ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｕｌｂｌｅｔ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　Ｄａｎｓ　ｏｆ　ｂｕｌｂ　ｓｃａｌｅ．Ｔｈｅ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｂｕｌｂ　ｓｃａｌｅｓ　ｗａｓ　ｒｅｃｏｒｄｅｄ　ｈｉｇｈｅｒ　ｆ７６．６７％１　ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｖｅｘｉｔｙ　ｏｆ　ｂｕｌｂ　ｓｃａｌｅ　ｗａｓ　ｕｐｗａｒｄ．Ｔｈｅ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｉｎｎｅｒ　ｂｕｌｂ　ｓｃａｌｅ　ｒｅａｃｈｅｄ　８５．０ｏ％．Ｔｈｅ　ｂｕｌｂ　ｓｃａｌｅ　ｏｆ　ｖａｒｉｅｔｙ　Ｌｉｔｔｌｅ　ａｎｇｌｅ　ｈａｄ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｂｕｌｂｌｅｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ，ｗｈｅｎ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｏｎ　ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　６－ＢＡ（１．０　ｍｇ　ａｎｄ　ＮＡＡ（０．５　ｍｅＣＬ），ｗｈｉｌｅ　ｖａｒｉｅｔｙ　Ｃｈｒｉｓｔｍａｓ　ｈａｄ　ｈｉ　ｇｈｅｒ　ｂｕｌｂｌｅｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｎ　ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　６一ＢＡ（２．０　ｍｓ／Ｌ）ａｎｄ　ＮＡＡ（０．５　ｍｇＬ）．Ｔｈｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｕｌｂｌｅｔ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｂｅｓｔ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　６－ＢＡ（３．０　ｍｇ／Ｌ）ａｎｄ　ＮＡＡ（０．２　ｍｇ／Ｌ）．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔｕｌｉｐ；ｂｕｌｂ　ｓｃａｌｅ；ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｂｕｌｂｌｅｔ；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　

郁金香（Ｔｕｌｉｐａ　ｇｅｓｎｅｒｉａｎａ　Ｌ．）又名洋荷花，花大、　色艳、花形奇异，为荷兰、土耳其等国的国花，是世　

界著名的球根花卉。我国从上世纪８０年代开始少量　引种。近年来不少大、中城市大量进口郁金香种球　

用于举办花展，市场需求日益增长，经济效益十分　可观。但郁金香鳞茎自然繁殖子球的速度很慢，且　

退化严重，故每年均需进口，严重制约了我国郁金　香花卉产业的发展。植物组织培养可不受地区、气　

候、时间的影响，可在较短的时间内繁殖出大量种　苗『ｌＩ　，不仅是快速繁殖郁金香种球的有效途径，而　

且是进行郁金香种质资源保存、遗传转化和新品种　

选育的基础。目前，国外学者对郁金香组织培养研　究进行较多，主要以茎段［　，　、腋芽ｌ５．　、球茎［　，引、花　

茎［，］等作为外植体，且大部分研究都是先形成愈伤　组织后再分化出小芽，而对以鳞片为外植体直接诱　

导再生小鳞茎的研究较少。本研究以郁金香种球为　材料，以其鳞片为外植体，对离体条件下小鳞茎再　生特性和影响因素进行系统研究，以期为郁金香的　

快速繁殖提供参考。　

１材料与方法　

１．１试验材料　

以２个郁金香品种小天使、圣诞节的种球为材　料，取鳞片为外植体。　

１．２试验方法　１．２．１　预处理用保鲜膜包裹郁金香种球，置于　

４℃冰箱中预冷处理３０　ｄ。　

１．２．２消毒方法　消毒前１　ｄ从冰箱中取出郁金　

收稿日期：２０１０—０８—１８　基金项目：广西农业科学院科技发展基金项Ｅｔ（２００７０１０）　作者简介：龚明霞（１９７９一），女，湖北黄冈人，硕士，助理研究员，主要从事花卉及特种蔬菜育种、组织培养和栽培等研究工作。

　龚明霞等：郁金香鳞片离体培养再生小鳞茎研究　・　１１５９　・　

香种球。消毒时剥去种球外层表皮，用解剖刀切去　黄化老死部分。用洗沽精洗净表面污物后，以自来　

水冲洗３０　ｍｉｎ以上。于超净工作台上，用７５％酒精将　

种球消毒３０　Ｓ。无菌水冲洗１～２次，然后用加有２～３　滴吐温一８０的０．Ｉ％ＨｇＣ１　溶液浸泡消毒１０　ｍｉｎ，期间　

每２　ｍｉｎ摇动１次，最后用无菌水浸洗５～６次，取出置　于无菌滤纸上吸干水分后待用。　

１．２．３接种方法用解剖刀切除种球尖端开口部　分，再纵切种球，取其内、外层鳞片，切割成约０．５　

ｃｍｚ的小块，进行不同处理培养。　１．２．４不同接种方式对鳞片生长的影响　以小　

天使内层鳞片为材料，按凹面朝上和凸面朝上２种　

接种方式接入ＭＳ＋６一ＢＡ　１．０　ｍｇ／ＩＪ＋ＮＡＡ　０．３　ｒａｇ／Ｌ＋蔗　糖３０．０　Ｌ＋琼脂粉８．０　ｇ／Ｌ培养基中，每瓶接５块，各　

接８　ｌ０瓶．研究接种方式对鳞片初培养的影响。观　

察记录鳞片生长情况．３０　ｄ后统计结果（不计污染　瓶，下同）。　

１．２．５不同部位鳞片对鳞片生长的影响分别取　小天使外层和内层鳞片，以凸面朝上的方式接入　

ＭＳ＋６一ＢＡ　１．０　ｍ　Ｌ＋ＮＡＡ　１．０　ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０．０　ｇ／Ｌ＋　琼脂粉８．０　Ｌ培养基中，每瓶接５块，各接８～１０瓶，　

观察记录鳞片生长情况，３０　ｄ后统计结果。　１．２．６不同基因型和激素浓度对郁金香种球鳞片　

小鳞茎分化、增殖的影响　以ＭＳ为基本培养基，添　力Ⅱ１．０～２．０　ｍ＃Ｌ　６一ＢＡ、０．５～１．０　ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ以及蔗糖　

３０．０　Ｌ、琼脂８．０　ｇ／Ｌ，分别对小天使和圣诞节种　球内层鳞片进行分化培养；在ＭＳ培养基中添加１．０～　

３．０　ｍｇ／Ｌ　６一ＢＡ、２．０　ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ以及蔗糖３０．０　Ｌ、　琼脂８．０　Ｌ，分别对“小天使”和“圣诞节”小鳞茎　

进行增殖培养，每瓶接５～６块，各接１６瓶，４０　ｄ后统　

计结果　

２结果与分析　

２．１不同接种方式对郁金香鳞片成活的影响　

对小天使内层鳞片进行培养，７　ｄ后部分鳞片　开始膨大生长，凸面由乳白色渐变成浅黄绿色．最　

后变成绿色．部分可分化出小鳞茎：有的鳞片则从　周围切口处开始，凸面由乳白色渐变为黄白色，最后　

呈黄褐色或灰褐色坏死状：而几乎所有鳞片凹面均　为灰褐色或黑褐色。从表１可知，以不同方式接种的　

鳞片成活率差异极明显，其中凸面朝上的鳞片成活　率为７６．６７％．比凹面朝上的高６６．６７个百分点。　

表１接种方式对郁金香鳞片成活的影响　Ｔａｂｌｅ　１　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｎ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｏｆ　ｂｕｌｂ　。ｓｃａｌｅ　ｉｎ　ｔｕｌｉｐ　ｖａｒｉｅｔｙ　Ｌｉｔｔｌｅ　ａｎｇｅｌ　

魏　ｍ　ｂ　ｅｒ　ｏｆ　ｓｕｒｖｉ删豢　Ｓ船ｕｒｖｉｖ取ａｌ　ｒ　ａｔｅ　

Ｕｐｓ凹ｉｄ面ｅ　ｃ朝ｏｎ上ｃａｖｅ　３　凸面朝ｃｏ上ｎｖ　２３Ｕｏｓｉｄｅ　ｃｏｎｖｅｘ　２７　

１７　１０．Ｏ０　

７６．６７　２．２不同部位鳞片对郁金香鳞片成活的影响　分别对小天使内、外层鳞片进行培养，１０　ｄ后　

大部分内层鳞片由白色转为灰绿色，且能够生长和　增粗伸长，最后部分鳞片直接分化长出小鳞茎；而　

大多数外层鳞片自切口处开始慢慢变褐，已变成淡　

黄绿色的中心部位也开始变褐，最后整块褐化死　亡。表２结果表明，内、外层鳞片的成活率差异极明　

显，内层鳞片成活率高达８５．００％，比外层鳞片高６７　

个百分点，说明鳞茎的内层鳞片较适宜作为郁金香　组织培养的外植体。　

表２“小天使”内、外层鳞片培养成活率比较　Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｉｎｎｅｒ　ａｎｄ　ｏｕｔｅｒ　ｂｕｌｂ　ｓｃａｌｅ　ｉｎ　ｔｕｌｉｐ　ｖａｒｉｅｔｙ　Ｌｉｔｔｌｅ　ａｎｇｅｌ　

Ｂ　ｕｌｂ　ｓｃａｌｅ　Ｎ　ｖｅａ　Ｓ腑ｕｒｖｉｖ取ａｌ　ｒ　ａｔｅ　

２．３不同激素浓度和基因型对两个郁金香品种内层　鳞片成活和分化的影响　在不同分化培养基上培养７　ｄ后，两个品种的　

郁金香成活鳞片均呈黄绿色，且可膨大生长：２周　后，部分鳞片基部分化出小鳞茎．但部分鳞片未见　

任何小鳞茎分化或愈伤组织形成。从表３可以看出，　

不同培养基和基因型对鳞片的成活率和分化率有　影响，而对每鳞片分化的鳞茎数没有影响。同一品　

种的内层鳞片在不同培养基中的成活率和分化率　有所不同，小天使内层鳞片在添￣Ｊｌｌ６一ＢＡ　１．０　ｍｇ／Ｌ、　

ＮＡＡ　０．５　ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上的成活率和分化率均　最高，此培养基较适合“小天使”鳞片的诱导分化培　

养：圣诞节内层鳞片在添加６一ＢＡ　２．０　ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ　Ｏ．５　ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上的分化率较高。此外．在相　同培养基中，两个品种的内层鳞片成活率和分化率　

也不同，圣诞节鳞片的成活率和分化率均高于小天　

使。　２．４不同激素浓度和基因型对两个郁金香品种　小鳞茎增殖的影响　

表４结果表明，不同激素组合对两个郁金香品　种小鳞茎的生长和增殖有一定影响。当培养基中